Вы находитесь на странице: 1из 9

ВЛИЯНИЕ МИКРОСТРУКТУРИРОВАННОГО КОЛЛАГЕНСОДЕРЖАЩЕГО ГИДРОГЕЛЯ НА КУЛЬТУРЫ

ОСТРОВКОВЫХ КЛЕТОК ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Кирсанова Л.А.¹, Баранова Н.В.¹, Бубенцова Г.Н.¹, Скалецкая Г.Н.¹, Перова Н.В.², Севастьянов В.И.² ,
Скалецкий Н.Н.¹ ¹ Лаборатория клеточной трансплантации ФГБУ «Федеральный научный центр
трансплантологии и искусственных органов им. ак. В.И. Шумакова» Минздрава РФ, Москва,
Российская Федерация ² Лаборатория тканевой инженерии и систем доставки отдела
биомедицинских технологий и тканевой инженерии ФГБУ «Федеральный научный центр
трансплантологии и искусственных органов им. ак. В.И. Шумакова» Минздрава РФ, Москва,
Российская Федерация

Цель. Изучение влияния микроструктурированного коллагенсодержащего гидрогеля


(биоматрикса) на выживаемость и особенности роста культуры островковых клеток при их
совместной инкубации. Мате- риалы и методы. В качестве биоматрикса использовали
микроструктурированный коллагенсодержащий гидрогель линейного ряда Сферо®ГЕЛЬ. Культуры
островковых клеток, полученные из поджелудочной железы новорожденных кроликов, засевали
на поверхность биоматрикса, заливали ростовой средой и помещали в СО2 -инкубатор.
Изменения, происходившие с биоматриксом и культурами, фиксировали с помощью
инвертированного микроскопа и гистологических исследований, включая иммуногистохими-
ческий анализ. Результаты. Присутствие микроструктурированного коллагенсодержащего
гидрогеле- вого матрикса при инкубации флотирующих культур островковых клеток
способствовало длительному сохранению их структурной целостности и гормональной
активности. Одновременно выявлено форми- рование культур прогениторных клеток
поджелудочной железы, являющихся предшественниками ост- ровковых клеток. Заключение.
Коллагенсодержащий гидрогель оказывает благоприятное действие на формирование и
выживание культур островковых клеток и может быть использован в качестве матрикса
тканеинженерной конструкции поджелудочной железы. Ключевые слова: культуры островковых
клеток поджелудочной железы, микроструктурированный коллагенсодержащий гидрогель.
INFLUENCE OF MICROSTRUCTURED COLLAGEN HYDROGEL ON PANCREATIC ISLET CELL CULTURES
Kirsanova L.A.¹, Baranova N.V.¹, Bubentsova G.N.¹, Skaletskaya G.N.¹, Perova N.V.², Sevastianov V.I.²,
Skaletskiy N.N.¹ 1 Laboratory of cell transplantation «V.I. Shumakov Federal Research Center of
Transplantology and Artifi cial Organs», Moscow, Russian Federation ² Laboratory of tissue engineering
and delivery systems, department of biomedical technologies and tissue engineering, «V.I. Shumakov
Federal Research Center of Transplantology and Artifi cial Organs», Moscow, Russian Federation Aim. A
study of the infl uence of microstructured collagen hydrogel (biomatrix) on survival and growth
characteristics of islet cell cultures at their co-incubation. Materials and methods. As a biomatrix, the
microstructured collagen hydrogel of linear series Sphero® GEL was used. Islet cell cultures obtained
from newborn rabbit pancreas were inoculated onto the biomatrix surface, covered with growth
medium, and placed in a CO2 incubator. Changes occurring with biomatrix and cultures were observed
by means of an inverted microscope and histological studies, including immunohistochemical analysis.
Results. The presence of the microstructured collagen hydrogel matrix during the incubation of fl oating
islet cell cultures promoted long-term preservation of the structural integrity and hormonal activity.
Simultaneously the formation of cultures of pancreatic progenitor cells (islet cells precursors) was
observed. Conclusion. Collagen hydrogel has a favorable effect on the formation and survival of islet cell
cultures and can be used as a matrix of a tissue-engineered pancreas construct. Key words: pancreatic
islet cell cultures, microstructural collagen hydrogel. 30 ВЕСТНИК ТРАНСПЛАНТОЛОГИИ И
ИСКУССТВЕННЫХ ОРГАНОВ том XVI № 1–2014 ВВЕДЕНИЕ В настоящее время клеточная
трансплантация является одним из наиболее интенсивно развиваю- щихся научных направлений в
биологии и медици- не. Одновременное наступательное развитие науки о биоматериалах
сделало реальной разработку кле- точно-инженерных и тканеинженерных конструк- ций (ТИК) [1].
