Вы находитесь на странице: 1из 4

наука и здравоохранение, №1, 2013 Статьи

УДК 616.15. - 615.38


О.А. Искакова
АО «Республиканский научный центр неотложной медицинской помощи», г. Астана
ПРИМЕНЕНИЕ ГЕЛЕВОЙ ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ
ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ КРОВИ
Аннотация
Статья содержит сведения о гелевой технологии, используемой для иммуногематологических исследований кро-
ви, принципах гелевого теста, характеристику идентификационных карт. Здесь же описывается клиническая
значимость и преимущества гелевой технологии, а также представлены результаты некоторых исследований.
Предназначено для специалистов, занимающихся иммуногематологическими исследованиями в трансфузиологии,
трансплантологии, гематологии, иммунологии.
Ключевые слова: иммуногематология, гелевые технологии, стандартизация гемагглютинации.
Введение. Гелевая технология была предложена Принцип гелевого теста. Для проведения тестов
Y.Lapierre в 1989г. - основана на агглютинации эритро- обычно используются три вида геля:
цитов в агаровом геле «сефадекс», помещенных в мик- 1) нейтральный, не содержащий специфических ан-
ропробирки и внедрена с целью стандартизации реак- тител (применяется для поиска и идентификации анти-
ций гемагглютинации с получением достоверных ре- тел солевым и ферментативным методами, на холодо-
зультатов. вой стадии пробы на совместимость крови донора и
Обычно иммуногематологические исследования, реципиента);
основанные на реакции гемагглютинации, проводятся в 2) специфический, содержащий антитела (монокло-
жидкофазных системах. Ложные, слабые или отрица- нальные или поликлональные) к антигенам эритроцитов
тельные результаты непрямого антиглобулинового те- крови человека (применяется для типирования антиге-
ста, за счет нейтрализации антиглобулинового реагента нов эритроцитов систем АВ0, Rh, Kell и т.д.);
следами сыворотки (вследствие недостаточно эффек- 3) антиглобулиновый, содержащий антитела (полис-
тивного отмывания эритроцитов), могут стать причиной пецифические или моноспецифические) к иммуногло-
ошибок и неверно интерпретированы, особенно не- булинам человека и компонентам системы комплемента
опытным персоналом. (применяется для прямого и непрямого антиглобулино-
Гелевая технология использует комбинацию мето- вого теста, т.е. реакции Кумбса, при поиске и идентифи-
дов агглютинации и гель-фильтрации. кации ауто- и аллоиммунных антител, пробе на совме-
Тесты включают в себя: определение группы кро- стимость крови донора и реципиента).
ви, Rh-фактора, фенотипа эритроцитов, антиглобулино- Исследуемые или стандартные эритроциты и ис-
вый тест, скрининг и идентификацию антител, тесты на следуемая сыворотка (плазма) помещаются в соответ-
совместимость и некоторые другие. ствующие микропробирки, где происходит реакция аг-
Для исследований пригодны как образцы цельной глютинации, затем идентификационные карты центри-
крови (взятые в чистую, сухую пробирку), так и образцы фугируются для разделения результатов реакции. При
крови, взятые на консервантах и стабилизаторах. Также этом неагглютинированные эритроциты свободно про-
пригодна артериальная, капиллярная и пуповинная (без ходят между частицами геля и образуют на дне микро-
отмывания) кровь. пробирки компактный осадок красного цвета - отрица-
Характеристика идентификационных карт. Иден- тельный результат; агглютинированные располагаются
тификационные карты (ID-карты) представляют собой на поверхности или в толще геля (в зависимости от
пластиковые карточки, в которые встроено по шесть размеров агглютинатов) – положительный результат.
микропробирок. В пяти пробирках содержится смесь В зависимости от силы реакции агглютинации в ге-
геля со специфическими моноклональными антителами левой среде принята следующая оценка полученных
и антиглобулиновым реагентом, предназначены для результатов:
определения группы крови по системе АВ0 и Rh-  сильно-положительный (++++) – образовавшиеся
принадлежности эритроцитов доноров и реципиентов агглютинаты эритроцитов задержались на поверхности
(включая слабые варианты антигенов), а также для геля;
типирования других антигенов эритроцитов.  положительный (+++) – агглютинаты располагают-
Каждая карточка имеет шестую контрольную про- ся в верхней трети столбика геля;
бирку, содержащую нейтральный гель без антител (сtl).  слабо-положительный (++) – агглютинаты фикси-
Маркировка пробирок в ID-карте осуществляется по рованы в верхних двух третях геля;
выявляемым антигенам, например: А-В-АВ-D-СDЕ-сtl  очень слабо-положительный (+) – агглютинаты
или С-с-Е-е-К-ctl. располагаются в нижней трети геля;
Идентификационные карты для выявления антител  отрицательный (-) – эритроциты формируют на
к антигенам эритроцитов имеют некоторые отличия, дне микропробирки компактный осадок.
например, карты "Coombs / Enzyme Test": в трех про- Размер частиц геля, специальный подбор монокло-
бирках, расположенных слева, содержится гель, содер- нальных или поликлональных антител позволяет до-
жащий антитела к глобулинам человека (моноспецифи- стичь наилучших результатов чувствительности и спе-
ческие анти-IgD или полиспецифические - к иммуногло- цифичности, а его прозрачность делает считывание
булинам различных классов) - реакция Кумбса. В сле- результатов более надежным и позволяет интерпрети-
дующих трех пробирках содержится только нейтраль- ровать самые сложные диагностические случаи.
ный гель, предназначенный для выявления антител к Клиническая значимость. Принцип безопасности
антигенам эритроцитов в солевой среде. трансфузий эритросодержащих гемокомпонентов воз-

