Вы находитесь на странице: 1из 105

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное образовательное учреждение


высшего профессионального образования
«СМОЛЕНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ»

В.Н. ДЫШКО, В.В. ДЫШКО,


П.В. РОМАНЕНКО, Н.В. СЛУЧЕНКОВА

Методики агрохимических
исследований почв и растений
Учебно-практическое пособие для аспирантов по направлению подготовки
35.06.01 Сельское хозяйство

Смоленск 2014
1
УДК 631.81:631.4(075.8)
ББК 40.4:40.3я73
Д91

Рецензент: С.М. Вьюгин, доктор сельскохозяйственных наук, профессор


кафедры агрономии и экологии ФГБОУ ВПО «Смоленская ГСХА»

Дышко В.Н.
Методики агрохимических исследований почв и растений: учебно-
практическое пособие / В.Н. Дышко, В.В. Дышко, П.В. Романенко,
Н.В. Слученкова. – Смоленск: ФГБОУ ВПО «Смоленская ГСХА», 2014.-197 с.
В учебно-практическом пособии приведены методики агрохимических исследований,
применяемые в почвоведении и агрономической химии. Направлено на формирование у
аспирантов знаний по проведению всестороннего агрохимического анализа почв и растений
в лабораторных условиях.
Подготовлено в соответствии с требованиями федерального государственного
образовательного стандарта высшего образования подготовки научно-педагогических кадров
в аспирантуре по направлению подготовки 35.06.01 Сельское хозяйство, направленности
(профилю) подготовки Агрохимия - очной и заочной форм обучения.
Может быть использовано также аспирантами других направленностей (профилей)
подготовки.

Печатается по решению методического совета ФГБОУ ВПО «Смоленская


ГСХА» (протокол № 07 от « 30 » июня 2014 г.)

УДК 631.81:631.4(075.8)
ББК 40.4:40.3я73

©Дышко В.Н., Дышко В.В., Романенко П.В., Слученкова Н.В., 2014


©ФГБОУ ВПО «Смоленская ГСХА», 2014

2
СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………... 6
1.МЕТОДИКИ АГРОХИМИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ ПОЧВ……………………………………………………... 7
1.1.Отбор почвенных образцов для лабораторных исследований…………... 7
1.2.Определение влажности почвы……………………………………………. 7
1.2.1. Определение гигроскопической влажности почвы……………………. 8
1.2.2. Определение полевой влажности почвы……………………………... 8
1.3.Подготовка образцов почвы к химическому анализу……………………. 9
1.4.Определение реакции, емкости поглощения почвы и состава
поглощенных катионов………………………………………………………… 10
1.4.1. Определение реакции почвы потенциометрическим методом……...... 10
1.4.2. Определение обменной кислотности методом
потенциометрического титрования………………………………………….... 12
1.4.3. Фотоколориметрическое определение обменного (подвижного)
алюминия в почве по методу ЦИНАО………………………………………... 12
1.4.4. Определение гидролитической кислотности титрованием………...…. 14
1.4.5. Определение суммы поглощенных оснований по Каппену-
Гильковицу……………………………………………………………………… 15
1.4.6.Определение кальция трилонометрическим методом... ………………. 16
1.4.7.Определение обменного магния
фотоколориметрическим методом………..…………………………………… 18
1.4.8.Количественное определение кальция и магния
комплексонометрическим методом в водной вытяжке……………………… 21
1.5. Определение содержания
питательных веществ в почвах и потребности в удобрениях……………….. 23
1.5.1. Определение гумуса в почве по методу И.В. Тюрина (вариант
ЦИНАО)………………………………………………………………………… 23
1.5.2. Определение подвижных форм фосфора и калия в почве по методу
Кирсанова в модификации ЦИНАО………………………………………….. 26
1.5.3. Определение нитратного азота в почве ионометрическим экспресс-
методом……......................................................................................................... 30
1.5.4. Определение аммиачного азота фотоколориметрическим методом…. 33
1.5.5. Определение аммиачного азота реактивом Несслера…………………. 35
1.6. Определение подвижных форм микроэлементов в почве…...………….. 37
1.6.1. Определение меди……………………………………………………….. 37
1.6.2. Определение марганца………………………………………………….. 40

3
1.6.3. Определение кобальта…………………………………………………… 42
1.6.4. Фотометрическое определение цинка с использованием дитизона….. 45
1.6.5. Определение бора по методу Бергера и Труога в модификации
ЦИНАО………………………………………………………………………….. 48
1.6.6. Определение молибдена……………………………………………….... 54
Вопросы для самоконтроля……………………………………………………. 56
2. МЕТОДИКИ АГРОХИМИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ РАСТЕНИЙ………………………………………………. 58
2.1. Задачи агрохимического анализа растений……………………………… 58
2.2. Отбор растительной пробы……………………………………………….. 58
2.3. Фиксация растительного материала……………………………………… 60
2.4. Размол растительных образцов и их хранение…………………………... 61
2.5. Определение в растениях «сырой» золы..................................................... 62
2.6. Растворение золы………………………………………………………….. 63
2.7. Мокрое озоление по методу Гинсбург…………………………………… 63
2.8. Определение общего азота колориметрическим методом с реактивом
Несслера………………………………………………………………………… 65
2.9. Определение фосфора с применением
аскорбиновой кислоты (по Мерфи и Райли)…………………………………. 66
2.10. Определение калия в растениях…………………………………………. 67
2.11.Определение кальция и магния в растениях после сухого и мокрого
озоления............................................................…………………………………. 68
2.12. Определение жира в растениях методом обезжиренного остатка…….. 70
2.13. Определение сырой клетчатки в кормах по методу Кюшнера и
Ганека…………………………………………………………………………… 73
2.14. Определение общего содержания серы в растениях…………………… 75
2.15. Определение микроэлементов в растениях…………………………….. 76
2.15.1. Фотоколориметрический метод определения меди с
использованием диэтилдитиокарбамата……………………………………… 76
2.15.2. Фотоколориметрический метод определения марганца с
использованием периодата калия……………………....................................... 78
2.15.3. Фотометрический метод определения железа с использованием
ортофенантролина……………………………………………………………… 80
2.15.4. Фотоколориметрический метод определения цинка с
использованием дитизона……………………………………………………… 82
2.15.5. Фотоколориметрический метод определения кобальта с
использованием 1,2-пиридилазо-2-нафтола (ПАН)………………………….. 84
2.15.6. Фотометрический метод определения бора с использованием
4
хинализарина…………………………………………………………………… 85
2.15.7. Фотометрический метод определения молибдена с использованием
цинк-дитиола……………………………………………………………………. 87
2.16. Определение кислотности силоса……………………………………...... 88
2.17. Определение сырого протеина в растениях…………………………….. 89
2.18. Определение белкового азота в растениях………………………...…… 90
2.19. Определение содержания нитратов в растениях с помощью
ионоселективного электрода по методу ЦИНАО……………………………. 93
2.20. Определение крахмала в растениях методом кислотного гидролиза.... 95
2.21. Определение содержания каротина по Сапожникову………...……….. 99
Вопросы для самоконтроля……………………………………………………. 101
Библиографический список……………………………………………………. 102

5
ВВЕДЕНИЕ
Агрохимия изучает круговорот питательных веществ в земледелии,
взаимоотношения между растением, почвой и удобрениями и способы
регулирования питания сельскохозяйственных культур для повышения их
урожайности и улучшения качества урожая. Внедрение интенсивных технологий
возделывания сельскохозяйственных культур невозможно без четкого
осуществления всех мероприятий, обеспечивающих наиболее эффективное
применение минеральных и органических удобрений.
К.А. Тимирязев писал: «В конечном счете, все задачи земледелия сводятся
к возможно строгому осуществлению питания растений». Изучение питания
растений и химического состава растительной сельскохозяйственной продукции
- одна из важнейших задач агрохимии. Она исследует также обмен веществ в
растениях в связи с условиями питания, ибо характер его определяет не только
величину, но и качество урожая. Именно поэтому химическая специфика
сельскохозяйственных растений выступает первым и ключевым объектом
агрохимических исследований.
Вторым объектом исследования в агрохимии является почва. Изучение
содержания и динамики питательных веществ в почве, их доступности
растениям, действия удобрений на свойства почвы - также важнейшая задача
агрохимических исследований. Химический состав почв является одним из
основных факторов почвенного плодородия, как непосредственно, так и
определяя те или иные свойства почвы, имеющие решающее значение в жизни
сельскохозяйственных растений.
В пособии рассмотрены методики лабораторного агрохимического анализа
почв и растений, эмпирические данные которого необходимы для
агрохимической и агротехнической оптимизации сельскохозяйственного
производства. Значительное внимание уделено методам определения
микроэлементов в почве и растениях, агрохимическому анализу грунтов,
выполнению учебной практики по агрохимии.

6
1. МЕТОДИКИ АГРОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПОЧВ

1.1. Отбор почвенных образцов для лабораторных исследований


Почвенные образцы бывают двух видов: взятые с нарушением естественного
сложения (насыпные) и в виде цельных блоков-монолитов. Насыпные образцы
отбирают из всех основных разрезов для лабораторного исследования почв, а также
для сравнения и уточнения морфологической характеристики почвенных профилей
и возможности их сопоставления между собой в период обработки данных
полевого обследования.
Образцы берутся послойно при помощи почвенного ножа, без пропусков, по
всей толще почвенного разреза. Для того чтобы каждый почвенный горизонт был
достаточно охарактеризован, образцы берут из верхней и нижней его части. Если
мощность горизонта значительная (≈50 см), берут еще один образец из середины
горизонта. При незначительной мощности почвенного горизонта (10-20 см) можно
ограничиться взятием из данного горизонта одного образца, выбирая для этого
наиболее типичную развитую часть горизонта. При мощности горизонта менее 10
см образец отбирают со всей толщи. Масса каждого образца должна быть примерно
0,5-0,7 кг.
Отбор образцов следует производить снизу вверх, в противном случае почва
будет осыпаться и засорит нижнюю часть разреза. Самый нижний образец нужно
брать лопатой со дна ямы сразу же после ее выкопки. Отобранные почвенные
образцы помещают в полиэтиленовые пакеты. Каждый образец снабжается
этикеткой, в которой указываются: дата, район работ, № разреза, горизонт и
глубина взятия образца, автор исследования.

1.2. Определение влажности почвы


Агрохимические исследования почвы следует начинать с определения ее
влажности, поскольку от степени увлажнения зависят цвет почвы, ее твердость,
выраженность структуры и т.д. Влажность почвы зависит от количества
перегноя и глинистых частиц.
В лабораторных условиях определяется гигроскопическая влажность и
полевая влажность почвы.
Гигроскопической влажностью называется то количество воды, которое
поглощает почва из воздуха, насыщенного парами воды. Величина
гигроскопической влажности зависит от гранулометрического состава почвы,
количества коллоидов и гумуса в ней. Этой величиной пользуются для
вычисления влажности завядания растений (коэффициента завядания). Она
соответствует в большинстве случаев полуторной - двойной максимальной
гигроскопической влажности.
7
Полевой влажностью почвы называют то количество воды, которое
содержится в ней в данный момент. Влажность почвы непрерывно изменяется
вследствие передвижения влаги по профилю и ее испарения из почвы. Этой
величиной пользуются для вычисления запаса влаги в том или ином горизонте
почвы и для вычисления коэффициента пересчета с влажной почвы на сухую.
Наиболее распространенным является метод высушивания почвы в термостате.

1.2.1. Определение гигроскопической влажности почвы


Ход анализа
Стеклянный бюкс высушивают и взвешивают на аналитических весах.
Бюксы с почвой взвешивают на технохимических весах и высушивают до
постоянного веса в сушильном шкафу в течение 6-8 часов при температуре
1050С. В процессе сушки нельзя открывать шкаф и ставить в него новые бюксы.
По окончании высушивания стаканчики вынимают из сушильного шкафа
щипцами с резиновыми наконечниками, закрывают крышками и ставят в
эксикатор для охлаждения (20–30 мин.). После охлаждения стаканчики
взвешивают закрытыми на аналитических весах.

Расчет результатов
Влажность в процентах от массы сухой почвы определяют по потере в
весе согласно формуле

Х = (а – в)∙100/ (в – с), где

с - масса бюкса, г; а - масса бюкса с пробой почвы до сушки, г; в - масса бюкса


с пробой почвы после сушки, г; (а – в) - масса испарившейся влаги, г; (в – с) -
масса абсолютно сухой почвы, г; 100 - коэффициент пересчета в проценты.
Определение гигроскопической влажности проводят в 2-кратной
повторности и вычисляют среднее из этих определений.
Оборудование: сушильный шкаф, технохимические и аналитические
весы, эксикатор, стеклянные бюксы.

1.2.2. Определение полевой влажности почвы


Ход анализа
Для определения полевой влажности на месте взятия образца берут буром
или ножом массу почвы с заданной глубины. Из пахотного слоя образец берут на
всю глубину или из нескольких слоев (0-5, 5-10, 10-15, 15-20 см). На
технохимических весах взвешивают алюминиевый бюкс с крышкой, помещают в
него почву на 1/2-1/3 объема и снова взвешивают, закрыв крышкой. Образец
высушивают открытым в сушильном шкафу при температуре 105 °C в течение 5

8
часов (крышку помещают под дно бюкса) и после охлаждения в эксикаторе снова
взвешивают. Высушивание и взвешивание повторяют до постоянной массы.

Расчет результатов
Полевую влажность рассчитывают в весовых процентах по формуле

А = а/в∙100, где

А - полевая влажность, %; а - масса испарившейся влаги, г; в - масса сухой почвы


после высушивания, г; 100 - коэффициент пересчета в проценты.
Для многих анализов, которые проводятся со свежей почвой, необходимо
знать коэффициент пересчета с влажной на сухую почву. Его вычисляют по
формуле:

К = 100 + А/100, где

А - полевая влажность, %.
Оборудование: сушильный шкаф, технохимические весы, эксикатор,
алюминиевые бюксы.

1.3. Подготовка образцов почвы к химическому анализу


Почвенный образец массой 600-750 г размещают на листе чистой
оберточной или пергаментной бумаги и удаляют из него корни, включения и
новообразования. Дернину тщательно отряхивают от комочков почвы. Крупные
комки почвы разламывают руками или дробят в фарфоровой ступке пестиком с
резиновым наконечником до комков диаметром 5-7 мм. Цель измельчения –
получить более однородный образец, который можно тщательно перемешать при
взятии средней пробы. Поскольку средняя проба характеризует все свойства
исследуемой почвы, на подготовку образца к ее взятию обращают особое
внимание.
Среднюю пробу отбирают квартованием. Измельченный дроблением
образец после перемешивания располагают на бумаге в виде квадрата или
прямоугольника и делят шпателем по диагонали на четыре равные части. Две
противоположные части высыпают в картонную коробку для хранения на случай
повторных или дополнительных определений. В коробку следует положить
также этикетку образца и вторую этикетку наклеить на стенку коробки. Из
оставшейся на бумаге почвы в первую очередь берут лабораторную пробу для
подготовки к определению гумуса и азота. Пробу берут до растирания почвы в
ступке, так как при растирании остатки корней измельчаются настолько, что
выбрать их из пробы невозможно, поэтому результаты анализа получаются
завышенными.
9
Оборудование: лист пергаментной бумаги, фарфоровая ступка, шпатель.

1.4. Определение реакции, емкости поглощения почвы и состава


поглощенных катионов

1.4.1. Определение реакции почвы потенциометрическим методом


Реакция почвенного раствора - один из основных агрохимических
показателей почвы. Реакция среды оказывает важное влияние на биологические и
химические процессы в почве, на поступление питательных веществ в растения.
Учитывать рН почвы следует и при внесении минеральных удобрений.
В зависимости от состояния ионов водорода в почве различают
кислотность актуальную (активную) и потенциальную (скрытую). Последняя
в свою очередь подразделяется на обменную и гидролитическую.
Актуальная кислотность обусловлена повышенной концентрацией ионов
водорода в почвенном растворе по сравнению с гидроксид-ионами. Она
определяется наличием в почвенном растворе водорастворимых кислот -
щавелевой, лимонной, фульвокислот, гидролитически кислых солей и, прежде
всего, угольной кислоты. Величина актуальной кислотности оказывает важное
влияние на растения и почвенные микроорганизмы, ее величина и стабильность
определяются, прежде всего, буферными свойствами почвы.
Значение потенциальной кислотности важно при решении вопроса о
необходимости известкования почв, а также при внесении удобрений. В
зависимости от величины рН солевой вытяжки различают реакцию почв: 4,0 -
очень сильнокислая; 4,1-4,5 - сильнокислая; 4,6-5,0 - среднекислая; 5,1-5,5 -
слабокислая; 5,6-6,0 - близкая к нейтральной; 6,1 - нейтральная.
Для исследования кислотности почвы измеряют рН водной и солевой
вытяжки. Величина рН водной вытяжки характеризует актуальную кислотность,
величина рН солевой вытяжки – потенциальную кислотность почвы.
Потенциометрический метод определения рН почв сводится к измерению
ЭДС, которая возникает при погружении в почвенную суспензию (водную или
солевую вытяжку) двух различных электродов: измерительного (стеклянные или
мембранный электрод) и электрода сравнения (чаще всего хлорсеребряный).

Ход анализа
Предварительно высушенную и просеянную через сито (диаметр отверстий 1
мм) почву взвешивают на аналитических весах. Величина навески зависит от
горизонта почв: для минеральных горизонтов она составляет 10 г, для
органогенных (подстилка) - 1 г. Почву помещают в колбу емкостью 100 мл.
Для определения кислотности в водной вытяжке почву заливают
дистиллированной водой (25 мл), в солевой вытяжке -1 н. раствором хлорида
10
калия (25 мл). Для лучшего диспергирования почвы в водном/солевом растворе
колбы взбалтывают в течение 10 минут, в случае больших партий можно
использовать электрическую мешалку. Приготовленные почвенные болтушки
оставляют на 24 часа. По истечении срока проводят фильтрование через
складчатый фильтр. Складчатый фильтр вместо обычного используется с целью
ускорения фильтрования. В этом случае работает вся поверхность листа, и
фильтрование идет быстрее.

Рисунок 1 - Изготовление складчатого фильтра

Рисунок 2 - Готовый складчатый фильтр

Рисунок 3 - Фильтрование

Основные правила фильтрования:


 жидкость с осадком необходимо приливать по стеклянной палочке;
 приливая первые порции жидкости, необходимо слегка придерживать фильтр
палочкой;
 первую порцию фильтрата нужно отбрасывать, предварительно ополоснув ею
приѐмную колбу (эта порция собирает в себе загрязнения).
Затем проводят определение кислотности почвенной вытяжки методом
прямой рН-метрии на рН-метре. Данные измерений заносят в таблицу
следующего вида (Таблица 1):
11
Таблица 1 – Результаты исследования кислотности почвенной вытяжки
Место Горизонт (глубина
рНвод. рНсол.
отбора почв отбора почв), см

Оборудование: рН-метр, ротатор, аналитические весы, сито (диаметр


отверстий 1 мм), коническая колба на 100 мл с пробкой, 2 пипетки на 25 мл,
стеклянная воронка, фильтры.
Реактивы: 1 н. раствор хлорида калия КСl.

1.4.2. Определение обменной кислотности методом


потенциометрического титрования
Метод основан на том, что вытяжку из почвы титруют 0,1 н. раствором
гидроксида натрия до рН=8,2, используя рН-метр с блоком автоматического
титрования.

1.4.3. Фотоколориметрическое определение обменного (подвижного)


алюминия в почвепо методу ЦИНАО
Метод основан на образовании хромазуролом-С с катионом Аl3+ оранжевого
комплексного соединения, по степени интенсивности окраски которого при
колориметрировании устанавливают концентрацию алюминия в растворе. При
этом мешающее влияние катиона Fe3+ устраняют восстановлением его с помощью
аскорбиновой кислоты.

Ход анализа
Из вытяжки, приготовленной для определения обменной кислотности,
отбирают пипеткой по 1 мл в стаканы вместимостью 100 мл, прибавляют по 25
мл 0,02% раствора аскорбиновой кислоты. Содержимое тщательно
перемешивают стеклянной палочкой, прибавляют 25 мл рабочего
окрашивающего раствора и снова перемешивают.
Фотоколориметрирование окрашенного раствора проводят в кювете с
толщиной слоя 1 см, используя желто-зеленый светофильтр с λ=545 нм, не ранее
чем через 10 мин и не позднее чем через 30 мин после окрашивания раствора.
Оптическую плотность измеряют относительно холостой пробы, содержащей все
реактивы, кроме алюминия. Если оптическая плотность анализируемого раствора
будет выходить за пределы калибровочного графика, то определение повторяют,
разбавив исходный фильтрат в 10 раз. Для этого берут 10 мл почвенной вытяжки
пипеткой, переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят до метки 1 М раствором

12
хлорида калия. В этом случае найденное по графику содержание подвижного
алюминия увеличивают в 10 раз.
Приготовление стандартного раствора алюминия
На аналитических весах взвешивают 0,450 г металлического алюминия с
точностью до 0,0001 г, переносят навеску в мерную колбу на 500 мл. Приливают
10 мл разбавленной соляной кислоты, закрывают колбу клапаном Бунзена и после
прекращения бурного выделения пузырьков водорода ставят на кипящую водяную
баню до полного растворения алюминия. После этого колбу с раствором
охлаждают, добавляют 37,5 г хлорида калия, доводят объем раствора до метки
дистиллированной водой и перемешивают. Полученный раствор содержит 0,1
мэкв/мл алюминия и может храниться в склянке с притертой пробкой до 1 года.

Приготовление рабочей шкалы растворов сравнения


Из приготовленного стандартного раствора алюминия первоначально
готовят рабочий стандартный раствор: в мерную колбу на 250 мл пипеткой
отбирают 25 мл исходного стандартного раствора и доводят объем до метки 1 М
раствором хлорида калия. Полученный раствор содержит 0,01 мэкв/мл алюминия.
Рабочую шкалу растворов сравнения готовят в мерных колбах
вместимостью 100 мл, отбирая мерной пипеткой объемы рабочего стандартного
раствора, указанные в таблице 2.
Содержимое колб доводят 1 М раствором хлорида калия до метки,
закрывают пробками и тщательно перемешивают. Растворы хранят в колбах с
притертой пробкой не более 3 мес.
Для окрашивания растворов шкалы сравнения пипеткой отбирают по 1 мл из
каждой колбы стандартных растворов, окрашивают их так же, как и испытуемый
раствор и спустя 10 мин фотоколориметрируют. По данным измерений строят
калибровочный график: ось абсцисс - содержание подвижного алюминия (мэкв/100
г почвы) или его концентрацию, которому соответствует данный стандартный
раствор, по оси ординат - соответственно показания оптической плотности.

Таблица 2 - Приготовление рабочей шкалы растворов сравнения при


фотоколориметрическом определении алюминия
Номер колбы
Показатель
1 2 3 4 5 6 7 8
Объем рабочего раствора, мл 0 4 12 24 32 40 48 56
Концентрация алюминия в
0 0,0036 0,0108 0,0216 0,0288 0,036 0,0432 0,05
растворах сравнения, мг/мл
Концентрация алюминия
пересчета на почву, мэкв/100 0 0,10 0,30 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40
г
13
Расчет результатов
Содержание подвижного алюминия (в мг/100 г почвы) в исследуемой
почве находят по калибровочному графику или по формуле, когда при анализе
берут другие разведения:

Al = С∙100/m, где

С - концентрация алюминия, найденная по калибровочному графику растворов


сравнения, мг/мл; 100 - коэффициент пересчета на 100 г почвы; m - масса почвы,
соответствующая взятому объему вытяжки для фотоколориметрирования, г.
Допустимые расхождения параллельных определений от среднего
арифметического не должны превышать 40% при содержании алюминия до 3,5
мг/100 г почвы и 10% - свыше 3,5 мг/100 г почвы.
Оборудование: ФЭК, кюветы с толщиной слоя 2 см, химические стаканы
на 100 мл, мерные колбы на 100 мл, мерные пипетки на 1 и 10 мл.
Реактивы: 0,02% свежеприготовленный раствор аскорбиновой кислоты,
соляная кислота HCl (разбавленная дистиллированной водой 1:1), алюминий
металлический Al,кислота уксусная ледяная CH3COOH, ацетат натрия CH3COONa,
запасной окрашивающий раствор (на технохимических весах взвешивают 326 г
ацетата натрия, растворяют его примерно в 800 мл дистиллированной воды,
добавляют мерным цилиндром 5 мл ледяной уксусной кислоты и хорошо
перемешивают; затем в полученной буферной смеси растворяют 1 г хромазурола-С,
после чего доводят объем раствора до 1 л дистиллированной водой, перемешивают
и оставляют до следующего дня; затем раствор отфильтровывают через бумажный
фильтр и хранят в склянке из темного стекла, его можно использовать в течение 3
мес.), рабочий окрашивающий раствор (берут 8 объемов запасного
окрашивающего раствора и разбавляют 92 объемами дистиллированной воды).

1.4.4. Определение гидролитической кислотности титрованием


Для определения гидролитической кислотности используют 1 н. раствор
ацетата натрия c рН=8,2. Поскольку при однократной обработке раствором вся
гидролитическая кислотность не извлекается, в расчеты вводят коэффициент 1,75
на неполноту вытеснения. В этом случае определяется вся почвенная кислотность
как актуальная, так и потенциальная.

Ход анализа
На технохимических весах берут навеску воздушно-сухой почвы массой 20 г,
переносят ее в колбу на 200 мл и приливают 50 мл 1 н. раствора ацетата натрия.
Содержимое колбы взбалтывают в течение 1 минуты и оставляют стоять до
следующего дня.
14
На следующий день содержимое еще раз взбалтывают в течение 1 минуты и
фильтруют через сухой складчатый фильтр. Первые мутные порции (10-15 мл)
фильтрата выбрасывают. Затем отбирают пипеткой 25 мл прозрачного фильтрата и
переносят в коническую колбу на 100 мл и титруют 0,1 н. раствором гидроксида
натрия до розовой окраски, не исчезающей в течение 1 минуты. Если фильтрат
окрашен, титрование проводят в присутствии «свидетеля» (колба с таким же
раствором), сравнивая его окраску с цветом титруемого раствора.

Расчет результатов
Результаты анализа осуществляют по формуле

H = V∙N∙1,75∙100/m, где

V- количество 0,1 н. щелочи, пошедшее на титрование, мл; N - нормальность


раствора гидроксида натрия; 100 - коэффициент пересчета на 100 г почвы; 1,75 -
поправка на полноту вытеснения ионов Н+; m - масса почвы, соответствующая
взятому для титрования объему фильтрата, г.
Оборудование: технохимические весы, колба коническая на 200 мл,
стеклянная воронка, фильтры, пипетка на 25 мл, колба для титрования на 100
мл, бюретка на 25 мл.
Реактивы: 1 н. раствор ацетата натрия рН=8,3-8,4 (136 г СН3СООNa∙3Н2О
растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды в мерной колбе на 1
л и доводят объем до метки; приготовленный раствор (проба с 20 мл) должен
давать с одной каплей фенолфталеина слабо-розовое окрашивание; в противном
случае реакцию среды доводят до требуемой величины добавлением 10%
раствора уксусной кислоты или 10% раствора гидроксида натрия; раствор
хранится не более 3 дней), 0,1 н. раствор гидроксида натрия NaOH, 1% спиртовой
раствор фенолфталеина.

1.4.5. Определение суммы поглощенных


оснований по Каппену-Гильковицу
Метод основан на вытеснении поглощенных оснований ионами Н+ при
взаимодействии почвы с 0,1 н. раствором соляной кислоты. Количество
перешедших в раствор обменных оснований определяют по разности между
количеством соляной кислоты, взятой для приготовления вытяжки, и соляной
кислоты, оставшейся после взаимодействия с почвой. Остаток кислоты
учитывают титрованием гидроксида натрия такой же концентрации.

Ход анализа
На технохимических весах берут навеску почвы в 20 г и помещают в колбу
емкостью 250 мл. Затем пипеткой или из бюретки приливают 100 мл 0,1 н. раствора
15
соляной кислоты, точно установленной концентрации. Колбу плотно закрывают
пробкой и взбалтывают в течение 1 часа на ротаторе и оставляют на 24 часа для
взаимодействия кислоты с почвой. По истечении этого срока суспензию хорошо
взбалтывают и фильтруют через сухой складчатый фильтр, перенося всю почву на
воронку. Первые мутные порции фильтрата выбрасывают.
Отбирают пипеткой 50 мл прозрачного фильтрата, переносят в
коническую колбу на 200-250 мл и кипятят 1-3 минуты. Прибавляют 2 капли
фенолфталеина и титруют горячий раствор 0,1 н. раствором гидроксида натрия
до неисчезающей в течение 1 мин слабо-розовой окраски.
Примечание: в случае выпадения осадка в процессе титрования ему дают
осесть и дотитровывают прозрачную жидкость над осадком до появления
слаборозового окрашивания.

Расчет результатов
Содержание обменных оснований рассчитывают по формуле

S = (V - V1)∙N∙V3∙100/(V2∙m), где

S - сумма обменных оснований, мэкв/100 г почвы; V - объем 0,1 н. раствора


гидроксида натрия, пошедшего на титрование 50 мл 0,1 н. раствора соляной
кислоты, взятого для приготовления вытяжки, мл; V1 - объем 0,1 н. раствора
гидроксида натрия, пошедшего на титрование 50 мл вытяжки, мл; N -
нормальность раствора гидроксида натрия; V3 - объем вытяжки, мл; 100 -
коэффициент пересчета результатов анализа на 100 г почвы; V2 - объем вытяжки
для титрования, мл; m - масса почвы для приготовления вытяжки, г.
Оборудование: технохимические весы, ротатор, электрическая плитка, 3
колбы конические на 250 мл, стеклянная воронка, фильтры, пипетки на 50 и 100
мл, бюретка на 25 мл.
Реактивы: 0,1 н. раствор соляной кислоты HCl, 1% спиртовой раствор
фенолфталеина, 0,1 н. раствор гидроксида натрия NaOH.

