Вы находитесь на странице: 1из 257

Вопросы к экзамену

дедлайн 17го 23.59


не расписанные отмечаем -
некоторые вопросы хорошо расписаны в доке с диска Лося, можно их перекопировать,
а потом дополнить конспектами лекций по этой теме, так как прошлогодний док
расписывался не по лекциям, видимо, к тому же тест мб не по вопросам, а по лекциям

но еще по лекциям иногда ничерта непонятно, поэтому иногда стоит добавить из


учебника-гугла, или дока Лося(там иногда гораздо понятнее написано)

1 юля, конспекты+напишите 1.1 кто-нибудь


2 юля, конспекты +
3 юля, конспекты+
4 Нелли +
5🐋+
6 Петропавловский + (я скидываю картинки из Janeway’s Immunology, ткните, если
подписи нужно перевести) Все добавил, keep calm. 👀👌
7🐋+
8🐋+
9 Карина-конспекты+юля-док Лося+напишите 9.7, 9.11 из учебника, ниче не понятно
10 Карина-конспекты. Есть знаки вопроса - прошу почекать их, но в целом блок
расписан

Инсайдовый вброс по тому, как обычно проверяется экзамен. Несмотря на то, что во
все предыдущие годы были вопросы с открытым ответом, а Купраш говорит, что
однозначного ответа нет, ценится формат “конкретный вопрос - конкретный ответ”.
Расписывать подробно функции NK-клеток в вопросе про классификацию лимфоцитов
не стоит.

конспекты лекций: Иммунология 2020

1. Введение в молекулярную иммунологию. Принципы


иммунологического распознавания.

1.1. Фазы иммунного ответа и их характерная длительность


Развитие иммунитета включает индуктивную и продуктивную (эффекторную) фазы.
Индуктивная фаза состоит в формировании исполнительных механизмов адаптивного
иммунитета и реализуется в первые 7 суток после появления в организме. В этот
период основную роль в иммунной защите играет врожденный иммунитет. По мере
развития эффекторных механизмов адаптивного иммунитета они берут на себя
основную нагрузку в защите организма.
(инфа из учебника Ярилина)

/
На пикче видно что эффекторная фаза иммунного ответа длится примерно 2 недели
(вторая-третья недели).

1.2. Основные функции иммунной системы.


1) Защита от инфекций
2) Поддержание гомеостаза тканей

1.3. Основные клеточные компоненты иммунной системы.

Иммунные процессы осуществляются клетками костномозгового происхождения,


относящимися к двум кроветворным линиям - миелоидной и лимфоидной. Миелоидные
клетки отвечают за реакции врожденного, лимфоидные - преимущественно за реакции
адаптивного и только частично - врожденного иммунитета.

1. «Микробное чужое» - врождённый иммунитет. Реакция происходит


очень быстро, но нет памяти. Клетки миелоидные (макрофаги,
нейтрофильные клетки) и дендритные.
2. «Отсутствие своего» (молекулярный пароль) – NK клетки (лимфоидные),
врождённый иммунитет (убивают «по умолчанию», но при выполнении
некоторых дополнительных условий).

/
3. «Чужое в контексте своего» - приобретенный (адаптивный) иммунитет.
Рецепторы Т лимфоцитов. Клональность (образуется целый клон
одинаковых Т-лимфоцитов, которые однажды распознали чужое в
контексте своего - вирусный эпитоп). После выздоровления большинство
клонов лизируются, но часть сохраняется (запрограммированная
клеточная смерть). Реакция требует недель для образования нужного
клона. Есть память.
4. Распознавание антигена рецепторами В лимфоцитов – приобретенный
иммунитет (белок-белковое взаимодействие). Клональность. Реакция
требует недель. Есть память.

Короче: у врожденного моноциты (из них образуются макрофаги и


дендритные клетки), эозинофилы, базофилы, нейтрофилы и тучные клетки
- миелоидные, NK (натуральные киллеры) - лимфоидные; у адаптивного
Т-лимфоциты и В-лимфоциты - лимфоидные.

1.4. Основные гуморальные компоненты иммунной системы.


Все, что связано с биологическими жидкостями. Растворимые факторы.

Гуморальные компоненты врождённого иммунитета: противовоспалительные


цитокины (хемокины, интерфероны, интерлейкины), компоненты системы
комплемента, бактерицидные вещества, эйкозаноиды (лейкотриены, простагландины,
эоксины, гепоксилины).

Гуморальные компоненты адаптивного иммунитета: система MHC-II-антигенный


пептид, костимулирующие молекулы ( на дендритных клетках это молекулы В7 - CD80
и CD86, на Т-клетках - CD28), цитокины (хемокины, интерфероны, интерлейкины),
иммуноглобулины (антитела).

/
1.5. Какие антибактериальные компоненты иммунной системы
считали самыми важными сторонники клеточной и гуморальной
теорий иммунитета?

Сторонники гуморальной теории: все защитные факторы находятся в крови и других


жидких субстанциях организма, они могут быть отделены от клеток. Бактерии могут
быть убиты только гуморальным фактором (комплементом). (Эрлих, Борде)

Сторонники клеточной теории: воспаление - нормальная врожденная реакция,


обусловленная клетками, и связанная с защитой от инфекций. Патогенные бактерии
уничтожаются фагоцитами. (Мечников)

1.6. Принцип действия профилактических вакцин. Примеры


инфекций, против которых существуют эффективные вакцины.
Вакцинами называют препараты, предназначенные для формирования
иммунологической памяти и протективного иммунитета к антигенам возбудителей,
минуя стадию инфекционного заболевания. Вакцинацией называют способ создания
протективного иммунитета с помощью вакцин.

Расширенное употребление (в отношении препаратов с противоопухолевой,


противоаллергической активностью) термина:
Вакцины - препараты, содержащие антигенный материал, направленные на
предотвращение и лечение инфекционных, опухолевых процессов, а также

/
проявлений гиперчувствительности путем индукции эффекторных клеток и клеток
памяти, оказывающих защитное действие.

Вакцина от вируса оспы


Доярки меньше болеют оспой, так как общаются с коровами с оспой. Дженнер взял
оспинки коров и вакцинировал ребенка, потом заразил его оспой, а он не заболел. Это
была перекрестная вакцина - близкородственным патогеном.
Вакцина от вируса бешенства
Пастер: если покультивировать инфекционный агент ин витро, то он ослабится и при
обработке им человека и последующим заражении нормальным вирусом, человек не
умрет.

Пастер делал вакцины от вируса бешенства. Аттенуированный патоген - изменивший


свои свойства за время культивирования.

Пастер разработал общие принципы вакцинации с использованием живой


ослабленной вакцины. Такие вакцины эффективны, но существует опасность реверсии
с восстановлением патогенности и вирулентности.

Реакция Манту - диагностический метод, есть ли у вас туберкулез.

БЦЖ вакцинацию делают при рождении, так что появляется сильная реакция на Манту,
так как есть антитела.

Беринг переносил сыворотку крови из переболевших людей, чтобы защитить здоровых


людей от того, что выделяет дифтерийная палочка. Затем стали использовать
сыворотки переболевших животных, защищающих от токсина. То же было открыто и

/
для столбнячного токсина. Для короны используется перенос плазмы крови
переболевших.

Таблица из учебника Ярилина

/
1.7. Основные принципы иммунологического распознавания.

Сенсор настроен на определенный паттерн, который может ему показаться


подозрительным. Распознается паттерн, на который запрограммирована система.
Рецепторы врожденного иммунитета распознают напрямую инвариантные микробные
паттерны. Инвариантные - хим. паттерны, характерные для классов микроорганизмов.

Распознавание подозрительных паттернов: рецепторы


врождённого иммунитета на миелоидных клетках напрямую
узнают инвариантные паттерны. Микробные паттерны -
характерны для целых классов микроорганизмов. “Микробное
чужое” - клеточные стенки бактерий. По характерным химическим
группам один рецептор может распознать целый класс
микроорганизмов:
i. G+: липотейхоевая кислота - рецептор для её
распознавания из двух субъединиц TLR2 + TLR6 (toll-like
receptor);
ii. G-: LPS (липополисахариды) - TLR4 - лигандом для этого
рецептора является липид А (специфическое узнавание).

/
Липотейхоевая кислота - инвариантная структура у грам+, а у грам - -
липополисахариды.
Оказалось, что есть рецепторы, которые напрямую распознают эти структуры.
Для грам + есть толл-подобный рецептор 2, полимеризующийся с толл-подобным
рецептором 6.

/
Для грам - есть толл-подобный рецептор 4 с лигандом липид А.

*Окрашиваются грам +, не окрашивается грам-

Распознавание по принципу “отсутствие своего”.


Клетки естественные киллеры (NK) убивают то, что не своё,
клетки-мишени без определённого пароля будут уничтожены. Этот
молекулярный пароль является рецептором - продуктом гена
главного класса гистосовместимости (класс I MHC). Если его нет,
реализуется защитная функция - NK убивает клетку-мишень.

Фиолетовая клетка - NK, через поверхностный рецептор может получать


два типа сигнала: ингибирующий и активирующий внутреннего убийцу. В норме
клетка-мишень через ингибирующий рецептор подаёт сигнал о том, что её не

/
надо убивать, она своя. В случае отсутствия пароля по умолчанию происходит
убийство. В норме такие клетки заражены вирусом или в них произошли
злокачественные изменения.
Молекулы пароля - это молекулы главного комплекса
гистосовместимости. Генетический локус МНС (HLA) - самый полиморфный
локус в геноме человека, является ключом к иммунологическому
распознаванию. Именно за счёт полиморфизма в популяции всегда есть
индивид, который сможет образовать иммунный ответ к новой инфекции.

Адаптивный иммунитет.
Включает в себя уникальные генетические механизмы, связанные с
перестройками. За счёт этого достигается большое разнообразие
распознаваемых структур. Лимфоциты могут даже атаковать свои собственные
клетки и ткани, что является аутоиммунным отклонением. Такие лимфоциты
“выбраковываются” в тимусе.
Открытие тимуса - Жак Миллер.

Адаптивное распознавание:
Рецепторы Т-клеток распознают чужое в контексте своего.
Сюда в пример приводилась притча о кабальеро, который вернулся из
долгого странствия и обнаружил на своей сеньорите чужое ожерелье. Он его не
дарил. Произошло распознавание чужого (ожерелье) в контексте своего
(знакомая шея..). После такого распознавания при определённых условиях
может наступить эффекторная фаза, заканчивающаяся убийством.
Молекулярная природа: в цитоплазме клеток есть протеасомы -
нарезают белки на пептиды. Это обеспечивает сменяемость белков, а также
является контролем того, что все белки в порядке, так как если вирус попадает
в клетку и начинает синтезировать свои, чужие для клетки, белки, протеасома
их нарезает на пептиды. Затем вражеский пептид может быть вынесен на
поверхность клетки и обнаружен Т-лимфоцитами. Таким образом, происходит
распознавание вторжения без разрушения клетки. Пептиды (как свои, так и
чужие) на поверхность выставляют МНС-молекулы. После чего TCR

/
(Т-клеточные рецепторы у Т-клетки) распознают этот пептид как “чужое в
контексте своего”.

Генетический локус МНС: короткое плечо хромосомы 6, там 3 класса


генов: I - представляют пептиды цитотоксическим Т-лимфоцитам. II - пептиды
для Т-хелперов (Th).

Последствия распознаваний - передача внутриклеточного сигнала.


Сигналы разные для адаптивного и врождённого иммунитетов.
Рецепторы закреплены на поверхности клеток, при распознавании
происходит изменение конформации, затем происходит передача
биохимического сигнала. Сигнал возникает при связывании рецептора со своим
лигандом.

Распознавание В-клеточным рецептором (распознавание антигена


антителом). В-клеточный рецептор - антитело, заякоренное на поверхности
клетки. Через антитело сигнал передаётся внутрь клетки.
Таким образом, первичная функция антитела - не плавать (не быть
просто частью гуморального иммунитета), а быть рецептором на В-лимфоцитах
и передавать сигнал.

Наглядная картинка.

Принципы иммунологического распознавания (итог):

/
5. «Микробное чужое» - врождённый иммунитет. Реакция происходит
очень быстро, но нет памяти. Клетки миелоидные (макрофаги,
нейтрофильные клетки) и дендритные.
6. «Отсутствие своего» (молекулярный пароль) – NK клетки, врождённый
иммунитет (убивают «по умолчанию», но при выполнении некоторых
дополнительных условий).
7. «Чужое в контексте своего» - приобретенный (адаптивный) иммунитет.
Рецепторы Т лимфоцитов. Клональность (образуется целый клон
одинаковых Т-лимфоцитов, которые однажды распознали чужое в
контексте своего - вирусный эпитоп). После выздоровления большинство
клонов лизируются, но часть сохраняется (запрограммированная
клеточная смерть). Реакция требует недель для образования нужного
клона. Есть память.
8. Распознавание антигена рецепторами В лимфоцитов – приобретенный
иммунитет (белок-белковое взаимодействие). Клональность. Реакция
требует недель. Есть память.

Откуда берется разнообразие специфичностей?

1. Врожденный иммунитет – ввиду огромного разнообразия потенциальных


патогенов и ограниченности генома: распознавание патогенов «по
классам» ограниченным числом предсуществующих рецепторов.
2. Приобретенный иммунитет – перестройки генов в лимфоцитах: Т и В
клеточные рецепторы (последние в секретируемой форме и являются
антителами) + соматические мутации.

/
1.8. Свойства врожденного иммунитета (по Ч. Джэйнуэю).

сигнал передают дендритные клетки


в нас действуют менее сильные адьюванты, чем мертвые микобактерии
сигнал 2 в лимфоидных органах передается лимфоцитам, дендритные клетки
мигрируют в лимфоидные органы

/
2. Врожденный иммунитет. Защита границ.

2.1. Кишечник человека: размер, устройство и факторы защиты от


бактерий.
Пищеварительная граница (начиная от рта до прямой кишки;
пищеварительная трубка, где происходит переваривание - преобразование
чужих полимеров в простые молекулы, которые всасываются через границы и с
кровью разносятся к каждой клетке, где она строит уже свои биополимеры).
Длина от рта до кишки - 10 метров, ширина - несколько см. Граница ЖКТ
250-400 м2, это самая большая граница с внешнем миром.
Такая большая поверхность берется из-за множества складок и
ворсинок, что увеличивает поверхность кишечника, на которой происходит
всасывание питательных веществ.
Диаметр ворсинки - 100 мкм (0,1мм) и ворсинок очень много.
Кишечник же покрыт одним слоем клеток однослойного эпителия.
На апикальной поверхности эпителия (смотрит в просвет кишки, бронха)
есть нановорсинки, а сверху - молекулярная проволока из разветвленных
полисахаридов - гликокаликс (50-100 нм). Поверхность с молекулярной
сетью нужна для защиты границы. Гликокаликс: белковая основа +
разветвлённые полисахаридные ветви = ригидная молекула, так как ветви
сильно гидратированы и как следствие отталкиваются друг от друга.
Основным элементом гликокаликса является муцин, создающий
трудно преодолимую преграду для микроорганизмов, чужих молекул и
вирусов.
Бокаловидные клетки выделяют слизь (гель); вблизи эпителия - плотный и
вязкий слой, дальше - более рыхлый (вакуоли со слизью).
Гель образуется из молекул муцина, они отделены от мембранной части и
образуют тример, тримеры организуются в сети, так образуются слои геля.
Таким образом, имеем сложную преграду (заряженные сахара + полимеры).
Бактерии заряжены, так что заряды им мешают.Толщина таких слоёв разная в
разных отделах ЖКТ: от 150 мкм до 800 мкм (для сравнения бактериальная
клетка 1 мкм).
200-250 мкм слизи в желудке, 200 мкм в 12 п кишке, тонкая кишка 400 мкм,
толстая 800 мкм.
Самый толстый слой в толстой кишке.
Муцин секретируется бокаловидными клетками, и чем дальше он от
поверхности эпителия, тем более рыхлый (разрушается ферментами,
микроорганизмами).

/
Помимо такого защитного слоя слизи, есть и другие методы защиты границ. А
именно производство эндогенных антибиотиков. Их производится около сотни.
Границы тела с внешним миров “вооружены” антибиотиками больше, чем
другие ткани.
Эндогенные антибиотики - защитные вещества белковой (больше 50 АК) и
пептидной природы: дефенсины, кателицидины, гистатины; лактоферрин,
лизоцим, псориазин, дермицидин и др.

Клетки Панета находятся в криптах между ворсинками и выделяют дефенсины


в гранулах, которых становится много после инфицирования.
Антибактериальные вещества клетки Панета:

Действие дефенсинов на микробную клетку:


1) образование ионных каналов и водных пор в липидной мембране
(приводит к лизису клетки);
2) разрушение липидной мембраны;
3) образование комплекса с ДНК и РНК (так как они отрицательно
заряжены, а дефенсины положительно), из-за чего происходит
нарушение их функционирования.

Toll-like рецепторы (узнают поверхностные биополимеры микроорганизмов) в


клетках эпителия кишечника:

/
/
/
2.2. Факторы защиты от патогенов на коже
Самая толстая граница - кожа (эпидермис 5-10 слоёв - 100 мкм).
Из всех наших границ с внешним миром самая толстая – это кожа, а её
площадь около 2 кв.м. Эпидермис состоит из ~5-10 слоев клеток (~ 100 мкм).

/
Соответственно, это механическая защита. В принципе, в кожном
барьере представлены все типы клеток, способные осуществлять широкий
спектр иммунных реакций. Согласно концепции лимфоидной ткани кожи —
skin-associated lymphoid tissue (SALT), наряду с лимфоцитами (больше всего
Т-лимфоцитов) к иммунной системе кожи следует отнести нейтрофилы, тучные
клетки и эозинофилы, клетки Лангерганса и кератиноциты. В коже
представлены все типы иммунного ответа — врожденный и приобретенный
(адаптивный), клеточный и гуморальный. Благодаря этому возможны и
неспецифическая защитная функция (иммуноглобулины, лизоцим,
лактоферрин, дефенсины, фагоцитоз), и первичное распознавание антигена с
последующей его презентацией и пролиферацией антигенспецифических
Т-клеток. Необходимо подчеркнуть, что особенностью кожи как иммунного
органа является относительное преобладание врожденного иммунитета над
приобретенным, а в системе врожденного иммунитета кожи в свою очередь
превалируют клеточные факторы. Нет секреции гуморальных факторов во
внешнюю среду.

2.3. Факторы защиты от патогенов в легких


Самая большая граница - там где происходит газообмен. Он должен
проходить быстро. Это границы дыхательных путей. Дыхание происходит на
поверхности 120-140 м2. И все это нужно защищать, так как вдыхаемый воздух
инфицирован (частички пыли, дыма, микробов). Поэтому каждую клетку нужно
защитить. Большая поверхность за счёт многочисленных мелких пузырьков
(альвеол) - 700 000 000 таких пузырьков диаметром 300 мкм в совокупности
даёт такую большую поверхность.
Воздушные трубки (трахея, бронхи, бронхиолы) покрыты многослойным
эпителием (несколько клеточных слоев - псевдо многоклеточный эпителий).

/
Эпителий же альвеол очень тонкий из-за процессов газообмена - в толщину
всего один слой клеток.
Альвеоцит 1 типа - очень тонкие, образуют пузырь.

Альвеоцит 2 типа - производят вещества для смазывания пузырька, чтобы он


не схлопнулся.

Выделение слизи в ответ на проникновение микроба=насморк.


С помощью молекулярных сенсоров, например Toll-like receptors, узнается о
том, что проник микроб.
TLR эпителия дыхательной систем

В состав иммунной системы лёгких входят:


Кондиционирующая функция лёгких, БАЛТ (Бронхоассоциированная лимфоидная
ткань), иммунная система бронхиальной и альвеолярной стенок, альвеолярный
макрофаг, сурфактант, кислотный барьер лёгочной ткани и
антиоксидантная система альвеолярной стенки. Благодаря
кондиционирующим свойствам лёгких альвеолярный воздух всегда по
температуре и влажности соответствует условиям организма.

Бокаловидные железистые клетки стенок бронхов вырабатывают густой


муцинсодержащий секрет (имеет бактерицидные свойства, содержит

/
гуморальные факторы). Мукоцилиарный аппарат бронхов обеспечивает
очищение поверхности от частиц, принесенных извне.

БАЛТ отвечает за распознавание антигенной структуры повреждающих


факторов. Альвеолоциты II типа в альвеолах лёгких выделяют
сурфактант, лизоцим и интерфероны для защиты границ. Иммунная
функция сурфактанта заключается в том, что продукты метаболизма ЖК в его
составе образуют лейкотриены, простагландины и АФК. Альвеолярный
макрофаг вырабатывает все факторы гуморального иммунитета (цитокины,
хемокины, иммунглобулины и т.д.) и осуществляет клеточные механизмы
иммунитета без посредников. Таким образом, в лёгких превалирует
гуморальный компонент, представленный муцинсодержащей слизью,
сурфактантом и секретом альвеолярных макрофагов.

2.4. Защитные реакции клеток эпителия.


Выделение слизи, которая препятствует движению микроорганизмов.
Эндогенные антибиотики - защитные вещества белковой (больше 50 АК) и
пептидной природы: дефенсины, кателицидины, гистатины; лактоферрин,
лизоцим, псориазин, дермицидин и др.

/
Действие дефенсинов на микробную клетку:
1) образование ионных каналов и водных пор в липидной мембране
(приводит к лизису клетки);
2) разрушение липидной мембраны;
3) образование комплекса с ДНК и РНК (так как они - заряжены, а
дефенсины +), из-за чего происходит нарушение их
функционирования.

При вторжении главная цель границ - остановить, изолировать и


ликвидировать чужое. Организм фокусируется на месте вторжения и изолирует
патоген. Организм узнаёт о вторжении благодаря рецепторам. Рецепторы очень
разнообразны, на одной клетке часто представлены разные виды рецепторов.
Рецепторы=антенны, детектируют молекулярные сигналы патогенов. Рецепторы-
молекулярные сенсоры.

Toll-like receptors (TLR №...) - узнают поверхностные биополимеры


микроорганизмов: пептидогликан (в случае G+), липотейхоевые кислоты (у G-),
липопротеины, липоарабиноманнаны (микобактерии - турбекулёз), зимозан
(грибы - дрожжи).
TLR4 - на липополисахариды (LPS G-).
TLR5 - на флагеллин (белок жгутиков).
TLR3,7, 10 - заглядывают внутрь эндосомы, распознают
неметилированные повторы СрG бактериальной НК, на однонитевую или

/
двунитевую РНК вирусов - на разной стадии репликации.

Это первая линия защиты. Если микробы прорвались сквозь слизь и эндогенные
антибиотики.
У эпителиальных клеток, как и у всех клеток нашего организма, есть рецепторы.

/
Клетка Панета производит кучу антибиотиков и фоново, но при соприкосновении с
микробом увеличивает продуцирование антибиотиков. Бокаловидная выделяет и
слизь и антибиотики. Эпителиоцит также выделяет антибиотики.

/
А внутрь клетки эпителия производят сигнал об опасности для соседей-цитокины.

Другие клетки, услышав сигналы, готовятся к защите. Готовятся к защите клетки


соединительной ткани.
Соед ткань = гель из полисахаридов + волокна + фибробласты + макрофаги + тучные
клетки.
Фибробласт образует основу этой ткани. Фибробласты и получают защиту о
проникновении инфекции. Это вторая линия обороны. Здесь также вырабатываются
сигналы об опасности и защитные реакции, а также сигналы SOS в виде хемокинов.

2.5. Типы реакции фагоцитов на контакт с инфекцией и на сигналы


опасности.

/
Быстрая реакция - выделение АФК в течение минут.
Регуляция быстрой выработки АФК происходит благодаря существованию
молекулярной машины - фермент NADPH-оксидаза (на картинке А он в разобранном
виде). Этот фермент может из О2 делать супероксид-анион. После получения
соответствующего сигнала клеткой (встреча с инфекцией/сигнал опасности от
цитокина) фермент очень быстро делает данную АФК: эта молекулярная машина
очень быстро собирается (буквально минутой). В собранном виде фермент
перерабатывает NADPH с образованием супероксид-аниона.

/
Кинетика выработки: хемокин позвал фагоцит → фагоцит пополз на сигнал, при этом
вырабатывая вот эти вот всякие ядовитые субстанции. Получается такая ползущая
смертоносная машина, разрушающая всё рядом с собой (и МО, и свои клетки). Урон
только клеткам рядом, так как все эти активные формы сразу же после
взаимодействия (а реагируют они с первым попавшимся) исчезают. Расстояния, на
которые они диффундируют, - 100 микрон, не больше, а время инактивации - 100
микросек (1/10.000 сек). То есть яды не распространяются, работа локальная.

Более медленная продукция цитокинов - эти вещества вырабатываются медленнее.


Чёрная ломанная с чёрными ромбиками с усами - кинетика продукции мРНК,
кодирующей TNFα, а кривая со светлыми треугольниками показывает сам белок TNFα.
На графике снизу те же обозначения: мРНК и IL-6 (интерлейкин 6). Белок начинает
производиться примерно через час, затем кривая нарастает, что показывает, что белок
ещё довольно долго потом производится. Скорость измеряется часами, так как нужно
включить производство новых генов, транскрипцию для производства ранее молчащих
генов. Тут же есть график с кинетикой синтеза IL-1β (интерлейкина-1 бета), смысл тот
же.

/
Медленная - выделение цитокинов (сигнал danger) в течение неск.часов:
-TNFα - Tumor necrosis factor альфа
-интерлейкин 6
-интерлейкин 1β (вырабатывается из заранее заготовленного предшественника, от
которого надо отрезать кусочек протеазой=каспазой 1 типа, которую еще надо собрать.
Каспаза активируется при срабатывании сенсоров, смотрящих в эндосому или
плавающих в цитоплазме. Эти сенсоры собираются в инфламмасому и он преобразует
каспазу. Это происходит без транскрипции, она позже.)

Механизм срабатывания внутриклеточных сенсоров: IL-1β вырабатывается поначалу


не за счёт транскрипции, как TNFα или IL-6, а из заранее заготовленного
предшественника. Так, есть полипептид-заготовка, от него отрезается кусочек и
получается готовый IL-1β (то же самое и для IL-18). Но для этого надо собрать
машину: протеазу, отрезающую часть молекулы у предшественника полипептида. Ей
является активная каспаза 1-го типа. Она активируется, когда срабатывают сенсоры,
которые смотрят внутрь эндосомы или находят признаки инфекции прямо в цитозоли.
Эти сенсоры собираются в инфламмосому - ферментативный комплекс,
преобразующий каспазу, и она отрезает у предшественника IL-1β или IL-18 кусок,
делая активную форму интерлейкина. Это происходит без транскрипции. Потом этот
ген конечно тоже может транскрибироваться, но начальные этапы обходятся без этого.

Теперь о транскрипционном перепрограммировании клетки в ответ на


инфекцию/сигналы об инфекции от других клеток (цитокины).

