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SECCIÓN PARASITOLOGÍA

INSTRUCTIVO PARA LA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS

INFECCIÓN POR Plasmodium sp. (Malaria)

INTRODUCCION

La Malaria es una enfermedad parasitaria causada por diferentes especies de Plasmodium y es


transmitida por un vector (mosquito) del género Anopheles. El período de incubación de la
enfermedad es de 10 a 28 días, según la especie de Plasmodium y los síntomas se presentan
bruscamente con escalofríos intensos, fiebre y sudoración.

Chile no es un país endémico para Malaria, sin embargo cuenta con el vector que transmite la
enfermedad. Por lo tanto los mecanismos de vigilancia deben estar atentos a la reaparición de
nuevos casos, ya sea por la introducción debido a viajeros, residentes en países endémicos o
por la reactivación de la transmisión en áreas donde el vector se encuentre presente.

Un diagnóstico certero y oportuno mediante antecedentes clínicos-epidemiológicos y exámenes


de laboratorio es fundamental para la elección del un tratamiento eficaz y una buena evolución
de la enfermedad.

Frente a la sospecha clínica de Malaria, se debe enviar las muestras al Instituto de Salud
Pública (ISP) para su confirmación mediante técnicas específicas de laboratorio. Tanto el
diagnóstico de laboratorio como el seguimiento en el tratamiento se basan en la confirmación de
la presencia del parásito en sangre, el diagnóstico de especie, estadios presentes y su carga
parasitaria. La Sección Parasitología del ISP basa el diagnóstico y la confirmación del caso en el
uso de un algoritmo que incluye: técnicas inmunocromatográficas, moleculares como Reacción
de la Polimerasa en Cadena (PCR) y la observación microscópica en gota gruesa y frotis. La
observación microscópica en la gota gruesa es el método Gold Estándar en el diagnóstico de
laboratorio, donde utilizando la tinción de Giemsa un microscopista entrenado puede diferenciar
las diferentes especies de Plasmodium, sus estadios y su carga parasitaria. El uso del frotis se
considera un apoyo a lo observado en gota gruesa Los métodos inmunocromatográficos por su
parte poseen una alta especificidad y rapidez en su ejecución, con un promedio de 15 minutos y
son capases de diferencias algunas especies de Plasmodium. El uso complementario de la
técnica de PCR permite detectar secuencias específicas de las principales especies del parásito
y es útil para la detección de Malarias mixtas y bajas parasitemias. Estas últimas dos
metodologías son recomendadas para países no endémicos como Chile.

El éxito de un buen diagnóstico se encuentra establecido principalmente en la calidad y


condiciones de la muestra enviada. Por este motivo, el presente instructivo tiene el objetivo de
indicar la correcta manera de la toma de muestra, confección de los frotis y gota gruesa, y del
envío y transporte de la muestra al Instituto de Salud Pública de Chile.

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FONO: 25755399. FAX: 25755660 RedMinsal 255399. EMAIL: parasito@ispch.cl
DEFINICIONES

Gota gruesa: Es una técnica de rutina y consiste en una muestra de una gota de sangre
conformada por numerosas capas en su mayoría de glóbulos rojos, los que son
deshemoglobinizados durante la coloración con Giemsa. Esta concentración de glóbulos rojos
facilita la detección de los parásitos que pudieran estar presentes en su interior en densidades
bajas.

Frotis o Extendido sanguíneo: Es una capa delgada, única de células sanguíneas, fijadas con
metanol y coloreadas con Giemsa, que facilitan la observación de las características
morfológicas de los parásitos presentes en los glóbulos rojos.

REQUISITOS DE TIPO Y CANTIDAD DE MUESTRA

Para la confirmación de Malaria mediante observación microscópica, inmunocromatografía y


PCR se solicita el envío de:

• 2 portaobjetos con un frotis de sangre desde punción capilar cada uno.


• 2 portaobjetos con una gota gruesa de sangre desde punción capilar.
• 2 portaobjetos con un frotis + una gota gruesa en sangre desde punción capilar cada
uno.
• 1 tubo de sangre venosa en EDTA como anticoagulante (entre 2 y 5 ml) para las técnica
inmunocromatográficas y PCR.

Se requiere el envío de todas las muestras solicitadas. La ausencia o mala calidad de las
muestras enviadas es causal de rechazo inmediato y solicitud de nueva muestra.

TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA

Para el proceso de toma de muestra se deben seguir las medidas correspondientes a un nivel
de bioseguridad clase II de acuerdo al Manual de Bioseguridad y buenas prácticas del
establecimiento.

Las muestras deben ser obtenidas de preferencia antes de que el paciente haya recibido
tratamiento antimalárico y para un mayor rendimiento se recomienda que la muestra sea tomada
durante un pick febril > a 37.5 °C , ya que corresponde a los momentos de mayor parasitemia.

