Código FLA-23 v.

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Guía Unificada de Laboratorios
MICROBIOLOGIA CLÍNICA
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1. Título: MORFOLOGIA BACTERIANA

2. Objetivo:

2.1 General:
Enumerar los criterios para la descripción macroscópica y microscópica de bacterias y su
importancia como herramienta guía en la identificación bacteriana.

2.2 Específicos:

 Realizar descripciones macroscópicas de colonias bacterianas teniendo en cuenta loa

criterios dados
 Observar demostraciones de la morfología microscópica de bacterias y relacionarlas
con las colonias
 Realizar el montaje, coloración de Gram y el informe de un cultivo bacteriano

3. Marco Teórico

Las características morfológicas (macroscópica y microscópica) de las bacterias son de

gran importancia en la clasificación bacteriana además de ser una herramienta básica en
la identificación y diagnóstico del laboratorio.

Morfología Macroscópica

Cuando los microorganismos crecen sobre medios de cultivo exhiben diferencias en la

apariencia macroscópica de su crecimiento, estas diferencias llamadas características
macroscópicas son la base para la separación de ellos en grupos taxonómicos. Las
características del cultivo de los microorganismos conocidos son consignadas en
Bergey´s Manual of Systematic Bacteriology y determinadas por el cultivo de los
microorganismos en medios inclinados, en placas de petri o en medios líquidos.

Crecimiento Bacteriano en Agar Nutritivo Inclinado

Los cultivos en este medio se inoculan en una sola línea recta y se evalúan de la siguiente
manera:
Abundancia de crecimiento: la cantidad de crecimiento es designada como ninguna,
leve, moderada o abundante.
Pigmentación: Los microorganismos cromogénicos pueden producir pigmentos
intracelulares que son responsables de la coloración de las colonias; otros
microorganismos producen pigmentos solubles extracelulares que son excretados en el
medio y también producen un color; sin embargo la mayoría de los microorganismos son
no cromogénicos y aparecerán desde el blanco al gris.

Elaborado por: Revisado y Aprobado por:

Lucy Carolina Vargas Pabón Departamento de Bacteriología y Versión 2 de 2014.
Docente Microbiología Clínica Laboratorio Clínico
Fecha: Septiembre 19 de 2014 Fecha: Fecha: Septiembre 19 de 2014.
Las características ópticas: pueden evaluarse con base en la cantidad de luz
transmitida a través del crecimiento, estas características con descritas como opaca
(ninguna transmisión de luz), translúcida (transmisión parcial) o transparente (transmisión
total de la luz).
Forma: la apariencia del crecimiento de la siembra en una sola línea sobre la superficie
del agar inclinado se designa así (Ver figura 1):

Filiforme: crecimiento en forma de hilo con bordes lisos continuos.

Equinulado: crecimiento en forma de hilo con bordes irregulares continuos.
Barbado: colonias semiconfluentes o no confluentes.
Difuso: Crecimiento difuso y reducido.
Arborescente: crecimiento en forma de árbol.
Rizoide: crecimiento en forma de raíz.

Figura 1. Características de la forma de crecimiento en Agar nutritivo en tubo inclinado.

Crecimiento Bacteriano en Caldo Nutritivo:

Son evaluados según su distribución y apariencia del crecimiento como sigue (Ver Figura
2):
Turbidez fina uniforme: Crecimiento fino y totalmente disperso.
Floculante: crecimiento en agregados escamosos totalmente disperso.
Película: crecimiento en la superficie como plataforma, grueso.
Sedimento: Concentración del crecimiento en el fondo del caldo; puede ser granular,
escamoso o Floculante.

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 Figura 2. Crecimiento Bacteriano en caldo nutritivo.

Crecimiento Bacteriano en Agar Nutritivo en Caja de Petri sembrado por

Agotamiento:

Su descripción se realiza de colonias (masa visible de bacterias originada a partir de uno

sola bacteria por lo que en una colonia las bacterias son generalmente idénticas)
aisladas, se evalúa de la siguiente manera:

Tamaño: Grande, mediano, pequeño y puntiforme.

Forma: redonda, ovalada, irregular
Borde: De borde regular: continuo (Ver Figura 3).

Figura 3.Colonia con borde regular continuo

De borde irregular (Ver Figura 4):

Lobulado: Ondulado: Dentado: Filamentoso: Festoneado: Arborescente:

Figura 4. Bordes irregulares de las colonias bacterianas.

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Elevación (Ver Figura 5):
No elevada: plana.
Elevada: convexa, mamelonada, umbilicada y papilar.