В качестве тканевого компонента при создании ТИК применяют, как правило, куль- туры клеток,
входящих в состав регенерируемой ткани или являющихся их предшественниками. Помимо
клеточной культуры в состав ТИК входит специальный носитель (матрикс, каркас, матрица).
Матриксы могут быть выполнены из различных биосовместимых материалов. Большинство из них
являются биодеградируемыми, при этом в процес- се их резорбции не должны образовываться
проме- жуточные продукты, обладающие токсичностью, резко изменяющие рН среды или
ухудшающие рост и дифференцировку клеточной культуры. Клетки полученной культуры
наносятся на матрицу, после чего такая трехмерная структура может быть пе- ренесена в
биореактор с питательной средой, где инкубируется в течение определенного времени. Другим
вариантом создания ТИК может быть на- слоение прокультивированных клеток на матрицу,
помещенную в культуральный флакон или пробир- ку с последующим добавлением питательной
среды и инкубацией в различных условиях термостата. Проведенные в последние годы
исследования пока- зали, что в полной мере качествами, необходимыми для матрицы, входящей
в состав ТИК, обладает кол- лагенсодержащая композиция гетерогенного имп- лантируемого геля
(торговая марка «Сферо®ГЕЛЬ», производитель ЗАО «БИОМИР сервис», Россия).
Коллагенсодержащую композицию гетерогенно- го имплантируемого геля получают из
гидролизата эмбриональных или постнатальных коллагенсодер- жащих тканей животного
происхождения (исклю- чая человека), состоящего из двух компонентов: твердого – микрочастиц
из сшитого гидролизата и жидкого – исходного гидролизата, взятых в опре- деленном
соотношении [патент РФ на изобретение № 2433828]. Формирование гетерогенной структуры
гидро- геля позволило существенно увеличить время его биорезорбции по сравнению с
биоимплантатами из коллагена, рассасывающимися в течение 3–4 не- дель. Сферо®ГЕЛЬ
относится к классу биополимер- ных имплантатов и предназначен для замещения и восполнения
объемов мягких тканей, что происхо- дит за счет стимуляции синтеза собственного вне-
клеточного матрикса жизнеспособными клетками. Так, например, была показана перспективность
применения Сферо®ГЕЛЯ в качестве биодегради- руемого матрикса при создании клеточно-инже-
нерной конструкции хрящевой ткани [2] и клеточ- но-инженерной конструкции печени [3].
Настоящее исследование посвящено изучению влияния микро- структурированного
коллагенсодержащего гидро- гелевого матрикса на культуры островковых клеток, что является
важным этапом на пути создания ТИК поджелудочной железы. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Донорами поджелудочной железы служили 1–3-дневные новорожденные кролики, доставлен-
ные из специализированного питомника ФГБУН Кирсанова Людмила Анфилофьевна – к. б. н.,
старший научный сотрудник лаборатории клеточной трансплантации отдела биоме- дицинских
технологий и тканевой инженерии ФГБУ «Федеральный научный центр трансплантологии и
искусственных органов им. ак. В.И. Шумакова» Минздрава РФ, Москва, Российская Федерация.
Баранова Наталья Владимировна – научный сотрудник той же лаборатории. Бубенцова Галина
Николаевна – научный сотрудник той же лаборатории. Скалецкая Галина Николаевна – на- учный
сотрудник той же лаборатории. Перова Надежда Викторовна – д. б. н., ведущий научный
сотрудник лаборатории тканевой инженерии и систем доставки отдела биомедицинских
технологий и тканевой инженерии того же центра. Севастьянов Виктор Иванович – д. б. н.,
профессор, руководитель отдела биомедицинских технологий и тканевой инженерии того же
центра. Скалец- кий Николай Николаевич – д. м. н., заведующий лабораторией клеточной
трансплантации отдела биомедицинских технологий и тканевой инженерии того же центра. Для
корреспонденции: Скалецкий Николай Николаевич. Адрес: 123182, г. Москва, ул. Щукинская, д. 1.
