Вы находитесь на странице: 1из 8

© А.И. ВИСЛОБОКОВ, Ю.Д. ИГНАТОВ, В.А.

БОРИСОВА,
997
К.Н. МЕЛЬНИКОВ; 2005
СанктПетербургский государственный медицинский университет
ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ им. акад. И.П. Павлова

ВЛИЯНИЕ БЛОКАТОРОВ КАЛЬЦИЕВЫХ


КАНАЛОВ, ОПИАТНЫХ АНАЛЬГЕТИКОВ
И КОКАИНА НА КАЛЬЦИЕВЫЕ ТОКИ
Резюме НЕЙРОНОВ МОЛЛЮСКА
В работе использовали метод
внутриклеточного диализа
и фиксации мембранного
потенциала. С помощью ВВЕДЕНИЕ
блокаторов кальциевых каналов
израдипина, нифедипина,
бепридила, омегаконотоксина В литературе обсуждаются вопросы анальгетического действия
и гадолиния идентифицированы опиатов и формирования процессов зависимости людей и животных
Nподобные кальциевые каналы от некоторых веществ центрального действия, в частности, кокаина,
нейронов прудовика (Lymnaea
stagnalis). Показано морфина и др. [2, 4, 6, 7, 20]. Механизмы действия опиатов связы(
дозозависимое и обратимое вают с участием циклических нуклеотидов и ионов кальция, много(
влияние кокаина, морфина, образная и важная роль которых, в том числе и как вторичных по(
бупренорфина, селективного
агониста κопиатных средников, в клеточных и системных функциях организма общеиз(
рецепторов U50.488H, вестна [3, 5, 13, 19].
промедола, трамадола и Имеются данные о том, что опиаты и опиоиды реализуют свой эф(
буторфанола
на кальциевые токи нейронов фект через модуляцию активности различных потенциалоуправляе(
моллюска мых ионных каналов нейрональной мембраны. Наиболее распрост(
ранено представление, что такое влияние происходит опосредованно,
через активацию опиатных рецепторов и связанную с ними систему
внутримембранных G(протеинов и внутриклеточных посредников [7,
8, 12]. Показано, что κ(агонист динорфин А избирательно и налоксо(
нобратимо подавляет активность Са2+(каналов N(типа в нейронах ган(
глия заднего корешка мыши, что, в свою очередь, приводит к умень(
шению амплитуды и продолжительности кальций(зависимых потен(
циалов действия в этих нейронах [9, 17].
Установлено, что µ(агонисты взаимодействуют с воротными час(
тицами Са2+(каналов N(типа, которое приводит к замедлению акти(
Ключевые слова
вации кальциевого тока, уменьшению вероятности открытого состоя(
Lymnaea stagnalis; ния каналов и увеличению времени нахождения каналов в инактиви(
изолированный нейрон;
кальциевые каналы; гадолиний;
рованном состоянии [15]. Опиаты и опиоиды оказывают заметное
кокаин; морфин; бупренорфин; влияние на различные типы калиевых каналов. Показана активация
буторфанол; U50.488H; калиевых каналов, чувствительных к дендротоксину, при действии
промедол; трамадол
агониста κ(опиатных рецепторов U69593 в нейронах гиппокампа.
Предполагается, что увеличение выхода калия из пресинаптических
окончаний ускоряет фазу реполяризации потенциала действия и при(
водит к уменьшению входа ионов кальция в пресинаптические терми(
нали, что, в свою очередь, вызывает уменьшение выделения медиа(
тора пресинаптическими волокнами и нарушению синаптической пе(
редачи [7, 9, 20].
Показано, что морфин налоксонобратимо уменьшает выделение
субстанции Р при антидромной стимуляции седалищного нерва, что
обусловлено активацией Са2+(зависимых К+(каналов, поскольку