El periodo de toma de muestra frente a un caso sospechoso es de 2 a 3 días con intervalos de 8


a 12 entre muestras.

En el caso que el tratamiento haya sido iniciado al momento de la toma de muestra, debe
destacarse en el formulario de envío de muestra.

La extracción de la muestra de sangre con EDTA como anticoagulante se debe realizar de


acuerdo a los procedimientos técnicos propios de cada laboratorio e identificar el tubo con los
datos del paciente.

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Punción capilar

Para la preparación de los frotis y gotas gruesas se recomienda sangre directamente desde
punción capilar y no desde sangre con anticoagulante. El detalle del proceso se presenta a
continuación:

1. Limpiar el lugar de trabajo con alcohol 70%.


2. Limpiar 6 portaobjetos de preferencia con borde esmerilado con ayuda de algodón y
alcohol 70%. Secar los portaobjetos con un paño limpio evitando la presencia de
pelusas.
3. Desinfectar con alcohol 70% la zona para la obtención de la muestra y dejar secar. De
preferencia utilizar el dedo anual de la mano menos hábil. Se puede puncionar lóbulo de
la oreja o talón en caso de recién nacido o lactante.
4. Puncionar con lanceta estéril la zona lateral (menos sensible) del pulpejo del dedo y
presionar para la salida de sangre. Eliminar la primera gota obtenida con gasa estéril.

Preparación del frotis

Desde el dedo puncionado, presionar y colocar suavemente una gota pequeña de sangre, no
más grande que la cabeza de un palo de fósforos (7-8 ul), justo en el centro del portaobjetos.

Extender la gota con ayuda de otro portaobjeto o cubreobjeto en un ángulo de 45º desde el
centro al borde externo de la lámina de manera que quede un extendido fino; de un tamaño no
mayor a 3 cm y con una clara distinción entre cabeza, cuerpo y cola (Ver figura 1).

Figura 1

El nombre del paciente debe se colocado con lápiz de mina en el extremo superior del
frotis

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Deben enviarse dos portaobjetos

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Preparación de la gota gruesa

Desde el dedo puncionado, presionar y colocar suavemente una gota pequeña de sangre, no
más grande que la cabeza de un palo de fósforos (7-8 ul), a 2,5 cm del borde de la lámina que
posee el esmerilado.

Realizar movimientos circulares desde adentro hacia fuera y viceversa con el ángulo de otro
portaobjeto hasta generar un círculo uniforme de 1 cm de diámetro (ver figura 2).
Figura 2

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Deben enviarse dos portaobjetos

Preparación de frotis + gota gruesa

Desde el dedo puncionado, presionar y colocar suavemente 2 gotas pequeñas de sangre tal
cual se preparara un frotis y una gota gruesa en un mismo portaobjetos con borde esmerilado.
(Ver figura 3).
Figura 3

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Deben enviarse dos portaobjetos

Rotulado, secado y fijación de los frotis y gota gruesa

Rotular con lápiz grafito en la zona esmerilada con el nombre del paciente y la fecha de
obtención de la muestra.

Dejar secar el frotis en posición horizontal durante 30 minutos protegida de los insectos, del
polvo, de la luz solar directa y del calor extremo.

Fijar solo los frotis sumergiéndolos en metanol por 3 segundos. Para el caso de la lámina que
posee gota gruesa y frotis al mismo tiempo, sumergir solo la zona del frotis en metanol por 3
segundo procurando no fijar la zona que posee la gota gruesa. Las gotas gruesas no se fijan ya
que impiden la deshemoglobinización de los glóbulos rojos durante la tinción.

NOTA En el caso de los portaobjetos sin borde esmerilado escribir sobre el borde del frotis o
etiquetar.

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ENVÍO DE LAS MUESTRAS

• Las muestras no deben sobrepasar las 48 horas desde su obtención hasta el envío al
ISP.

• Las muestras deben ser enviadas en un recipiente apropiado para su transporte al


laboratorio con la finalidad de evitar cualquier derrame o rotura.

• Enviar las láminas de gota gruesa y frotis protegidas del polvo y a T° ambiente.

• La muestra de sangre en EDTA debe ser transportada en cadena de frío a 4 º C.

• Las muestras deben ser enviadas junto al formulario disponible en la página Web
institucional http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento/2010/04/RG-213.56-007.pdf
a la dirección Av. Marathon #1000, Ñuñoa, Santiago.

• El horario de recepción de las muestras es continuado pero lo recomendado para que


sea entregado en el mismo día al laboratorio es de lunes a viernes de 8:30 a 15:00 hrs.

INFORMACIÓN Y CONSULTAS

Para consultas comunicarse al teléfono 02-25755399, Red MINSAL 255399 o por correo
electrónico a parasito@ispch.cl.

IMPORTANTE

Imprima la hoja N° 4 ya que sirve como plantilla pa ra la realización de la gota gruesa y la forma
combinada.

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