© А.И. ВИСЛОБОКОВ, Ю.Д. ИГНАТОВ, В.А.
БОРИСОВА,
ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
Резюме
В работе использовали метод
внутриклеточного диализа
и фиксации мембранного
потенциала. С помощью
блокаторов кальциевых каналов
израдипина, нифедипина,
бепридила, омегаконотоксина
и гадолиния идентифицированы
Nподобные кальциевые каналы
нейронов прудовика (Lymnaea
stagnalis). Показано
дозозависимое и обратимое
влияние кокаина, морфина,
бупренорфина, селективного
агониста κопиатных
рецепторов U50.488H,
промедола, трамадола и
буторфанола
на кальциевые токи нейронов
моллюска
Ключевые слова
Lymnaea stagnalis;
изолированный нейрон;
кальциевые каналы; гадолиний;
кокаин; морфин; бупренорфин;
буторфанол; U50.488H;
промедол; трамадол
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
997
К.Н. МЕЛЬНИКОВ; 2005
СанктПетербургский государственный медицинский университет
им. акад. И.П. Павлова
ВЛИЯНИЕ БЛОКАТОРОВ КАЛЬЦИЕВЫХ
КАНАЛОВ, ОПИАТНЫХ АНАЛЬГЕТИКОВ
И КОКАИНА НА КАЛЬЦИЕВЫЕ ТОКИ
НЕЙРОНОВ МОЛЛЮСКА
ВВЕДЕНИЕ
В литературе обсуждаются вопросы анальгетического действия
опиатов и формирования процессов зависимости людей и животных
от некоторых веществ центрального действия, в частности, кокаина,
морфина и др. [2, 4, 6, 7, 20]. Механизмы действия опиатов связы(
вают с участием циклических нуклеотидов и ионов кальция, много(
образная и важная роль которых, в том числе и как вторичных по(
средников, в клеточных и системных функциях организма общеиз(
вестна [3, 5, 13, 19].
Имеются данные о том, что опиаты и опиоиды реализуют свой эф(
фект через модуляцию активности различных потенциалоуправляе(
мых ионных каналов нейрональной мембраны. Наиболее распрост(
ранено представление, что такое влияние происходит опосредованно,
через активацию опиатных рецепторов и связанную с ними систему
внутримембранных G(протеинов и внутриклеточных посредников [7,
8, 12]. Показано, что κ(агонист динорфин А избирательно и налоксо(
нобратимо подавляет активность Са2+(каналов N(типа в нейронах ган(
глия заднего корешка мыши, что, в свою очередь, приводит к умень(
шению амплитуды и продолжительности кальций(зависимых потен(
циалов действия в этих нейронах [9, 17].
Установлено, что µ(агонисты взаимодействуют с воротными час(
тицами Са2+(каналов N(типа, которое приводит к замедлению акти(
вации кальциевого тока, уменьшению вероятности открытого состоя(
ния каналов и увеличению времени нахождения каналов в инактиви(
рованном состоянии [15]. Опиаты и опиоиды оказывают заметное
влияние на различные типы калиевых каналов. Показана активация
калиевых каналов, чувствительных к дендротоксину, при действии
агониста κ(опиатных рецепторов U69593 в нейронах гиппокампа.
Предполагается, что увеличение выхода калия из пресинаптических
окончаний ускоряет фазу реполяризации потенциала действия и при(
водит к уменьшению входа ионов кальция в пресинаптические терми(
нали, что, в свою очередь, вызывает уменьшение выделения медиа(
тора пресинаптическими волокнами и нарушению синаптической пе(
редачи [7, 9, 20].
Показано, что морфин налоксонобратимо уменьшает выделение
субстанции Р при антидромной стимуляции седалищного нерва, что
обусловлено активацией Са2+(зависимых К+(каналов, поскольку
ISSN 1606–8181
 ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
в присутствии блокаторов таких каналов эффект
морфина не проявляется [15, 20].
998 В плазматической мембране нейронов описано
6 типов кальциевых каналов, отличающихся по ряду
параметров [3, 5, 19]. Наряду со сходством анало(
гичных типов каналов у разных клеток и видов жи(
вотных между ними имеются и некоторые различия.
В соматической мембране нейронов моллюсков име(
ются кальциевые каналы L(, N( и T(типов, но оста(
ется не выясненным вопрос о том, какие типы каль(
циевых каналов преимущественно встречаются в ней(