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

в присутствии блокаторов таких каналов эффект Выделение чистых кальциевых токов с их ста(
морфина не проявляется [15, 20]. бильными параметрами, которые принимали за ис(
998 В плазматической мембране нейронов описано ходные значения, осуществлялось через 3–5 мин
6 типов кальциевых каналов, отличающихся по ряду после полной замены растворов. Затем раствор в
параметров [3, 5, 19]. Наряду со сходством анало( камере, где находился нейрон, заменяли на раствор
гичных типов каналов у разных клеток и видов жи( с исследуемым веществом. Когда изменения ион(
вотных между ними имеются и некоторые различия. ных токов, вызванные влиянием вещества, стаби(
В соматической мембране нейронов моллюсков име( лизировались через 2–3 мин, вновь регистрирова(
ются кальциевые каналы L(, N( и T(типов, но оста( ли токи. После этого раствор заменяли на исходный
ется не выясненным вопрос о том, какие типы каль( и наблюдали динамику восстановления кальциевых
циевых каналов преимущественно встречаются в ней( токов.
ронах прудовика. Для изучения были взяты: бепридил — неселек(
Целью данной работы явилась идентификация тивный блокатор L(каналов; израдипин и нифеди(
кальциевых каналов мембраны сомы изолирован( пин — избирательные блокаторы L(каналов; оме(
ных нейронов прудовика с помощью блокаторов га(конотоксин GIVA (далее в тексте — омега(коно(
кальциевых каналов и изучение влияния опиатных токсин) и гадолиний — селективные блокаторы
анальгетиков в различных концентрациях на каль( N(каналов; морфин, бупренорфин, промедол, тра(
циевые токи нейронов. мадол и буторфанол — агонисты различных типов
опиатных рецепторов; U(50.488H — селективный
агонист κ(опиатных рецепторов; а также кокаин, ока(
МЕТОДИКА зывающий разностороннее влияние на нервную сис(
тему.
Объектом исследования были неидентифициро( Все вещества исследовали только при внеклеточ(
ванные нейроны брюхоногого моллюска прудовика ном приложении в широком диапазоне концентра(
большого (Lymnaea stagnalis). Из тела моллюска ций от 10–12 до 10–3 М.
вырезали окологлоточное кольцо нервных гангли( Кривые ионных токов оценивали на экране ос(
ев, которое затем обрабатывали 0,25 % (м раство( циллографа, вводили в компьютер и распечатывали
ром трипсина в течение 40 мин. Подробно методика на принтере. Строили и анализировали вольт(ам(
изложена нами ранее [1, 2]. Использовали раство( перные, инактивационные характеристики и зави(
ры со следующим ионным составом (мМ): симости «концентрация–эффект». Последние были
1) наружные (перфузирующие) растворы для ре( обработаны статистически с использованием t(кри(
гистрации суммарного входящего тока: NaCl — 100; терия Стьюдента. Во всех экспериментах было ис(
KCl — 5; CaCl2 — 2; MgCl2 — 1,5; Tris(OH — 2; следовано около 200 нейронов.
рН =7,5 и кальциевого тока — CaCl 2 — 10;
MgCl2 — 1,5 ; CsCl — 100; Тris(ОН — 2; рН =7,5;
2) внутриклеточные (диализирующие) раство( РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ры для регистрации суммарного выходящего кали(
евого тока: KCl — 120; Tris(OH — 2 ; рН =7,4 и Влияние бепридила, израдипина
кальциевого тока: СsCl — 120; Tris(ОН — 2; и нифедипина
рН =7,4.
Перфузирующий раствор подавался в камеру, На фоне регистрации стабильных параметров
где находился нейрон на полиэтиленовой микро( кальциевого тока наружный раствор заменяли на
пипетке, а диализирующий — внутрь этой пипет( раствор с добавлением бепридила в концентраци(
ки. Исследуемые вещества при регистрации каль( ях от 10–12 до 10–3 М. Поддерживаемый потенциал
циевых токов добавляли в перфузирующий раст( оставался на уровне –100 мВ, тестирующий подби(
вор. рали таким, чтобы регистрировался максимум тока
Для измерения трансмембранных ионных токов (от 10 до 10 мВ).
применяли метод внутриклеточной перфузии изо( Результаты представлены на рис. 1 (кривая 1) в
лированных нейронов и фиксации мембранного виде зависимости «концентрация–эффект». Вид(
потенциала [5]. После регистрации суммарных ион( но, что в малых концентрациях (от 10–12 до 10–10 М )
ных токов производили замену внутриклеточного и ток возрастал до 104 % от исходного. Небольшое
наружного растворов на растворы для регистрации подавление тока наблюдалось при действии бепри(
кальциевого тока. дила в концентрации 10–9 М. В более высоких кон(

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

140

3
100 999

60 1
I/I0, Са, %

Рис. 1
20 2 Влияние бепридила (1), гадолиния (2) и кокаина (3) на кальциевые
каналы нейронов прудовика:
0
По оси абсцисс — концентрация веществ, по оси ординат — кальциевый
–12 –10 –8 –6 –4
ионный ток (I — при действии вещества, I0 — до действия), доверительные
С, 1∗10n, Μ интервалы при р = 95 %

центрациях препарат усиливал блокирующее дей( Омега(конотоксин в концентрациях 10–5–10–6 М