Plana: Convexa: Mamelonada: Umbilicada:

Figura 5. Elevación de las Colonias.

Consistencia: Blanda, dura o mucoide.

Brillo: brillante u opaco
Pigmento: amarillo, rojo, verde, etc.
Hemólisis: parcial o alfa; total o beta y no hemólisis. Esta característica se evalúa
solamente en agar sangre.

La morfología de las colonias es un parámetro importante en el proceso de identificación

bacteriana siendo las características comunes entre cada género bacteriano. Sin embargo
la morfología puede alterarse por el tiempo de incubación, composición del medio de
cultivo (excesiva desecación o humedad), etc.

Morfología Microscópica

Observación a partir de preparaciones en fresco:

Las bacterias por su pequeño tamaño y su índice de refracción cercano al agua, no

permiten una adecuada observación microscópica en su forma viva o sin teñir, sin
embargo un examen en fresco permite observar la movilidad, la forma y el tamaño natural
ya que la fijación por calor y la exposición a agentes químicos durante la tinción causan
algún grado de distorsión.

Preparación de láminas para observación de bacterias vivas:

 Colocar una asada de cultivo bacteriano líquido sobre la lámina y cubrir esta con la
laminilla o cubreobjetos. Realizar esta preparación según las recomendaciones del
docente sobre las técnicas microbiológicas adecuadas (uso de guantes, mechero,
asas bacteriológicas, técnica aséptica, etc.).
 Observe en objetivo de 10X y 40X.
 Registre las diferentes observaciones en los diversos aumentos con referencia a:
movilidad y forma.

Recuerde: es esencial diferenciar entre el verdadero movimiento (movilidad) y el

movimiento Browniano el cual corresponde al movimiento de las células a causa del
bombardeo de las moléculas de agua en suspensión.

Observación a partir de preparaciones coloreadas:

En el laboratorio de Microbiología se utilizan diversos métodos de tinción o coloración

para visualizar los detalles morfológicos de las bacterias. Parte del diagnóstico

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bacteriológico se fundamenta en las diferentes afinidades tintoriales de las bacterias frente
a los diversos colorantes.

Preparación de frotis a partir de medios de cultivo líquido y sólido:

Frotis a partir de medio de cultivo líquido:

 Tomar el tubo con la mano izquierda, inclinando cerca al mechero, manipular el asa
bacteriológica con la mano derecha.
 Flamear el asa bacteriológica de argolla hasta el rojo vivo.
 Remover el tapón del tubo con el dedo meñique y el cuarto dedo de la mano derecha,
sosteniéndolo entre ellos y la palma de la mano.
 Flamear la boca del tubo. Introducir el asa bacteriológica, tomar una gota del cultivo
líquido y colocarla sobre la lámina portaobjetos, extendiéndola en forma circular.
 Flamear de nuevo la boca del tubo y colocar el tapón o tapa al tubo.
 Esterilizar una vez más el asa.
 Dejar que la lámina se seque al ambiente y fijar, realizando movimientos rápidos de la
lámina sobre la llama del mechero.

Frotis a partir de medios de cultivo sólido:

Se utiliza el asa bacteriológica recta.

 Colocar una gota de solución salina sobre la lámina. Esterilizar el asa al mechero y
dejar enfriar.
 Tomar con el asa recta material del cultivo bacteriano.
 Colocar la muestra sobre la solución salina y extender en forma circular.
 Dejar secar y fijar la preparación.

Después de realizar los frotis y fijarlos o flamearlos usted tiene listas las preparaciones
para los diversos procesos de coloración. Luego de colorearlos debe observarlos al
microscopio, inciando con 10x y luego con el objetivo de inmersión.

Coloración De Gram:

Es la más útil en el Laboratorio de Microbiología, aunque no determina con absoluta

certeza el microorganismo causal, si establece un diagnóstico presuntivo rápido. Está
conformado por una serie de 3 colorantes (Violeta de Genciana, Lugol, Safranina) y un
decolorante (Alcohol Acetona).

Técnica De Coloración:
 Cubrir el frotis con violeta de genciana durante un minuto.
 Enjuague con agua.
 Cubra luego con solución de lugol por un minuto.
 Enjuague con agua.
 Decolore con alcohol acetona por segundos.
 Enjuague con agua.
 Cubra con safranina por treinta segundos.
 Enjuague con agua y colóquela en posición vertical dejando secar al aire.

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Una vez seca proceda a observar al microscopio. La coloración de Gram suministra
información sobre Forma, Agrupación y Tinción.

Según su forma las bacterias reciben una denominación como son (Ver Figura 6):

 Cocos: Esférica o globos.