ронах прудовика.
Целью данной работы явилась идентификация
кальциевых каналов мембраны сомы изолирован(
ных нейронов прудовика с помощью блокаторов
кальциевых каналов и изучение влияния опиатных
анальгетиков в различных концентрациях на каль(
циевые токи нейронов.
МЕТОДИКА
Объектом исследования были неидентифициро(
ванные нейроны брюхоногого моллюска прудовика
большого (Lymnaea stagnalis). Из тела моллюска
вырезали окологлоточное кольцо нервных гангли(
ев, которое затем обрабатывали 0,25 % (м раство(
ром трипсина в течение 40 мин. Подробно методика
изложена нами ранее [1, 2]. Использовали раство(
ры со следующим ионным составом (мМ):
1) наружные (перфузирующие) растворы для ре(
гистрации суммарного входящего тока: NaCl — 100;
KCl — 5; CaCl2 — 2; MgCl2 — 1,5; Tris(OH — 2;
рН =7,5 и кальциевого тока — CaCl 2 — 10;
MgCl2 — 1,5 ; CsCl — 100; Тris(ОН — 2; рН =7,5;
2) внутриклеточные (диализирующие) раство(
ры для регистрации суммарного выходящего кали(
евого тока: KCl — 120; Tris(OH — 2 ; рН =7,4 и
кальциевого тока: СsCl — 120; Tris(ОН — 2;
рН =7,4.
Перфузирующий раствор подавался в камеру,
где находился нейрон на полиэтиленовой микро(
пипетке, а диализирующий — внутрь этой пипет(
ки. Исследуемые вещества при регистрации каль(
циевых токов добавляли в перфузирующий раст(
вор.
Для измерения трансмембранных ионных токов
применяли метод внутриклеточной перфузии изо(
лированных нейронов и фиксации мембранного
потенциала [5]. После регистрации суммарных ион(
ных токов производили замену внутриклеточного и
наружного растворов на растворы для регистрации
кальциевого тока.
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
Выделение чистых кальциевых токов с их ста(
бильными параметрами, которые принимали за ис(
ходные значения, осуществлялось через 3–5 мин
после полной замены растворов. Затем раствор в
камере, где находился нейрон, заменяли на раствор
с исследуемым веществом. Когда изменения ион(
ных токов, вызванные влиянием вещества, стаби(
лизировались через 2–3 мин, вновь регистрирова(
ли токи. После этого раствор заменяли на исходный
и наблюдали динамику восстановления кальциевых
токов.
Для изучения были взяты: бепридил — неселек(
тивный блокатор L(каналов; израдипин и нифеди(
пин — избирательные блокаторы L(каналов; оме(
га(конотоксин GIVA (далее в тексте — омега(коно(
токсин) и гадолиний — селективные блокаторы
N(каналов; морфин, бупренорфин, промедол, тра(
мадол и буторфанол — агонисты различных типов
опиатных рецепторов; U(50.488H — селективный
агонист κ(опиатных рецепторов; а также кокаин, ока(
зывающий разностороннее влияние на нервную сис(
тему.
Все вещества исследовали только при внеклеточ(
ном приложении в широком диапазоне концентра(
ций от 10–12 до 10–3 М.
Кривые ионных токов оценивали на экране ос(
циллографа, вводили в компьютер и распечатывали
на принтере. Строили и анализировали вольт(ам(
перные, инактивационные характеристики и зави(
симости «концентрация–эффект». Последние были
обработаны статистически с использованием t(кри(
терия Стьюдента. Во всех экспериментах было ис(
следовано около 200 нейронов.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Влияние бепридила, израдипина
и нифедипина
На фоне регистрации стабильных параметров
кальциевого тока наружный раствор заменяли на
раствор с добавлением бепридила в концентраци(
ях от 10–12 до 10–3 М. Поддерживаемый потенциал
оставался на уровне –100 мВ, тестирующий подби(
рали таким, чтобы регистрировался максимум тока
(от 10 до 10 мВ).
Результаты представлены на рис. 1 (кривая 1) в
виде зависимости «концентрация–эффект». Вид(
но, что в малых концентрациях (от 10–12 до 10–10 М )
ток возрастал до 104 % от исходного. Небольшое
подавление тока наблюдалось при действии бепри(
дила в концентрации 10–9 М. В более высоких кон(
ISSN 1606–8181