ствие. Максимальное снижение на 97 % амплиту( не снижал кальциевые токи, не изменялись и неспе(
ды кальциевого тока происходило при действии беп( цифические токи утечки мембраны.
ридила в концентрации 10–3 М. Восстановление ам( При действии кокаина в концентрации от 10–12 до
–6
плитуды тока наблюдалось через 5 мин от начала 10 М увеличение амплитуды кальциевого тока про(
отмывания, оно было не полным и дозозависимым: исходило при концентрации 10–8 М до 107 % от ис(
после действия препарата в концентрации 10–7 М ходного значения (рис. 1, кривая 3). Подавление тока
ток восстанавливался до 70 %, а в концентрации начиналось только при его действии в концентра(
10–3 М — до 8 % от исходного значения. ции 10–5 М, а в более высоких концентрациях оно
При действии бепридила во всех концентрациях усиливалось. Максимальное снижение амплитуды
неспецифический ток утечки мембраны, положение кальциевого тока до 54,5 % от исходного значения
максимума вольт(амперной характеристики кальци( происходило под влиянием кокаина в концентрации
евых токов на оси потенциалов, кинетика их актива( 10–3 М. После действия кокаина в концентрациях от
ции и инактивации практически не изменялись. 10–12 до 10–5 М амплитуда кальциевых токов дли(
Примечательно, что блокаторы L(кальциевых кана( тельное время оставалась увеличенной и лишь че(
лов из группы дигидропиридинов — израдипин и ни( рез 5–7 мин отмывания возвращалась к исходному
федипин в концентрациях от 10–9 до 10–4 М — прак( значению. После действия кокаина в концентрации
тически не изменяли параметры кальциевых токов. 10–3 М восстановление сниженной амплитуды каль(
циевого тока до 87 % от исходного значения проис(
ходило через 5–15 мин.
Влияние гадолиния, Во всех случаях максимум вольт(амперных харак(
омегаконотоксина и кокаина теристик мембраны наблюдался при тестирующем
потенциале 10 мВ и при действии кокаина не сме(
Гадолиний в концентрациях от 10–12 до 10–7 М уве( щался (рис. 2А). Однако под влиянием кокаина в кон(
личивал амплитуду кальциевого тока до 126 %, а в центрации 10–4 М он сдвигался в сторону деполяри(
концентрации 10–7 М подавлял ее (рис. 1, кривая 2). зации вправо по оси потенциалов на 10 мВ. После
Максимальное снижение амплитуды кальциевого отмывания в течение 10–15 мин смещение макси(
тока до 1,7 % выявлено при действии гадолиния в мума вольт(амперной характеристики сохранялось.
концентрации 10–3 М. Восстановление амплитуды Кривые стационарной инактивации кальциевых то(
тока происходило через 5–7 мин от начала отмыва( ков под влиянием кокаина сдвигались в сторону ги(
ния, было не полным и дозозависимым: после дей( перполяризации влево вдоль оси потенциалов при(
ствия препарата в концентрации 10–7 М ток восста( мерно на 10 мВ, а положение инактивационных ха(
навливался до 70–80 % от исходного значения, а пос( рактеристик не изменялось.
ле действия вещества в концентрации 10–3 М— лишь Характерный пример изменений амплитуды и
до 30 %. При действии гадолиния во всех концентра( кинетики кальциевых токов при действии кокаина
циях положение максимума вольт(амперной харак( в различных концентрациях представлен на рис.
теристики на оси потенциалов, кинетика активации 2Б. Видно увеличение тока после приложения ко(
и инактивации кальциевых токов практически не из( каина в концентрации 10–8 М (кривая 2), уменьше(
менялись. Неспецифические токи утечки мембраны ние его при действии кокаина в концентрации
изменялись незначительно и неоднозначно. 10–3 М (кривая 3) и увеличение, последовавшее

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

A Б
–30 –20 –10 0 10 20 30 40 V, mV 10
0
1000 5
Т0 Т1 Т2
–5 0

ICa, nA
ICa, nA

–10 –5 3
–10
–15
1
1 –15
–20 2
3 –20 4
–25 2

Рис. 2
Пример изменений кальциевых токов нейронов прудовика под влиянием кокаина:
А — изменения вольтамперных характеристик: по оси абсцисс — тестирующий потенциал, по оси ординат —
кальциевый ионный ток. 1 — контроль; 2 — кокаин 10–7 М; 3 — отмывание. Б — изменения кинетики и амплитуды:
Т0 = Т2 = 100 мс; Т1 = 2 с. 1 — контроль; 2 — кокаин 10–7 М; 3 — кокаин 10–3 М; 4 — отмывание