/
У клетки бывают разные программы в зависимости от ситуации. Поэтому каждая
клетка отслеживает внешние сигналы и в зависимости от них переходит в программу,
адекватную для сигнала.
Схема:
Сигнал 1 действует через рецептор этого сигнала. Дальше внутриклеточный
сигнальный путь 1 приводит к активации транскрипционного фактора - белка,
включающего транскрипцию ряда генов в разных участках ДНК. Программа требует
участия многих белков, значит несколько генов удобно включать одним сигналом.
Заканчивается эта программа синтезом соответствующих белков и клеточной реакцией
1.
Сигнал 2: через рецептор 2 включается сигнальный путь 2, активируются другие гены.
Производятся другие белки и реализуется другая реакция.
Так происходит регуляция поведения клетки через транскрипционное
перепрограммирование - изменение программы считываемых генов. Новые функции
белков способствуют переходу клетки в новое состояние.

Активация транскрипции генов в макрофаге: в строке обозначены гены, если они


активируются в ответ на инфекцию - они обозначаются красным, если подавляются -
зелёным, чёрный - не меняется. Смотрим на красные: макрофаг вне зависимости от
типа инфекции активирует гены цитокинов, рецепторов цитокинов, хемокины,
рецепторы хемокинов и тд (перечень синим шрифтом на слайде). Ко-стимуляторы
нужны для того, чтобы при контакте с другими клетками активировать иммунную
защиту нового типа.

NO синтаза делает активную форму кислорода и азота.


Запускание другого типа имунной защиты костимуляторными молекулами CD80,86

/
Так, в макрофаге при встрече с инфекцией активируется около 300 генов.
Макрофаг в мирное время (состояние М2): спокойный, живёт своей жизнью,
убирает мёртвые клетки и следит за порядком - housekeeper. После встречи с
инфекцией он становится макрофагом М1 - убийцей. Производит всякие яды,
активные формы.

/
Может растягиваться.
Чтобы сделать фагоцитоз, фагоцит должен загарпунить свою жертву филлоподией.
потом надо подсунуть под жертву ламеллоподию. Далее жертва окутывается и
оказывается в мешочке фагосомы, состоящей из внеш. мембраны фагоцита.

/
Дальше с фагосомой сливается другой пузырёк, в котором много разных ферментов -
лизосома. Содержимое лизосомы и фагосомы сливается, ферменты переваривают
поглощённого микроба до элементарных простых сахаров, аминокислот, липидов. Из
них клетка может сделать что-то полезное для себя или они окажутся пищевым
субстратом для других клеток.
В лизосомальной мембране есть та же NADPH-оксидаза, вырабатывающая
смертельный синглетный кислород и другие активные соединения. Кроме этого, в
лизосоме есть активные гидролазы (протеазы, гликозидазы), разрезающие полимеры
на части.

/
2.6. Механизмы хемотаксиса. Природа хемоаттрактантов. Какие
клетки и когда вырабатывают хемоаттрактанты? Приведите как
минимум два примера
Хемокины выделяют клетки соединительной ткани при взаимодействии с микробом
или если им прилетает сигнал опасности в виде цитокина. Например, всякие фагоциты
типа макрофагов могут выделять хемокины, а также фибробласты, тучные клетки.

В качестве хемоаттрактантов выступают разные вещества, образующиеся в очаге


воспаления. Прежде всего это продукты, выделяемые самими микроорганизмами.
Другую группу хемотаксических факторов формируют разнообразные
провоспалительные факторы пептидной, белковой и липидной природы,
образующиеся в очаге воспаления. Это малые фрагменты компонентов комплемента
(С3а и С5а) - анафилатоксины, лейкотриены и цитокины. Также хемотаксическим
действием обладают продукты расщепления факторов свертывания крови и
фибринолиза (тромбин, фибрин), нейропептиды, фрагменты иммуноглобулинов и т.д.

Нужны ли более точные примеры?


Пример №1: Активация моноцитов/макрофагов/эндотелиальных клеток
микроорганизмами и вирусами приводит к выработке IL-8. Он привлекает эозинофилы,
базофилы и Т-лимфоциты.

/
Пример №2: При развитии воспаления эндотелиальными клетками секретируется
хемокин MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1, или ССL-2), который является
наиболее мощным факторов хемотаксиса моноцитов.
Пример № 3: Малые пептиды, образующиеся при расщеплении факторов
комплемента (например, C3a образуется при расщеплении С3), образуют градиент и
привлекают фагоциты и активируют их, активируют дегрануляцию тучных клеток и
активируют эндотелий, действуют как сильные индукторы воспаления.

/
На переднем фронте движущейся клетки есть сенсоры - рецепторы, воспринимающие
сигналы и активирующие движение клетки навстречу им. Сенсор представляет собой 7
раз пронизывающий мембрану рецептор, узнающий хемокин.

Несколько филлоподий, вытягиваясь, образуют ламеллоподию. Актиновые филаменты


растут и полимеризуются из-за сигналов рецептора хемокина. Интегрины цепляются за

/
межклеточный коллаген.

Рецептор ассоциирован с G-протеином. Как только хемокин подействовал на рецептор,


запускается каскад (G-protein → PI3-kinase → PI3-P → GEF → Rac) который активирует
белок Arp2/3. Arp2/3 сидит на кончике полимеризующегося филамента; там, где он
активирован, филамент растёт. Таким образом, через этот рецептор идёт
биохимический сигнал к росту филамента в ту сторону, от которой пришёл сигнал.

Движется со скоростью 1 мкм в минуту, довольно медленно, но этого достаточно.

/
2.7. Типы клеток, способные к эффективному фагоцитозу. Где, в
каких тканях и органах располагаются фагоциты?
Макрофаг
Дендритная клетка
Нейтрофилы, моноциты, лимфоциты и другие клетки крови также выходят на защиту,
они все способны к фагоцитозу.
В соединительной ткани, в легких, кишечнике, дендритные и макрофаги могут
приходить в ворсинки, макрофаги в альвеолах, дендритные в бронхах.

Фагоцитоз – поглощение клеткой частицы размером более 0.5 мкм или другой клетки.

Традиционно выделяют 8 стадий фагоцитоза:


1. Приближение к объекту в результате хемотаксиса.
2. Адгезия, или установление контакта (прилипание фагоцита к объекту).
3. Активация мембраны, подготовка к поглощению.
4. Погружение, обволакивание объекта.
5. Образование фагосомы.
6. Слияние фагосомы и лизосомы.
7. Киллинг и расщепление объектов фагоцитоза.
8. Выброс продуктов деградации.
Фагоцитоз идет по так называемому “механизму крюка и лопаты”. Фагоцит
выбрасывает вокруг себя филоподии с целью попасть в чужеродный объект. Если
бактерия найдена, к ней прикрепляется несколько филлоподий (=”крюк”), но этого
недостаточно для того, чтобы оторвать микроорганизм от субстрата. Тогда под
бактерию “просовывается” ламеллоподия (=”лопата”).
Как только бактерия полностью снимается с субстрата и ложится на ламеллоподию,
сверху образуется фагоцитарная чаша для её интернализации. К профессиональным
фагоцитам относятся нейтрофилы, моноциты, макрофаги, дендритные и тучные

/
клетки. Основное отличие “профессиональных” фагоцитов от “непрофессиональных”
заключается в наличии у первых специальных рецепторов с чужеродным объектам.
Где располагаются фагоциты: на границах с внешней средой (кожа, ЖКТ,
респираторная система), во внутренних средах организма (кровь, лимфа,
соединительная и нервная ткани), а также в иммунокомпетентных органах и тканях
(костный мозг, селезенка, тимус).

2.8. Основные семейства рецепторов, позволяющие фагоцитам


распознавать молекулярные признаки микроорганизмов.

Toll-like receptors - (мембранные [TLR4, TLR5] и эндосомальные [TLR3, TLR7, TLR9]),


узнают PAMP (Pathogen Associated Molecular Patterns) - молекулярные структуры
микроорганизмов, сигнализируют. Узнают поверхностные биополимеры
микроорганизмов: пептидогликан (в случае G+), липотейхоевые кислоты (у G-),
липопротеины, липоарабиноманнаны (микобактерии - турбекулёз), зимозан (грибы -
дрожжи).
TLR4 - на липополисахариды (LPS G-).
TLR5 - на флагеллин (белок жгутиков).
TLR3, 7, 9 - заглядывают внутрь эндосомы; если она поглотила бактерию, там будет
бактериальная ДНК, которую эти рецепторы опознают (в ней много неметилированных
повторов CpG, что нехарактерно для нашей ДНК). Также они опознают вирусную ds и
ssРНК при попадания вируса в клетку.

NOD-like receptors - внутриклеточные, узнают пептидогликаны, образуют


инфламмасомы, активируют каспазу-1.

RIG-like receptors - внутриклеточные, узнают двухцепочечную РНК, индуцируют синтез


интерферонов 1 типа.

/
C-type lectins - мембранные, узнают углеводные остатки, участвуют в интернализации
молекул.

Scavenger receptors - узнают липопротеины, липополисахариды, липотейхоевые


кислоты, апоптотические клетки, обеспечивают интернализацию молекул.

/
Таблица из учебника Ярилина (на лекциях этого не было)

/
2.9. Активация фагоцита (в чем она состоит, чем индуцируется).
При встрече с инфекцией или если фагоцит получил сигнал от цитокина.
Распознавание мишеней фагоцитоза через мембранные рецепторы фагоцитов
приводит к запуску процессов активации, отличающихся деталями, но приводящих к
одинаковому результату - погружению и последующему разрушению частицы.

Регуляция быстрой выработки защитных соединений происходит благодаря


существованию молекулярной машины - фермент NADPH-оксидаза (на картинке А он
в разобранном виде). Этот фермент может из О2 делать супероксид-анион. После
получения соответствующего сигнала клеткой (встреча с инфекцией/сигнал опасности
от цитокина) фермент очень быстро делает данную АФК: эта молекулярная машина
очень быстро собирается (буквально минутой). В собранном виде фермент
перерабатывает NADPH с образованием супероксид-аниона.
Убивает только рядом с собой, так как АФК диффундирует только на расстояние сотен
микрон и быстро исчезает.

/
2.10. Бактерицидные химические вещества, производимые
фагоцитами.
Фагоциты выделяют дефенсины, каталицидины, лизоцим, лактоферрин.
А также очень агрессивные вещества:

/
Это активные формы кислорода, хлора, азота, они выделяются макрофагами.

2.11. Опсонизация частиц. Какие рецепторы фагоцита срабатывают


на опсонины.
Обязательным условием адгезии фагоцита служит распознавание объекта фагоцитоза.
Механизмы распознавания разнообразны и принципиально различаются в случаях
опсонизированного и неопсонизированного объектов.
Под опсонизацией понимают обволакивание частицы молекулами,
облегачающими её распознавание и поглощение фагоцитом.

Рецепторов, цепляющих опсонины, довольно много, например:

/
CR1, CR3, CR4 и CRIg.

Существует два основных варианта опсонизации (часто работают вместе):


1. опсонизирующие агенты - антитела класса IgG.
2. опсонизирующие агенты - фрагмент С3-компонента комплемента.

Есть два типа рецепторов. играющих основную роль в распознавании опсонинов,


фиксированных на поверхности фагоцитируемых клеток: рецепторы для Fc-части
иммуноглобулинов/антител (FcR) и рецепторы для комплемента (СR). Распознавание
патогенов и других клеток, опсонизированных антителами класса IgG, осуществляется
с помощью Fc-рецепторов (FcγR). В молекулах свободных антител распознавание
невозможно (кроме FcγRI) , поскольку участок Fc скрыт конформацией и становится
доступным только после связывания с антигеном.

У человека три типа FcγR:


1. FcγRI - экспрессирован на покоящихся макрофагах, нейтрофилы и эозинофилы
начинают экспрессировать его после активации. Распознает свободные антитела.
Сигнал внутрь клетки не передает. Наиболее высокая аффинность.
2. FcγRII - свойственны практически всем клеткам врождённого иммунитета и
В-лимфоцитам. Способны передавать сигнал внутрь клетки. Средняя аффинность.
3. FcγRIII - характерны для NK-клеток, а также макрофагов, моноцитов и ряда других.
Способны передавать сигнал внутрь клетки.

Низкоаффинные. С3-рецепторы более гетерогенны, различают 4 разновидности:


1. CR1 - экспрессирован на нейтрофилах, моноцитах (класс. фагоциты) и на
эритроцитах. Выполняет функции, связанные с развитием гуморального иммунного
ответа и клиренс иммунных комплексов.
2. CR2 - экспрессирован на В-клетках, Т-клетках и на NK-клетках. Не имеет отношения
к фагоцитозу, но активирует В-клетки.

/
3. CR3 - экспрессирован на моноцитах, макрофагах, нейтрофилах. Опсонизирует,
контроль активации комплемента. Является β2-интегрином.

Интегрин бета-2 (CD18) — мембранный белок, гликопротеин из надсемейства интегринов,


продукт гена ITGB2. Интегрин бета-2 является одним из компонентов гетеродимерных
клеточных рецепторов. Он входит в состав нескольких рецепторов.

4. CR4 - экспрессирован на моноцитах, макрофагах, нейтрофилах. Опсонизирует,


контроль активации комплемента. Является β2-интегрином.

3. Воспалительная реакция.

3.1. Основные признаки реакции воспаления. Факторы,


индуцирующие воспаление.
Воспаление
Реакция воспаления - один из важнейших механизмов защиты многоклеточного
организма от внешних вторжений, от повреждений, приводящих к изменению и
деструкции тканей. Внешние границы организма защищены с помощью
различных механизмов (подробнее см. лекцию 2). Если все же патоген
проходит через границу, то организм старается локализовать патоген в одном
месте, убить его и переварить остатки, очистить зону вторжения и восстановить
повреждения. Это оптимальный локальный сценарий, он происходит
множество раз, мы его не ощущаем.

Воспаление - это защитная реакция, которая развивается, когда местная


(пограничная) защита не справилась с инфекцией или повреждением. При
воспалении защиту осуществляет весь организм.

/
Когда развивается воспаление, патруль (фагоциты, макрофаги, дендритные
клетки) приползает в зону вторжения, и, контактируя с инфекцией, выделяет
большое количество цитокинов.

Если этих
событий много (инфекции, макрофагов и дендритных клеток), либо это
продолжается долго, и фагоциты не могут справиться с инфекцией, тогда
концентрация цитокинов и хемокинов, которые производят эти клетки,
достигает определенных значений, достаточных, чтобы вовлечь в реакцию
ближайшие кровеносные сосуды.

3.2. Факторы, вызывающие изменение эндотелия кровеносных


сосудов, ближайших к очагу инфекции и\или повреждения.
Если этих событий много (инфекции, макрофагов и дендритных клеток), либо
это продолжается долго, и фагоциты не могут справиться с инфекцией, тогда
концентрация цитокинов и хемокинов, которые производят эти клетки,
достигает определенных значений, достаточных, чтобы вовлечь в реакцию
ближайшие кровеносные сосуды.
Сигналы SOS зовут другие специализированные клетки на помощь, сигналы
danger оповещают соседние клетки об опасности, чтобы они были готовы к
защите. Цитокины выделяют эпителиальные клетки, макрофаги, дендритные
клетки, тучные клетки и фибробласты также выделяют цитокины и хемокины.

Таким образом из очага инфекции происходит диффузия веществ (цитокинов и


хемокинов), влияющих на ближайшие кровеносные сосуды. В результате

/
изменения сосудов из крови в пораженную ткань выходят защитные молекулы
и клетки. В этом суть реакции воспаления.

Активированные фагоциты в зоне вторжения вырабатывают значительные


количества таких сигнальных молекул, если вторжение значительное и его не
удается ликвидировать пограничными силами.
В ответ на сигналы из кровеносных сосудов выйдут лейкоциты, которые
направятся прямо в очаг инфекции.

3.3. Механизм торможения и выхода клеток из кровотока в ткань в


зоне воспаления

/
Лейкоциты выходят через целостную стенку сосуда. Далее идет хемотаксис в сторону
хемокинов и очага инфекции. Нейтрофилы, моноциты, лимфоциты и другие клетки
крови также выходят на защиту, они все способны к фагоцитозу.

/
На слайде изображены стадии процесса выхода лейкоцита из кровотока в ткань.
Сначала лейкоцит цепляется за эндотелий сосуда и при этом вращается (это
называется rolling), далее более плотно залипает (адгезия), распластывается и
пропихивается сквозь стенку сосуда. На всех этих стадиях у лейкоцита в мембране
одни молекулы, а у эпителиальных клеток эндотелия - другие. На слайде написаны
пары взаимодействующих молекул. Например, на стадии rolling у лейкоцита работает
PSGL-1, а у эндотелиальных клеток - L-selectin и P-selectin. Они между собой
взаимодействуют, и это позволяет клеткам контактировать друг с другом.
Всеми стадиями выхода лейкоцитов из кровотока управляют цитокины и молекулы
межклеточной адгезии.

Действуя на эндотелий сосудов хемокинами и цитокинами, фагоциты активируют


эпителиальные клетки эндотелия, которые, в свою очередь, выставляют на
поверхность белки-рецепторы - селектины. Селектины - молекулярные “крючки”,
цепляющие лейкоциты за лиганд - углеводную часть, состоящую из нескольких
соединенных между собой сахаров, глиголипида, расположенного в мембране
лейкоцита (липидная часть представлена керамидом и находится в мембране). Этот
гликолипид также известен под названием Сиалил-Льюис.

Селектины имеют доменную организацию, и самый дистальный, отдаленный от


мембраны домен (лектиновый) обладает способностью цеплять сахара. Белок,
который умеет специфическим образом хватать углеводные остатки, называется
лектин. Т.е. селектин - это имя собственное одного из вариантов лектинов (их тысячи).

Различные селектины (P-селектин, E-селектин и т.д.) отличаются структурой, но их


лектиновый домен очень похож. Немного отличается его специфичность к сахарам, и
поэтому несколько разных селектинов цепляют контрлатеральные, оппозитные
молекулы, с которыми они взаимодействуют на другой клетке.

/
Например, PSGL-1 - молекула, с которой взаимодействует P-селектин. Селектины не
находятся на мембране в виде одиночных молекул. Их много тысяч - вся поверхность
покрыта ими.
Так как селектинов на поверхности эндотелия тысячи, вероятность зацепить
проплывающие мимо лейкоциты достаточно высокая. Селектин цепляет лейкоцит и
замедляет его движение, тот начинает катиться и потом останавливается.

/
Катящийся лейкоцит выбрасывает длинные филоподии, на которых есть лиганды
PSGL-1. На слайде красные области - это скопления лигандов на филоподии. Лиганды
цепляются за P-селектин на эндотелии, и вот эти островки, которыми филоподия
крепится за поверхность эндотелия, замедляют движение несущегося лейкоцита. Он
действительно несется: в капиллярах скорость кровотока - 1000 мкм/с, а размер
лейкоцита - меньше 10 мкм. Клетка делает движение в 100 своих размеров в секунду.
Эти зацепки не очень прочные: поток продолжают нести клетку, она накатывается на
вытянутую зацепившуются филоподию, отрывает ее и цепляется следующей, тем
самым перекатывается как бы цепляясь стропами за поверхность. За счет зацепок
скорость лейкоцита замедляется в 100 раз до 10 мкм/с. Это дает возможность найти
другие контакты между лейкоцитом и эндотелием.
Благодаря дополнительным контактам возникает адгезия - распластывание лейкоцита
на поверхности эндотелия и прочное залипание с последующим проникновением
сквозь стенку сосуда.
Адгезия лейкоцита на эндотелии, распластывание и движение по поверхности
эндотелиальной клетки определяются взаимодействием другой пары молекул -
интегрина и лиганда интегрина (CAM - cell adhesion molecules). САМ - семейство
молекул клеточной адгезии на поверхности эндотелия..

/
Интегрины - белковые рецепторы лейкоцита, распознающие на поверхности эндотелия
молекулы САМ. Это гетеродимер, состоящий из α- и β-цепей. С помощью сайта
связывания лиганда интегрин хватается за САМ.

/
Разные САМы отличаются
числом доменов, в MAdCAM-1 есть еще углеводные модификации. В нашем случае
интегрин взаимодействует с ICAM-1, у нее 5 доменов.

/
Когда происходит первичный контакт PSGL-1 с P-селектином, по молекулам PSGL-1
лейкоцит получает сигнал активации, и это влияет на открытие интегрина (LFA-1), что
дает возможность образовать второй, прочный контакт между лейкоцитом и
эндотелием сосуда, клетка останавливается и распластывается.

/
Активация и распластывание лейкоцита происходят благодаря тому, что интегрин
сначала открывается; первое взаимодействие P-селектина и PSGL-1 дает сигнал через
внутриклеточные события в лейкоците, активирующие PI3-киназу (PI3Kγ) и
фосфолипазу Сγ (PLCγ2). Это приводит к тому, что экспонируется интегрин, который
взаимодействует с ICAM-1. Оказывается, остановившись и распластавшись на
поверхности эндотелия, лейкоцит еще может найти хемокин. И эти хемокины (CXCL8
(интерлейкин 8), CXCL1 и др.) выставлены на поверхности эндотелия. Хемокины могут
выставляться клетками эндотелия на поверхность и фиксироваться там
гликозаминогликаном. На слайде как раз синяя звездочка (хемокин) на синей “ветке” -
гликозаминогликане. У лейкоцита есть рецепторы к этим хемокинам. При
взаимодействии хемокина с рецептором произойдет дополнительная активация
лейкоцита через активационный сигнал, знакомый нам по управлению хемотаксисом
(см. лекцию 2). Путь сигнала будет идти через PI3-киназу (PI3Kγ), инозитол трифосфат
(IP3) и диацилглицерин (DAG). Этот сигнал произведет дополнительные изменения в
интегрине, что увеличит прочность связывания интегрина с ICAM-1 в 1000 или даже
10000 раз.

/
Все это приводит к тому, что лейкоцит пропихивается сквозь слой клеток, образующих
стенку сосуда, оказывается внутри ткани и движется в направлении источника
хемокинового сигнала.

/
Смысл того, что происходит: движение двух субъединиц (α- и β-) относительно друг
друга. Там где написано Bent (closed) неактивный, неэкспонированный интегрин. Он
активируется благодаря первому сигналу через селектин. Активированный

/
появившийся интегрин (extended closed) взаимодействует с ICAM достаточно слабо, не
очень прочно. Но если придет еще сигнал от хемокинового рецептора и подействует на
взаимное расположение α- и β-субъединиц, эти “ножки” расходятся (смотрим на пикчу),
что приводит к изменению положения двух головок α- и β-субъединиц, меняется
аффинность места связывания с ICAM, делая связывание прочнее.
Почему раздвигаются “ножки”? Потому что сигнал через хемокиновый рецептор
действует на талин, который, в свою очередь, активирует микрофиламенты. Именно
актиновые микрофиламенты раздвигают “ножки” интегрина.

Интегрин - очень редкая молекула, которая сигналит сразу в двух направлениях.

Интегрин, взаимодействуя с ICAM, может формировать сигнал, активирующий


лейкоцит (снаружи - внутрь).
Активированный лейкоцит проходит трансэпителиально между двух эпителиальных
клеток в ткань в сторону очага поражения. Эритроциты и тромбоциты, равные и даже
меньше лейкоцита, так не могут.

/
Эндотелиальные клетки соединены между собой межклеточными контактами -
молекулярными крючками. Когда лейкоцит проходит между ними, он выполняет роль
одной из клеток эндотелия. Лейкоцит использует те же молекулы, которыми
контактируют между собой клетки эндотелия: CD31, CD99 и JAM.

/
Проходя между клетками эндотелия, лейкоцит забирает нужные для построения
контактов молекулы у этих самых клеток. Он делает себе молекулярные крючки из их
резервных молекул.

Кроме прохождения слоя эндотелиальных клеток, лейкоцит должен пройти через


базальную мембрану и слой перицитов.

/
Базальная мембрана сосуда - трубочка из биополимеров (коллагены,
хондроитинсульфат, полимеры, сделанные из аминокислот и сахаров). В базальной
мембране бывают щели, а в синусоидах (в печени, селезенке, костном мозге), где
клетки должны проходить сквозь стенку сосудов, сделаны специальные отверстия -
фенестры.

А что же в нашем случае?

Окрашивание показало, что в стенке базальной мембраны есть дефекты размера,


достаточного для протискивания лейкоцита.

Окей, едем дальше. Лейкоцит прошел через эндотелий, через базальную мембрану, но
впереди еще один слой - перициты.

Перициты - клетки, образующие внешний слой сосуда и синтезирующие полимер, из


которого состоит базальная мембрана. Перициты образуют несплошной слой, между
ними есть щели, через которые и выходят лейкоциты.

Перициты тоже чувствуют цитокиновые и хемокиновые сигналы клеток, являются


активными участниками, привлекающими лейкоциты в очаг инфекции.

/
Перициты и сами вырабатывают цитокины, хемокины и молекулы адгезии.

/
Время, необходимое для того, чтобы лейкоциты почувствовали изменения на
эндотелии сосудов, прилипли, вышли и стали двигаться к центру событий, исчисляется
несколькими часами.
Для выхода лейкоцитов из сосудов больше всего подходит венула. Из обычных вен и
артерий они не выходят.

/
3.4. Координированная кинетика экспрессии молекул адгезии на
клетках эндотелия сосудов и миграции лейкоцитов в очаг
воспаления.

На слайде можно увидеть, какие лейкоциты выходят в разные дни в очаг инфекции. В
первые сутки - нейтрофилы, потом пик миграции моноцитов (выйдя в ткань, они тут же
становятся макрофагами), спустя несколько дней выходят лимфоциты (могут выходить
достаточно долго, пока очаг не будет полностью ликвидирован и восстановлен).

Как устроить такие волны миграции?

/
Для каждого типа клеток крови на эндотелии сосудов выставляется свой тип
рецепторов. Т.е. в первый день 1 тип рецепторов и выходят нейтрофилы и т.д.
Лимфоциты обычно выходят, чтобы уже все залечить и закончить в случае победы над
инфекцией (тогда это была острая инфекция). Однако в случае хронического
воспаления лимфоциты будут выходить и звать макрофагов всю оставшуюся жизнь,
чтобы предотвратить дальнейшее распространение инфекции (хроническая
инфекция).

Чтобы проверить, действительно ли рецепторы выставляются по очереди, возьмем


кровеносный сосуд, искусственно дадим импульс цитокинов:

/
Пульсовое воздействие на эндотелий включает программу последовательной
экспрессии или презентации на поверхности эндотелия разных рецепторов.

Разных рецепторов для ловли разных клеток крови недостаточно, нужны еще разные
молекулярные крючки. Тогда наши рецепторы смогут селективно отлавливать нужные
клетки. Для этого существует большое разнообразие интегринов и их α- и β-цепей, что
дает в совокупности 24 варианта интегринов:

/
На клетках крови также должны быть свои контррецепторы (лиганды интегринов),
совместимые с интегринами и рецепторами эндотелия.

