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Examen cytobactériologique
des selles
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Rôles de la flore intestinale
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Diarrhées
Émission d’au moins 3 selles par jour molles à
liquides depuis moins de 14 jours
Augmentation brutale de la fréquence et du
volume des selles depuis moins de 3 jours
Causes infectieuses (bactériennes, virales,
parasitaires)
Causes non infectieuses (inflammatoires,
tumorales)
Conséquence d’un traitement antibiotique
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DIARRHEES BACTERIENNES
Bactéries entéro-invasives
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Physiopathologie : Mécanisme de la diarrhée
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Physiopathologie : Mécanisme de la diarrhée
Mécanisme sécrétoire :
Toxine pré-formée dans l’aliment avant son ingestion
EXP : Toxi –infection à S.aureus
Mécanisme entéro-invasif :
Tableau de syndrome dysentérique (bactérie type
shigella)
Les bactéries envahissent les cellules épithéliales et s’y
multiplient jusqu’à destruction.
Réaction inflammatoire locorégionale intense avec présence de
sang , de glaire et de pus dans les selles et généralement de la
fièvre .
Les lésions siègent au niveau du côlon.
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Physiopathologie : Mécanisme de la diarrhée
Mécanisme entéro-invasif :
Tableau de syndrome gastroentérique ( bactérie de type
salmonella ou yersinia )
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Autres mécanismes :
Modèle EPEC / EHEC
Bactéries:
Vibrio cholerae O1 et O139
E. coli entérotoxinogènes (ETEC)
S.aureus , clostridium perfringens
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Clinique : Syndrome dysentérique
Bactéries:
Shigella dysenteriae
E. coli entéroinvasifs (EIEC)
certaines souches de Campylobacter 14
Clinique: Syndrome gastroentéritique
Bactéries:
Salmonella non typhi
E. coli entéropathogènes (EPEC)
Campylobacter jejuni, yersinia
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Diagnostic Etiologique
DIARRHEES BACTERIENNES
Bactéries et mécanisme d’agression
Entéro-invasif Toxinique
EIEC ETEC
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Diarrhée post-antibiotique
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EXAMEN
CYTOBACTERIOLOGIQUE
DES SELLES (COPROCULTURE)
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OBJECTIFS
Rechercher l’agent bactérien responsable de la
diarrhée au sein d’une flore complexe
Mise en évidence de toxines dans les selles
Recherche de bactérie responsable d’une IAS
Recherche de portage de bactérie dans
l’entourage du patient, personnel soignant,
cuisinier
Étudier sa résistance aux antibiotiques
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Coproculture - Prélèvements
Selles:
Récipient sterile
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Coproculture - Prélèvements
Écouvillonnage rectal: nouveau né, petit enfant,
enquête épidémiologique (BMR)
Renseignements cliniques:
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Coproculture standard: Examen
microscopique
Etat frais:
Leucocytes: > 5/champ → Processus
invasif
Hématies
Mobilité caractéristique de
Campylobacter: en vol de mouche
V. cholerae: en bande de poisson
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Coproculture standard: Examen
microscopique
Coloration de Gram:
Flore normale:
Majorité BGN (60%)
Présence de BGP (40%)
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Coproculture standard: Examen
microscopique
Coloration de Gram:
Morphotypes
particuliers
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Coproculture / Culture
Impossible de rechercher tous les germes
entéropathogènes
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Bactéries recherchées par coproculture
en fonction du contexte
Coproculture standard Salmonella, Shigella, Campylobacter
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Recherche de Salmonella - Shigella
Toute coproculture doit systématiquement
mettre en œuvre la recherche de Salmonella et
Shigella
Milieu d’enrichissement pour Salmonella
Bouillons Mueller-Kauffmann / Sélénite
Milieu sélectif
Hektoen
SS
XLD
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Recherche de Salmonella - Shigella
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Milieu Hektoen
Couleur Germes
Jaune saumon E. coli, Citrobacter, Klebsiella,
Enterobacter, Serratia, S. arizonae, Vibrio
cholerae (ox+), Aeromonas (ox+), Yersinia
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Milieu SS
Lecture: Fermentation du
lactose (colonies rouges) et
production H2S (centre noir)
Colonies suspectes
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Bactéries en fonction du milieu de culture
Milieux Caractères de Bactéries y Bactéries
sélectifs différenciation poussant recherchées
SS L(+) rouges, L(-) à centre orange Eliminées
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Identification de Campylobacter