Тел.: 8 (499) 190-42-66; 8-903-790-95-39. E-mail: NSkaletsky@mail.ru Kirsanova Lyudmila Anfi lofi evna
– senior research, cell transplantation laboratory, department of biomedical technologies and tissue
engineering «V.I. Shumakov Federal Research Center of Transplantology and Artifi cial Organs», Ministry
of Health of the Russian Federation, Moscow, Russian Federation. Baranova Natalia Vladimirovna –
research fellow at the same laboratory. Bubentsova Galina Nikolaevna – research at the same
laboratory. Skaletskaya Galina Nikolaevna – research fellow at the same laboratory. Perova Nadezhda
Viktorovna – leading research fellow, laboratory of tissue engineering and delivery systems, department
of biomedical technologies and tissue engineering at the same center. Sevastianov Viktor Ivanovich –
professor, head of department of biomedical technologies and tissue engineering at the same center.
Skaletskiy Nikolay Nikolaevich – head of cell transplantation laboratory, department of biomedical
technologies and tissue engineering at the same center. For correspondence: Skaletskiy Nikolay
Nikolaevich. Address: 123182, Moscow, Shchukinskaya, 1. Tel.: 8 (499) 190-42-66; 8-903-790-95-39. E-
mail: NSkaletsky@mail.ru 31 РЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ «Научный
центр биомедицинских технологий» ФМБА. Культуры островковых клеток (ОК) подже- лудочной
железы получали с помощью ранее разра- ботанного нами метода [4]. Для проведения опытов
использовали оригинальные культуральные про- бирки конической формы с горизонтальным
дном площадью 10 см² (фирма TPP, Швейцария). В качес- тве микроструктурированного
коллагенсодержаще- го гидрогелевого матрикса (МКГМ) использовали специально
разработанную для клеточных техноло- гий композицию имплантируемого гетерогенного геля
линейного ряда Сферо®ГЕЛЬ (ЗАО «БИОМИР сервис», Россия), представляющую собой находя-
щийся в шприце стерильный прозрачный, слегка опалесцирующий, вязкий, рН-сбалансированный
гидрогель с зернистой структурой. Средний раз- мер микрочастиц – 150 ± 20 мкм, вязкость МКГМ
– 62,9 ± 7,9 Па и рН – 6,8 ± 0,1. Биоматрикс в количестве 2 мл выдавливали из стерильного шприца
и равномерно распределяли по дну культуральной пробирки. Затем флотиру- ющую фракцию
культуры, сформировавшуюся после 12 суток инкубации 40 измельченных под- желудочных
желез новорожденных кроликов, наслаивали на МКГМ, покрывая всю его поверх- ность. После
добавления 7–8 мл ростовой среды 199 (без сыворотки) пробирку помещали в инку- батор с
увлажненной атмосферой, содержащей 5% СО2 . Смена среды проводилась каждые 2–3 дня.
Наблюдение за культурой, инкубируемой вместе с биоматриксом, проводили в инвертированном
микроскопе Nikon Eclipse TS 100 путем ежеднев- ного мониторинга, и значимые изменения фик-
сировали с помощью цифровой фотокамеры. Для гистологического исследования на
определенных сроках совместной инкубации культуры и МКГМ (7 и 14 дней) материал
фиксировали в жидкости Буэна. После рутинной процедуры обезвоживания образцы заливали в
парафин. Срезы толщиной 4 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, а также подвергали
иммуногистохимическому ок- рашиванию по стандартной методике с пероксида- зой хрена для
выявления основных типов ОК с ис- пользованием соответствующих моноклональных антител:
antiinsulin и antiglucagon (Sigma). Для выявления протокового эпителия окрашивание препаратов
на цитокератин 19 осуществляли с ис- пользованием Novocastra Concentrated Peroxidase Detection
System (RE 7130-K, Leica Microsystems), следуя инструкции производителя. Предваритель- но
перед окрашиванием депарафинированные срезы подвергали ретривизации инкубацией в 0,1%-
ном растворе трипсина при 37 °С в течение 30 минут. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ К 12-дневному
сроку инкубации микрофрагмен- тов поджелудочной железы новорожденных кроли- ков
происходило формирование культуры, которая состояла в основном из флотирующей фракции.