47
наука и здравоохранение, №1, 2013 Статьи

можно осуществлять за счёт выявления предшествую- тологии, когда получение достаточных количеств материа-
щей сенсибилизации. Это достигается обязательным ла (необходимых для других методик) затруднено;
для всех реципиентов скринингом нерегулярных анти- Оборудование и реактивы.
эритроцитарных антител имеющее клиническое значе-  ID-карты для определения антигенов эритроцитов
ние, способные вызывать in vivo разрушение эритроци- и антиэритроцитарных антител;
тов, имеющих на мембране соответствующий антиген.  ID-центрифуга для центрифугирования карт;
Присутствие которых, вызывает возникновение пост-  термостат на +37°С;
трансфузионной гемолитической реакции и осложнения,  штатив для пробирок и карт;
гемолитической болезни новорожденных или укороче-  пробирки вместимостью 5 и 10 мл;
ние времени выживания перелитых эритроцитов. При  пипетки полуавтоматические одноканальные (10,
отсутствии антител (отрицательный результат скринин- 25, 50 мкл);
га) эритросодержащие среды выбирают только с учётом  перчатки резиновые хирургические;
группы крови по системе АВ0 и Rh(D) принадлежности.
 раствор для разведения 1 (раствор бромелина);
Положительный результат скрининга говорит об «опас-
ном» реципиенте, которому трансфузии гемокомпонен-  раствор для разведения 2 (раствор низкой ионной
тов осуществляют только по индивидуальному подбору силы - LISS, РНИС);
с обязательным исключением антигена, к которому вы-  0,9% раствор хлорида натрия;
явлена сенсибилизация. В таких случаях целесообраз-  стандартные типированные эритроциты человека
но выполнять типирование эритроцитов реципиента по для выявления антител и проведения перекрестной
антигенам С,с,Е,е системы Rh, антигену К системы Kell реакции.
и другим для точных рекомендаций по выбору гемоком-
понентов для трансфузий. Это относится также к реци- Таблица 1.
пиентам, которым планируются многократные трансфу- Результаты исследования антигенов группы крови
зии гемокомпонентов (пациенты гематологических, он- АВО и резус-принадлежности в ID-карте АВО/Rh.
кологических стационаров, гемодиализа, реципиенты Выявляемые антигены
Заключение
органов и тканей). Таким реципиентам индивидуальный А В АВ D СDЕ
подбор проводится не только с учётом выявления + + + + + АВ Rh+
предшествующей сенсибилизации, но и с обязательным + + + – – АВ Rh-
фенотипированием эритроцитов. + – + + + А Rh+
Для исследования вышеуказанных антигенов эрит- + – + – – А Rh-
роцитов и антител к ним используются различные ме- – + + + + В Rh+
тоды, наиболее чувствительным и специфичным из – + + – – В Rh-
которых является гелевый тест. – – – + + 0 Rh+
Основные преимущества использования геле- – – – – – 0 Rh-
вой технологии: Примечание: Специфичность исследования под-
 Высокая чувствительность и специфичность те- тверждается по отрицательному результату в пробир-
стов, что позволяет проводить диагностику слабых ва- ке с контролем ID-карты.
риантов антигенов и антител (включая А2, А3; Du, DVI);
 Единственный метод выявления посттрансфузи- Таблица 2.
онных и посттрансплантационных «химер»; Определение антигенов эритроцитов системы АВО.
 Объективизация, стандартизация и возможность Группа Результаты исследования с сыворотками
фотодокументации результатов исследований для со- крови анти-А анти-В анти-АВ
хранения их в архиве или использования для учебных 0 (1) - - -
пособий; А1 (II) ++++ - ++++
 Автоматизации выполнения исследований и ком- А2 (II) ++++ - ++++
пьютерной обработки результатов; А3 (II) ++/+++ - ++/++++
 Удобство и простота в исследовании, повышение Аx (II)* -/++ - +/++
безопасности персонала: отсутствие этапов отмывания В (II) - ++++ ++++
эритроцитов; исследование крови, заготовленной на В3 (III) - +/+++ +/+++
консервантах и стабилизаторах без искажения резуль- Вx (III)* - -/++ -/++
татов; сокращение времени на проведение полного А1В (IV) ++++ ++++ ++++
иммуногематологического исследования в 2-5 раз; сни- А2В (IV) +++/++++ ++++ ++++
жение риска заражения персонала инфекциями, пере- Примечание: * - определение очень слабых вари-
дающимися через кровь; антов антигенов А и В требует дальнейших исследо-
 Возможность использования небольших количеств ваний.
крови – актуально при использование в педиатрии - неона-
Таблица 3.
Определение резус-принадлежности (D, СDЕ).
Резус-принадлежность Результаты исследования с сыворотками
D-положительная ++++ ++++
D-отрицательная - -
D-отрицательная, С Е- положительная* -
Слабоположительная (Du) От ± до +++ от +++ до ++++
Примечание: * - Положительная реакция с сывороткой анти-СDЕ при отрицательной реакции с сывороткой анти-
D свидетельствует о наличии антигенов С, Е и требует дальнейшего типирования с использованием ID-карт: С-с-Е-
е-К-сtl или С-Сw-с-Е-е-К