/
Есть разные лимфоциты, и они все выходят в разное время.

Подытожим:

Необходимые составляющие выхода лейкоцитов из кровотока в ткань

1. Активирующий цитокин из очага инфекции должен достичь кровеносного сосуда


и оказаться иммобилизованным на его эндотелии.
2. Активирующие вещества (цитокины) должны вызвать экспрессию адгезионных
молекул на поверхности эндотелия.
3. Активирующие вещества (цитокины, гистамин) должны вызвать повреждение
плотных контактов (tight junctions) между клетками эндотелия.
4. Лейкоцит должен найти активирующий цитокин на поверхности
эндотелия,активироваться, изменить интегрин, распластаться.
5. Лейкоцит должен почуять фактор хемотаксиса (тоже иммобилизован) и
неуклонно ползти к его источнику, развивая большое механическое усилие –
вспомните фильм хемотаксис с преодолением препятствия в виде пипетки. (не
понимаю о чем это…)
6. Лейкоцит должен иметь молекулы, комплементарные молекулам межклеточных
контактов, чтобы на время встать в монослой эндотелия, как полноценный
участник этого слоя.
7. Лейкоциту необходимы молекулы для взаимодействия с перицитом –
распластывание, движение, прохождение в щели между перицитами.
8. Лейкоцит должен уметь проходить сквозь плотный волокнистый гель –
базальную мембрану, построенную из протеогликанов и фибриллярных белков.
Нужны ферменты, расплавляющие базальную мембрану. Пример –
аминопептидаза (CD13), без которой моноциты не могут выходить в ткань, в
частности, в брюшную полость.

3.5. В чем состоит защитная роль воспаления?


Воспаление – это защитная реакция, которая развивается, когда местная
(пограничная) защита не справилась с инфекцией или повреждением. Защиту
осуществляет весь организм. Из очага инфекции происходит диффузия веществ,
влияющих на ближайшие кровеносные сосуды. В результате изменения сосудов из
крови в пораженную ткань выходят защитные молекулы и клетки (например,
лейкоциты). В этом суть реакции воспаления. Из целого сосуда выходят защитные
клетки – лейкоциты. Ни эритроциты, ни даже тромбоциты не появляются, значит,
целостность сосудов не нарушена.Лейкоциты вышли точно в том месте, где они нужны
для защиты. Больше нигде в организме этого не произошло. Точная локализация. Что
происходит в очаге воспаления?
1. Формирование барьера с односторонней проницаемостью.
2. Сорбция чужеродных агентов, препятствие их распространению.
3. Ограничение крово- и лимфооттока.
4. Формирование гранулоцитарного и моноцитарного барьера (из-за размножения
соединительнотканных клеток)

/
Итак, что произошло:

Из очага инфекции шли какие-то сигналы в виде цитокинов и хемокинов. Если они
достигли ближайшего сосуда и подействовали на его стенку, на тучные клетки,
живущие рядом, то тучные клетки дегранулировались и выпустили крупные молекулы
(солнышки и зеленые штуки на пикче). Эти крупные молекулы диффундируют в очаг
инфекции для защиты. Это произойдет быстро, за считанные минуты.
Помимо этого, сосуд начнет отлавливать пробегающие мимо в токе крови лейкоциты: в
один день одни, в другой - другие и т.д. Лейкоциты будут адгезировать на эндотелии,
проникать сквозь него, выходить наружу и по градиенту факторов хемотаксиса ползти
в очаг инфекции. Клетки выпускаются медленнее, чем молекулы: в течение часов,
дней, а если надо, лет. Подведем итог:

/
Попадание в цель очень точное за счет локализованного изменения проницаемости
сосуда только у очага поражения.
Про 3,4 пункт: избыточность реакции также может убить, особенно если очаг инфекции
в жизненно важных органах, т.к. это нарушает жизнедеятельность этих органов.
Например, цитокиновый шторм в легких при коронавирусной инфекции, приводит к
пневмонии и поражению легких.
Что за большой уровень надежности? В 5 л крови содержатся миллиарды защитников,
а за счет костного мозга, включающего резервы, число защитников может утроиться
или даже учетвериться.

/
Теперь мы знаем, что здесь произошло и для чего. Покраснение, потому что
расширились капилляры; отек из-за того, что увеличилась проницаемость. Белый
центр - это погибшие лейкоциты, нейтрофилы: они выделяют ядовитые соединения
так быстро и в таком количестве, что и сами гибнут. Это и есть гной - побоище, где
погибли микробы и лейкоциты.

3.6. Роль печени в системном ответе на локальное воспаление.


Помимо местных событий в инфицированной ткани (выход из крови в ткань клеток,
крупных молекул и воды), в организме происходят системные изменения.
Они затрагивают весь организм и называются системными признаками воспаления.

Цитокины из очага воспаления попадают в кровь. Достигнув печени, они включают


синтез дополнительных защитных веществ – маннан-связывающего лектина,
С-реактивного белка, сывороточного амилоида и стимулируют глюконеогенез –
превращение запасов жира в энергетические субстраты.
1. Маннан-связывающий лектин является рецептором распознавания паттерна, он
распознает остатки маннозы в углеводной оболочке на поверхности бактерий, вирусов
и прочих патогенов. Связывание MBL приводит к запуску лектинового пути активации
комплемента.
2. С-реактивный белок (CRP) играет важную роль в удалении из организма
биоактивных лизофосфолипидов и жирных кислот, образующихся при повреждении
собственных клеточных мембран. Согласно наиболее распространенной концепции,
данный процесс осуществляется за счёт способности CRP усиливать классический
путь активации комплемента на поверхности апоптозных клеток, что облегчает
поглощение этих клеток макрофагами, имеющими рецепторы для комплемента CR3 и
CR4

/
3. Сывороточный амилоид сам по себе действует как опсонин, а также активирует
классический путь комплемента, связывая C1q.

Если процесс интенсивный или много инфекции, что ее никак не удается победить, и
клетки будут вырабатывать много цитокинов, то эти цитокины попадут в кровь и
разнесутся по организму. Их концентрации будет достаточно, чтобы включить
процессы в разных органах для защиты в очаге воспаления. Печень начнет
вырабатывать крупные защитные белки. Выпускать их будут только тучные клетки
рядом с очагом инфекции, но их производитель - печень. Цитокины также достигнут
гипоталамуса, сосудистого тела и гипофиза и повлияют на наше поведение,
настроение, продукцию гормонов и многое другое. Повышение температуры
стимулирует в клетках процессы выработки веществ защиты. Вегетативные реакции
тоже результат действия на гипоталамус. На гормоны влияет гипофиз. Зачем менять
настроение? Чтобы сфокусироваться на болезни.
Также цитокины пойдут в костный мозг, где включится продукция лейкоцитов. Они
пойдут в кровь, где будут циркулировать, и выйдут в районе очага воспаления, там где
эндотелий сосуда активирован и сможет их отлавливать с помощью селектинов,
интегринами и т.д. При разных инфекциях происходит лейкоцитоз - повышение
концентрации лейкоцитов.

/
3.7. Механизмы и биологическое значение регуляции
проницаемости кровеносных сосудов для крупных молекул.
Оказывается, помимо выхода клеток из стенок сосудов, сосуды еще и меняют
проницаемость для растворимых веществ. Т.е. помимо клеток, в очаг инфекции из
крови направляется большое количество защитных веществ.
В крови клетки занимают примерно 45% объема, а жидкая часть - 55%.

Как и какие вещества доставляются клеткам ткани? Артерия, распадаясь на


капилляры, приносит в клетки ткани различные полезные вещества, происходит
диффузия сквозь стенку каппиляров и посткапиллярных венул. Так приносится
кислород, сахара, аминокислоты, жиры и т.д. Это все диффундирует в тканевую
жидкость (и образует ее), которая омывает клетки ткани, кормит их, обеспечивает
кислородом. Далее по лимфатическим сосудам тканевая жидкость возвращается
обратно в кровь, таким образом происходит промывание ткани. Кровь все лишнее
отдает почкам, а пищевые субстраты всасывает например из кишечника и снова
разносит по организму и отдает клеткам питательные вещества. Так устроено
промывание и кормление клеток организма.

Как мы уже говорили, клетки крови выходят из тонких венул. А что насчет растворимых
веществ?

/
Давление, которое гонит жидкую часть, заставляя ее фильтроваться сквозь
стенку венулы или капилляра, составляет примерно 10 мм рт.ст. Это то
давление, которое создало сокращение сердечной мышцы. Там, где сердце,
оно гораздо больше, но пока оно добежало до мелких артериол и капилляров,
то по пути потерялось. Эти 10 мм рт.ст. и являются движущей силой,
заставляющей диффундировать воду, соли и некоторые вещества из крови в
тканевую жидкость.

/
Тучные клетки живут вдоль стенки сосудов. Зачем они там? Они являются
дирижерами проницаемости стенки сосуда: могут увеличить проницаемость
для воды и растворенных в ней веществ, когда надо. При этом увеличивается и
размер молекул, которые начинает пропускать эта стенка.

/
Тучная клетка - крупная клетка, содержащая много гранул. Получив
цитокиновый сигнал из очага инфекции, тучные клетки увеличивают
проницаемость стенки сосуда для защитных веществ. Как они это регулируют?
С помощью веществ-регуляторов, содержащихся в гранулах, например,
гистамина. Гистамин находится в комплексе с гепарином. Тучная клетка
выливает все содержимое гранул на поверхность сосуда, и в том месте, где она
дегранулируется, произойдет воздействие гистамина и других регуляторных
молекул на стенку сосуда, там изменится проницаемость. Дегрануляция
происходит быстро, за несколько секунд.
Помимо мгновенной реакции выброса веществ гранул, она еще синтезирует
вещества de novo: через активацию фосфолипазы, цикл арахидоновой
кислоты, с помощью циклооксигеназы и липоксигеназы тучная клетка
синтезирует различные активные соединения (тромбоксаны, лейкотриены и
др.), которые тоже влияют на проницаемость сосудов и не только: они еще и
стимулируют выход клеток из сосудов.

/
Для гистамина у клеток есть специальные рецепторы.

Для нас очень важно, что он действует на клетки эндотелия (H1 рецепторы). А
действуя на гладкие мышцы, гистамин может вызвать расширение артериол и
артерий, т.к. там есть мышечная часть. В венах нет мышечной части, поэтому
там он влияет только на проницаемость стенки сосудов для растворимых в
жидкой части крови веществ. Нас будут интересовать только гистаминовые
рецепторы первого типа.

Гистаминовый рецептор пронизывает мембрану 7 раз, похожий на рецепторы,


ловящие факторы хемотаксиса.

/
Посмотрим, как меняется проницаемость сосуда под влиянием гистамина.
Для этого берем калибрующие молекулы. Это те крупные молекулы, которые
обычно (без воздействия гистамина) не проходят через стенку сосуда.

Делаем из глюкозы полимер (декстран), где можно менять количество звеньев.


Т.е. можно делать декстран разной молекулярной массы.

Из экспериментов ясно, что где-то между 40 и 50 кДа граница размеров


молекул, диффундирующих через стенку сосуда в обычной жизни (без
воздействия гистамина).

Добавив гистамин, вещества молекулярной массой 70 кДа спокойно выходят из


сосудов.

Получается, сквозь тонкие стенки венул выходят как клетки крови, так и
молекулы.
Молекулы выходят на стыке двух эндотелиальных клеток. При воздействии
гистамина и других веществ тучных клеток на стенку сосуда, изменяются
свойства межклеточных контактов эндотелиальных клеток.

/
Если на эндотелиальную клетку подействует гистамин через рецептор
гистамина, то через G-белок пойдет сигнал, действующий на регуляторы,
контролирующие молекулярные межклеточные замки. Они изменят
расположение и качество межклеточных замков таким образом, что пойдут
более крупные молекулы (больше 50 кДа).

/
Вам не нужно вникать в подробности сигнализации (с) Атауллаханов
Вкратце: через 7 раз пронизывающий мембрану рецептор поступает сигнал;
желтым отмечены киназы, которые активируются при действии гистамина на H1
рецептор, и это приводит к разборке соединения между эпителиальными
клетками (оно не разрушится, но перестанет быть таким строгим).

Итак, проницаемость контактов между клетками эндотелия повышается.


Из крови – в ткань (в область вторжения инфекции) выходят защитные
вещества.

Какие защитные вещества нам нужны и важны?

/
/
4. Система комплемента

4.1. Основные функциональные блоки системы комплемента.

Система комплемента - более 30 белков в тканевой жидкости, лимфе и


крови, на поверхности клеток.
Основные функциональные блоки ПО ЛЕКЦИИ:
1. Центральное звено -”ядерное устройство” (С3, протеаза D, С3u, Bb, С3b, P).
2.Лектиновый блок (Запал 2 на слайде) (MBP (маннан-связывающие белки),
протеазы MASP, Ficolin ( родственник (аналог?) MBP)
3. Классический путь - запал 3 на слайде (C1q, С4, C4b,С2, С2a, C2b, С1(?)).
4. Хемотаксис, привлечение фагоцитов (С5a, С4a, С3a).
5. Цитолиз - продырявливание (С5, С6, С7, С5b, С8, С9).
6. Самозащита (H, I, СD59, DAF, MCP, С4bp, CR1).
7. Опсонизация, то есть стимуляция фагоцитоза (C3b, CR1, CR2 ,CR3, CR4).

ПО
ЛОСЮ немного по-другому
1. Центральное звено (С3, D, С3u, Bb, С3b, P).
2. Опсонизация, то есть стимуляция фагоцитоза (C1q,Bb, C4b, C5b, C5b6,
C5b67).
3. Хемотаксис, привлечение лейкоцитов (С5a, С4a, С3a).
4. Цитолиз (С5, С6, С7, С5b, С8, С9).
5. Самозащита (H, I, СD59, DAF, MCP, С4bp, CR1).

/
4.2. Какие клетки производят факторы комплемента?

Факторы комплемента производятся в:


● Гепатоцитах
● Лейкоцитах
● Фибробластах
● Жировых клетках
● Эпителиальных клетках

ПРУФ:

4.3. Особенности С3 как ключевого фактора системы


комплемента.
Белок С3 – ключевой фактор системы комплемента. Его особенность состоит в
нестабильности: тиоэфирная группа склонна к спонтанному гидролизу. С3 –
глобулярный белок, состоит из двух цепей α и β. Всего – более 1600 a.a.,
организованных в 13 доменов. При спонтанном гидролизе тиоэфирной группы домены
TED и CUB отодвигаются от остальной части молекулы С3, и открывается место для
посадки фактора В.

/
Образуется активный фермент C3u+Bb (С3-конвертаза), он способен протеолитически
разрушать новые молекулы С3. C3u+Bb неустойчив (стабилизируется пропердином
(по-моему это хуйня, потому что в лекции не говорили что С3u+Bb стабилизируется
пропердином, а вот С3b+Bb точно стабилизируется им.)), но может расщепить C3 на C3a
и C3b (за счет отрезания домена ANA (77 аминокислотных остатков) у C3). Это
расщепление приводит к значительному изменению конформации всей молекулы.
Происходит разворачивание и тиоэфирный домен вываливается из молекулы. ТО
ЕСТЬ при образовании C3b тиоэфирная группа не гидролизуется и остаётся способна
активно вступать в реакцию (но короткое время жизни - 100 микросекунд). Может
вступать в реакцию с OH-группами сахаров/NH2 -группами белков. На поверхности
микроба легко найти и то и другое - особенно, если бактерии насинтезировали себе
полисахаридную капсулу ))

ИТАК, C3b ковалентно связывается с поверхностью. Далее процесс идёт как цепная
реакция, так как C3b связывает B фактор, D-протеаза режет этот комплекс, в итоге
образуется C3b+Bb, расщепляющий ещё один C3. Модификация поверхности
микробной клетки множеством молекул C3b имеет фатальные последствия для
микроорганизма – фагоцитоз/лизис.

Еще раз, а то мне кажется из текста выше неочевидно:


С3u+Bb - это жидкофазная конвертаза, то, что образуется изначально при спонтанном
гидролизе тиоэфирной группы, отодвигании доменов TED и CUB. Она может резать
другие молекулы С3, и тогда уже образуется С3b+Bb - твердофазная конвертаза, тут
уже домен ANA отщепляется. Твердофазная конвертаза устойчива в отличие от
жидкофазной, т.к. ее стабилизирует пропердин.

Вокруг одной такой твёрдофазной конвертазы благодаря цепочке реакций - образуется


множество таких же. Происходит лавинообразное размножение.

/
Комплемент не активируется на клетках организма хозяина, так как есть его
белки-регуляторы комплемента. МНОГИЕ ИЗ ЭТИХ ФАКТОРОВ НАЦЕЛЕНЫ НА C3b
Фактор H занимает место в С3b, куда хочет присоединиться (или уже присоединился
фактор B).
(У фактора H больше сродство к С3b, так что он либо вытесняет фактор B, либо не
дает ему присоединиться, таким образом происходит инактивация C3b)
DAF – ложится ровно в то место на C3b, где должен быть расположен Bb .

4.4. Малые белки комплемента и их функции

К ним относятся C3a (из С3 получается спонтанным или индуцированным


гидролизом С3), C4a, C5a. Их ещё называют анафилотоксинами (?), так как при
большом их количестве они вызывают реакцию, по силе равную анафилактическому
шоку. Малые пептиды, образующиеся при расщеплении факторов комплемента,
активируют фагоциты, тучные клетки и эндотелий, действуют как сильные
индукторы воспаления. Вызывают дегрануляцию тучных клеток.Они увеличивают
проницаемость эндотелия; являются также хемокинами, по градиенту которых
лейкоцит приближается к микробной клетке, опсонизированной этими
факторами.

4.5. Альтернативный путь активации комплемента.


(ЭВОЛЮЦИОННО БЫЛ ДО КЛАССИЧЕСКОГО КСТАТИ)

Альтернативный путь активации комплемента начинается с ковалентного


связывания активной фракции С3b (всегда присутствует в крови из-за постоянно
протекающего спонтанного расщепления фракции С3) с

/
поверхностными молекулами не всех, но некоторых микроорганизмов.
Дальнейшие события развиваются следующим образом.
1. С3b связывает фактор В, образуя комплекс С3bВ.
2. В связанном с С3b виде фактор В выступает в качестве субстрата для
фактора D (сывороточной сериновой протеазы), которая расщепляет его с
образованием активного комплекса С3bВb. Этот комплекс называется
С3-конвертазой альтернативного пути.
3. Сама по себе С3-конвертаза альтернативного пути нестабильна. Чтобы
альтернативный путь активации комплемента успешно продолжался, этот
фермент стабилизируется фактором Р (пропердином).
4. Нарабатывается много С3b и образуется комплекс С3bВbС3b, являющийся
С5-конвертазой.
5. С5-конвертаза расщепляет фракцию С5, появившаяся в результате этого
активная фракция C5b присоединяет фракцию С6.
6. Комплекс С5bС6 присоединяет фракцию С7.
7. Комплекс С5bС6С7 встраивается в фосфолипидный бислой мембраны
микробной клетки, к нему присоединяется белок С8.
8. Белок С8 катализирует полимеризацию 10 – 16 молекул белка С9. Данный
полимер С9 формирует в мембране микробной клетки пору, что приводит к лизису
микроба.

/
Основное функциональное отличие альтернативного пути активации
комплемента, по сравнению с классическим, заключается в быстроте ответа на
патоген: так как не требуется время для накопления специфических антител и
образования иммунных комплексов.

4.6. Классический и лектиновый пути активации комплемента.

Лектиновый путь: маннан-связывающий лектин (MBL) связывается с


патогенной поверхностью. Маннан-связывающий лектин (MBL) имеет 6 глобулярных
головок, которые способны цепляться за концевой остаток - маннозу олигосахарида на
поверхности. У лектина есть коллагеноподобный участок и глобулярный участок. Он и
обладает способностью цеплять маннозу. Каждая субъединица МСЛ (голова-шея)
складывается из трех небольших мономеров ~10kDa. Биологической активностью
обладают тетрамеры, пентамеры или гексамеры, то есть «чудовища» с 4, 5 или 6
головами.

/
MBL несет на себе пару сериновых протеаз - MASP1, MASP2 (они изначально
НЕАКТИВНЫ). Связывание с маннанозными остатками меняет конформацию MBL, он
раскрывается и протеазы АКТИВИРУЮТСЯ (“активируют друг друга”) и производят
протеолитическое расщепление C4 (*аналог C3) и C2 (аналог B). От С2
маннан-ассоциированная протеаза отрезает C2b и C2a (аналог Bb). Это единственный
случай в системе комплемента, когда большой фрагмент после протеолиза назвали a,
а малый b.

Образeется конвертаза C4bC2a, идентичная C3-конвертазе. В конечном итоге


расщепляются C3, идёт цепная реакция как в альтернативном пути.

Классический путь:
ЧАСТЬ АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА, РАБОТАЕТ ЧЕРЕЗ АНТИТЕЛА

Антитела служат платформой для посадки C1q. Сенсорная молекула С1q гомологична
маннан-связывающему белку. Связанные с C1q протеазы C1r и C1s активируются тем
же образом, что MASP1 и MASP2 в лектиновом пути. Дальше классический путь
активации точно совпадает с лектиновым – расщепление C4 и C2, образование
конвертазы C4bC2a, расщепление C3 с лавинообразным взрывом продукции C3b.

/
Оба пути, хотя и по-разному активируются, приводят в целом к
1. лавинообразной сборке C3b на поверхности микроба
2. последовательной сборке литического комплекса, атакующего мембрану
(MAC), состоящего из C5b, C6, C7, C8 и С9.
С9 выстилает пору размером 11-12 нм через которую из клетки вытекают ионы и
бактерия погибает.

4.7. Состав и структура литического комплекса комплемента.

/
КРАТКО
Если на поверхности накапливается много молекул С3b, то происходит образование
конвертаз C3b-Bb-C3b (при альтернативном пути) и C4b-С2a-C3b (при лектиновом или
классическом пути), которые могут расщеплять C5. Из С5 получается С5а (аттрактант
фагоцитов) и C5b, который инициирует присоединение C6, C7 и С8, образуя с ними
комплекс, атакующий мембрану. Он заякорен в мембране через частицу С7. Рядом с
этим комплексом собирается олигомер С9, образующий пору.

ИЗ ЛОСЯ

Компоненты литического комплекса

Нативный Активный Функции


компонент компонент

С5а Малый пептид, медиатор воспаления


С5
С5b Инициирует сборку литического комплекса

С6 С6 Связывается с С5b, служит акцептором для С7

С7 С7 Связывается с С5b6, служит акцептором для С8

С8 С8 Связывается с С5b67, инициирует полимеризацию С9

С9 С9*n Полимеризуется на С5b678 с формированием


комплекса поры, пронизывающей мембрану

/
4.8. Защитные функции комплемента.

1. Опсонизация частиц - облегчение фагоцитоза путем прикрепления к


чужеродным частица молекул опсонинов. В случае комплемента происходит
опсонизация микробных клеток молекулой С3b. У фагоцитов есть
рецептор к С3b, что помогает им зацепить бактерию (“механизм крючка и
лопаты” ЭТО ИЗ ЛОСЯ).
2. Привлечение фагоцитов хемотаксическими пептидами С5а, С4а, С3а
(малые пептиды, которые отрезаются от соответствующих белков). Создают
хемотаксический градиент с максимальной концентрацией у поверхности. У
фагоцитов есть рецепторы на эти пептиды.
3. Цитолиз (=лизис) незащищённых клеток («чужих» и измененных «своих»)
в результате работы комплекса, атакующего мембрану (MAC), состоящего
из C5b, C6, C7, C8 и С9.
4. Индукция воспаления малыми пептидами С5а, С4а, С3а. Они активируют
фагоциты, тучные клетки (вызывают дегрануляцию) и эндотелий
(увеличивают проницаемость сосудов).

4.9. Факторы, защищающие собственные клетки от системы


комплемента.

Клетки нашего организма надежно защищены от агрессивного действия


комплемента.
1. фактор I - сериновая протеаза, режет C3b и C4b.
2. фактор Н - связан с поверхностью наших клеток через остатки сахаров
(глюкозаминогликан). Занимает место в С3b, куда хочет присоединиться (или уже
присоединился фактор B). У фактора H больше сродство к С3b, так что он либо
вытесняет фактор B, либо не дает ему присоединиться, таким образом происходит
инактивация C3b. Более того, фактор H способствует атаке протеазы I , которая
разрушает С3b, разрезая его на три части, остаётся маленький огрызок C3dg.

3. DAF (decay accelerating factor) - очень похож на N-концевой фрагмент фактора H.


Ложится ровно в то место, где должен быть расположен Bb и не пускает его. Он
держится в липидной мембране с помощью GPI-якоря (glucosylphosphatidylinositol). Так
же занимает место фактора B или вытесняет его и вызывает протеазу I.

/
Заякорен в мембране, ускоряет отсоединение Bb от С3b и C2a от C4b.
6. CD59 (протектин) - связываясь с С8 в составе комплекса C5b-C8, не дает
связываться белку С9, то есть не дает образовать комплекс, атакующий
мембрану (MAC).

А ОБ ЭТОМ НА ЛЕКЦИИ ПОДРОБНО НЕ ГОВОРИЛИ, но в общей табличе он был


4. CR1 (Complement-receptor 1) и MCP (membrane co-factor protein) - ускоряют
разрушение C3b и C4b фактором I.
5. C4BP (C4-binding protein) - связывается с C4b, вытесняя C2а. Способствует
разрезанию C4b фактором I.

/
4.10. Механизм действия токсина кобры.
Один из компонентов яда кобры, Cobra venom factor (CVF) - структурный и
функциональный аналог С3b, соединяется с В, образует конвертазу CVF-Bb, которая
не инактивируется факторами H и I. То есть клетки организма атакуются своей же
системой комплемента

5. Рецепторы врожденного иммунитета. Цитокины.


Молекулярные механизмы передачи сигналов.

5.1. Какой рецептор отвечает за распознавание липополисахарида


в клеточной стенке грам-негативных бактерий? Как происходит это
распознавание?
Открытие Toll-подобных рецепторов произвело революцию в иммунологии. За
распознавание липополисахаридов (ЛПС) в клеточной стенке грамотрицательных
бактерий отвечает Toll-подобный рецептор 4 (TLR4).
Липополисахарид - структура Грам - бактерий, которую распознают два
рецептора TLR4. Т.к. распознается липидная часть, а она не может быть очень
гидрофобная, для того, чтобы эта структура была подана на рецептор, часть
липополисахарида должна быть упрятана во вспомогательный белок MD2. Т.е. для
TLR4 лигандом является не сам липополисахарид, а комплекс LPS с MD2.

/
Липид А - это та инвариантная структура липополисахарида, которая
распознается TLR4. От количества и длины ацильных групп липида А зависит сила
передаваемого сигнала.
Грам-негативные бактерии распознаются у дрозофил путем IMD Pathway. NF-kB -
семейство транскрипционных факторов.