Последняя представляла собой плотные остров- ковоподобные структуры, в которых методом им-
муногистохимии определялись основные типы ОК – бета-клетки и альфа-клетки (рис. 1, 2). При
совместной, достаточно длительной (2 недели) ин- кубации культур и биоматрикса во
флотирующих микрофрагментах не выявлялось выраженных де- структивных изменений, и с
помощью иммуно- гистохимического окрашивания подтверждалось сохранение значительного
количества гормональ- но-активных ОК как на 7-е, так и на 14-е сутки со- Рис. 1. Флотирующая
культура островковых клеток под- желудочной железы новорожденных кроликов. Иммуно-
позитивное окрашивание бета-клеток антителами к ин- сулину. ×400 Рис 2. Флотирующая культура
островковых клеток под- желудочной железы новорожденных кроликов. Имму- нопозитивное
окрашивание альфа-клеток антителами к глюкагону. ×400 32 ВЕСТНИК ТРАНСПЛАНТОЛОГИИ И
ИСКУССТВЕННЫХ ОРГАНОВ том XVI № 1–2014 культивирования. Это свидетельствовало, по мень-
шей мере, об отсутствии отрицательного влияния МКГМ на выживаемость и
морфофункциональные качества культур ОК. При этом отмечалось при- крепление таких культур к
поверхности биомат- рикса и их распластывание, которое, вероятно, обеспечивало наилучшие
условия для выживания и сохранения функции ОК (рис. 3). Часть флотиру- ющих культур,
соединившихся с МГМК, содержа- ли, как показал иммуногистохимический анализ, значительное
количество клеток, которые демонс- трировали позитивную реакцию при окрашивании
антителами к цитокератину 19 – специальному маркеру протокового эпителия (рис. 4). Одновре-
менно в процессе совместной инкубации культур, полученных из поджелудочной железы
новорож- денных кроликов, с биоматриксом вокруг части прикрепившихся культур
формировались эпите- лиоподобные однослойные зоны роста (рис. 5, 6). На основании ранее
проведенных нами исследова- ний [5] можно с большой долей вероятности пред- положить, что
клетки, входящие в образовавшийся монослой, также происходят из протокового эпите- лия и
являются прогениторными клетками подже- лудочной железы, то есть предшественниками ОК.
Перспективность использования прогениторных клеток поджелудочной железы подтверждена ис-
следованиями, в которых показано, что отсутствие предшественников ОК в трансплантате
приводит к снижению массы бета-клеток [6], в то время как трансплантация островковой ткани,
богатой про- гениторными клетками, существенно повышает антидиабетический эффект [7].
Важно отметить, что в контрольном опыте инкубации только фло- Рис. 3. Прикрепление
флотирующей культуры к биомат- риксу. Иммунопозитивное окрашивание бета-клеток ан-
тителами к инсулину. ×400 Рис. 4. Культура, прикрепленная к биоматриксу. Иммуно- позитивное
окрашивание на цитокератин 19. ×200 Рис. 5. Прикрепление флотирующей культуры островко- вых
клеток поджелудочной железы новорожденных кро- ликов к биоматриксу. ×200 Рис. 6.
Формирование однослойной культуры вокруг оча- га прикрепления флотирующей культуры
островковых клеток поджелудочной железы новорожденных кроликов к биоматриксу. ×400 33
РЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ тирующих культур поджелудочной
железы ново- рожденных кроликов (без МКГМ) не наблюдалось формирования однослойных зон
роста вокруг оча- гов прикрепления культур ко дну культурального флакона. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные исследования показали, что при- сутствие микроструктурированного коллагенсо-
держащего гидрогелевого матрикса не только не оказывает токсического воздействия, но
благопри- ятно влияет на выживание флотирующих культур, полученных из поджелудочной
железы новорож- денных кроликов. При этом сохраняются струк- турные особенности и
гормональная способность, характерные для нативных островков поджелу- дочной железы.
Значительная часть флотирующих культур, находящихся в непосредственном кон- такте с
биоматриксом, содержат как зрелые ОК, так и прогениторные клетки поджелудочной желе- зы.
