Frottis Sanguin

présenté par :
Kouka Imen
Mâarfia Abir
Larit Ines
Nahoui Roufaida
Hamlaoui Halima
Aissous Roukaia
Encadré par :
Dr. BOUHSANE
Sommaire:
 Introduction
 Définition
 Principe
 Matériel et consommables
 Indications
 Comment réaliser un frottis sanguin ?
 Préparation
 Colorations
 Interprétation
 Conclusion
 Introduction :
Un frottis sanguin est du sang étalé sur une
lame de microscope, dans le but d'observer
ses cellules et aussi les dénombrer.
Le frottis doit subir une coloration pour révéler
certaines cellules qui sans cela seraient
transparentes, donc non visibles.
Il permet également de repérer un éventuel
parasite dans le sang comme l'agent
du paludisme, le Plasmodium falciparum.
 Définition:

 Le frottis sanguin constitue l’étude

qualitative de l’hémogramme. C’est un
examen qui permet d'analyser les cellules
sanguines d'un patient.
Cet examen sanguin est généralement mis
en place pour établir, approfondir ou
confirmer un diagnostic.
 Principe :

 Étaler une goutte de sang uniformément

sur une lame de verre, de manière à
obtenir une seule couche de cellules.
Après fixation et coloration, on pourra
effectuer l'étude morphologique des
éléments figurés du sang, et déterminer s'il
y a des anomalies de présence, d'aspect ou
de nombre de cellules.
 Matériel et consommables :

 Des gants non-stériles, à usage unique

 Des lames porte-objet mattes nettoyées et
emballées
 Des lames porte-objet rodées nettoyées et
emballées
 De l’alcool méthylène (méthanol absolu).
 les cas où on utilise un frottis sanguin :

Les résultats d'un frottis sanguin sont généralement

utilisés pour approfondir un diagnostic médical. À
titre d'exemple, un frottis sanguin peut notamment
être pratiqué :
 Suite à un hémogramme anormal, qui est une
analyse quantitative et qualitative des cellules
sanguines.
 Lorsqu’il dans le but de diagnostiquer des
infections spécifiques comme le paludisme où le
parasite est présent dans les globules rouges.
De plus, un frottis sanguin peut également être
pratiqué pour suivre certains traitements médicaux
lourds. Cela peut notamment être le cas lors
d'une radiothérapie ou d'une chimiothérapie. Dans
ces cas, le frottis sanguin permet de confirmer que le
traitement se déroule comme prévu ou d'identifier
des perturbations dans la production des cellules
sanguines.
 Comment réaliser un frottis
sanguin ?
Première étape : prélèvement du sang
La première étape d'un frottis sanguin est le
prélèvement d'un échantillon de sang.
Ce dernier peut être obtenu à l'aide d'une aiguille au
niveau d'une veine du bras, du bout du doigt, ou du
talon chez le bébé.
 Seconde étape : analyse des résultats

La seconde étape d'un frottis sanguin est l'analyse

des résultats.
Pour cela, une goutte de sang est étalée sur une
lame de verre afin d'obtenir une seule couche de
cellules.
Pour distinguer les différents types de cellules, une
technique de coloration est ensuite utilisée. Celle-ci
est généralement la coloration de MGG.
Une fois coloré, le frottis sanguin est alors analysé
au microscope par un biologiste médical ou un
technicien de laboratoire.
 Troisième étape : interprétation des
résultats
 La dernière étape d'un frottis sanguin consiste en
l'interprétation des résultats.
 La coloration du frottis sanguin permet de visualiser et
distinguer les différentes cellules du sang.
 Dans la plupart des cas, la goutte de sang analysée contient
majoritairement des globules rouges.
 Plusieurs millions de globules rouges et des centaines de
milliers de globules blancs et plaquettes peuvent ainsi être
évalués.
 Lecture au microscope optique
x40: contrôle de qualité (homogénéité, répartition des cellules);
x100 à l’émersion: observation qualitative des éléments figurés
du sang : GR au niveau de la queue.
Différents paramètres d'analyse sont alors
pris en compte:
la morphologie: taille, forme, couleur,
apparence des cellules.
Le nombre ou la richesse.