140
3
100
60 1
I/I0, Са, %
20 2 Влияние бепридила (1), гадолиния (2) и кокаина (3) на кальциевые
0
–12 –10 –8 –6 –4
С, 1∗10n, Μ
центрациях препарат усиливал блокирующее дей(
ствие. Максимальное снижение на 97 % амплиту(
ды кальциевого тока происходило при действии беп(
ридила в концентрации 10–3 М. Восстановление ам(
плитуды тока наблюдалось через 5 мин от начала
отмывания, оно было не полным и дозозависимым:
после действия препарата в концентрации 10–7 М
ток восстанавливался до 70 %, а в концентрации
10–3 М — до 8 % от исходного значения.
При действии бепридила во всех концентрациях
неспецифический ток утечки мембраны, положение
максимума вольт(амперной характеристики кальци(
евых токов на оси потенциалов, кинетика их актива(
ции и инактивации практически не изменялись.
Примечательно, что блокаторы L(кальциевых кана(
лов из группы дигидропиридинов — израдипин и ни(
федипин в концентрациях от 10–9 до 10–4 М — прак(
тически не изменяли параметры кальциевых токов.
Влияние гадолиния,
омегаконотоксина и кокаина
Гадолиний в концентрациях от 10–12 до 10–7 М уве(
личивал амплитуду кальциевого тока до 126 %, а в
концентрации 10–7 М подавлял ее (рис. 1, кривая 2).
Максимальное снижение амплитуды кальциевого
тока до 1,7 % выявлено при действии гадолиния в
концентрации 10–3 М. Восстановление амплитуды
тока происходило через 5–7 мин от начала отмыва(
ния, было не полным и дозозависимым: после дей(
ствия препарата в концентрации 10–7 М ток восста(
навливался до 70–80 % от исходного значения, а пос(
ле действия вещества в концентрации 10–3 М— лишь
до 30 %. При действии гадолиния во всех концентра(
циях положение максимума вольт(амперной харак(
теристики на оси потенциалов, кинетика активации
и инактивации кальциевых токов практически не из(
менялись. Неспецифические токи утечки мембраны
изменялись незначительно и неоднозначно.
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
999
Рис. 1
каналы нейронов прудовика:
По оси абсцисс — концентрация веществ, по оси ординат — кальциевый
ионный ток (I — при действии вещества, I0 — до действия), доверительные
интервалы при р = 95 %
Омега(конотоксин в концентрациях 10–5–10–6 М
не снижал кальциевые токи, не изменялись и неспе(
цифические токи утечки мембраны.
При действии кокаина в концентрации от 10–12 до
–6
10 М увеличение амплитуды кальциевого тока про(
исходило при концентрации 10–8 М до 107 % от ис(
ходного значения (рис. 1, кривая 3). Подавление тока
начиналось только при его действии в концентра(
ции 10–5 М, а в более высоких концентрациях оно
усиливалось. Максимальное снижение амплитуды
кальциевого тока до 54,5 % от исходного значения
происходило под влиянием кокаина в концентрации
10–3 М. После действия кокаина в концентрациях от
10–12 до 10–5 М амплитуда кальциевых токов дли(
тельное время оставалась увеличенной и лишь че(
рез 5–7 мин отмывания возвращалась к исходному
значению. После действия кокаина в концентрации
10–3 М восстановление сниженной амплитуды каль(
циевого тока до 87 % от исходного значения проис(
ходило через 5–15 мин.
Во всех случаях максимум вольт(амперных харак(
теристик мембраны наблюдался при тестирующем
потенциале 10 мВ и при действии кокаина не сме(
щался (рис. 2А). Однако под влиянием кокаина в кон(
центрации 10–4 М он сдвигался в сторону деполяри(
зации вправо по оси потенциалов на 10 мВ. После
отмывания в течение 10–15 мин смещение макси(
мума вольт(амперной характеристики сохранялось.
Кривые стационарной инактивации кальциевых то(
ков под влиянием кокаина сдвигались в сторону ги(
перполяризации влево вдоль оси потенциалов при(
мерно на 10 мВ, а положение инактивационных ха(
рактеристик не изменялось.
Характерный пример изменений амплитуды и
кинетики кальциевых токов при действии кокаина
в различных концентрациях представлен на рис.
2Б. Видно увеличение тока после приложения ко(
каина в концентрации 10–8 М (кривая 2), уменьше(
ние его при действии кокаина в концентрации
10–3 М (кривая 3) и увеличение, последовавшее
ISSN 1606–8181
 ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

