Клеточный цикл. Митоз и мейоз.

Хромосомы.
к.б.н., м.н.с. лаборатории биохимической генетики СПбГУ
Физикова Анастасия Юрьевна
 Терминология
Соматические клетки - клетки тканей многоклеточных организмов, не
являющиеся половыми
Хромосомы-нуклеопротеиновые нитевидные структуры клеточного ядра
Центромера-участок хромосомы, играющий важную роль в процессе деления
клеточного ядра и в контроле экспрессии генов
Теломеры-концевые участки хромосом
Митоз-основной способ деления эукариотических клеток без редукции числа хр.
Мейоз-деление клетки, в результате которого происходит редукция числа хр.
Кроссинговер-взаимный обмен участками гомологичных хромосом
Плоидность-число наборов хромосом, содержащихся в клетке или во всех клетках
многоклеточного организма
Эухроматин-участки хроматина, сохраняющие деспирализованное состояние
хроматина в покоящемся ядре, т. е. в интерфазе (в отличие от других участков,
сохраняющих спирализованное состояние — гетерохроматин)
Гомологичные гены - гены, произошедшие от общего предшественника
2
Клеточный цикл

3
 Клеточный цикл
Хромосомы
Морфология
Теломеры

Гетерохроматин
Цетромера (оранж.)

Эухроматин

4
 Клеточный цикл
Хромосомы
Типы хромосом

Телоцентрическая Субметацентрическая
Акроцентрическая Метацентрическая
5
 Клеточный цикл
Хромосомы
Эухроматин и гетерохроматин
Эухроматин Гетерохроматин
~67% генома ~33% генома
Y-Хр.-полностью, прицентромерные обл. др.
Плечи хромосом
хромосом
Компактны в ходе митоза и мейоза На протяжении всего к/ц
Не оказывает влияния на экспрессию
Инактивация близких генов
генов
Не объединяются Участки объединяются, образуя хромоцентры
Расположен по всему объему ядра Главным образом у ядерной оболочки
Отсутствие С-окраски Интенсивная С-окраска
В основном высокоповторенные
10% умеренных повторов
последовательности
Почти нет гистонов Много гистонов
6
Локализация основного числа генов Гены почти отсутствуют
Клеточный цикл
Митоз
Политенные хромосомы

7
 Клеточный цикл
Хромосомы
Число хромосом (2n) у разных организмов

8
 Клеточный цикл
Повторяющаяся совокупность событий, обеспечивающих
деление клеток

G1 – пресинтетический период
G0 – период покоя
S – синтетический период
G2 – постсинтетический период
M – митоз

9
 Клеточный цикл
Длительность
Организм Длительность клеточного цикла,
часы
Человек Homo sapiens
Лейкоциты 18
Кожа 28
Кукуруза Zea mays 12--29
12
Табак Nicotiana tabacum 10
Дрожжи Sacch. cerevisiae 2
Бактерии E. coli 0,3

10
 Клеточный цикл
Интерфаза
G1:
• Интенсивный синтез
• Рост клетки
• Увеличение размеров органелл
• Удвоение центриолей
S:
• Репликация ДНК
• Синтез гистонов
G2:
• Деление органелл
• Увеличение запасов клетки
11
 Клеточный цикл
Митоз
(от греч. mitos - нить)
Профаза: конденсация хромосом,
центриоли расходятся к полюсам,
ядерная мембрана растворяется
Метафаза: хромосомы
выстраиваются на экваторе клетки
Анафаза: центромеры
расщепляются на две, хроматиды
расходятся к полюсам клетки
Телофаза: деспирализация
хромосом, разрушение веретена
деления, появление ядерной
оболочки
12
 Клеточный цикл
Митоз

Интерфаза Профаза Метафаза Анафаза Телофаза

13
 Митоз
Хромосомы
Кариотип и идиограмма
Кариотип – совокупность признаков (число, размеры, форма и т. д.) полного
набора хромосом, присущая клеткам данного биологического вида

5 мкм
Идиограмма - диаграмматический рисунок кариотипа
14
 Клеточный цикл
Митоз

Животная клетка Растительная клетка

Центриоли Есть Нет
«Звезды»
Есть Нет
из МТ
Фрагмопласт и клеточная
Цитокинез Борозда
пластинка

Митоз В разных тканях В меристеме

15
 Клеточный цикл
Митоз
Центросома
Центриоли

Фибриллы

250 нм
Микротрубочки
(9*3)

