École Normale Supérieure de Laghouat

Master biochimie fondamentale et appliquée

Semestre : 3

Intitulé de la matière :TP des techniques chromatographiques

La chromatographie sur colonne du sirop de menthe

I. Introduction

La chromatographie d'adsorption est une technique de séparation de composés basée sur la différence d'affinité
existant entre ces composés, la phase mobile, qui entraîne les composés, et la phase stationnaire. En effet, selon la
plus ou moins grande affinité entre les solutés et la phase stationnaire ou mobile, les constituants du mélange
migrent à des vitesses différentes et sont ainsi séparés.

La technique présentée ici est la chromatographie sur colonne, elle utilise une phase stationnaire introduite dans une
colonne de verre. C'est une technique très largement utilisée notamment lors de réaction en chimie organique, pour
séparer et purifier les différents constituants d'un mélange.

Au cours de cette séquence nous verrons sur l'exemple d'un mélange de colorants, extraits du sirop de
menthe( zikuv), le principe de cette technique en utilisant comme phase stationnaire la silice (SiO2).

II. Présentation du matériel

 Pot silice,

 les deux éluants : eau salée à 40g/L, puis éthanol,

 entonnoir,

 sable et coton,

 colonne en verre(selon la quantité et la qualité de produit a séparé, on choisira des colonnes de diamètre et de
longueur ±importants)

 béchers,

 pipettes pasteur, propipettes

 solution contenant le mélange sirop menthe,

 support et tubes à essai,

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III. Réalisation de l'expérience

A. PRÉPARATION DE LA COLONNE ( PHASE FIXE ).

Fixer verticalement la colonne à l'aide d'une pince.

2 : Déposer un petit morceau de coton dans le bas de la colonne.

3 : Déposer un peu de sable pour rendre la surface plane.

4 : Peser environ 5g de silice et délayer dans l'eau salée pour en faire un gel.

5 : Introduire la silice dans la colonne.

6 : Tapoter la colonne afin d'obtenir une surface plane de silice : rajouter un peu de sable pour aplanir.

7 : Placer un bêcher sous la colonne.

8 : Introduire doucement de l'eau salée ( à l'aide d'une pipette plastique par écoulement de long de la paroi de la
colonne ). Ajouter une quantité d'eau suffisante pour être environ à 2 cm au dessus de la surface plane de la silice.

B. DÉPÔT DE L'ÉCHANTILLON À SÉPARER.

1 : Déposer très doucement à l'aide d'une pipette, sans toucher les parois de la colonne, 5 gouttes de sirop de menthe
: attention à ne pas déformer la surface de la phase stationnaire pendant cette opération.
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