A Б
–30 –20 –10 0 10 20 30 40 V, mV 10
0
1000 5
Т0 Т1 Т2
–5 0

ICa, nA
ICa, nA

–10 –5 3
–10
–15
1
1 –15
–20 2
3 –20 4
–25 2

Рис. 2
Пример изменений кальциевых токов нейронов прудовика под влиянием кокаина:
А — изменения вольтамперных характеристик: по оси абсцисс — тестирующий потенциал, по оси ординат —
кальциевый ионный ток. 1 — контроль; 2 — кокаин 10–7 М; 3 — отмывание. Б — изменения кинетики и амплитуды:
Т0 = Т2 = 100 мс; Т1 = 2 с. 1 — контроль; 2 — кокаин 10–7 М; 3 — кокаин 10–3 М; 4 — отмывание

после отмывания (кривая 4). Кинетику активации
кальциевого тока оценивали по времени достиже(
ния его пикового значения. Так, если в норме это
время составляло 13,4 мс, при действии кокаина в
концентрации 10–6 М — 12,0 мс, то при действии
кокаина в концентрации 10 –3 М — 9,4 мс, то есть
наблюдалось ускорение процесса активации каль(
циевого тока (рис. 2). Кинетика инактивации тока
в норме и при действии кокаина по визуальным
оценкам может быть описана двумя экспонентами
с постоянной времени порядка десятка мс у одной и
сотни — у другой. При действии кокаина кинетика
инактивации практически не изменялась. Неспе(
цифические токи утечки мембраны под влиянием
кокаина изменялись незначительно и разнонаправ(
ленно.
Влияние морфина, бупренорфина
и U50.488H
Бупренорфин, как и морфин, дозозависимо, но
сильнее угнетал кальциевые токи (рис. 3). Так под
влиянием бупренорфина в концентрации 10–3 М ток
снижался почти на 56 %. После его действия в кон(
центрациях 10–12 –10–5 М восстановление токов
было полным, но после действия бупренорфина в
концентрациях 10–4 и 10–3 М — только до 80 % от
исходных величин.
Влияние U(50.488H (рис. 3) было дозозависи(
мым, обратимым и монофазным. Подавление токов
наблюдалось в концентрации 10–5 М и усиливалось
в концентрации 10–2 М (подавление на 43 % ). Пос(
ле действия препарата в концентрации 10–2 М вос(
становление токов происходило только до 57 % от
исходных значений.
Все три вещества не изменяли кинетику актива(
ции и инактивации токов. Неспецифические токи
утечки мембраны снижались на 5–7 нА, однако при
действии бупренорфина этот эффект был выражен
120

Морфин дозозависимо снижал кальциевый ток,

начиная с концентрации 10–6 М, достигая уменьше( 80
1
ния на 29 % при концентрации 10–3 М (рис. 3). Пос(
2
ле его действия в концентрации 10–12 –10–4 М вос(
3
I/I0, Са, %

становление тока было полным, а после действия в 40

более высоких концентрациях — только до 80 % от

исходных величин. Нами не установлено антагониз( 0
ма налоксона в действии морфина на ионные токи –12 –10 –8 –6 –4 –2

нейронов прудовика. Так, при совместном их приме( С, 1∗10n, Μ

нении по 500 мкМ не было устранения подавления
тока морфином, он снижался на 45–50 % по срав(
нению с контролем, то есть примерно в 2 раза силь(
нее, чем при изолированном действии морфина или
налоксона. Неспецифический ток утечки под влия(
нием налоксона и морфина уменьшался.
Рис. 3
Влияние морфина (1), κопиатного агониста
U50.488H (2) и бупренорфина (3) на кальциевый ток
нейронов прудовика: по оси абсцисс — концентра
ция веществ, по оси ординат — кальциевый ионный
ток (I — при действии вещества, I0— до действия),
доверительные интервалы при р = 95 %