300-700 нм

16
 Клеточный цикл
Митоз
Центриоль
ГТФ β ГТФ β
ГТФ α ГТФ α
ГТФ β-тубулин
ГТФ α-тубулин (+)-конец
ГТФ ГТФ
ГТФ
ГДФ
ГТФ ГДФ β
ГДФ
ГТФ ГТФ/ГДФ ГТФ α
ГДФ
ГТФ
ГДФ (-)-конец
ГТФ
Протофиламент
(ПФ)
25 нм 250 нм
Микротрубочка (МТ) Центриоль
17
 Клеточный цикл
Митоз
Белки, соединяющиеся с микротрубочками
Белки Функции
MAP +/- Структурные белки, при +Фн отсоединяются от МТ
γ-TuRC + Матрица для новых МТ, латеральная стабилизация МТ
+TIPS + Моторные и линкерные белки. Взаимодействие с МТ в
клеточном кортексе.Поддержание стабильности (+)-(+)-конца и
(XMAP215
регуляция динамики МТ (XMAP 215--продольная стабилизация)
CLASP + Присоединение димеров тубулина к (+)(+)--концу. Ингибиторы
катастрофинов.. Взаимодействие с кинетохором (связь с
катастрофинов
хромосомой).
Катастрофины + Диссоциация димеров тубулина за счет активации гидролиза
(MCAK – кинезин
ГТФ или изменения конформации ПФ (MCAK кинезин,,
находится в кинетохоре, обеспечивает диссоциацию (+)-(+)-конца во
время анафазы митоза)
Катанин + Разделяет МТ, образуя нестабильный (+)
(+)--конец
Кинезины и +/- Моторные белки, кинезины двигаются от (-)-конца к (+), а
динеины динеины--наоборот
динеины
18
 Клеточный цикл
Регуляция

Митогенный фактор + рецептор

Митогенактивируемые протеинкиназы

Транскрипционные факторы

Активация экспрессиии генов

19
 Клеточный цикл
Регуляция динамики микротрубочек

Киназа
Фосфатаза
TF
Каспаза
Рецептор
Фермент
Циклин Активация
GEF Подавление
Перенос
ГТФаза
G-белок/
субъед.риб
осомы
20
Клеточный цикл
Митоз
Профаза

21
Клеточный цикл
Митоз
Прометафаза

22
Клеточный цикл
Митоз
Метафаза

23
Клеточный цикл
Митоз
Анафаза

24
Клеточный цикл
Митоз
Телофаза и диакинез

25
 Клеточный цикл
Митоз
Регуляция
G2-M Метафаза-Анафаза

G2-M: размер клетки,

незавершенность репликации,
крупные повреждения ДНК

Метафаза-анафаза: неправильная
сборка веретена деления

R- регуляторный пункт: количество

питательных веществ, размер клетки,
ошибки репликации
“R-регуляторный
пункт”
26
 Клеточный цикл
Митоз
Регуляция
G2-M Метафаза-Анафаза

Циклины и циклин-зависимые
протеинкиназы
• Инактивирование комплекса предыдущей
стадии;
• Стимуляция событий своей стадии;
• Образование или активация комплекса
следующей стадии.

“R-регуляторный
пункт”
27
 Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

Экспрессия генов, Экспрессия генов,

кодирующих циклины кодирующих циклины
митоза: CycA-CDK1, середины фазы G1:
CycB-CDK1 Cyc D-CDK4, CycD-CDK6

Экспрессия генов, Экспрессия генов,

кодирующих кодирующих циклины
циклины фазы S: поздней фазы G1:
CycA-CDK2 CycE-CDK2

28
 Клеточный цикл
Регуляция
Период клеточного цикла Регулирующие белки
cdk2 + циклин D1, cdk5 +
G1-период
циклин D3
R-пункт периода G1 cdc2 + циклин С
Переход из G1- в S-период cdk2 + циклин Е
Переход из S- в G2-период cdk2 + циклин А
Переход из G2-периода в митоз
cdc2 + циклин В
(М-период)
Циклин H + cdk7 необходим для фосфорилирования и
активации cdc2 в комплексе с циклином В 29
 Клеточный цикл
Регуляция

Митогенный фактор + рецептор

Митогенактивируемые протеинкиназы

Транскрипционные факторы

Активация экспрессиии генов

30
Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

31
Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

32
Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

33
Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

34
Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

35
Клеточный цикл
Митоз
Регуляция

36
 Клеточный цикл
Митоз
Значение

•Генетическая стабильность
•Рост
•Бесполое размножение и регенерация

37
 Клеточный цикл
Мейоз
(от греч. meiosis – уменьшение)

