Вы находитесь на странице: 1из 2

ВЛИЯНИЕ ЭКЗОСОМ ДРОЖЖЕЙ НА БИОДОСТУПНОСТЬ ПРЕПАРАТОВ: ФИЗИКО

ХИМИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ


Смирнова Анастасия Алексеевна, ГБОУ Курчатовская школа

Проблема проникновения фармпрепаратов сквозь многие тканевые барьеры


является актуальной по сей день. Одним из наиболее важных для целевого переноса
веществ является гемато-энцефалический барьер (ГЭБ), являющийся непреодолимым
препятствием для большинства фармпрепаратов. Одним из возможных систем для
целенаправленной доставки веществ через ГЭБ является способ их включения в состав
клеточных экзосом (или экстраклеточных везикул) либо после инкубации вещества или
его предшественника с процудирующими клетками, либо контролируемым слиянием с
коллоидными формами препарата in vitro.
Данная работа посвящена исследованиям возможностей использования экзосом
дрожжей Saccharomyces cerevisiae для улучшения биодоступности препаратов при
парентеральном, интраназальном и трансдермальном введении. Существенная часть
работы посвящена аналитическому исследованию механизмов транспорта везикул сквозь
ГЭБ, роли везикулярного транспорта в нейронных коммуникациях и формировании
памяти в виде молекулярного белкового кода тетраспанинов всех клеток-участников
последовательной передачи везикул по нейронным сетям, а также отработки
экспериментальных моделей, позволяющих количественно оценить влияние везикулярной
формы на нейрональные эффекты. Нами была выбрана личиночная форма мясной мухи,
или опарыши, в качестве модельного объекта для исследования нейротоксичности
праллетрина. Оценивалась двигательная активность личинок в виде способности ползти
по вертикальной стеклянной стенке сосуда, угнетаемая праллетрином. Удобство модели
состоит в результирующем подсчете поднимающихся особей после введения
определённых дозировок препарата. Модель церебрального барьера насекомых является
наиболее близкой к позвоночным, отражая все ключевые транспортные процессы.
Экзосомы дрожжей получались экстракцией из культуральной жидкости после
осаждения клеточного дебриса и фильтрования. Экзосомы были охарактеризованы на
дзета-сайзере Zetasizer Nano ZS распределением по размерам и дзета-потенциалам, а
также устойчивостью к различным физико-химическим воздействиям и методам
химического осаждения. Выяснилось, что средние размеры экзосомальных частиц
дрожжей составляют 80-100 нм (рис.1 а), с дзета-потенциалом -7±1 мВ. Инкубация этих
экзосом с частицами ватерита (аморфной конформации СаСО3) полностью разрушает
экзосомы, - о чем свидетельствует изменение в распределении размеров частиц (рис.1 б).
По-видимому, это происходит вследствие защелачивания раствора до рН=9,5 при
диссоциации ионов Са2+.
Statistics Graph (6 measurements)

25

20
Number (Percent)

15

10

0
1 10 100 1000 10000
Size (d.nm)

а б Mean w ith +/-1 Standard Deviation error bar

Statistics Graph (6 measurements)

30
Number (Percent)

20

10

0
1 10 100 1000 10000
Size (d.nm)

Mean w ith +/-1 Standard Deviation error bar


Рис. 1 Распределение частиц коллоидного раствора с экзосомами Saccharomyces cerevisiae
исходно (а) и после инкубации с СаСО3 (б)

При исследовании количественных различий активности двух форм препарата:


исходного праллетрина и ассоциированного с экзосомами использовано три группы
личинок м.м в количестве по 50 штук: контрольная группа, получающих воду с сахаром,
группу препарата сравнения, получавшей 0,04% праллетрин, в виде эмульсии в сахарной
воде и коллоидный раствор супернатанта жидкой культуры, в которую предварительно
введен 0,04% праллетрин. Группы сравнивались по количествам особей, способных
ползать по вертикальной стеклянной стенке сосуда. Полученные результаты зависимостей
активности животных от дозы препарата представлены на рисунке 2.
группа 1 _1 (эмульсия праллетрина)
группа 2_1 (праллетрин в ассоциации с экзосомами дрожжей)
35 группа 1 _2 (эмульсия праллетрина)
количество активных особей в группе

группа 2 _2 (праллетрин в ассоциации с экзосомами дрожжей)


30 интактный контроль

25

20

15

10

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5
количество праллетрина, 10^(-3)масс.д.
Рис.2 Зависимости активностей от количества праллетрин в разных формах

Исследование показало, что ассоциирование праллетрина с экзосомальной


фракцией жидкой культуры Saccharomyces cerevisiae не приводит к качественному
улучшению биодоступности препарата. Использованные исследованные подходы могут
быть применены в разработке новых лекарственных препаратов, направленно
действующих на дегенеративные и психиатрические заболевания.
Работа выполнена в рамках школьного научного проекта в Курчатовской школе в
сотрудничестве с НИЦ «Курчатовский институт».