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


слабее и увеличение токов утечки было только на
1 нА. Вольт(амперные характеристики кальциевых
токов при действии всех соединений изменялись
сходным образом — снижалась амплитуда токов, но
не происходило сдвига их максимума.
Влияние промедола, трамадола
и буторфанола
Все препараты, как и морфин, начиная с концен(
трации 1–100 мкМ, снижали амплитуду кальцие(
вых токов и максимально подавляли ее в концентра(
ции 1000 мкМ (рис. 4А). Буторфанол в диапазоне
концентраций 10–1000 мкМ уменьшал амплитуду
кальциевого тока в большей степени, чем другие ве(
щества. Обратимость эффекта всех соединений
была почти полной, но наиболее быстро и полнос(
тью амплитуда кальциевого тока восстанавливалась
после действия трамадола и через 0,5–1мин отмы(
вания составляла 99,0 ± 9,72 % от исходной вели(
чины. Кинетика тока под влиянием промедола и
трамадола во всем диапазоне концентраций прак(
тически не изменялась. Было обнаружено, что лишь
при действии буторфанола в высоких концентраци(
ях (порядка 100 ∑ 1000 мкМ) наблюдалось некото(
рое замедление инактивации кальциевого тока (ри(
с. 4Б). Все анальгетики не смещали вольт(ампер(
ные характеристики кальциевых каналов по оси
потенциалов, что указывает на отсутствие измене(
ний потенциала фиксированных зарядов мембраны
в области этих каналов.
А Б
120
I/I0, Са, %
100
80
60
40
1
20 2
3
0 100 1000
1 10
С, mkM
Рис. 4
Влияние промедола (1), трамадола (2) и буторфанола (3) на кальциевые токи нейронов прудовика.
А — зависимости «концентрация–эффект»: по оси абсцисс — концентрация препаратов (мкМ); по оси ординат —
отношение амплитуды кальциевого тока при действии веществ к его величине в контроле, %.
Б — кривые кальциевого тока нейрона моллюска
в контроле (1), при действии буторфанола
в концентрации 100 мкМ (2) и после отмывания нейрона (3): по оси абсцисс — время, мс; Т1 = 50 мс; Т2 = 200 мс;
Т3 = 100 мс; Т4 = 1 с; по оси ординат — амплитуда
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ
РЕЗУЛЬТАТОВ
1001
Известно, что нейроны моллюсков содержат не(
сколько типов кальциевых каналов в различных со(
отношениях: высокопороговые и низкопороговые,
отличающиеся кинетикой их развития [5, 10, 14],
которые, вероятно, можно отнести к L(, N( и Т(ти(
пам каналов. Было показано, что гадолиний дозоза(
висимо блокировал N(тип кальциевых каналов кле(
ток нейробластомы в концентрациях от 0,1 до
100 мкМ. Следует отметить, что при высоких кон(
центрациях гадолиния (100 мкМ) происходило по(
давление также L( и Т(типов кальциевых токов
[11]. В наших опытах подавление N(тока на 50 %
происходило при действии гадолиния в концентра(
циях 10–20 мкМ, что в принципе соответствует дан(
ным литературы. Поскольку мы исследовали более
широкий диапазон концентраций от 10–12 до 10–3 М,
то обнаружили двухфазный характер действия га(
долиния на кальциевые каналы. Под влиянием гадо(
линия в низких концентрациях происходило увели(
чение амплитуды кальциевого тока, а подавление его
начиналось в концентрации 10–7 М и достигало мак(
симума при концентрации 10–3 М.
Из литературы известно, что омега(конотоксин
весьма специфично блокирует N(тип кальциевых ка(
налов нейронов теплокровных животных, аналогич(
но тому, как тетродотоксин подавляет натриевые ка(
налы [21]. Нам не удалось найти данных литературы
о влиянии омега(конотоксина на кальциевые каналы
IСа,
nA
Т1 Т2 Т3 Т4
0
2
–4
3
–8
1
–12
–16
ISSN 1606–8181
 ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
нейронов моллюсков, и мы надеялись с помощью оме(
га(конотоксина заблокировать и идентифицировать
1002 N(тип кальциевых каналов. Однако результаты на(
ших экспериментов оказались довольно неожидан(
ными. Омега(конотоксин не подавлял кальциевые
токи нейронов прудовика, сходные по электрофизио(
логическим характеристикам с N(типом кальциевых
токов. На этом основании можно предположить, что
фармакологические свойства кальциевых каналов
N(типа нейронов позвоночных и моллюсков отлича(
ются. Возможно, эти различия обусловлены особен(
ностями субмолекулярной организации каналов,то
есть кальциевые каналы нейронов моллюсков не со(
держат специфических мест связывания для омега(
конотоксина. В этом отношении отличия кальциевых
