Вы находитесь на странице: 1из 5

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО

(Эритротестомтм - цоликлонами Анти – А и Анти – В и Анти – АВ)


Оснащение: цоликлоны Анти – А и Анти – В и Анти – АВ, пипетки для взятия
и нанесения сывороток, маркированные белые фаянсовые или стандартные
планшеты, стеклянные палочки, 0,9% раствор хлорида натрия, песочные часы
на 5 мин.
Эритротесттм - цоликлон Анти – А и Анти – В и Анти – АВ предназначены
для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях
гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными
иммунными сыворотками.
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 10мл.
Цоликлон Анти – А – бесцветный. В качестве консерванта применяется азид
натрия в конечной концентрации 0,1%.
Срок хранения – 2 года при температуре 2 - 8. Вскрытый флакон можно
хранить при температуре 2 - 8С в течение месяца в закрытом виде.
Выполнение манипуляции
Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови,
взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой
гемоагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение
группы крови производится в помещении с хорошим освещением при
температуре 15 - 25С.
1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны
Анти – А, Анти – В и Анти – АВ по одной большой капле (0,1мл) под
соответствующими надписями.
2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой
крови (0,01-0,03мл).
3. Смешайте кровь с реагентом.
4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком
покачивании пластины или планшета в течение 3мин. Агглютинация
эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3 – 5сек, но
наблюдение следует вести 3мин ввиду более позднего появления
агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности
антигенов А или В.
5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или
отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации
(склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в
виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При
отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный
цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с
Цоликлонами представлена в таблице
Результат реакции* с Цоликлном Исследуемая кровь
принадлежит к группе*
Анти – А Анти – В Анти – АВ
- - - О (I)

+ - + А (II)

- + + В (III)

+ + + АВ (IV)

* Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) - отсутствие


агглютинации.
** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам
перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и
изогемагглютининов в сыворотке.
Контроль специфичности реакции агглютинации
В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных
вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не
требуется проведения контроля с растворителями. При положительном
результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо
исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых
эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови
(эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к
группе АВ (IV)только при отсутствии агглютинации эритроцитов в
физиологическом растворе.

Завершение манипуляции:
- После определения группы крови необходимо сделать отметку о групповой
принадлежности на лицевой части истории болезни, занести данные в
протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и резус
принадлежности.
- Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми
нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной
очистке и стерилизации изделий медицинского назначения.
- Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии
с СаНПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов
лечебно-профилактических учреждений»

Определение резусной принадлежности крови


Оснащение: ЭритротестТМ - Цоликлон Анти – D Супер, пробирки, 0,9%
раствор хлорида натрия, маркированные белые фаянсовые или стандартные
планшеты, стеклянные палочки,
ЭритротестТМ - Цоликлон Анти – D Супер предназначен для выявления D
антигена системы резус в эритроцитах человека.
Цоликлон Анти – D Супер выпускается в жидкой форме во флаконах по 2,5
или 10мл (1мл содержит 10доз). В качестве консерванта применяется азид
натрия в конечной концентрации 0,1%.
Срок хранения – 1 год в холодильнике при 2 - 8С. Вскрытый флакон можно
хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.
Выполнение манипуляции
Реакция агглютинации на плоскости
На пластинку со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю
(около 0,1мл) реагента. Рядом поместите маленькую каплю (0,01 – 0,05мл)
исследуемой крови и смешайте кровь с реагентом. Наиболее крупная
агглютинация наблюдается при использовании эритроцитов в высокой
концентрации. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10 – 15сек.
четко выраженная агглютинация наступает через 30 – 60сек. Использование
подогретой до 37 - 40пластинки сокращает время наступления агглютинации.
Результаты реакции учитывайте через 3мин. Пластинку после смешивания
реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20 – 30сек., что
позволяет за это время развивать более полной крупнолепестковой
агглютинации – резус положительный, если нет агглютинации – резус
отрицательный.
Завершение манипуляции:
- После определения резус-фактора необходимо сделать отметку о
групповой принадлежности на лицевой части истории болезни, занести
данные в протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и
резус принадлежности.
- Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми
нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной
очистке и стерилизации изделий медицинского назначения.
- Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии
с Сан.ПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов
лечебно-профилактических учреждений»

Проведение пробы на индивидуальную совместимость.


Пробу на совместимость следует производить двояко: проба на
совместимость по группам крови системы АВО и проба на
совместимость по резус-фактору.
Проба на совместимость по группам крови производится на тарелке
общепринятым способом:
- к двум каплям сыворотки реципиента прибавляют в 5 - 8 раз меньшую
каплю эритроцитов донора, капли перемешивают и учитывают результат в
течение 5 минут.
- При появлении агглютинации проба считается положительной, кровь
несовместимая.