1.4.6. Определение кальция трилонометрическим методом


Метод основан на вытеснении обменных катионов раствором нейтральных
солей, не содержащих катиона Са2+, с последующим комплексонометрическим
титрованием кальция при рН=13 в присутствии индикатора мурексида.
Для выпадения в осадок магния из титруемого раствора создает
щелочную реакцию добавлением раствора гидроксида натрия. Влияние
марганца устраняют прибавлением гидроксиламина, препятствующего
образованию пероксида марганца, который мешает титрованию. Медь
связывают диэтилдитиокарбаматом натрия.
16
Ход анализа
На технических весах с точностью до 0,3 г взвешивают 30 г воздушно-
сухой почвы, переносят ее в бутылку вместимостью 250-500 мл и приливают 75
мл 1 н. раствора хлорида калия. Бутылку плотно закрывают каучуковой
пробкой и взбалтывают в течение 1 мин. Суспензию оставляют на 18-20 часов,
после чего фильтруют.
В химический стакан емкостью150-200 мл отбирают пипеткой 10 мл
фильтрата (при анализе проб почвы тяжелого механического состава) или 25 мл
(при анализе проб песчаных и супесчаных почв, а также сильнокислых почв с рНсол
≤4,5, содержащих обычно мало обменного кальция). Затем содержимое стакана
разбавляют дистиллированной водой примерно до 100 мл, ставят стакан на
магнитную мешалку, помещают в стакан магнитик, включают мешалку, приливают
к раствору 0,5 мл 5% раствора гидроксиламина, 2 мл 2 н. раствора гидроксида
натрия, несколько кристалликов диэтилдитиокарбамата натрия, 10-15 мг (на
кончике ножа) мурексида и титруют 0,05 н. раствором трилона Б до переход
пурпурной окраски в лиловую. При прибавлении избытка трилона Б окраска не
меняется, поэтому титрование проводят со «свидетелем» (заведомо
перетитрованной пробой). Одновременно проводят титрование приготовленной
холостой пробы, в которую добавлены все реактивы, за исключением испытуемого
фильтрата. Объем трилона Б, израсходованного на холостое титрование, вычитают
из результата титрования анализируемой пробы.

Расчет результатов
Содержание обменного кальция (в мэкв/100 г почвы) вычисляют по
формуле

Са = (V – V1)∙N∙V2∙100/(V3∙m), где

V - объем трилона Б, израсходованный на титрование анализируемой пробы


вытяжки, мл; V1 - объем трилона Б, израсходованный на титрование холостой
пробы, мл; V2 - объем приготовленной вытяжки, мл; V3 - объем вытяжки, взятый
для анализа, мл; N - нормальность раствора трилона Б; 100 - коэффициент
пересчета на 100 г почвы; m - масса почвы для анализа, г.
Оборудование: технические весы, магнитная мешалка, бутылка с пробкой на
250-500 мл, мерный цилиндр на 100 мл, стеклянная воронка, фильтры,
химический стакан емкостью 150-200 мл, мерные пипетки на 10, 25 мл, бюретка.
Реактивы: 1 н. раствор хлорида калия (75 г хлорида калия растворяют в
мерной колбе на 1 л в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят
объем о метки; полученный раствор должен иметь рН=5,6-6; если рН<5,6,

17
прибавляют 10% раствор гидроксида натрия, а при рН>6 прибавляют 10%
раствор соляной кислоты), 5% водный раствор гидроксиламина солянокислого
NH2OH∙HCl; 2 н. раствор гидроксида натрия NaOH, N,N-диэтилдитиокарбамат
натрия С5H10NS2Na∙3H2O, мурексид растертый с хлоридом калия в соотношении
1:20, 0,05 н. раствор трилона Б (готовят из стандарт-титра).

1.4.7. Определение обменного магния фотоколориметрическим методом


Гидроксид магния в щелочной среде при взаимодействии с титановым
желтым образует комплексное соединение ярко-розового цвета, интенсивность
окраски которого пропорциональна концентрации магния. Окрашиванию
мешают марганец, железо, алюминий, поэтому в раствор вводят гидроксиламин
и триэтаноламин. Для устранения коагуляции окрашенного комплекса
добавляют поливиниловый спирт или желатин, затем вытяжку
фотоколориметрируют.

Ход анализа
Отбирают 5 мл вытяжки (при анализе почв легкого механического состава:
песчаных и супесчаных) и 2 мл (суглинистые почвы) и переносят в коническую
колбу вместимостью 100 мл. Прибавляют мерным цилиндром 50 мл
окрашивающего раствора и перемешивают. Прибавляют гидроксиламин и
триэтаноламин для устранения мешающего влияния марганца, железа и алюминия.
При непрерывном перемешивании раствора прибавляют из бюретки 5 м 2 н.
раствора гидроксида натрия.
Измеряют оптическую плотность полученного окрашенного раствора на
приборе ФЭК, предварительно добавив к раствору поливиниловый спирт.
Измерение проводят не ранее чем через 5 мин и не позднее 2 часов после
добавления раствора гидроксида натрия. Если в качестве антикоагулянта
используют желатин, измерения проводятся не ранее 10 мин и не позднее 1
часа после прибавления раствора гидроксида натрия.
Оптическую плотность измеряют в кювете с толщиной слоя 3 см с желто-
зеленым светофильтром (λ=545 нм) против холостой пробы (раствор сравнения), не
содержащей магния (см. приготовление шкалы стандартных растворов). Раствор
сравнения в кювете заменяют на свежий через каждые 2 часа при использовании
поливинилового спирта или через каждый час при применении желатина.

Приготовление рабочей шкалы стандартных растворов магния


Готовят исходный стандартный раствор. Взвешивают на аналитических весах
0,663 г оксида магния с точностью до 0,001 г, предварительно доведенного до
постоянного веса прокаливанием в муфельной печи при 5000С, переносят навеску в
мерную колбу на 1 л. Затем приливают 10 мл 25% раствора соляной кислоты, после
18
растворения оксида магния приливают примерно 600 мл дистиллированной воды.
Добавляют в колбу 75 г хлорида калия и доводят объем дистиллированной водой
до метки. Хранят раствор в плотно закрытой склянке из химически устойчивого
стекла. Приготовленный раствор содержит 0,4 мг/мл.
Далее для приготовления рабочей шкалы отбирают мерной пипеткой
указанные в таблице 3 объемы исходного стандартного раствора и переносят в
мерные колбы на 100 мл, затем доводят в них объем до метки 1 н. раствором
хлорида калия. Из полученных растворов отбирают мерной пипеткой по 5 мл
(при анализе почв легкого механического состава: песчаных и супесчаных) или
2 мл (при анализе суглинистых почв) и переносят в конические колбы на 100
мл, прибавляют 50 мл окрашивающего раствора, содержимое перемешивают.
Проводят измерения оптической плотности растворов на ФЭК.
По результатам фотоколориметрирования строят калибровочный график.
Для хорошей воспроизводимости результатов важно все измерения
проводить одновременно, особенно необходимо в одно и то же время приливать
раствор титанового желтого.

Расчет результатов
Содержание обменного магния в анализируемой почве находят по
калибровочному графику и выражают в мэкв/100 г почвы или в мг/1 кг почвы,
обязательно вычитая результат холостого определения. При очень большом
содержании магния в анализируемой пробе почвы, когда показания выходят за
пределы шкалы, фотоколориметрирование повторяют, предварительно
разбавив вытяжку 1 н. раствором хлорида калия до требуемой концентрации.
Найденное после этого содержание магния увеличивают во столько раз, во
сколько раз была разбавлена вытяжка.
Определенное данным методом содержание магния может быть
использовано для характеристики поглощающего комплекса почвы и
определения потребности в магниевых удобрениях.
Если при анализе берут другие разведения, содержание магния в мг/кг почвы
находят по формуле

Мg = а∙V∙1000/(V1∙m), где

а - концентрация магния, найденная по калибровочному графику, мг/100 мл; V -


общий объем вытяжки, мл; 1000 - коэффициент пересчета на 1 кг почвы;V1 -
объем вытяжки, взятый для фотоколориметрирования, мл; m - масса почвы, г.

19
Таблица 3 – Приготовление рабочей шкалы для количественного определения
магния фотоколориметрическим методом
Объем исходного Содержание магния в почве
стандартного раствора

Концентрация
Mg, мг/100 мл
объем вытяжки
№ колбы

объем вытяжки 2 мл
Mg, мл 5 мл
объем объем
вытяжки вытяжки мг/кг мэкв/100 г мг/кг мэкв/100 г
2 мл 5 мл
1 0 0 0 0 0 0 0
2 2,5 1,0 0,02 25 0,206 10 0,082
3 5,0 2,0 0,04 50 0,412 20 0,165
4 7,5 3,0 0,06 75 0,618 30 0,247
5 10,0 4,0 0,08 100 1,030 40 0,329
6 12,5 5,0 0,10 125 1,030 50 0,412
7 15,0 6,0 0,12 150 1,230 60 0,494
8 20,0 8,0 0,16 200 1,650 80 0,658

Для перевода мг (Mg) в мэкв найденную величину делят на


эквивалентную массу магния.
Оборудование: ФЭК, кюветы с толщиной слоя 3 см, конические колбы
емкостью 100 мл - 9 шт., мерный цилиндр на 50 мл, бюретка, аналитические весы,
мерная колба на 1000 мл, муфельная печь, мерные колбы на 100 мл - 8 шт.
Реактивы: 5% раствор гидроксиламина солянокислого, триэтаноламин,
разбавленный дистиллированной водой (1:4), 2 н. раствор гидроксида натрия
NaOH, 25% раствор соляной кислоты HCl, хлорид калия KCl, оксид магния
MgO, окрашивающий раствор.

Приготовление окрашивающего раствора


Готовят 0,05% раствор титанового желтого: 0,5 г реактива с точностью до
0,01 г взвешивают и переносят в мерную колбу на 1 л, растворяют в небольшом
объеме дистиллированной воды и доводят объем до метки, тщательно
перемешивают и фильтруют через плотный фильтр (синяя лента), хранят раствор
в склянке из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике не более недели.
Готовят 1 н. раствор хлорида кальция следующим образом: взвешивают
109,54 г СаCl2∙6Н2О, переносят в мерную колбу на 1 л, растворяют
дистиллированной водой в половине объема и доводят объем водой до метки;
устанавливают концентрацию по трилону Б.
Готовят 2% раствор поливинилового спирта. Для этого 20 г поливинилового
спирта помещают в коническую колбу емкостью 1200-1500 мл, добавляют 1000 мл
дистиллированной воды, закрывают колбу каучуковой пробкой с клапаном Бунзена
20
и нагревают на кипящей водяной бане при периодическом помешивании до
полного растворения спирта. Если раствор мутный, его фильтруют. Полученный
раствор может быть использован в течение месяца с повторным фильтрованием.
0,5% раствор желатина готовят из питательного желатина в день проведения
анализа.
Окрашивающий раствор готовят в день проведения анализа следующим
образом: пипеткой отбирают 5 мл 1 н. раствора хлорида кальция в мерную
колбу на 1 л, доводят объем дистиллированной водой примерно до 600 мл,
затем добавляют 12 мл 5% раствора гидроксиламина, 25 мл триэтаноламина, 50
мл 0,05% титанового желтого, 5 мл 2% поливинилового спирта или 10 мл 0,05%
раствора желатина, тщательно перемешивают смесь после каждого реактива.

1.4.8. Количественное определение кальция и магния


комплексонометрическим методом в водной вытяжке
Метод основан на последовательном комплексонометрическом
титровании в одной пробе катионов Са2+ при рН 12,5-13 и катионов Мg2+ при
рН≈10 с использованием в качестве металлоиндикатора хрома кислотного
темно-синего.

Ход анализа
Отбирают пипеткой 10 мл анализируемой вытяжки в химический стакан
или в коническую колбу. Стакан или колбу помещают на магнитную мешалку и
при перемешивании приливают 50 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 5%
раствора гидроксиламина солянокислого, 2 мл 2н. раствора гидроксида натрия,
несколько кристаллов диэтилдитиокарбамата натрия и 5 капель 0,5% раствора
хрома темно-синего. Титруют Са2+ 0,05 н. раствором трилона Б до перехода
окраски от розовой к лиловой. Записывают объем трилона Б, израсходованного
на титрование. Затем нейтрализуют оттитрованный раствор соляной кислотой,
разбавленной 1:4, до перехода окраски в исходную (розовую) так, чтобы
избыток соляной кислоты не превышал 1-2 капель. Прибавляют 5 мл
аммиачного буферного раствора и продолжают титрование уже катиона Mg2+
0,05 н. раствором трилона Б до перехода окраски от розовой к синей.
Записывают общий объем трилона Б, израсходованный на титрование катионов
Са2+ и Mg2+. Таким же образом титруют холостую пробу.
Допускается увеличение или уменьшение объема пробы для анализа в
зависимости от предполагаемого содержания Са2+ и Mg2+ в анализируемой почве.
Для темно-окрашенных вытяжек допускается увеличение до 100 мл объема
дистиллированной водой, добавляемой к титруемой пробе.

21
Расчет результатов
Количество эквивалентов кальция или магния в анализируемой почве,
ммоль/100 г, вычисляют по формуле:
X = (V – V1)∙С∙500/V2, где

V - объем 0,5 н. раствора трилона Б, израсходованный на титрование Са2+ или


Mg2+, мл; V1 - объем раствора трилона Б, израсходованный на титрование Са2+ или
Mg2+ в холостой пробе, мл; С - концентрация раствора трилона Б; 500 -
коэффициент пересчета на 100 г почвы; V2 - объем пробы анализируемой
вытяжки, мл.
Массовую долю кальция в почве вычисляют по формуле:
X1 = C∙0,02, где
C - количество эквивалентов кальция в анализируемой почве, ммоль в 100 г;
0,020 - коэффициент пересчета в проценты.
Массовую долю магния в анализируемой почве вычисляют по формуле:
X2 = C∙0,0122, где
C - количество эквивалентов магния в анализируемой почве, ммоль в 100 г;
0,0122 - коэффициент пересчета в проценты.
Допускаемые относительные отклонения при доверительной вероятности
0,95 от среднего арифметического результата повторных анализов при
выборочном статистическом контроле составляют: 18% - для количества
эквивалентов кальция и магния свыше 1 до 2 ммоль в 100 г почвы; 14% - свыше
2 до 6 ммоль в 100 г почвы; 7% - свыше 6 ммоль в 100 г почвы.
Оборудование: мешалка магнитная; пипетки мерные на 1, 2, 10 мл;
стаканы химические на 150 мл или колбы конические на 250 мл; бюретка.
Реактивы: кислота соляная HCl, разбавленная дистиллированной Н2О 1:1 и
1:4, 2 н. раствор гидроксида натрия NaOH, 5% раствор гидроксиламина
солянокислого NH2OH∙НCl, диэтилдитиокарбамат натрия C5H10NS2Na, 0,1 н.
раствор сульфата магния MgSО4, индикатор хром кислотный темно-синий, 0,05 н.
раствор трилона Б C10H14O8N2Na2∙2H2O, этанол С2Н5ОН, разбавленный
дистиллированной водой 1:5; хлорид аммония NH4Cl; аммиак водный NH4OH.

Приготовление аммиачногобуферного раствора


20 г хлорида аммония, взвешенного с погрешностью не более 0,1 г,
переносят в мерную колбу на 1л, растворяют в 100 мл дистиллированной
водой, приливают 100 мл раствора гидроксида аммония и доводят объем

22
раствора до 1 л дистиллированной водой. Приготовленный раствор тщательно
перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой не более 2 мес.
Приготовление раствора индикатора
0,5 г хрома кислотного темно-синего, взвешенного с погрешностью не более
0,1 г, помещают в мерную колбу на 100 мл и растворяют в этаноле, разбавленном
дистиллированной водой 1:5, доводят объем раствора до метки. Раствор хранят в
темной склянке с притертой пробкой не более 2 мес.

Приготовление 0,1 н. раствора сернокислого магния


Готовят из стандарт-титра. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой
не более 1 года. В случае помутнения, образования хлопьев, осадка раствор
заменяют свежеприготовленным.

Приготовление 0,05н. раствора трилона Б


Готовят из стандарт-титра либо 9,3 г трилона Б, взвешенного с погрешностью
не более 0,1 г, помещают в мерную колбу на 1 л и растворяют в дистиллированной
водой, доводят объем раствора до метки. Приготовленный раствор тщательно
перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой не более 3 мес.
Точную концентрацию раствора трилона Б устанавливают титрованием по
0,1 н. раствору сульфата магния. Для этого 5 мл 0,1 н. раствора сульфата магния
отбирают пипеткой в химический стакан. Стакан помещают на магнитную
мешалку и при перемешивании приливают 50 мл дистиллированной воды, 5 мл
аммиачного буферного раствора, 5 капель раствора хрома кислотного темно-
синего и титруют 0,05 н. раствором трилона Б до перехода окраски от розовой к
синей. Титрование проводят до сходящихся результатов и для расчета точной
концентрации используют среднее арифметическое результатов титрований.
Точную концентрацию трилона Б вычисляют по формуле
Х = 0,1∙5/V, где
0,1 - концентрация раствора сульфата магния; 5 - объем раствора сульфата магния,
взятый для титрования, мл; V - объем раствора трилона Б, израсходованный на
титрование, мл.

1.5. Определение содержания питательных


веществ в почвах и потребности в удобрениях

1.5.1. Определение гумуса в почве по методу И.В. Тюрина (вариант ЦИНАО)


Определение гумуса имеет важное значение для агрохимической оценки
почвы. Гумус - важнейший показатель плодородия почвы и обеспеченности
растений азотным питанием. С его наличием связана поглотительная способность
почвы, водопроницаемость, влагоемкость.
23
Метод основан на окислении гумуса почвы раствором бихромата калия
К2Сг2O7 в H2SO4 с последующим фотоколориметрическим определением
трехвалентного содержания хрома, эквивалентного содержанию гумуса.
Реакция протекает по схеме:
3C+2K2Cr2O7+8H2SO4 =3CO2+2Cr2(SO4)3+2K2SO4+8H2O
По количеству израсходованного бихромата калия, пошедшего на
окисление гумуса, судят о его количестве.
При анализе полученных результатов необходимо учитывать, что
определение содержания гумуса по методу Тюрина дает несколько заниженные
показатели по сравнению с данными, полученными методом прямого сжигания
на анализаторе, что обусловлено спецификой самого метода (невозможно
удостовериться в полноте окисления исследуемого материала). Кроме того, на
начальном этапе добавления хромовой смеси на точность ее дозирования
оказывает влияние скорость истечения из бюретки. Не поддается унификации и
операция кипячения пробы, так как интенсивность нагрева зависит от вида
используемого нагревательного прибора. Погрешности могут возникать и при
титровании пробы. Занижение результатов, может быть обусловлено и
спецификой косвенного определения количества углерода по его окисляемости:
если окисляемость гумуса, определяемая структурой молекул гумусовых кислот,
по каким-либо причинам снижается, то и результат определения гумуса
оказывается заниженным.
Ход анализа
Пробу воздушно-сухой почвы, подготовленную для анализа, взвешивают на
аналитических весах с погрешностью не более 0,001 г. Масса пробы для анализа
зависит от содержания в ней гумуса: при содержании гумуса более 7% берут
навеску 0,05-0,1 г; при 4-7% - 0,1-0,2 г; при 2-4% - 0,25-0,35 г; менее 2% - 0,5-0,7 г.
Необходимо тщательно подготовить почву к анализу: в ней не должно быть
корней и органических остатков. Взвешенную почву переносят количественно в
пробирку, калиброванную на объем 50 мл. В нее и одновременно в 9 чистых
пробирок для приготовления рабочей шкалы растворов сравнения, установленных
в штатив, добавляют дозатором или из бюретки по 10 мл хромовой смеси.
В пробирки с жидкостью помещают стеклянные палочки и содержимое
перемешивают. Штатив с пробирками помещают в кипящую водяную баню и
выдерживают в ней в течение 1 часа с момента закипания воды в бане.
Пробирки помещают таким образом, чтобы хромовая смесь в пробирках
находилась на 3 см ниже уровня воды в бане. Содержимое пробирок
перемешивают стеклянными палочками через каждые 20 минут. Через час
штатив с пробирками вынимают из водяной бани и охлаждают под краном или в

24
бане с холодной водой. После этого в пробирки с почвой приливают по 40 мл
дистиллированной воды.
В пробирки для приготовления шкалы растворов сравнения приливают
раствор восстановителя (соль Мора) и дистиллированную воду в объемах,
указанных в таблице 4. Затем из пробирок вынимают стеклянные палочки, и
содержимое тщательно перемешивают барбатацией воздуха, нагнетаемого
резиновой грушей через стеклянную трубку. Пробирки оставляют стоять для
оседания частиц почвы и полного осветления.
После этого проводят фотоколориметрирование растворов шкалы
сравнения, а затем испытуемых растворов на ФЭК в кювете с толщиной слоя 1-2
см при λ=590 нм с оранжево-красным светофильтром. Испытуемый раствор в
кювету переносят осторожно, не взмучивая осадка на дне пробирки.

Таблица 4 - Объемы растворителя и воды для приготовления шкалы растворов


сравнения
Номер колбы 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Объем воды, мл 40 38 36 32 30 25 20 15 10
Объем раствора 0 2 4 8 10 15 20 25 30
восстановителя, мл
Масса гумуса,
соответствующая
0 1,03 2,07 4,14 5,17 7,76 10,30 12,90 15,50
количеству восстановителя
в растворе сравнения, мг

Расчет результатов
Сначала находят массу гумуса (в мг) в анализируемой пробе почвы по
калибровочному графику, который строят по результатам фотометрирования
растворов шкалы сравнения. Содержание гумуса (в %) рассчитывают по формуле

Г = M∙K∙100/m, где

М - масса гумуса в анализируемой почве, найденная по калибровочному графику;


К - поправка на концентрацию восстановителя; 100 - коэффициент пересчета в %;
M - масса пробы почвы, мг.
Расчет поправочного коэффициента осуществляют по результатам
титрования соли Мора 0,1 н. раствором перманганата калия по формуле

К = V1/V, где

V – объем раствора соли Мора, взятого для титрования, мл; V1 – объем 0,1 н.
раствора перманганата калия, израсходованный на титрование соли Мора, мл.
25
Допустимые отклонения от среднего арифметического повторных анализов:
при содержании гумуса до 5% - 20%, свыше 5% - 10%.
Оборудование: аналитические весы, ФЭК, кюветы с толщиной слоя 1-2 см,
пробирки объемом 50 мл - 10 шт., водяная баня, мерный цилиндр на 50 мл, мерные
пипетки на 10, 15, 20 мл, стеклянные палочки, стеклянная трубка, резиновая груша.
Реактивы: хромовая смесь, восстановитель - соль Мора (39,2 г соли Мора,
взвешенных с погрешностью не более 0,01 г, растворяют в 700 мл 0,5 М раствора
серной кислоты, раствор фильтруют через двойной складчатый фильтр в мерную
колбу на 1 л, доводят объем дистиллированной водой до метки; концентрацию
раствора проверяют каждые 3 дня по 0,1 н. раствору перманганата калия,
приготовленному из стандарт-титра - в колбу для титрования на 100 мл из
бюретки наливают 10 мл раствора соли Мора, добавляют 1 мл концентрированной
серной кислоты, добавляют до объема 40-50 мл горячей дистиллированной воды и
титруют 0,1 н. раствором перманганата калия до появления слабо-розовой
окраски, не исчезающей в течение 1 мин), 0,5 М раствор серной кислоты H2SO4.

1.5.2. Определение подвижных форм фосфора и калия в почве по методу


Кирсанова в модификации ЦИНАО
Общее количество фосфора в почвах колеблется от 0,01 до 0,2%. Большая
часть органических и минеральных соединений фосфора, находящихся в почве,
нерастворима в воде и недоступна для растений. В практике сельского хозяйства
под названием «подвижные соединения фосфора» понимают те почвенные
фосфаты, которые растворяются в воде и слабых кислотах и могут усваиваться
растениями.
Общее содержание калия в различных почвах колеблется в среднем от 1 до
8% в пересчете на К2О. Количество поглощенного калия составляет от 0,004 до
0,06% (4–60 мг на 100 г), а водорастворимого лишь 0,0001–0,002% (0,1–2 мг на 100
г почвы). Наиболее доступной формой калия являются его водорастворимые
соединения и поглощенный (обменный) калий. Поглощенный калий является
основным источником калийного питания растения, и содержание его в почве
служит показателем степени обеспеченности почвы усвояемым калием.
Для определения степени обеспеченности почвы подвижными формами
фосфора и калия существует несколько методов. Выбор метода определяется
степенью карбонатности и насыщенности почв основаниями.
Для кислых подзолистых и дерново-подзолистых почв широко
используется метод А.Г. Кирсанова.
Метод основан на извлечении фосфора и калия из почвы 0,2 М раствором
соляной кислоты при соотношении почвы к раствору 1:5 для минеральных почв и

26
1:50 для торфяных с последующим фотоколориметрическим определением
фосфора и пламенно-фотометрическим определением калия.

Ход анализа
На технохимических весах отвешивают 10 г сухой почвы, пропущенной
через сито с отверстиями 1 мм, помещают в колбу на 100 мл и заливают 50 мл
0,2 М раствора соляной кислоты. Содержимое колбы взбалтывают от руки или
на мешалке в течение 1 минуты и оставляют в покое на 15 минут, после чего
содержимое снова тщательно взбалтывают и фильтруют через складчатый
фильтр. Первые порции фильтрата отбрасывают. Извлечение фосфора и калия
из почвы проводят при температуре 18±30С.

Определение содержания подвижного фосфора


Для определения фосфора пипеткой отбирают 5 мл фильтрата, переносят
его в мерную колбу на 100 мл и добавляют до метки реактив Б. Через 10 мин
после окрашивания раствора определяют оптическую плотность раствора на
фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 5-10 мм относительно
раствора сравнения №1 при λ около 600-750 нм. Другую часть фильтрата
используют для определения калия.

Приготовление шкалы стандартных растворов


Первоначально готовят исходный стандартный раствор дигидрофосфата
калия: на аналитических весах взвешивают 0,1917 г дигидрофосфата калия с
точностью до 0,0001 г, переносят через воронку в мерную колбу на 1 л,
растворяют в 0,2 М растворе соляной кислоты и доводят объем в мерной колбе
до метки. Полученный раствор содержит 0,1 мг Р2О5 в 1 мл. Из этого раствора
готовят рабочую шкалу стандартных растворов следующим образом: в мерные
колбы на 500 мл мерной пипеткой отбирают указанные в таблице 5 объемы
исходного раствора и доводят их до метки 0,2 М раствором соляной кислоты.
Для построения градуировочного графика из каждой колбы рабочей шкалы
отбирают по 5 мл раствора и переносят в мерные колбы на 100 мл (шкала
сравнения). Окрашивание стандартных растворов шкалы сравнения проводится
аналогично окрашиванию почвенных вытяжек. Через 10 мин после окрашивания
проводят измерения оптической плотности данных растворов на ФЭК.
Строят градуировочный график: по оси абсцисс откладывают
концентрацию Р2О5 в мг/100 мл или в мг/кг почвы, по оси ординат - показания
оптической плотности.

27
Таблица 5 - Приготовление шкалы стандартных растворов для определения
фосфора
№ стандартного раствора
Показатель
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Объем исходного раствора

100

125

150

200

250
15

25

50

75
0

5
КН2РО4, мл

Концентрация Р2О5 в 100

0,005

0,015

0,025

0,075

0,100

0,125

0,15

0,20
0,05

0,25
мл растворов шкалы 0
сравнения, мг

Содержание Р2О5 в почве,

150

200
100

125

250
15

25

50

75
5
0

мг/кг

Расчет результатов
Содержание фосфора в исследуемой почве находят по градуировочному
графику непосредственно в мг/кг почвы или по формуле
P2O5 = C∙V∙1000/(V1∙m),
где С - концентрация Р2О5 (мг/100 мл), найденная по градуировочному графику;
V - общий объем фильтрата, мл; 1000 - коэффициент пересчета на 1 кг почвы;
m - масса почвы, г; V1 - объем фильтрата в колбе для колориметрирования, мл.
Допустимые расхождения результатов повторных определений при
содержании фосфора до 30 мг/кг почвы – 20%, от 30 до 60 мг – 15 и более 60 мг – 15%.
Реактивы: 0,2 М раствор соляной кислоты HCl, реактив А, реактив Б
(окрашивающий раствор).

Приготовление реактива А.
На технохимических весах взвешивают 6 г молибденовокислого аммония,
переносят в стакан и растворяют в 200 мл дистиллированной воды. На
аналитических весах взвешивают 0,155 г сурьмяно-виннокислого калия с
точностью до 0,01 г и растворяют в стакане в 100 мл дистиллированной воды. Оба
раствора готовят при слабом подогревании. После растворения солей растворы
охлаждают и приливают их к 500 мл 2,5М раствора серной кислоты,
предварительно помещенного в мерную колбу на 1 л. Раствор в колбе
перемешивают и доводят дистиллированной водой до метки. Реактив хранят в
склянке из темного стекла.

Приготовление реактива Б.
В день проведения анализа на аналитических весах взвешивают 1 г
аскорбиновой кислоты с точностью до 0,01 г и растворяют ее в 170 мл реактива
28
А, предварительно помещенного в мерную колбу на 1 л, доводят объем до
метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Определение содержания подвижного калия


Калий определяют непосредственно из приготовленной вытяжки, беря
аликвоту в стаканчик вместимостью 5-7 мл и фотометрируя ее на пламенном
фотометре при светофильтре, пропускающем аналитические линии калия при
λ=766,5 и λ=769,9 нм.

Приготовление рабочей шкалы стандартных растворов калия


Готовят исходный стандартный раствор. Для этого на аналитических
весах взвешивают 0,792 г хлорида калия с точностью до 0,001 г, переносят
навеску в мерную колбу на 1 л и растворяют ее в небольшом количестве 0,2 М
растворе соляной кислоты и доводят объем до метки. Полученный раствор
содержит 0,5 мг/мл К2О.
Из исходного стандартного раствора готовят рабочую шкалу растворов
сравнения для построения калибровочного графика (для калибровки пламенного
фотометра). С этой целью в 10 мерных колб на 250 мл отбирают пипеткой
указанные в таблице 6 объемы исходного стандартного раствора.

Таблица 6 - Приготовление рабочей школы стандартных растворов при


определении калия
Номер стандартного раствора
Показатель
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Объем
исходного
10

20

40

60

80
0

раствора КCl,
мл
Концентрация
К2 О
120,0

160,0
12,0

20,0

40,0

80,0

растворов
2,0

4,0

8,0
0

сравнения,
мг/1000 мл
Содержание
100

200

400

600

800

К2О в почве,
10

20

40

60
0

мг/кг

Растворы в колбах доводят до метки 0,2 М раствором соляной кислотой и


используют для калибровки пламенного фотометра.