каналов нейронов моллюсков от таковых у теплокров(
ных аналогичны отличиям натриевых каналов ней(
ронов моллюсков, не блокирующихся тетродотокси(
ном, от натриевых каналов нейронов теплокровных,
которые им блокируются [5, 13].
По данным литературы, бепридил является не(
селективным блокатором L(типа кальциевых кана(
лов [11, 13], однако каких(либо конкретных данных
о его влиянии на кальциевые токи нейронов мол(
люсков в литературе обнаружить не удалось. Нами
показано, что дигидропиридины в широком диапа(
зоне концентраций (10–9–10–4 М) не оказывают
специфического блокирующего действия на кальци(
евые токи нейронов прудовика. Следовательно, учи(
тывая данные литературы и результаты наших экс(
периментов, можно предположить, что на мембра(
не нейронов прудовика преобладают кальциевые
каналы, которые можно идентифицировать как
N(подобные. Потенциалзависимые инактивацион(
ные и вольт(амперные характеристики этих кана(
лов, представленные в данной работе, подтвержда(
ют это предположение. Для L(подобных каналов
процессы инактивации кальциевого тока должны бы
быть более медленными.
Наши результаты о действии опиатных анальгети(
ков на трансмембранные кальциевые токи нейронов
прудовика позволяют утверждать, что все они обла(
дают мембранотропным действием. Установлено, что
под их влиянием происходит снижение кальциевых
токов. По силе блокирующего действия на кальцие(
вые токи эти соединения можно расположить в
следующий ряд:
буторфанол = бупренорфин > промедол >
> трамадол > U(50.488H >морфин.
Можно предположить, что при действии опиатов
снижается количество функционирующих каналов.
Снижение ионных токов возможно также по причи(
не уменьшения времени открытого состояния от(
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
дельных каналов или уменьшения частоты их откры(
вания.
Опиаты не изменяют потенциала фиксированных
зарядов на мембране, на что указывает отсутствие
смещения максимума вольт(амперных характерис(
тик мембраны, а в случае изменения оно должно про(
исходить [5, 13]. Почти полное и достаточно быст(
рое восстановление ионных токов после действия
препаратов свидетельствует о слабом их связыва(
нии со структурами мембраны нейронов.
В литературе есть отдельные данные об увели(
чении токов под влиянием кокаина [16, 18]. Быстрая
обратимость влияния кокаина, которая показана
нами, указывает на относительно непрочное связы(
вание с молекулярными структурами мембраны.
Отсутствие сдвига максимума вольт(амперных ха(
рактеристик мембраны вдоль оси потенциалов под
влиянием кокаина в концентрации 10–7 М указыва(
ет на неизменность величины потенциала фиксиро(
ванных зарядов на мембране. Максимум вольт(ам(
перных характеристик под влиянием кокаина в кон(
центрации 10–4 М смещался вдоль оси потенциалов
в сторону деполяризации от 0 до 10 мВ. После от(
мывания он оставался смещенным на 10 мВ, что сви(
детельствует об устойчивом изменении потенциала
фиксированных зарядов на мембране.
По данным литературы, кинетика активации и
инактивации кальциевого тока нейронов моллюсков
имеет сложный характер и может быть описана мо(
дифицированными уравнениями Ходжкина–Хакс(
ли [5, 10, 19]. Кинетика активации аппроксимиру(
ется переменной m в квадратичной зависимости.
В принципе, изменения процесса активации каль(
циевого тока могут быть обусловлены множеством
причин, среди которых существенными являются из(
менения проводимости одиночных каналов и скоро(
стей их активации и инактивации. Ускорение про(
цесса активации при действии кокаина, возможно,
связано с непосредственным влиянием на актива(
ционные ворота, что может приводить к увеличе(
нию частоты открывания и закрывания одиночных
каналов. Существенно отметить, что ускорение ак(
тивации кальциевого тока происходило как при дей(
ствии малых (10–6 М), так и высоких (10–3 М) кон(
центраций кокаина. Кинетика инактивации кальци(
евого тока в норме может быть описана двумя
экспонентами, одна из которых имеет постоянную
времени в несколько десятков, а другая — в несколь(
ко сотен миллисекунд. Наша качественная оценка
процесса инактивации подтверждает эти факты.
Можно высказать несколько предположений о
причинах увеличения кальциевых токов под влияни(
ем кокаина. Увеличение токов без существенных из(
ISSN 1606–8181