GR: taille, forme, couleur, présence d’inclusions

cytoplasmiques.
GB: morphologie, nombre des sous populations.
PLQ: richesse, taille, forme.
 Interprétation:
 Interprétation des données sur les globules rouges
Les globules rouges sont considérés comme normaux et matures lorsqu'ils
sont uniformes, ronds, aplatis, avec des faces creuses, et d'un diamètre de
7 µm. Lors d'un frottis sanguin, ces globules rouges apparaissent avec une
couleur rosée et un centre plus clair. Si ces paramètres diffèrent, des
anomalies peuvent alors être identifiées. On distingue deux types
d'anomalies des globules rouges :

 Des anomalies de taille

 Des anomalies de formes

 Des anomalies de couleur,

 Inclusions cytoplasmiques.
 Aspect anormal
Anisocytose

correspond à des
Anisochromie
variations de taille des
GR. correspond à des
Les GR plus petits (<7 variations de la
µm) sont dénommés coloration des GR.
microcytes et les ceux Les GR hypochromes
de plus de 7 µm sont
appelés macrocytes.
onr une coloration Poïkilocytose
diminuée; les GR
polychromatophiles ont
une coloration correspond à des variations de
inhomogène avec des formes des GR. Il peut s'agir
zones basophiles. d’échinocytes, d’acanthocytes,
d’elliptocytes, de kératocytes,
de drépanocytes, de cellules
cibles, de cellules en forme de
larme (dacrocytes), de cellules
frottis (aussi appelées cellules
carie ou un panier), et de
schizocytes.
 Les microcytes Les macrocytes

Sont des hématies de taille Sont des hématies de tailles

diminuée et résultent en générales
d’un défaut de synthèse d’Hb soit
par anomalies au niveau de
synthèse de l’hème, des chaines de
globines ou de métabolismes de
fer.
augmentée. La présence de
macrocytes traduit en générale
une anomalies de synthèse de
l’ADN.

Anisocytose: grande variabilité des

diamètres des hématies sur un même
frottis.
 Hypochromie Polychromatophilie

Résulte d’une diminution de la Correspond à des hématies de

concentration d’Hb liée à une
synthèse de l’ Hb
qualitativement ou
quantitativement anormales.
grande taille et de couleur grise,
bleue au MGG contenant des résidus
d’ARN avec une hémoglobinisation
incomplète. Ce sont les jeunes
réticulocytes, retrouvés au cours de
toutes anémies régénératives.

Anisochromie: grande variabilité de la

couleur des hématies sur un même
frottis.
 Frottis sanguin normal

Hématies en larme : Drépanocytes:

Hématies en cible
splénomégalie

Acanthocytes: Echinocytes: Sphérocytes:

Elliptocytes
Présence d’inclusions cytoplasmiques:

Ponctuations basophiles,

Corps de Pappenheimer,

Corps de Howell-Jolly,

Anneau de Cabot,

Corps de Heinz.

Hématies parasitées
 Interprétation des données sur les globules blancs

 Une augmentation de certains globules blancs permet

d'identifier le développement d'inflammations ou de maladies.
Parmi les différents types de globules blancs, cela est
notamment le cas :

 Des polynucléaires neutrophiles, qui correspondent au type

de globules blancs les plus présents chez l'adulte en bonne
santé et dont la quantité augmente lors d'inflammations.

 Des polynucléaires éosinophiles, qui sont peu nombreux

mais dont la quantité augmente lors d'allergies ou d'infections
par des parasites.
 .

 Des polynucléaires basophiles, qui correspondent au type de

globules blancs les moins présents et dont l'augmentation rare
apparaît généralement après une vaccination, lors de
la varicelle, d'une colite ulcéreuse ou encore lors de
certaines leucémies.

 Des monocytes, qui sont les plus grands globules blancs.

 Des cellules lymphoïdes, qui incluent notamment les

lymphocytes, une sous-classe de globules blancs impliqués
dans la défense de l'organisme.
 Interprétation des données sur les plaquettes

 Un frottis sanguin permet d'évaluer le nombre de

plaquettes présentes dans le sang. En effet, une production
trop faible ou trop importante de plaquettes peut engendrer
de graves complications. Intervenant dans le processus
de coagulation, les plaquettes doivent être en quantité
suffisante pour stopper les saignements. Si une quantité
insuffisante en plaquettes altère le phénomène de
coagulation, une quantité trop importante de plaquettes
peut engendrer la formation de caillots sanguins et
diminuer la fluidité du sang.
 Préparation d’un frottis
sanguins :
 1. Notez les données du patient sur la surface matte de la
lame porte-objet avec un marqueur permanent
 2. Déposez une petite goutte de sang à l’extrémité de la
lame porte-objet matte.
 3. Sans attendre, posez le bord de la lame rodée juste à
l’avant de la goutte de sang. Les deux lames doivent
former un angle de 45°C.
 4. Faites glisser la lame rodée jusqu’à ce qu’elle touche la
goutte de sang.
 .
 5. Attendez que le sang se répartisse tout le long du bord de la
lame rodée.
 6. Poussez la lame rodée tout au bout de la lame d’étalement,
d’un mouvement doux et régulier, Jusqu’à l’épuisement de la
goutte de sang.
Le sang est entraîné derrière la lame et s’étale en couche mince.