после отмывания (кривая 4). Кинетику активации Бупренорфин, как и морфин, дозозависимо, но
кальциевого тока оценивали по времени достиже( сильнее угнетал кальциевые токи (рис. 3). Так под
ния его пикового значения. Так, если в норме это влиянием бупренорфина в концентрации 10–3 М ток
время составляло 13,4 мс, при действии кокаина в снижался почти на 56 %. После его действия в кон(
концентрации 10–6 М — 12,0 мс, то при действии центрациях 10–12 –10–5 М восстановление токов
кокаина в концентрации 10 –3 М — 9,4 мс, то есть было полным, но после действия бупренорфина в
наблюдалось ускорение процесса активации каль( концентрациях 10–4 и 10–3 М — только до 80 % от
циевого тока (рис. 2). Кинетика инактивации тока исходных величин.
в норме и при действии кокаина по визуальным Влияние U(50.488H (рис. 3) было дозозависи(
оценкам может быть описана двумя экспонентами мым, обратимым и монофазным. Подавление токов
с постоянной времени порядка десятка мс у одной и наблюдалось в концентрации 10–5 М и усиливалось
сотни — у другой. При действии кокаина кинетика в концентрации 10–2 М (подавление на 43 % ). Пос(
инактивации практически не изменялась. Неспе( ле действия препарата в концентрации 10–2 М вос(
цифические токи утечки мембраны под влиянием становление токов происходило только до 57 % от
кокаина изменялись незначительно и разнонаправ( исходных значений.
ленно. Все три вещества не изменяли кинетику актива(
ции и инактивации токов. Неспецифические токи
утечки мембраны снижались на 5–7 нА, однако при
Влияние морфина, бупренорфина действии бупренорфина этот эффект был выражен
и U50.488H
120

Морфин дозозависимо снижал кальциевый ток,


начиная с концентрации 10–6 М, достигая уменьше( 80
1
ния на 29 % при концентрации 10–3 М (рис. 3). Пос(
2
ле его действия в концентрации 10–12 –10–4 М вос(
3
I/I0, Са, %

становление тока было полным, а после действия в 40

более высоких концентрациях — только до 80 % от


исходных величин. Нами не установлено антагониз( 0
ма налоксона в действии морфина на ионные токи –12 –10 –8 –6 –4 –2

нейронов прудовика. Так, при совместном их приме( С, 1∗10n, Μ


нении по 500 мкМ не было устранения подавления Рис. 3
тока морфином, он снижался на 45–50 % по срав( Влияние морфина (1), κопиатного агониста
нению с контролем, то есть примерно в 2 раза силь( U50.488H (2) и бупренорфина (3) на кальциевый ток
нейронов прудовика: по оси абсцисс — концентра
нее, чем при изолированном действии морфина или
ция веществ, по оси ординат — кальциевый ионный
налоксона. Неспецифический ток утечки под влия( ток (I — при действии вещества, I0— до действия),
нием налоксона и морфина уменьшался. доверительные интервалы при р = 95 %

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