29
Расчет результатов
Содержание калия в исследуемой почве находят по калибровочному
графику рабочей шкалы растворов сравнения непосредственно в мг/кг почвы
или рассчитывают по формуле

К2О = С∙V/m, где

C – концентрация К2О, найденная по калибровочному графику, мг/1000 мл; V –


объем вытяжки, мл; m – масса почвы для анализа, г.
Допустимые расхождения повторных определений: при содержании К2О
до 80 мг/кг почвы - 15%, свыше 120 мг - 10%.
Оборудование: ФЭК, пламенный фотометр, кюветы с толщиной слоя 5-10
мм, технохимические весы, стеклянные воронки, фильтры, коническая колба на
100 мл, мерная колба на 1000 мл, мерные колбы на 100 мл (21 шт.), пипетка
мерная на 5, 10, 20, 40, 50, 100 мл.

1.5.3. Определение нитратного азота


в почве ионометрическим экспресс–методом
Органический азот (азот гумуса) для растений непосредственно недоступен.
Поэтому об обеспеченности растений азотом судят по содержанию в почве
минерального азота – нитраты и аммиак. Нитратный азот наиболее легко
усваивается растениями, в связи с этим содержание его в почве является важным
показателем обеспеченности растений азотом.
Метод определения нитратного азота основан на измерении активности
нитрат-ионов ион-селективным электродом в солевой суспензии 1% раствора
алюмокалиевых квасцов при соотношении почва/раствор 1:2,5. Определение
нитратного азота возможно также в суспензии 0,05% раствора сульфата калия при
соотношении почва/раствор 1:2,5.Ион-селективный электрод используется для
определения нитратов во всех почвах, кроме засоленных.

Ход анализа
Пробу сухой почвы, просеянную через сито с отверстиями диаметром 2 мм,
и сырой почвы, просеянной через сито с диаметром отверстий 5 мм, массой 20 г
помещают в конические колбы на 100 мл, добавляют 50 мл 1% раствора
алюмокалиевых квасцов или 0,05% раствора сульфата калия и перемешивают в
течение 3 минут. В полученной суспензии измеряют активность нитрат-иона с
помощью нитратного ион-селективного электрода.

Подготовка мембранного электрода (ЭМ-NO3-01) к работе


Перед работой электрод заполняют 0,1 М раствором нитрата калия.
Электрод в течение 24 часов выдерживают в 0,1 М растворе нитрата калия.
30
Необходимо следить за уровнем раствора в электроде: он должен быть
постоянным. В нерабочее время нитратный мембранный электрод следует
хранить в растворе 0,001 М нитрата калия.

Измерение активности в рNO3


При работе на милливольтметре типа рН-340 ставят тумблер «Род
работы» в положение «рН», измерительный нитратный электрод подключают к
гнезду «ВСП», а вспомогательный хлорсеребряный электрод – к гнезду «ИЗМ»,
т.к. измеряется активность аниона NO3-, а прибор рассчитан на измерение
активности ионов Н+.
Перед началом работы, ежедневно, нитратный электрод помещают на 10
мин в дистиллированную воду, затем электроды сушат фильтровальной бумагой и
производят настройку прибора по трем стандартным растворам нитрата калия,
концентрация которых 0,0001 М; 0,001 М и 0,01 М; рNO3 этих растворов
соответственно равен 4, 3, 2.
Настройку прибора проводят не менее 2 раз в день, начиная с растворов
меньшей концентрации. После измерения активности растворов с большей
концентрацией иона электроды выдерживают 3-4 мин в дистиллированной воде.
Температура растворов должна быть одинаковой.
Настраивая рН-метр в единицах рNO3, пользуются ручками «Еи грубо» и
«Еи точно», а также температурным тумблером при рNO3, равном 4 и 3. Ручкой S
устанавливают величину рNO3, равную 2. Отсчеты показаний снимают по верхней
шкале в диапазоне 300 мВ, работая в необходимых пределах измерения,
соответствующих данной электродной паре.
Электроды перед погружением в анализируемые растворы каждый раз
тщательно обмывают дистиллированной водой, удаляя остатки фильтровальной
бумагой. Перемешав суспензию стеклянной палочкой, снимают показания
прибора в величинах рNO3. Показания прибора снимают в течение 1 мин в
вытяжке почвы, приготовленной на алюмокалиевых квасцах и 1,5 мин при
использовании 0,05% раствора сульфата калия.

Измерение активности нитрат-иона на иономере ЭВ-74


При измерении активности анионов NO3- составляется
электрохимическая цепь из стеклянного электрода с водородной функцией
ЭСЛ-43-07 и мембранного электрода ЭМ-NO3-01.
При измерении активности в величинах рNO3 включают клавишу
«Анионы/Катионы» и клавишу диапазона измерения рН=1-4, настраивают прибор
по двум стандартным растворам: рNO3=4/10-4 М раствор КNO3 - с помощью
резистора «Калибровка», рNO3=2/10-2 М раствор КNO3 - резистором «Температура
раствора». Когда замеряют величину рNO3, то нажимают клавишу «рХ», при
31
отключении цепи - клавишу «t». На стекле шкалы делают надпись восковым
карандашом слева направо 4, 3, 2, 1 рNO3 соответственно цифрам 0, 1, 2, 3 средней
шкалы прибора.
Когда измерение активности нитрат-иона ведут в мВ, нажимают клавишу
«мВ», включают диапазон измерения рН=1-4 и замеряют ЭДС (мВ) в стандартных
и исследуемых растворах. По величине рNO3 или ЭДС стандартных растворов
сравнения строят калибровочный график, по которому находят величину
концентрации анализируемого раствора.

Приготовление растворов сравнения нитрата калия


Из исходного раствора нитрата калия готовят 0,01 н. и 0,001 н. растворы. Из
них готовят стандартные растворы сравнения в мерных колбах на 100 мл, внося в
них с помощью мерной пипетки указанные в таблице 7 количества мл раствора
нитрата калия и доводя объем до метки 1% раствором алюмокалиевых квасцов.
Приготовленную шкалу используют для калибровки иономера.

Таблица 7 - Приготовление растворов сравнения нитрата калия


Номер колбы
Раствор
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
0,001 н.
раствор
10

30
5

-
КNO3, мл
0,01 н.
раствор
10

30

50

80
5

8
-

КNO3, мл
Концентрац
112,0
1,12

11,2

14,0

42,0

70,0

ия нитрат-
0,7

1,4

4,2

7,0

иона, мг/л

Расчет результатов
Содержание нитратного азота (N – NO3) в почве (в мг/кг) находят по
формуле

где

14 - атомная масса азота; V - объем экстрагирующего раствора, мл; m - масса


пробы почвы, г; рNO3 - отрицательный логарифм концентрации нитрат-ионов.
Оборудование: иономер или рН-метр, электроды ЭМ-NO3-01 и электрод
сравнения, стаканчик на 50 мл, технохимические весы, сито, коническая колба на
100 мл, цилиндр мерный на 50 мл, мерные колбы на 100 мл - 10 шт.

32
Реактивы: 1% раствор алюмокалиевых квасцов Al2(SO4)3∙K2SO4∙24H2O, 0,1
н. раствор нитрата калия KNO3 (на аналитических весах с точностью до 0,01 г
взвешивают 10,11 г нитрата калия, предварительно перекристаллизованного и
высушенного при температуре 100-1050С до постоянной массы, переносят в
мерную колбу на 1 л, растворяют в небольшом количестве 1% раствора
алюмокалиевых квасцов и доводят объем этим же растворителем до метки).

1.5.4. Определение аммиачного азота фотоколориметрическим методом


Помимо нитратного азота растения при определенных условиях легко
могут усваивать и аммонийный азот. Основная часть аммонийного азота
находится в почве в поглощенном, обменном состоянии, поэтому определение
его содержания проводят в водно-солевых вытяжках.
Метод определения аммонийного азота основан на вытеснении катионов
аммония из почвы 1 М раствором хлорида калия при соотношении почва/раствор
- 1:2,5 с последующим фотоколориметрическим определением аммония в виде
окрашенного индофенольного соединения, образующегося в щелочной среде
при взаимодействии аммония с гипохлоритом и салицилатом натрия.

Ход анализа
На технических весах взвешивают навеску почвы массой 30 г с точностью
до 0,1 г, помещают ее в коническую колбу на 150 мл и добавляют мерным
цилиндром 75 мл 1 М раствора хлорида калия. Содержимое колбы перемешивают
в течение 1 мин и оставляют на 18-20 часов. Затем суспензию снова
перемешивают и фильтруют. В коническую колбу на 100 мл пипеткой отбирают
2,5 мл фильтрата, прибавляют 45 мл рабочего окрашивающего реактива и 2,5 мл
рабочего раствора гипохлорита натрия. Содержимое колбы перемешивают и
оставляют на 1 час для развития окраски. Окрашенные растворы
фотоколориметрируют в кювете с толщиной слоя 1 см при λ=655 нм (красный
светофильтр). Измерение оптической плотности заканчивают не позднее чем
через 2,5 часа после прибавления рабочего раствора гипохлорита натрия.

Приготовление рабочей шкалы


растворов сравнения
Вначале готовят исходный стандартный раствор. На аналитических весах
взвешивают 0,382 г хлорида аммония с точностью до 0,0012 г, переносят в
мерную колбу на 1 л и растворяют в 1 М растворе хлорида калия, затем доводят
этим же раствором объем до метки. Приготовленный раствор содержит 0,1 г N –
NH4 в 1 мл. Затем готовят шкалу растворов сравнения: в 8 мерных колб на 250 мл
переносят пипеткой или наливают с помощью бюретки исходный стандартный
33
раствор в количестве, указанном в таблице, и доводят объем до метки 1 М
раствором хлорида калия.

Построение калибровочного графика


Из каждой колбы шкалы растворов сравнения отбирают пипеткой 2,5 мл
раствора в мерную колбу на 100 мл, добавляют 45 мл рабочего окрашивающего
раствора и 2,5 мл рабочего раствора гипохлорита натрия, смесь перемешивают и
оставляют на 1 час для развития окраски. Далее измеряют оптическую плотность
окрашенных растворов на ФЭК при красном светофильтре (λ=655 нм). По
результатам измерений строят градуировочный график.

Расчет результатов
Содержание азота (в мг/кг почвы) находят по калибровочному графику,
построенному по шкале стандартных растворов (см. таблицу 8) или по
формуле, если при анализе используют другие разведения:

N-NH4 = a∙V∙1000/(V1∙m), где

а - содержание азота по калибровочному графику, мг; V - общий объем вытяжки,


мл; 1000 – коэффициент пересчета на 1 кг почвы; V1 - объем вытяжки для
колориметрирования, мл; m - масса почвы, г.

Таблица 8 - Шкала для определения N – NH4 фотоколориметрическим методом


№ бюкса
Показатель
1 2 3 4 5 6 7 8
Объем исходного
стандартного
10

20

30

40

50

60
0

раствора, мл
Содержание N –
NH4, мг/50 мл
0,005

0,010

0,020

0,030

0,040

0,050

0,060
0

(шкалы растворов
сравнения)
Содержание N –
NH4, мг на 1 кг
10

20

30

40

50

60
0

почвы

Оборудование: технические и аналитические весы, ФЭК, кюветы с


толщиной слоя 1 см, коническая колба на 150 мл, мерный цилиндр на 100 мл,
мерные пипетки на 5 мл, мерная колба на 1 л, мерные колбы на 250 мл - 8 шт.,
бюретка, конические колбы на 100 мл - 9 шт.

34
Реактивы: 1 М раствор хлорида калия KCl, запасной окрашивающий реактив
(56,7 г салицилата натрия С7Н6О3Na2∙2H2O, 16,7 г сегнетовой соли С4О6Н4КNa∙4H2O
и 26,7 г NaOH растворяют в 600-700 мл дистиллированной воды в химическом
стакане и кипятят раствор 20 мин для удаления аммония, охлаждают и добавляют
0,4 г нитропруссида натрия, переносят в мерную колбу на 1 л и доводят объем
водой до метки; реактив хранят в темной посуде в холодильнике в течение
нескольких месяцев), рабочий окрашивающий раствор (в мерную колбу на 1 л
переносят 125 мл запасного окрашивающего раствора и 125 мл 2 М раствора
гидроксида натрия, прибавляют 2 г трилона Б и доводят объем до метки
дистиллированной водой; содержимое колбы взбалтывают до полного растворения
трилона Б), раствор гипохлорита натрия NaClO (в стакан на 500 мл помещают 150 г
хлорной извести и 250 мл дистиллированной воды, перемешивают; в другом
стакане в 250 мл воды растворяют 150 безводного карбоната натрия; затем
растворы сливают при постоянном перемешивании; полученную суспензию
оставляют на 1-2 суток, затем отфильтровывают, хранят в темной склянке в течение
года. Полученный раствор содержит активного хлора около 6-10%), известь
хлорная техническая, кислота соляная концентрированная.
Примечание: перед использованием раствора гипохлорита натрия
определяют концентрацию активного хлора. Для этого в коническую колбу на
100 мл отбирают 1 мл реактива, разбавляют дистиллированной водой до 40-50
мл, прибавляют 2г иодида калия и 10 мл 1 М раствора соляной кислоты.
Образовавшийся иод оттитровывают 0,1 М раствором тиосульфата натрия
(приготовленного из стандарт-титра 0,1н.) до исчезновения желтой окраски; 1
мл раствора Na2S2O3∙5H2O соответствует 0,00355 г хлора. Исходный раствор
гипохлорита натрия разбавляют до концентрации 0,125% дистиллированной
водой и используют в день приготовления.

1.5.5. Определение аммиачного азота реактивом Несслера


Аммонийный азот находится в почве в форме поглощенного (обменного)
катиона и в виде водорастворимых солей. Его извлекают обработкой почвы 1 н.
раствором хлорида калия и определяют колориметрически. Колориметрическое
определение основано на взаимодействии катионов NН4+ с реактивом Несслера,
при котором образуется йодистый меркураммоний, окрашенный в желтый цвет:
NH4OH + 2K2HgI4 + 3КОН = NH2Hg2OI + 7KI + ЗН2O.
Для связывания катионов Са2+ и Мg2+, которые также переходят в раствор
и мешают определению, к раствору прибавляют сегнетовую соль
(KNaC4H4O6∙4Н2О).

35
Ход анализа
Навеску свежей почвы, соответствующую 10–50 г сухой почвы, помещают в
коническую колбу на 250-500 мл и заливают 10-кратным количеством 1 н. раствора
хлорида калия с учетом воды, уже содержащейся в почве. Содержимое колбы
взбалтывают 5 минут и оставляют на ночь. Длительное отстаивание можно заменить
часовым взбалтыванием на ротаторе. Затем содержимое колбы фильтруют через
складчатый фильтр, предварительно промытый раствором хлорида калия для
очистки от аммиака, и, если фильтрат прозрачен и бесцветен, приступают к
колориметрическому определению катиона NН4+. Вначале проводят качественную
пробу на содержание катиона NН4+ в вытяжке. В пробирку берут 5 мл фильтрата,
прибавляют 2 капли сегнетовой соли и 2 капли реактива Несслера. Раствор должен
окраситься в чисто желтый цвет. Если окраска становятся желто-бурой или выпадает
осадок, вытяжку разбавляют и записывают разбавление, после чего повторяют
качественную пробу. Подобрав нужную концентрацию вытяжки, берут от 5 до 40 мл
ее в мерную колбу на 50 мл и разбавляют водой до 40 мл, после чего прибавляют 2
мл сегнетовой соли и хорошо перемешивают содержимое колбы.

Приготовление стандартного раствора катиона NH4+


Растворяют в дистиллированной воде 0,7405 г хлорида аммония и
доводят объем водой до 1 л. Отбирают пипеткой 10 мл этого раствора в мерную
колбу на 500 мл и доводят водой до метки. Этот стандартный раствор содержит
0,005 NH4+ (или 0,0039 мг N) в 1 мл.

Приготовление шкалы стандартных растворов


В мерные колбы вместимостью 50 мл берут пипеткой 1, 5, 10, 15 и 20 мл
стандартного раствора, разбавляют водой до 40 мл и прибавляют 2 мл раствора
KNaC4H4O6∙4Н2О, хорошо размешивая ее со стандартным раствором. Затем во
все колбы прибавляют по 2 мл реактива Несслера, доводят содержимое колб до
метки и снова тщательно перемешивают растворы. Через 2-3 минуты
колориметрируют испытуемый и стандартные растворы.

Расчет результатов
По калибровочному графику находят концентрацию катиона аммония,
соответствующую измеренному значению оптической плотности, и вычисляют
содержание NН4+ в мг/100 г сухой почвы по формуле

Х (мг/100 г) = a∙V∙100∙K/(b∙c), где

а - содержание NH4+ в 50 мл, найденное по градуировочной кривой, мг; V -


общее количество 1 н. раствора хлорида калия, взятое для приготовления
вытяжки, мл; b - объем испытуемого раствора, взятый для определения, мл; с -
36
навеска почвы, г; 100 - коэффициент для пересчета на 100 г почвы; K -
коэффициент пересчета на сухую почву.
Оборудование: технические весы, ФЭК, кюветы, коническая колба на 250-
500 мл, стеклянная воронка, фильтры, пробирка на 16-20 мл, мерные колбы на
50 мл - 6 шт., мерная колба на 1000 мл и на 500 мл, мерные пипетки на 5, 10 мл.
Реактивы: 1 н. раствор хлорида калия, реактив Несслера, раствор
сегнетовой соли.

1.6. Определение подвижных форм микроэлементов в почве


Применение микроудобрений приобретает все большее значение как
эффективное средство повышения урожая сельскохозяйственных культур и
улучшения его качества, что требует в свою очередь систематического определения
подвижных форм микроэлементов в почвах.

1.6.1. Определение меди


Извлечение меди из почвы
Метод основан на извлечении подвижной меди из некарбонатных и
малокарбонатных почв Нечерноземной зоны, красноземов 1 М соляной кислоты
(по Пейве и Ринькинсу). Отношение почвы к раствору 1:10. Взбалтывают
суспензию на ротаторе в течение 1 ч.
Оборудование: мерные цилиндры или дозаторы на 50 мл, банки бытовые
или молочные бутылки вместимостью 200 мл, кассеты под банки или бутылки,
ротатор, фильтры беззольные с белой лентой диаметром 15 см, предварительно
очищенные от следов меди.
Реактивы: 1 М соляная кислота НСl.

Приготовление вытяжки
Взвешивают почву массой 5 г с погрешностью не более 0,1 г и помещают в
банку или бутылку, установленную в кассете. К пробе добавляют 50 мл 1 М
соляной кислоты и взбалтывают суспензию на ротаторе в течение 1 ч (пробки на
бутылках должны быть обернуты полиэтиленовой пленкой). Вытяжку фильтруют
через складчатый фильтр, отмытый от микроэлементов. Первую мутную порцию
фильтрата отбрасывают. Одновременно ставят холостой опыт, проводя его через
все стадии. Данную вытяжку можно использовать для атомно-абсорбционного и
фотометрического методов анализа.

Фотометрический метод определения меди


с использованием диэтилдитиокарбамата свинца
Метод основан на получении окрашенного комплекса меди с
диэтилдитиокарбаматом свинца, экстракции его четыреххлористым углеродом и
37
фотометрировании экстракта. Железо, марганец и некоторые другие
микроэлементы не образуют окрашенных комплексов с диэтилдитиокарбаматом
свинца. Только медь при взаимодействии с этим реагентом образует прочный
желто-коричневый комплекс. Экстракцию проводят в слабокислой среде, что
обеспечивает получение прозрачных экстрактов. Измерение оптической плотности
полученного комплекса проводят при λ=436 нм.

Подготовка к анализу
Готовят раствор диэтилдитиокарбамата свинца (см. фотометрический
метод определения меди в растениях, см. 2.16.1.).
Готовят маскирующий раствор, смешивая 750 мл 20% раствора ацетата
натрия и 250 мл 10% раствора цитрата натрия.
Готовят запасной стандартный раствор меди следующим образом: 3,929 г
пятиводного сульфата меди переносят в мерную колбу на 1 л, растворяют в
дистиллированной воде, содержащей 1 мл концентрированной серной кислоты, и
доводят объем дистиллированной водой до метки. Полученный раствор,
содержащий 1 г/мл меди, хранят 1 год. Промежуточный стандартный раствор
меди (раствор Б) готовят так: в мерную колбу на 100 мл наливают 10 мл запасного
стандартного раствора А и доводят объем до метки 1 М соляной кислотой.
Полученный раствор, содержащий 100 мкг/мл меди, хранят 3 мес. В день
проведения анализа готовят рабочий стандартный раствор меди (раствор В): в
мерную колбу на 50 мл помещают 5 мл раствора Б и доводят объем до метки 1 М
соляной кислотой. Полученный раствор содержит 10 мкг/мл меди.

Ход анализа
В делительную воронку переносят 10 мл вытяжки почвы, добавляют 10 мл
маскирующего раствора. Содержимое воронки перемешивают, приливают по 5 мл
раствора диэтилдитиокарбамата свинца в четыреххлористом углероде. Содержимое
воронки встряхивают 2 мин. После разделения фаз нижний слой
четыреххлористого углерода сливают в кювету с толщиной просвечиваемого слоя 2
см и фотометрируют при λ=436 нм (синий светофильтр) относительно
четыреххлористого углерода. Если объем экстракта не заполняет полностью
кювету, то объем анализируемого раствора и всех реактивов увеличивают в 2 раза.
Если значение оптической плотности анализируемой вытяжки превышает значение
для последнего раствора сравнения, то вытяжку разбавляют 1М соляной кислотой.
Приготовление шкалы образцовых растворов и построение градуировочного
графика. В день проведения анализа в 7 мерных колб на 50 мл помещают объемы
раствора В, указанные в таблице 9. Объемы растворов доводят до метки 1М
соляной кислотой. Из полученных растворов сравнения берут по 10 мл и переносят
в делительные воронки. Далее анализ проводят, как анализ почвенных образцов. По
38
результатам фотометрирования строят градуировочный график. На оси абсцисс
откладывают массовую концентрацию меди в растворе сравнения в пересчете на
массовую долю меди в почве (млн-1, мг/кг почвы), а на оси ординат - значение
оптической плотности.

Таблица 9 - Приготовление шкалы образцовых растворов для фотометрического


определения меди в почве
№ раствора Объем Массовая Массовая концентрация меди в растворе
сравнения раствора концентрация меди в сравнения в пересчете на массовую долю
Б, мл растворе сравнения, меди в почве, млн-1 (мг/кг)
мкг/мл
1 0 0 0
2 0,5 0,10 1,0
3 1,0 0,20 2,0
4 2,0 0,40 4,0
5 3,0 0,60 6,0
6 4,0 0,80 8,0
7 5,0 1,00 10,0

Используя градуировочный график, находят массовую концентрацию меди в


почве (млн-1, мг/кг почвы) по формуле

Х = С∙V/m, где
С - концентрация меди, найденная по градуировочному графику, мг/1000 мл; V -
объем вытяжки, мл; m - масса почвы для приготовления вытяжки, г.
При анализе торфяных почв объем вытяжки увеличивают до 20 мл,
переносят ее в стакан из термостойкого стекла, добавляют 2 мл
концентрированной соляной кислоты, 2 мл концентрированной перекиси
водорода. Содержимое упаривают на водяной бане до получения влажного
остатка. Такую обработку остатка повторяют до тех пор, пока окраска не
станет светло-желтой. Полученный остаток растворяют при нагревании в 10
мл соляной кислоты, разбавленной дистиллированной водой 1:100. Раствор
переносят в делительную воронку, приливают 5 мл маскирующего раствора и
далее анализ: проводят аналогично анализу почв. Для приготовления шкалы
образцовых растворов см. табл. 9.
Оборудование: ФЭК, весы технохимические и аналитические, воронки
делительные на 100 и 200 мл, колбы мерные на 100 и 500 мл, пипетки или
дозаторы на 10, 20 мл, бюретки на 50 и 100 мл, пипетки на 1, 5, 10 и 20 мл.
Реактивы: углерод четыреххлористый, диэтилдитиокарбамат натрия,
нитрат свинца Pb(NO3)2, 0,02% раствор дитизона (дифенилтиокарбазона), медь
сернокислая пятиводная CuSO4∙5H2O, 1 М раствор соляной кислоты HCl и
39
соляная кислота, разбавленная водой 1:100 по объему, 10% раствор
трехзамещенного цитрата натрия, 20% раствор ацетата натрия CH3COONa,
вода дистиллированная.

1.6.2. Определение марганца


Извлечение марганца из почвы
Метод основан на извлечении подвижного марганца из некарбонатных
и малокарбонатных почв Нечерноземной зоны, красноземов 0,1 н. серной
кислотой (по Пейве и Ринькису). Отношение почвы к раствору 1:10.
Взбалтывают на ротаторе 1 ч.

Приготовление вытяжки
Взвешивают почву массой 5 г с погрешностью не более 0,1 г и помещают в
банку или бутылку, установленные в кассете. К пробе приливают 50 мл 0,1 н.
серной кислоты и взбалтывают суспензию на ротаторе в течение 1 ч (пробки на
бутылках должны быть обвернуты полиэтиленовой пленкой). Вытяжку
фильтруют через складчатый фильтр, отмытый от следов микроэлементов.
Первую мутную порцию фильтрата отбрасывают. Необходимо одновременно
ставить холостой опыт, проводя его через все стадии анализа.
Оборудование: такое же, как и при определении меди.
Реактивы: титрованный 0,1 н. раствор серной кислоты H2S04.

Фотометрический метод определения марганца


с использованием формальдоксима
Метод основан на получении окрашенного комплекса марганца с
формальдоксимом и измерении оптической плотности раствора. Для
образования окрашенного комплекса марганца необходима щелочная реакция
среды, которую создают с помощью аммиачного буферного раствора. Разрушая
комплекс железа с формальдоксимом с помощью аскорбиновой кислоты и
трилона Б, устраняют влияние железа.

Подготовка к анализу
Готовят запасной раствор формальдоксима: в мерную колбу на 1 л
помещают около 700 мл дистиллированной воды, добавляют 123 г
солянокислого гидроксиламина, 172 мл 37% формалина и доводят объем до
метки дистиллированной водой. Полученный раствор хранят в закрытой склянке
до 1 мес.

40
В день проведения анализа готовят рабочий раствор формальдоксима: к
200 мл запасного раствора формальдоксима добавляют 800 мл
дистиллированной воды и раствор перемешивают.
Готовят запасной аммиачный буферный раствор: в мерную колбу на 1 л
помещают 68 г хлорида аммония и 570 мл 25% водного раствора аммиака,
доводят объем до метки дистиллированной водой. Для приготовления рабочего
аммиачного буферного раствора к 100 мл запасного аммиачного буферного
раствора добавляют 900 мл дистиллированной воды и тщательно перемешивают.
В день проведения анализа готовят маскирующий раствор: в 500 мл 3%
раствора трилона Б растворяют 4 г аскорбиновой кислоты.
Запасной стандартный раствор марганца А готовят так: в мерную колбу на 1
л помещают 4,338 г пятиводного сульфата марганца, доводят объем до метки
дистиллированной водой. Полученный раствор, содержащий 1 мг/мл марганца,
хранят не более 1 года.
Рабочий стандартный раствор марганца Б готовят следующим образом: в
мерную колбу на 100 мл помещают 25 мл раствора А. Объем до метки доводят
0,1 н. серной кислотой. Полученный раствор, содержащий 250 мкг/мл
марганца, хранят не более 3 мес.
В день проведения анализа в мерные колбы на 50 мл помещают указанные в
таблице 10 объемы рабочего стандартного раствора Б.
Объемы до метки доводят 0,1 н. серной кислотой.
По результатам фотометрирования образцовых растворов строят
градуировочный график. На оси абсцисс откладывают массовую концентрацию
марганца в почве (млн-1, мг/кг), соответствующую образцовому раствору, на оси
ординат - значение оптической плотности.

Таблица 10 - Приготовление шкалы образцовых растворов для


фотометрического определения марганца в почве

Массовая концентрация
раство Массовая концентрация
Объем раствора Б, марганца в растворе сравнения
ра марганца в растворе
мл в пересчете на массовую долю
сравне сравнения, мкг/мл
марганца в почве, млн-1 (мг/кг)
ния
1 0 0 0
2 1 1 10
3 2 2 20
4 5 5 50
5 10 10 100
6 15 15 150
7 20 20 200

41
Ход анализа
В сухую коническую колбу на 100 мл помещают 5 мл вытяжки из почвы,
приливают 10 мл рабочего раствора формальдоксима и 30 мл рабочего
аммиачного буферного раствора. После добавления каждого реактива содержимое
колбы тщательно перемешивают. Колбу оставляют на 5 мин для полного развития
окраски формальдоксимата марганца. После этого добавляют 5 мл маскирующего
раствора и перемешивают. Через 10 мин после полного разрушения,
формальдоксимата железа, раствор фотометрируют при λ=490 нм (сине-зеленый
светофильтр) в кювете с толщиной просвечивающего слоя 1 см относительно
дистиллированной воды. Так как окраска формальдоксимата марганца
ослабляется, его фотометрируют не позже чем через 30 мин после добавления
маскирующего раствора. Используя градуировочный график, находят массовую
концентрацию марганца в почве (млн-1, мг/кг).
Оборудование: ФЭК, весы технохимические и аналитические, колбы
конические на 100 мл, пипетки или дозатор на 5 и 20 мл, бюретки или дозатор
на 5, 10 и 30 мл, колбы мерные на 50, 100 и 1000 мл.
Реактивы: аскорбиновая кислота, формалин технический 37%, аммиак
водный NH4OH, гидроксиламин солянокислый, хлорид аммония NH4Cl, 3%
раствор трилона Б, пятиводный сульфат марганца MnSO4∙5H2O, сульфит натрия
Na2SO3, 0,1 н. раствор серной кислоты H2S04, вода дистиллированная.

1.6.3. Определение кобальта

Извлечение кобальта из почвы


Метод основан на извлечении раствором 1 н. азотной кислоты подвижного
кобальта из некарбонатных и малокарбонатных почв Нечерноземной зоны,
красноземов (по Пейве и Ринькису в модификации ЦИНАО). Отношение почвы к
раствору 1:10 для минеральных почв, 1:20 для торфяных почв. Суспензию
взбалтывают на ротаторе 1 ч.

Подготовка к анализу
Для получения препарата с массовой долей основного вещества
(100±0,2%), отвечающего формуле Na2B407∙10Н20, проводят его
перекристаллизацию. Для этого 100 г кристаллогидрата растворяют в 550 мл
воды при температуре 50-60°С, фильтруют и охлаждают до 20-30°С, энергично
перемешивают. Полученные кристаллы отфильтровывают и подвергают
вторичной перекристаллизации. Затем кристаллы высушивают между солями
фильтровальной бумаги до постоянной массы. Перекристаллизованный
десятиводный тетраборат натрия хранят в эксикаторе.