 Bacilos: Oval, cilíndrica o en forma de bastón. Varían mucho en longitud y grosor. Si
con bacilos cortos se denominan cocobacilos. También pueden ser bacilos curvos en
forma de coma, aunque esta forma se agrupa dentro las formas espiraladas.
 Espirilas: espiral o helicoidal o en forma de coma.
 Filamentosa: En forma de hilos entrecruzados.

Figura 6. Denominación y forma de las bacterias.

Según su agrupación las bacterias también reciben denominaciones como:

Los cocos pueden presentar diferentes tipos de agrupaciones (Ver Figura 7):

Diplococos. Cocos que se dividen en un plano y permanecen unidos en parejas

Estreptococos: Cocos que se dividen en planos paralelos y quedan unidos para formar
cadenas.
Tétradas: Cocos que se dividen en dos planos perpendiculares y forman grupos de
cuatro.
Sarcinas: Cocos que se dividen en tres planos perpendiculares, formando agrupaciones
cuboides.
Estafilococos: Cocos que se dividen en tres planos irregulares formando racimos.

Figura 7. Denominaciones de las agrupaciones de bacterias de forma esférica.

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Los Bacilos no se agrupan como los cocos, pero a veces se presentan en pares o en
cadenas o pueden formar letras china o formaciones en empalizada (Ver figura 8).

Figura 8. Formas de bacilos.

Según su tinción con la coloración se Gram se clasifican en 2 grupos: los que se colorean
con violeta de genciana, Gram positivas y los que no se colorean con violeta de genciana
y por el contrario toman el colorante secundario o de contraste que se denominan Gram
negativas.

4. Materiales, Equipos e Insumos:

Asas bacteriológicas rectas y de argolla. Láminas y laminillas.

Cultivos bacterianos. Mechero de Bunsen.
Láminas demostrativas.

5. Reactivos:
Kit coloración de Gram.
Solución salina 0.85% esterilizada y en frasco gotero.

6. Procedimiento:

 Por grupo de trabajo realice la descripción macroscópica y microscópica de los

microorganismos asignados.
 Seleccione un representante de cada grupo para presentar el informe en una plenaria.

7. Nivel de Riesgo:

8. Consulta:

 Cuál es el objetivo de flamear las preparaciones?

 Consulte la morfología microscópica de los siguientes microorganismos:

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Especie Morfología Microscópica con la tinción de Gram
Staphylococcus aureus
Neisseria gonorrhoeae
Haemophilus influenzae
Vibrio cholerae
Streptomyces sp.
Treponema pallidum
Bacillus megaterium
Streptoccus pneumoniae
Pseudomonas aeruginosa
Fusobacterium nucleatum

9. Bibliografía

 CLARK, G. : Procedimientos de coloración,5ª. Ed. Williams and Wilkins, Baltimore,

2000.
 LENNETTE, E, H,. E.H. SPAULDING, Y J.P. TRUANT. Manual de Microbiología
Clínica,4a. Ed. Sociedad Americana de Microbiología, Baltimore, 1999.
 MADIGAN, MARTINKO,PARKER, Biología de los microorganismos.8ª Ed. Prentice-
Hall. 1997
 NESTER,E,ANDERSON,D,ROBERTS,E,NESTER,M. Microbiología humana. 5ª Ed.
Manual moderno, 2007

10. Anexos

Preparación de la Coloración De Gram:

1. Violeta De Genciana:
Solución A:
Cristal violeta ......................................................10 gr.
Alcohol etílico ..................................................... 100ml.
Solución B:
Oxalato de amonio .……............................................... 8gr.
Agua destilada ….…............................................... 800ml.

Una vez preparadas se mezcla la solución A con la solución B y se envasa en frasco color
ámbar.

2. Lugol
Iodo metálico .....................................……………..1gr.
Yoduro de potasio …..................................................…2gr.
Agua destilada .......................................................300ml.

Colocar el yoduro de potasio en un mortero, agregar el iodo y triturarlo perfectamente.

Adicionar el agua poco a poco en el mortero y traspasar a un frasco color ámbar, lavar
continuamente el mortero hasta terminar el volumen.

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3. Alcohol Acetona
Alcohol etílico al 95% ………………................................... 70ml.
Acetona ...........................................................30ml.

4. Safranina

SOLUCIÓN STOCK:
Solución al 2.5% de safranina en alcohol del 95%.

SOLUCIÓN DE TRABAJO DIARIO O SOLUCIÓN COLORANTE: De la solución sotck

tomar 10ml. y completar a 100ml. con agua destilada, mezclar bien y envasar en frascos
color ámbar.

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