слабее и увеличение токов утечки было только на ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ


1 нА. Вольт(амперные характеристики кальциевых РЕЗУЛЬТАТОВ
токов при действии всех соединений изменялись 1001
сходным образом — снижалась амплитуда токов, но
не происходило сдвига их максимума. Известно, что нейроны моллюсков содержат не(
сколько типов кальциевых каналов в различных со(
отношениях: высокопороговые и низкопороговые,
Влияние промедола, трамадола отличающиеся кинетикой их развития [5, 10, 14],
и буторфанола которые, вероятно, можно отнести к L(, N( и Т(ти(
пам каналов. Было показано, что гадолиний дозоза(
Все препараты, как и морфин, начиная с концен( висимо блокировал N(тип кальциевых каналов кле(
трации 1–100 мкМ, снижали амплитуду кальцие( ток нейробластомы в концентрациях от 0,1 до
вых токов и максимально подавляли ее в концентра( 100 мкМ. Следует отметить, что при высоких кон(
ции 1000 мкМ (рис. 4А). Буторфанол в диапазоне центрациях гадолиния (100 мкМ) происходило по(
концентраций 10–1000 мкМ уменьшал амплитуду давление также L( и Т(типов кальциевых токов
кальциевого тока в большей степени, чем другие ве( [11]. В наших опытах подавление N(тока на 50 %
щества. Обратимость эффекта всех соединений происходило при действии гадолиния в концентра(
была почти полной, но наиболее быстро и полнос( циях 10–20 мкМ, что в принципе соответствует дан(
тью амплитуда кальциевого тока восстанавливалась ным литературы. Поскольку мы исследовали более
после действия трамадола и через 0,5–1мин отмы( широкий диапазон концентраций от 10–12 до 10–3 М,
вания составляла 99,0 ± 9,72 % от исходной вели( то обнаружили двухфазный характер действия га(
чины. Кинетика тока под влиянием промедола и долиния на кальциевые каналы. Под влиянием гадо(
трамадола во всем диапазоне концентраций прак( линия в низких концентрациях происходило увели(
тически не изменялась. Было обнаружено, что лишь чение амплитуды кальциевого тока, а подавление его
при действии буторфанола в высоких концентраци( начиналось в концентрации 10–7 М и достигало мак(
ях (порядка 100 ∑ 1000 мкМ) наблюдалось некото( симума при концентрации 10–3 М.
рое замедление инактивации кальциевого тока (ри( Из литературы известно, что омега(конотоксин
с. 4Б). Все анальгетики не смещали вольт(ампер( весьма специфично блокирует N(тип кальциевых ка(
ные характеристики кальциевых каналов по оси налов нейронов теплокровных животных, аналогич(
потенциалов, что указывает на отсутствие измене( но тому, как тетродотоксин подавляет натриевые ка(
ний потенциала фиксированных зарядов мембраны налы [21]. Нам не удалось найти данных литературы
в области этих каналов. о влиянии омега(конотоксина на кальциевые каналы