Если реакция окажется отрицательной, то необходимо сразу


приступить к проведению пробы на совместимость по резус-фактору.

Для пробы на совместимость по резус-фактору рекомендуется


использовать одну из следующих методик:
1. Проба на совместимость переливаемой крови по резус-фактору с
использованием 33% раствора полиглюкина.
- Пробу проводят в пробирке без подогрева в течение 5 минут.
- На дно пробирки, на которой предварительно сделаны соответствующие
обозначения, наносят 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю донорской крови
и 1 каплю 33% раствора полиглюкина, специально приготовленного для
лабораторных целей.
- Содержимое пробирки перемешивают путем встряхивания, затем пробирку
наклоняют почти до горизонтального положения и медленно поворачивают
таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки. Эту
процедуру продолжают 5 минут.
- После этого в пробирку доливают 3-4мл. изотонического раствора хлорида
натрия, перемешивают содержимое путем 2-3 кратного перевертывания
пробирки (не взбалтывать!) и просматривают на свет невооруженным глазом.
Оценка результатов: наличие агглютинации эритроцитов на фоне
просветленной или полностью обесцвеченной жидкости указывает на то, что
кровь донора несовместима с кровью реципиента и не может быть ему
перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, без
признаков агглютинации эритроцитов, кровь донора совместима с кровью
реципиента в отношении резус-фактора.
2. Проба на совместимость переливаемой крови по резус-фактору с
использованием 10% раствора желатины. Пробу производят в пробирках при
температуре 46-48°С. На дно пробирки, соответственно обозначенной,
помещают 1 каплю эритроцитов донора, предварительно отмытых
десятикратным объемом изотонического раствора хлорида натрия. Затем
добавляют туда 2 капли подогретого до разжижения 10% раствора желатины и
2-3 капли сыворотки реципиента. Раствор желатины перед употреблением
необходимо тщательно просмотреть. При помутнении или появлении хлопьев -
желатина непригодна. Содержимое пробирки перемешивают путем
встряхивания и помещают в водяную баню при температуре 46-48" С на 10
мин. Затем пробирку извлекают из водяной бани, добавляют в нее 5-8 мл.
изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают содержимое путем 1-2
кратного перевертьюания пробирки и просматривают на свет невооруженным
глазом или через лупу.
Оценка результатов: наличие агглютинации в виде взвеси мелких, реже
крупных комочков на фоне просветленной или полностью обесцвеченной
жидкости означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не
должна быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно
окрашенным, слегка опалесцирует и в ней не наблюдается агглютинация
эритроцитов, кровь донора совместима с кровью реципиента в отношении
резус-фактора.
При отсутствии полиглюкина и желатины, в экстренных ситуациях
допустимо проведение пробы на совместимость по резус-фактору на водяной
бане. На чашку Петри наносятся 2 большие капли сыворотки реципиента и к
ним прибавляется полкапли крови донора. Капли перемешивают и чашка
помещается на водяную баню (46°С) на 10 минут.
Затем просматривают результат по агглютинации. Если агглютинация
отсутствует, следовательно, кровь совместима по резус-антигенам.
• В некоторых случаях положительная реакция может быгь
неспецифического характера, что иногда наблюдается с кровью больных,
страдающих заболеваниями системы крови, но и в таком случае надо считать
кровь несовместимой и не переливать ее.
• Трансфузия крови возможна лишь тогда, когда врач абсолютно уверен
в том, что при производстве пробы на совместимость не наступило никакой
агглютинации.

Проведение биологической пробы.


Первые 45 мл крови вводят внутривенно струйно в три этапа по 15 мл с
паузой в 3 мин. Отсутствие признаков несовместимости после вливания 45 мл
крови позволяет производить переливание крови без перерыва.
При переливании нескольких порций от разных доноров пробы
производят с каждой новой порцией.
Проба считается положительной в случае если после переливания 15мл
крови больные жалуются на ломоту, боли в мышцах, конечностях, груди,
тошноту, головокружение, сердцебиение, шум в ушах, расстройства зрения и
прочие явления субъективного характера.
Возможно возникновение вазомоторных расстройств: резкая бледность,
обычно сменяющаяся цианозом, частый малый пульс. Дыхание учащается и
становится поверхностным, артериальное давление заметно снижается, больной
покрывается холодным потом. Затем появляется непродолжительный озноб,
сопровождающийся повышением температуры до субфебрильных цифр.
Нередко наблюдается крапивница.
• Синдром несовместимости не всегда клинически выявляется после
однократного введения 15мл групповонесовместимой крови. Поэтому показано
обязательное проведение троекратной биологической пробы.
• Если биологическая проба положительная, следует переливание крови
прекратить и начать проводить противошоковую терапию.

Оценить