Кроме того, при совместной инкубации таких культур с биоматриксом в бессывороточной рос-
товой среде происходит формирование однослой- ных культур, которые, по всей видимости,
состоят из прогениторных клеток поджелудочной железы, являющихся, как известно,
предшественниками ОК. То, что именно МКГМ оказывает стимулиру- ющее действие на
образование этих клеток, до- казывает отсутствие формирования однослойных культур при
инкубации флотирующих культур в бессывороточной среде без добавления МКГМ. Таким
образом, использованный нами биоматрикс способствует длительному сохранению морфо-
функциональных свойств флотирующих куль- тур, содержащих ОК, а также способствует росту
прогениторных клеток поджелудочной железы. Последний факт позволяет надеяться на то, что с
помощью микроструктурированного коллагенсо- держащего гидрогелевого матрикса можно
будет существенно увеличить количество островковых клеток, получаемых из донорской
поджелудочной железы, которые могут быть использованы в даль- нейшем для трансплантации
больным сахарным диабетом. Таким образом, биополимерный гете- рогенный
коллагенсодержащий гидрогель оказы- вает благоприятное воздействие на формирование и
выживание культур островковых клеток in vitro и может быть использован в качестве матрикса
тканеинженерной конструкции поджелудочной железы. Работа выполнена при финансовой
поддержке РФФИ в рамках научных проектов № 13-04-12017 офи_м и № 13-02-12215 офи_м.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ / REFERENCES 1. Биосовместимые материалы (учебное пособие) / Под ред.
В.И. Севастьянова и М.П. Кирпичникова. M.: МИА, 2011; 544. Biosovmestimiye materialy (uchebnoe
posobie). Editors Sevastianov V.I. and Kirpichnikov M.P. M: MIA, 2011: 544 (in rus). 2. Surguchenko V.A.,
Ponomareva A.S., Kirsanova L.A., Bubentsova G.N., Skaletskij N.N., Sevastianov V.I. On the possibility of
in vitro formation of tissue-engineered construct of cartilage on the basis of cell-engineered construct
composed of biopolymer hydrogel matrix and human adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells.
Advanced Metals, Ceramics and Composites (ed. H. Tu, K. Solntsev, R. Zhou), Yunnan Publ. Group Corp.,
Kunming, China, 2013: 242–245. 3. Готье С.В., Шагидулин М.Ю., Онищенко Н.А., Кра- шенинников
М.Е., Ильинский И.М., Можейко Н.П., Люндуп А.В., Волкова Е.Н., Петраков К.В., Авра- мов П.В.,
Перова Н.В., Севастьянов В.И. Коррекция хронической печеночной недостаточности при транс-
плантации клеток печени в виде суспензии и клеточ- но-инженерных конструкций
(экспериментальное исследование). Вестник РАМН. 2013; 4: 44–51. Gauthier S.V., Shagidulin M.Yu,
Onishchenko N.A., Krasheninnikov M.E., Il'inskii I.M., Mazhejko N.P., Lyundup A.V., Volkov E.N., Petrakov
K.V., Avramov P.V., Perov N.V., Sevastianov V.I. Correction of chronic liver failure in the transplantation
of liver cells in suspension and cell engineering structures (an experimental study). Vestnik RAMSci.
2013; 4: 44–51 (in rus). 4. Шумаков В.И., Скалецкий Н.Н. Трансплантация ост- ровковых клеток
поджелудочной железы. Трансплан- тология (руководство для врачей) / Под ред. акад. В.И.
Шумакова. М.: МИА, 2006: 418–430. Shumakov V.I., Skaletsky N.N. Transplantation of pancreatic islet
cells. Transplantologiya (posobie dla vrachey). Editor acad. V.I. Shumakov. M: MIA, 2006: 418–430 (in
rus). 5. Кирсанова Л.А., Баранова Н.В., Скалецкий Н.Н., Зай- денов В.А., Бубенцова Г.Н., Пушкова
И.А. Поджелу- дочнаяжелеза новорожденных кроликов как источник прогениторных клеток.
Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2011; 11 (1): 61–64. Kirsanova L.A., Bubentsova
G.N., Baranova N.V., Skaletskiy N.N., Zaydenov V.A., Pushkova I.A. Newborn rabbits pancreas as a source
of progenitor cells. Vestnik transplantologii i iskusstvennyh organov. 2011; 13 (1): 61–64 (in rus). 6. Lee
S.-H., Hao E., Savinov A.Y., Geron I., Strong A.J. Itkin-Ansari P. Human B-cell precursors mature into
functional insulin-producing cells in an immunoisolation device: implications for diabetes cell therapies.