А Б

120
I/I0, Са, %
IСа,
100
nA
80 Т1 Т2 Т3 Т4
0
60 2
–4
40 3
1
–8
20 2
1
–12
3
0 100 1000
1 10 –16
С, mkM
Рис. 4
Влияние промедола (1), трамадола (2) и буторфанола (3) на кальциевые токи нейронов прудовика.
А — зависимости «концентрация–эффект»: по оси абсцисс — концентрация препаратов (мкМ); по оси ординат —
отношение амплитуды кальциевого тока при действии веществ к его величине в контроле, %.
Б — кривые кальциевого тока нейрона моллюска
в контроле (1), при действии буторфанола
в концентрации 100 мкМ (2) и после отмывания нейрона (3): по оси абсцисс — время, мс; Т1 = 50 мс; Т2 = 200 мс;
Т3 = 100 мс; Т4 = 1 с; по оси ординат — амплитуда

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

нейронов моллюсков, и мы надеялись с помощью оме( дельных каналов или уменьшения частоты их откры(
га(конотоксина заблокировать и идентифицировать вания.
1002 N(тип кальциевых каналов. Однако результаты на( Опиаты не изменяют потенциала фиксированных
ших экспериментов оказались довольно неожидан( зарядов на мембране, на что указывает отсутствие
ными. Омега(конотоксин не подавлял кальциевые смещения максимума вольт(амперных характерис(
токи нейронов прудовика, сходные по электрофизио( тик мембраны, а в случае изменения оно должно про(
логическим характеристикам с N(типом кальциевых исходить [5, 13]. Почти полное и достаточно быст(
токов. На этом основании можно предположить, что рое восстановление ионных токов после действия
фармакологические свойства кальциевых каналов препаратов свидетельствует о слабом их связыва(
N(типа нейронов позвоночных и моллюсков отлича( нии со структурами мембраны нейронов.
ются. Возможно, эти различия обусловлены особен( В литературе есть отдельные данные об увели(
ностями субмолекулярной организации каналов,то чении токов под влиянием кокаина [16, 18]. Быстрая
есть кальциевые каналы нейронов моллюсков не со( обратимость влияния кокаина, которая показана
держат специфических мест связывания для омега( нами, указывает на относительно непрочное связы(
конотоксина. В этом отношении отличия кальциевых вание с молекулярными структурами мембраны.
каналов нейронов моллюсков от таковых у теплокров( Отсутствие сдвига максимума вольт(амперных ха(
ных аналогичны отличиям натриевых каналов ней( рактеристик мембраны вдоль оси потенциалов под
ронов моллюсков, не блокирующихся тетродотокси( влиянием кокаина в концентрации 10–7 М указыва(
ном, от натриевых каналов нейронов теплокровных, ет на неизменность величины потенциала фиксиро(
которые им блокируются [5, 13]. ванных зарядов на мембране. Максимум вольт(ам(
По данным литературы, бепридил является не( перных характеристик под влиянием кокаина в кон(
селективным блокатором L(типа кальциевых кана( центрации 10–4 М смещался вдоль оси потенциалов
лов [11, 13], однако каких(либо конкретных данных в сторону деполяризации от 0 до 10 мВ. После от(
о его влиянии на кальциевые токи нейронов мол( мывания он оставался смещенным на 10 мВ, что сви(
люсков в литературе обнаружить не удалось. Нами детельствует об устойчивом изменении потенциала
показано, что дигидропиридины в широком диапа( фиксированных зарядов на мембране.
зоне концентраций (10–9–10–4 М) не оказывают По данным литературы, кинетика активации и
специфического блокирующего действия на кальци( инактивации кальциевого тока нейронов моллюсков
евые токи нейронов прудовика. Следовательно, учи( имеет сложный характер и может быть описана мо(
тывая данные литературы и результаты наших экс( дифицированными уравнениями Ходжкина–Хакс(
периментов, можно предположить, что на мембра( ли [5, 10, 19]. Кинетика активации аппроксимиру(
не нейронов прудовика преобладают кальциевые ется переменной m в квадратичной зависимости.
каналы, которые можно идентифицировать как В принципе, изменения процесса активации каль(
N(подобные. Потенциалзависимые инактивацион( циевого тока могут быть обусловлены множеством
ные и вольт(амперные характеристики этих кана( причин, среди которых существенными являются из(
лов, представленные в данной работе, подтвержда( менения проводимости одиночных каналов и скоро(
ют это предположение. Для L(подобных каналов стей их активации и инактивации. Ускорение про(
процессы инактивации кальциевого тока должны бы цесса активации при действии кокаина, возможно,
быть более медленными. связано с непосредственным влиянием на актива(
Наши результаты о действии опиатных анальгети( ционные ворота, что может приводить к увеличе(
ков на трансмембранные кальциевые токи нейронов нию частоты открывания и закрывания одиночных
прудовика позволяют утверждать, что все они обла( каналов. Существенно отметить, что ускорение ак(
дают мембранотропным действием. Установлено, что тивации кальциевого тока происходило как при дей(
под их влиянием происходит снижение кальциевых ствии малых (10–6 М), так и высоких (10–3 М) кон(
токов. По силе блокирующего действия на кальцие( центраций кокаина. Кинетика инактивации кальци(
вые токи эти соединения можно расположить в евого тока в норме может быть описана двумя
следующий ряд: экспонентами, одна из которых имеет постоянную
буторфанол = бупренорфин > промедол > времени в несколько десятков, а другая — в несколь(
> трамадол > U(50.488H >морфин. ко сотен миллисекунд. Наша качественная оценка
Можно предположить, что при действии опиатов процесса инактивации подтверждает эти факты.
снижается количество функционирующих каналов. Можно высказать несколько предположений о
Снижение ионных токов возможно также по причи( причинах увеличения кальциевых токов под влияни(
не уменьшения времени открытого состояния от( ем кокаина. Увеличение токов без существенных из(