42
Готовят точно 1М раствор азотной кислоты: 67,2 мл концентрированной
азотной кислоты переносят в мерную колбу на 1 мл, заполненную
дистиллированной водой. Объем до метки доводят дистиллированной водой.
Концентрацию полученного раствора кислоты устанавливают по десятиводному
тетраборату натрию. Берут 3-4 навески по 6-8 г перекристаллизованного
тетрабората натрия, переносят, в конические колбы и растворяют в 50-100 мл
теплой (50-60°С) дистиллированной воды. Охлаждают раствор до комнатной
температуры, добавляют 3-4 капли метилового красного и титруют раствором
азотной кислоты до перехода желтой окраски в розовато-оранжевую.
Концентрацию приготовленной азотной кислоты (моль/л) рассчитывают
по формуле

С = М∙1000/(190,68∙V), где

М - навеска тетрабората натрия, г; 190,68 - молекулярная масса эквивалента


тетрабората натрия, г/моль; V - объем раствора азотной кислоты на титрование, мл.
Концентрацию определяют по нескольким навескам, берут среднее
значение. Допустимая концентрация азотной кислоты от 0,99 до 1,01 моль/л.

Приготовление вытяжки
Взвешивают почву массой 5 г и помещают в банку или бутылку,
установленную в кассете. К пробе приливают 50 мл 1 М азотной кислоты (или
100 мл для торфяных почв) и взбалтывают суспензию на ротаторе в течение 1
ч, пробки на бутылках должны быть обернуты полиэтиленовой пленкой.
Вытяжку фильтруют через складчатый фильтр, отмытый от следов
микроэлементов. Первую мутную порцию фильтрата отбрасывают.
Одновременно ставят холостой опыт, проводя его через все стадии анализа.
Данную вытяжку можно использовать для атомно-абсорбционного и
фотометрического методов определения кобальта в почве.
Оборудование: колбы конические на 100 мл, ротатор, фильтровальные
установки, дозатор или цилиндр на 50 и 100 мл, воронки стеклянные для
фильтрования, фильтры беззольные с белой лентой, эксикатор.
Реактивы: кислота азотная концентрированная HNO3, бромид натрия
NaBr, тетраборат натрия 10-водный Na2B407∙10Н20, 0,1% раствор индикатора
метилового красного.

Фотометрическое определение кобальта с


использованием 2-нитрозо-1-нафтола (нитрозо-Р-соль)

Метод основан на получении окрашенного комплекса кобальта с 2-


нитрозо-1-нафтолом (нитрозо-Р-соль) и измерении оптической плотности
43
раствора на ФЭК. С целью минерализации органических веществ вытяжку
перед окрашиванием концентрируют. Для этого ее выпаривают и обрабатывают
окислителями. С помощью цитрата устраняют влияние двухвалентного железа.
Окрашенные соединения трехвалентного железа и меди с нитрозо-Р-солью
разрушают смесью азотной и фосфорной кислот.

Подготовка к анализу
Готовят запасной стандартный раствор кобальта (раствор А): на 1 л
бидистиллированной воды 4,769 г семиводного сернокислого кобальта.
Полученный раствор содержит 1 мг/мл кобальта.
Готовят рабочий стандартный раствор кобальта (раствор Б): в мерную
колбу на 100 мл помещают 10 мл раствора А, объем до метки доводят соляной
кислотой, разбавленной 1:100. Раствор хранят до 3 мес. Полученный раствор
содержит 100 мкг/мл кобальта.
Готовят раствор В: в мерную колбу на 100 мл помещают 25 мл раствора Б.
Объем до метки доводят соляной кислотой, разбавленной 1:100. Полученный
раствор содержит 25 мкг/мл кобальта.
В день проведения анализа готовят окрашивающий раствор, смешивая в
соотношении 1:1:1 растворы 20% цитрата натрия, 40% ацетата натрия (аммония) и
0,1% нитрозо-Р-соли.
В день проведения анализа в мерные колбы на 50 мл помещают
указанные в таблице 11 объемы раствора В.

Таблица 11 - Приготовление шкалы образцовых растворов для


фотометрического определения кобальта в почве
№ Объем Массовая концентрация Массовая концентрация кобальта в
раство раствора В, кобальта в растворе растворе сравнения в пересчете на
ра мл сравнения, мкг/мл массовую долю кобальта в почве,
сравне млн-1 (мг/кг)
ния
1 0 0 0
2 0,5 0,25 0,5
3 1,0 0,5 1,0
4 2,0 1,0 2,0
5 3,0 1,5 3,0
6 4,0 2,0 4,0
7 5,0 2,5 5,0

Доводят объем до метки соляной кислотой, разбавленной 1:100,


перемешивают.

44
Ход анализа
Для построения градуировочного графика из приготовленной шкалы
образцовых растворов берут по 5 мл пробы и помещают в стаканы. К пробам
приливают по 3 мл окрашивающего раствора, перемешивают. Стаканы закрывают
часовым стеклом, ставят на горячую электрическую плитку и кипятят растворы в
течение 2-3 мин. Затем растворы охлаждают, приливают по 2 мл
концентрированной азотной кислоты, содержимое стаканов переносят в
градуированные пробирки и доводят объем водой до 10 мл. Растворы
фотометрируют в кювете с толщиной просвечивающего слоя 1-2 см при λ=520 нм
относительно первого раствора сравнения, не содержащего кобальт.
По результатам фотометрирования шкалы образцовых растворов строят
градуировочный график. На оси абсцисс откладывают массовые концентрации
кобальта в почве (млн-1, мг/кг), соответствующие образцовому раствору, на оси
ординат - значения оптической плотности.
Оборудование: ФЭК, плитка электрическая, центрифуга, стаканы на 50
мл, колбы мерные на 100 и 1000 мл, пробирки на 20 мл, пипетки или дозатор на
25 мл, пипетки вместимостью 1, 5, 10 мл, цилиндры мерные на 25 и 100 мл.
Реактивы: азотная кислота HN03, соляная кислота HCl, серная кислота
H2SO4, 20% раствор цитрата натрия Na3C6H5O7 в бидистиллированной воде,
ортофосфорная кислота Н3РО4, 40% раствор ацетата натрия CH3COONa, перекись
водорода H2O2, 0,1% раствор нитрозо-Р-соли, кобальт сернокислый семиводный
CoSO4∙7H2O, бумага индикаторная универсальная, вода бидистиллированная.

1.6.4. Фотометрическое определение цинка


с использованием дитизона
Метод основан на получении окрашенного комплекса цинка с дитизоном и
экстрагировании его четыреххлористым углеродом, а затем фотометрировании
экстракта без удаления избытка дитизона. Мешающие определению цинка катионы
меди, свинца, серебра и некоторых других микроэлементов предварительно
связывают тиосульфатом в прочные соединения, и они остаются в водной фазе.

Подготовка к анализу
Перед началом анализа готовят рабочий раствор дитизона - в сухую
мерную колбу на 1 л помещают 100 мл запасного стандартного раствора
дитизона и объем до метки доводят четыреххлористым углеродом.
Готовят маскирующий раствор: смешивают 500 мл ацетатного буферного
раствора с pH 4,8 и 50 мл 50% раствора тиосульфата натрия.
Запасной стандартный раствор цинка А готовят следующим образом: в
мерную колбу на 1 л вносят 1 г гранулированного цинка и растворяют его в 7 мл
45
разбавленной 1:1 соляной кислоты. Объем раствора до метки доводят
дистиллированной водой. Полученный раствор, содержащий 1 мг/мл цинка, хранят
до 1 года.
Рабочий стандартный раствор цинка А готовят в день проведения анализа
так: в мерную колбу на 100 мл помещают 10 мл запасного стандартного
раствора цинка и доводят объем до метки соляной кислотой. Полученный
раствор содержит цинка 100 мкг/мл.
Рабочий стандартный раствор цинка Б (для анализа неокисленных
вытяжек из почв) готовят в день проведения анализа так: 2 мл раствора А
помещают в мерную колбу на 50 мл. Объем до метки доводят ацетатным
буферным раствором с pH 4,8. Полученный раствор содержит цинка 4 мкг/мл.
Рабочий стандартный раствор В (для окисленных вытяжек из почв): 10 мл
раствора А помещают в мерную колбу на 100 мл. Объем до метки доводят соляной
кислотой. Полученный раствор содержит цинка 10 мкг/мл. Раствор также готовят в
день проведения анализа.
В мерные колбы на 50 мл помещают объемы рабочего стандартного раствора
Б, указанные в таблице 12.Объемы растворов в колбах доводят до метки ацетатным
буферным раствором с pH 4,8.В мерные колбы на 50 мл помещают объемы
рабочего стандартного раствора В, указанные в таблице 13.
Объемы растворов в колбах доводят до метки соляной кислотой.
Для построения градуировочного графика при анализе исходных
(неокисленных) вытяжек из растворов сравнения в делительные воронки на 100 мл
помещают 25 мл пробы, приливают 10 мл маскирующего раствора, содержимое
воронок перемещают, добавляют 10 мл рабочего раствора дитизона в
четыреххлористом углероде. Воронку встряхивают в течение 1 мин. После
разделения фаз сливают нижний органический слой в кювету с толщиной
просвечиваемого слоя 1 см и фотометрируют при λ=538 нм (зеленый светофильтр)
относительно первого раствора сравнения, не содержащего цинк.
По результатам фотометрирования шкалы образцовых растворов строят
градуировочный график. На оси абсцисс откладывают массовые концентрации
цинка в почве (в млн-1, мг/кг), соответствующие образцовому раствору, на оси
ординат - значение оптической плотности.
Для построения градуировочного графика при анализе окисленных вытяжек
из растворов сравнения в делительные воронки на 50 мл помещают по 10 мл пробы,
добавляют по 5 мл маскирующего раствора, перемешивают и далее проводят
анализ, как при построении градуировочного графика для неокисленных вытяжек.

46
Таблица 12 - Приготовление образцовых растворов для неокисленных вытяжек
из почвы
№ Объем Массовая концентрация Массовая концентрация цинка в
раствора раствора Б, цинка в растворе растворе сравнения в пересчете
сравнения мл сравнения, мкг/мл на массовую долю цинка в почве,
млн-1 (мг/кг)
1 0 0 0
2 0,5 0,04 0,4
3 1,0 0,08 0,8
4 2,0 0,16 1,6
5 3,0 0,24 2,4
6 4,0 0,32 3,2
7 5,0 0,40 4,0

Таблица 13 - Приготовление образцовых растворов для окисленных вытяжек из


почвы
№ Объем Массовая концентрация Массовая концентрация цинка в
раствора раствора Б, цинка в растворе растворе сравнения в пересчете
сравнения мл сравнения, мкг/мл на массовую долю цинка в почве,
млн-1 (мг/кг)
1 0 0 0
2 0,5 0,1 0,4
3 1,0 0,2 0,8
4 2,0 0,4 1,6
5 3,0 0,6 2,4
6 4,0 0,8 3,2
7 5,0 1,0 4,0

Ход анализа
При проведении анализа вытяжек из почв без окисления органических
веществ в делительную воронку на 100 мл помещают 25 мл вытяжки из почвы, 10
мл маскирующего раствора и далее проводят анализ, как при построении
градуировочного графика.
При проведении анализа вытяжек из почв с окислением органических
веществ в термостойкие стаканы вместимостью 50 мл вливают 25 мл вытяжки
из почвы, добавляют 1 мл азотной кислоты, 1 мл перекиси водорода и
помещают стакан на кипящую водяную баню. Содержимое стакана упаривают
до слегка влажного остатка. Обработку азотной кислотой перекисью водорода
повторяют еще раз, содержимое стакана выпаривают досуха. К сухому остатку
приливают 10 мл соляной кислоты (1:100) и растворяют его при нагревании.
47
Полученный минерализат переносят в делительную воронку, ополаскивают
стакан водой и переносят к минерализату в делительную воронку. Приливают в
воронку 5 мл маскирующего раствора и далее проводят анализ, как при
построении градуировочного графика. Используя график, находят массовую
долю цинка в почве по формуле (см. определение меди в почве).
Оборудование: ФЭК, колбы мерные на 100, 1000 мл, цилиндры мерные на
100, 250 и 500 мл, воронки делительные на 100, 250 и 500 мл, цилиндр мерный
или дозатор на 50 мл, бюретки на 100 мл, пипетки на 1, 2 и 10 мл.
Реактивы: ацетат натрия, 50% раствор тиосульфата натрия Na2S2O3,
ацетатный буферный раствор с рН 4,8, 15% раствор ацетата натрия CH3COONa,
серная кислота H2SO4, соляная кислота HCl, разбавленная водой 1:100 по объему,
азотная кислота HNO3, 0,02% раствор дитизона в четыреххлористом углероде
(запасной раствор), цинк металлический гранулированный Zn, перекись водорода.

1.6.5. Определение бора по методу Бергера и Труога в модификации


ЦИНАО
Подготовка почвы к анализу
Пробы почвы высушивают до воздушно-сухого состояния в сушилке
почвенных проб с подогревом воздуха не выше 40°С или в хорошо
вентилируемом помещении при комнатной температуре. Высушенные пробы
рассыпают на полиэтиленовой пленке, разминают крупные комки и выбирают
включения. Затем почву измельчают на почвенном пробоизмельчителе или
растирают в фарфоровой ступке и просеивают через сито с круглыми отверстиями
диаметром 1-2 мм. Измельченные пробы хранят в полиэтиленовых пакетах,
картонных коробках или специальных контейнерах. Перед анализом почву
высыпают на ровную поверхность, хорошо перемешивают и распределяют слоем
не более 1 см. Пробу для анализа отбирают ложкой или шпателем не менее чем из
пяти разных мест, равномерно распределенных по всей поверхности.

Ход анализа
Готовят запасной раствор хинализаринa: (0,150±0,001) г хинализарина
растворяют в концентрированной серной кислоте (плотностью 1,84 г/мл) и
количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доливают до
метки серной кислотой и тщательно перемешивают. Раствор хранят в склянке
из безборного стекла с притертой пробкой в темном месте до 1 года.
Готовят рабочий раствор: 10 мл запасного раствора хинализарина
помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доливают до метки H2SO4
(плотностью 1,84 г/мл). Раствор хранят в склянке из безборного стекла с
притертой пробкой в темном месте не более 2 мес.
48
Синтезируют азометин Аш. Для этого (18,0±0,01) г мононатриевой соли Аш-
кислоты растворяют при нагревании до 45-50°С в 1 л воды и фильтруют раствор
через бумажный фильтр в коническую колбу вместимостью 2-3 л. Раствор в колбе
нейтрализуют раствором гидроксида калия до рН 7 по универсальной
индикаторной бумаге. Прибавляют по каплям соляную кислоту, непрерывно
перемешивая раствор, до получения рН 2-3. Затем небольшими порциями (3-5 мл)
прибавляют 20 мл салицилальдегида, колбу с раствором помещают на водяную
баню, нагретую до 60-65°С, и выдерживают при этой температуре в течение 15-20
мин, периодически перемешивая раствор вручную круговым движением. Затем
колбу с теплым раствором помещают на механический взбалтыватель и
взбалтывают раствор в течение 1 ч. Колбу с раствором оставляют на ночь при
комнатной температуре для полного выделения азометина Аш. Осадок
отфильтровывают на воронке Бюхнера, промывают пять раз C2H5OH по 20-25 мл и
высушивают при температуре 100-110°С в течение 3 ч. Полученный продукт
оранжевого цвета хранят в склянке с притертой пробкой до 1 года.
Готовят 0,9% раствор азометина Аш: (0,90±0,01) г азометина Аш и
(2,0±0,1) г аскорбиновой кислоты растворяют в дистиллированной воде при
нагревании на водяной бане. Полученный раствор переносят в мерную колбу
вместимостью 100 мл и доливают до метки водой. Хранят раствор в
холодильнике не более 2 недель. Если при хранении раствор мутнеет, то перед
анализом его подогревают на водяной бане до просветления.
Готовят буферный маскирующий раствора (рН 5,2): (500,0±0,1) г ацетата
аммония и (10,0±0,1) г трилона Б растворяют в воде и доводят объем до 1 л. К
полученному раствору приливают серную кислоту, разбавленную 1:4, до рН
(5,2±0,2).
Готовят буферный маскирующий раствор (рН 6,0): (500,0±0,1) г ацетата
аммония и (10,0±0,1) г трилона Б растворяют в воде и доводят объем до 1 л. К
полученному раствору приливают серную кислоту, разбавленную 1:2, до рН
(6,0±0,2).
В день проведения анализа готовят смешанный окрашенный раствор,
смешивая раствор азометина Аш и буферный маскирующий раствор с рН 5,2
(для анализа минеральных почв) или с рН 6,0 (для анализа органогенных почв)
в отношении 1:1. Также в день анализа готовят окисляющий раствор для
анализа минеральных почв, смешивая серную кислоту, разбавленную 1:5, и 1%
раствор перманганат калия в отношении 1:1. Для органолептического анализа
окисляющий раствор готовят, смешивая серную кислоту, разбавленную 1:2, и
3% раствор перманганата калия в отношении 3:7.

49
Для приготовления раствора бора массовой концентрации 1 мг/мл
(раствор А) (5,720±0,001) г борной кислоты растворяют в воде и доводят объем
раствора водой до 1000 мл в мерной колбе. Раствор хранят не более 1 года.
Раствор бора массовой концентрации 100 мкг/мл (раствор Б) готовят
методом разбавления: в мерную колбу на 100 мл помещают 10 мл раствора А и
доливают до метки H2O. Раствор хранят не более 3 мес.
В день анализа готовят раствора бора массовой концентрации 10 мкг/мл
(раствор B): в мерную колбу на 100 мл помещают 10 мл раствора Б и доливают до
метки 0,1% раствором сульфата магния.

Приготовление растворов сравнения для определения бора с хинализарином


В мерные колбы на 50 мл из бюретки наливают указанные в таблице 14
объемы раствора Б, доливают до метки водой при анализе минеральных почв
или 1 М раствором серной кислоты при анализе органогенных почв.

Таблица 14 - Приготовление растворов сравнения для количественного


определения бора с хинализарином
Номер Массовая Массовая доля бора в почве при отношении
Объем
раствора концентрация бора в почвы к раствору
раствора
сравнен растворе сравнения,
Б, мл 1:5 1:10
ия мкг/мл
1 - 0 0 0
2 0,25 0,5 0,25 0,5
3 0,5 1,0 0,5 1,0
4 1,0 2,0 1,0 2,0
5 2,0 4,0 2,0 4,0
6 3,0 6,0 3,0 6,0
7 4,0 8,0 4,0 8,0

Приготовление растворов сравнения


для определения бора с азометином Аш
В мерные колбы на 50 мл из бюретки наливают указанные в таблице 15
объемы раствора бора и доливают до метки 0,1% раствором сульфата магния.

50
Таблица 15 - Приготовление растворов сравнения для количественного
определения бора с азометином Аш
Номер Массовая доля бора в почве при отношении
Массовая
раствор Объем почвы к раствору
концентрация бора в
а раствора
растворе сравнения,
сравнен В, мл
мкг/мл 1:5 1:10
ия
1 0 0 0 0
2 0,5 0,1 0,5 1,0
3 1,0 0,2 1,0 2,0
4 2,0 0,4 2,0 4,0
5 4,0 0,8 4,0 8,0
6 6,0 1,2 6,0 12,0
7 8,0 1,6 8,0 16,0
8 10,0 2,0 10,0 20,0

Приготовление почвенной вытяжки


Навески минеральной почвы массой (10,0±0,1) г или органогенной почвы
массой (5,0±0,1) г помещают в конические колбы и приливают к ним по 50 мл 0,1%
раствора семиводного сульфата магния. Закрывают колбы лабораторными
воронками или полыми стеклянными пробками и кипятят суспензии на
электрической плитке в течение 5 мин с момента закипания, не допуская бурного
кипения. После завершения кипячения суспензии перемешивают и фильтруют в
горячем состоянии через бумажные фильтры. Первые порции фильтратов
отбрасывают, последующие порции собирают в чистые технологические емкости.
Если фильтраты мутные, их возвращают на фильтры.
В каждой партии анализов для контроля загрязнения посуды,
оборудования, фильтровальной бумаги, воды и реактивов проводят контрольный
опыт: технологическую емкость, не содержащую навеску, проводят через все
стадии анализа одновременно с пробами, добавляя то же количество тех же
реактивов, что и в пробы.

Определение бора с хинализарином в вытяжке из минеральной почвы


В стаканы помещают по 10 мл почвенных вытяжек, контрольного раствора,
приливают по 2 мл пероксида водорода и выдерживают стаканы на водяной бане,
нагретой до 60-70°С, в течение 1-2 мин. Затем прибавляют по две капли раствора
гидроксида натрия и продолжают нагревать стаканы при этой же температуре еще
10 мин. Затем повышают температуру водяной бани до 100°С и выпаривают
содержимое стаканов досуха. В стаканы приливают по 1 мл гипофосфита кальция
(или натрия) и растворяют сухие остатки. Одновременно в сухие пробирки
помещают по 1 мл растворов сравнения. К анализируемым растворам и растворам
51
сравнения приливают по 9 мл рабочего раствора хинализарина, содержимое
стаканов и пробирок тщательно перемешивают. Из стаканов растворы переносят в
сухие пробирки. Пробирки закрывают пробками и оставляют на 30 мин в темном
месте при комнатной температуре. Через 30 мин растворы фотометрируют в кювете
с просвечиваемым слоем толщиной 20 мм относительно первого раствора
сравнения, не содержащего бор, при λ=620 нм или используют светофильтр с
максимумом пропускания в области 590-625 нм. Если значение оптической
плотности анализируемого раствора превышает значение оптической плотности
последнего раствора сравнения или ниже значения второго раствора сравнения,
повторяют определение, уменьшив или увеличив соответственно объем вытяжки.

Определение В с хинализарином в вытяжке из органогенной почвы


В фарфоровые тигли помещают по 10 мл почвенных вытяжек контрольного
раствора, приливают по 1 капле раствора гидроксида натрия и выпаривают досуха.
Сухой остаток прокаливают в муфельной печи при температуре 600°С в течение 2
ч. После охлаждения в тигли приливают по 1 мл 1 М раствора серной кислоты и
растворяют сухие остатки. Одновременно в сухие пробирки помещают по 1 мл
растворов сравнения. К анализируемым растворам и растворам сравнения
приливают по 9 мл рабочего раствора хинализарина и содержимое тиглей и
пробирок тщательно перемешивают. Затем из тиглей растворы переносят в
пробирки. Пробирки с анализируемыми растворами и растворами сравнения
закрывают пробками и оставляют на 30 мин в темном месте. Далее анализ
проводят, как и с минеральными почвами.

Определение В с азометином Аш в вытяжке из минеральной почвы


В сухие пробирки, установленные в штатив, помещают по 5 мл почвенных
вытяжек контрольного раствора и растворов сравнения. Приливают по 0,5 мл
окисляющего раствора. Штатив с пробирками погружают в кипящую водяную
баню и выдерживают в ней в течение 10 мин. Уровень воды в бане должен быть
выше уровня содержимого пробирок. Через 10 мин штатив с пробирками
вынимают из водяной бани и охлаждают растворы до комнатной температуры.
Затем приливают по 0,5 мл раствора аскорбиновой кислоты с массовой долей 10%
и перемешивают содержимое пробирок до растворения осадка оксида марганца
(IV). К прозрачным растворам приливают по 4 мл смешанного окрашивающего
раствора и оставляют растворы на 2 ч. Затем растворы фотометрируют в кюветах с
просвечиваемым слоем толщиной 10-20 мм относительно первого раствора
сравнения, не содержащего В, при λ=420 нм или используют светофильтр с
максимумом пропускания в области 400-440 нм. Если значение оптической
плотности анализируемого раствора превышает значение оптической плотности

52
последнего раствора сравнения, вытяжку разбавляют 0,1% раствором семиводного
сульфата магния и повторяют определение.

Определение В с азометином Аш в вытяжке из органогенной почвы


В сухие пробирки, установленные в штатив, помещают по 5 мл
почвенных вытяжек, контрольного раствора и растворов сравнения. Приливают
по 1 мл окисляющего раствора. Штатив с пробирками погружают в кипящую
водяную баню и выдерживают в ней в течение 15 мин. Уровень воды в бане должен
быть выше уровня содержимого пробирок. Через 15 мин штатив с пробирками
вынимают из водяной бани и охлаждают растворы до комнатной температуры.
Затем приливают по 0,5 мл раствора аскорбиновой кислоты с массовой долей 10%
и перемешивают содержимое пробирок до растворения осадка оксида марганца
(IV). К прозрачным растворам приливают по 4 мл смешанного окрашивающего
раствора и оставляют на 2 ч. Далее анализ проводят, как и для минеральной почвы.
По результатам фотометрирования растворов сравнения строят
градуировочный график, откладывая по оси абсцисс массовые концентрации
бора в растворах сравнения в пересчете на массовые доли в почве в
миллионных долях, а по оси ординат - соответствующие им показания прибора.
По графику находят массовые концентрации бора в вытяжках из почв и
контрольном растворе в пересчете на массовую долю в почве.
Массовую долю подвижных соединений бора в почве вычисляют по формуле

Х = К∙(с – с1), где

К - коэффициент, учитывающий разбавление или уменьшение объема вытяжки


(при анализе неразбавленной вытяжки и использовании указанного объема
вытяжки, при разбавлении или уменьшении объема вытяжки в пять раз и т.д.); с -
массовая концентрация бора в почвенной вытяжке в пересчете на массовую долю в
почве, найденная по графику; с1 - массовая концентрация бора в контрольном
растворе в пересчете на массовую долю в почве, найденная по графику.
Значение результата контрольного опыта не должно превышать
минимальной концентрации растворов сравнения. За результат анализа
принимают результат единичного определения. Результат вычисляют до
второго десятичного знака.
Все работы по подготовке к анализу и его проведению должны проводиться
на рабочих местах, оборудованных приточно-вытяжной вентиляцией.
Оборудование: сушилка почвенных проб марки СП-1 или СП-1М;
пробоизмельчитель почвенный; весы лабораторные с наибольшим пределом
взвешивания 200 г 2-го класса точности и с наибольшим пределом взвешивания 500
г 4-го класса точности; фотоэлектроколориметр; печь муфельная, обеспечивающая
53
поддержание температуры 600°С; плитка электрическая с регулятором нагрева;
баня водяная; взбалтыватель с возвратно-поступательным движением и частотой
колебаний не менее 75 мин; ступка фарфоровая с пестиком; алюминиевое или
стальное сито с круглыми отверстиями диаметром 1-2 мм; колбы конические
вместимостью не менее 150 мл; стаканы вместимостью 50-100 мл из кварца или из
химически стойкого стекла, или другие емкости из безборного материала той же
вместимости; колбы конические вместимостью 200-250 мл из кварца или
химически стойкого стекла для кипячения суспензии; воронки стеклянные
лабораторные; тигли фарфоровые высокие; дозатор или цилиндр мерный
вместимостью 50 мл экстрагирующего раствора; пипетки 2-го класса точности
вместимостью 1, 5 и 10 мл; бюретки 2-го класса точности вместимостью 5, 10 и 50
мл; пипетки 2-го класса точности вместимостью 1, 2 и 10 мл с резиновой грушей;
колбы мерные на 50, 100 и 1000 мл; пробирки на 10 мл из химически стойкого
стекла с пришлифованными пробками; штатив для пробирок; фильтры
обеззоленные с синей лентой диаметром 15 см или бумага фильтровальная
лабораторная марки ФНС; бумага индикаторная универсальная для определения рН
1,0-10,0.
Реактивы: кислота серная H2SO4 плотностью 1,84 г/мл и разбавленная
водой 1:2, 1:4 и 1:5 по объему и ее 1 н раствор, кислота соляная HCl, кислота
аскорбиновая 10% раствор, кислота борная H3BO3, сульфат магния семиводный
MgSO4∙7H2O 10% раствор, пероксид водорода H2O2, 10% раствор гидроксида
натрия NaOH, перманганат калия кристаллический KMnO4, ацетат аммония
CH3COONH4, трилон Б, салициловый альдегид, Аш-кислоты мононатриевая соль
(1-амино-8-нафтол-3,6-дисульфокислоты мононатриевая соль, 1,5-водная), спирт
этиловый C2H5OH, 10% раствор гидроксида калия KOH, хинализарин (1, 2, 5, 8-
тетраоксиантрахинон), 10% растворы гипофосфита кальция Ca(H2PO2)2 или
гипофосфита натрия NaH2PO2, вода дистиллированная.

1.6.6. Определение молибдена


Извлечение молибдена из почвы
Метод основан на извлечении подвижного молибдена из почвы (по Григгу)
оксалатным буферным раствором с pH 3,3 (реактив Тамма). Отношение почвы к
раствору 1: 10. Суспензию взбалтывают на ротаторе в течение 1 ч.
Готовят оксалатный буферный раствор - в мерную колбу на 1 л помещают 25
г щавелевокислого аммония и 12,6 г щавелевой кислоты, которые растворяют в
горячей дистиллированной воде, затем раствор охлаждают и доводят объем до
метки дистиллированной водой.
Взвешивают почву массой 15 г и помещают в молочную бутылку
вместимостью 500 мл. Приливают 150 мл оксалатного буферного раствора,
54
бутылку закрывают и взбалтывают в течение 1 ч. Вытяжку фильтруют через
складчатый фильтр в бытовую банку, установленную в десятипозиционную ю
кассету. Первую мутную порцию фильтрата отбрасывают. Необходимо
одновременно ставить холостой опыт, проводя его через все стадии анализа.
Оборудование: ротатор, бутылки молочные вместимостью 500 мл с
полиэтиленовыми пробками, кассеты десятипозиционные под бытовые банки,
банки бытовые, установки фильтровальные десятипозиционные, фильтры
беззольные с синей лентой, цилиндр мерный или дозатор на 150, 250 мл.
Реактивы: щавелевая кислота Н2С2О4, аммоний щавелевокислый (NH4)2C2O4.

Фотометрический метод определения


молибдена с использованием цинк-дитиола
Метод основан на получении окрашенного комплекса молибдена с
дитиолом, экстракции его хлороформом и измерении оптической плотности
экстракта на ФЭК. Введение аскорбиновой кислоты в анализируемые вытяжки
приводит к восстановлению железа, тем самым устраняется его влияние.
Добавление к вытяжкам лимонной кислоты предотвращает взаимодействие
дитиола с вольфрамом, а влияние меди устраняется иодидами.

