Parámetros que afectan en la reacción Antígeno – Anticuerpo

La interacción antígeno eritrocitário anticuerpo puede ser detectada por

diversas técnicas serológicas, entre ellas, la precipitación la aglutinación,
la inhibición y la hemólisis.

Los métodos utilizados con mayor frecuencia en el laboratorio de

Inmunohematologia tienen como punto final la hemólisis o la
aglutinación.

La aglutinación de hematíes es una reacción físico-química con parámetros definidos.

La aglutinación sucede en dos etapas:

1º Durante la primera etapa el anticuerpo se une al antígeno correspondiente en

la membrana eritrocitaria.

El proceso se conoce con el nombre de sensibilización y a este punto la

reacción no es visible.

2º La segunda etapa es el resultado de colisiones entre hematíes sensibilizados

que dan lugar a la
formación de "puentes" entre ellos y la subsiguiente visualización de la
aglutinación.

Primera etapa de la aglutinación

La asociación del antígeno con el anticuerpo es reversible y es afectada por :

Concentración de antígeno y anticuerpo

Un exceso de anticuerpo (prozona), o de antígenos
(postzona), pueden causar falsos negativos.

Es más probable que se produzca la

sensibilización cuando el anticuerpo se halla en
concentración elevada. Esto puede lograrse
aumentando la proporción del suero en relación
con los hematíes.
En la serología eritrocitaria es común
usar 2 gotas de suero por cada gota de
suspensión de eritrocitos al 2-5%.

Si los anticuerpos son poco reactivos, el aumento de concentración de puede

acrecentar la sensibilidad.
 Temperatura
La mayoría de los anticuerpos de grupo sanguíneo presentan un rango
térmico específico.

Generalmente, los anticuerpos IgM reaccionan mejor a temperaturas

bajas en un rango de 4ºC a 25ºC. Algunos anticuerpos IgM activan el
complemento a 30 ºC , pero rara vez afecta la transfusión; mientras que
los IgG se detectan mejor a 37°C y en la fase de anti globulina.
En medicina transfusional es de importancia detectar solo los anticuerpos
que se consideran clínicamente significativos.

Generalmente, estos anticuerpos reaccionan mejor a 37°C y en la fase de anti globulina.

Muchos de los anticuerpos son “reactivos fríos” como IgM y reactivo calientes son IgG.

pH
Aunque no se ha determinado el pH óptimo para la mayoría de anticuerpos de grupo
sanguíneo de importancia clínica, se supone que se aproxima al pH fisiológico. Sin embargo,
algunos anticuerpos, como por ejemplo anti-M, reaccionan mejor a pH bajo.

Fuerza iónica
Los iones de N a 'y Cl presentes en la solución salina normal se agrupan
alrededor
de las moléculas de antígeno y anticuerpo y neutralizan parcialmente sus cargas
opuestas,
lo cual dificulta la unión entre ellos.
El efecto puede reducirse disminuyendo la fuerza iónica del medio.

Período de incubación
El período de incubación necesario para que la reacción antígeno-anticuerpo alcance el equilibrio
varia para los anticuerpos de los diferentes grupos sanguíneos. Esta variación es principalmente
debido a la clase de inmunoglobulina y a la interacción específica entre la región Fab del anticuerpo
y la configuración antigénica. La adición de sustancias que afectan la captación de anticuerpo puede
disminuir el tiempo de incubación.
La incubación por mas de 30min no plantea mayores inconvenientes, excepto la demora de los
resultados.
La detección de la mayoría de los anticuerpos significativos es a 37Cº durante 30 a 60minutos.
Segunda etapa de la aglutinación
Después que el anticuerpo se ha fijado al antígeno en la superficie eritrocitaria, los
hematíes sensibilizados deben unirse para así dar lugar a la aglutinación.