Transplantation, 2009; 87 (7): 983–991. 7. Smith R.N., Kent S.C., Nagle J., Selig M., Lafrate A.J., Najafi an
N. Pathology of an islet transplant 2 years after transplantation: evidence for a nonimmunological loss.
Transplantation. 2008; 86 (7): 54–62. Cтатья поступила в редакцию 27.01.2014 г. 34

ВЕСТНИК ТРАНСПЛАНТОЛОГИИ И ИСКУССТВЕННЫХ ОРГАНОВ том XVI № 1–


2014

К сожалению, в наше время всё большее количество людей требует замены


повреждённых тканей или органов. Самая важная проблема пересадки - отторжение
трансплантированного органа или ткани - ещё далека от своего полного решения.
Организм каждого человека на поверхности всех клеток имеет специальный набор
определённых белков - антигенов совместимости.
Эти антигены одинаковы во всех тканях и органах одного человека, но существенно
отличаются от антигенов другого организма. Из-за этого любая пересадка живой ткани,
взятой от иного организма, запускает к действию иммунную систему. Выявив и распознав
инородные клетки, лимфоциты разрушают их. Указанная проблема не является
препятствием при использовании конструкций из синтетических материалов.
Полимерные материалы - соединения на основе высокомолекулярных веществ, состоящих
из однотипных группировок атомов, которые соединены между собой химическими
связями. Основную массу полимеров получают либо путём химического синтеза из
мономеров, либо методом переработки естественных полимеров (целлюлозы, лигнина).
В общем, все полимерные материалы воспринимаются клетками организма как
посторонний предмет. Первичная реакция на имплантированный полимер
неспецифическая и является обыкновенной реакцией раздражения на посторонний
предмет. Обычно эта реакция представляет собой асептическое воспаление, степень
которого определяется как химическими, так и физическими свойствами полимерного
материала.
Наиболее благоприятным результатом такого воспаления считается образование тонкой
соединительной капсулы. Медицинские аспекты поведения того или иного материала в
живых тканях довольно разнообразны: в одних случаях соединительная ткань обтекает
протез, в других прорастает сквозь него; сердечный клапан, протез артерии или протез
жёлчного протока, даже если они изготовлены из одного материала, "вживляются" в
организм по-разному, если вживляются вообще.
При протезировании мягких тканей важно добиваться максимального соответствия
физико-механических свойств протеза и его формы аналогичным параметрам живой
ткани.
Тканевая инженерия объединяет в себе аспекты цитологии и материаловедения, что
позволяет создавать в условиях лаборатории полусинтетическим путём ткани и органы.
Подобные структуры состоят из биологического каркаса, который постепенно разлагается
и адсорбируется в организме, и клеточных элементов, выращенных с помощью
культивирования культур клеток.
Конечной целью данного научного направления является перспектива выращивания
полноценных органов, которые состоят из разных типов клеток и тканей, а также
способны заменить повреждённые в ходе заболевания или травмы органы.
Первыми в лабораториях были созданы такие простые ткани, как кожа и хрящ. Недавно
учёным удалось воплотить в жизнь идею биогибридной почки, способной поддержать
жизнедеятельность пациента с острой почечной недостаточностью на протяжении
периода, необходимого для прохождения восстановительного процесса в поражённой
почке.
У исследуемой группы больных, шансы на выживание которых при традиционных
методах лечения оценивались в 10-20%, полностью восстановилась функциональность
почек, и пациенты покинули больницу в достаточно удовлетворительном состоянии
благодаря трансплантации биогибридных почек, которая предотвратила появление
симптомов, присущих острой почечной недостаточности: сепсиса, инфицирования,
нарушения работы других систем.
Отдельными элементами гибридной почки являются полые трубочки, засеваемых
почечными стволовыми клетками, которые пролиферируют, пока не покроют всю
внутреннюю поверхность трубочек. В дальнейшем эти клетки дифференциируются в
клетки почек, которые способны к синтезу ряда гормонов и принимают участие в
фильтрации крови. Также гибридная почка способна корректно реагировать на сигналы,
посланные остальными структурами организма.
Тканевая инженерия - многодисциплинарная отрасль, которая применяет разные подходы
инженерии, молекулярной биологии и цитологии для создания биологических
заменителей с целью восстановления, поддержания и развития качества тканевых
функций.
В её основе лежат 3 составляющие: 
1. Репаративные клетки, которые сформируют функциональный матрикс. 