Ход анализа
Помещают 100 мл вытяжки в стакан из термостойкого стекла и выпаривают
содержимое досуха; оставляют стакан на плитке еще в течение 30 мин для
обезвоживания остатка и частичной возгонки оксалатов. Помещают стакан в
холодный муфель и поднимают температуру до 500°С. Остаток вытяжки
прокаливают в течение 1 часа. К прокаленному остатку добавляют 2 мл хлорной
кислоты и выпаривают ее на плитке при температуре 180-2000С досуха. Затем
стакан снова ставят в холодный муфель, повышают температуру до 500°С и
выдерживают 15 мин.
Прокаленный остаток растворяют при нагревании в 25 мл 14% соляной
кислоты. Полученный раствор охлаждают, добавляют к нему 4 мл маскирующего
раствора, перемешивают и оставляют на 5 мин. Затем добавляют 2 мл раствора
иодистого калия (или натрия), приливают в воронку 2 мл раствора цинк-дитиола и
перемешивают. Затем приливают 4 мл хлороформа и встряхивают воронку 2 мин.
Дают жидкостям расслоиться, фильтруют нижний слой через бумажный фильтр в
кювету с толщиной просвечиваемого слоя 2 см.
Оптическую плотность экстракта окрашенного в зеленый цвет измеряют
на ФЭК, используя красный светофильтр, кюветы с толщиной просвечиваемого
слоя 2 см. Объемы вытяжки и реактивов увеличивают в 1,5 раза, а хлороформа
в 2,5 раза. Используя градуировочный график, находят массовую долю
молибдена в почве по формуле (см. определение меди в почве).
55
Для приготовления шкалы образцовых растворов и построения
градуировочного графика в мерные колбы на 100 мл помещают по 10 мл 1%
раствора железоаммонийных квасцов и 0; 0,5; 1; 2; 3; 4 и 5 мл рабочего
стандартного раствора молибдена соответственно, и доводят объем в воронках
до 25 мл 14% соляной кислотой.
Для построения градуировочного графика из растворов сравнения берут
пробы по 25 мл, помещают в делительные воронки, приливают по 4 мл
маскирующего раствора и далее анализ проводят, как и анализ почвы. По
результатам фотометрирования образцовых растворов строят градуировочный
график. На оси абсцисс откладывают массовую долю молибдена в почве, на оси
ординат - значение оптической плотности.
Оборудование: ФЭК, печь муфельная, плитка электрическая, колбы мерные
на 100, 250 и 1000 мл, цилиндр мерный или дозатор на 100 мл, бюретка или дозатор
на 50 мл, стаканы термостойкие на 100 мл, воронки делительные на 100 мл,
пипетки градуированные или дозаторы на 2, 4, 5, 20 мл, воронки для фильтрования,
фильтры беззольные с белой лентой.
Реактивы: 0,3% раствор цинк-дитиола, лимонная кислота, аскорбиновая
кислота, 50% раствор иодида натрия NaJ или калия KJ в бидистиллированной воде,
гидроксид натрия NaOH, этиловый спирт C2H5OH, хлороформ CHCl3, 1% раствор
железоаммонийных квасцов в 14% соляной кислоте, молибденовокислый аммоний
(NH4)6Мо7∙024∙4Н20, 14% раствор очищенной соляной кислоты НСl.

Вопросы для самоконтроля


1. Какие задачи решают с помощью химического анализа почв?
2. Какие системы показателей химического состояния почв используют в
агрохимии?
3. Как осуществляют подготовку почвенных проб к химическому анализу?
4. Как готовят лабораторную посуду к химическому анализу почв?
5. Что называют гигроскопической влажностью почвы?
6. Почему результаты анализа почв выражают на почву, не содержащую
гигроскопической влаги?
7. Как результат анализа, выраженный на воздушно сухую почву, пересчитать на
почву высушенную?
8. Что понимают под первичной почвенной пробой?
9. Что понимают под средней лабораторной почвенной пробой?
10. Что такое аналитическая почвенная проба?
11. Как подготовить аналитическую пробу для определения органического
углерода и азота?

56
12. Каким образом получают аналитическую пробу для определения рН, обменных
катионов, легкорастворимых солей и других анализов?
13. Как готовят почвенную пробу для валового анализа минеральной части почв?
14. Для чего используют кислотно-основное титрование в химическом анализе почв?
15. Окислительно-восстановительное титрование в химическом анализе почв.
16. Зачем используют комплексонометрическое титрование в химическом анализе
почв?
17. Какие электрохимические методы используют в химическом анализе и как их
можно классифицировать?
18. Для каких целей в химическом анализе почв используют потенциометрические
методы анализа?
19. Какие элементы или их соединения могут быть определены в почве
фотометрическим методом?
20. Какие методы определения кальция и магния используют при валовом анализе?
21. Каковы особенности комплексонометрического определения кальция и магния?
22. Какие методы определения натрия и калия используют при валовом анализе?
23. Какие методы определения фосфора используют при валовом анализе?
24. Какие методы определения тяжелых металлов используют при валовом анализе?
25. На чем основан титриметрический метод определения углерода органического
вещества почв И. В. Тюрина?
26. Как по результатам определения углерода принято рассчитывать содержание
гумуса?
27. Какие методы используют для определения азота в почвах?
28. Принцип метода водных вытяжек?
29. Каковы достоинства и недостатки метода водной вытяжки?
30. Какими методами определяют натрий и калий в почвах?
31. Что понимают под подвижностью химических элементов в почвах?
32. Какие методы традиционно используют для оценки содержания подвижного
фосфора и подвижного калия в почвах?
33. Что такое катионный обмен в почвах?
34. Какие катионы и почему относят к обменным основаниям?
35. Что такое емкость катионного обмена?
36. Какие виды емкости катионного обмена определяют в почвах?
37. На чем основаны методы определения обменных оснований?
38. Растворы каких солей используют для вытеснения из почв и определения
обменных оснований?
39. Что понимают под степенью насыщенности почв основаниями?
40. Какие категории почвенной кислотности принято оценивать при исследовании
почв?
57
2. МЕТОДИКИ АГРОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ РАСТЕНИЙ

2.1. Задачи агрохимического анализа растений


 Исследовать трансформацию макро- и микроэлементов в системе почва-
растение удобрения при различных режимах выращивания растений.
 Определить содержание основных биокомпонентов в растительных объектах и
кормах: белков, жиров, углеводов, витаминов, алкалоидов и соответствие их
содержания принятым нормам и стандартам.
 Оценить меру пригодности растений для потребителя (нитраты, тяжѐлые
металлы, алкалоиды, токсиканты).
 Произвести диагностику обеспеченности растений питательными веществами.
 По признакам обеспеченности производить подкормки.

2.2. Отбор растительной пробы


При отборе проб растений в агроценозе основная цель - средняя проба,
которая должна наиболее полно отражать биологическое состояние растений, т.е.
быть репрезентативной для поля, опытной делянки, выбранной площадки,
вегетационного сосуда. Чтобы средняя проба отражала статус всей совокупности
растений, учитывают макро- и микрорельеф, гидротермические условия,
равномерность и густоту стояния растений, их биологические особенности.
Растительные пробы отбираются в сухую погоду, в утренние часы, после
высыхания росы. При изучении процессов обмена веществ в растениях в динамике
эти часы соблюдаются в течение всего вегетационного периода.
Для культур сплошного сева на опытном участке выделяются равномерно 5-
6 площадок размером 0,25-1,00 м2, растения с площадки скашиваются на высоте
3-5 см. Общий объѐм взятого материала составляет объединенную пробу. После
тщательного усреднения этой пробы отбирают средний образец массой 1 кг.
Проводят взвешивание средней пробы, а затем разбор по ботаническому составу,
учѐт сорняков, больных растений, которые исключают из состава пробы.
Проводят также разделение растений на органы с весовым учѐтом в пробе
листьев, стеблей, початков, цветов, колосьев. Молодые растения от всходов до
кущения обычно не дифференцируют по органам и фиксируют целиком.
В вегетационных сосудах пробы этих растений отбираются следующим
образом: из каждого сосуда берѐтся равное количество растений или из 2-3
сосудов каждого варианта растения срезаются полностью, первый приѐм
используют чаще.
Для культур пропашных, особенно высокостебельных (кукуруза,
подсолнечник), объединенную пробу составляют из 10- 20 растений средней
величины, взятых по диагонали делянки или поочерѐдно в несмежных рядах.
58
При отборе корнеплодов выкапывают 10- 20 растений средней величины,
очищают от почвы, подсушивают, взвешивают, отделяют надземные органы и
взвешивают корнеплоды. По состоянию этих компонентов определяют
структуру урожая.
Среднюю пробу составляют с учѐтом размера клубней, початков, корзинок
и т.п. Для этого материал сортируют визуально на большие, средние, малые и
соответственно долевому участию фракции составляют средний образец. У
высокостебельных культур проба может усредняться за счѐт продольного
расчленения всего растения от верхушки до основания.
В производственных условиях пробы зерна, муки, гранулированных
кормов, силоса, сенажа, соломы, овощных, плодовых, ягодных культур
отбирают из больших объѐмов пробоотборниками в соответствии с
инструкциями отраслевых стандартов или ГОСТов.
Критерием оценки правильного отбора пробы является сходимость
результатов химического анализа при параллельных определениях.
Скорость химических реакций в растительных образцах, взятых в
период активной вегетации, намного выше, чем во многих анализируемых
объектах (например, зерно, солома, семена). За счѐт работы ферментов
продолжаются биохимические процессы, в результате которых происходит
разложение таких веществ, как крахмал, белки, органические кислоты и
особенно витамины. Задачи исследователя - сократить до минимума срок от
взятия пробы до проведения анализа или фиксации растительного материала.
Снижения скорости реакций можно добиваться работой со свежими
растениями на холоде в климатокамере (+4°С), а также кратким хранением в
бытовом холодильнике на нижней полке.
В свежем растительном материале при естественной влажности проводят
определение водорастворимых форм белков, углеводов, ферментов, калия,
фосфора, определяют содержание нитратов, нитритов. С небольшой погрешностью
эти определения можно выполнять в образцах растений после лиофильной сушки.
В фиксированных воздушно-сухих образцах определяют все макроэлементы,
т.е. зольный состав растений, общее содержание белков, углеводов, жиров,
клетчатки, пектиновых веществ. Высушивание растительных образцов до
абсолютно сухого веса для проведения анализа недопустимо, так как нарушаются
растворимость и физико-химические свойства многих органических соединений,
происходит необратимая денатурация белков. При анализе технологических
свойств любых объектов, (в том числе зерна, соломки льна) допускается сушка при
температуре не более 30°С. Повышенные температуры изменяют свойства белково-
углеводных комплексов в растениях и искажают результаты определения.

59
2.3. Фиксация растительного материала
Сохранение органических и зольных веществ в растительных пробах в
количествах, близких к их естественному состоянию, осуществляется за счѐт
фиксации. В настоящее время применяется температурная фиксация и лиофильная
сушка, при которой растительные ферменты сохраняются в активном состоянии, а
белки не денатурируют.
Температурная фиксация растительного материала проводится в
сушильном шкафу, лучше с принудительной вентиляцией. Растительный
материал помещают в пакеты из плотной бумаги типа «крафт» и загружают в
сушильный шкаф, предварительно нагретый до 105-110°С. После загрузки
выдерживают температуру 90-95°С в течение 10-20 мин в зависимости от
свойств растительного материала. При такой температурной обработке за счѐт
паров воды происходит инактивация растительных ферментов.
Окончание фиксации проверяют следующим образом: вынимают из шкафа
образцы, разворачивают - растительный материал должен быть влажным и вялым
при этом он должен сохранить свою окраску, т.е. не пожелтеть.
Дальнейшее высушивание пробы проводят при доступе воздуха в открытых
пакетах при температуре 50-60°С в течение 3-4 ч. Превышать указанные интервалы
температуры и времени не следует. Длительное нагревание при высокой
температуре приводит к термическому разложению многих азотсодержащих
веществ и карамелизации углеводов растительной массы.
Растительные образцы с большим содержанием воды - корнеплоды,
фрукты, ягоды и т.п. - разделяют на сегменты так, чтобы в анализ попали
периферийные и центральная части плода. Набор сегментов для пробы
составляют из сегментов больших, средних и маленьких плодов или клубней в
соответствующем соотношении их в урожае. Сегменты средней пробы
измельчают и фиксируют в эмалированных кюветах.
Если образцы объѐмны, то надземную часть растений; листья стебли,
цветы, черешки, корзинки и т.д. - непосредственно перед фиксацией
измельчают ножом или ножницами и быстро закрывают в пакеты.
Если в образцах предполагается определение только набора химических
элементов, их можно не фиксировать, а высушить при комнатной температуре.
Однако высушивание растительного материала лучше провести в термостате
при температуре 40-60°С, так как при комнатной температуре возможно
загнивание массы и загрязнения пылевыми частицами из атмосферы.
Не подвергают температурной фиксации образцы зерна и семян, но
высушивают их при температуре не выше 30°С.
Лиофилизация растительного материала (высушивание путѐм возгонки)
основана на испарении льда, минуя жидкую фазу. Высушивание материала при
60
лиофилизации проводится следующим образом: отобранный растительный
материал замораживают до твѐрдого состояния, заливая образец жидким азотом.
Затем образец помещают в лиофилизатор, где при низкой температуре ив условиях
вакуума происходит высушивание. При этом влага поглощается специальным
осушителем (реактивом), в качестве которого используется силикагель, хлористый
кальций и т.д. Лиофильная сушка подавляет ферментативные процессы, но сами
ферменты сохраняются.

2.4. Размол растительных образцов и их хранение


Размол растений проводят в воздушно-сухом состоянии. Скорость
размола увеличивается, если образцы предварительно подсушиваются в
термостате. Отсутствие в них гигроскопической влаги определяется визуально:
хрупкие, легко разламывающиеся в руках стебли и листья – наиболее
пригодный материал для размола.
Образцы для размола можно предварительно измельчить ножницами. Для
размола объѐмных образцов, весом более 30 г используют лабораторные
мельницы ПРП-1, для размола небольших проб используют бытовые кофемолки
типа «Пируэт». При очень малых количествах растительные пробы можно
измельчить в фарфоровой ступке с последующим пропусканием материала через
сито.
Измельчѐнный материал просеивается через сито. Диаметр отверстий
зависит от специфики анализа: от 1 мм до 0,25 мм. Если в анализе не
оговаривается тонкость помола материала, берут сито 1 мм. Часть материала, не
прошедшая через сито, повторно измельчается на мельнице или в ступке. Отброс
растительного материала не допускается, так как это изменяет состав средней
пробы. Например, при размоле зерна на сите остаются отруби, которые с трудом
измельчаются и не проходят через сито с первого просеивания. Отброс отрубей
приводит к грубым ошибкам при анализе, в результате анализируется мука
грубого помола (в основном эндосперм), а не целое зерно.
После размола каждого образца рабочие органы мельницы и рабочую
емкость тщательно очищают ершиком и сухой хлопчатобумажной тканью.
Только после этого приступают к размолу следующего образца.
При большом объѐме размолотых образцов можно снизить объѐм,
перейдя от средней лабораторной пробы к средней аналитической, вес
последней составляет 10-50 г, а для зерна не менее 100 г. Отбор производится
методом квартования. Лабораторная проба равномерно распределяется на
бумаге или стекле в виде круга или квадрата. Шпателем делится на мелкие
квадратики (2-3 см) или сегменты. Материал из несмежных квадратиков
отбирается в аналитическую пробу.
61
2.5 Определение в растениях «сырой» золы
Сухое вещество растений содержит в себе как органические, так и
минеральные соединения. Последние остаются после сжигания органического
вещества в виде «сырой» золы и составляют в среднем от 5 до 15% сухого вещества
растений. «Сырой» золу называют потому, что в ней, помимо зольных элементов
растений, содержатся некоторые примеси - углистые частицы, песчинки, плохо
смытая почва. Количество золы и еѐ состав зависят от вида, органа, возраста
растений, почвенно-климатических условий, применяемых форм и доз
минеральных удобрений и других факторов.
Для определения в растениях «сырой» золы используют метод сухого
озоления растительного материала, основанный на сжигании органического
вещества при высокой температуре в муфельной печи. В полученной этим путѐм
золе можно определить те элементы, которые не теряются вследствие образования
легколетучих соединений при температуре 500-600°С. К ним относятся калий,
кальций, магний, алюминий, марганец и т.д. Можно проводить озоление как сухих,
так и свежих растений.
Ход анализа
Фарфоровые чашечки или тигли объѐмом 25-50 мл в течение 2-3 ч
прокалить в муфельной печи при температуре 500-6000C, доведя до
постоянного веса. Взвешивать на аналитических весах с точностью до 0,0002 г.
Поместить в эксикатор. На аналитических весах с такой же точностью взять 1 г
воздушно-сухого растительного материала. Навеску в чашечке укладывать
рыхло для свободного доступа кислорода. Во время озоления содержимое
чашечки не перемешивают.
Первоначальное озоление растительного материала ведут при доступе
воздуха на электроплитке или газовой горелке. Нагревание слабое, обугливание
осуществляется без возгорания и покраснения пробы. Если наблюдается
покраснение, чашку снимают и возгорание прекращают, накрывая пробу часовым
стеклом.
Через 15-20 мин, когда материал почернеет и прекратится выделение дыма,
перенести чашечки в нагретую муфельную печь. Вести озоление в течение 1,5-2 ч
при температуре не выше 500°С, так как при более высокой температуре будут
потери хлорида калия, хлорида натрия, оксида фосфора и натрия.
Осторожно перенести чашечки в эксикатор, охладить до комнатной
температуры и взвесить на аналитических весах.
Повторить прокаливание чашек с навеской в течение 40 - 60 мин,
охладить и взвесить. Проводить прокаливание до получения постоянного веса
чашки с золой. Обычно это достигается после второго прокаливания. Если вес

62
золы после третьего прокаливания увеличивается, анализ прекращают, ведут
расчет на меньшую величину.
х = (с – а)∙100/(в – а), где
х - содержание золы, %; а - вес пустой чашки, г; в - вес чашки с навеской, г; с -
вес чашки с золой, г; 100 - множитель для выражения содержания золы в
процентах.
Вес золы (г) определяется по разности между последним весом чашечки с
золой и весом пустой прокалѐнной чашечки.
Оборудование: фарфоровые чашечки, муфельная печь, электроплитка или
газовая горелка, эксикатор, часовые стекла, аналитические весы.

2.6. Растворение золы


Ход анализа:
Золу в чашечке осторожно смочить несколькими каплями
дистиллированной воды для избежания потерь. Прилить 5 мл 20% раствора
соляной кислоты и тщательно размешать содержимое чашечки небольшой
стеклянной палочкой. Работу вести под тягой.
Прилить 15-20 мл горячей дистиллированной воды для более полного
растворения золы и снижения концентрации раствора перед фильтрованием.
Фильтровать раствор по палочке через небольшую воронку с беззольным
фильтром в мерную колбу на 100 мл, промывая чашечку и фильтр несколько
раз горячей дистиллированной водой. Охлаждѐнный раствор довести до метки
водой, закрыть пробкой, взболтать.
В полученном растворе определяют содержание калия на пламенном
фотометре, кальция и магния комплексонометрически. Фосфор можно
определить фотометрически, если хорошо проведено озоление растительного
материала.
Оборудование: фарфоровые чашечки, электроплитка, пипетка на 5 мл,
стеклянные воронки для фильтрования, мерные колбы на 100 мл, стеклянные
палочки, вытяжной шкаф, беззольные фильтры.
Реактивы: 20% раствор соляной кислоты HCl, дистиллированная вода.

2.7 . Мокрое озоление по методу Гинзбург


В основу метода положены реакции гидролиза и окисления органических
веществ растений смесью серной и хлорной кислот в соотношении 10:1 при
нагревании. Основным окислителем является хлорная кислота. Безазотистые
органические вещества окисляются до воды и углекислоты, высвобождая
зольные элементы в виде оксидов. Азотсодержащие органические соединения
гидролизуются и окисляются до воды и углекислого газа, освобождают азот в
виде аммиака, который немедленно связывается серной кислотой. Таким
63
образом, в растворе находятся зольные элементы в виде оксидов и азот в форме
сульфата аммония и хлората аммония.
Метод мокрого озоления исключает потери азота, фосфора и калия в виде
их оксидов, так как растительное вещество озоляется при температуре 332°С.
Это температура кипения серной кислоты, у хлорной кислоты значительно
меньшая температура кипения - 121°С. Необходимо помнить, что при
добавлении избытка хлорной кислоты в процессе озоления происходят
значительные потери азота (до 50%).

Ход анализа
Навеску размолотого воздушно-сухого растительного материала 0,2-0,5 г,
взятую на аналитических весах с точностью до 0,0001 г помещают в колбу
Кьельдаля. Навески в колбах Кьельдаля заливают смесью серной и хлорной кислот
в объѐме 5,0-10,0 мл (соотношение 10:1) и тщательно перемешивают круговым
вращением колбы, осторожно встряхивая.
Оставляют колбы в лотке на 1,5-2 ч (можно на ночь) для первичного
озоления растительного материала при комнатной температуре.
После этого колбы устанавливают на нагревательные приборы для
дальнейшего озоления и нагревают на слабом огне до образования однородной
коричнево-бурой массы. Температуру озоления повышают до слабого кипения
раствора и продолжают озоление до полного его обесцвечивания. Если раствор
продолжает оставаться окрашенным в жѐлтый или темно-бурый цвет, колбы
охлаждают, добавляют 2-3 капли хлорной кислоты и продолжают нагревание.
Количество хлорной кислоты, добавленное сверх указанной нормы, ускоряет
процесс озоления, но приводит к существенным потерям азота в пробе.
Параллельно проводят контрольное озоление исходных реактивов без
растительной пробы в аналогичном режиме.
После окончания озоления колбы Кьельдаля охлаждают на воздухе, затем
в них приливают 10 мл дистиллированной воды и после перемешивания
содержимого вновь охлаждают, доливают около 60 мл горячей
дистиллированной воды.
Раствор из колбы Кьельдаля количественно переносят в мерную колбу на
100 мл. При этом колбу Кьельдаля многократно промывают небольшими
(около 5 мл) порциями горячей дистиллированной воды, сливая промывные
воды в мерную колбу. После охлаждения объѐм в мерной колбе доводят до
метки дистиллированной водой и после этого, закрыв пробкой, перемешивают.
В полученном методом мокрого озоления растворе определяют общий
азот, фосфор и калий по соответствующим методикам.

64
Оборудование: аналитические весы, колбы Кьельдаля, мерные колбы на 100
мл с пробками, стеклянные воронки для фильтрования, лоток, электроплитка,
пипетки на 5 и 110 мл.
Реактивы: концентрированная серная кислота H2SO4, концентрированная
хлорная кислота НСlО4, дистиллированная вода.

2.8. Определение общего азота колориметрическим методом


с реактивом Несслера
Соли ионов аммония при взаимодействии с реактивом Несслера образуют
комплексную соль желтого цвета. Интенсивность окраски раствора прямо
пропорциональна концентрации солей ионов аммония в растворе.
(NH4)2SO4 + 8KOH + 4K2(HgI4) = 2HgOHg(NH2)I + 14KI + K2SO4 + 6H2O
Такие зольные элементы, как кальций и магний, при взаимодействии с
реактивом Несслера образуют нерастворимые соединения, для устранения их
вредного влияния в раствор добавляют раствор сегнетовой соли.
Ход анализа
Из раствора, приготовленного мокрым озолением по методу К. Гинзбург,
отбирают пипеткой 1-5 мл раствора в химический стакан и в колбу на 50 мл,
добавляют 15-20 мл дистиллированной воды. В раствор в химическом стакане
бросают кусочек лакмусовой бумажки и нейтрализуют 10% раствором щелочи.
Такой же объем щелочи ушедший на нейтрализацию добавляют в колбу, к нему
приливают 2 мл 25% раствора сегнетовой соли.
Затем, тщательно перемешав раствор, к нему приливают 2 мл реактива
Несслера. Доводят дистиллированной водой до метки, оставляют на 5-7 мин. и
колориметрируют на ФЭК для определения оптической плотности раствора
через синий светофильтр при λ=400 нм. Через 10-15 мин колориметрируют при
тех же условиях, при которых строился калибровочный график.
Одновременно готовят шкалу образцовых растворов: в мерные колбы на
50 мл берут пипеткой 1,5,10,15 и 20 мл образцового раствора, разбавляют водой
до 40 мл и прибавляют 2 мл раствора сегнетовой соли, хорошо размешивая ее с
образцовым раствором. Затем во все колбы прибавляют по 2 мл реактива
Несслера, доводят содержимое колб до метки, тщательно перемешивают. Через
2-3 мин. колориметрируют, по калибровочной кривой находят концентрацию
NH4+, соответствующую измеренному значению оптической плотности, и
вычисляют содержание NH4+ по формуле

х = a∙v∙100∙0,776/(m∙b∙1000), где

х - содержание азота в растительных образцах, %; а - концентрация ионов аммония,


найденная по калибровочному графику мг; v - общий объем раствора, мл; m - масса
65
растительной навески, г; b - объем вытяжки, взятый для определения, мл; 100 -
коэффициент для перевода в %; 1000 - коэффициент для перевода граммов в
миллиграммы; 0,776 - коэффициент для перевода ионов аммония на аммиачный
азот.
Оборудование: химические стаканы, пипетки на 1, 5 и 10 мл, колбы мерные
на 50 мл.
Реактивы: 10% раствор гидроксида натрия NaOH или калия KOH,
реактив Несслера, 25% раствор сегнетовой соли KNaC4H4O6∙4Н2О,
дистиллированная вода, лакмусовая бумага.

2.9. Определение фосфора с применением


аскорбиновой кислоты (по Мерфи и Райли)
Метод основан на образовании желтого цвета фосфорно-молибденового
комплекса в кислой среде, который восстанавливается в присутствии катализатора
сурьмы аскорбиновой кислотой. Окраска переходит в голубой цвет. Максимум
развития голубой окраски достигается через 10 мин. Окраска устойчива в течение
суток. Метод обладает высокой чувствительностью. Определению сильно мешают
кремниевая кислота и ионы железа.
При использовании этого метода для определения фосфора в пробах,
характеризующихся высоким содержанием кремния (солома злаковых культур),
необходимо освобождать от него растворы золы фильтрованием.

Ход анализа
Для определения берут 1,5 или 10 мл раствора и помещают в мерную
колбу на 100 мл. Приливают около 20-30 мл дистиллированной воды, три капли
бета-динитрофенола и нейтрализуют 10% раствором гидроксида натрия до
золотисто-желтого цвета. Окраску затем снимают прибавлением 1-2 капель
10% соляной кислоты. (Нейтрализацию можно провести и по фенолфталеину
до слабо-розового окрашивания)
К нейтрализованному раствору добавляют 20 мл реактива Б, доводят
дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Спустя 10 мин, когда закончится образование синей окраски,
фотометрируют при красном светофильтре в кюветах шириной 20 мм. Окраска
устойчива в течение 24 ч.
Содержание фосфора в анализируемых пробах находят по калибровочной
кривой. Для построения калибровочной кривой в серию пронумерованных
мерных колб на 100 мл берут 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6 и 7 мл стандартного раствора
фосфата с содержанием Р205 0,01 мг/мл (приготовленного по методу Труога —
Мейера). В колбы мерным цилиндром добавляют по 20-30 мл дистиллированной
воды и 20 мл реактива Б, а затем доводят объем в колбах дистиллированной водой
66
до черты и перемешивают. Через 10 мин просматривают оптическую плотность на
ФЭК. Затем вычерчивают график.
Содержание фосфора в испытуемых пробах находят по калибровочной
кривой на основании измеренной оптической плотности. Найденные значения
подставляют в формулу

Х = а∙ V∙100/(Н∙V1), где

х - количество Р2О5, %; а - количество фосфора по графику, мг; Н - навеска


растительного материала для озоления, (200 мг); V - количество раствора,
полученного в результате озоления, мл; V1 - объем испытуемого раствора для
окрашивания, мл; 100 - коэффициент для выражения результатов анализа в
процентах.
Оборудование: мерные колбы на 100, 200, 500 и 1000 мл, пипетки на 1, 5 и 10
мл, мерные цилиндры на 50 мл, электроплитка, ФЭК.
Реактивы: бета-динитрофенол или фенофталеин, 10% раствор соляной
кислоты HCl, 10% раствор гидроксида натрия NaOH, реактив А (смесь растворов
молибдата аммония (NH4)2MoO4 (6 г в 200 мл дистиллированной воды), сурьмяно-
виннокислого калия K(SbO)C4H4O6∙H2O (0,145 г в 100 мл подогретой
дистиллированной воды) и 500 мл 5 н. раствора H2SO4; смесь доводится
дистиллированной водой до 1 л), реактив Б (свежий раствор 1,056 г аскорбиновой
кислоты в 200 мл реактива А), стандартный раствор KH2PO4, приготовленный по
методу Труога-Мейера.

2.10. Определение калия в растениях


В настоящее время для определения калия в растениях используют метод
пламенной фотометрии, который дает надежные и устойчивые результаты. Метод
основан на измерении светового излучения атомов калия при возбуждении их
электронных оболочек в пламени ацетилена. Мокрое озоление растительного
материала полностью исключает потери калия. Результат определения после
сухого озоления зависит от тщательности аналитика, и не исключены потери
калия в виде оксида калия при высокой температуре озоления.

Ход анализа
Раствор золы после мокрого или сухого озоления помещают в химический
стакан емкостью 50 мл и вводят в засасывающее устройство пламенного
фотометра. При введении растворов, содержащих калий, пламя окрашивается в
желтый цвет. В течение 30 сек. устанавливается стрелка прибора, показания
снимают по амперметру и записывают.