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

менений их кинетики может быть связано с увеличе( ионных токов возможно также по причине уменьше(
нием количества открывающихся при действии кока( ния времени открытого состояния отдельных кана(
ина ионных каналов, например, с экспрессией допол( лов или уменьшения частоты их открывания, что не 1003
нительных каналов, с противоинактивационным дей( отвергает возможности взаимодействия исследован(
ствием кокаина, с увеличением концентрации цАМФ. ных веществ с воротными механизмами каналов,
Эти предположения основаны еще и на том, что эф( о чем свидетельствуют полученные нами экспери(
фекты кокаина наиболее выражены на свежеизоли( ментальные данные. Поскольку скорость активации
рованных нейронах и нейронах с высоким уровнем или инактивации ионных токов определяется сте(
функционального состояния. Уменьшение кальциевых пенью функциональной активности соответствую(
токов при действии кокаина в более высоких концент( щих воротных структур (активационных m(ворот
рациях— от 10–5 до 10–3 М связано либо с насыщени( или инактивационных h(ворот) ионных каналов, то
ем липидного матрикса мембраны молекулами кокаи( не исключена возможность взаимодействия этих
на, в результате чего затрудняется функционирование анальгетиков непосредственно с воротными части(
кальциевых каналов, либо с прямым блокированием цами кальциевых каналов и каналов задержанного
кальциевых каналов кокаином. калиевого тока. Такому предположению не противо(
Наши результаты о действии опиатных анальгети( речат и данные литературы. Установлено, что µ(аго(
ков в целом соответствуют данным литературы. В нисты взаимодействуют с воротными частицами ка(
ряде исследований показано, что при внеклеточном налов N(типа, что проявляется замедлением актива(
действии морфин подавлял кальциевые трансмемб( ции кальциевого тока, уменьшением вероятности
ранные токи, уменьшая вход Ca2+ в клетку, и вызы( открытого состояния Са2+(каналов N(типа и увели(
вал активацию калиевых каналов, увеличивая выход чением времени нахождения каналов в закрытом
K+ из нейронов [9, 15]. Оба эти процесса приводят к (инактивированном) состоянии [8, 12, 15].
гиперполяризации нейрональной мембраны, повы( Уменьшение кальциевой проводимости оказывает
шению порога возбудимости нервных клеток и нару( существенное влияние на электрофизиологические
шению процессов генерации и проведения возбуж( характеристики нейрональной активности не только
дения по нервному волокну. Агонисты опиатных ре( за счет уменьшения суммарного входящего тока, но и
цепторов (в том числе µ(типа) уменьшают вход Са2+ в результате опосредованного действия ионов каль(
в клетки различных структур мозга, причем этот ция на калиевые токи и его возвратное самоблокиру(
эффект связывают с уменьшением кальциевой про( ющее действие. В нейрональной соматической мем(
водимости через потенциалозависимые кальциевые бране присутствует особая популяция кальций(зави(
каналы [7, 9, 20]. симых калиевых каналов, которые активируются во
Имеются данные и о рецептор(независимом дей( время деполяризации по мере поступления ионов Са2+
ствии морфина на мембранные токи в кардиомиоци( внутрь нейрона по кальциевым каналам. Возможно,
тах [15]. Агонисты κ(опиатных рецепторов в нейронах что снижение амплитуды выходящих калиевых токов
гиппокампа вызывают активацию калиевых каналов, под влиянием анальгетиков происходит вследствие
чувствительных к дендротоксину. Увеличение выхода их первичного блокирующего действия на кальцие(
калия из пресинаптических окончаний ускоряет фазу вые каналы и уменьшения входа в клетку ионизиро(
реполяризации потенциала действия и приводит к ванного Са2+, что и приводит к нарушению процесса
уменьшению входа ионов кальция в пресинаптические активации Са2+(регулируемых К+(каналов. Кроме
терминали, что, в свою очередь, вызывает уменьше( того, ионы кальция, являясь вторичным посредником,
ние выделения медиатора пресинаптическими волок( играют ключевую роль в реализации биохимических
нами и нарушению синаптической передачи [5, 13]. клеточных ответов. Полученные за последние годы
Существует представление о рецепторопосредованной данные о том, что действие опиатов тесно связано с
модуляции агонистами опиатных рецепторов функций G(белками и системами вторичных посредников [8,
потенциалозависимых ионных каналов через G(бел( 12], позволяют предположить, что эта связь может
ки и вторичные посредники [8, 17]. осуществляться и за счет модулирования этими ве(
По нашим данным, мембранотропное влияние ществами кальциевой проводимости.
опиатных анальгетиков имеет сходство с влиянием Следовательно можно допустить, что анальгети(
на нейроны местных анестетиков. Механизм подав( ки опосредованно действуют на калиевую проводи(
ления токов при действии анальгетиков на потенци( мость за счет снижения концентрации ионов Са2+ в
алоуправляемые ионные каналы, вероятно, связан с цитоплазме нервной клетки. Не исключена возмож(
тем, что, как и при действии анестетиков, снижается ность и сочетанного их действия на калиевые кана(
количество функционирующих каналов. Снижение лы: как непосредственное подавление их активнос(