У человека и мыши (см. на левую часть картинки). MyD88 - адаптерная молекула.

Как происходит активация TLR:


1. Липополисахарид (ЛПС) высвобождается из клеточной стенки бактерии и образует
комплекс с сывороточным фактором LBP (LPS-binding complex).
2. ЛПС-связывающий комплекс взаимодействует с мембранной молекулой CD14 (это
обеспечивается сродством LBP к CD14).
3. Комплекс ЛПС-LBP-CD14 взаимодействует с внутренней гидрофобной
поверхностью молекулы MD2.

/
4. Наружная поверхность MD2 взаимодействует с внутренней поверхностью
“подковы” TLR4, что вызывает его конформационные изменения, то есть TLR4
распознает измененный MD2, а не непосредственно липополисахарид.
Активация TLR4 приводит к работе внутриклеточного сигнального пути NF-kB и
продукции воспалительного цитокина, который отвечает за активацию
врожденной иммунной системы.

5.2. Какой белок в составе бактериальных жгутиков распознается


иммунной системой? Какой рецептор участвует в его
распознавании?
Бактериальные жгутики состоят из белка флагеллина, способного к самоорганизации
и образующего полые цилиндрические структуры, то есть филаменты жгутика.
Флагеллин является основным компонентом бактериального жгутика и присутствует в
больших количествах почти во всех жгутиковых бактериях. За распознавание
флагеллина отвечает Toll-подобный рецептор 5 (TLR5). Есть конкретная
аминокислотная последовательность, укладка флагеллина, которая уникальна для
бактериального жгутика, поэтому все бактерии со жгутиками могут быть распознаны
TLR5.

5.3. Эндосомальные Toll-подобные рецепторы и их лиганды.

кратко:
TLR3 - dsDNA
TLR8+TLR7 - ssRNA
TLR9 - CpG
TLR4 (попадает из плазмолеммы) - MD2

/
В эндосому могут попасть вирусы и бактерии, поглощенные клеткой, поэтому
там есть TLR.
ДНК, обогащенная CpG нуклеотидами, характерна для бактерий.
Распознавание нуклеиновой кислоты в совокупности с локализацией (в эндосоме)
можно считать распознаванием типа “микробное чужое”, в других частях клетки - нет.
TLR4 - единственный рецептор, который может находиться как в эндосоме, так и на
клеточной поверхности. Будучи в эндосоме он имеет другую адапторную молекулу
(TRIF). TRIF также у TLR3. Большинство передают сигнал через адапторную молекулу
MyD88.

Длинно:
К эндосомальным Toll-подобным рецепторам относятся TLR3, TLR7, TLR8 и TLR9. В
связи с особенностями структуры трансмембранного участка этих TLR они
представлены только на мембране эндоплазматического ретикулума, но не на
плазмалемме. Такая локализация предохраняет их от распознавания собственных
нуклеиновых кислот организма, что чревато развитием аутоиммунной патологии.
TLR3 распознаёт двуспиральную РНК, характерную для большинства вирусов, а
TLR9 - участки ДНК, обогащённые неметилированными последовательностями CpG,
характерными для ДНК бактерий. TLR7 и TLR8 обладают сродством к
имидазолхолиновым и гуанозиновым производным, поэтому считается, что они
распознают односпиральную вирусную РНК.

5.4. Что такое цитокины и на основании чего их классифицируют?


Приведите примеры.
Цитокины - белковые или полипептидные факторы, лишенные специфичности в
отношении антигенов, продуцируемые преимущественно клетками кроветворной и
иммунной систем и опосредующие межклеточные взаимодействия при кроветворении,
воспалении, иммунных процессах и межсистемных коммуникациях. То есть, цитокины
являются молекулярным языком общения между клетками.
Цитокины могут быть заякорены в мембране или растворены в цитоплазме.
Действуют локально (паракринно или аутокринно). Действуют и сигналят через
высокоаффинные рецепторы.

/
Таблица известных цитокинов (не всех). Они сгруппированы по типу передачи
сигнала, который связан со внутриклеточной структурой рецептора.

Рассмотрим некоторые группы.


I группа: цитокины семейства IL-1 (интерлейкин-1). На внутренней части
рецептора у них есть TIR домен. Это домен в молекуле TLR или TR, на который
рекрутируется первая адапторная молекула каскада: MyD88. Парадигма передачи
сигналов у этих цитокинов точно такая же как от гораздо более древних Toll-like
рецепторов врожденного иммунитета.
II группа: интерфероны 1 и 2 типа и противовоспалительный интерлейкин-10.
IFN-α - это достаточно большое семейство, а IFN-β и IFN-γ только по одному гену. У
IL-10 есть небольшое подсемейство.
III группа: цитокины семейства фактора некроза опухоли. Позже выяснили, что
он скорее проопухолевый, а его основной функцией является иммунорегуляция. TNF
регулирует воспалительный ответ, а следовательно, защиту от инфекций
(микобактерии, туберкулезная палочка). Большая часть цитокинов семейства связана
с мембраной. Несколько из них запускают программируемую клеточную гибель
(внешний каскад апоптоза). Когда нужно удалить уже ненужные для борьбы с
инфекцией Т-лимфоциты, FasL (лиганд) этого семейства через соответствующий
рецептор Fas запускает программируемую клеточную гибель.
Красным отмечены важные цитокины, имеющие отношение к гемопоэзу (в
большой красной рамочке все гемопоэтины). Гемопоэтины - регуляторы
дифференцировки иммунных клеток. IL-6 например фактор патогенеза при

/
коронавирусной инфекции и его пытаются блокировать сейчас поэтому. Epo -
эритропоэтин, фактор дифференцировки эритроцитов.
XII группа: хемокины. LTN - лимфотактин. СС - большая группа хемокинов, СХС
- тоже большой список хемокинов. IL-8 назвали интерлейкином по ошибке, он хемокин.

Можно классифицировать по типу рецептора (в скобках даны цитокины):


1. Гемопоэтиновые рецепторы (IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7 и IL-8).
2. Рецепторы интерферонов (INFα, INFβ, INFγ, IL-10).
3. Рецепторы фактора некроза опухоли (TNFα).
4. Рецепторы интерлейкина-1 (IL-1, IL-18).

А можно по типу передаваемого сигнала (в скобках даны цитокины):


1. МАРК-каскады (EGF, PDGF, VEGF, SCF и другие “встроенные” тирозиновые киназы).
2. SMAD-coSMAD транскрипционные факторы (TGF-β [1-3] и “встроенные” сериновые
киназы).
3. JAK-STAT путь (интерфероны, IL-10, большинство интерлейкинов [кроме IL-1, IL-8,
IL-18 и IL-17] и гемопоэтины [кроме M-CSF и SCF]).
4. NF-kB (семейство IL1, семейство TNF).
5. G-белки (хемокины).

5.5. В чем особенность рецепторов хемокинов по сравнению с


другими цитокинами?
Хемокиновые рецепторы относят к семейству родопсиноподобных рецепторов.
Они 7-кратно пронизывают мембрану α-спирализованными участками. N-конец
молекулы рецептора и 3 петли обращены наружу и участвуют (особенно N-конец) в
распознавании и связывании хемокина-лиганда. С-конец и 3 петли обращены внутрь
клетки, с ними связаны G-белки.
Специфичность хемокиновых рецепторов характеризуется вырожденностью: с
одним и тем же рецептором взаимодействует до 10 хемокинов, только единичные
рецепторы имеют один лиганд.
С другой стороны, системе хемокинов свойственна избыточность: один и тот же
хемокин может взаимодействовать с разными рецепторами.

5.6. Что общего между семействами Toll рецепторов и рецепторов


ИЛ1/18?
Рецепторы цитокинов семейства IL1/18 являются так называемыми рецепторами
интерлейкина-1. Внеклеточный домен рецептора относят к суперсемейству
иммуноглобулинов, внутриклеточный (TIR) сходен с TIR доменом Toll-подобного
рецептора.
TIR (toll/interleukin-1 receptor) домен состоит из 3 консервативных участков,
ответственен за взаимодействие с адаптерными молекулами сигнальных путей,
он есть у MyD88, семейства IL-1, в Toll-подобных рецепторах и в R-белках растений.

TIR домен (“Toll and IL-1 Receptor”) – важен для пристыковки адаптерного белка MyD88
к TLR и ИЛ-1/18 семейства рецепторов.

/
TIR домен имеет тенденцию слипаться с другим TIR доменом. Поэтому этот домен
есть как на рецепторе, так и на адаптерном белке MyD88.

DD – «домен смерти» (death domain) участвует в передаче сигнала в системе


рецепторов TLR, IL-1/18, Fas, TNF (ФНО).

Передача сигналов от рецепторов семейства IL-1 происходит также, как и от


большинства TLR.
Лиганд связал в димер рецептор, в результате во внутренней части сблизились или
претерпели конформационные изменения внутренние участки этого рецептора. Тогда
на TIR домены смогли сесть адаптерные молекулы MyD88 с помощью своих TIR
доменов. Далее с помощью другого гомотипического взаимодействия на адаптерные
молекулы сели другие молекулы.
После того, как рекрутировалась киназа IRAK, она может фосфорилировать
следующую киназу ТАК. Дальше через несколько шагов будет фосфорилирован IKK
комплекс - киназный комплекс, отвечающий за активацию транскрипционных факторов
NFkB.
Далее фосфорилируется ингибитор транскрипционного фактора NFkB. Вообще NFkB
уже в готовом виде плавает в цитоплазме, прочно связанный со своим ингибитором.
Этот ингибитор закрывает сигнал ядерной локализации, в результате чего
транскрипционный фактор не может пойти в ядро.
В случае фосфорилирования ингибитора, он деградирует по протеосомному пути.
NFkB освобождается и может пойти в ядро, активировать гены цитокинов.

5.7. Какое биохимическое событие непосредственно предшествует


транслокации NF-kB в ядро клетки?
После стимуляции иммунных клеток каскад сигнальной трансдукции приводит к
активации (фосфорилированию) комплекса IKK (IκB kinase), событие,

/
характеризующееся связыванием NEMO с гомологичными субъединицами киназы
IKK-α и IKK-β.

Киназный комплекс IκB (IKK) фосфорилирует IκB по двум N-концевым остаткам


серина, после чего они подвергаются убиквитинилированию и протеасомной
деградации.

/
Димеры NF-kB перемещаются в ядро клетки после того, как фосфорилированный
IκB (ингибитор димера) расщепляется протеасомой.

5.8. Из каких компонентов состоят, чем активируются и какие


события запускают инфламмасомы?
Инфламмасома - многобелковый олигомерный комплекс-платформа, отвечающий за
активацию воспалительного ответа, является частью врождённого иммунитета.

В состав инфламассомы входят такие белки, как прокаспаза-1, PYD (Pyrin-domain),


CARD (caspase activation and recruitment domain), LRR (Leucine-rich region). Состав
конкретной инфламассомы зависит от активатора, что запустил её образование.

/
Существует множество рецепторов распознавания паттерна (PRR, pattern recognition
receptors), в том числе NOD-подобные рецепторы, среди которых NLRP1 (не только
он, но на нём открыли), способный олигомеризоваться и собираться в
инфламмасому.
Инфламмасома связывает через CARD домен молекулы прокаспазы-1, запуская их
автокаталитическое разрезание. Активная каспаза-1 инициирует несколько
процессов, связанных с воспалением: например, созревание противовоспалительных
цитокинов IL-1β и IL-18 из молекул-предшественников.
Секреция этих интерлейкинов может вызвать:
1. пироптоз, вид программируемой клеточной гибели.
2. секрецию интерферона γ.
3. активацию NK-клеток.
Инфламмасома

Результатом активации некоторых NLR в цитоплазме является сборка


комплекса, в котором участвует один из “гомотипических” доменов - Pyrin-domain
(PYD), через который адапторный молекулы и с доменами PYR и с доменами CARD
могут рекрутировать в комплекс прокаспазу-1 (с доменом CARD). В результате
каспаза-1 самоактивируется и становится активной протеазой, а её мишенью
становятся неактивные предшественники двух цитокинов - IL-1 и IL-18. Отдельно
отметим, что каспаза-1 не участвует в апоптозе, её уникальная роль - активация
цитокинов в ответ на активацию рецепторов врожденного иммунитета.

Пример NLR - NLRP3 -


инфламмасома, которая собрана с
помощью адапторной молекулы ASС,
с 2 доменами: пириновый домен для
олигомеризации и CARD - для
рекрутирования прокаспазы. Важно,
что сами по себе предшественники
цитокинов находятся под
транскрипционным контролем NFкB.
Т.е. нужен сигнал (signal 1 на схеме)
(например от TLR/цитокинового
рецептора), который запустит
экспрессию предшественника. И ещё
нужен сигнал в виде микробного
чужого для NLRP3 для сборки
инфламмасомы.

Существует несколько типов


инфламмасом, с разными доменами,
разными лигандами и активирующими
стимулами, например АТФ или отток ионов K+:

/
CARD-домен может напрямую связать предшественник каспазы, а если у
инфламмасомы сначала PYD домен, то нужна еще прокладка в виде CARD домена
между ним и прокаспазой.

5.9. Известные принципы врожденного распознавания вирусов.


1. В отличие от бактерий, у вирусов нет собственных метаболических путей, они
реплицируются в клетке хозяина, поэтому вирусная нуклеиновая кислота внутри клетки
едва ли может быть «паттерном» чужого. То есть, нужен дополнительный критерий -
локализация.
2. TLR3, TLR7 и TLR8 распознают вирусы не на клеточной мембране, а на мембране
эндосом, то есть внутри везикулы, в которую вирус попал с поверхности клетки (там
она может быть “понята”, как чужое).
3. TLR3 распознаёт двуспиральную РНК, характерную для большинства вирусов, а
TLR7 и TLR8 обладают сродством к имидазолхолиновым и гуанозиновым
производным, поэтому считается, что они распознают односпиральную вирусную
РНК.
4. В цитоплазме RIG-I распознаёт 5'-трифосфорилированные (некэппированные)
одноцепочечные РНК и короткие фрагменты двухцепочечных РНК. MDA5 распознаёт
мРНК без 2'-O-метилированного 5'-конца и длинные двухцепочечные РНК (более 2000
нуклеотидов). На лекции было сказано так: RLR узнают одноцепочечную РНК (RIG-I)
или двуцепочечную РНК (MDA5) в цитоплазме, а также «некэпированный» 5’-конец
РНК вируса, который по структуре отличается от хозяйской мРНК. (Некоторые
вирусы умеют кэпировать свой 5’-конец.)

/
5. Эти рецепторы содержат CARD домен, который после активации и
конформационного изменения становится доступным и рекрутирует каспазы.
Содержат CARD домен (скрыт в неактивном состоянии), который после активации
и конформационного изменения становится доступным и за счет гомотипического
взаимодействия связывается с MAVS (IPS-1), находящимся на мембране
митохондрий, что приводит к образованию новой «платформы» для последующей
активации (через IKKε, он фосфорилирует) транскрипционных факторов IRF3 и
IRF7 (важны для запуска интерферонов).

6. Конечным результатом является активация системы интерферонов первого типа.

/
Интерфероны запускают в других клетках антивирусную программу: блокируется
вирусная трансляция, запускается синтез РНКазы L, которая деградирует вирусную
РНК.

5.10. На примере любых семейств цитокинов проиллюстрируйте и


объясните основные принципы внутриклеточной передачи сигнала.
Принципы передачи внутриклеточного сигнала:
1. Гомотипические взаимодействия во внутриклеточной сигнализации:
связывание лиганда (IL-1) вызывает связывание домена TIR, присутствующего на
рецепторе IL-1R, с доменом TIR на адапторном белке MyD88.

Для передачи внутриклеточного сигнала должны произойти гомотипические


взаимодействия между белками-участниками программ передачи сигнала. Первый
белок, входящий в эту программу - сам рецептор (его внутриклеточная часть) - TIR
домен.
Гомотипические взаимодействия в системах внутриклеточной сигнализации
● TIR домен (“Toll and IL-1 Receptor”) – важен для пристыковки адаптерного белка
MyD88 к TLR и ИЛ-1/18 семейства рецепторов.
TIR домен имеет тенденцию слипаться с другим TIR доменом. Поэтому этот домен
есть как на рецепторе, так и на адаптерном белке MyD88. У следующих
перечисленных доменов есть такие же свойства.
● DD – «домен смерти» (death domain) участвует в передаче сигнала в системе
рецепторов TLR, IL-1/18, Fas, TNF (ФНО).
● DED (death effector domain) – то же.
● CARD (caspase recruitment and activation domain) –то же, плюс инфламмасома.
● PYD (pyrin domain) – инфламмасома.

На рецептор садятся адаптерные молекулы, с помощью которых через модули


гомотипических взаимодействий на рецепторе происходит самосборка “платформы”.
После самосборки «платформы» рекрутируют киназы (семейство IL1 (IL1a,b, IL1RA,
IL18, IL33) – адаптерные молекулы MyD88 (как в TLR), TRAF, IRAK ⟶ NFkB

2. «Активация, индуцированная близостью», или proximity-induced activation:


олигомеризация приводит к рекрутированию и сборке платформы с IRAK1 и IRAK4,
которые фосфорилируют убиквитин лигазу TRAF-6.

Jak-STAT Pathway: До лиганда рецепторы разобщены, но на них уже сидят в


неактивной форме JAK-киназы. Хотя киназа и не интегральная часть аминокислотной
последовательности, она все равно плотно пристыкована к рецептору.
Лиганд сшивает рецепторы в гомодимер, и киназы пространственно сближаются.
Proximity-induced activation - принцип в сигналлинге, активация, индуцированная
близостью. Сближенные киназы активируются и фосфорилируют себя крест-накрест, а

/
также другие участки внутренней части рецепторов. В итоге образовалась другая,
качественно новая белковая платформа.

● «Платформы» собираются за счёт высокого сродства взаимодействий


гомотипических доменов, или «сшивки» рецепторов лигандом, или в результате
убиквитинилирования и фосфорилирования.
● На этих «платформах» происходят конформационные изменения в неактивных
ферментах (они не могут активироваться вне платформы), приводящие к
активации ферментативной активности (белок-киназ или протеаз).

3. Роль обратимого убиквитилирования: TRAF-6 полиубиквитинилирует белок ТАК1,


который ассоциирует с IKK (IκB kinase) и фосфорилирует её по субъединице IκBβ, тем
самым освобождая от ингибитора IκB димер NF-κB, который проникает в ядро клетки и
активирует транскрипцию цитокиновых генов).

Известно, что убиквитинилирование - это сигнал для деградации, тег для молекул,
подлежащих утилизации. Но у него есть и другая роль.
● Для передачи сигнала широко используются несигналящие адаптерные белки,
которые участвуют в сборке «платформ» для пространственной организации
сигналлинга.
● Важную роль в построении таких платформ играют посттрансляционные
модификации белков, в т.ч. убиквитинилирование.
● Ферменты убиквитинилирования и де-убиквитинилирования – важная часть
сигналлинга!

/
6. Адаптивный иммунитет. Лимфоциты.

6.1. Первичные и вторичные лимфоидные органы млекопитающих.


Первичные лимфоидные органы - тимус, костный мозг. В них происходит созревание
наивных B- и Т-лимфоцитов.

Красный костный мозг - собственно орган кроветворения и иммунопоэза. Расположен


внутри эпифизов трубчатых костей, тазовых костей, ребер, грудины и костей черепа.
В ККМ выделяют ростки гемопоэза (cell lines): эритроцитарный, гранулоцитарный,
лимфоцитарный, моноцитарный, мегакариоцитарный. Они образуются из
полипотентных стволовых клеток, которые специализируются под действием
цитокинов в олигопотентные, а затем в колониеобразующие единицы (КОЕ).

Тимус - небольшой орган, расположенный перед бифуркацией трахеи, над сердцем.

В тимусе происходит созревание наивных Т-лимфоцитов. Также показано, что тимус


влияет на процесс старения.

Вторичные лимфоидные органы - лимфоузлы, селезенка, пейеровы бляшки. Играют


роль депо наивных лимфоцитов и места распознавания ими антигена.

/
Лимфоузлы - основные вторичные органы. Служат депо наивных лимфоцитов,
распознавание антигенов, попадающих в лимфоток, происходит именно здесь. По
строению (опять же, позже, гуглдокс пидар) четко разделяются на B- и Т-клеточную
зоны.

Селезенка - орган контроля крови. Антигены, попадающие в кровь, попадают в белую


пульпу с расположенными в ней Т- и В-клетками, где и отлавливаются. Здесь
находятся герминативные центры - зона созревания активированных В-лфц. Красная
пульпа служит местом депонирования зрелых элементов крови и фагоцитирования
инородных частиц, старых и поврежденных эритроцитов и тромбоцитов, превращения
моноцитов в макрофаги. Маргинальная зона находится на границе пульп и содержит
специальные макрофаги, важные для антибактериальной защиты.

Пейеровы бляшки - по сути тоже лимфоузлы, но с наворотом. Они расположены прямо


под и частично состоят из эпителия тонкой кишки. Они собирают антигены из
кишечника с помощью микроскладчатых клеток (М-клетки).

/
/
6.2. Основные направления дифференцировки кроветворных
клеток.

Пикча с лекции:

/
Фиолетовым выделен домен клеток врожденного иммунитета.

/
/
Схемы выше - коротко о происхождении лимфоцитов. Довольно удобно, с основной
важной информацией. Схемы ниже - подробно постадийно разложенное развитие
Т/В-клеток с VDJ-рекомбинацией по цепям и производимым в процессе оной белкам.
Удобно классно хорошо.

/
6.3. Какие типы Т-клеток помогают В-клеткам в ответе на
тимус-зависимые антигены? В чем заключается эта помощь?

/
Тимусзависимые антигены - антигены, полноценный ответ на которые невозможен без
участия Т-клеток. У таких антигенов есть особенность строения - нет повторяющихся
эпитопов, характерно для глобулярных белков. Их большинство.
Для развития иммунного ответа на тимусзависимые антигены необходимо участие
Т-хелперов Th1 и Tfh (фолликулярные). Они усиливают адаптивный ответ,
презентируя антиген В-клеткам и выделяя цитокины, главным образом IL-4/-5/-13. При
этом В-клетки пролиферируют и могут превратиться либо в короткоживущие
плазматические клетки, синтезирующие антитела, либо в долгоживущие В-клетки
памяти. Они также запускают процесс оптимизации антигенов. Вроде бы за эту
функцию отвечают Th1, а за остальные - фолликулярные, но в Джейнуэе здесь
путаница между схемами и текстом.

/
6.4. Какой тип Т-клеток и с участием каких молекул помогает
макрофагам? В чем заключается эта помощь?

Основную работу здесь делают Th1.


- продуцируют IFN-γ и CD40-L, индуцируя и активируя таким образом М1
макрофаги, также за счет постоянной индукции интерфероном образуются
гранулемы (Гранулема - ограниченное скопление клеток, способных к
фагоцитозу);
- при обнаружении инфицированных макрофагов (старых/дефектных, чаще
всего) синтезируют fas-лиганд и LTβ (лимфотоксин-бета), индуцируя апоптоз
таких макрофагов.
Некоторая функция есть у Th2:
- рекрутируют и активируют макрофаги М2 с помощью IL-4/-13.

/
6.5. Теория клональной селекции лимфоцитов.

Теория Бернета - теория, согласно которой в организме возникают клоны


иммунокомпетентных клеток.
Основные положения:
- Антитела и лфц с необходимой специфичностью в организме существуют еще
до первого контакта с антигеном;
- ЛФЦ, участвующие в ответе, имеют на своей мембране рецепторы (В-клетки
имеют те же молекулы, которые выделяют);
- Каждый ЛФЦ имеет только один тип рецепторов;
- Активированный В-лимфоцит формирует клон плазматических клеток в
результате пролиферации. Они могут синтезировать только антитела
В-лфц-предшественника. Благодаря этому они могут накапливаться в случае
инфекции.
- Механизм для Т-клеток аналогичен.

/
6.6. Строение В-клеточных рецепторов и антител.

Пикча с лекции:

/
Слева соответственно В-клеточный рецептор.
Это заякоренная на мембране структура из 4 полипептидных цепей, 2 - короткие
(легкие), 2 длинные (тяжелые), соединенные дисульфидными мостиками. Рецепторы
B-клеток устроены аналогично антителам, но имеют мембранно-связывающий домен,
связанный с Fc. Т-клеточные рецепторы, в свою очередь, гомологичны вариабельному
домену антитела, закрепленному на клеточной мембране.

/
6.7. Участие антител в иммунной защите

1. Связывание с вирулентными эпитопами вирусов, чтобы блокировать их


проникновение внутрь клеток.

/
2. Блокирование связывания токсинов с клетками.
3. Аналогично для бактерий-внутриклеточных паразитов.
4. Опсонизация бактерий, чтобы облегчить фагоцитоз.
5. Активация комплемента.
6. Антитело-зависимая цитотоксичность. Достаточное количество связанных с
мишенью антител, является сигналом для NK-клеток, которые распознают их
Fc-домены. Если NK-клетка получает такой сигнал, она убивает клетку-мишень.
7. IgE находятся на поверхности тучных клеток, если они получают
множественный сигнал от мультивалентного антигена, то запускают сигнал на
дегрануляцию тучной клетки.

/
Это - спертая из лекций сводная таблица, отвечающая на вопросы 6.8-6.10. Лекция, в
свою очередь, использует таблицы из Джейнуэя.

6.8. Свойства и функции IgM


См. 6.7

/
IgM - первая линия защиты, эти антитела активированный В-лимфоцит производит
первыми. Производятся в виде пентамеров, ввиду пониженного сродства к антигену.

6.9. Свойства и функции IgG


См. 6.7

IgG - основные иммуноглобулины крови. Долгосрочный иммунитет, нейтрализация


токсинов, проникновение через плаценту, активация комплемента, активация
фагоцитов. Есть четыре подкласса, отличающихся константными частями и по
выполняемым функциям.

/
6.10. Свойства и функции IgA и IgE
См 6.7

Ig E - нейтрализация паразитов. Аллергические реакции. Его очень мало в


выделяемой сыворотке, т.к. обычно он сидит, облепив тучные клетки. IgE находятся на
поверхности тучных клеток, если они получают множественный сигнал от
мультивалентного антигена, то запускают сигнал на дегрануляцию тучной клетки.

IgA - секретируемое антитело. Защита на слизистых поверхностях. Может быть и в


виде мономера, и в виде димера, у димеров есть специальный белок (секреторный
компонент на пикче), который обеспечивает секрецию IgА через эпителий кишечника.