67
Содержание калия в анализируемом растворе находят по калибровочной
кривой. Интенсивность светового потока пламенного фотометра
пропорциональна содержанию атомов калия в растворе. Чувствительность
метода зависит от прибора, но она не менее 0,01 мкг К20 на 1 мл.
Серию образцовых растворов сравнения для построения калибровочной
кривой готовят путем разбавления основного раствора хлорида калия, содержащего
1 мг/мл калия в пересчете на его оксид. В десять мерных колб на 50 мл, проливают
20 мл дистиллированной воды и последовательно добавляют 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0 мл
раствора хлорида калия, содержащего 1 мг/мл калия в пересчете на его оксид.
Образцовые растворы сравнения вводят по возрастающей концентрации в
засасывающее устройство пламенного фотометра и записывают показания прибора,
соответствующие концентрации.
По результатам фотометрирования растворов сравнения строят
градуированный график. По оси абсцисс откладывают концентрации калия в
растворах сравнения в мг/мл, а по оси ординат - соответствующие им показания
пламенного фотометра.
Процентное содержание К2О рассчитывают по формуле:

К20[%] = а∙V∙100/(Н∙1000), где

а - К2О мг/мл по графику; V - объем исследуемого раствора, мл; 100 -


коэффициент для выражения данных в процентах; 1000 - коэффициент для
перевода г навески в мг, т.е. для приведения данных к одним единицам; Н -
навеска воздушно-сухого вещества, г.
Если концентрация исследуемого раствора выше приведенной на графике
и прибор «зашкаливает», необходимо сделать соответствующее разведение.
Для этого берут пипеткой 10-20 мл испытуемого раствора в мерную колбу на
50 мл, доливают до метки дистиллированной водой и проводят определение.
Разведение учитывают при расчете результатов.
Оборудование: химический стакан на 50 мл, пламенный фотометр, мерные
колбы на 50 мл и 1л, мерный цилиндр, пипетка на 1 мл, аналитические весы.
Реактивы: раствор хлорида калия КСl, содержащий 1 мг/мл калия в
пересчете на его оксид (1,5826 г перекристаллизованного хлорида калия
растворяют в мерной колбе на 1 л дистиллированной водой до метки).

2.11. Определение кальция и магния в растениях после сухого и


мокрого озоления
При определении кальция и магния в растениях аналитические
растительные пробы озоляют либо сухим, либо мокрым способом.

68
Кальций и магний определяют в одном растворе с помощью трилона Б. В
щелочной среде они образуют с раствором трилона Б недиссоциирующие,
устойчивые комплексные соединения. В присутствии индикаторов хромогена
черного и мурексида количество пошедшего на связывание ионов кальция и
магния трилона Б известной концентрации определяют по изменению окраски
растворов. Сначала определяют сумму катионов кальция и магния в
присутствии индикатора хромогена черного, а в присутствии индикатора
мурексида определяют количество кальция. Количество магния определяют
вычитанием результатов второго титрования из первого.

Ход анализа
Реактивы готовят аналогично п. 1.4.8.
Из колбы №1 берут 30 мл раствора золы, помещают в химический стакан
или в коническую колбу на 100-150 мл. Стакан или колбу подогревают на плитке
или газовой горелке примерно до 60-700С и приливают в него 3 мл 5% раствора
хлорида железа. Содержимое нагревают почти до кипения, после чего снимают
емкость с огня и доливают 30 мл 10% раствора уротропина для осаждения
полуторных оксидов и фосфатионов. Реакцию среды в стакане доводят до 4-5,5 по
лакмусовой бумаге.
Стакан снова помещают на нагревательный прибор и нагревают его
содержимое до 800С, после чего жидкость в стакане охлаждают и количественно
переносят в мерную колбу на 100 мл (колба №2) и водят ее объем
дистиллированной водой до метки. После перемешивания раствор фильтруют.
Берут 20-40 мл фильтрата, содержащего 2-10 мг соли оксида кальция, помещают в
коническую колбу и приливают 60-80 мл дистиллированной воды. Для устранения
вредного влияния марганца на результаты титрования в колбу приливают 1 мл 5%
раствора солянокислого гидроксиламина и доводят рН раствора до 12 по
лакмусовой бумажке 10% раствором гидроксида натрия. Для устранения вредного
влияния меди в колбу прибавляют 50 мг диэтилдитиокарбамата натрия. После
перемешивания вносят 50 мг сухого мурексида, растертого в ступке с поваренной
солью.
Когда раствор в колбе окрасится в розовый цвет, титруют Са 2+ раствором
трилона Б до перехода окраски от розовой к сиреневой и регистрируют расход
титранта по бюретке.
Для определения суммарного содержания магния и кальция из колбы №2
берут 20-40 мл фильтрата и помещают в коническую колбу на 250 мл,
добавляют 60-80 мл дистиллированной воды и 1 мл 5% раствора
гидроксиламина (для связывания марганца). Подщелачивают раствор 10%
раствором гидроксида натрия до рН 9-9,5 по индикаторной бумаге.
69
Для создания щелочной реакции в колбу прибавляют 10 мл хлоридно-
аммиачного буферного раствора, а для устранения вредного влияния меди 50
мг диэтилдитиокарбамата натрия. После перемешивания содержимого в колбу
вносят 10-15 мг хромогена черного растѐртого с хлоридом натрия и титруют
0,02 н. раствором трилона Б до перехода окраски от вишнево-красной к синей.
Количество эквивалентов кальция или магния в анализируемой пробе,
вычисляют по формулам

X (СаО) = а∙Т∙0,40∙V1∙V3∙100/(Н∙V2∙V4),
X (МgО) = а∙Т∙0,243∙V1∙V3∙100/(Н∙V2∙V4), где

а - количество 0,02 н. трилона Б, пошедшего на титрование, мл; Т - поправка к


титру раствора трилона Б; Н - навеска растительного материала, взятого на
озоление, мг; 0,40 - количество СаО (мг), отвечающее 1 мл трилона Б; 0,243 -
количество MgO (мг), отвечающее 1 мл трилона Б; V1 - объем раствора золы в
колбе №1, мл; V2 - объем раствора золы, взятый из колбы №1 для осаждения
полуторных окислов и фосфатов, мл; V3 - объем отфильтрованного раствора золы,
полученного после осаждения полуторных окислов и фосфатов, мл (колба №2); V4
- объем фильтрата, взятого для титрования, мл; 100 - коэффициент для выражения
результатов анализа в процентах.
Оборудование: весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим
пределом взвешивания 200 г и 4-го класса точности с наибольшим пределом
взвешивания 500 г; плитка или газовая горелка; пипетки и бюретки 2-го класса
точности; стаканы химические на 150 мл или колбы конические на 100, 150 и
250 мл, воронка стеклянная для фильтрования, фильтровальная бумага.
Реактивы: кислота соляная HCl, разбавленная (1:1 и 1:4), 2 н. раствор
гидроксида натрия NaOH, 5% раствор гидрохлорида гидроксиламина
(NH3OH)Cl, диэтилдитиокарбамат натрия C5H10NS2Na, 0,1 н раствор сульфата
магния MgSО4 индикатор хром кислотный темно-синий, трилон Б
C10H14O8N2Na2∙2H2O 0,05 н раствор - титрованный по 0,1 н. раствору сульфата
магния, спирт этиловый С2Н5ОН (разбавленный дистиллированной водой 1:5),
хлорид аммония кристаллический NН4Сl, аммиак водный NH4OH, 5% раствор
хлорида железа, бумага лакмусовая, уротропина раствор 10%, хлорид натрия
кристаллический, вода дистиллированная.

2.12. Определение жира в растениях методом обезжиренного остатка


Метод обезжиренного остатка основан на извлечении жира эфиром из
навески известной массы растительного материала, причем растительная проба
подвергается воздействию периодически сменяющегося эфира, который
растворяет и удаляет жир из исследуемого объекта. Обезжиренную навеску
70
растительного материала высушивают и взвешивают. По убыли массы
растительного материала вычисляют содержание в нем жира. Обезжиривание
проводят в аппарате Еременко и Сокслета.

Подготовка растительной пробы к анализу


Для ускорения процесса экстракции жира из растительной пробы
необходимо измельчение материала, но не очень тонкое. Обычно материал с
низким содержанием жиров (до 10%) зерновые и вегетативные органы -
размалывают на мельнице «Пируэт» и пропускают через сито в 1 мм без остатка.
Измельчение семян с высоким содержанием жиров производить таким образом
нельзя из-за больших потерь масла при размоле. Поэтому такие пробы тщательно
растираются в фарфоровой ступке. Предварительно растирают небольшое
количество исследуемого материала, при этом происходит насыщение
поверхности ступки и пестика маслом, а материал выбрасывают.
Рекомендуется брать навеску материала в воздушно-сухом состоянии и в
отдельной пробе определять абсолютно сухой вес. Высушивание материала при
повышенной температуре допускается только в вакууме или токе индифферентного
газа (углекислом газе и водороде), чтобы исключить окисление на воздухе
маслянистых веществ и изменение их растворимости. Избыточное присутствие
влаги в анализируемом материале увеличивает извлечение примесей и затрудняет
извлечение самого жира.

Ход анализа
Для технических целей допускается выполнять анализы с
предварительным подсушиванием взятой навески в обычном сушильном шкафу
при температуре 100-105°С в течение 3 ч. После этого бюкс с навеской
охлаждают в эксикаторе и взвешивают на аналитических весах.
Этот способ сушки не пригоден при анализе материалов с высоким
процентом жиров и высоким содержанием непредельных жирных кислот.
Экстракцию жира необходимо проводить сразу же после измельчения
анализируемого материала, чтобы избежать процессов окисления жира.
Хранить растертые образцы можно только в токе инертного газа. Сушить
материал в термостате при доступе воздуха нельзя, особенно материал с
высоким процентом жира. Ненасыщенные жирные кислоты, которые входят в
состав растительных жиров, при нагревании на воздухе присоединяют кислород
по месту двойной связи, в результате увеличивается вес извлекаемого масла и
изменяется его качество.
Навеску растительного материала помещают в предварительно
подготовленный пакет или патрон из плотной фильтровальной бумаги размером
71
10х2 см. Патрон готовят, навертывая фильтровальную бумагу на соответствующую
стеклянную пробирку. Основание патрона на 0,5 см перекрывает основание
пробирки. Его стягивают и завязывают обезжиренной ниткой. Надежные
результаты дает также использование стеклянных патронов с пористыми
фарфоровыми пластинками. Уплотнять навеску в патроне не следует, так
достигается более равномерная и быстрая экстракция жира. Сверху навеска
закрывается обезжиренной ватой. Таким путем устраняются потери материала при
разбрызгивании и равномерное распределение эфира по поверхности навески.
Навеска растительного материала определяется его природой: для
низкомасличных образцов с содержанием жира до 10% она составляет около 10 г, а
для высокомасличных с содержанием жира более 40% - 1-3 г. Низкое содержание
жира наблюдается в вегетативных органах, зерне зерновых и зернобобовых
культур, исключая арахис и сою.
Патрон с навеской помещают в экстрактор аппарата Сокслета. Аппарат
состоит из трех частей: круглодонной стеклянной колбы для растворителя,
экстрактора с двумя стеклянными трубками и шарикового холодильника. По
объему колбы и экстракторы соответствуют друг другу и имеют стандартный
объем 100, 200, 400 мл. Все части прибора соединяются между собой шлифами.
Аппараты монтируют в блок по 4-6 на один нагревательный прибор. Для
подогрева растворителя используют водяные бани с терморегулятором.
Перед определением круглодонные колбы доводят в термостате до
постоянного веса, взвешивают на аналитических весах и хранят в большом
эксикаторе. Для работы в колбу приливают 2/3-3/4 объема сухого чистого
эфира. Соединяют колбу с экстрактором и холодильником. Подготовленный
аппарат ставят на водяную баню, включают подогрев и холодильник.
Нагревание и кипение эфира регулируют так, чтобы каждое сливание
эфира из экстрактора в колбу происходило примерно через 6 мин. Как слишком
слабое, так и чрезмерно сильное кипение замедляет извлечение жира.
Температуру в водяной бане поддерживают на уровне 45-50°С.
При кипении пары эфира поднимаются по узкой боковой трубочке,
заполняют весь объем экстрактора и поднимаются по шарикам внутренней
трубки холодильника. Там пары эфира конденсируются, стекают по трубке
вниз, попадая в патрон с навеской или на пакет. Когда уровень эфира
поднимается выше верхнего колена сифонной трубочки, эфир с извлеченным
жиром стекает в круглодонную колбу. Регулировать температуру экстракции
можно погружением колбы в водяную баню, снижением водяного охлаждения
в воздушном холодильнике, покрытием колбы и сифонов асбестовой тканью.
Чтобы капли конденсированной влаги на поверхности холодильника не

72
попадали на шлифы, экстракционную трубку обматывают несколько раз
шпагатом, концы которого свободно свисают по стенкам трубки.
При нормальной работе прибора извлечение из образцов с малым
содержанием жира обычно заканчивается за 4-б часов, а с большим - за 5-8 часов.
Не рекомендуется проводить экстракцию более 12 часов. Конец экстракции
определяют следующим образом: отсоединяют колбу от трубки и на чистое часовое
стекло берут несколько капель эфира, стекающего из экстрактора. После испарения
эфира стекло должно остаться абсолютно чистым, если на стекле образуется налет,
экстракция считается незаконченной. При очень длительной экстракции появление
налета является результатом извлечения небольшого количества трудно
растворимых в эфире веществ, а не жира.
После окончания экстракции колбу отсоединяют от экстрактора,
соединяют с холодильником и отгоняют основную массу эфира на водяной
бане при температуре 50-60°С.
Содержание жира в процентах вычисляют по формуле:

х = (в - в1)·100/(в - а), где

а - масса бюкса и пустого пакета после сушки, г; в - масса бюкса и пакета с


навеской после высушивания до экстракции, г; в1 - масса бюкса и пакета с
навеской после высушивания и экстракции, г; а - масса растительной навески,
взятая для анализа, г; 100 - коэффициент для перевода в проценты.
Оборудование: бюксы, мельница, фарфоровая ступка с пестиком, эксикатор,
сушильный шкаф, весы технические и аналитические, аппарат Еременко и
Сокслета, патроны из фильтровальной бумаги, водяная баня с терморегулятором,
холодильник, часовые стекла.
Реактивы: эфир, хлорид кальция CaCl2.

2.13. Определение сырой клетчатки по методу Кюршнера и Ганека


Метод определения клетчатки в растениях основан на том, что при
обработке аналитической пробы растительного материала смесью
концентрированных азотной и уксусной кислот происходит растворение жиров,
гидролиз белков, окисление и нитрование многих органических соединений,
сопровождающих клетчатку, не затрагивая реакциями разложения саму
клетчатку.

Ход анализа
На аналитических весах берут навеску 1 г воздушно-сухого растительного
материала, измельченного на 3-4 мм (при анализе сочных кормов и силоса навеска
составляет 4-5 г) и помещают в коническую колбу вместимостью 100-150 мл с
73
пришлифованным шариковым обратным холодильником. Одновременно
определяют влажность растительного материала, для чего в стеклянном бюксе
берут навеску 4-5 г растительного вещества и руководствуются вышеизложенными
методиками.
В конической колбе навеску заливают 25-30 мл смеси уксусной и азотной
кислот, колбу ставят на кипящую водяную баню и соединяют с обратным
холодильником. Гидролиз сопутствующих клетчатке органических соединений
проводят в течение 1-1,5 ч (для бобовых культур 1,5-2 ч). Заканчивают его, когда
растительный материал в колбе полностью побелеет.
Свободную клетчатку в колбе промывают 3-4 раза горячей
дистиллированной водой (по 40-50 мл). Затем клетчатку количественно смывают
дистиллированной водой в стеклянный тарированный тигель Гуча с пористым
дном (№ 1 или 2) или в воронку с пористой перегородкой для фильтрования под
разрежением. Для ускорения фильтрования в тигель (перед его высушиванием и
тарированием) кладут на дно кружок неплотной фильтровальной бумаги.
Осадок на фильтре тигля Гуча промывают 3-4 раза горячей
дистиллированной водой (до исчезновения запаха уксусной кислоты). Новые
порции воды приливаются лишь после полной фильтрации предыдущей.
Необходимо тщательно смывать клетчатку со стенок тигля. Затем клетчатку в
тигле промывают 5 мл этилового спирта и дважды такими же объемами серного
эфира для удаления остатков смол, жиров, воска, дубильных и красящих веществ.
После окончания промывания тигель с клетчаткой высушивают в
термостате при температуре 105°С до постоянной массы.
Содержание клетчатки (X) в % на сухое вещество вычисляют по формуле

Х = (а – б)∙100/Н, где

а - масса тигля с осадком, г; б - масса тигля с кружочком фильтровальной


бумаги, г; Н - навеска исследуемого вещества, г.
Для перерасчета результатов анализа на абсолютно сухое вещество,
вычисленное содержание клетчатки, умножают на 100/(100 – у), где y - влажность
анализируемого вещества в %.
Оборудование: аналитические весы, стеклянные бюксы, коническая колба
на 100-150 мл с пришлифованным шариковым обратным холодильником,
водяная баня, тигель Гуча или воронка с пористой перегородкой, термостат,
фильтровальная бумага плотная.
Реактивы: 100 частей 80% уксусной кислоты смешивают с 5 частями
концентрированной азотной кислоты плотностью 1,4, этиловый спирт, серный
эфир, дистиллированная вода.

74
2.14. Определение общего содержания серы в растениях
Определение серы в растениях основано на высвобождении ее из
органических соединений путем мокрого озоления вещества в азотной кислоте с
перекисью водорода и дальнейшим осаждением образовавшейся серной кислоты
хлористым барием. Образовавшийся осадок сульфата бария выделяют из
раствора фильтрованием и учитывают весовым методом.
Ход анализа
При помощи пробирки на аналитических весах берут навеску
тонкоизмельченного растительного материала массой 1 г и переносят на дно
колбы Кьельдаля. Колба Кьельдаля должна иметь шлиф для плотного соединения
с обратным водяным холодильником. В колбу приливают 15 мл
концентрированной азотной кислоты, соединяют ее с обратным холодильником и
оставляют на 5-10 ч для медленного взаимодействия, кислоты с растительным
веществом. После этого в холодильник пускают холодную воду и ведут озоление
при слабом подогревании колбы Кьельдаля тазовой горелкой. При сильном
разогревании возможен выброс озоленного вещества через холодильник. Сильное
кипение недопустимо также и в связи с выделением при этом оксидов серы и
улетучивания их вместе с парами воды.
Концентрированный пероксид водорода приливают по каплям через
холодильник в колбу Кьельдаля с озоленным растительным материалом после
окончания выделения бурых паров оксидов азота. Озоление заканчивают, когда
раствор в колбе станет прозрачным и бесцветным, на что уходит не менее 8 ч.
Затем в колбу Кьельдаля с раствором золы приливают 10-20 мл
дистиллированной воды, и раствор фильтруют для удаления кремниевой кислоты
через плотный фильтр в мерную колбу на 200 мл. Колбу Кьельдаля многократно
промывают дистиллированной водой небольшими порциями, каждый раз собирая
промывные воды на фильтр. Осадок кремниевой кислоты на фильтре еще
несколько раз промывают дистиллированной водой, затем фильтрат в колбе на
200 мл доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и отбирают
пипеткой в два химических стакана пробы раствора по 50-100 мл (в зависимости
от ожидаемого содержания серы в анализируемом веществе), подкисляют соляной
кислотой и осаждают серную кислоту хлоридом бария.
Содержание серы в пересчете на серный ангидрид в процентах
вычисляют по формуле
Х = (а - (б + в)∙0,3429∙100/Н,
где а - масса тигля с прокаленным сульфатом бария, г; б - масса
прокаленного тигля, г; в - масса золы фильтра, г; 0,3429 - коэффициент
пересчета сульфата бария на серный ангидрид; 100 - множитель для

75
выражения результатов в процентах; Н - навеска растительного вещества,
отвечающая объему раствора, взятого для осаждения серной кислотой.
Оборудование: аналитические весы, пробирки, химические стаканы на 50
и 100 мл, мерные колбы на 200 мл, пипетки на 10 мл, тигель, стеклянная
воронка для фильтрования, плотная фильтровальная бумага, колба Кьельдаля,
обратный водяной холодильник, газовая горелка или электроплитка.
Реактивы: азотная кислота HNO3 концентрированная, пероксид водорода
Н202 концентрированный, соляная кислота HCl, хлорид бария BaCl2,
дистиллированная вода.

2.15. Определение микроэлементов в растениях


Анализ растений на содержание микроэлементов имеет большое значение.
Это связано с необходимостью правильно регулировать количество
микроэлементов в рационах скота и птицы, с определением обеспеченности
микроэлементами растений, с контролем за правильностью использования
микроудобрений.
Определение микроэлементов в растительном материале состоит из двух
основных этапов: 1) минерализации анализируемого растительного материала и
получении раствора золы; 2) определении микроэлементов в растворе золы.
Из всех известных методов минерализации исходного растительного
материала при массовых анализах наиболее удобен сухой способ озоления
растительного материала. Он менее трудоемок, не требует больших количеств
очищенных реактивов, используемых при мокром озолении.

2.15.1. Фотоколориметрический метод определения меди с использованием


диэтилдитиокарбамата
Метод основан на получении окрашенного комплекса меди с
диэтилдитиокарбаматом свинца, экстрагировании его четыреххлористым
углеродом, затем фотометрировании экстракта. Железо, марганец и некоторые
другие элементы с диэтилдитиокарбаматом свинца окрашенных комплексов не
образуют. Только медь при взаимодействии с этим реагентом образует прочный
бесцветный комплекс. Медь определяют при pH около 1,5 с целью получения
прозрачных растворов. Требуемую кислотность получают прибавлением к
раствору золы лимоннокислого аммония. Цитрат аммония повышает pH среды и
препятствует выпадению из раствора полуторных окислов вследствие
образования цитратных комплексов.

Ход анализа
Готовят раствор диэтилдитиокарбамата свинца в четыреххлористом углероде
- 664 г диэтилдитиокарбамата натрия помещают в делительную воронку,
76
добавляют 1 л четыреххлористого углерода, 100 мл раствора нитрата свинца (486
мг соли растворяют в 100 мл бидистиллированной воды). Полученный в
делительной воронке раствор встряхивают в течение 5 мин. После разделения фаз
нижний слой четырххлористого углерода с растворенным в нем
диэтилдитиокарбаматом свинца фильтруют через сухой фильтр с белой лентой в
сухую склянку из темного стекла. Раствор хранят в холодильнике.
Готовят 0,02% раствор дитизона в четыреххлористом углероде: 0,1 г
дитизона (взвешивают на аналитических весах) помещают в делительную
воронку на 250 мл, приливают 100 мл четыреххлористого углерода, закрывают
пробкой и встряхивают на ротаторе 15 мин. Полученный раствор переносят в
делительную воронку на 1 л, приливают 250 мл разбавленного аммиака (1,25
мл концентрированного аммиака в 250 мл бидистиллированной воды) и
встряхивают на ротаторе 3-5 мин. Дитизон переходит в аммиачный слой и
окрашивает его в оранжевый цвет.
Слой четыреххлористого углерода отбрасывают, а аммиачный раствор
дитизона промывают небольшими порциями (по 5-10 мл) четыреххлористого
углерода, пока последний не окрасится в зеленый цвет. Затем к аммиачному
раствору дитизона добавляют 6,2 мл серной кислоты (1:5), встряхивают, добавляют
500 мл четыреххлористого углерода, снова встряхивают, дают слоям разделиться и
сливают слой четыреххлористого углерода с растворенным в нем дитизоном в
чистую делительную воронку.
Полученный раствор промывают водой 3 раза порциями по 250-300 мл для
удаления остатков серной кислоты. Затем раствор дитизона в четыреххлористом
углероде фильтруют через сухой, очищенный от микроэлементов фильтр в
склянку из темного стекла и хранят в холодильнике. При длительном хранении
реактив разлагается. Качество раствора дитизона необходимо контролировать.
Для этого в делительную воронку помещают 5 мл реактива, приливают 25 мл.
0,01 М раствора аммиака (0,7 мл 25% раствора аммиака на 1 л дистиллированной
воды). Органический слой должен быть бесцветным. Раствор, окрашенный в
бурый цвет, непригоден для анализа.
Рабочий раствор готовят в день проведения анализа для построения
градуировочного графика: 5 мл запасного стандартного раствора меди помещают в
мерную колбу на 250 мл и доводят до метки 0,3 М или разбавленной (1:15) соляной
кислотой. Полученный рабочий раствор содержит меди 10 мкг/мл.
В делительную воронку на 50 мл помещают 2-10 мл раствора золы (в
зависимости от содержания меди). Из бюретки к пробе добавляют 0,3 М соляную
кислоту или разбавленную (1: 15), чтобы общий объем составил 10 мл. Затем
приливают 5 мл 10% раствора лимоннокислого аммония, перемешивают.
Прибавляют из бюретки 15 мл диэтилдитиокарбамата свинца в четыреххлористом
77
углероде и встряхивают 2 мин. После разделения по фазам нижний слой
четыреххлористого углерода сливают в кювету для колориметрирования.
Используют кювету с толщиной просвечиваемого слоя 2 см. Определение
проводят при λ=436 нм (синий светофильтр) относительно четыреххлористого
углерода. Массовую концентрацию меди в анализируемой пробе золы определяют
по градуировочному графику и вычитают из него результат холостого опыта.
В делительные воронки вносят пипеткой 0; 0,2; 0,5; 1 и 2 мл рабочего
раствора меди и доводят объем 0,3 М соляной кислотой или разбавленной (1:15) до
10 мл. Массовая концентрация в делительных воронках соответствует 0, 2, 5, 10 и
20 мг меди. Фотометрирование проводят в тех же условиях, что и при анализе
растворов золы. На основании полученных данных строят градуировочный график.
На оси абсцисс обкладывают массовую концентрацию меди в образцовых
растворах в мкг, на оси ординат — значения оптической плотности.
Вычисление результатов анализа. Содержание элемента в анализируемом
материале вычисляют по формуле:

Х = (С∙А)/(Н∙а)∙((100/(100 – В)), где

X - массовая концентрация элемента в анализируемом материале, млн-1 (мг/кг на


абсолютно сухое вещество); С - массовая концентрация элемента, найденная по
градуировочному графику, мкг; Н - навеска анализируемого материала; а - объем
анализируемого раствора золы, мл; А - общий объем исходного 100 раствора золы,
мл; 100/(100 – В) - поправка на гигроскопическую влажность анализируемого
вещества, % (В - гигроскопическая влага).
Оборудование: ФЭК, весы аналитические, колбы мерные на 100 и 1000
мл, делительные воронки вместимостью 50 и 1000 мл, механический
встряхиватель, пипетки на 2,5 и 10 мл, бюретка на 50 мл.
Реактивы: четыреххлористый углерод СCl4, диэтилдитиокарбамат натрия,
нитрат свинца Pb(NO3)2, 0,02% раствор дитизона (дифенилтиокарбазона), 0,3 М
раствор соляной кислоты HCl, медь сернокислая CuSO4, аммиак водный, 10%
раствор цитрата аммония (очищенный дитизоном), вода бидистиллированная.

2.15.2. Фотоколориметрический метод определения марганца с


использованием периодата калия
Периодатный метод основан на окислении Мп2+ в кислой среде
метапериодатом натрия или калия до окрашенного перманганат иона и
измерении оптической плотности полученного раствора на ФЭК. Определению
мешают хлориды и остатки органического вещества. При упаривании раствора
золы с концентрированной азотной кислотой мешающие хлориды и остатки

78
органического вещества удаляются. Для устранения влияния железа окисление
марганца проводят в фосфорнокислом растворе.
Ход анализа
Рабочий стандартный раствор марганца (раствор Б) готовят из запасного
стандартного раствора марганца (раствор А): в мерную колбу на 100 мл
помещают 10 мл раствора А, объем до метки доводят 9% раствором
ортофосфорной кислоты. Полученный раствор содержит 100 мкг/мл марганца.
В день проведения анализа из этой колбы берут 10 мл (раствора Б) и помещают
в мерную колбу на 100 мл. Объем до метки доводят 9% ортофосфорной
кислотой (раствор В). Полученный раствор содержит 10 мкг/мл марганца.
В термостойкий стакан помещают 2-15 мл анализируемого раствора золы
(в зависимости от содержания марганца), прибавляют 5 мл концентрированной
азотной кислоты и осторожно упаривают на плитке. Остаток смачивают 5 мл
концентрированной азотной кислоты и упаривают досуха (последнюю
операцию проводят 3 раза).
К сухому остатку добавляют из бюретки 20 мл 9% раствора ортофосфорной
кислоты, нагревают до полного растворения остатка. Полученный раствор
переносят в мерную пробирку на 25 мл. Пробирки (в штативе) помещают в
водяную баню. Через 5 мин после нагревания раствора вводят 5 мл 2% раствора
периодата калия, перемешивают и оставляют на бане в течение 30 мин.
Окрашенный раствор охлаждают, доводят объем до 25 мл дистиллированной
водой, перемешивают и измеряют оптическую плотность в кювете с толщиной
просвечиваемого слоя 5 см при λ=536 нм (зеленый светофильтр) относительно
нулевого раствора шкалы образцовых растворов. Массовую долю марганца в
анализируемых растворах находят по градуировочному графику, вычитая из нее
результат холостого опыта.
Для приготовления шкалы образцовых растворов берут мерные пробирки
вместимостью 25 мл, помещают в них указанные в таблице 16 объемы
стандартного раствора марганца (раствора В) и доводят объем раствора до 20 мл
9% раствором ортофосфорной кислоты.
По результатам фотометрирования шкалы образцовых растворов строят
градуировочный график. На оси абсцисс откладывают массовую концентрацию
марганца в растворе сравнения (млн-1, мг/кг), а на оси ординат - отсчет
измерительного прибора. Вычисление результатов проводят по формуле,
аналогичной формуле для фотометрического определения меди в п.2.16.1.

79
Таблица 16 - Приготовление шкалы образцовых растворов для
фотометрического определения марганца
№ Объем раствора Массовая концентрация Массовая концентрация марганца
раств В, мл марганца в растворе в растворе сравнения в пересчете
ора сравнения, мкг/мл на массовую долю марганца в
растительном образце, млн-1, мг/кг
1 0 0 0
2 2 2 20
3 5 5 50
4 7 7 70
5 10 10 100
6 20 20 200

Оборудование: ФЭК, весы аналитические, плитка этернитовая, водяная


баня, термостойкие стаканы на 50 мл, пипетки на 2, 5, 10 и 15 мл, бюретка на 50
мл, пипетки на 25 мл.
Реактивы: азотная кислота концентрированная HN03, 9% (по объему)
раствор ортофосфорной кислоты Н3Р04, запасной стандартный раствор
марганца (раствор А) (в 1 л воды растворяют 4,338 г пятиводного сульфата
марганца MnSO4∙5H2O; полученный раствор содержит 1мг/мл марганца),
свежеприготовленный 2% раствор периодата KJО4 в 9% ортофосфорной
кислоте (периодат калия), 10% раствор тиосульфата натрия Na2S2O3,
дистиллированная вода.