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181


ПСИХОНЕЙРОФАРМАКОЛОГИЯ

ти, так и опосредованное через нарушение входа 8. Barrett C.F., Rittenhouse A.R. Modulation of
ионизированного кальция. Можно предположить, Ntype calcium channel activity by Gproteins
что анальгетики, действуя на внесинаптическую and protein kinase C // J. Gen. Physiol. —
1004 2000. — Vol. 115, N 3. — P. 277–286.
мембрану через модуляцию активности потенциа(
9. Bradford H.F., Crowder J.M., White E.J.
лоуправляемых кальциевых и Са2+(зависимых ка( Inhibitory actions of opioid compounds on
лиевых каналов, могут уменьшать ритмическую ак( calcium fluxes and neurotransmitter release
тивность нейронов центральной нервной системы, from mammalian cerebral cortical slices // Br. J.
частоту генерации ими потенциалов действия и, тем Pharmacol. — 1986. — Vol. 88 — P. 87–93.
самым, угнетать передачу ноцицептивных сигналов 10. Chad G., Eckert R., Ewald D. Kinetics of Ca
в спинном и головном мозге. Известно, что эти ка( dependent inactivacion in clamped neurones
налы в мембранах нервной клетки локализуются, of Aplysia californica // J. Physiol. (London). —
как правило, во внесинаптической области сомы 1984. — Vol. 347. — P. 279–300.
11. Docherty R.J. Gadolinium selectively
нейрона, в районе аксонального холмика и далее по
blocks a component of Ca2+ current in rodent
аксону, и играют ведущую роль в процессах генера( neuroblastoma // J. Physiol. (London). —
ции потенциала действия. 1988. — Vol. 398. — P. 33–47.
Таким образом, полученные нами результаты по( 12. Dolphin A.C. // Pharmacol. Rev. — 2003. —
зволяют считать, что в нейронах прудовика преоб( Vol. 55. — P. 607–627.
ладают N(подобные кальциевые каналы, функцио( 13. Hille B. Ion channels of excitable membranes.
нирование которых модулируется опиатными Third Edition. — University of Washington,
анальгетиками и кокаином. Опиатные анальгетики 2001. — 722 p.
непосредственно взаимодействуют с потенциалоуп( 14. Kits K.S., Mansvelder H.D. Voltage gated
calcium channels in molluscs: classification,
равляемыми ионными каналами нейрональной мем(
Ca2+ dependent inactivation, modulation and
браны и могут изменять их активность помимо из( functional roles // Invert. Neurosci. — 1996. —
вестного действия через специфические рецепторы. Vol. 2, N. 1. — P. 9–34.
15. North R.A. Opioid receptor types and
membrane ion channels // Trends Neurosci. —
ЛИТЕРАТУРА 1986. — Vol. 9. — P. 114–117.
16. Premkumar L.S. Selective potentiation of
1. Вислобоков А.И. и др. Мембранные Ltype calcium channel currents by cocaine in
механизмы действия на нервные клетки cardiac myocytes // Molecular Pharmacol. —
анестетиков, анальгетиков и противоарит 1999. — Vol. 56. — P. 1138–1142.
мических средств // Мед. акад. журн. — 17. Shen K.F., Crain S.M. Dual opioid modulation
2001. — Т. 1, № 1. — С. 25–33. of the action potential duration of mouse dorsal root
2. Вислобоков А.И., Савоськин А.Л. Влияние ganglion neurons in culture // Brain Research. —
опиатных анальгетиков на потенциал 1989. — Vol. 491, N 2. — P. 227–242.
управляемые ионные каналы нейронов 18. Vislobokov A.I., Mantsev V.V., Kuzmin A.V.
прудовика // Эксперим. и клин. фармакол. — Cocaine, amphetamine and cathinone, but not
2000. — Т. 63, № 4. — С. 7–12. nomifensine and pargyline increase calcium
3. Вислобоков А.И., Копылов А.Г., Бовтюш inward current in internally perfused neurons //
ко В.Г. Кальциевые каналы клеточных Life Sci. —1993. — Vol. 52, N 23. — P. 261–265.
мембран // Усп. физиол. наук. — 1995. — 19. White G.B., Pfahnl A., Haddock S., Lamers S.,
Т. 26, № 1. — С. 93–110. Kits K.S., Mansvelder H.D. Voltage gated calcium
4. Игнатов Ю.Д., Зайцев А.А. Нейрофизиоло channels in molluscs: classification, Ca 2+
гические механизмы боли // Болевой dependent inactivation, modulation and
синдром / Под ред. В.А. Михайловича и functional roles // Invert. Neurosci. — 1996. —
Ю.Д. Игнатова. — Л., 1990. — Гл. 1. — Vol. 2. — P. 9–34.
С. 7–44. 20. Xiang J.Z., Adamson D., Brammer M.J.,
5. Костюк П.Г. Кальций и клеточная Campbell I.C. The Kopiate agonist U50488H
возбудимость. — М., 1986. — 256 с. decreases the entry of Ca into rat cortical
6. Шабанов П.Д. Основы наркологии. — synaptosomes by inhibiting N but not Ltype
СПб.: Лань, 2002. — 560 с. caicium channels // Neuropharmacol. —
7. Alzheimer C., Bruggencate G.T. Nonopioid 1990. — Vol. 29, N 5. — P. 439–44.
actions of the kopioid receptor agonists U50488H 21. Yochikami D., Bagabaldo Z., Olivera B.M.
and U69593 on electrophysiologie properties of The ingibitory effects of omegaconotoxins on
hippocampal CA3 neurons in vitro // J. Pharmacol. Ca channels and synapses // Annals N.Y. Acad.
Exp. Ther. — 1990. — Vol. 225. — P. 900–905. Sci. —1989. — Vol. 560. — P. 230–248.

Психофармакология и биологическая наркология / ТОМ 5 / ВЫПУСК 3 / 2005 ISSN 1606–8181