/
6.11. Неонатальный Fc рецептор

Неонатальный Fc-рецептор - рецептор Fc-фрагмента IgG. Гетеродимер из


микроглобулина β2 и MHC-I-like тяжелой цепи. Узнает участок, соединяющий Ch2- и
Ch3-домены. Обеспечивает усвоение IgG из крови/молока матери, во взрослом
возрасте важен для поддержания гомеостаза этих антител и сывороточного
альбумина. Обнаруживается в эндотелии сосудов, антигенпрезентирующих клетках,
эпителии кишечника, эндотелии ЦНС итд.

Неонатальный Fc-рецептор связывается с константной частью IgG при кислом pH и не


связывается при нормальном физиологическом, благодаря этому он может
обеспечивать транспорт IgG из кишечника новорожденных (материнское молоко) в
кровеносную систему. Обеспечивает перенос через плаценту и возвращение IgG из
кислых эндосом эпителия сосудов обратно в циркуляцию. То есть благодаря этим
рецепторам IgG может долго циркулировать в организме, в отличии от обычных
белков, которые очень быстро выводятся.

6.12. Строение Т-клеточного рецептора.


См. 6.6

/
Т-клеточные рецепторы гомологичны вариабельному домену антитела, закрепленному
на клеточной мембране.

6.13. Особенности строения и функционирования молекул MHCI и


MHCI.
СМ. 6.14

6.14. Особенности строения и функционирования молекул MHCI и


MHCII.

α1/2-домены МНС-I - антигенсвязывающий комплекс. Аналогично, у MHC-II это β1/α1.


Первый тип МНС находится на всех клетках организма, его наличие проверяется
натуральными киллерами, а связанные с разными МНС антигены - Т-клетками
(Т-хелперами), с помощью комплекса MHC-II, который присутствует только у
антигенпрезентирующих клеток.

Т-хелперы несут ко-рецептор CD4, антиген им презентируют профессиональные


антиген-презентирующие клетки, которые экспрессируют MHC II, после собственной
активации.

/
Ко-рецепторы взаимодействуют только с MHC, не задевая пептид.

На предсобранный MHC I пептиды попадают изнутри, после их нарезания


протеасомами, в то время как MHC II связывает экзогенные пептиды,
захваченные клеткой.

/
/
Структура презентирующего участка MHC представляет собой бороздку, в которой
конформация области контакта зависит от аминокислотного состава боковых
альфа-спиралей, формирующих ее, и структуры самого антигена. Следовательно,
распознавание “чужого в контексте своего” TCR-рецептором производится
наполовину по MHC, наполовину по самому антигену.

Строение пептид-связывающей щели отличается у разных классов MHC. Как


видим, MHC I нуждается в более коротких антигенных пептидах для презентации, так
как пептид-связывающая щель более закрыта.
Аминокислотный состав боковых альфа-спиралей изменяется между аллелями,
наименее консервативные аминокислоты как раз являются отвечающими за
специфическое связывание антигена
внутри щели. Итого каждая аллель
MHC имеет свой репертуар
антигенных пептидов для презентации.
Вследствие такого широкого
полиморфизма репертуар Т-клеточных
эпитопов индивидуален.
В свою очередь это дает лучшую
популяционную защиту от вирусов и
обеспечивает индивидуальные реакции
на различные патогены.

/
Молекулы MHC
● αβ Т-лимфоциты распознают фрагменты антигенов только в комплексе с
молекулами MHC (MHC-рестрикция) (исключение - суперантигены);
● молекулы MHC настолько полиморфны, что репертуар Т-клеточных эпитопов
фактически уникален для каждого индивидуума, что крайне полезно для
антивирусной защиты популяции;
● то же самое обстоятельство обуславливает широкий диапазон индивидуальных
реакций на инфекции, различную генетическую предрасположенность к
аутоиммунным реакциям и сложности при трансплантации.

6.15. Генетика и механизм V(D)J рекомбинации.


(сперто из дока с конспектами лекций)
Гены, кодирующие рецепторы занимают довольно крупные локусы ~1-2
мегабазы. Однако это довольно компактно, если учесть их огромную вариативность.
Компактизация обеспечивается т.н. коллекциями разных фрагментов V, D и J.

Комбинация этих фрагментов и обеспечивает случайный “фоторобот” антигена.

/
RAG-эндонуклеаза ориентируется на
специальные
RSS-последовательности, которые
пристыкованы к V, D и J фрагментам и
представляют собой разорванные
палиндромы. Разрыв составляет 12
либо 23 п.о.
Важно отметить, что механизм 12/23
делает невозможным прямую
рекомбинацию между регионами с
RSS-23, без участия RSS-12, что
наблюдаем на рисунке для тяжелой
цепи, где без D, рекомбинация V и J
невозможна.
В RAG-комплексе RAG1 является
собственно рекомбиназой, а RAG2
стабилизирует тетрамер и
взаимодействует с гистоном H3.
Предполагается происхождение
RAG от транспозонов.

/
Участок D-J соответствует CDR3 (complementarity determining region 3),
который является наиболее вариабельным регионом в тяжелой цепи, отвечающим за
комплементарность к лиганду. Вариабельность в этом регионе возникает именно при
V(D)J-рекомбинации, в то время как вариабельность в CDR1 и CDR2 уже
закодирована в геноме.

На этом перестройки для Т-клеток завершаются.

/
B-клетки после рекомбинации переживают соматический гипермутагенез,
совершенствуя распознавание своего антигена.
Также B-клетки способны к переключению изотипов экспрессируемых антител.

Для формирования общей картины - см. 6.2, две схемы в конце - VDJ рекомбинация Т
и В по цепям с участвующими белками (какие на каком этапе).

6.16. Где происходит соматический гипермутагенез, какие клетки в


этом участвуют?
См. чуть выше

/
B-клетки после рекомбинации переживают соматический гипермутагенез,
совершенствуя распознавание своего антигена.
Также B-клетки способны к переключению изотипов экспрессируемых антител.

При взаимодействии с T-клетками B-лимфоциты представляют им фрагмент


захваченного патогена в контексте MHCII. T-клетки популяции фолликулярных
T-хелперов. Они попадают в B-клеточную зону, экспрессируя на поверхности рецептор
для B-клеточного хемокина, и предоставляют костимуляторный сигнал, на что
цитокины в ответ активируются.
B-клетки взаимодействуют с фолликулярными дендритными клетками
(происходят из перицитов кровеносных сосудов), функция в том, чтобы удерживать на
своей поверхности антиген в нативном состоянии. Таким образом, чтобы В-клетки,
проводящие мутагенез генов рецептора, могли конкурировать за связывание с этим
антигеном. B-клетки с удачным мутагенезом побеждают в конкуренции и получают
сигнал к выживанию, проигравшие - в апоптоз.

/
6.17. Зачем нужны гибридомы и что требуется для их получения?

/
Гибридома - это слитые (с помощью уничтожения и перестройки мембраны) клетки
В-лимфоцитов, способные к синтезу антител, и миеломы. Получающаяся линия может
долго поддерживаться и производить антитела.
Что нужно:
- иммунизация мыши
- выделить лимфоциты из селезенки
- клетки миеломы, не содержащие гена
гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы (иначе не чувствительна к
селектирующему агенту) и не производящие антител
- среда с гипоксантином, аминоптерином и тимидином (НАТ) (в ней выживают
только гибридомы)
Применяется эта хренота для производства моноклональных антител, тк такая
околовечная культура может быть размножена (что на практике и делается).

6.18. В чем отличие ELISPOT от ELISA?

/
По сути оба метода - похоже об одном и том же. Принципиальная разница заключается
в том, что ELISA требует наносить непосредственно белок, который связывается с
антителами, и на эту вот восхитительную конструкцию уже сажают антитела с метками
(это вариант сэндвича, самый распространенный способ поставить элайзу). В отличие
от элайзы, здесь (ELISPOT) наносятся непосредственно клетки, выделяемые которыми
цитокины уже вяжутся с антителами на подложке. После инкубации это дело
промывают, еще несколько раз обрабатывают, связывая со специфическими
антителами, наконец с маркером.

/
Есть отличие и в получении информации. В случае с ELISA - получается плотность
раствора, которая сравнивается с калибровочной кривой. В ELISpot подсчитывается
количество точек (автоматически или с помощью микроскопа) в отдельной лунке,
которое отображает частоту цитокинпродуцирующих клеток, которые мы наносили
изначально. По ссылке есть хорошая анимация принципа метода, если кому надо:
https://www.mabtech.com/knowledge-center/assay-principles/elispot-assay-principle

1. ELISA
На поверхность сажается захватывающее АТ, узнающее один участок интересующего
АГ. Затем наливается другое АТ, которое конъюгировано с другим ферментом,
производящим цветную или световую реакцию. За счет комбинации 2х высоких
афинностей АТ к разным участкам искомой молекулы, можно получить исключительно
чувствительное и точное определение нужной молекулы в сыворотке крови,
биожидкостях.
2. ELISPOT
Еще более чувствительный метод по определению продукции цитокинов клетками.
Здесь плашка покрывается антителами, затем на ней выращиваются клетки, которые
как-то стимулируются, и АТ к интересующему цитокину. Цитокины не могут уйти далеко
от производящей их клетки, потому что захватываются АТ на плашке. Если
концентрация клеток подобрана правильно, то каждая индивидуальная клетка,
производящая цитокин, будет обнаружена при помощи детектирующих антител в виде
цветного пятна.
Если посеять миллион клеток на ячейку, то 5-10 точек позволят обнаружить в
популяции T-лимфоцитов 1/100000 клеток, производящих цитокины.

6.19. Мешают ли разные антитела друг другу при одновременном


анализе на несколько маркеров методом проточной
цитофлуориметрии?
На практике часто получается, что разные метки перекрываются и засвечивают
соседние каналы (FITC может засвечивать фикоэритриновый канал), для решения
этой проблемы в цитометрии используют одиночные контроли (single-stained controls),
с помощью которых выполняется компенсация, чтобы при анализе работать с чистыми
значениями.

/
Есть система детекции в несколько флуоресцентных каналов, которая позволяет
проанализировать для каждой клетки наличие на поверхности каждого из маркеров,
для которых в смеси были АТ.
Современная система позволяет детектировать десятки разных флуоресцентных
каналов, проще - 4, 8 и тд.
Можно добавить к системе модуль с пьезо-элементом, который разбивает струю с
проходящими клетками. 1 капля - 1 клетка. Они электризуются и по алгоритму анализ в
реальном времени, при помощи электрического поля капли с нужным набором
флуоресцентных маркеров отклоняют в пробирки - клеточная сортировка.

6.20. Какие природные белки применяют для иммунопреципитации,


и почему именно эти?
Классически в иммунопреципитации используются бактериальные белки A и G.
Причина очень простая - они связываются с Fc-областью массы антител и просты в
получении (получают из стафилококков).
Бактерия облеплена АТ задом наперед, и Fc-рецепторы ее не узнают. Фагоциты могут
захватить.

/
/
7. Активация лимфоцитов. Развитие лимфоцитов в
первичных лимфоидных органах.

7.1. Сигнальные белки, входящие в комплексы BCR и TCR, и


механизм запуска внутриклеточных сигнальных каскадов.

У B-cell Receptor (BCR), нет внутриклеточного сигнального фрагмента. Для этого


есть передающие сигнал молекулы Ig(альфа) и Ig(бета), несущие ITAM сегменты -
которые обеспечивают сигналинг.

BCR: Ig α , Ig β , на каждом есть ITAM (Immunoreceptor tyrosine-based activation motif).


Тирозиновые остатки в этих мотивах становятся фосфорилированными после
взаимодействия молекул рецептора с их лигандами. Фосфорилированные ITAMs
служат сайтами стыковки для других белков, содержащих домен SH2, которые служат
индукторами сигнального каскада, приводящего к активации иммунной клетки.

TCR: комплексы CD3, ζ − цепь, тоже содержат ITAMs.

/
Для того, чтобы передать сигнал, необходима кластеризация молекул BCR
путем связывания с мультивалентным лигандом или формирования
иммунологического синапса. Ну или агонистические тела могут помочь (только в
эксперименте). В случае с Т-клетками в кластеризации комплекса участвуют
заряженные аминокислоты.

/
Механизм (на примере TCR):
1. Lck (сериновая киназа) связана с ингибирующими фосфатами. CD45
дефосфорилирует Lck, её активированная форма стабилизируется при наличии
стимуляции TCR.

Ключевую роль играет киназа Lck, она через координированный Zn связана с CD4/CD8
корецептором (поэтому все время находится рядом с комплексом TCR). Она содержит
последовательность с “ингибирующим тирозином”, его фосфорилирование приводит к
связыванию с SH2 доменом этого же белка (киназы) и сворачиванию этого белка в
такую конформацию, в которой киназный домен не активен. В неактивных клетках,
киназа Csk поддерживает этот тирозин в фосфорилированном состоянии (чтобы Lsk
не активировалась).
При продуктивном взаимодействии с лигандом, фосфатаза CD45 дефосфорилирует
киназу Lck, удаляет фосфат с “ингибирующего тирозина”, белок разворачивается в
активную конформацию и может фосфорилировать ITAM мотивы, находящиеся в
составе ζ-цепи комплекса TCR.

2. Lck фосфорилирует ITAM мотив на CD3 и ζ .


3. Такой фосфорилированный ITAM служит мишенью для связывания Src киназ (в
данном случае ZAP-70), которые активируются и фосфорилируют несколько

/
скаффолд-белков (каркасные белки, не имеют ферментативной активности, служат
для посадки участников сигнальной цепи).
С фосфорилированным ITAM связывается ZAP-70 киназа (содержит SH2 домен,
связывает тирозины). Она фосфорилирует теперь SLP76 и LAT, что запускает 4
сигнальных модуля:
I. Активация PLCγ : запускаются факторы транскрипции через посредников.
Расщепление PIP3 на IP3 и DAG.
IP3 открывает кальциевые каналы, активируя фосфатазу кальциневрин, запускающий
NFAT (nuclear factor for activated t-cell) путем удаления ингибирующих фосфатов. DAG
остаётся на мембране и привлекает PKC-θ и RasGRP (RAS guanyl-releasing protein),
является платформой для их посадки.
NFκB активируется через PKC-θ и CARMA, AP1 через RasGRP, Ras и каскады MAP
киназ.
II. Akt повышает клеточную метаболическую активность.
III. Vav запускает полимеризацию актина и реорганизацию цитоскелета.
IV. ADAP усиливает "липкость", кластеризацию интегринов (это меняет свойства
клеточной адгезии).

/
PLC-γ расщепляет PIP3 (фосфатидилинозитол трифосфат), находящийся на клеточной
мембране, на IP3 (инозитол трифосфат) и DAG (диацилглицерол). И здесь происходит
соединение сигнальных каскадов от TCR и молекул костимуляции, потому что
появление PIP3 является результатом костимуляторного сигнала.

В результате вышеописанного активируются три фактора транскрипции


(формально, каждый из них это не один фактор, а семейство): NFAT, NFkB, AP1.

● NFkB - активируются при любых сигналах клеток на выживание,


пролиферацию, иммунологических реакциях, в раковых опухолях
● AP1 - ключевые факторы активации транскрипции в разных клетках
● NFAT - открыты при изучении T-лимфоцитов, являются мишенью
иммуносупрессора циклоспорина А. Он активируется через внутриклеточный
кальций, который запускает фосфатазу кальциневрин, которая удаляет с
предсинтезированного NFAT ингибирующие фосфаты => меняется
конформация => открываются сигналы ядерной локализации => NFAT
отправляется в ядро и активирует гены (циклоспорин А блокирует
кальциневрин).

/
Важность корецепторов для данного механизма: Без корецептора CD28 PIP2 не
фосфорилируется до PIP3, а PIP3 необходим во-первых для того, чтобы расщепиться
на IP3 и DAG и далее активировать транскрипционные факторы (см. пикчи выше),
во-вторых, PIP3 является платформой для посадки разных киназ, в том числе Itk,
которая фосфорилирует PLC-γ, активируя её.

7.2. Основные физиологические последствия активации TCR.

/
Основные физиологические последствия активации TCR - фосфорилирование
сигнальных молекул LAT и SLP-76, что приводит к:
1. активации транскрипционных факторов (через PLCγ)
a. NFAT из-за выхода Cа2+ в ЦПМ при сигналинге от IP3
b. NFkB через PKC-θ при сигналинге от DAG
c. AP1 через Ras GRP (guanyl-releasing protein) при сигналинге от DAG
d. RAS и MAP (cell survival).
2. повышению клеточной метаболической активности (через Act).
3. полимеризации актина и реорганизации цитоскелета (через Vav).
4. усилению адгезивных свойств поверхности: усилению “липкости” и
кластеризации интегринов (через ADAP).

/
7.3. Три типа сигналов, которые Т-лимфоцит получает от
активированной антиген-презентирующей клетки. Что это за клетка,
и где происходит взаимодействие?

1. Сигнал активации: распознавание TCR пептида, презентированного в комплексе с


молекулой МНС (CD4-MHC-II, CD8-MHC-I).
2. Сигнал выживания: чтобы вхолостую не активировать Т-клетки, необходим сигнал
от костимуляторов CD80 и CD86, которые присутствуют в большом количестве на
поверхности АПК, активированной микробами. Узнается CD28 Т-клетки.
3. Сигнал дифференцировки: цитокиновый, хемокиновый (IL-6, IL-12, TGF-β, IL-4 для
CD4 T-клеток; IFNα и IL-12 для CD8 Т-клеток).
Взаимодействие происходит в лимфатическом узле.

/
7.4. Основные функции интерлейкина-2 в физиологии Т-клеток.

В Т-клетках одной из основных функций NFAT, AP-1 и NFκB является стимуляция


экспрессии гена цитокина IL-2, который необходим для пролиферации и
дифференцировки Т-клеток в эффекторные клетки. Промотор для гена IL-2
содержит несколько регуляторных элементов, которые должны быть связаны
факторами транскрипции для инициации экспрессии IL2.
Некоторые сайты уже связаны факторами транскрипции, вырабатывающимися
конститутивно, но этого недостаточно для включения IL-2. Только когда AP-1, NFAT и
NFκB активированы и связаны со своими сайтами в промоторе, IL-2 представляет
собой экспрессируемый ген. Кроме того, костимуляция CD28 дополнительно
усиливает транскрипцию IL-2 путем увеличения активации NFκB.
Таким образом, промотор IL-2 объединяет сигналы как от рецептора Т-клеток, так
и от CD28, чтобы гарантировать, что IL-2 производится только при соответствующих
обстоятельствах.

Ген IL2 это механизм, интегрирующий сигналы от TCR и ко-стимуляции. В его


промоторе (меньше 200 п.н.) расположены участки связывания для факторов
транскрипции (для некоторых больше одного): NFAT, AP-1, Oct1, NFkB. Они
взаимодействуют друг с другом, например NFAT и AP-1 когда садятся находятся в
белок-белковом контакте. Это позволяет быстро и эффективно запускать работу IL2 в
активированных Т-лимфоцитах.

/
7.5. В чем сходство и в чем разница между ITAM и ITIM мотивами?

ITAM (immunoreceptor tyrosine-based activation motif) - белковая последовательность,


бывает разной, но основная черта - наличие тирозинов (Y) и изолейцинов/лейцинов
(I/L): Y-xx-I/Lx(6-12)-Y-xx-I/L. х-любая АК.
Эти тирозины фосорилируются Src-киназами, к фосфорилированным мотивам
присоединяются Syk-киназы, содержащие SH2-домен (ZAP-70, Syk). Эти события
запускают активирующий сигнал, запускающий внутриклеточные сигнальные каскады.
ITAM локализуется во внутриклеточной части полипептидных цепей TCR (γ,δ,ε,ζ), BCR
(Igα, Igβ), FcR и других, они отвечают за способность рецептора активировать клетку.

ITIM (immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif) - антагонист ITAM.


Последовательность: I/V/L/S-x-Y-xx-L.
Механизм такой же как и у ITAM, но рекрутирует фосфатазы, содержащие SH2
домен (SHP1, SHP2, SHIP) . В итоге ингибируется внутриклеточный сигнальный каскад.
ITIM локализуются в ингибирующих рецепторах NK-клеток, во внутриклеточной части
молекул KIR, СD94/NKG2A, FcγRIIB, CD22, CD72 и других.

7.6. Механизмы активации естественных киллеров.


NK-клетки (natural killer) - крупные лимфоциты, имеют характерные азурофильные
цитоплазматические гранулы, содержащие цитотоксические белки (перфорин,
гранзимы, гранулолизины), и функционально идентифицируются по их способности
убивать определенные линии опухолевых клеток in vitro без специфической
иммунизации.

/
В отличие от Т-клеток, способность убивать NK-клеток запускается врожденными
рецепторами, которые распознают молекулы на поверхности инфицированных или
злокачественных трансформированных клеток. Это система врожденного
иммунитета.
В процессе созревания NK-клетка настраивает уровень ответа так, чтобы не
реагировать на собственные клетки, имеющие на поверхности определенный набор
молекул MHCI и других NKR лигандов. У NK-клеток есть активирующие и
ингибирующие рецепторы. Ингибирующие рецепторы активируются узнаванием
“своего”. Активирующие рецепторы связываются с активирующим лигандом, которого в
здоровой клетке немного. Баланс сигналов от активирующих рецепторов и
ингибирующих приводит NK-клетку к решению, убивать или нет.
1. Механизм лизиса активируется в ответ на потерю экспрессии MHCI ("потеря
своего"). Например, опухолевая клетка с отсутствием MHCI прекрасная цель:
ингибирующие рецепторы (KIR) не связываются со своим лигандом, но есть
активирующие рецепторы → убийство.
2. Механизм лизиса активируется в ответ на повышение экспрессии стрессорных
белков ("стресс-индуцированное свое"). Свое узнается, но есть перевес в сторону
активирующих рецепторов (NKG2D) → убийство.

7.7. Логика селекции лимфоцитов в первичных лимфоидных


органах.

Концептуально селекция В- и Т-лимфоцитов сходна, но происходит в разных


местах. Кроме того, наблюдается параллель между строением BCR и TCR (тяжелая
цепь с β-цепью и легкая с α-цепью).
1. Происходит перестраивание тяжелой цепи (β-цепь). Рецептор выходит на
поверхность. В противном случае клетка погибает.
2. Происходит чередование фаз пролиферации и рекомбинации рецептора. После
стадии пролиферации происходит рекомбинация и выход на поверхность легкой цепи
(α-цепи).
3. Клетки, не способные связывать, и клетки, связывающие слишком сильно,
элиминируются.
4. Клетки со слабым связыванием становятся зрелыми.
Селекция в костном мозге: созревание В-клеток, экспрессирующих два
иммуноглобулина - IgM и IgD. Отбор клеток, реагирующих только на чужеродные
антигены .
Селекция в тимусе: Т-клетки экспрессируют CD4 или CD8. Селекция по TCR-сигналу:
если его нет или он сильный - клетку элиминируют. Если слабый - будет наивная
Т-клетка, если умеренный - Тreg.

/
Этапы:

Процесс В-клетка (созревают в Т-клетка (созревают в


костном мозге) тимусе)

Перестройка одной из ген тяжелых цепей ген β-цепей


цепей рецептора

Проверка. Если цепи дефектные, рецептор на поверхности не появляется и клетка


погибает.

Объединение с белковым Суррогатные легкие цепи Суррогатная α-цепь


партнером, который (из двух белков)
позволит сформировать
на поверхности пре-В/Т
клеточный рецептор

Пре-рецепторы кластеризуются друг с другом, что является сигналом о том, что


первый этап пройден успешно и можно делиться дальше и перестраивать ген второй
цепи

Перестройка гена второй легких цепей α-цепей


цепи

Проверка, в случае неудачи клетка погибает, если все нормально - появляется

/
полноценный рецептор

Рецептор пытается взаимодействовать с имеющимися антигенами. Если рецептор


не способен получить никакой сигнал или сигнал слишком сильный (негативная
селекция потенциально аутореактивных лимфоцитов) , то клетка погибает. Когда все
хорошо, летка превращается в зрелую наивную Т/В клетку.

7.8. Клеточные и гуморальные особенности первичного и


вторичного иммунного ответа.

В зависимости от характера контакта с антигеном (а точнее от наличия в организме


клеток иммунологической памяти, несущих рецептор к этому антигену) различают
первичный и вторичный иммунный ответ.
Первичный иммунный ответ развивается после первого контакта с антигеном. Для
него характерны следующие особенности:
1. Наличие латентного периода (2-3 дня после первого контакта с антигеном). При
поступлении в организм антигена сначала синтезируются IgM (антитела выявляются
через 2-3 суток), а затем – IgG (пик приходится на 8-10 сутки). Отмечается также
небольшое увеличение уровней IgA, IgE и IgD.
2. На третьи сутки появляются Т-лимфоциты.
3. Первичный иммунный ответ затихает через 2-3 недели после стимуляции антигеном.
4. Появляются лимфоциты памяти и может долго поддерживаться следовой уровень
IgG.

/
Вторичный иммунный ответ развивается после повторного контакта с тем же
антигеном и имеет следующие особенности:
1. В организме уже имеются долгоживущие клоны антигенспецифических Т- и
В-лимфоцитов памяти, ответственных за «память» об антигене и способных к
рециркуляции.
2. Стимуляция синтеза антител и иммунных Т-лимфоцитов наступает через 1-3 дня.
3. Т-клетки памяти превращаются в эффекторные.
4. Количество антител сразу резко увеличивается, причем синтезируются
иммуноглобулины высокой специфичности и аффинности – IgG (пик на 4-5 сутки).
5. Чем больше контактов с антигенами имело место в данном организме, тем выше
будет концентрация и специфичность (аффинность) антител.

7.9. По каким двум поверхностным маркерам определяют самые


многочисленные клетки в тимусе и в чем биологический смысл этого
фенотипа?
По рецепторам CD4 и CD8. Около 80% клеток тимуса - тимоциты, клетки, позитивные
по CD4 и CD8 (double positive). Тимоциты - незрелые Т-клетки, промежуточная стадия,
после селекции (положительной и отрицательной) остаются клетки с CD4 (Т-хелперы,
разные) или клетки с CD8 (Т-киллеры).

В кортикальной зоне - первичная фаза развития Т-клеток из предшественников,


построение полноценного TCR, его проверка на способность взаимодействовать с
молекулами MHC - обе крайности отбрасываются (либо отсутствие взаимодействия,
либо слишком сильное взаимодействие). Чтобы понять какие молекулы распознавать,
клетка проходит через стадию, на которой экспрессирует и CD4 и CD8 - двойная
позитивная клетка, которая имеет возможность реагировать и с MHC I и с MHC II, в

/
зависимости от того, какое взаимодействие прошло лучше, Т-клетка превращается
либо в CD4-положительную, либо в CD8-положительную, а экспрессия другого
рецептора подавляется.
Важной субпопуляцией CD4 положительных клеток являются регуляторные клетки
CD4+ T reg, они подавляют иммунный ответ.