2.15.3. Фотометрический метод определения железа с использованием


ортофенантролина
Метод основан на получении окрашенного комплекса железа с
ортофенантролином и на последующем измерении его оптической плотности на
ФЭК. При этом образуется высокоспецифический окрашенный комплекс и
практически ни один элемент не мешает определению железа. Определению
мешают орто- и пирофосфаты, содержание которых в пробах не должно
превышать соответственно 20 и 50 мкг/мл. Комплекс образуется в присутствии
восстановителя гидроксиламина, который удобен, ввиду устойчивости и
длительности хранения его растворов. Для уменьшения вредного влияния
пирофосфата на развитие окраски проводят колориметрирование не раньше, чем
через 1 ч после смешивания реактивов.
Для устранения действия ортофосфатов в раствор вводят цитраты; при
этом замедляется развитие окраски. Оптимальную величину pH достигают
добавлением ацетатного буфера, который добавляют последним.

80
При проведении анализов строго соблюдают порядок введения реактивов,
как в анализируемый материал, так и в шкалу стандартных растворов. Лучшие
результаты получаются, когда сначала приливают восстановитель, потом
комплексообразователь и соединения, влияющие на pH.

Ход анализа
Окрашивающий раствор готовят следующим образом: к 1 л ацетатного
буферного раствора приливают 100 мл 0,25% раствора ортофенантролина.
Полученный раствор хорошо перемешивают и хранят в течение нескольких
месяцев в посуде из химически устойчивого стекла в темном месте.
Запасной стандартный раствор железа (раствор А) готовят так: в мерную
колбу на 1 л вносят 8,635 г железоаммонийных квасцов, растворят в
дистиллированной воде, содержащей 25 мл 16% серной кислоты. Объем
доводят водой до метки; полученный раствор хранят до 1 года.
Рабочий стандартный раствор железа (раствор Б) раствора готовят
следующим образом: в мерную колбу на 100 мл помещают 20 мл раствора А и
доводят объем до метки соляной кислотой, разбавленной 1:15. Полученный
раствор, содержащий 200 мкг/мл железа, хранят до 3 мес.
В пять мерных колб на 100 мл помещают из бюретки 0, 1, 2, 5 и 10 мл
рабочего стандартного раствора Б, что соответствует массовой концентрации 0,
2, 4, 10 и 20 мкг/мл железа. Объем раствора до метки доводят разбавленной
соляной кислотой (1:15). По результатам фотометрирования образцовых
растворов строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают
массовую концентрацию железа, мкг/мл, а на оси ординат - значение оптической
плотности.
В мерные колбы на 50 мл берут пипеткой 2-5 мл раствора золы (в
зависимости от содержания в них железа), приливают в колбу по 2 мл 10%
раствора гидроксиламина, перемешивают, дают раствору постоять 5 мин,
затем добавляют по 10 мл окрашивающего раствора. Объем раствора доводят
до метки дистиллированной водой, перемешивают и проводят измерение
оптической плотности. Окраска раствора не изменяется в течение суток.
Оптическую плотность раствора измеряют при λ=510 нм (сине-зеленый
светофильтр) относительно нулевого раствора шкалы образцовых растворов,
используя кювету с толщиной просвечивающего слоя 1 см. Массовую
концентрацию железа (в млн-1, мг/кг) определяют по формуле, аналогичной п.п.
2.15.1, 2.15.2.
Оборудование: ФЭК, колбы мерные на 50, 500 и 1000 мл, пипетки на 2, 5,
10 и 20 мл, бюретка на 50 мл.

81
Реактивы: раствор соляной кислотой HCl (разбавленный 1:15), 16%
раствор серной кислоты H2SO4, азотная кислота HNO3, аммиак водный NH4OH,
ацетатный буферный раствор (136 г трехводного ацетата натрия
CH3C00Na∙3H20 растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе на 1 л,
вводят 120 мл ледяной уксусной кислоты CH3C00Н и доводят объем в колбе до
метки), 10% раствор гидроксиламина, 2% раствор нитрата аммония NH4NO3, 1%
раствор нитрата серебра AgNO3, 0,25% раствор ортофенантролина,
железоаммонийные квасцы FeNH4(SO4)2∙12H2O).

2.15.4. Фотоколориметрический метод определения цинка


с использованием дитизона
Метод основан на получении окрашенного комплекса цинка с дитизоном, в
присутствии которого в нейтральной среде образуется пурпурно-красный
однозамещенный дитизонат цинка, хорошо экстрагирующийся органическими
растворителями (например, четыреххлористым углеродом). Затем
колориметрируется без удаления избытка дитизона. Мешающие определению
цинка катионы меди, свинца, серебра и некоторых других микроэлементов
предварительно связываются тиосульфатом в прочные соединения и остаются в
водной фазе. Оптимальное значение pH достигается предварительной
нейтрализацией анализируемого раствора прибавлением ацетатного буфера.

Ход анализа
Рабочий раствор дитизона (0,0012%) готовят непосредственно перед
анализом следующим образом: 30 мл запасного раствора помещают в сухую
мерную колбу на 500 мл, объем до метки доводят четыреххлористым углеродом.
Запасной стандартный раствор цинка А готовят следующим образом: в
мерную колбу на 1 л вносят 1 г гранулированного цинка и растворяют его в 7 мл
разбавленной 1:1 соляной кислоты. Объем раствора до метки доводят
дистиллированной водой. Полученный раствор, содержащий 1 мг/мл цинка, хранят
до 1 года.
В день проведения анализа готовят рабочий стандартный раствор цинка Б
- 10 мл запасного стандартного раствора цинка А переносят в мерную колбу
вместимостью 100 мл, объем до метки доводят 0,3 н. соляной кислотой или
соляной кислотой, разбавленной 1:15. Полученный раствор содержит 10 мкг/мл
цинка. Рабочий стандартный раствор цинка В готовят также в день анализа
следующим образом: в мерную колбу на 100 мл помещают 10 мл раствора Б.
Объем до метки доводят 0,3 н. соляной кислотой или соляной кислотой,
разбавленной 1:15. Полученный раствор содержит 1 мкг/мл цинка.
Перед анализом растворы золы предварительно разбавляют в зависимости от
предполагаемого содержания в них цинка. При анализе образцов сена, соломы,
82
корнеплодов, клубнеплодов растворы золы рекомендуется разбавлять в 10 раз 0,3 н.
соляной кислотой или соляной кислотой, разбавленной 1:15, при анализе образцов
зерна - в 20 раз.
В делительные воронки вместимостью 50 мл помещают 10 мл раствора золы,
добавляют 1-2 капли метилового красного и нейтрализуют аммиаком до появления
желтой окраски. Помещают в воронку 5 мл ацетатного буферного раствора, 1 мл
25% раствора тиосульфата натрия, перемешивают. Затем добавляют из бюретки 20
мл свежеприготовленного 0,0012% раствора дитизона в четыреххлористом
углероде, взбалтывают 1 мин. Экстракт сливают в кювету толщиной
просвечиваемого слоя 1 см и фотометрируют при λ=538 нм (зеленый светофильтр).
Для сравнения используют нулевой раствор, шкалы образцовых растворов.
Содержание цинка определяют по градуировочному графику, вычитая из него
результат холостого опыта.
Для построения градуировочного графика помещают в делительные
воронки 0, 2, 4, 6, 8 и 10 мл рабочего раствора В цинка и доводят объем до 10 мл
0,3 н соляной кислотой. Содержание цинка в делительных воронках
соответствует 0, 2, 4, 6, 8 и 10 мкг цинка. Затем поступают так же, как и при
анализе зольных растворов. На основании полученных данных строят
градуировочный график. На оси абсцисс откладывают массовую концентрацию
цинка в образцовых растворах в мкг, на оси ординат — значение оптической
плотности. Вычисление результатов проводят по формуле (см. предыдущие
пункты по анализу микроэлементов). Полученный результат умножают на
разбавление исходного раствора.
Оборудование: ФЭК, делительные воронки на 50, 250 и 1000 мл, пипетки
на 2, 5, 10 и 15 мл, бюретки на 50 мл со стеклянным краном, колбы мерные на
50, 100 и 500 мл, эксикатор.
Реактивы: цинк металлический гранулированный Zn, ацетатный буферный
раствор с pH 5 (272 г ацетата натрия CH3C00Na∙3H20 растворяют в
бидистиллированной воде, прибавляют 58 мл ледяной уксусной кислоты
CH3C00Н и доводят полученный раствор до 1 л), 0,02% запасной раствор дитизона
в четыреххлористом углероде, 0,3 М раствор соляной кислоты НС1, 10% водный
раствор аммиака NH4OH, раствор индикатора метилового красного (10 мг
индикатора, растертого с 20 мл 0,02 М раствора гидроксида натрия,
количественно переносят в колбу на 250 мл и доводят объем до метки
дистиллированной водой), 0,02 М раствор гидроксида натрия NaOH, 25% раствор
тиосульфата натрия Na2S2O3.

83
2.15.5. Фотоколориметрический метод определения кобальта с
использованием 1,2-пиридилазо-2-нафтола (ПАН)
Метод основан на получении окрашенного комплекса Со3+ с IIAH,
экстракции комплекса хлороформом и фотометрировании экстракта. Окисление
Со2+ до Со3+ осуществляется периодатом калия. Мешающие определению
кобальта окрашенные комплексные соединения сопутствующих элементов с
ПАН разрушают действием серной кислоты.

Ход анализа
Для приготовления маскирующего раствора смешивают 1:1 20% раствор
цитрата натрия и 40% раствор ацетата натрия.
Запасной стандартный раствор (А) кобальта готовят следующим образом:
4,769 г семиводного сернокислого кобальта переносят в мерную колбу на 1 л,
объем до метки доводят дистиллированной водой. Полученный раствор,
содержащий 1 мг/мл кобальта, хранят 1 год.
Рабочий стандартный раствор кобальта Б готовят так: в мерную колбу на
100 мл помещают 10 мл запасного стандартного раствора кобальта (А) и объем
раствора до метки доводят 0,3 М соляной кислотой или соляной кислотой,
разбавленной 1:15. Полученный раствор, содержащий 100 мкг/мл кобальта,
хранят до 3 мес.
Для приготовления рабочего стандартного раствора кобальта В в мерную
колбу на 100 мл помещают 2 мл запасного стандартного раствора В. Объем до
метки доводят 0,3 М соляной кислотой или соляной кислотой, разбавленной 1:5.
Полученный раствор содержит кобальта 2 мкг/мл. Раствор готовят в день
проведения анализа.
Для приготовления шкалы образцовых растворов в шесть мерных колб на
100 мл помещают 0, 1, 2, 4, 6 и 8 мл рабочего стандартного раствора В, что
соответствует массовой концентрации 0; 0,1; 0,2; 0,4; 0,6 и 0,8 млн -1 (мг/кг).
Объемы растворов до метки доводят соляной кислотой, разбавленной 1:15.
В делительную воронку вместимостью 250 мл помешают 25 мл раствора
золы, приливают 0,5 мл периодата калия (можно 1 мл пероксида водорода), 10 мл
маскирующего раствора, 3 мл 0,2% раствора ПАН. Тщательно перемешивают
содержимое делительной воронки и оставляют раствор на 15 мин, периодически
перемешивая. Затем приливают в делительную воронку 35 мл 12 н раствор серной
кислоты, перемешивают, приливают из бюретки 5 мл хлороформа и встряхивают
в течение 1 мин. После разделения фаз нижний слой сливают в кювету толщиной
просвечиваемого слоя 3 см, не допуская попадания воды в кювету.
Фотометрирование проводят при λ=630 нм относительно хлороформа. По
результатам фотометрирования шкалы строят градуировочный график. Для
84
этого на оси абсцисс откладывают массовую концентрацию кобальта в
анализируемом материале (млн-1, мг/кг), на оси ординат - отсчеты
измерительного прибора. Используя градуировочный график, находят
массовую концентрацию кобальта в анализируемых образцах и вычитают из
него результат холостого опыта.
Оборудование: ФЭК, колбы мерные на 100 и 1000 мл, воронки
делительные на 250 мл, пипетки или дозатор на 25 мл.
Реактивы: 20% раствор цитрата натрия Na3C6H5O7, раствор йоднокислого
калия (периодата) KJO4 (0,5 г соли на 100 мл воды), 0,2% раствор 1,2-пиридилазо-2-
нафтола (ПАН), хлороформ, 40% раствор ацетата натрия CH3COONa, перекись
водорода H2O2, 0,3 н раствор соляной кислоты НС1, 12 н раствор серной кислоты
H2SO4, кобальт сернокислый семиводный CoSO4∙7H2O, этиловый спирт C2H5OH.

2.15.6. Фотометрический метод определения бора с использованием


хинализарина
Метод основан на получении окрашенного комплекса бора с
хинализарином в растворе крепкой серной кислоты. В растворе
концентрированной серной кислоты хинализарин образует с бороной кислотой
сложный эфир - внутрикомплексное соединение с характерной синей окраской.
Чувствительность метода можно увеличить, работая с дымящейся серной
кислотой (олеумом). Но работа с такой кислотой вносит сложности в проведение
анализа. Пары кислоты коррозируют металлические части оптических приборов,
поэтому чаще работают с недымящейся кислотой, но повышая чувствительность
метода благодаря использованию кювет с большей величиной оптического пути
и подбора оптимальной концентрации хинализарина.
Чтобы не загрязнять исследуемый материал в работе, нельзя использовать
фарфоровые ступки. Растительный материал растирают в металлических,
агатовых ступках, или в ступках из оргстекла. Недопустим мокрый способ
озоления растительного материала из-за улетучивания соединений бора в кислых
растворах. Для сухого озоления используют платиновые или кварцевые тигли.
Для снижения потерь бора при озолении добавляют щелочь или окись кальция.

Ход анализа
Стандартный раствор бора готовят следующим образом. Растворяют 0,286 г
борной кислоты, переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки 1
н. серной кислотой. Полученный раствор содержит 500 мкг/мл бора.
Готовят рабочие растворы бора: а) раствор А (концентрация бора 10
мкг/мл) - 5 мл запасного стандартного раствора бора переносят в мерную колбу
на 250 мл и доводят объем до метки 1 н серной кислотой; б) раствор Б
(концентрация бора 5 мкг/мл) - 25 мл раствора А переносят в мерную колбу на
85
50 мл и доводят объем раствора до метки 1 н. серной кислотой; в) раствор С
(концентрация бора 1 мкг/мл) - 5 мл раствора А переносят в мерную колбу на
50 мл и доводят объем до метки 1 н. серной кислотой.
Берут 1 мл отстоявшегося зольного раствора и переносят в сухую пробирку,
наливают из бюретки 9 мл раствора хинализарина. Содержимое пробирки
тщательно перемешивают и оставляют в темном месте на 2 ч. Фотометрируют на
ФЭК при λ=620 нм в тех же пробирках, в которых выдерживали окрашенный
раствор. Оптическую плотность измеряют относительно «нулевого» раствора (1
мл 1 н. серной кислоты и 9 мл раствора хинализарина). «Нулевой» раствор хранят
в закрытой пробирке и по нему проверяют настройку прибора.
При измерении интенсивности окраски раствора на ФЭК используют
кюветы толщиной просвечиваемого слоя 2 см, применяют оранжево-красный
светофильтр (около 620 нм). Для сравнения используют «нулевой» раствор
хинализарина (2 мл 1 н серной кислоты и 18 мл хинализарина). При смене
раствора в кювете его не сливают, а отсасывают водоструйным насосом.
Массовую концентрацию бора в анализируемых образцах находят по
градуировочному графику и вычитают из него результаты холостого опыта.
Берут градуированной пипеткой соответствующие объемы рабочих
растворов (табл. 17).

Таблица 17 - Приготовление шкалы образцовых растворов для


фотометрического определения бора
Номера пробирок
Показатель
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Рабочие растворы - С С В В В В А А
бора
Объем рабочего
0,5

1,0

0,4

0,6

0,8

1,0

0,6

0,8
0

раствора бора, мл
Массовая
концентрация
0,5

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

8,0
0

бора, мкг

Переносят их в пробирки и доводят объем раствора до 1 мл 1 н. серной


кислотой, приливают 9 мл раствора хинализарина, перемешивают и оставляют на 2
ч в темном месте. По данным фотометрирования строят градуировочный график.
На оси абсцисс откладывают массовую концентрацию бора, взятую для
приготовления шкалы, на оси ординат - показания ФЭК. Результаты вычисляют по
формуле, используемой в предыдущих разделах по определению микроэлементов.

86
Оборудование: ФЭК, пробирки из спецстекла диаметром 15 мм с
полиэтиленовыми пробками, пипетки или дозаторы на 1, 5, 10 и 25 мл, колбы
мерные на 50, 700, 250 и 1000 мл, бюретка на 50 мл.
Реактивы: серная кислота H2SO4 концентрированная, 1 н. раствор серной
кислоты H2SO4, хинализарин (0,015 г в 1 л концентрированной серной
кислоты), борная кислота.

2.15.7. Фотометрический метод определения молибдена с использованием


цинк-дитиола
Метод основан на получении зеленого комплекса молибдена с дитиолом,
экстрагируемого хлороформом и фотометрировании экстракта. Введение
аскорбиновой кислоты в анализируемые растворы приводит к восстановлению
железа, тем самым устраняется его влияние. При добавлении, к анализируемым
растворам лимонной кислоты предотвращается взаимодействие дитиола с
вольфрамом, а влияние меди устраняется йодистым натрием.

Ход анализа
Маскирующий раствор готовят так: 75 г лимонной кислоты и 150 г
аскорбиновой кислоты переносят в мерную колбу вместимостью 1 мл и доводят
объем бидистиллированной водой до метки (раствор хранят в холодильнике).
Запасной стандартный раствор молибдена готовят так: 0,184 г
молибденовокислого аммония помещают в мерную колбу на 1 л, доводят объем
до метки бидистиллированной водой. Полученный раствор содержит молибдена
0,1 мг/мл.
В день проведения анализа готовят рабочий стандартный раствор молибдена:
2,5 мл запасного стандартного раствора переносят в мерную колбу на 250 мл и
доводят объем до метки 14% соляной кислотой. Полученный раствор содержит
молибдена 1 мкг/мл.
Пипеткой отбирают 25 мл раствора золы и переносят в делительную воронку
вместимостью 100 мл. К раствору в воронке добавляют 0,5 мл 1% раствора
железоаммонийных квасцов, 2 мл маскирующего раствора и оставляют стоять 2
мин. Затем приливают в воронку 3 мл 50% раствора иодида натрия или калия,
снова выдерживают 2 мин, добавляют 2 мл 0,3% раствора цинк-дитиола. Раствор в
воронке тщательно перемешивают после внесения очередного реактива. Через 2
мин в воронку добавляют 4 мл хлороформа и встряхивают в течение 2 мин. Дают
жидкости расслоиться, отфильтровывают через сухой фильтр нижний зеленый слой
соединений молибдена с дитиолом в сухую кювету или в сухую пробирку. Затем
колориметрируют. Окраска жидкости устойчива в течение нескольких часов.

87
При работе на ФЭК для экстракции дитиолового комплекса берут 10 мл
хлороформа и используют кюветы с толщиной просвечиваемого слоя 2 см,
светофильтр красный (λ=660-690 нм). Содержание молибдена в анализируемых
образцах находят по градуировочному графику и вычитают из него результат
холостого опыта.
Для приготовления шкалы образцовых растворов отмеряют пипеткой в семь
делительных воронок 0; 0,5; 1; 2; 3; 4 и 5 мл рабочего стандартного раствора
молибдена, добавляют по 1 мл 1% раствора железоаммонийных квасцов и доводят
объем в воронках до 25 мл 14% соляной кислотой. Далее поступают аналогично
анализу растворов золы растений, фотометрируют в тех же условиях. По данным
фотометрирования строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают
массовую концентрацию молибдена в образцовых растворах шкалы, на оси ординат
- показатели измерительного прибора. Вычисление результатов проводят по
формуле, приведенной в предыдущих пунктах.
Оборудование: ФЭК, воронки для фильтрования, фильтры с белой лентой,
колбы мерные на 250, 500 и 1000 мл, бюретка на 50 мл, делительные воронки на
100 мл, пипетки на 50 мл.
Реактивы: 0,3% раствор цинк-дитиола, лимонная кислота, аскорбиновая
кислота, 50% раствор иодида натрия NaJ или калия KJ в бидистиллированной
воде, гидроксид натрия NaOH, этиловый спирт C2H5OH, хлороформ CHCl3, 1%
раствор железоаммонийных квасцов в 14% соляной кислоте, молибденовокислый
аммоний (NH4)6Мо7∙024∙4Н20, 14% раствор очищенной соляной кислоты НСl.

2.16. Определение кислотности силоса


Ход анализа
Навеску образца силоса массой 10 г помещают в коническую колбу на
200 мл, приливают 100 мл кипяченой дистиллированной воды и ставят на 1 час в
установку для встряхивания. Затем отфильтровывают 20-30 мл экстракта,
переносят его в химический стаканчик и измеряют кислотность с помощью рН-
метра. За результат анализа принимается среднее значение из двух
определений. Допустимое расхождение между результатами двух
параллельных определений 0,05 рН.
Оборудование: коническая колба на 200 мл, весы технохимические,
встряхиватель, стеклянная воронка для фильтрования, складчатый фильтр,
химический стаканчик на 50 мл, рН-метр.
Реактивы: вода дистиллированная.

88
2.17. Определение сырого протеина в растениях
Общий азот представлен белковым и азотом небелковых соединений.
Общий азот пересчитывают на белок и выражают в процентах, этот показатель
называют «сырой» протеин. Содержание «сырого» протеина в продукции – один
из главных критериев качества. Его важно знать при определении кормовой и
пищевой ценности продукции растениеводства.
Метод основан на окислении органического вещества в колбе Къельдаля
при нагревании с концентрированной серной кислотой и комбинированным
катализатором. Освобожденный азот белковых соединений в форме аммиака
улавливается серной кислотой, образуя при этом сернокислый аммоний. Для
освобождения аммиака используют 40% раствор щелочи. Отгон аммиака ведут
в аппарате Къельдаля, где при нагревании в щелочной среде сернокислый
аммоний разлагается, а выделившийся при этом аммиак улавливается
титрованным раствором серной кислоты. Остаток кислоты оттитровывается
раствором щелочи с точно установленной концентрацией до изменения окраски
в присутствии индикатора.

Ход анализа
Берут навеску тонкоизмельченного растительного материала массой 0,5 г (с
точностью до 0,001 г) и помещают в колбу Къельдаля. Цилиндром приливают 10
мл концентрированной серной кислоты и оставляют на 12-24 часа. Колбу
закрывают маленькой воронкой.
Затем в колбу добавляют 0,6 г комбинированного катализатора. Ставят
колбу в наклонном положении на электрический колбонагреватель.
Содержимое колбы постепенно нагревают, избегая вспенивания раствора. При
появлении белых паров нагревание усиливают и кипятят до полного
обесцвечивания жидкости (это указывает на окончание окисления вещества).
Колбу Къельдаля охлаждают.
Готовят колбу-приемник: из бюретки приливают 30 мл 0,1 н. раствора
серной кислоты с точно установленным титром. Добавляют 3-4 капли индикатора
конго красного или метилового красного. Колбу с титрованной серной кислотой
устанавливают под холодильник аппарата Къельдаля так, чтобы носик трубки
холодильника был погружен в кислоту.
В колбу Къельдаля осторожно добавляют 150-200 мл дистиллированной
воды и 1-2 капли фенолфталеина. Содержимое колбы количественно переносят
в отгонную колбу (общий объем раствора в колбе не должен превышать 350 мл
и быть не менее 300 мл).
Держа отгонную колбу в наклонном положении, осторожно по
внутренней стенке колбы приливают из цилиндра 60 мл 40% раствора
89
гидроксида натрия, чтобы она вся опустилась на дно. Отгонную колбу
немедленно закрывают каплеуловителем, содержимое осторожно
взбалтывают. Появление темно-малинового окрашивания раствора укажет на
то, что щелочи добавлено достаточное количество (при отсутствии
окрашивания необходимо добавить щелочи).
Отгоняют аммиак, контролируя окончание процесса лакмусовой
бумажкой и реактивом Несслера. Для этого в пробирку с реактивом Несслера
добавляют несколько капель из-под носика холодильника. Если раствор не
пожелтеет, то прекращают отгон аммиака. Если раствор в кобле-приемнике
изменил окраску, то немедленно приливают в приемник дополнительно 20 мл
0,1 н. раствора серной кислоты.
Содержимое колбы-приемника оттитровывают 0,1 н. раствором гидроксида
натрия до изменения окраски жидкости из синей (в кислой среде) в красную (если
индикатор конго красный) или из красной в золотистую (если индикатор
метиловый красный).
Расчет содержания сырого протеина проводят по формуле

Х,% = (а∙Т− в∙Т)∙0,14∙100/Н, где

а - объем 0,1 н. раствора серной кислоты, взятой в колбу-приемник, мл; Т1 -


поправка к титру серной кислоты; в - количество 0,1 н. раствора гидроксида
натрия, израсходованного на титрование остатка серной кислоты в колбе-
приемнике, мл; Т2 - поправка к титру гидроксида натрия; 100 - пересчет в
проценты; Н - навеска исследуемого вещества, г.
Оборудование: весы технохимические и аналитические, аппарат
Къельдаля, мерные цилиндры на 10 и 100 мл, стеклянные воронки для
фильтрования, колбонагреватель электрический.
Реактивы: концентрированная серная кислота H2SO4 и ее 0,1 н.
титрованный раствор, 40% и 0,1 н. растворы гидроксида натрия NaOH,
катализатор комбинированный (селен+сульфат меди), реактив Несслера,
фенолфталеин, лакмусовая бумага, конго красный или метиловый красный
индикаторы, вода дистиллированная.

2.18. Определение белкового азота в растениях


Метод определения содержания белкового азота и белков основан на
способности белковых молекул денатурировать и выпадать в осадок под
воздействием ионов тяжелых металлов, кислой и щелочной реакции среды,
высокой температуры, спирта, ацетона и других факторов. В белковых
молекулах происходят изменения в полипептидных цепях, белки из
растворимых становятся нерастворимыми и теряют свои свойства.
90
Небелковые азотсодержащие вещества остаются в растворе и легко
удаляются фильтрацией и промыванием. По нижеизложенному способу
осаждение белков достигается сернокислой медью в щелочной среде
(CuS04∙Cu0H). Осадок белка отмывается от небелковых и растворимых
азотсодержащих соединений и озоляется серной кислотой по методу
Кьельдаля с последующим отгоном аммиака. Найденное количество азота
пересчитывается на белок.

Ход анализа
На аналитических весах при помощи часового стекла или фарфоровой чашки
берут навеску тонкоизмельченной воздушно-сухой растительной пробы 0,2-0,5 г
семян, 1 г сена, соломы и ботвы. Свежего, измельченного растительного
материала (корни, клубни, кочаны, листья и т. д.) берут 4-6 г (с таким расчетом,
чтобы в навеске содержалось 20-40 мг азота). Навеску растительного материала
(после взвешивания с тарой) переносят в химический стакан емкостью 150-200
мл. Тару с остатками растительного вещества взвешивают на аналитических
всех. По разности между взвешиванием тары с пробой и тары со следами пробы
находят точную массу взятой для анализа пробы. Одновременно в тарированный
стеклянный бюкс берут 3-5 г исследуемого материала для определения
гигроскопической влаги и сухого вещества.
В стакан с навеской приливают из промывалки около 50 мл
дистиллированной воды, перемешивают содержимое стеклянной палочкой и стакан
устанавливают на кипящую водяную баню. После того как температура в стакане с
растительным веществом достигнет 60°С, не охлаждая содержимого стакана,
прибавляют в него 25 мл раствора медного купороса (реактив 1), а затем при
помешивании небольшими порциями туда же приливают 25 мл раствора щелочи
(реактив 2). Образуется основная соль сернокислой меди (CuS04∙Cu(ОН)2), которая
и осаждает белки. Выпадает осадок комплекса белковых молекул и меди. Стакан с
содержимым ставят на отстаивание в течение 1-1,5 ч. В течение этого времени
готовят приспособление для фильтрования. В коническую колбу на 250-З00 мл
(или такой же вместимости химический стакан) вставляют воронку на специальном
кольцедержателе, в нее вставляют складчатый фильтр из плотной фильтровальной
бумаги. Фильтр по размерам должен быть таким, чтобы помещался в воронке на
0,5-1 см ниже краев воронки. После этого отстоявшуюся над осадком жидкость
сливают на фильтр по стеклянной палочке.
Осадок в стакане промывают декантацией несколько раз горячей
дистиллированной водой, постепенно перенося осадок на фильтр. Затем осадок
полностью без потерь (снимая приклеившиеся частички со стенок стакана
резиновым наконечником стеклянной палочки и маленькими кусочками
91
фильтровальной бумаги) переносят на фильтр и продолжают промывание горячей
водой до исчезновения ионов серной кислоты в вытекающем фильтрате (реакция с
раствором хлорида бария Отсутствие мути после добавления хлорида бария к
небольшой порции вытекающего фильтрата указывает на то, что все небелковые
азотсодержащие соединения отмыты из осадка белка, так как они имеют
одинаковую подвижность с ионами сульфата, отсутствие которого и указывает на
полноту отмывания.
Затем дают возможность полного протекания раствора над осадком на
фильтре, и фильтр с осадком вместе с воронкой просушивают в термостате при
температуре 50-60°С до тех пор, пока бумага не станет легко сниматься с воронки
(1-2 ч). Фильтр сворачивают в виде сигары и, не теряя осадка белка, опускают в
колбу Кьельдаля для сжигания. В колбу Кьельдаля приливают из цилиндра или
дозатора 1015 мл концентрированной серной кислоты с растворенным селеном и
осторожно перемешивают содержимое, стараясь смочить серной кислотой (не
расплескивая) весь фильтр и осадок белка, и затем оставляют на 5-6 ч для
медленного взаимодействия кислоты и осадка.
Затем в колбу Кьельдаля приливают 1-2 мл пергидроля, устанавливают колбу
на газовую установку под тягой и озоляют при медленном кипении. При
необходимости в процессе озоления добавляют в колбу по 1-2 мл серной кислоты и
пергидроля. Озоление ведут до абсолютного осветления раствора в колбе
Кьельдаля. После этого колбу остужают, осторожно приливают в нее 3-5 мл
дистиллированной воды из промывалки, раствор перемешивают и снова
охлаждают. Раствор золы из колбы Кьельдаля количественно переносят в мерную
колбу на 100 мл.
Отгон аммиака проводят на аппарате Кьельдаля для микроопределений,
используя в приемнике раствор борной кислоты. Титруют содержимое
приемника 0,01 н. раствором серной кислоты.
Вычисление результатов анализа проводят по формуле

Х=(а∙Т - в∙Т)∙0,0014∙V∙100/(H∙V1), где


а - количество 0,01 н. серной кислоты, пошедшей на титрование исследуемого
раствора, мл; в - количество 0,01 н. серной кислоты на титрование контроля
(холостое титрование); Т - поправка к титру 0,01 н. серной кислоты; Н - масса
абсолютно сухого растительного материала, взятого на озоление, г; V - исходный
объем озоленного растительного вещества, мл (колба №1); 0,0014 - количество
азота, г (в форме аммиака), которое связывается 1 мл точно 0,01 н. серной
кислоты; V1 - объем озоленного вещества, взятого для отгона аммиака, мл.