менений их кинетики может быть связано с увеличе(
нием количества открывающихся при действии кока(
ина ионных каналов, например, с экспрессией допол(
нительных каналов, с противоинактивационным дей(
ствием кокаина, с увеличением концентрации цАМФ.
Эти предположения основаны еще и на том, что эф(
фекты кокаина наиболее выражены на свежеизоли(
рованных нейронах и нейронах с высоким уровнем
функционального состояния. Уменьшение кальциевых
токов при действии кокаина в более высоких концент(
рациях— от 10–5 до 10–3 М связано либо с насыщени(
ем липидного матрикса мембраны молекулами кокаи(
на, в результате чего затрудняется функционирование
кальциевых каналов, либо с прямым блокированием
кальциевых каналов кокаином.
Наши результаты о действии опиатных анальгети(
ков в целом соответствуют данным литературы. В
ряде исследований показано, что при внеклеточном
действии морфин подавлял кальциевые трансмемб(
ранные токи, уменьшая вход Ca2+ в клетку, и вызы(
вал активацию калиевых каналов, увеличивая выход
K+ из нейронов [9, 15]. Оба эти процесса приводят к
гиперполяризации нейрональной мембраны, повы(
шению порога возбудимости нервных клеток и нару(
шению процессов генерации и проведения возбуж(
дения по нервному волокну. Агонисты опиатных ре(
цепторов (в том числе µ(типа) уменьшают вход Са2+
в клетки различных структур мозга, причем этот
эффект связывают с уменьшением кальциевой про(
водимости через потенциалозависимые кальциевые
каналы [7, 9, 20].
Имеются данные и о рецептор(независимом дей(
ствии морфина на мембранные токи в кардиомиоци(
тах [15]. Агонисты κ(опиатных рецепторов в нейронах
гиппокампа вызывают активацию калиевых каналов,
чувствительных к дендротоксину. Увеличение выхода
калия из пресинаптических окончаний ускоряет фазу
реполяризации потенциала действия и приводит к
уменьшению входа ионов кальция в пресинаптические
терминали, что, в свою очередь, вызывает уменьше(
ние выделения медиатора пресинаптическими волок(
нами и нарушению синаптической передачи [5, 13].
Существует представление о рецепторопосредованной
модуляции агонистами опиатных рецепторов функций
потенциалозависимых ионных каналов через G(бел(
ки и вторичные посредники [8, 17].
По нашим данным, мембранотропное влияние
опиатных анальгетиков имеет сходство с влиянием
на нейроны местных анестетиков. Механизм подав(
ления токов при действии анальгетиков на потенци(
алоуправляемые ионные каналы, вероятно, связан с
тем, что, как и при действии анестетиков, снижается
количество функционирующих каналов. Снижение
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
ионных токов возможно также по причине уменьше(
ния времени открытого состояния отдельных кана(
лов или уменьшения частоты их открывания, что не 1003
отвергает возможности взаимодействия исследован(
ных веществ с воротными механизмами каналов,
о чем свидетельствуют полученные нами экспери(
ментальные данные. Поскольку скорость активации
или инактивации ионных токов определяется сте(
пенью функциональной активности соответствую(
щих воротных структур (активационных m(ворот
или инактивационных h(ворот) ионных каналов, то
не исключена возможность взаимодействия этих
анальгетиков непосредственно с воротными части(
цами кальциевых каналов и каналов задержанного
калиевого тока. Такому предположению не противо(
речат и данные литературы. Установлено, что µ(аго(
нисты взаимодействуют с воротными частицами ка(
налов N(типа, что проявляется замедлением актива(
ции кальциевого тока, уменьшением вероятности
открытого состояния Са2+(каналов N(типа и увели(
чением времени нахождения каналов в закрытом
(инактивированном) состоянии [8, 12, 15].
Уменьшение кальциевой проводимости оказывает
существенное влияние на электрофизиологические
характеристики нейрональной активности не только
за счет уменьшения суммарного входящего тока, но и
в результате опосредованного действия ионов каль(
ция на калиевые токи и его возвратное самоблокиру(
ющее действие. В нейрональной соматической мем(
бране присутствует особая популяция кальций(зави(
симых калиевых каналов, которые активируются во
время деполяризации по мере поступления ионов Са2+
внутрь нейрона по кальциевым каналам. Возможно,
что снижение амплитуды выходящих калиевых токов
под влиянием анальгетиков происходит вследствие
их первичного блокирующего действия на кальцие(
вые каналы и уменьшения входа в клетку ионизиро(
ванного Са2+, что и приводит к нарушению процесса
активации Са2+(регулируемых К+(каналов. Кроме
того, ионы кальция, являясь вторичным посредником,
играют ключевую роль в реализации биохимических
клеточных ответов. Полученные за последние годы
данные о том, что действие опиатов тесно связано с
G(белками и системами вторичных посредников [8,
12], позволяют предположить, что эта связь может
осуществляться и за счет модулирования этими ве(
ществами кальциевой проводимости.
Следовательно можно допустить, что анальгети(
ки опосредованно действуют на калиевую проводи(
мость за счет снижения концентрации ионов Са2+ в