На стадии, ведущей к двойной позитивной Т-клетке, выделяют несколько этапов,


которые можно отличить по поверхностным маркерам - CD25 и CD44:
● CD25 - α-цепь высокоаффинного рецептора IL-2, маркер клеток на стадии
пролиферации, т.к. IL2 - ростовой фактор для Т-лимфоцитов
● CD44 - рецептор гиалуроновой к-ты, обеспечивающий прикрепление Т-клеток к
внеклеточному матриксу, его экспрессия коррелирует с нахождением Т-клеток в
той или иной части тимуса
Они сменяют друг друга, а внутри клетки происходит сначала перестройка β-цепи VDJ
рекомбинация, экспрессия Pre-TCR, перестройка α-цепи и в конце сборка
полноценного рецептора, выход в фазу двойной позитивности, потом превращение в
Т-киллера/хелпера.

7.10. В какой анатомической структуре происходит клональная


селекция Т-лимфоцитов? Каков ее алгоритм и основные этапы?
Ранние предшественники Т-лимфоцитов мигрируют в тимус из костного мозга.
Находящаяся в тимусе незрелая Т-клетка (тимоцит) перемещается внутри органа,
постоянно взаимодействуя с тимусной стромой - "выстилающими" тимус
эпителиальными клетками и АПК. Взаимодействие со стромой обеспечивает сигналы,
необходимые для созревания и клональной селекции. Более 95% тимоцитов погибает,
не пройдя какую-либо из стадий отбора.
Алгоритм:
1. Удаляем тех, кто обладает аутореактивностью, низкой избирательностью или не
узнает вообще никого. В кортексе.
2. Положительная селекция: удаляем клетки, не способные распознавать пептиды в
составе молекул МНС. Медуллярное вещество. (В конспекте сказано, что
позитивная селекция в кортикальном веществе)
3. Отрицательная селекция: отбраковываем потенциально аутоагрессивные клетки
(апоптоз). Медуллярное вещество ближе к периферии.
Сначала Т-лимфоциты двойные негативные CD4-/CD8-, потом двойные
положительные CD4+/CD8+. Далее идёт дифференцировка на CD8+ (Т-киллеры) и
CD4+ (Т-хелперы и Treg). Прошедшие двойную селекцию в тимусе, но не
сталкивавшиеся с антигеном клетки - наивные Т-лимфоциты.

/
7.11. К каким последствиям для иммунологической толерантности
приводят мутации генов Aire и Fas, и почему.

/
Нарушения функции AIRE вызывают аутоиммунный полигландулярный синдром 1-го
типа, или хронический кожно-слизистый кандидиоз (autoimmune
polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal dystrophy, APECED) - редкое
наследственное заболевание, характеризующееся аутоиммунным ответом на ткани
разных органов, преимущественно эндокринных желез.
Почему: AIRE-зависимая экспрессия тканеспецифических антигенов в клетках
тимусного эпителия - один из механизмов центральной иммунологической
толерантности. Так удаляются аутореактивные Т-клетки.
Аутоиммунный лимфопролиферативный синдром: хроническое
незлокачественное увеличение лимфоузлов, печени и селезенки, аутоиммунная
патология, повышение уровня иммуноглобулинов в крови. Причиной является мутация
в Fas, Fas-FasL взаимодействия нужны для удаления аутореактивных лимфоцитов на
этапе дифференцировки в центральных лимфоидных органах.

/
8. Дифференцировка лимфоцитов. Иммунологическая
толерантность и онтогенез иммунной системы.

8.1. Основные субпопуляции Т-хелперов: характеристические


цитокины и функции.
1. Т-хелперы 0 (Th0) — «наивные», недифференцированные Т-хелперы в тимусе;
дифференцировку вызывает взаимодействие с АПК.
2. Т-хелперы 1 (Th1) — способствуют развитию клеточного иммунного ответа при
воспалении, активируя макрофаги; Выделяют IFNγ, IL-2 и TNFα;
3. Т-хелперы 2 (Th2) — активируют В-лимфоциты, способствуя развитию
гуморального иммунного ответа; продуцируют IL-4, IL-5 и IL-13;
4. Т-reg, Т-регуляторы — экспрессируют на поверхности молекулы CD25,
экспрессируют транскрипционный фактор Foxp3, секретируют IL-10 и TGFβ,
супрессируют иммунный ответ.
5. Т-хелперы 17 (Th17) — в больших количествах продуцируют провоспалительный
цитокин — IL-17. Важен для регуляции микробиоты, ВНЕклеточных бактерий и грибов.

/
8.2. Какие клетки обозначают аббревиатурой ILC? Взаимосвязь
между типами ILC и типами Т-хелперов.
Врожденные лимфоидные клетки (ILC) - это группа лимфоцитов, которые
вовлечены в быстрое цитокин-зависимое реагирование организма во время
воспалительного процесса. Как и Т-хелперы, ВЛК имеют общего предшественника.

8.3. Иммунологический синапс - устройство и биологическая роль.


Иммуннологический синапс — структурированная зона контакта между клетками
(обычно эффекторной Т-клеткой и клеткой мишенью, например ДК), участвующими в
реализации той или иной формы иммунологического распознавания и связанной с ним
передаче сигнала.
Иммуннологический синапс = супрамолекулярный активационный кластер
(SMAC—Supramolecular activation cluster).
Различают центральную зону сSMAC (обогащена TCR, CD4/8,CD28, CD2 и PKC) и
периферическую pSMAC (обогащена интегрином LFA-1, цитоскелетным белком
талином).
При распознавании Т-клеточным рецептором комплекса MHC–пептид происходит
перераспределение мембранных молекул: диффузное распределение сменяется
иммунным синапсом, центр которого вначале занят молекулами адгезии, а затем —
специфическими комплексами TCR–(MHC–пептид).
С участием иммунного синапса реализуются 3 основных условия эффективной
презентации:
1. Устраняются стерические помехи для взаимодействия клеток.

/
2. Обеспечивается мобилизация молекул адгезии, необходимых для формирования
контакта между клетками и его стабилизации, реорганизуется цитоскелет и
перемещается секреторный аппарат.
3. Запускается синтез и высвобождение эффекторных молекул (цитокинов или
литических гранул), причем оптимизировано, прямо в синаптическую щель.

8.4. Последовательность событий при уничтожении клетки-мишени


Т-киллером.
1. Т-киллер содержит специализированные лизосомы (литические гранулы).
Начальное связывание Т-клетки с клеткой-мишенью через адгезионные молекулы не
влияет на распределение литических гранул.
2. Связывание Т-клеточного рецептора с комплексом [MHC-I + антиген] запускает
поляризацию Т-клетки. Происходит реорганизация цитоскелета и перемещение
секреторного аппарата, к месту контакта.
3. Литические гранулы перемещаются прямо к области контакта, их мембрана
сливается с внешней мембраной Т-клетки, и содержимое изливается в
синаптическую щель между контактирующими клетками.

/
/
8.5. Типы эффекторных Т-клеток и их характеристические
цитокины (по 1-2 для каждого типа).

8.6. Механизм действия циклоспорина А. Примеры


иммуносупрессантов, действующих на внутриклеточные и
мембранные белки-мишени.
Циклоспорин а блокирует кальциневрин, который активирует (через
дефосфорилирование) NFAT (nuclear factor for activated t-cell). Это транскрипционный
фактор для IL-2, а он необходим для пролиферации Т-клеток.
Действие циклоспорина заключается в остановке пролиферации Т-клеток. Также
блокируется производство цитокинов Т-клетками.
Примеры иммуносупрессантов, действующих на внутриклеточные белки-мишени:
1. Рапамицин блокирует mTOR, ответственный за пролиферацию клеток (через
IL-2).
2. Микофенолат мофетил блокирует пролиферацию Т-клеток через остановку
синтеза GTP.

/
Примеры иммуносупрессантов, действующих на мембранные белки-мишени:
1. Анти-IL-2R антитело имеет эффект, аналогичный циклоспорину; может
способствовать опсонизации Т-клеток.
2. Анти-CD3 антитело устраняет Т-клетки за счёт промотирования
фагоцитоза/активации комплемента.
3. CTLA4-Ig мешает CD28 связываться с B7 дендритной клетки (образуется связь
CTLA-4:B7, что является ингибирующим сигналом для Т-клетки).

8.7. Функции и последствия мутаций гена FoxP3.


FoxP3 - транскрипционный фактор Т-регуляторных клеток. Их функция особенно
важна в кишечнике, где формируется толерантность к комменсальной микробиоте
и антигенам пищи. Ген FoxP3 экспрессируется и в "естественных" (центральных), и в
"индуцируемых" (периферических) Treg клетках. Ген FoxP3 содержит несколько
регуляторных участков, интегрирующих сигналы от TCR, рецептора TGFb, и рецептора
IL-2.
Tregs индуцируются в тимусе при связывании антигена с чуть более высокой
аффинностью, чем Т-клетки, которые подвергаются положительной селекции.
При мутации этого регулятора наступает энтеропатия, полиэндокринопатия, и
аутоиммунные поражения (IPEX синдром, immune dysregulation polyendocrinopathy
enteropathy, X-linked).

8.8. Механизмы действия Т-регуляторных клеток.


T-регуляторные клетки выполняют супрессорные функции, и их главная задача -
предотвращение развития аутоиммунных процессов.
1. Тreg клетки, взаимодействуя с рецептором CD86 на дендритных клетках при
помощи CTLA-4, способны ингибировать функцию активации дендритными клетками
Т-клеток, это таргетирование АПК.
2. Treg взаимодействуют с эффекторными Т-клетками, гранзим B действует через
перфорины, образующие канал, вызывая цитолиз в этих клетках и элиминируя их.
3. IL-2 - фактор роста, поддерживающий Т-клетки. Treg экспрессируют много CD25,
обладающего высокой аффинностью к IL-2, изымают его из среды, подавляя рост
Т-клеток.
4. Цитокины, выделяемые Тreg клетками, например TGFβ, связываются со своими
рецепторами на поверхности Т-эффекторных клеток и ингибируют их активацию.

8.9. Функции вторичных лимфоидных органов.


Вторичные лимфоидные органы: селезёнка, лимфоузлы, миндалины, пейеровы
бляшки, аппендикс, и ткани, ассоциированные с ними (BALT, MALT и так далее).
1. Захватывать патогены «на входе» и тем самым ограничивать их распространение
+ переработка антигена.
2. Способствовать контакту АПК и лимфоцитов.
3. Способствовать контакту Т- и В-лимфоцитов.
4. Обеспечивать ниши для дифференцировки эффекторных клеток.

/
8.10. Иммунопривилегированные органы. Последствия нарушения
целостности гематоэнцефалического барьера.
1. Мозг и глаз (жизненно важные органы с минимальной способностью к
регенерации).
2. Семенники (сперматозоиды появляются, когда периферия уже заполнена зрелыми
лимфоцитами).
3. Плацента и эмбрион (полиморфные отцовские белки являются чужеродными).
4. Защечный мешок грызунов (пища богата аллергенами).
5. Волосяной фолликул в стадии роста.
6. Щитовидная железа.
Нарушение целостности ГЭБ (травма; васкуляризация трансплантата в передней
камере глаза) провоцирует системную иммунную реакцию. В норме есть механизмы
защиты от Т-лимфоцитов:
1. Плотные физические контакты на границе.
2. Экспрессия FasL на астроцитах.
3. Гуморальные и клеточные механизмы иммуносупрессии.
Пример: при рассеянном склерозе возникает локальное воспаление в мозге
(причины неизвестны), гематоэнцефалический барьер становится проницаемым,
через него проникают лейкоциты. Это запускает иммунную реакцию, привлекая
Т-клетки. Т-клетки узнают местные антигены на АПК и активируют В-клетки.
Происходит воспаление (с участием комплемента, тучных клеток) и демиелинизация
нейронов (за счёт аутореактивных антител).
Симпатическая офтальмия: при травме глаза, если антигены попадают в тканевую
жидкость или лимфатический проток, они поступают в лимфоузел. В процессе
воспаления активируются клетки врожденного иммунитета => в совокупности с
костимуляторным сигналом от клеток врожденного иммунитета это приводит к
активации лимфоцитов, специфически узнающих белки глаза. И активированные
лимфоциты будут проходить ГЭБ и атаковать не только больной глаз, но и здоровый.

8.11. Группы крови системы AB0 как пример центральной


толерантности.
Группа крови - различные системы поверхностных молекул на эритроцитах, по
которым разные люди отличаются. По системе АВ0 группы крови определяются
аллелью фермента, который навешивает сахар на Н-антиген.
Агглютинины a и b (естественные антитела к антигенам А и B) производятся в
основном B1-клетками (предполагаемая физиологическая роль таких антител -
иммунитет к пищевым антигенам).
B-клетки, производящие антитела против A или B антигена, в его присутствии не
могут пройти селекцию в костном мозге.
На поверхности эритроцитов нет MHCI, поэтому при переливании крови Т-клеточный
ответ не происходит. От NK-клеток эритроциты защищены молекулой CD47, которая
на старых эритроцитах меняет конформацию и превращается в сигнал "съешь меня"
для макрофагов.

/
8.12. Механизмы поддержания иммунологической толерантности в
здоровом кишечнике.
1. Тregs, супрессирующие эффекторные Т-клетки. Активируются через ДК, которые
презентируют антиген из просвета кишечника, это пример периферической
толерантности. Доминирует активное подавление иммунных реакций.
2. Ингибирующие макрофаги and tolerance-inducing dendritic cells (tiDCs)
(фагоцитоз без воспаления, иммуносупрессивное микроокружение с IL-10).
3. Секреция противовоспалительного IL-10 различными клетками (дендритными,
моноцитами Tregs и т.д.).

8.13. Правила отторжения трансплантатов между инбредными


линиями мышей.
Инбредные мыши гомозиготны по всем генам, так как получены путём
множественных близкородственных скрещиваний. Соответственно, у разных
инбредных линий разные аллели одного гена из исходного разнообразия.
У мышей 3 аллеля кодируют МНС-I, у инбредных мышей максимум 3 разных аллеля,
а у обычных было бы 6 (3 от мамы, 3 от папы), причём 1-2 из них обычно не
функциональны.

/
Правила:
1. При пересадке кожи между мышами из одной линии кожа приживается, потому что
МНС одинаковые. Сингенная трансплантация.
2. При пересадке кожи между разными инбредными линиями кожа отторгается, так как
Т-клеток определяют чужеродный МНС. Аллогенная трансплантация.
3. Если реципиент - потомок двух разных инбредных линий, то при пересадки ему
кожи любого из родителей она приживётся, так как при созревании в тимусе Т-клетки
видели эти молекулы МНС и аутореактивные клоны были удалены. Аллогенная
трансплантация.
4. Если наоборот пересаживать кожу от гибрида родителям, она не приживётся, так
как чужеродные молекулы МНС. Аллогенная трансплантация.

8.14. Прямое и непрямое аллогенное распознавание.


Трансплантационная реакция сочетает некоторые черты цитотоксической и
воспалительной форм клеточного иммунного ответа. Она реализуется с участием
CD8+ и CD4+ Т-лимфоцитов. Вовлечение в ответ CD4+ Т-лимфоцитов происходит за
счёт миграции из трансплантанта дендритных клеток. Т-клетки могут распознавать
молекулы МНС двумя способами:
1. Прямое аллогенное распознавание: TCR непосредственно взаимодействует с
аллогенной молекулой МНС-I.
2. Непрямое аллогенное распознавание: молекула МНС вместе с другими
молекулами аллогенных клеток поступает в дендритные клетки путем эндоцитоза,
расщепляется в эндосомах и презентируется в составе молекул МНС-II.

/
8.15. Механизмы поддержания иммунологической толерантности
при беременности. Резус-конфликт.
Любой развивающийся плод содержит половину генов потенциально чужеродных для
матери, то есть является аллотрансплантантом, поэтому есть защита ребёнка от
материнской иммунной системы в плаценте:
1. Физический барьер (отсутствие лимфатических протоков). На границе
синцитиотрофобласта и децидуальной оболочки.
2. Белки, контролирующие и подавляющие комплемент. На границе
синцитиотрофобласта и децидуальной оболочки.
3. Отсутствие классических молекул МНС I и II. Экспрессия HLA-G для защиты от
NK. В децидуальной оболочке и синцитиотрофобласте.
4. Индукция экспрессии IDO. Супрессорные Tregs (TGFβ, IL-10) и Th2 (IL-4)
цитокины. Отсутствие Th1 и их цитокинов (IFNγ). В децидуальной оболочке и
синцитиотрофобласте.
5. Специализированные врожденные лимфоидные клетки - утробные естественные
киллеры ("uterine NK"). В децидуальной оболочке.
6. Антигенные ловушки для антител к МНС- антигенам плода. В околоплодной
мезодерме.
Резус-конфликт: резус-фактор - пептидогликан на поверхности эритроцитов. При
повторной беременности резус(-) матерью резус(+) ребёнком существует 10-20%
вероятность, что возникнет конфликт, так как антитела против резус-фактора
(появившиеся во время первой беременности) будут атаковать эритроциты плода.

/
Конфликт можно предотвратить, если матери вколоть сыворотку против
резус-фактора.

8.16. Особенности иммунной системы новорожденных.


Развитие вторичных лимфоидных органов завершается после рождения. В ходе
внутриутробного развития ребёнка защищают IgG матери, которые сохраняются ещё
9 месяцев после рождения. В грудном молоке IgА (участвует в правильной настройке
микробиоты).
Сначала у ребёнка появляются IgМ (В1 клетки), затем IgG и IgА. В период, когда IgG
матери уже нет, а IgG ребёнка ещё не сформировались (период дефицита IgG),
ребёнок особенно восприимчив к инфекциям.
У новорождённых, ещё не контактировавших с антигеном, в основном все Т-клетки это
недавние тимусные мигранты.
1. TREC = T-cell Receptor Excision Circles ("сигнальные кольца").
2. CD62L (L-Selectin), хоуминг во вторичные лимфоидные органы.
3. CD44 - рецептор остатков гиалуроновой кислоты на межклеточном матриксе.
4. CCR7, CCR5, CXCR3 рецепторы хемокинов.
У плода есть много миелоидных супрессорных клеток и Т-регуляторных, но мало
комплемента и антимикробных пептидов.

/
/
8.17. Изменение клональной структуры периферических
Т-лимфоцитов с возрастом.
У детей большая часть Т-клеток - наивные Т-клетки (~80%). По мере взросления и
старения общее количество Т-клеток меняется не сильно, но большая часть
превращается в Т-клетки памяти, а свежих клеток, пришедших из тимуса, становится
все меньше.
Тимус в значительной степени зарастает соединительной тканью (инволюция) к
пубертатному возрасту. Остается минимум его функциональной активности,
поэтому недавних мигрантов из тимуса очень мало уже даже у детей.

9. Иммунная система и рак. Аутоиммунные заболевания.


Аллергические реакции.

9.1. Хроническое воспаление и рак.


Ещё одна проблема, которая появляется у людей с возрастом, это рак. Схема
из “культовой” статьи. Учёные суммировали знания о биологии рака к концу 20
века. Все признаки на схеме относятся к внутренним свойствам раковой клетки
(за исключением, индукции ангиогенеза).

/
Давно было понятно, что важную роль в развитии злокачественной
опухоли, играет её взаимодействие с иммунной системой. Поэтому через
несколько лет пришлось рисовать обновлённую, усложнённую схему.
Появилось много новых данных о молекулярных механизмах взаимодействия
опухоли и иммунных клеток. 2 новых признака относятся к иммунитету:
воспалительный процесс (хроническое воспаление практически всегда
сопровождает развитие опухолей) и устойчивость к атакам со стороны
иммунной системы.

/
IBD (инфекционная бурсальная болезнь) возникает в результате нокаута
IL-10.

/
Исследование влияния нестероидных противовоспалительных
препаратов на рак: многолетнее исследование проводилось, пожилым людям
из группы риска по сердечно-сосудистым заболеваниям давали 150 г аспирина
ежедневно. В результате у многих возникли онкологические заболевания,
помимо кардиоспирина принимали и лечение против рака. В контрольной
группе люди не получали аспирин. Постоянное блокирование хронического
воспаление снижало риск метастазирования и, как оказалось потом, и риск
возникновения первичной онкологии -> показывает роль в канцерогенезе и
опухолевой прогрессии.

/
9.2. Использование активации врожденного иммунитета в
иммунотерапии рака.
Острое воспаление и его молекулярные медиаторы могут активировать
иммунитет и помогать в борьбе с раком. Идея исходит от Уильяма Коли, врача,
в конце 19 века обнаружил, что некоторые пациенты после хирургического
удаления опухоли переживали тяжёлые бактериальные инфекции. Для таких
пациентов было показано выздоровление от онкологии после переноса
тяжелейшей бактериальной инфекции. Начал экспериментировать -
изготавливал экстракты из бактерий, которые дозированно вносил пациентам,
чтобы активировать иммунную систему для атаки на опухоль. Сложная
методика, которая и сейчас сложна. Трудно произвести предназначенные для
введения бактериальные продукты, непросто сделать препараты по нынешним
стандартам. В конце 19 века не было антибиотиков, спонтанные
бактериальные инфекции были обычным делом у пациентов. Но потом
наступила эра радиотерапии (конец 19- начало 20 века), затем химиотерапия.
Исследования были заброшены, тк радио- и химиотерапии были
перспективными решениями проблемы.

/
В 1975 году попытки воспроизвести такие эффекты на мышах привели к
открытию фактора некроза опухоли (ФНО или TNF). Схема эксперимента:
мышам вводили ослабленные микобактерии (штамм БЦЖ, что используется
для вакцинации от туберкулёза). Через 2 недели дополнительно вводили
липосахарид грам-негативных бактерий. У мышей, что были предварительно
праймированы БЦЖ, липополисахарид вызывал септический шок -> умирали
через несколько часов. Но если через 2 часа взять у них сыворотку, ввести в
опухоль, то она рассасывалась, оставалась кровавая ранка, мышь
выздоравливала. Надежда на наличие “золотой пули” в лечении рака. Но
оказалось, что TNF вызывает многие эффекты, в том числе активирует
слишком многие клетки, чтобы оказывать специфический эффект на опухоль.
Тут уничтожение опухоли производилось не за счёт прямого действия на
раковые клетки, а за счёт чрезмерной активации кровеносных сосудов в
опухоли -> непроходимость сосудов, недостаток кислорода, опухоль погибала
от гипоксии.

Из TNF не получилось лекарства (системная токсичность возникает), но


активация врождённого иммунитета, в том числе за счёт БЦЖ, используется.
Инъекция БЦЖ в мочевой пузырь провоцирует острое бактериальное
воспаление, которые вызывает активацию врождённого иммунитета ->
выживаемость. Так лечат опухоль мочевого пузыря. Онкологи

/
экспериментируют и с интерферонами, чтобы не специфически стимулировать
иммунитет (Лайфферон).
Ещё TNF применяется в перфузии изолированной конечности. Когда
опухоль уже не операбальна, необходимо удалять конечность. Оказалось, что
если образовать для конечности отдельный круг кровообращения и запустить в
него цитостатики (химиотерапия+повышенная доза TNF, который при
системном введении убил бы пациента за счёт чрезмерной активации
эндотелия и органов), конечность переживает такое лечение -> улучшение
пациента. но такой размер опухоли уже даёт метастазы, это не лечит, но
улучшает качество жизни.

9.3. Опухоли вирусного происхождения и гипотеза иммунного


надзора.
Ещё важная вещь - онкогенные вирусы. Ещё в 19 веке Вирхов и другие
замечали, что опухоль сопровождается воспалительными процессами. В 1909
году Пауль Эрлих выдвинул гипотезу иммунного надзора над опухолями, а в
1910 году Фрэнсис Пейтон Раус открыл вирус, вызывающий саркому (опухоль
соединительной ткани) у кур. Он обнаружил, что если опухоль кур
гомогенизировать, очистить так, чтобы не было клеток, а затем внести
здоровым птицам, то опухоль вырастала. Получается, что передача рака

/
происходила в соответствии с классическими постулатами вирусологической
теории (это типа про постулаты Коха, похоже). Вирус был охарактеризован
(вирус саркомы Рауса). Но оказалось, что у млеков найти аналогичные
онкогенные вирусы не так просто. У крыс, мышей и тд долго не могли найти,
поэтому это открытие воспринимали, как артефакт. Раус стал чемпионом по
ожиданию Нобелевской премии (лол). Получил через 50 с лишним лет после
открытия её.
Когда биологи узнали больше о различных иммунодефицитных
состояниях, то стало понятно, что снижение иммунитета приводит к
увеличению частоты рака. Если бы вся иммунная система отвечала за все
виды раковых опухолей, то можно было бы ожидать, что подавление
иммунитета будет вызывать некий равномерный рост частоты разных видов
рака. Но в первую очередь появляются виды рака, ассоциированные с
онкогенными вирусами, в частности, повышается вероятность
В-клеточных лимфом вследствие трансформации В-клеток вирусом
Эпштейна-Барр, рака печени, ассоциированным с гепатитом В. Когда в
широкую практику вошла трансплантация (почек, затем и других органов),
выяснилось, что иммуносупрессия, необходимая для успешной
трансплантации, повышала частоту В-клеточных лимфом, карцином, связанных
с вирусом Эпштейна-Барр, цитомегаловирусом, вирусом папилломы и
некоторыми другими факторами канцерогенеза (например, УФ, повреждающий
ДНК). Интересная группа пациентов - гомосексуалисты. Была какая-то статья в
1983, в которой говорилось, что они подвержены онкологическим
заболеваниям. А оказалось, что виноват ВИЧ. ВИЧ уничтожает Т-хэлперы,
вызывает иммунодефицит, а на его фоне повышается частота опухолей,
связанных с распространёнными онкогенными вирусами.

/
Концепция иммунологического надзора была предложена Бёрнетом и
заключалась в том что:
так как в опухолевых клетках происходят изменения, которые приводят к
возникновению мутаций и новых белков и новых антигенов, то иммунные
клетки организма распознают эти несвойственные белковые детерминанты и
вызывают иммунологический ответ. это может приводить к регрессии опухолей.

/
Опыт, который это подтверждает: берем мышь, вакцинируем ее
облученными опухолевыми клетками (мертвыми, но с антигенами). Через
некоторое время снова вкалываем те же клетки, но живые - опухоль не
вырастет. Если другую опухоль, к которой ее не иммунизировали, то опухоль с
большой вероятностью не вырастет. Если вколоть неиммунизированной
мышке, но которой перенесли Т-клетки от иммунизированной, живые опух
клетки, то тоже ничего не вырастет. Бедные мыши.

9.4. Вакцинация против онкогенных вирусов. Механизм действия


профилактических вакцин.
Прививки от HPV нет в календаре прививок, надо сделать
самостоятельно. В первом приближении надо сделать до начала половой
жизни или до начала незащищенной половой жизни (до момента, когда
появляется риск заражения). После заражения уже неэффективно, надо
предотвратить заражение. Вакцина против гепатита В имеется в календаре
прививок.