Caractères culturaux:
petites, brunâtres, muqueuses ou en voile
Identification morphologique:
petit BGN, spiralé, très mobile, forme en S,
en longues spires
Identification biochimique:
catalase +, oxydase +
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Identification de Campylobacter
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Recherche de V. cholerae
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Recherche de V. cholerae
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Identification de V. cholerae
V.Parahaemolyticus
V.Cholerae sur TCBS
sur TCBS
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Recherche de E. coli
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Recherche de E. coli
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EHEC
Dépistage d’E. coli O157:H7
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DIAGNOSTIC DES INFECTIONS A EHEC Selles
écouvillonnage rectal
Milieu
d’enrichissement Mise en culture
SMAC Sorbitol
PCR stx
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1- Le modèle entérotoxinique
Entérotoxine
=> sécrétion intestinale hydro-électrolytique
deux sous-unités A et B
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1- Le modèle entérotoxinique
Mode d’action de la toxine cholérique:
Fixation de ss unité B sur un récepteur
spécifique (GM1)
=> passage intracellulaire de la ss unité A
=> Activation de l’adényl cyclase cellulaire
=> ↗ AMP cyclique
=> Fuite d’eau, NaCl, K+,HCO3-
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1- Le modèle entérotoxinique
E. coli entérotoxinique ou ETEC: structure
et mode d’action ≈ toxine de V. cholerae
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2- Le modèle entéro-invasif
Adhésion de la bactérie à la membrane
apicale de l’entérocyte
Internalisation de la bactérie entéro-invasive
au sein d’une vésicule d’endocytose
Multiplication dans l’entérocyte, altération
de sa structure, sa destruction
=> extension horizontale de l’infection
Invasion du tissu conjonctif sous-jacent
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Modèle Shigella / E. coli entéro-invasif
Phase préalable d’adhésion : LPS
Formation d’une vésicule d’endocytose qui
permet son internalisation
Destruction des vésicules / multiplication
des bactéries dans cytoplasme
Facteurs d’invasion (Ipa: A,B,C,D) et facteurs
de lyse vacuolaire (virf F et virf G)
Facteurs polarisant les filaments d’actine
(envahissement des cellules voisines)
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Modèle Shigella / E. coli entéro-invasif
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Modèle Shigella / E. coli entéro-invasif
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Modèle Shigella / E. coli entéro-invasif
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Modèle Salmonella
Adhésion des bactéries à des récepteurs
cellulaires spécifiques (EGF)
Formation de vacuole d’endocytose,
multiplication de Salmonella
Migration de la vacuole vers la membrane
latérobasale et expulsion des bactéries
Les bactéries sont prises en charge par les
macrophages des follicules lymphoïdes et
des ganglions mésentériques
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Modèle Salmonella
Si elles sont éliminées, l’infection reste
localisée: coproculture positive et hémoculture
négative
Dans le cas inverse, les Salmonella passent
dans le sang: coproculture et hémoculture
positives
Pas de destruction des entérocytes (≠ Shigella)
Réaction inflammatoire moins intense
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Modèle Salmonella
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3- Modèle EPEC / EHEC
EPEC :
Malabsorption sévère
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3- Modèle EPEC / EHEC
EHEC : Production de Vérotoxines VT1-VT2
ou Toxine « Shiga like »
=> Passage dans le sang
=> Thrombose de la microcirculation intestinale
et rénale
=> Colite hémorragique pouvant
se compliquer de SHU
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Diarrhée post-antibiotique :
1er Mécanisme
Tous les antibiotiques administrés par voie orale ou
parentérale (à l’exception des aminosides) sont
responsables d’une dysbiose aiguë , rapidement
réversible . Cette dysbiose peut être la cause (dans 5 à
20 % des cas selon les antibiotiques) d’une diarrhée
fonctionnelle modérée, bénigne et autolimitée, attribuée
à une altération des capacités fermentaires des résidus
glucidiques par les bactéries du côlon droit et/ou par une
altération du métabolisme des sels biliaires.
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Diarrhée post-antibiotique :
2éme Mécanisme
Plus rarement (1 à 2 % des prescriptions
antibiotiques), du fait du déséquilibre
écologique induit par les antibiotiques, des
agents bactériens pathogènes déjà résidents
ou de rencontre (Clotridium difficile et plus
rarement Salmonella et Klebsiella oxytoca,
peuvent proliférer et donner lieu à une
infection intestinale symptomatique, souvent
autolimitée.
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