• Гамето- и спорогенез
• Генетическая изменчивость

38
 Клеточный цикл
Стадия Митоз Мейоз

Интерфаза Синтез ДНК. Удвоение хромосом

Компактизация хромосом. Конъюгация
Профаза I Компактизация хромосом гомологичных хромосом – образование
бивалентов, рекомбинация
Метафаза I Расположение хромосом в Расположение бивалентов в плоскости
плоскости экватора экватора
Расхождение сестринских Расхождение гомоличных хромосом к
Анафаза I хроматид к полюсам полюсам. Независимое расхождение
хромосом, входящих в разные биваленты
Формирование в клетке Формирование в клетке двух гаплоидных
Телофаза I двух идентичных ядер, которые могут различаться
диплоидных ядер генотипически
Профаза II - Компактизация хромосом

Метафаза II - Расположение центромеров в плоскости

экватора
Анафаза II - Расхождение сестринских хроматид к
полюсам
Телофаза II - Формирование четырех гаплоидных ядер,
кот. могут различаться генотипически
39
 Клеточный цикл
Мейоз
Мейоз I Мейоз II

40
 Клеточный цикл
Мейоз
Профаза I
Лептотена: стадия тонких нитей
Зиготена: конъюгация гомологичных хромосом,
теломеры ориентируются к одному из полюсов ядра
(букет), образуется синаптонемный комплекс между
конъюгирующими хромосомами
Пахитена: стадия толстых нитей, гаплоидное число
бивалентов
Диплотена: отталкивание гомологов – видны хроматиды
и хиазмы, хромосомы типа «ламповых щеток» (ооциты)
– деспирализация хромомер
Диакинез: спирализация усиливается, уменьшается
число хиазм, биваленты локализованы по периферии
ядра 41
 Клеточный цикл
Мейоз
Хромосомы типа «ламповых щеток»

• Встречаются в ооцитах рыб, земноводных,

рептилий и птиц на стадии диплотены
• Характеризуются деконденсацией хроматина в
процессе транскрипции
• Активно транскрибируются
• Петля среднего размера содержит 50-100 т.п.н.

42
 Клеточный цикл
Мейоз
Синаптонемный комплекс
• Необходим для рекомбинации хромосом и редукции их числа

100 нм

43
 Клеточный цикл
Мейоз
Синаптонемный комплекс

S. cerevisiae Zip1p
Петли хроматина Петли хроматина
Mammalia SCP1 (SYCP1)

Когезины Когезины
Rec8 (Rad21), + 3 когезина SMC1b (SMC1)
+мейоз специфичные белки: SCP2, SCP3 (Mammalia; 44
Hop1p и Red1p (S. cerevisiae )
 Клеточный цикл
Регуляция

Митогенный фактор + рецептор

Митогенактивируемые протеинкиназы

Транскрипционные факторы

Активация экспрессиии генов

45
 Клеточный цикл
Мейоз
Регуляция
Арест мейоза Возобновление
мейоза

46
Клеточный цикл
Мейоз
Регуляция

47
Клеточный цикл
Мейоз
Регуляция

48
 Хроматин
2нм Уровни компактизации

• Нуклеосомный уровень (11 нм)

11нм
• Нуклеомерный уровень или
30нм сверхбусина, соленойд (30 нм)
300нм
• Петельно-доменный уровень/
хромомерный (300нм)

• Хромонемный уровень (700нм)

700нм

49
1400нм
 Хроматин
Нуклеосома
• Октамер гистонов H2A, H2B, H3 и
H4 (25-40% сухой массы хроматина)
• Сильноосновные белки
• H3 и H4 Arg-богатые, очень
консервативны, N-концы
модифицируются
• Кодируются генами, образующими
тандемные повторы на разных Хр
•ДНК обвивает нуклеосому 1,75 раза
(145 пар оснований/ нуклеосому)
• 60 млн молекул каждого гистона на
клетку
50
 Хроматин
Нуклеосома

Гистоны Н2А, Н2В, Н3, Линкерная ДНК

Н4 (по два на
нуклеосому)

ДНК кόра
Нуклеосома

51
 Хроматин
Нуклеомерный уровень/ соленойд/ фибрилла

Октамерный
Нуклеосомный гистоновый кор ДНК
тяж формирует
левозакрученную
ДНК
спираль Н1
Октамер
гистонов

Н1

52
 Хроматин
Нуклеомерный уровень/ соленойд/ фибрилла
 Хроматин
Петельно-доменный и хромомерный уровни

ДНК
Нуклеосомы
Скаффолд

30 нм
соленойд

ДНК
нуклеосомы

Скаффолд 54
Соленойд
 Хроматин
Скаффолд
Scaffold associated regions – SAR
S/ MARs
Matrix associated regions – MAR

S/ MARs около 400 разных элементов: ~30000 на клетку Mammalia:

• AT – богатые
• Содержат инвертированные повторы
• Участки, способные образовывать неканонические
структуры (изгибы ДНК, тройную спираль, Z-форму
ДНК и др.)
• Сайты расщепления топоизомеразы II