92
Для перерасчета результатов анализа на абсолютно сухую массу
растительного вещества, содержание белкового азота умножают на 100/(100-y), где
y - содержание гигроскопической влаги в %.
Содержание белка вычисляют умножением содержания белкового азота
(в %) на коэффициент 6,25 или на соответствующий данному растению.
Оборудование: аппарат Къельдаля, термостат, весы технохимические и
аналитические, часовое стекло, фарфоровые чашки, химический стакан на 150-
200 мл, тарированные стеклянные бюксы, промывалки на 100-200 мл, колбы
конические на 250-300 мл, мерные колбы на 100 мл, воронка на
кольцедержателе, складчатый фильтр, стеклянные палочки с резиновыми
наконечниками, электроплитка, водяная баня.
Реактивы: раствор медного купороса CuS04 (60 г кристаллогидрата на 1 л
дистиллированной воды), раствор гидроксида натрия NaOH (12,5 г на 1 л воды),
33% раствор перекиси водорода H2O2 (пергидроль), 0,01 н. раствор серной
кислоты H2SO4, 4% раствор борной кислоты H3BO3, раствор селена Se в
концентрированной серной кислоте (5 г кристаллического селена на 1 л кислоты),
комбинированный индикатор, вода дистиллированная.

2.19. Определение содержания нитратов в растениях с помощью


ионоселективного электрода по методу ЦИНАО
В основу метода положено явление возникновения электрического
заряда строго определенной силы практически всех ионов, растворенных в
воде или слабых растворах нейтральных солей. Электродвижущая сила
(ЭДС) раствора, обусловленная нитратами, селективно измеряется
нитратным электродом. Конструктивно и технологически этот электрод
выполнен так, что способен регистрировать лишь электрические заряды
нитрат-ионов. Между ЭДС, измеряемой электродом и концентрацией
нитратов, в растворе существует строгая зависимость. В данном случае
нитраты определяют потенциометрически с помощью ионоселективного
нитратного электрода в вытяжке из свежего растительного материала. В
качестве экстрагирующего раствора используют 1% раствор
алюмокалиевых квасцов. При определении нитратов в вытяжке
ионоселективным электродом в качестве вспомогательного электрода
применяют хлоросеребряный электрод. Определение ведут на ионометре
или аналогичном приборе другой конструкции.

Ход анализа
Свежий растительный материал средних проб стебли и листья злаковых и
бобовых трав, ботву, растения силосных культур, кочаны капусты, листовые
овощи и другие измельчают ножницами или ножом на деревянной доске и
93
тщательно перемешивают. Плоды, корне- и клубнеплоды измельчают на терке
или мясорубке и также тщательно перемешивают. При помощи тарированной
фарфоровой чашки на технических весах отвешивают 12,5 г предварительно
измельченного растительного материала и помещают в стакан гомогенизатора.
Остатки растительного вещества из фарфоровой чашки смывают в стакан 50 мл
1% раствора алюмокалиевых квасцов и гомогенизируют в течение 2 мин при 6000
об/мин.
После гомогенизации суспензию переливают в химический стаканчик
вместимостью около 100 мл. При отсутствии гомогенизатора навеску
предварительно измельченного растительного материала растирают в ступке с
кварцевым песком до однородной массы. Предварительно песок настаивают в
соляной кислоте, затем тщательно отмывают от хлор-ионов водопроводной и
дистиллированной водой и после высушивания на воздухе прокаливают в муфеле
при температуре 250°С.
Содержимое ступки заливают 10-20 мл (из отмеренного объема) 1% раствора
алюмокалиевых квасцов и продолжают растирать в течение 3-5 мин, а затем массу
количественно переносят в химический стаканчик вместимостью около 100 мл,
смывая остатки на ступке и пестике оставшимся раствором алюмокалиевых
квасцов. Перенесенную массу энергично перемешивают в стаканчике стеклянной
палочкой в течение 2-3 мин. В подготовленных гомогенатах измеряют потенциал
нитратного ионоселективного электрода на ионометре.
Концентрацию нитратов в исследуемом растворе находят по
калибровочному графику на основании измеренного потенциала в мВ. Для
построения калибровочной кривой измеряют ЭДС в милливольтах в серии
растворов нитрата калия известной концентрации - 0,1 М; 0,01 М; 0,001 М и
0,0001 М. По полученным значениям мВ растворов указанной концентрации
строят градуировочную кривую, откладывая на оси абсцисс значения pN03-, а на
оси ординат - соответствующие им значения ЭДС (мВ).
Содержание азота нитратов в растительном материале (в мг/кг сырой
массы) вычисляют по формуле

Х = 10-рХ∙А∙V∙103/Н, где
Х - содержание нитратов, мг/кг; рХ - отрицательный логарифм концентрации
нитратного азота (-logCN-NO3) по градуировочному графику; А - атомная масса
определяемого элемента, г; V - объем вытяжки, мл; Н - масса навески
анализируемого материала, г; 103 - коэффициент перевода в мг.
Оборудование: ионометр, сушильный шкаф, муфельная печь, тигли для
прокаливания, тарированные фарфоровые чашки, весы технохимические,

94
гомогенизатор, химические стаканчики на 100 мл, ступка с пестиком,
стеклянные палочки, ножи, кюветы, шпатели.
Реактивы: 1% раствор алюмокалиевых квасцов, кварцевый песок,
соляная кислота, дистиллированная вода, 0,1 М стандартный раствор KNO3
(другие растворы готовят из него методом разбавления).

2.20.Определение крахмала в растениях методом кислотного гидролиза


В основу метода положена реакция расщепления молекул крахмала
действием соляной кислоты на глюкозу:
(С6Н10O5)+nН20= nС6Н12O6
В полученном гидролизате определяют глюкозу методом Бертрана.
Сущность метода заключается в способности глюкозы легко окисляться при
наличии альдегидной группы. Для этого на глюкозу в растворе действуют
феллинговой жидкостью, составленной из сернокислой меди и щелочного
раствора сегнетовой соли. Феллингова жидкость, реагируя с глюкозой, окисляет
ее до сахарной кислоты и одновременно образуется оксид меди (I). Количество
его соответствует количеству глюкозы в растворе. Выпавший в форме красного
осадка оксид меди (I) (закись меди) учитывают путем обработки его сернокислым
окисным железом в присутствии серной кислоты:
Cu20+Fe2(S04)3 + H2S04 = 2CuS04+ 2FeSO4 + H2O.
При этом оксид меди (I) переходит в оксид меди (II) СuО, а сульфат
железа (III) восстанавливается до сульфата железа (II), который определяется
титрованием перманганатом калия:
10FeS04 + 2KMn04 + 8H2S04 = 5Fe2(S04)3 + 2MnS04 + K2S04 + 8Н2О
Перманганат калия переводит железо из оксида (II) в оксид железа (III).
О количестве глюкозы в гидролизате судят по израсходованному на
титрование раствора перманганата калия.

Ход анализа
Для анализа необходимо использовать тщательно измельченный
растительный материал. Зерно злаковых и бобовых культур измельчают на
мельнице.
Свежий материал после взятия навесок растирают в ступке или
гомогенизируют в гомогенизаторе. На аналитических весах берут навеску
картофеля 4-5 г, муки 1-1,5 г и количественно переносят смыванием ее 1% соляной
кислотой в круглодонную или коническую колбу на 300-350 мл. Общее количество
1% соляной кислоты, взятой для гидролиза, должно быть 150 мл. Колбу закрывают
каучуковой пробкой со вставленной стеклянной длинной трубкой, выполняющей
роль обратного холодильника, и погружают на 3 ч в кипящую водяную баню.
95
Окончание гидролиза устанавливают по отсутствию синего окрашивания
гидролизуемого раствора с йодом в йодистом калии. Для проверки берут 2-3 капли
гидролизата и добавляют одну каплю раствора йода.
После окончания гидролиза содержимое колбы охлаждают под краном с
холодной водой, добавляют 3-4 капли метилового красного и нейтрализуют
раствор в колбе 10% раствором гидроксида натрия, прибавляя его из пипетки
или бюретки по каплям до появления желтоватой окраски раствора.
Темноокрашенные гидролизаты нейтрализуют по лакмусовой бумаге, бросая
кусочки ее всякий раз после прибавления щелочи.
Избыток щелочи приводит к разложению глюкозы, поэтому его удаляют
прибавлением одной капли 2% раствора соляной кислоты. В нейтрализованном
растворе глюкозы осаждают белки прибавлением 5-10 мл раствора ацетата свинца
(до прекращения появления мути от прибавления очередной капли ацетата
свинца). Раствор в колбе перемешивают и фильтруют в мерную колбу на 250 мл
(колба № 1).
Дистиллированной водой тщательно смывают остатки растительного
материала в колбе, где проводили гидролиз, и переносят на фильтр. Осадок на
фильтре промывают водой и фильтруют почти до метки. Затем объем фильтрата в
колбе доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и
перемешивают.
Избыток ацетата свинца в фильтрате мешает определению глюкозы. Для
удаления его избытка берут пипеткой 50 мл фильтрата и переносят в мерную
колбу на 100 мл (колба № 2) приливают (постепенно при перемешивании до
исчезновения появления мути от последней капли) насыщенный раствор
сульфата натрия (общий объем его 5-7 мл). После осаждения избытка ацетата
свинца объем в колбе доводят дистиллированной водой до метки, закрывают
пробкой и перемешивают. Затем в обе мерные колбы (№1 и 2) с гидролизатами
крахмала (на 250 и 100 мл) добавляют по 3-4 капли толуола или по 1-2
кристаллика тимола для консервации и, если нет возможности определить
глюкозу сразу, оставляют до следующего дня.
Затем раствор из колбы № 2 (объем 100 мл) фильтруют через двойной
плотный фильтр в коническую чистую колбу или стакан. Берут пипеткой 20 мл
фильтрата и переносят в коническую колбочку или стаканчик на 150-200 мл,
добавляют смесь 20 мл раствора сульфата меди и 20 мл щелочного раствора
сегнетовой соли. Содержимое колбочки нагревают до кипения на сетке газовой
горелкой и несильно кипятят в течение 3 мин. Затем отстаивают содержимое в
течение 1 мин (дают возможность осесть выпавшему в осадок оксиду меди (I)).
Отстоявшийся осадок в колбочке отмывают горячей дистиллированной
водой, фильтруя промывные воды в колбу Бунзена через трубку Аллина с
96
асбестовым фильтром при слабом разрежении. Фильтрат в колбе Бунзена
должен иметь синее окрашивание, что указывает на нормальное прохождение
реакций окисления глюкозы. Если фильтрат окрашен в другой какой-либо цвет,
анализ повторяют, разбавив исходный раствор глюкозы в несколько раз.
Осадок в колбочке отмывают горячей водой до тех пор, пока вытекающая из
трубки Аллина вода станет совершенно прозрачной и перестанет давать реакцию на
сульфат-ион с раствором хлорида бария. Затем осадок оксида меди (I) в колбочке
промывают холодной дистиллированной водой и фильтруют. Необходимо следить,
чтобы осадок оксида меди (I) все время находился в слое дистиллированной воды
во избежание контакта с кислородом воздуха.
После окончания промывания осадка трубку Аллина с небольшим слоем
воды над асбестом вытаскивают из колбы Бунзена и устанавливают в штативе или
в чистом химическом стакане в вертикальном положении. Фильтрат из колбы
Бунзена выливают в раковину, а колбу тщательно и неоднократно споласкивают
дистиллированной водой. После этого трубку Аллина снова укрепляют в колбе
Бунзена. Вакуумная система или водоструйный насос в этот период должны быть
отключены.
Мерным цилиндром берут 20-30 мл кислого раствора железоаммонийных
квасцов или такое же количество сульфата железа (III) в серной кислоте.
Небольшими порциями, приливая железоаммонийные квасцы в колбочку с
осадком, растворяют оксид меди (I). Осадок сначала чернеет, а потом раствор
приобретает зелено-голубоватое окрашивание. Затем раствор из колбочки
переносят в трубку Аллина и стеклянной палочкой осторожно разбивают
верхний слой асбеста для растворения ранее попавшего туда оксида меди (I)
при отмывании осадка меди. Включают вакуум и при слабом разрежении
медленно фильтруют растворенный в железоаммонийных квасцах оксид меди
(I) в колбу Бунзена.
Колбочку несколько раз споласкивают из цилиндра железо-аммонийными
квасцами, сливая раствор в трубку Аллина. Если асбест сильно уплотняется, то
его аккуратно разбивают стеклянной палочкой, разрежение уменьшают. После
полного расходования отмеренного объема раствора железоаммонийных
квасцов колбочку и асбестовый фильтр трубки Аллина несколько раз
промывают горячей дистиллированной водой, собирая фильтрат при слабом
вакууме в колбу Бунзена. Необходимо следить, чтобы при промывании осадка
на фильтре восстановленное железо не имело контакта с кислородом воздуха, т.
е. не надо давать жидкости полностью стекать в трубке Аллина.
После полного завершения промывания асбестового фильтра трубку Аллина
удаляют, а горячий раствор в колбе Бунзена титруют 0,1 н. раствором перманганата
калия до слабого порозовения, не исчезающего в течение 0,5-1 мин.
97
Длительность анализа, начиная с момента прибавления реактивов и до
конца титрования, не должна быть больше 12-15 мин.

Вычисление результатов анализа


1 мл точно 0,1 н. раствора перманганата калия соответствует 6,36 мг
меди. Умножив число израсходованного на титрование 0,1 н. раствора
перманганата калия на коэффициент 6,36, находят количество меди,
образовавшейся в результате окисления глюкозы феллинговой жидкостью.
Далее по количеству меди в таблице Бертрана находят соответствующее
количество глюкозы и подставляют в формулу.
В большинстве случаев масса меди, вычисленная по израсходованному
0,1 н. перманганату калия, не совпадает точно с цифрами таблицы Бертрана. В
связи с этим количество глюкозы вычисляют интерполяцией.
Расчетная формула:

Х = а∙V1∙V3∙100∙0,9/(H∙V2∙V4), где

X - содержание крахмала, %; а - интерполированное количество глюкозы,


найденное по меди в таблице, мг; Н - навеска растительного материала для анализа,
мг; V1 - объем гидролизованного и отфильтрованного крахмала в колбу № 1, мл
(250 мл); V2 - объем раствора глюкозы, взятого из колбы № 1 для осаждения
ацетата свинца и помещенного в колбу № 2, мл (брали 50 мл); V3 - объем раствора
глюкозы в колбе № 2 с осажденным избытком ацетата свинца, мл (100 мл); V4 -
объем вторично отфильтрованного раствора гидролизата из колбы № 2 для
определения глюкозы по Бертрану, мл (20 мл); 100 - коэффициент для перевода
результатов анализа в %; 0,9 - коэффициент для пересчета глюкозы на крахмал.
Из полученного результата вычитают количество свободных сахаров, для
чего в отдельно взятой навеске растительного материала дистиллированной водой
извлекают свободные сахара, и определяют содержание их по Бертрану, точно так
же, как и глюкозу после гидролиза крахмала. В отдельных случаях можно
пользоваться справочными материалами содержания свободных сахаров в данной
анализируемой культуре.
Оборудование: мельница, ступка с пестиком или гомогенизатор, весы
технохимические и аналитические, круглодонная или коническая колба на 300-350
мл, мерные колбы на 100 и 250 мл, каучуковая пробка со стеклянной трубкой
(обратный холодильник), колба Бунзена, трубка Аллина с асбестовым фильтром,
сетка с асбестовой прокладкой, газовая горелка, водяная баня, водоструйный насос,
лабораторный штатив, электроплитка, мерный цилиндр на 100 мл, бюретка на 50
мл, пипетки, химический стакан на 150-200 мл, стеклянная воронка для
фильтрования, фильтровальная бумага.
98
Реактивы: концентрированная серная кислота H2SO4, 2% соляная кислота
HCl, 10% раствор гидроксида натрия NaОH, насыщенный раствор сульфата натрия
Na2SO4, щелочной раствор сегнетовой соли (200 г C4H406KNa∙4Н20 растворяют в
мерной колбе на 1 л дистиллированной водой, а затем прибавляют 150 г NaOH,
растворяют и доводят объем до метки дистиллированной водой), кислый раствор
железоаммонийных квасцов (в мерной колбе на 1 л растворяют в 300 мл
дистиллированной воды 86 г железоаммонийных квасцов, добавляют 108,7 мл
концентрированной серной кислоты; после охлаждения раствор в колбе доводят
дистиллированной водой до метки и перемешивают), раствор сульфата железа (III)
в серной кислоте (50 г Fe2(S04)3∙nН2О растворяют в дистиллированной воде в
химическом стакане и прибавляют 108,7 мл концентрированной серной кислоты;
после охлаждения раствор переносят через воронку в мерную колбу на 1 л и
доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают), 0,1 н. раствор
перманганата калия КМп04 (титр устанавливают по щавелевой кислоте или ее
аммонийной (или натриевой) соли), 10% раствор ацетата свинца, раствор сульфата
меди (40 г кристаллогидрата CuS04∙5Н20 на 1 л дистиллированной воды),
индикатор метиловый красный, лакмусовая бумага, ацетат свинца, толуол, тимол
кристаллический, дистиллированная вода.

2.21.Определение содержания каротина по Сапожникову


В основе всех методов определения каротина присутствует метод
хроматографического адсорбционного анализа, разработанный М.Е. Цветом.
Принцип метода состоит в том, что сложная смесь различно окрашенных веществ
экстрагируется из листьев или корнеплодов каким-либо органическим
растворителем или их смесью, например, спирт, ацетон. Экстракт пропускает через
стеклянную трубку, заполненную адсорбентом. Как адсорбенты используются
тонко размолотые тальк, крахмал, углекислый кальций или окись алюминия и др. В
связи с тем, что каждый из пигментов обладает различной скоростью движения по
адсорбционной колонке с фронтом растворителя и специфической адсорбционной
способностью происходит концентрация данного пигмента в определенном слое
адсорбента. Слой адсорбента, содержащий тот или иной пигмент, вынимают из
трубки или колонки. Пигмент выделяют из адсорбента с помощью какого-либо
другого растворителя и количественно определяют, измеряя интенсивность окраски
на колориметре.

Ход анализа
Проба свежих листьев или корнеплодов предварительно измельчают
скальпелем на кафельной плитке или пластмассовой терке (примерно 20- 30 г).

99
Две параллельные навески по 1-5 г из пробы берут на часовом стекле на
технических весах и помещают в фарфоровую ступку.
В ступку добавляют 0,5 г соды (Na2CO3) для нейтрализации органических
кислот (поскольку в кислой среде каротин разрушается), и безводный сульфат
натрия из расчета 3 г на 1 г сырой навески для обезвоживания материала,
перемешивают массу скальпелем.
В ступку добавляют 5 г адсорбента оксида алюминия и 0,5 г кварцевого
песка, перемешиваем и тщательно пестиком растираем содержимое ступки до
образования сухой гомогенной массы, которую затем ставим в темное место на
20 мин для полноты адсорбции пигментов.
Готовят адсорбционную воронку. Для этого в нижнюю часть стеклянной
воронки закладывают ватный тампон средней плотности, затем небольшими
порциями насыпают окись алюминия, уплотняя его слегка стеклянной
палочкой. Высота адсорбционного слоя должна быть примерно 2,5 см.
Поверхность адсорбента, выровненную скальпелем, слегка смачивают по всей
воронке каплями дистиллированной воды (примерно 15 капель) и воронку
вставляют в приемник, обычно используют мерную колбу на 100 мл.
Гомогенную массу из ступки количественно с помощью скальпеля
переносят на поверхность адсорбционной воронки, распределяя равномерно.
В ступку наливают 20 мл бензина, тщательно споласкивают пестик и стенки
ступки, вычищая остатки адсорбента скальпелем, содержимое выливают в воронку,
операцию повторяют до тех пор, пока в ступке не останется следов пигментов.
Бензин медленно приливают из стакана на воронку, вся поверхность
навески должна быть покрыта тонким слоем бензина, так как на воздухе
каротин может окисляться.
Экстракцию каротина проводят до тех пор, пока желтые пигменты на ватном
тампоне не перейдут в раствор приемника каротина, а капли бензина, поступающие
в приемник, не будут бесцветными.
Содержимое колб после экстракции доводят до метки чистым бензином и
колориметрируют. Можно измерить цилиндром объем полученного раствора
каротина, записать в журнал и колориметрировать с синим светофильтром
(λ=420 нм), кюветы 0,5 см. В контрольную кювету наливают бензин.
Расчет содержания каротина ведут по формуле
Содержание каротина, мг% = А∙V∙100/Н,
где А - мг каротина по графику; V - объем полученного экстракта, мл; Н -
навеска растительного материала, г.
Работу по извлечению каротина проводят под тягой, при этом недопустима
работа любых нагревательных приборов в помещении.

100
Оборудование: ФЭК, кафельная плитка, мерная колба на 100 мл,
скальпель, весы технохимические и аналитические, часовые стекла,
фарфоровая ступка с пестиком, адсорбционная воронка, стеклянные палочки.
Реактивы: сода Na2СO3, безводный сульфат натрия Na2SO4, оксид
алюминия Аl2O3 (высушенный при 1050С в сушильном шкафу и увлажненный
затем до 4% влаги), кварцевый песок, основной стандартный раствор бихромата
калия K2Cr2O7 для построения графика на каротин (720 мг K2Cr2O7 на 1 л
дистиллированной воды, 1 мл этого раствора соответствует 0,00416 мг каротина),
бензин (очищенный активированным углем), дистиллированная вода.

Вопросы для самоконтроля


1. Значение анализа растений для оценки качества урожая и выноса питательных
веществ.
2. Диагностика минерального питания растений.
3. Как используют анализ растений при изучении влияния почвы и удобрений на
биохимические процессы в растениях?
4. Расчеты по выносу элементов питания урожаем сельскохозяйственных растений.
5. Основные приемы анализа растений.
6. Подготовка растительных проб к анализу.
7. Цели и сроки визуальной диагностики.
8. Перечислить основные признаки недостатка элементов питания в растениях.
9. Определение белка в растениях.
10. Способы озоления при определении азота и зольных элементов в растениях.
11. Основные методики определения нитратов в растениях.
12. Основные методики определения фосфора в растениях.
13. Основные методики определения калия в растениях.
14. Основные методики определения кальция, магния и серы в растениях.

101
Библиографический список
1. Банкин, М.П. Физико-химические методы в агрохимии и биологии почв / М.П.
Банкин, Т.А. Банкина, Л.П. Коробейникова. – СПб: Изд-во СПбГУ, 2005. - 177 с.
2. Безуглова, О.С. Сравнительная характеристика методов определения
органического углерода в почвах / О.С. Безуглова, С.Н. Горбов, А.В. Карпушова,
С.С. Тагивердиев // Фундаментальные исследования. Биологические науки. № 8,
2014. - С. 1576-1580.
3. Бобкова, Ю.А. Методы почвенных и агрохимических исследований: метод.
указания для лабораторно-практических занятий) / Ю.А. Бобкова.- Орел:
Издательство ОГАУ, 2008. - 48с.
4. Бухарина, И.Л. Биохимия растений: учеб.-метод. пособие / И.Л. Бухарина, О.В.
Любимова. – Ижевск: ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2009. – 50 с.
5. Воробьева, Л.А. Химический анализ почв. Вопросы и ответы. / Л.А. Воробьева,
Д. В. Ладонин, О. В. Лопухина и др. - М. 2011. – 186 с.
6. Герасименко, В. П. Практикум по агроэкологии: учеб. пособие / В. П.
Герасименко. - СПб.: Лань, 2009. - 432 с.
7. ГОСТ 26485-85. Почвы. Определение обменного (подвижного) алюминия по
методу ЦИНАО [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
http://docs.cntd.ru/document/gost-26485-85, свободный (дата обращения: 4.11.2015).
8. ГОСТ Р 50688-94. Почвы. Определение подвижных соединений бора по методу
Бергера и Труога в модификации ЦИНАО [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
http://docs.cntd.ru/document/gost-r-50688-94, свободный (дата обращения: 5.11.2015).
9. Громовик, А.И. Современные инструментальные методы в почвоведении.
Теория и практика / А.И. Громовик, О.А. Йонко. – Воронеж, 2010. – 60 с.
10. Дружкин, А.Ф. Основы научных исследований в растениеводстве и
селекции: учеб. пособие / А. Ф. Дружкин, Ю. В. Лобачев, Л. П. Шевцова. –
Саратов. 2013. – 264 с.
11. Карпачевский, Л. О. Экологическое почвоведение / Л. О. Карпачевский. – М.:
КолоС, 2010. – 687 с.
12. Мартынова, Н. Агрохимия почв: органическое вещество почв: учеб.-метод.
пособие / Н. А. Мартынова. – Иркутск: Изд-во ИГУ, 2011. –255 с.
13. Методика определения гумусового и агрегатного состояния чернозема
[Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://biofile.ru/bio/35610.html, свободный
(дата обращения: 12.11.2015).
14. Методические указания по проведению комплексного мониторинга плодородия
почв земель сельскохозяйственного назначения. – М., 2003. – 195 с.
15. Методические указания к изучению дисциплины «Физико-химические методы
исследования растений»: учеб. пособие. – Екатеринбург: Изд-во Уральского
государственного университета им. А.М. Горького, 2007. – 62 с.
102
16. Методы определения кальция и магния в водной вытяжке (ГОСТ 26428-85)
[Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://docs.cntd.ru/document/gost-26428-85,
свободный (дата обращения: 8.11.2015)
17. Микроэлементы почвы [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
http://biofile.ru/geo/3363.html, свободный (дата обращения: 9.11.2015).
18. Пискунов, А. И. Методы агрохимических исследований / А. И. Пискунов. – М.,
Колос. - 2004. - 320 с.
19. Полевые исследования свойств почв: учеб. пособие к полевой практике для
студентов, обучающихся по направлению подготовки 021900 – почвоведение /
М.А. Мазиров, Е.В. Шеин, А.А. Корчагин и др. – Владимир: Изд-во ВлГУ,
2012. – 72 с.
20. Попов, А. И. Плодородие почв – следствие круговорота биофильных элементов
// Плодородие почв – уникальный природный ресурс – в нем будущее России:
материалы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 125-летию книги В. В. Докучаева
«Русский чернозем» (26 февр. - 1 марта 2008 г., Санкт-Петербург, Россия). – СПб,
2008. - С. 97-98.
21. Роль элементов в жизни растений [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
http://enc.sci-lib.com/article0000909.html, свободный (дата обращения: 8.11.2015).
22. Самофалова, И.А. Химический состав почв и почвообразующих пород:
учебное пособие / И.А. Самофалова. - Пермь: Изд-во ФГОУ ВПО «Пермская
ГСХА», 2009. - 132 с.
23. Соединения алюминия и проблема почвенной кислотности [Электронный
ресурс]. – Режим доступа: http://helpiks.org/1-19988.html, свободный (дата
обращения: 9.11.2015).
24. Соколова, О.Я. Тяжелые металлы в системе элемент – почва – зерновые
культуры / О.Я. Соколова, А.В. Стряпков, С.В. Антимонов и др. // Вестник ОГУ.
Апрель, 2006. – С. 106-110.
25. Титова, В.И. Агро- и биохимические методы исследования состояния
экосистем: учеб. пособие для вузов / В.И. Титова, Е.В. Дабахова, М.В. Дабахов;
Нижегородская гос. с.-х. академия. – Н. Новгород: Изд.-во ВВАГС, 2011. – 170 с.
26. Федорец, Н.Г. Методика исследования почв урбанизированных территорий /
Н.Г. Федорец, М.В. Медведева. - Петрозаводск: Карельский научный центр РАН,
2009. - 84 с.
27. Химический анализ почвы. Руководство по применению почвенных
лабораторий и тест-комплектов / Под ред. к.х.н. А.Г. Муравьѐва. — СПб.:
«Крисмас+», 2014. -120 с.
28. Химический состав почв [Электронный ресурс]. – Режим доступа:
http://www.bygeo.ru/materialy/pervyi_kurs/pochvovedi-zem-res-u-chtenie/1767-

103
himicheskiy-sostav-pochvmakroelementy-v-pochvah.html, свободный (дата
обращения: 10.11.2015).
29. Чуков С. Н. Система методов в изучении гуминовых веществ // Гуминовые
вещества в биосфере: тр. IV Всерос. конф. (Москва, 19–21 дек. 2007 г.). - СПб, 2007.
- С. 117-118.
30. Шеуджен, А.Х. Агрохимия: учебное пособие / А.Х. Шеуджен, В.Т. Куркаев,
Н.С. Котляров; под ред. А.Х. Шеуджена. - 2-е изд., перераб. и доп. – Майкоп:
Изд-во «Афиша», 2006. – 1075 с.
31. Шеуджен, А. Х. Органическое вещество почвы и его экологические
функции / А. Х. Шеуджен, Н. Н. Нещадим, Л. М. Онищенко. – Краснодар,
КубГАУ. - 2011. - 202 с.
32. Шеуджен, А.Х. Фундаментальная агрохимия: курс лекций, учебно-
методическое пособие / А.Х. Шеуджен. - Краснодар: КубГАУ, 2014. – 23 с.
33. Ягодин, Б.А. Практикум по агрохимии / Б.А. Ягодин и др.; под. ред. Б.А.
Ягодина. – М.: Агропромиздат, 1987. – 512 с.

104
Учебно - методическое издание

Виталий Николаевич Дышко


Виталий Витальевич Дышко
Павел Владимирович Романенко
Нина Владимировна Слученкова

Методики агрохимических исследований почв и растений


Учебно-практическое пособие

Подписано в печать___ ___ 201__ г. Формат 60х84/8.


Печ. л. 13,13 Тираж _____ экз.
Заказ № ____

ФГБОУ ВПО «Смоленская ГСХА»


214000, Смоленск, ул. Б. Советская, 10/2
105