/
Механизм работы профилактических вакцин. Общий принцип - нужно
каким-то способ внести в организм тот ослабленный патоген/фрагмент
патогена на который требуется иммунный ответ в комбинации с
активаторами врождённого иммунитета. Есть рекомбинантные вакцины (с
активатором врождённого иммунитета, это отдельный компонент - адъювант).
Вакцина против коронавируса в Институте Гамалеи представляет собой
изуродованный вирус человека (аденовирус): вырезан у него кусок генома, но
не способен размножаться, вызывает ответ. Вместо вырезанного куска генома
вставлен ген, кодирующий S-белок коронавируса -> клетки производят белок,
на заражённые клетки происходит иммунная реакция, врождённая и активная.
Активированные дендритные клетки, которые захватили и процессировали
белки аденовируса и S-белок корона вируса, поступают в аденоузел,
взаимодействуют с Т-хэлперами. Часть размножается, а часть превращается в
фолликулярные хэлперы, которые взаимодействуют с В-клетками, у которых
(у B-клеток) рецептор подошёл к нативному белку коронавируса. Из В-клеток
развиваются нативные клетки, которые дают защиту. Т-хэлперы
дифференцируются в различные субпопуляции, часть клеток вместе с
В-клетками превращаются в клетки памяти. Memory cells по набору белков
адгезии и хемокинов подходят для миграции в перифирическую ткань. Так

/
называемые центральные клетки памяти располагаются в костном мозге, живут
там, иногда циркулируя по организму. В костном мозге располагаются и
плазматические клетки, которые производят в течение многих лет антитела,
титр которых достаточен для предотвращения заражения вирусом. Так
поддерживается титр защитных антител и дольше живут клетки памяти (при
повторной инфекции не могут защитить полностью, но сделают течение
болезни легче). С SARS, который в начале 20 века бушевал: антитела исчезали
через 2 года, а клетки памяти находили в течение 10 лет после инфекции.
Ожидается, что возможная вакцина будет давать похожие эффекты, но как
конкретно будет работать, покажут длительные испытания 3 фазы.

9.5. ВПЧ и рак шейки матки


Нужно поберечься - защититься вакцинами. Вирус папилломы человека -
больше 100 типов. Обнаружилось, что HPV16 и 18 являются причиной
возникновения рака шейки матки. ВПЧ передаётся половым путём и заражает
клетки эпителия слизистой оболочки. В норме происходит нормальная реакция
иммунной системы на вирус, в течение нескольких недель проблема
разрешается, но в некоторых случаях вирус встраивается в геном клетки

/
(ДНК-вирус) и остаётся там, меняя транскрипционную программу клетки,
стимулируя эпителиальное разрастание. Через лет 10 возникнет опухоль. Если
пропустить этот момент, то на поздних стадиях может привести к смерти, на
операбельных стадиях возникают неприятные операции. Если предотвратить
заражение с помощью вакцин, то работает очень хорошо. Вакцины безопасны,
испытываются и применяются уже несколько лет. Побочных эффектов нет.
Вакцина не вызывает аутизм. В мире продолжается разработка более крутых
вакцин. Сейчас есть 4- и 9-валентные вакцины.

Такой прививки нет в календаре прививок, надо сделать самостоятельно.


В первом приближении надо сделать до начала половой жизни или до начала
незащищенной половой жизни (до момента, когда появляется риск заражения).
После заражения уже неэффективно, надо предотвратить заражение. Вакцина
против гепатита В имеется в календаре прививок.

/
9.6. Противораковые вакцины на основе дендритных клеток.
Против рака обычно (за исключением тех случаев, когда речь идёт о
понятных инфекционных агентах, которые рак провоцирует - вирус папилломы
человека, вирус гепатита) речь идёт о терапевтической вакцинации: попытка
спровоцировать иммунный ответ у человека с опухолью. Сложно, но успехи и
надежды сейчас связывают с клеточными вакцинами, связанными с
дендритными клетками. Проблема в том, что раковая опухоль серьёзно
подавляет иммунный ответ, подавляет локальную и системную
иммунносупрессию, поэтому индуцировать иммунный ответ прямо в организм
пациента оканчивались неудачей. Более перспективна активация иммунных
клеток, которые извлечены из пациента. Из периферической крови извлекают
моноциты, которые под действием цитокинов дифференцируются в
незрелые дендритные клетки, затем они активируются и нагружаются
рако-ассоциированными антигенами (синтетические пептиды, суммарные
клеточные экстракты, вирусные векторы, РНК, кодирующие ожидаемые мишени
и тд). Затем активируют клетки с с помощью провоспалительных цитокинов,
вводят пациенту под расчёт на то, что они встретятся там с подходящим

/
Т-лимфоцитами -> вызовут ответ. Так работает иммунотерапия
гормононезависимого рака предстательной железы. Sipuleucel-T - это не
лекарство, а целая программа в США. В течение нескольких дней человек
проходит терапию, выполняется специальной компаний для пациентов, у
которых рак не отвечает на стандартную гормональную терапию. Испытания
показали, что значимого эффекта на продолжительность жизни не даёт, но как
и TNF-терапия (с опухолью в конечности, было выше) оказывает влияние на
улучшений условий жизни пациентов.

9.7. Иммуноредактирование злокачественных опухолей.


Опухоль очень неоднородна, содержит слабо и сильно иммунногенные клетки.
Последние быстро удаляются NK-клетками и CTL, так как являются очевидной
мишенью. Соответственно, остаются те, кто приспособлен и незаметен.
Как раковые клетки уходят из-под надзора:
1. Формирование иммуносупрессивного микроокружения.
a. Привлечение MDSC (myeloid-derived suppressor cells), которые представляют
собой АПК, не получившие стимуляции через систему врожденного иммунитета и
поэтому оказывающие не активирующее, а супрессорное действие.
b. Привлечение М2 макрофагов, подавляющих иммунный ответ.
c. В отсутствие активации дендритные клетки ингибируют Т-клетки через
CD80(ДК):CTLA-4 (на Т-клетках) взаимодействие.

/
d. Ингибирование СD4+ клеток, нет активации адаптивного ответа.
2. Синтез антиапоптотических регуляторов
a. экспрессия PD-L1, связывающийся с PD-1 на Т-клетках и ингибирующий их
FasL, промотирующий апоптоз Т-клеток.
b. Опухоль может вырабатывать иммуносупрессорные цитокины: IL-10, TGF β ,
IDO.
3. Снижение презентации антигенов.

Как же опухолевые клетки борются с иммунной системой?


“Иммуноредактирование”. Опухоль сумела выжить, вырасти до микроразмеров
в организме, но такая опухоль отличается уже от оригинального клона. Исходно
опухолевые клетки иммуногенные. Когда контроль сломан, то это связано с
мутациями, изменениям экспрессии белков, появляются белки и фрагменты
белков, которые могут распознаваться иммунной системой. Подвергаются атаке
цитостатической иммунной системы -> опухолевые клетки поддерживаются под
контролем. Однако, с некоторой вероятностью в ходе повышенной
пролиферации и мутагенеза происходит микроэволюция, так у клеток
повышается устойчивость к клеточной смерти, снижается экспрессия антигенов
-> уход из-под иммунного надзора (Т-клеточного контроля). Однако, тогда могут
воздействовать NK-клетки. С NK-клетками можно бороться путём
выбрасывания растворимых лигандов для активации рецепторов этих клеток
(действуют как растворимые ингибиторы). В опухоль привлекаются незрелые
миелоидные клетки (миелоидные супрессорные клетки), которые
устанавливают иммуносупрессивное окружение. Макрофаги
дифференцируются в М2, которые вырабатывают иммуносупрессивные
цитокины (IL-10, TGF-бета). Активность Т-хэлперов подавляется, начинается
индукция развития регуляторных Т-клеток. На опухолевых клетках может
появится лиганд негативного иммунологического чекпоинта PD-L1. Короче, есть
все механизмы, которые обычно встречаются в иммунопривилегированных
органах и при беременности. Иммуносупрессия локальна и системна, сложно
преодолеть такое сопротивление.

/
Есть стадия перехода между иммуноредактированием и клеткой без
привилегий по отношению к иммунитету - некое положение равновесия. На
мышах эксперименты с химическим канцерогенезом (с метилхолантреном,
похож на канцерогенные вещества в составе табачного дыма). Было показано,
что каждая индивидуальная опухоль имеет свой индивидуальный набор
мутаций, опухоли иммунологически несовместимы с параллельно полученными
аналогичными перевиваемыми опухолями. Можно перевить такую опухоль,
дать прорасти, вырезать. Такая мышь будет устойчива к инокуляции, но не
будет устойчива к пересадке аналогичной опухоли, полученной в независимом

/
эксперименте.

Такие клетки можно замораживать хранить, использовать в экспериментах


дальше. И показали, что развитие индуцированной опухоли в мыши связано с
развитием иммунитета, у мышей с дефицитом иммунитета опухоли возникали
раньше и более активно.

/
Можно также наблюдать фазу равновесия между опухолью и активным
иммунитетом. Если привить опухоль мышам, то она вырастет не у всех -
предполагается, что иммунитет держит развитие опухоли под контролем. А
если разделить таких мышей на 2 группы: одной дать нерелевантные
моноклональные антитела, другой - антитела, блокирующих
CD4,CD8,IFN-гамма, что не даёт Т-киллерам распознавать MHC1 и 2, а
активирует Т-хэлперов 1 типа и цитотоксические эффекты Т-киллеров (то есть
отключить весь адаптивный иммунитет), то мы видим, что в контроле (группа 1)
роста опухоли не наблюдается, а вот второй группе начинается рост опухоли ->
манипуляция сняла иммунный контроль.

/
/
Экспериментально наблюдать иммунный надзор у человека сложнее.
Сейчас легче вследствие наличия анализа генома и транскриптома одиночных
клеток - возможно следить за судьбой отдельных клонов раковых клеток.

Множественная миелома происходит из плазматических клеток,


производящих антитела. Ей предшествует разрастание конкретного клона
плазматических клеток с соответствующим повышением концентрации
моноклонального антитела в сыворотке крови. Такое предраковое состояние
может длится очень долго, что пациенты не испытывают проблем, а умирают от
другие естественных причин. Если предраковое состояние устойчиво и не
переходит в злокачественное состояние, то такое состояние хорошо
коррелирует с наличием Т-клеточного ответа на антигены, которые
экспрессируются этими опухолевыми клетками. Можно наблюдать
специфический иммунитет, который удерживает трансформированные клетки
под контролем.
Можно и пересадить опухоль человеку через трансплантат. Иммунитет
понижен, а опухоли как раз на руку такое. Поэтому людей с опухолями не
используют, как доноров. Был случай: у пациента были родинки, в которых
были обнаружены раковые клетки, он наблюдался несколько лет. Затем через
15 лет вроде выздоровел, но через год погиб в автокатастрофе. Его почки
пересадили, у обоих реципиентов образовалась меланома))))) Генетический
анализ показал, что меланома была донорского происхождения. На ранней
стадии меланомы уже были раковые стволовые клетки, которые покинули

/
исходную локацию, засели в почках под контролем иммунной системы, которая
не давала им расти -> а в реципиентах разрослись.
Паранеопластические аутоиммунные синдромы - ситуация, когда
аутоиммунная реакция возникает не в том органе, в котором возникла
первичная проблема. Самая частая ситуация, на которой и был описан
синдром - экспрессия HuD в раке лёгких. Есть белки, участвующие в
нейротрансмиссии, один из них может экспрессироваться в мелкоклеточном
раке лёгкого. Этот рак образуется из клеток, отвечающих за иннервацию клеток
лёгкого. Неудивительно, что этот белок экспрессируется, раз происходит из
нервных клеток, НО по другую сторону гематоэнцефалического барьера -
иммунная система реагирует на присутствие “чужеродного” белка.
Активируется Т-хэлперы, Т-киллеры, которые сначала вырабатываются против
HuD в лёгких, затем пересекают гематоэнцефалический барьер и атакуют
нейроны в ЦНС. Пациенты попадают сначала к неврологу, а не онкологу, тк
сначала возникают неврологические симптомы, которые могут быть опасны для
жизни раньше, чем исходная раковая опухоль. Неблагоприятно для пациента,
но рост опухоли под контролем (?).

/
9.8. Способы генетической модификации Т-лимфоцитов для
клеточной терапии рака.
CAR-T клетки: химерные антигенные рецепторы позволяют придать Т-клеткам
специфичность теоретически к любому известному антигену. Что можно поменять?
Вариабельные цепи антитела и сигнальную часть ТCR: 1. I поколение: изменить ITAM.
2. II поколение: изменить ITAM + костимуляторные молекулы.
3. III поколение: комбинаторика костимуляторных молекул. Доставка ретровирусом.
Эффективно применяется в лечении B-клеточной лимфомы (CAR узнается CD19
В-клеток)
CD19 экспрессируется почти всеми B-клетками (утрачивается при созревании в
плазматические клетки), принадлежит к иммуноглобулиновому семейству. Участвует в
активации B-клеток, так как выполняет важную сигнальную функцию через свою связь
с PI3K и киназами Blk, Lyn и Syk.
Как использовать эту молекулу для иммунотерапии рака? Создать генетически
модифицированные Т-клетки (CAR-T), которые имеют UCART19, CD19 специфичный
домен антител, чтобы находить CD19 в организме (а он на В-клетках).
При связывании с мишенью и активации Т-клеточного рецептора, выпускаются
цитокины, эти В-клетки лизируются.
Что лечим? Лимфомы и лейкозы, то есть B-лимфоцитарные заболевания, убивая
злокачественные B-клетки.
Инфильтрация в опухоль специфических Т-лимфоцитов. Извлечь их и
хорошенько размножить. Сначала размножали под действием высоких
концентраций IL-2, затем стали тестировать на специфическое распознавание
раковых антигенов и размножать только те, что давали специфическую
реакцию. В процессе выяснилось, что общее кол-во лимфоцитов организм
поддерживает на одном уровне, поэтому для действия таких Т-лимфоцитов
необходимо убивать часть лимфоцитов организма, чтобы добавить новые
лимфоциты. Но большого успеха эксперименты не дали. In vitro процедура
сильно истощает пролиферативные силы Т-лимфоцитов -> не так сильно могут
давать отпор опухоли.

/
Сейчас более перспективна трансфекция суммарных лимфоцитов
пациента, клонированных цепями Т-клеточного рецептора, распознающих
конкретные рак-ассоциированные антигены, пептиды, связанные с МНС.
Пациента нужно оттипировать по MHC (чтобы знать, какие аллели есть),
провести молекулярный анализ опухолевых клеток (знать, какие пептиды
экспрессируются на высоком уровне). Если есть высокоэкспрессированный
пептид и MHC, то можно из холодильника достать заранее имеющийся там ген
альфа и бета-цепей, которые распознают такой пептид. С помощью
лентивирусного вектора перенести его, заставить лимфоцит экспрессировать
второй Т-клеточный рецептор. Если экспрессия на высоком уровне, то
экспрессия эндогенного рецептора, как правило, подавляется, такие клетки
могут эффективно атаковать клетки опухоли (Вот вы его поняли? И я не
поняла). След шаг в развитии - не ограничиваться естественными генами в
TCR, которая потенциально может любую мишень распознавать. Такая модель:
скомбинировать рецепторы с сигнальными последовательностями,
характерными для Т-клеток. Вставить конструкцию в Т-клетки, придавая
Т-клеткам специфичность к тем опухоль-ассоциированым молекулам, которым
мы хотим. Сейчас очень модная технология, есть первые клинические успехи.

/
Сейчас уже 4 поколение химерных-антигенных рецепторов (CAR) есть.
Внутриклеточная часть достигла большого развития, туда добавляются
содержащие ITAM-фрагменты, фрагменты, ассоциированных с T-клеточными
молекулами, молекул костимуляции. Проблема с распознаванием мишени.
Настоящих опухоль-специфических антигенов (которых много на раковых
клетках и которых нет в нормальных клетках) мало.

/
Хорошо работают CART против специфических для В-клеток молекул - CD19 и
CD20. Почти идеальные мишени для такой терапии. CD19 - компонент
В-клеточного рецептора, позволяет В-клеткам узнавать молекулы комплемента,
появляется на некоторой стадии развития В-клеточных предшественников,
присутствует в большом кол-ве на всех В-клетках, НО перестаёт
присутствовать на плазматических клетках. Если дать цитотоксическую
терапию, то будут уничтожены все зрелые В-клетки, но это не создаст
проблемы: плазматические клетки остались, они будут синтезировать
защитные молекулы, а новые популяции здоровых В-клеток будет наработаны
чрез несколько недель из предшественников в костном мозге.

/
Сверху на картинке пример такой терапии. TCR и CD52 - гены собственно
организма, RXR8 специально вводится, чтобы потом при помощи антитела
убить Т-клетки, тк они могут сами превратиться в опухоль. Девочку спасли от
В-клеточной лимфомы.
Была признана одним из прорывов терапии рака, но универсальной
терпаии не получится, тк на большинстве раковых клеток нет подходящих
мишеней.

9.9. CAR-T технология


След шаг в развитии - не ограничиваться естественными генами в TCR,
которая потенциально может любую мишень распознавать. Такая модель:
скомбинировать рецепторы с сигнальными последовательностями,
характерными для Т-клеток. Вставить конструкцию в Т-клетки, придавая
Т-клеткам специфичность к тем опухоль-ассоциированым молекулам, которым
мы хотим. Сейчас очень модная технология, есть первые клинические успехи.

/
Сейчас уже 4 поколение химерных-антигенных рецепторов (CAR) есть.
Внутриклеточная часть достигла большого развития, туда добавляются
содержащие ITAM-фрагменты, фрагменты, ассоциированных с T-клеточными
молекулами, молекул костимуляции. Проблема с распознаванием мишени.
Настоящих опухоль-специфических антигенов (которых много на раковых
клетках и которых нет в нормальных клетках) мало.

/
Хорошо работают CART против специфических для В-клеток молекул - CD19 и
CD20. Почти идеальные мишени для такой терапии. CD19 - компонент
В-клеточного рецептора, позволяет В-клеткам узнавать молекулы комплемента,
появляется на некоторой стадии развития В-клеточных предшественников,
присутствует в большом кол-ве на всех В-клетках, НО перестаёт
присутствовать на плазматических клетках. Если дать цитотоксическую
терапию, то будут уничтожены все зрелые В-клетки, но это не создаст
проблемы: плазматические клетки остались, они будут синтезировать
защитные молекулы, а новые популяции здоровых В-клеток будет наработаны
чрез несколько недель из предшественников в костном мозге.

/
Сверху на картинке пример такой терапии. TCR и CD52 - гены собственно
организма, RXR8 специально вводится, чтобы потом при помощи антитела
убить Т-клетки, тк они могут сами превратиться в опухоль. Девочку спасли от
В-клеточной лимфомы.
Была признана одним из прорывов терапии рака, но универсальной
терапии не получится, тк на большинстве раковых клеток нет подходящих
мишеней.
Про CAR-T из спецкурса по опухоли:
Одно из самых “модных” лечений - CAR-T терапия В-клеточных лейкозов
и лимфом. Чтобы использовать этот метод сначала надо произвести
высокопроизводительное секвенирование (для поиска мутаций, которые
приводят к возникновению новых антигенов). Можно предсказанные антигены
внести в Т-лимфоциты, а их потом вернуть обратно пациенту. Тогда они станут
атаковать опухолевые клетки с новым антигеном, характерным для конкретного
пациента. Все эти работы сейчас развиваются очень активно. Нужно только
сказать, что это опять-таки очень экспериментальная область. Терапия
сопровождается синдромом высвобождения цитокинов, который приводит к
ухудшению состояния организма. Но это можно скорректировать ингибиторами
интерлекинов (например, IL-6). Некоторые исследования дошли до клиники, но
в некоторых обнаружились побочки из-за выраженной нейротоксичности. Как
обычно, ничего до конца не понятно, но ооочень интересно.

/
9.10. Способы использования антител для иммунотерапии рака.
1. Блокировка “иммунологических чекпойнтов”
. Очень эффективная терапия с блокировкой PD-1/PD-L1/CTLA-4 (immune checkpoint
inhibitors) с помощью антител.
a. Раковые клетки ингибируют Т-клетки, экспрессируя PD-L1.
Можно подобрать антитела анти-PD-1 и заблокировать связь этого рецептора с PD-L1.
b. Т-клетки репрессируются АПК при связывании CTLA-4, ингибиторной молекулы.
Если её связывание заблокировать с помощью анти-CTLA-4 антител, ингибирующий
сигнал не будет получен. Требует повторения. Блокада CTLA-4 работает в присутствии
здоровой микробиоты, которая нужна для IL-12-зависимого ответа Т-клеток (Th1).
Опухоли у мышей и пациентов растут медленнее, целостность кишечника сохраняется.
2. Прямая блокировка антителами пролиферативных сигналов опухоли
3. Иммунологическая цитотоксичность: если облепить опухоль антителами, то
это приведет к ADCC (NK-клеточные рецепторы CD16 связываются множеством
антител, что вызывает активацию NK-клетки и гибель опухолевой)
4. Блокировка ангиогенеза в опухоли: ингибирование VEGF, ответственного за
ангиогенез. Нет роста сосудов – гипоксия – гибель опухоли.
5. Использование моноклональных антител для вторичного таргетинга раковых клеток
–прикрепить что-то на антитело и доставить до опухоли.

/
a. цитотоксические агенты (в т.ч. классические), адъюванты – активация иммунного
ответа неспецифично, но за счёт таргетирования этих агентов к опухоли получается
локальный иммунный ответ, важна концентрация, чтобы убить только опухоль.
b. наночастицы (в т.ч. содержащие классические лекарства)
c. Т-лимфоциты (в т.ч. CAR)

Другой подход - блокада иммунологических чекпоинтов CTLA-4 и PD-1.


Механизмы противоопухолевого действия антител:

/
Про блокировку: блокировка CTLA-4 на регуляторных Т-клетках или PD-1 на
самих опухолевых клетках.

/
Список терапевтических антител пока не так велик.

CD19, CD20 - мишени не только для химерных антигенных рецепторов, но и


подходящих моноклональных антител, которые через связывание с ними
индуцируют антител-зависимую цитотоксичность.

/
CTLA-4 и PD-1 сейчас не перспективны, а уже используются. Перспективные -
агонистические антитела и блокировка рецептора IL2.
Эффективность блокады иммунологических чекпоинтов связана с тем,
найдутся ли в опухолях мишени Т-клеточного ответа после снятия тормозов.
Выясняется, что это так в ряде случаев. Чтобы добиваться эффекта, требуется
довольно серьёзный подбор пациентов по генетическим и гистологическим
параметрам. Нужно проверять:
1) генетику опухолей (детально смотреть с помощью глубокого секвенирования,
если ли там мутантные пептиды, которые могут быть распознаны как
иммуногенные);
2) если ли там экспрессия негативных чекпоинтов;
3) по видимому играет роль микрофлора - в опытах на мышах показано, что
анти-CTLA-4 работает только в здоровой микрофлоре).
По всем параметрам надо подбирать больных. Если блокировать
иммуннологические чекпоинты у всех, то опасные последствия будут
превышать потенциальную пользу.

/
Разные типы рака различаются по кол-ву мутаций. Дискограмма: каждая
колонка - тип рака, а точки - отдельные геномы опухолей. В целом, кол-во
мутаций, обнаруживаемых в опухолевых клетках варьирует от десятков
(меланома) до 1 (разные гемопоэтические раки). Чем меньше мутаций, тем
больше шанс Т-клеткам не реагировать. В случае с достаточным кол-вом
неоантигенов терапия полноценно активирует ответ, во многих случаях
метастатическая меланома, которая при стандартных химиотерапевтических
подходах является смертельным приговором, при таком лечении может дать
ремиссию.

/
9.11. Механизм действия CTLA-4 и PD-1.
Главная особенность связывания CTLA-4 состоит в том, что он поставляет
ингибирующий сигнал. CTLA-4 имеет более высокое сродство к CD80/86, чем CD28
Его функция состоит в завершении цепи активационных событий.
Экспрессируемая при активации Т-клетки молекула CTLA-4 вовлекается в иммунный
синапс, и осуществляемая через нее передача сигнала служит последним событием,
реализуемым в нём, после чего синапс прекращает свое существование. CTLA-4
также способствует разборке иммунного синапса в конце его существования.
PD-1 (ингибитор костимуляции Т-клеток, подавление развития и активности Т-клеток)
защищает от аутоиммунного ответа с помощью двух механизмов.
1. способствует апоптозу аутоантиген-специфических Т-клеток в лимфатических
узлах.
2. снижает апоптоз в регуляторных Т-клетках.

Про блокировку: блокировка CTLA-4 на регуляторных Т-клетках или PD-1 на


самих опухолевых клетках.

/
Список терапевтических антител пока не так велик.

CD19, CD20 - мишени не только для химерных антигенных рецепторов, но и


подходящих моноклональных антител, которые через связывание с ними
индуцируют антител-зависимую цитотоксичность.

/
CTLA-4 и PD-1 сейчас не перспективны, а уже используются. Перспективные -
агонистические антитела и блокировка рецептора IL2.
Эффективность блокады иммунологических чекпоинтов связана с тем,
найдутся ли в опухолях мишени Т-клеточного ответа после снятия тормозов.
Выясняется, что это так в ряде случаев. Чтобы добиваться эффекта, требуется
довольно серьёзный подбор пациентов по генетическим и гистологическим
параметрам. Нужно проверять:
1) генетику опухолей (детально смотреть с помощью глубокого секвенирования,
если ли там мутантные пептиды, которые могут быть распознаны как
иммуногенные);
2) если ли там экспрессия негативных чекпоинтов;
3) по видимому играет роль микрофлора - в опытах на мышах показано, что
анти-CTLA-4 работает только в здоровой микрофлоре).
По всем параметрам надо подбирать больных. Если блокировать
иммуннологические чекпоинты у всех, то опасные последствия будут
превышать потенциальную пользу.

/
9.12. Блокировка "иммунологических чекпойнтов" в иммунотерапии
рака.

Очень эффективная терапия с блокировкой PD-1/PD-L1/CTLA-4 (immune checkpoint


inhibitors) с помощью антител.
➔ Раковые клетки ингибируют Т-клетки, экспрессируя PD-L1. Можно подобрать
антитела анти-PD-1 и заблокировать связь этого рецептора с PD-L1.
➔ Т-клетки репрессируются АПК при связывании CTLA-4, ингибиторной молекулы.
Если её связывание заблокировать с помощью анти-CTLA-4 антител, ингибирующий
сигнал не будет получен. Требует повторения.
➔ Блокада CTLA-4 работает в присутствии здоровой микробиоты, которая нужна для
IL-12-зависимого ответа Т-клеток (Th1). Опухоли у мышей и пациентов растут
медленнее, целостность кишечника сохраняется.
➔ Терапия применима к опухолям, которые уже были распознаны иммунной системой
и содержат инфильтрирующие иммунные клетки, несущие PD-1 и PD-L1.
➔ Ключевую роль в активации противоопухолевого иммунитета играют мутации в
раковых клетках, которые непосредственно не влияют на канцерогенез и опухолевую
прогрессию.