Aquí se va a ver afectado por:

Distancia entre los eritrocitos

Los hematíes tienen una carga neta negativa en la superficie
y la interacción con los iones del
medio en que están suspendidos altera esta carga, dando
como resultado una carga neta llamada
Potencial zeta.
La reducción de la carga que separa a los hematíes permite
que estos se aproximen y se produzca la aglutinación.

El agua de hidratación es otra propiedad física que mantiene la distancia entre los hematíes
suspendidos en solución salina. Se piensa que las moléculas de agua fuertemente unidas a la
membrana celular actúan como aislantes y evitan el acercamiento entre los hematíes.

Tamaño del anticuerpo

Las reacciones que incluyen las moléculas de IgM suceden con
facilidad ya que debido a
su tamaño, estas moléculas pueden cubrir la distancia necesaria
para formar puentes con otros
hematíes. Este no es el caso con las moléculas de IgG, las cuales
debido a su tamaño no pueden
cubrir esas distancias y solo producen la sensibilización.

Potenciadores de la Aglutinación
Sustancias que se emplean para modificar el medio de prueba como una manera de promover
la aglutinación de hematíes antígeno-positivos por los anticuerpos IgG correspondientes.

Algunos potenciadores de uso rutinario son:

Albúmina bovina
El uso de la albúmina bovina en 1945 cuando se descubrió que algunos anti-
D aglutinaban los hematíes con el antígeno correspondiente solo cuando
estos estaban suspendidos en albúmina .
En 1965, Pollack y colaboradores investigaron el mecanismo de acción de la
albúmina y concluyeron que reducía el potencial zeta de la mezcla así
permitiendo que
los hematíes se aproximen los unos a los otros
Las soluciones de albúmina bovina están disponibles en concentraciones del
22% y el 30%.
Soluciones de baja fuerza iónica
El uso de soluciones de baja fuerza lónica para incrementar la captación de anticuerpo en
la prueba de antiglobulina indirecta fue inicialmente descrito en 1964 por Hughes-Jones
y colaboradores y Elliot y colaboradores . Sin embargo, en ese entonces habla cierta aversión
a usar este método en la rutina debido a las reacciones positivas-falsas que podlan ocurrir.

Poli etilenglicol
Es un polímero linear de etilen glicol que afecta la primera fase de la
aglutinación. Cuando se adhieren los polímeros a la prueba, ocurre la
exclusión estérica de las moléculas de agua, lo cual causa que las
moléculas de anticuerpos y los hematíes estén en mayor proximidad
asi incrementando la velocidad y la cantidad de captación de
anticuerpo .

Enzimas
Las enzimas proeoliticas más utilizadas en el laboratorio de inmunohematologia son la bromelina,
la ficina, la papaína, y la tripsina.
Aunque estas enzimas potencian la aglutinación mediada por algunos anticuerpos, destruyen ciertos
antígenos eritrocitarios , principalmente los M, N, S, Fya y Fy b.

Estas enzimas disminuyen la carga superficial de los eritrocitos por sajamiento de las moléculas de
ac. Siàlico de las cadenas de polisacáridos, por ende propicia la aglutinación .

El uso de enzimas es una herramienta importante en la identificación de anticuerpos,

pero su uso es limitado en las pruebas pre-transfisionales de rutina.

BIBLIOGRAFÍA:
http://www.sbhh.com.br/reservado/revista/2000Sup/248-252.pdf
Buscador: Google fecha 17 de febrero hora 11:06 pm
Rev.brm.hemtol.hemotm, 2000,22 (Suplemento 2): 248-252 Gloria Schlanser

Libro de texto. Radillo González (2006) Medicina transfusional 2da edición ed.
Prado
 UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE MEDICINA

QUÍMICO CLÍNICO BIÓLOGO

INMUNOHEMATOLOGIA

PARAMETROS QUE AFECTAN LA REACCIÓN ANTIGENO - ANTICUERPO

ALUMNO:
JUAN MANUEL BRIONES CARDONA
8vo SEMESTRE
MATRICULA 1376711

MONTERREY NUEVO LEÓN A 21 DE FEBRERO DE 2011