цитоплазме нервной клетки. Не исключена возмож(
ность и сочетанного их действия на калиевые кана(
лы: как непосредственное подавление их активнос(
ISSN 1606–8181
 ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ
ти, так и опосредованное через нарушение входа
ионизированного кальция. Можно предположить,
что анальгетики, действуя на внесинаптическую
1004
мембрану через модуляцию активности потенциа(
лоуправляемых кальциевых и Са2+(зависимых ка(
лиевых каналов, могут уменьшать ритмическую ак(
тивность нейронов центральной нервной системы,
частоту генерации ими потенциалов действия и, тем
самым, угнетать передачу ноцицептивных сигналов
в спинном и головном мозге. Известно, что эти ка(
налы в мембранах нервной клетки локализуются,
как правило, во внесинаптической области сомы
нейрона, в районе аксонального холмика и далее по
аксону, и играют ведущую роль в процессах генера(
ции потенциала действия.
Таким образом, полученные нами результаты по(
зволяют считать, что в нейронах прудовика преоб(
ладают N(подобные кальциевые каналы, функцио(
нирование которых модулируется опиатными
анальгетиками и кокаином. Опиатные анальгетики
непосредственно взаимодействуют с потенциалоуп(
равляемыми ионными каналами нейрональной мем(
браны и могут изменять их активность помимо из(
вестного действия через специфические рецепторы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Вислобоков А.И. и др. Мембранные
механизмы действия на нервные клетки
анестетиков, анальгетиков и противоарит
мических средств // Мед. акад. журн. —
2001. — Т. 1, № 1. — С. 25–33.
2. Вислобоков А.И., Савоськин А.Л. Влияние
опиатных анальгетиков на потенциал
управляемые ионные каналы нейронов
прудовика // Эксперим. и клин. фармакол. —
2000. — Т. 63, № 4. — С. 7–12.
3. Вислобоков А.И., Копылов А.Г., Бовтюш
ко В.Г. Кальциевые каналы клеточных
мембран // Усп. физиол. наук. — 1995. —
Т. 26, № 1. — С. 93–110.
4. Игнатов Ю.Д., Зайцев А.А. Нейрофизиоло
гические механизмы боли // Болевой
синдром / Под ред. В.А. Михайловича и
Ю.Д. Игнатова. — Л., 1990. — Гл. 1. —
С. 7–44.
5. Костюк П.Г. Кальций и клеточная
возбудимость. — М., 1986. — 256 с.
6. Шабанов П.Д. Основы наркологии. —
СПб.: Лань, 2002. — 560 с.
7. Alzheimer C., Bruggencate G.T. Nonopioid
actions of the kopioid receptor agonists U50488H
and U69593 on electrophysiologie properties of
hippocampal CA3 neurons in vitro // J. Pharmacol.
Exp. Ther. — 1990. — Vol. 225. — P. 900–905.
Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005
8. Barrett C.F., Rittenhouse A.R. Modulation of
Ntype calcium channel activity by Gproteins
and protein kinase C // J. Gen. Physiol. —
2000. — Vol. 115, N 3. — P. 277–286.
9. Bradford H.F., Crowder J.M., White E.J.
Inhibitory actions of opioid compounds on
calcium fluxes and neurotransmitter release
from mammalian cerebral cortical slices // Br. J.
Pharmacol. — 1986. — Vol. 88 — P. 87–93.
10. Chad G., Eckert R., Ewald D. Kinetics of Ca
dependent inactivacion in clamped neurones
of Aplysia californica // J. Physiol. (London). —
1984. — Vol. 347. — P. 279–300.
11. Docherty R.J. Gadolinium selectively
blocks a component of Ca2+ current in rodent
neuroblastoma // J. Physiol. (London). —
1988. — Vol. 398. — P. 33–47.
12. Dolphin A.C. // Pharmacol. Rev. — 2003. —
Vol. 55. — P. 607–627.
13. Hille B. Ion channels of excitable membranes.
Third Edition. — University of Washington,
2001. — 722 p.
14. Kits K.S., Mansvelder H.D. Voltage gated
calcium channels in molluscs: classification,
Ca2+ dependent inactivation, modulation and
functional roles // Invert. Neurosci. — 1996. —
Vol. 2, N. 1. — P. 9–34.
15. North R.A. Opioid receptor types and
membrane ion channels // Trends Neurosci. —
1986. — Vol. 9. — P. 114–117.
16. Premkumar L.S. Selective potentiation of
Ltype calcium channel currents by cocaine in
cardiac myocytes // Molecular Pharmacol. —
1999. — Vol. 56. — P. 1138–1142.
17. Shen K.F., Crain S.M. Dual opioid modulation
of the action potential duration of mouse dorsal root
ganglion neurons in culture // Brain Research. —
1989. — Vol. 491, N 2. — P. 227–242.
18. Vislobokov A.I., Mantsev V.V., Kuzmin A.V.
Cocaine, amphetamine and cathinone, but not
nomifensine and pargyline increase calcium
inward current in internally perfused neurons //
Life Sci. —1993. — Vol. 52, N 23. — P. 261–265.
19. White G.B., Pfahnl A., Haddock S., Lamers S.,
Kits K.S., Mansvelder H.D. Voltage gated calcium
channels in molluscs: classification, Ca 2+
dependent inactivation, modulation and
functional roles // Invert. Neurosci. — 1996. —
Vol. 2. — P. 9–34.
20. Xiang J.Z., Adamson D., Brammer M.J.,
Campbell I.C. The Kopiate agonist U50488H
decreases the entry of Ca into rat cortical
synaptosomes by inhibiting N but not Ltype
caicium channels // Neuropharmacol. —
1990. — Vol. 29, N 5. — P. 439–44.
21. Yochikami D., Bagabaldo Z., Olivera B.M.
The ingibitory effects of omegaconotoxins on
Ca channels and synapses // Annals N.Y. Acad.
Sci. —1989. — Vol. 560. — P. 230–248.
ISSN 1606–8181