N.B : Un mouvement trop lent produirait un frottis trop court et trop

épais. Un mouvement trop rapide donnerait un frottis trop long et
trop fin.
 7. Agitez la lame pour la faire sécher rapidement
 8. Fixez la préparation en faisant couler 2 ou 3 gouttes de
méthanol absolu sur le frottis disposé verticalement, pendant
2 à 3 minutes
 9. Laissez évaporer le méthanol
 10. La lame est prête pour être colorée
 .

Un bon frottis est assez épais

au début de l’étalement pour
s’amincir au milieu et finir
en forme de flamme avant la
fin de la lame. La partie
intermédiaire du frottis est la
plus appropriée pour
l’examen microscopique.
 pour un bon frottis il
faut:
 Vérifiez la qualité du frottis
sanguin avant de le sécher et de le
fixer
 Absence de lignes transversales
ou horizontales.
 Le frottis doit être lisse aux
extrémités, et non irrégulier ou
strié.
 Il ne doit pas être trop long ou trop
court Il ne doit pas être trop épais.
 Il doit être étalé uniformément.
 Les Colorations d’un frottis sanguin:

 La coloration la plus utilisée pour un frottis sanguin est : la

coloration MGG
Déf : La coloration de May-Grünwald Giemsa, parfois
également appelée coloration de Pappenheim est une
méthode de coloration utilisée en hématologie pour
différencier les cellules du sang lors des préparations
cellulaires (cytologie). Les colorations de May-Grünwald,
Giemsa, Leishmann sont des variétés de la méthode
de Romanowsky (médecin russe, 1861-1921).
 Principe de la coloration :
 repose sur l'action combinée de deux colorants neutres :
 Le May-Grünwald, contenant un colorant acide, l'éosine, et un colorant
basique, le bleu de méthylène.
 Le Giemsa, contenant lui aussi de l'éosine, et un colorant basique, l'azur de
méthylène
 Ces deux colorants sont en solution dans l'alcool méthylique sous forme
inactive. Lors de l'addition d'eau, les sels précipitent (éosinate de méthylène
et azur de méthylène) et se fixent sélectivement sur les constituants
cellulaires.
 Les constituants cellulaires acides, fixeront électivement les colorants
basiques. Ces éléments sont qualifiés de basophiles (ADN, cytoplasme
des lymphocytes riche en ARN).
Les constituants cellulaires basiques, fixeront électivement les colorants
acides. Ces éléments sont qualifiés d'acidophiles ou d'éosinophiles (cas de
l'hémoglobine, protéine basique contenue dans les hématies et des
granulations des granulocytes éosinophiles).
Les constituants fixant les deux types de colorants sont dits neutrophiles.
Résultat :
 Les noyaux sont de bleu à violet-noir
 Les hématies sont beige-rosé,
 les granulations des granulocytes éosinophiles
sont orangé.
 Les granulations des granulocytes neutrophiles
sont violet-lilas.
 Les granulations des granulocytes basophiles
sont bleu-noir
 Les granulations des grands lymphocytes sont
pourpres.
 Granulocytes
neutrophile(haut) et
éosinophile (bas)

Granulocyte basophile

Monocyte
 Autres colorants:

 Réticulocyte (coloration au Bleu de crésyl brillant): C'est une

solution de colorant prête à l'emploi, utilisée pour la mise en
évidence de structures cibles (par fixation, coloration,
éventuellement contre-coloration, recouvrement) dans des
épreuves hématologiques et clinico-cytologiques humaines,
telles que les frottis de sang entier et de moelle osseuse.
 Autres colorations:

 Coloration de Perls: est une technique de coloration

cytochimique de tissus utilisée en hématologie. Elle
permet de mettre en évidence le fer fixé dans
l'hémosidérine colorée en bleu par le bleu de Prusse;
les noyaux sont mis en évidence par le rouge nucléaire.
 La coloration de Perls est majoritairement employée
pour diagnostiquer les syndromes
myélodysplasiques par l'identification de
sidéroblastes en couronnes sur les myélogrammes
 Ces cellules sont des globules rouges immatures
dont les granulations d'hémosidérine entourent le
noyau.
 La coloration peut égament servir dans l'exploration
des anémies pour évaluer la localisation et le
métabolisme du fer.
 Conclusion:

Le frottis sanguin est un examen permet

d'orienter le diagnostic. Après analyse des
résultats, des examens complémentaires sont
généralement préconisés par le professionnel
de santé.