2. Подходящий остов для "монтажа" клеток и основы. 
3. Биологически активные молекулы (цитокины и факторы роста), поддерживающие ткань
и руководящие её формированием.
В организме человека синтезируется целый набор белков - факторов роста. Они
стимулируют деление и рост клеток, а также руководят их дифференциацией. Эти
природные белки, руководящие регенерацией тканей, используются при лечении ран,
восстановлении повреждений ткани, а также в тканевой инженерии. К наиболее важным
из них относят факторы роста эпидермиса, эритропоэтин, фактор роста фибробластов,
фактор роста нервов.
В последнее время для трансплантации всё большую популярность приобретают
гидрогели. Они представляют собой нерастворимую сетку гидрофильных полимеров,
способную впитывать биологические жидкости и воду. Основой для гидрогелей может
служить ряд водорастворимых веществ. Гидрогели преимущественно состоят из
искусственно синтезированных полимеров и естественных молекул. Самыми
распространёнными матрицами являются полиакриламид, поливинилпирролидон,
карбоксиметилцеллюлоза, крахмал, казеин, желатин. Пространственная гидрогелевая
структура является результатом поперечного сшивания полимеров, которые в результате
формируют нерастворимое в окружающем растворе образование.
Биообразные гидрогели имеют огромный потенциал для использования в создании тканей
in vivo. Благодаря высокому содержанию воды (до 97%) гидрогели замечательно
совместимы с организмом. Они удерживают форму, оставаясь пластичными, способны
выдерживать перепады температур и давления. К тому же они имеют хорошие оптические
свойства, что особенно кстати при создании искусственной роговицы и стекловидного
тела. Так, если говорить об оптических свойствах гидрогелей, коэффициент их
преломления практически совпадает с коэффициентом преломления воды (1,33 и 1,35
соответственно). Механические свойства тоже поражают: гидрогели могут выдерживать
давление от 0,6 до 3,0 МПа.
Большинство гидрогелей стойки к действию кипящей воды, а также к влиянию кислот и
щелочей. Эти материалы выдерживают рН в интервале 1-10, а также температуру от 10 до
130 градусов по Цельсию.
Учёные Российского химико-технологического университета им. Д.И.Менделеева создали
гидрогели нового поколения - структуры, удерживающие рекордно большое количество
воды - до 95-99%. Благодаря высокому содержанию воды гидрогели хорошо соединяются
с тканями, не вызывают раздражения и являются проницаемыми для кислорода.
Исследователи этого же университета создали уникальное синтетическое стекловидное
тело, которое не обрастает, не мутнеет, на его поверхности не происходит процессов
отторжения.
Учёные Корнельского университета (США) разработали трёхмерную гидрогелевую
матрицу, которую пронизывает система микроканалов, имитирующая капиллярную сетку.
В такой системе можно создавать различные трёхмерные структуры, например, в форме
мениска коленного сустава, и засеивать их живыми клетками. Теоретически, в такой
системе можно вырастить любую ткань. Вода, которая входит в состав гидрогеля,
удерживается тонкой сеткой полимера, в качестве которого используют целлюлозу,
являющуюся целиком безопасной для организма.
Учёные Гетеборгского университета (Швеция) экстрагировали хондроциты из суставов 25
пациентов, вырастили культуру клеток хрящевой ткани, а потом имплантировали её в
травмированный коленный сустав. У 14 из 16 пациентов было отмечено абсолютно
полное замещение повреждённого хряща новым.
Экспериментальная группа из биотехнологической компании "Organogenesis" занималась
выращиванием плёнки искусственной кожи, матрицей для которой послужил
естественный коллаген. При клинических испытаниях нового трансплантата кожи было
отмечено, что он улучшает заживление венозных ран и кожных повреждений.
Джоэль Шнайдер и Даррин Почан, учёные из Делаверского университета, создали
маловязкий гидрогель, цель использования которого - быстрое заживление ран. Основу
новинки составляет пептид, названный МАХ, созданный этими же учёными несколько лет
назад. Этот белок имеет функцию самосборки, которая запускается под влиянием
внешних факторов. Новый гель является отличным пористым адсорбентом. Благодаря
этому он является "арматурой" для фибробластов и остеобластов.