48
наука и здравоохранение, №1, 2013 Статьи

ID-карточки ID-карточки
A-B-AB-D-DCE- Контроль – для определения групп A-B-D-Контроль-Нейтр-Нейтр - для определения групп
крови ABO/RH. Каждая микропробирка (1-5) содер- крови ABO/RH перекрестным методом. Микропробирка 1
жит специфические моноклональнные антитела, 6 содержит анти - А, 2 - анти-В, 3 – Анти-D, 4 - кон-
– контроль содержит нейтральный гель. трольная, 5 и 6 –нейтральный гель.

ID-карточки ID-карточки
Кумбс + нейтральные – для скрининга антиэритроци- Кумбс анти - IgG, анти – IgG, C3d (АГС) - прямая реак-
тарных антител (непрямая реакция Кумбса и фермент- ция Кумбса. Микропробирки содержат гель с антигло-
ный тест). булиновой сывороткой для проведения реакции Кумбса
Первые три микропробирки содержат гель с анти- в растворе низкой ионной силы
глобулиновой сывороткой для проведения реакции (РНИС).
Кумбса в растворе низкой ионной силы (РНИС).
Последние три - нейтральный гель для выполнения
солевой или ферментативной реакции с папаином

Выводы. Гелевый тест является простым, воспро- Отсутствие этапов отмывания эритроцитов при вы-
изводимым, быстрым и очень чувствительным мето- полнении непрямого антиглобулинового теста позволя-
дом, позволяющим сразу выявлять слабые варианты ет более эффективно использовать рабочее время.
антигенов эритроцитов. Тест оценивается только мак-
роскопически. После короткого обучения персонала, Литература:
выполнения теста, сводятся к минимуму затрат рабоче- 1. Жибурт Е.Б. Трансфузиология. Издательский дом
го времени и ошибок, встречающиеся при традицион- "Питер", - 2002. – 345с.
ных методиках. 2. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы
Гелевый тест позволяет стандартизировать лабора- иммуногематологии. - Санкт-Петербург. – 2004.
торные методики, дать объективную оценку результатов 3. Bromilov I.M. Гелевая технология в серологии
реакции гемагглютинации. Тесты позволяют перепрове- групп крови // Вестник службы крови России. - №1, ян-
рять полученные данные, для контроля, так как могут варь – 1998. – С. 23-24.
быть фотокопированы для сохранения их в архиве. Для 4. Волкова О.Я. Применение гелевой технологии
теста используется небольшое количество сыворотки «Скангель» для иммуногематологических исследований
или эритроцитов, что чрезвычайно важно для педиат- крови доноров и реципиентов гемокомпонентов. Мето-
рических клиник. дические рекомендации. - Санкт-Петербург. – 2008. –
Использование гелевой системы позволяет снизить 65с.
риск заражения персонала даже при работе с потенци-
ально инфицированными образцами.

