Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
00
Guía Unificada de Laboratorios
MICROBIOLOGIA CLÍNICA
Página 1 de 1
2. Objetivo:
2.1 General:
Enumerar los criterios para la descripción macroscópica y microscópica de bacterias y su
importancia como herramienta guía en la identificación bacteriana.
2.2 Específicos:
3. Marco Teórico
Morfología Macroscópica
Los cultivos en este medio se inoculan en una sola línea recta y se evalúan de la siguiente
manera:
Abundancia de crecimiento: la cantidad de crecimiento es designada como ninguna,
leve, moderada o abundante.
Pigmentación: Los microorganismos cromogénicos pueden producir pigmentos
intracelulares que son responsables de la coloración de las colonias; otros
microorganismos producen pigmentos solubles extracelulares que son excretados en el
medio y también producen un color; sin embargo la mayoría de los microorganismos son
no cromogénicos y aparecerán desde el blanco al gris.
Son evaluados según su distribución y apariencia del crecimiento como sigue (Ver Figura
2):
Turbidez fina uniforme: Crecimiento fino y totalmente disperso.
Floculante: crecimiento en agregados escamosos totalmente disperso.
Película: crecimiento en la superficie como plataforma, grueso.
Sedimento: Concentración del crecimiento en el fondo del caldo; puede ser granular,
escamoso o Floculante.
Morfología Microscópica
Colocar una asada de cultivo bacteriano líquido sobre la lámina y cubrir esta con la
laminilla o cubreobjetos. Realizar esta preparación según las recomendaciones del
docente sobre las técnicas microbiológicas adecuadas (uso de guantes, mechero,
asas bacteriológicas, técnica aséptica, etc.).
Observe en objetivo de 10X y 40X.
Registre las diferentes observaciones en los diversos aumentos con referencia a:
movilidad y forma.
Tomar el tubo con la mano izquierda, inclinando cerca al mechero, manipular el asa
bacteriológica con la mano derecha.
Flamear el asa bacteriológica de argolla hasta el rojo vivo.
Remover el tapón del tubo con el dedo meñique y el cuarto dedo de la mano derecha,
sosteniéndolo entre ellos y la palma de la mano.
Flamear la boca del tubo. Introducir el asa bacteriológica, tomar una gota del cultivo
líquido y colocarla sobre la lámina portaobjetos, extendiéndola en forma circular.
Flamear de nuevo la boca del tubo y colocar el tapón o tapa al tubo.
Esterilizar una vez más el asa.
Dejar que la lámina se seque al ambiente y fijar, realizando movimientos rápidos de la
lámina sobre la llama del mechero.
Después de realizar los frotis y fijarlos o flamearlos usted tiene listas las preparaciones
para los diversos procesos de coloración. Luego de colorearlos debe observarlos al
microscopio, inciando con 10x y luego con el objetivo de inmersión.
Coloración De Gram:
Técnica De Coloración:
Cubrir el frotis con violeta de genciana durante un minuto.
Enjuague con agua.
Cubra luego con solución de lugol por un minuto.
Enjuague con agua.
Decolore con alcohol acetona por segundos.
Enjuague con agua.
Cubra con safranina por treinta segundos.
Enjuague con agua y colóquela en posición vertical dejando secar al aire.
Según su forma las bacterias reciben una denominación como son (Ver Figura 6):
Los cocos pueden presentar diferentes tipos de agrupaciones (Ver Figura 7):
Según su tinción con la coloración se Gram se clasifican en 2 grupos: los que se colorean
con violeta de genciana, Gram positivas y los que no se colorean con violeta de genciana
y por el contrario toman el colorante secundario o de contraste que se denominan Gram
negativas.
5. Reactivos:
Kit coloración de Gram.
Solución salina 0.85% esterilizada y en frasco gotero.
6. Procedimiento:
7. Nivel de Riesgo:
8. Consulta:
9. Bibliografía
10. Anexos
1. Violeta De Genciana:
Solución A:
Cristal violeta ......................................................10 gr.
Alcohol etílico ..................................................... 100ml.
Solución B:
Oxalato de amonio .……............................................... 8gr.
Agua destilada ….…............................................... 800ml.
Una vez preparadas se mezcla la solución A con la solución B y se envasa en frasco color
ámbar.
2. Lugol
Iodo metálico .....................................……………..1gr.
Yoduro de potasio …..................................................…2gr.
Agua destilada .......................................................300ml.
4. Safranina
SOLUCIÓN STOCK:
Solución al 2.5% de safranina en alcohol del 95%.