Оба типа клеток принимают участие в заживлении ран. Также в гель можно вводить
гепатоциты в участок поражённой печени. Гель имеет антимикробные свойства, убивая
многих грамположительных и грамотрицательных бактерий. Новый гель на основе МАХ
можно хранить как в виде порошка, так и вводить с помощью обычного шприца.
Однако не всё так хорошо, как кажется. Гидрогели, несмотря на все свои преимущества и
замечательные перспективы, имеют целый ряд недостатков. К сожалению, очень часто
результатом реакции на посторонний предмет является образование капсулы вокруг
имплантата. Именно инкапсуляция и создаёт определённые невыгодные условия для
функционирования органа или ткани.
Прежде всего, она препятствует контакту с другими тканями, и, как следствие,
нормальному прорастанию кровеносных сосудов. При отсутствии инкапсуляции эту
проблему можно решить достаточно легко: можно индуцировать прорастание
кровеносных сосудов смежных тканей в имплантат. Процесс роста инициируют
специальные стимуляторы, содержащиеся в полимерном каркасе. В конце лечения клетки
смежных тканей и оздоравливаемого участка соединяются и формируют общий
кровеносный сосуд.
Исследователи Райсовского университета совместно с коллегами из Медицинского
колледжа Бейлора отлично справились с одной из самых сложных проблем на пути к
выращиванию тканей, готовых для пересадки, в лабораторных условиях.
Им удалось найти способ выращивания кровеносных сосудов, поддерживающих трофику
тканей. В качестве матрицы учёные использовали полиэтиленгликоль,
модифицированный с целью имитации аморфного вещества, которое является основой
соединительной ткани, обеспечивает механическую поддержку и транспорт химических
веществ.
Полученную матрицу смешали с двумя типами клеток, необходимых для полноценного
формирования кровеносных сосудов, и с помощью света, который фиксировал матрицу в
форме геля, создали мягкие гидрогели, вмещающие живые клетки и факторы роста. В
течении трёхсуточного наблюдения было зафиксировано формирование клетками в геле
капилляров.
Для проверки работоспособности новых сосудистых сетей гидрогели имплантировали в
роговицу крыс, где отсутствует естественная васкулярная сетка. После введения
красителя исследователями было подтверждено нормальное кровообращение в
образованных капиллярах.
Инкапсуляция создаёт ещё одно препятствие для функционирование органа - она
усложняет гуморальную регуляцию, поскольку капсула делает невозможным доступ к
имплантату гормонов.
Впрочем, недавно учёные Национального института стандартов и технологий (США) и их
коллеги из университета Мэриленда разработали уникальную методику, с помощью
которой можно соединять между собой в одно целое липосомы и частицы гидрогеля.
Такая микроконструкция может использоваться для адресной доставки разнообразных
веществ, в том числе и гормонов. Также таким путём планируется доставка лекарств в
клетки опухолевых образований.
Капсула также защищает имплантат от воздействия иммунокомпетентных клеток. Это
делает имплантат особо чувствительным к действию бактерий и вирусов, и тогда орган
превращается в рассадник болезней.
Иногда даже имплантаты, изготовленные по современнейшим технологиям, не способны
полностью обеспечить всех функций живой ткани. Так, скажем, учёные из британского
университета Шефилда разработали новый вид синтетической крови, назначенный для
предотвращения острой кровопотери. Главный недостаток этой крови - неспособность
вывода продуктов метаболизма.
Ещё одна из новинок гидрогелевой индустрии, связанная с кровью, - создание нового
синтетического гидрогеля, который способен активизировать в организме человека
протеин, отвечающий за сворачивание крови. Данный гель является полностью
синтетическим, его конечная стоимость не превышает 10 у.е., следовательно, им можно
заполнить все мировые лаборатории. В рамках тестирования гидрогеля на овцах учёным
удалось остановить лёгочное кровотечение за 2 минуты, а кровотечение из печени - за 5
минут.
В данное время наибольшие успехи достигнуты в создании искусственной роговицы,
стекловидного тела, хрящей и так называемой "искусственной кожи". Учёные сейчас
работают над созданием сложных органов, например, печени. Исследуется применение
гидрогелей для стимуляции нейрогенеза. Принимая во внимание потрясающие
характеристики гидрогелей, они будут и в дальнейшем внедряться в медицину, а все
проблемы с их использованием будут решены. Тем более, потенциальные перспективы
гидрогелей в медицине практически не ограничены.