49
наука и здравоохранение, №1, 2013 Статьи

Тұжырым
ҚАННЫҢ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЯЛЫҚ ЗЕРТТЕУЛЕРІ ҮШІН ГЕЛДІК ТЕХНОЛОГИЯНЫ ҚОЛДАНУ
О.А. Искакова
АҚ «Республикалық жедел медициналық көмек көрсету ғылыми орталығы», Астана қ.
Мақала қанды иммуногематологиялық зерттеу үшін қолданылатын гелдік технология, гелдік сынақтама туралы
мәліметтерді және сәйкестендіру карталарының сипаттамасын ұсынады. Мұнда гелдік технологияның клиникалық
маңыздылығы мен артықшылықтары, сонымен қатар бірқатар зерттеулердің нәтижелері қарастырылған.
Аталмыш жұмыс трансфузиология, трансплантология, гематология, иммуногология салаларында
иммуногематологиялық зерттеулермен айналысатын мамандарға арналады.
Негізгі сөздер: иммуногематология, гелдік технологиялар, гемагглютинацияны стандарттау.
Summary
GEL TECHNOLOGIES FOR THE IMMUNE HEMATOLOGICAL BLOOD TESTING
O.A. Iskakova
JSC «Republican Research Center for Emergency Care», Astana
The article elaborates on use of gel technologies at immunohematology blood studies, principles of gel tests, and
characteristics of identification cards. Next, the article continues with describing clinical importance and advantages of gel
technology, as well as presents a number of research results. This is a recommended reading for specialists practicing
immunohematology studies in transfusiology, transplantology, hematology and immunology.
Key words: the immunohematology, gel technologies, gemagglyutination standartizing.

УДК 612.014.482.4-017.1
С.Е. Узбекова, Б.А. Жетписбаев, А.К. Мусайнова, Д.Е. Узбеков, Г.С. Шалгимбаева
Государственный медицинский университет города Семей
ВЛИЯНИЕ ИМУНОФАНА НА НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЕ ФАГОЦИТАРНОЕ ЗВЕНО ИММУНИТЕТА
ОРГАНИЗМА, ОБЛУЧЕННОГО ФРАКЦИОНИРОВАННОЙ ДОЗОЙ В ОТДАЛЕННОМ ПЕРИОДЕ
Аннотация
В статье отражены результаты влияния имунофана на показатели фагоцитарного фактора иммунной системы у
необлученных животных и в отдаленном периоде после после фракционированного гамма-облучения. В результате
экспериментов были получены данные, что у интактных животных под влиянием имунофана фагоцитоз достоверно
повышается с 36±2,4 до 42,6±1,5, а фагоцитарное число – в 1,6 раза. При этом имунофан в 3 раза повышает НСТ-
тест. Под воздействием имунофана в отдаленном периоде после облучения происходит нормализация фагоцитар-
ных факторов неспецифической резистентности организма.
Ключевые слова: фракционированное гамма-излучение, иммунная система, иммунопротекторы, отдаленные
последствия облучения.
Реализация восстановительных процессов в орга- Полученные цифровые данные обрабатывались
низме облегчается при фракционированном облучении общепринятыми методами вариационной статистики по
и при уменьшении мощности дозы, однако, во всех слу- методике Е.В. Монцевичюте-Эрингене с вычислением
чаях восстановление не может быть абсолютным, неко- критериев Стьюдента с оценкой степени достоверности
торая доля повреждений может оставаться необрати- различий между сравниваемыми группами. Статистиче-
мой и участвовать в формировании отдаленных по- ская обработка результатов исследования проводилась
следствий. Поэтому поиск эффективных препаратов с использованием программы Microsoft Excel 2000.
для профилактики отдаленных последствий радиацион- Результаты исследования и их обсуждение
ных поражений продолжает оставаться актуальной про- Нами было исследовано влияние имунофана на не-
блемой современной медицины. специфическое фагоцитарное звено иммунной системы
Цель исследования необлученных животных. Результаты представлены в
Целью нашего исследования явилась оценка влия- таблице 1.
ния имунофана на фагоцитарное звено иммунитета Из таблицы 1 видно, что у интактных животных под
интактного организма, а также в отдаленном периоде влиянием имунофана фагоцитоз достоверно повышает-
после фракционированного гамма-облучения. ся с 36±2,4 до 42,6±1,5, а фагоцитарное число – в 1,6
Материалы и методы исследования. Животных раза. При этом имунофан в 3 раза повышает НСТ-тест.
подвергали в течение 3 недель облучению гамма луча- В дальнейшем нами изучалось влияние имунофана
ми Со60 на радиотерапевтической установке «ЛУЧ-1», на неспецифическое фагоцитарное звено иммунной
суммарная доза облучения составила 6 Гр. Контроль- системы облученных фракционированной дозой живот-
ными для данной группы служили интактные животные ных в отдаленном периоде (таблица 2).
(n=10). До и через 90 дней после облучения и прове- Из таблицы 2 мы видим, что под воздействием иму-
денного курса имунофаном (в течение 10 дней по об- нофана происходит достоверное снижение НСТ-теста
щепринятой схеме) у всех животных определяли пока- до 2,4±0,2 (P<0,05), фагоцитоза до 24,8±3,9, а фагоци-
затели фагоцитарного фактора иммунной системы. тарное число снижается до нормы.

50

Оценить