• Конститутивные и динамические/ тканеспецифичные

 Хроматин
Скаффолд

Топоизомераза II
Гистон H1
Гистоны кора

Петельно-доменный
Соленойд уровень компактизации
Нуклеосома
ДНК
 Хроматин
Скаффолд

Гистоны кора

Нуклеосомы

Гистон H1

Соленойд Суперсоленойд
 Хроматин
Скаффолд
Топоизомераза II/ ДНК-гираза

• осуществляет ATP-зависимое расщепление цепей ДНК

• релаксация суперскрученных молекул ДНК
• образование или развязывание узлов ДНК
• образование или разделение катенанов

Важная роль в регуляции экспрессии генов


• ацетилирование
• фосфорилирование
• метилирование
• убиквитинилирование
• сумоилирование
Ключевая роль в регуляции экспрессии генов
Хроматин
Модификации гистонов
Гистоновый код – комбинация модификаций
Эпигенетика – изучение наследственных
изменений в функции генов, которые
происходят без изменения в
последовательности ДНК
11 декабря 2010
 Хромосома
Центромера

Теломеры

Гетерохроматин
Цетромера (оранж.)

Эухроматин

60
 Хромосома
Центромера

Последовательности
нуклеотидов в центромерах
16 хромосом дрожжей
Saccharomyces cerevisiae

5 мкм
 Хромосома
Центромера

78-86 п.о. ~90% AT

Вариабельная последовательность

Кор центромеры

Нуклеосома

Веретено деления
 Хромосома
Центромера

Веретено деления

Нуклеосомы Кинетохор,
центромера

ДНК
Нуклеотидов Нуклеотидов
 Хромосома
Центромера
Кинетохор

Функции:
• связывание между собой сестринских хроматид
• закрепление митотических МТ
• регуляция разъединения хромосом
• движение хромосом во время митоза
 Хромосома
Центромера
Кинетохор

Внешний слой (40-60 нм)

Средний слой (25-30 нм)

Внутренний слой
(40-60нм)

Центромера
 Хромосома
Центромера
Белки кинетохора
Внутренний

CENP-B Связывается с α-сателлитной ДНК CEN

(171н.п.~3-5% Хр)
MCAK Кинезиноподобный белок
CENP-A Гомолог гистона H3, связывается с CDE II
CENP-G Связывается с белками ядерного матрикса
3F3/2 Фиксирует натяжение пучков МТ
Средний

Ndc80/ HEC1 Вовлечен в связывание с МТ

CENP-E,CENP-F Связывание МТ
Внешний

BUB1,BUBR1, Сверочные белки сборки веретена деления: задержка в

MAD1,MAD2 метафазе пока все кинетохоры не будут прикреплены к
МТ
 Хромосома
Теломеры

Теломеры

Гетерохроматин
Цетромера (оранж.)

Эухроматин

67
 Хромосома
Теломеры
Функции

• Запечатывание конца хромосомы

• Препятствие склеивания хромосом
• Фиксация хромосом к ядерному матриксу
• Влияние на экспрессию генов
• Молекулярные часы
 Хромосома
Теломеры
Строение

Повтор из гуанинов Субтеломерная последовательность (TAS)

Теломерный концевой повтор (TR) Хромосома Центромера

50 п.н. Euplotes – >100 т.п.н. Mus 0,3-6,7т.п.н. S.cerevisiae – 300т.п.н Chironomus

 Хромосома
Теломеры
Строение
Теломерные повторы (TR) в хромосомах некоторых видов
 Хромосома
Теломеры
Строение
Структура TR в хромосомах инфузории окситрихи

G - конец

TR Хр. TR С - конец
 Хромосома
Теломеры
Строение
Плоскостное расположение молекул гуанина в теломерных повторах
 Хромосома
Теломеры
Репликация
Теломераза – РНК-зависимая ДНК-полимераза или обратная транскриптаза:

• Теломеразная обратная транскриптаза (TERT)

• Дискерин (DKC1)
• Теломеразная РНК (hTR или TERC) c 2 копиями TR:

простейшие 150-200 н.о.,

человек – 450 н.о.,
дрожжи 1300 н. о.
 Хромосома
Теломеры
Репликация
Теломераза

Ладонь
Матрица

Пальцы
Большой
палец

Теломеразная РНК

Теломерная ДНК
Хромосома
Теломеры
Репликация
Хромосома
Теломеры
Репликация
Хромосома
Теломеры
Белки
Хромосома
Теломеры
Белки
Хромосома
Теломеры
Белки
 Хромосома
Теломеры
Длина
теломеры

Число клеточных делений

 Полезные ресурсы

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/

http://humbio.ru/humbio/default.htm