/
(+ то, что в билетах 9.10, 9.11)
Эффективность блокады иммунологических чекпоинтов связана с тем,
найдутся ли в опухолях мишени Т-клеточного ответа после снятия тормозов.
Выясняется, что это так в ряде случаев. Чтобы добиваться эффекта, требуется
довольно серьёзный подбор пациентов по генетическим и гистологическим
параметрам. Нужно проверять:
1) генетику опухолей (детально смотреть с помощью глубокого секвенирования,
если ли там мутантные пептиды, которые могут быть распознаны как
иммуногенные);
2) если ли там экспрессия негативных чекпоинтов;
3) по видимому играет роль микрофлора - в опытах на мышах показано, что
анти-CTLA-4 работает только в здоровой микрофлоре).
По всем параметрам надо подбирать больных. Если блокировать
иммуннологические чекпоинты у всех, то опасные последствия будут
превышать потенциальную пользу.

Разные типы рака различаются по кол-ву мутаций. Дискограмма: каждая


колонка - тип рака, а точки - отдельные геномы опухолей. В целом, кол-во
мутаций, обнаруживаемых в опухолевых клетках варьирует от десятков
(меланома) до 1 (разные гемопоэтические раки). Чем меньше мутаций, тем
больше шанс Т-клеткам не реагировать. В случае с достаточным кол-вом

/
неоантигенов терапия полноценно активирует ответ, во многих случаях
метастатическая меланома, которая при стандартных химиотерапевтических
подходах является смертельным приговором, при таком лечении может дать
ремиссию.

Суммируя всё сказанное:

/
Опять из спецкурса по опухоли:
Ингибиторы иммунных чекпоинтов. На слайде одна из первых картинок по этой
теме. Один из рецепторов, который возникает на поверхности активированных
Т-лимфоцитов - CTLA4. Его практически нет в неактивированных Т-лимфоцитах.
CTLA4 взаимодействует с антиген-презентирующей клеткой, на которой есть
корецептор B7. Если активация посредством взаимодействия MHCII с Т-клеточным
рецептором произошла, то в лимфоците может активироваться синтез CTLA4,
взаимодействуют CTLA4 и В7, и блокируется иммунологический ответ. Это такой
регулятор силы иммунного ответа при распознавании антигенов.

/
Было предложено разработать вещества, которые блокируют эти иммунные
чекпоинты (они подавляют иммунный ответ). В том числе, неплохо было бы и снять
подавление CTLA4, ведь он блокирует активность Т-лимфоцитов. Был найден ещё 1
рецептор (PD-1), который тоже начинает экспрессироваться в активированных
Т-лимфоцитах (и уменьшать активность этих клеток, как я поняла). Против него тоже
сделали антитела. То есть разработали инструменты для подавления подавления
иммунного ответа (я не написала 2 раза 1 слово, так и задумано). Эти ингибиторы
действуют не на все опухоли, есть типы опухоли, которые особенно сильно отвечают
на них (меланомы, лимфомы Ходжкина). Колоректальный рак с микросателлитной
нестабильностью (показатель нестабильности генома, тогда в клетках образуется
очень много новых опухоль-специфических антигенов) с высокой вероятностью будет
подвержен воздействию такие ингибиторов чекпоинтов клеточного цикла (на
нестабильные опухоли действуют эффективнее). Применение таких ингибиторов уже
одобрено для клинической практики.

/
Для других типов опухолей всё не так ясно. Это прежде всего связано с тем, что
в организме есть много разных клеток, взаимодействующих с лимфоцитами (это
Т-регуляторные клетки и тд). На поверхности Т-лимфоцитов и взаимодействующих с
ними антигенпрезентирующих клеток или опухолевых клеток находится широкий
репертуар рецепторов и лигандов, которые взаимодействуют между собой.
Следовательно, в различных тканях взаимодействия сильно варьируют. А в опухолях
эта вариабельность ещё сильнее. Именно этим определяется то, что ингибиторы
иммунных чекпоинтов не универсальное лекарство ;(

/
Возможные стратегии разработки вариантов для иммунотерапии:

/
9.13. Побочные эффекты иммунотерапии рака.
Оборотная сторона иммунотерапии рака - побочка. Сводится к
различным аутоиммунным реакциям. Некоторые такие реакции даже
желательны. При лечении меланомы онкологи положительно относятся к
витилиго (осветление участков кожи). Независимо от способа лечения может
активироваться иммунный ответ, витилиго - показатель того, что лечение
успешно. Если ткани, в которых происходит опухоль, жизненно важные, то
тогда аутоиммунные заболевания опасны -> проблемы с кишечником, почками,
печенью, лёгкими и тд. При иммунотерапии неизбежно, тк иммунная система не
может отличить абсолютно раковые клетки от здоровых клеток.

9.14. Аутоиммунные заболевания и инфекции


Аутоиммунные заболевания. Врождённые аутоиммунные заболевания редки, тк
плохо совместимы с жизнью. В течение жизни могут возникать. Самое
распространённое - проблемы с щитовидкой, ревматоидный артрит (системное

/
воспаление суставов), аутоиммунный тиреоидит, рассеянный склероз (атака на
миелоидную оболочку нервов). Большинство аутоиммунных заболеваний
возникает чаще у женщин, чем у мужчин. Конкретную причину пока не
называют.

Причины разнообразны

/
Во многих случаях отмечают связь аутоиммунной реакции и инфекции
(не доказано до конца).

/
Мимикрия - антигенные пептиды организма похожи или идентичны
каким-то, происходящим из патогенов. В теории, если такой пептид
присуствии в протеоме, то узнающие его клетки должны уничтожаться при
отборе, их не должно быть. Но в каких-то ситуациях клоны остаются, уходят на
периферию, активируются в ответ на инфекцию, возвращаются к антигенам ->
атака.
Лечение. Часть препаратов те же, что и при трансплантации, ведь
основы патологии - Т-клеточные реакции, подходы те же.

/
Финголимод - рецептор участвует в трафике Т-клеток, если они не придут туда,
где оказывают патологическое действие, то его и не будет)))
Блокаторы цитокинов: анти-TNF-терапия работает при ревматоидном артрите,
блокировка IL-17 - при псориазе. IL-6, 1 - антиревматоидные препараты,
которые продолжают развиваться. Блокаторы IL-6 и 17 помогают при
блокировке цитокинового шторма при лечение коронавируса.
Цитотоксические антитела, направленные против вариабельных доменов
Т-клеточного рецептора - перспективно. У V-домена TCR десятки вариантов,
есть ситуации, когда оказывается, что клоны Т-лимфоцитов имеют конкретные
1 или 2 V-гена. Современные технологии глубоко секвенирования позволяют
исследовать это. Можно уничтожить эти несколько процентов Т-клеток,
рецептор, которого использует данный V-домен. Другие клетки нормальные)
тоже умрут, но тк кодирование V-домена вырождено, то сильно иммунитет не
пострадает. Маловероятно, что станет панацеей, но есть вероятность, что
кому-то и поможет.

9.15. Аллергические заболевания и микробиота


Это аномальные реакции не против собственных клеток и тканей (как
аутоиммунка), а против, в целом, безопасных чужеродных субстанций. Такие
реакции могут происходить с использованием любых компонентов иммунной
системы (гуморальной или клеточной): различные антитела, типы

/
Т-лимфоцитов. Самые известные аллергические реакции - быстрые
анафилактические. Ответ происходит на растворимые антигены, связан с
активацией тучных клеток через рецептор IgE. Это пищевые аллергии, сенная
лихорадка, аллергия на укусы пчёл. Ну и дальше в табличе всё написано:

CTL - цитостатические клетки. Все эти вещи надо отличать от


псевдоаллергических реакций. В итоге похоже на иммунологическую реакцию,
может использовать сходный механизм, но не связано с компонентами
иммунитета. Есть “аллергия на холод” - это не аллергия, а реакция тучных
клеток на переохлаждение. Можно купировать блокаторами рецептора
гистамина.
Главная задача - как сделать так, чтобы организм не был сенситизирован
к антигену? Чем более цивилизованная и чистая жизнь (без грязи всякой), тем
больше в жизни аллергий - “гигиеническая гипотеза”. Но не надо жить в грязи!
Наблюдение: с раннего детства люди, имеющие контакт с компонентами
каких-то растений, животных, лошадьми, валяются на сеновале (это цитата),
имеют дифференцированные Т-хэлперы в правильном направлении (Th1). а
Th2 дифференцировка, ответственная за продукцию антител, подавляется.
Если же такой “подготовки” нет, а есть аллергены типа пыльцы растений,
мелких бытовых клещей, то здесь взаимодействие слишком чистого детского
организма с иммуногенами может приводить к продукции Th2 и потом
продукции IgE. При повторной встрече с пыльцой будет острая реакция.

/
Много факторов влияет на иммунную систему ребёнка. Контакт с
растениями/животными, контакт с микрофлорой родственников (в тч
микрофлорой в молоке), вакцинация, микрофлора в кишечнике, лёгких, ротовой
полости, на коже - всё это влияет на сенситизацию на потенциальные
аллергены.

/
9.16. Способы подавления аллергических реакций.
Самые рапространённые мишени для лечения - гистамин. Тяжёлые
случаи - кортикостероиды. Возможна и специфическая иммунотерапия - можно
сдвинуть Th2 на Th1 или Treg. Но у детей сложно реализовать, у взрослых
может привести к индукции новых аллергий. Исследуются подходы на основе
снятия блокады IgE. Это довольно дорого. А стандартная рекомендация -
избегать контакта с аллергеном.

/
10. Иммунодефициты. Обратная генетика в иммунологии.
Иммунологические аспекты COVID-19 и ВИЧ/СПИД.

10.1. Особенности первичных и вторичных иммунодефицитов.


Есть первичные и вторичные иммунодефициты.

/
При первичном иммунодефиците единственное лечение, которое и правда
может помочь - генотерапия. Пока нет успехов в изменении генов ;( В случае
вторичного иммунодефицита, если известен индуцирующий фактор, то можно
его устранить и вылечится. Но, в целом, это заместительная,
противоинфекционная терапия.

/
10.2. Примеры и основные клинические проявления первичных
иммунодефицитов.

Рассмотрим несколько примеров:

/
Генетические дефекты в системе комплемента: можно жить без комплемента,
но люди с дефицитом в системе комплемента страдают от повторяющихся
бактериальных заболеваний.
Дефекты в сигнальных каскадах рецепторов врожденного иммунитета:
редкость этих мутаций показывает, что более глубокие дефекты здесь
являются летальными, люди просто не выживают с такими мутациями. Киназа
IRAK - часть сигналинга Toll-рецепторов.
Дефекты в дифференцировке регуляторных Т-клеток: относительно недавно
были открыты эти клетки. Без этих Т-клеток невозможно понять, как
регулируется иммунная система. Врождённый дефицит регуляторных Т-клеток
- страшная болезнь.
Дефекты в системе регуляции апоптоза лимфоцитов: при положительной и
отрицательной селекции в тимусе значительная часть лимфоцитов погибает, тк
они не отобрались либо в положительной, либо в отрицательной селекции. Это
дело регулирует апоптоз. То ж самое происходит, когда заканчивается
иммунный ответ, большой эффективно работающий клон лимфоцитов (как Т-,
так и В-) должен “сжаться” и клетки гибнут, не видя того антигена, на которой
они настроены. Клетки здесь также гибнут от апоптоза.
Дефекты в γc или Jak3: связан с дефектами цитокинового сигналинга, это
“хорошо понятная история”.

?10.3. Примеры мутаций, приводящих к SCID.


SCID (ТКИД) - combined severe immunodeficiency. Это дефекты в γc или
Jak3. (Я не очень поняла: на одном слайде было написано, что это SCID, а

/
потом в презе говорится, что это X-SCID… По сути-то, это тоже SCID, но
тут есть отдельный билет про X-SCID)
Основные мишени мутаций генов лимфоцитов, вызывающих первичные
иммунодефициты: на картинке отмечены красным крестиком те мишени,
мутации которых вызывают первичный иммунодефицит. У первичных
иммунодефицитов есть фенотип -> пациенты страдают от заболеваний,
которые связаны в первую очередь с дефицитом иммунной системы при
борьбе с инфекциями.

Часть примеров известны по той причине, что гены, которые произошли


мутации, связаны с Х-хромосомой. Такое найти легче: во-первых, их можно
идентифицировать у мальчиков, во-вторых, они гораздо чаще будут
проявляться, чем дефекты на другой хромосоме, тк второй вариант хромосомы
с большой вероятностью содержит нормальную последовательность ДНК.
Будучи гетерозиготой по мутации, можно полноценно функционировать. Кроме
(!) доминантно-негативных мутаций. Если это причина болезни/дефицита, то
болезнь/дефицит будет проявляться по-любому.
Очень известный пример - мутации в общей γ-цепи (common γ-chain)
рецепторов цитокинов, родственников IL-2. У 2 из этих цитокинов (IL-2R, IL-15R)
высокоаффинный рецептор состоит из 3 субъединиц: α,β,γ. У большинства
других цитокинов (IL-4R, IL-7R, IL-9R, IL-21R) рецептор состоит из 2 цепей: α,γ.
Молекулярно эти дефициты приводят к тому, что рецептор не
пристыковывается киназа Jak3 -> дефицит Jak3 сигнала -> дефекты в
дифференцировке и развитии лимфоцитов в костном мозге, не будут
образовываться правильно общие лимфоидные предшественники и на
периферии, самое главное - дефекты в Nk-клетках, Т-клетках. Тк Т-клетки
помогают В-клеткам, то возникнут проблемы и с ними, но сами В-клетки при
таком дефиците будут развиваться нормально.

/
Другой пример - дефект в молекуле, которая является лигандом
костимуляции В-клеток - лиганд CD40 (CD154 по номенклатуре). Этот лиганд
сцеплен с Х-хромосомой, Если не получить этот сигнал, то В-клетка не умеет
переключить классы антител, остаётся у организма только класс М. Это
называется гипер-IgM-синдром. Не много IgM образуется, а просто других нет.
Это ещё 1 пример первичного иммунодефицита.

/
Ещё 1 пример, связанный с неправильной регуляцией апоптоза -
мутации/дефекты в рецепторе Fas, который регулирует 1 из видов апоптоза. В
его отсутствие наблюдается лимфопролиферативный синдром. Лимфоидные
клетки находятся в пролиферирующем состоянии, откуда и образуются
различные патологии.

Последний пример - мутации, связанные с транскрипционным фактором


FOXP3, он необходим для развития Т-регуляторных клеток. Целый ряд
заболеваний связан с нарушением (на картинке). Жить можно, но очень
разнообразные отклонения наблюдаются, симптоматическое лечение
затруднено.

/
(Короче, в лекции почти все примеры про X-SCID, кроме примера про Fas...Он
вроде не сцеплен же с Х-хромосомой?)

10.4. Примеры мутаций, приводящих к X-SCID.


Основные мишени мутаций генов лимфоцитов, вызывающих первичные
иммунодефициты: на картинке отмечены красным крестиком те мишени,
мутации которых вызывают первичный иммунодефицит. У первичных
иммунодефицитов есть фенотип -> пациенты страдают от заболеваний,
которые связаны в первую очередь с дефицитом иммунной системы при
борьбе с инфекциями.

/
Часть примеров известны по той причине, что гены, которые произошли
мутации, связаны с Х-хромосомой. Такое найти легче: во-первых, их можно
идентифицировать у мальчиков, во-вторых, они гораздо чаще будут
проявляться, чем дефекты на другой хромосоме, тк второй вариант хромосомы
с большой вероятностью содержит нормальную последовательность ДНК.
Будучи гетерозиготой по мутации, можно полноценно функционировать. Кроме
(!) доминантно-негативных мутаций. Если это причина болезни/дефицита, то
болезнь/дефицит будет проявляться по-любому.
Очень известный пример - мутации в общей γ-цепи (common γ-chain)
рецепторов цитокинов, родственников IL-2. У 2 из этих цитокинов (IL-2R, IL-15R)
высокоаффинный рецептор состоит из 3 субъединиц: α,β,γ. У большинства
других цитокинов (IL-4R, IL-7R, IL-9R, IL-21R) рецептор состоит из 2 цепей: α,γ.
Молекулярно эти дефициты приводят к тому, что рецептор не
пристыковывается киназа Jak3 -> дефицит Jak3 сигнала -> дефекты в
дифференцировке и развитии лимфоцитов в костном мозге, не будут
образовываться правильно общие лимфоидные предшественники и на
периферии, самое главное - дефекты в Nk-клетках, Т-клетках. Тк Т-клетки
помогают В-клеткам, то возникнут проблемы и с ними, но сами В-клетки при
таком дефиците будут развиваться нормально.

/
Другой пример - дефект в молекуле, которая является лигандом
костимуляции В-клеток - лиганд CD40 (CD154 по номенклатуре). Этот лиганд
сцеплен с Х-хромосомой, Если не получить этот сигнал, то В-клетка не умеет
переключить классы антител, остаётся у организма только класс М. Это
называется гипер-IgM-синдром. Не много IgM образуется, а просто других нет.
Это ещё 1 пример первичного иммунодефицита.

/
Последний пример - мутации, связанные с транскрипционным фактором
FOXP3, он необходим для развития Т-регуляторных клеток. Целый ряд
заболеваний связан с нарушением (на картинке). Жить можно, но очень
разнообразные отклонения наблюдаются, симптоматическое лечение
затруднено.

10.5. В передаче сигналов от каких рецепторов участвует общая


гамма-цепь и к каким последствиям приводит ее мутация?
Очень известный пример - мутации в общей γ-цепи (common γ-chain)
рецепторов цитокинов, родственников IL-2. У 2 из этих цитокинов (IL-2R, IL-15R)
высокоаффинный рецептор состоит из 3 субъединиц: α,β,γ. У большинства
других цитокинов (IL-4R, IL-7R, IL-9R, IL-21R) рецептор состоит из 2 цепей: α,γ.
Молекулярно эти дефициты приводят к тому, что рецептор не
пристыковывается киназа Jak3 -> дефицит Jak3 сигнала -> дефекты в
дифференцировке и развитии лимфоцитов в костном мозге, не будут
образовываться правильно общие лимфоидные предшественники и на
периферии, самое главное - дефекты в Nk-клетках, Т-клетках. Тк Т-клетки
помогают В-клеткам, то возникнут проблемы и с ними, но сами В-клетки при
таком дефиците будут развиваться нормально.

/
10.6. В чем биологическая роль молекулы CD40, и почему ее
мутация приводит к гипер-IgM синдрому?
Другой пример - дефект в молекуле, которая является лигандом
костимуляции В-клеток - лиганд CD40 (CD154 по номенклатуре). Этот лиганд
сцеплен с Х-хромосомой, Если не получить этот сигнал, то В-клетка не умеет
переключить классы антител, остаётся у организма только класс М. Это
называется гипер-IgM-синдром. Не много IgM образуется, а просто других нет.
Это ещё 1 пример первичного иммунодефицита.

/
10.7. Мутация каких молекул приводит к аутоиммунному
лимфопролиферативному синдрому, и почему?
Ещё 1 пример, связанный с неправильной регуляцией апоптоза -
мутации/дефекты в рецепторе Fas, который регулирует 1 из видов апоптоза. В
его отсутствие наблюдается лимфопролиферативный синдром. Лимфоидные
клетки находятся в пролиферирующем состоянии, откуда и образуются
различные патологии.

/
10.8. Использование систем репарации ДНК для генетического
нокаута и для точного редактирования генома.
(Тут получилось много, но мне кажется, что всё сюда подходит)
Есть 2 принципиальные технологии редактирования генома. Есть термин
“обратная генетика”: идём не от фенотипа к поиску гена, а есть заданный ген,
который вы хотите изучить, манипулируем им, смотря на фенотипы животных,
получаемые при таком манипулировании, вы методом дедукции (лол)
понимаете, какую функцию имел ген.
1. Трансгенез (слева на картинке). Здесь не нужны эмбриональные
стволовые клетки, нужна только оплодотворенная яйцеклетка. Делается
генетическая конструкция, интересующий ген находится под
регуляторным элементом (условно говоря, под промотором). Такую
конструкцию, которую клонировали как плазмиду (генетическая
инженерия), инъецируют в линейной форме в яйцеклетку. Потом
оплодотворенную яйцеклетку переносят в псевдо-беременную мышь
(дать мыши побольше гормонов для псевдо-беременности). Дальше в
потомстве можно отобрать особи с включением конструкта при помощи
ПЦР. Конструкция попадает куда угодно в геноме. Можно добавить
флуоресцентный белок и сразу проверять результат.
2. Редактирование связано с технологией эмбриональных стволовых
клеток. Это сложная система, здесь нужна технология работы с

/
культурами эмбриональных стволовых клеток. Сколько-то лет назад
подход был не тривиальным. Здесь более сложная конструкция с
длинными плечами гомологии. Здесь конструкция должна попасть в
определённое место в геноме (куда надо исследователю). Эта процедура
происходит в специальной культуре клеток мыши/крысы/чего-то ещё,
культивируются клетки как обычно, затем методом трансфекции вносится
конструкт. При помощи методов отбора отбираются только те клетки, в
которых вставка произошла, как надо (плечи гомологии узнали место в
геноме). Как правило, попадает конструкт в 1 аллель. Далее
эмбриональные стволовые клетки подмешиваются к бластоцитам, в
надежде, что получится химерная мышь (клетки подсаживаются
“суррогатной матери”). Возможно, что мутация попадёт в клетки
зародышевого пути, тогда всё потомство будет нести мутацию. Во второй
аллель попадаем при помощи возвратного скрещивания.
Марио Капекки получил Нобелевку за это.

Вариантом этой технологии является технология кондиционного


редактирования, т.е. можно произвести мутации не во всех клетках организма,
а в определенных органах, клетках, и они могут быть индуцибельными. Особи
могут быть нормальны до начала эксперимента, затем даём индуктор ->
активируется индуцибельный ген -> мутация в определенном органе. Также
есть и контроль (то есть особи без мутаций). Важно, что огромное кол-во
нокаутов нежизнеспособно. Гены-регуляторы нервной системы очень важны,
поэтому эмбриогенез даже не идёт, а здесь можно уже на сформированном

/
животном создавать мутации. На человеке такое невозможно в силу ряда
причин. Есть бактериофаг Р1, у него есть cre-рекомбиназа. Она узнает длинную
последовательность в 34 нуклеотида. Если вставить в геном
последовательности для рекомбинации по краям таргетного гена, то в клетках
может произойти делетирование (если последовательности в 1 направлении)
или же переворачивание. Главным образом используется делетирование.

После Капекки возникли ещё идеи для редактирования генома.


Основоположник работ по кондиционному мутагенезу - Клаус Раевский.
Дальше возникла идея, известная иммунологам хорошо. В ходе перестроек
генов, происходящих в лимфоцитах, происходят 1-, 2-цепочечные разрывы
хромосомного материала. Дальше системы репарации восстанавливают
дефекты. Если бы восстановления не было, то образование рецепторов
адаптивного иммунитета не было бы возможно. И, скорее всего, те редкие
опухоли, связанные с тем, что неправильная перестановка произошла, были
бы более частыми.

/
Идея №1 - надо просто научиться надрезать геном в правильном месте, вместо
работы со сложными конструкциями. Идея №2 - вносим разрыв рядом с тем
сайтом, который хотим мутировать, а затем матрицу с мутацией с
определенной вероятностью получим клетку/организм с искомой мутацией,
которая будет вставлена в геном. Это оказалось очень продуктивно.
Явление используемое здесь - это негомологичное соединение концов.
Если добавляем матрицу, то это будет гомология-зависимая репарация
(homology-dependent repair). Были созданы нуклеазы, несколько видов. Есть
цинковые пальцы, более продуктивная технология TALLEN. Есть большие
последовательности, которые распознаются, дальше есть модуль,который
разрежет ДНК. Некие группы научились почти под любое (под многие) место
генома нуклеазу, кторая это место расщепит.

/
Система CRISPR/Cas9 - машинерия адаптивного иммунитета бактерий.
Если бактерию заражает бактериофаг, но она не умирает от заражения, то
кусок ДНК встравивается в геном бактерии. С кассет таких вставленных
кусочков считывается РНК. Определенный комплекс, где есть РНК, нуклеаза,
распознающие белки, белки, создающие структуру комплекса, распознает ДНК
фага, если он снова заразил клетку. В итоге, ДНК фага разрезается. Это более
сложный вариант рестрикции.

/
/
Cas9 - нуклеаза, сейчас есть и другие нуклеазы.
Направляющая РНК - структура, которая имеет шпильку + участок,
комплементарный участку генома.
Донорная ДНК необходима для достройки генома системой репарации (здесь
можно сразу подсунуть кусок с мутацией).
Система CRISPR/Cas9 сейчас очень часто используется.

10.9. Каким способом блокируют TNF и для чего это нужно.


Редактирование генома можно использовать для гуманизации мышей:
какие-то элементы иммунной системы делать человеческими. С такими
мышами можно делать какие-то вещи, чтобы экономить время для реализации
клинических исследований (поиск лекарств). Несколько примеров из
собственных работ Недоспасова: они много лет занимаются физиологией
одного из провоспалительных цитокинов - TNF. Этот фактор играет роль во
многих сигналингах, а также при определённых обстоятельствах запускать
апоптоз. Используются мыши и модель артрита. Мышей иммунизируют
коллагеном с адъювантом, у них развивается иммунный ответ (и антительный,
и Т-клеточный). Так клетки иммунной системы начинают атаковать собственный
коллаген -> патология суставов. Если взять обычных мышей и в в них развить
артрит, то его можно “лечить” блокаторами TNF, так как здесь он облигатный

/
медиатор. Но клинически для лечения человека принимается инфликсимаб (25
лет назад произвёл революцию в ревматологии). В обычных мышах он не
эффективен, тк это моноклональное антитело, это лекарство просто не
связывает мышиный TNF, а человеческий связывает. Если гуманизированную
мышь использовать (на месте мышиного гена в той же самой позиции
поставить ген,кодирующий человеческий TNF), то при введении контрольных
антител артрит развивается (как и при отсутствии введения антител). Но если
ввести блокатор человеческого TNF, то параллельная инъекция инфликсимаба
снижает показание болезней. Это пример использования гуманизированных
мышей. Для многих доклинических моделей такие модифицированные
животные делаются.

Клинический скор - показатель, который оценивается исходя из признаков


артрита (опухание лап, например).
2-ой пример сложнее. Были “сделаны” мыши, в которых:
1. ген TNF заменён на человеческую версию (hTNF);
2. внешняя часть рецептора TNFR2 гуманизована (именно с этим рецептором
реагирует hTNF, в случаях патологии/защитной функции нужен TNFR1),
какая-то часть гена рецептора претерпела изменение в виде вставки сайтов
рекомбинации cre (hTNFR2f/f - f/f= floxed, это означает как раз вставку сайтов
рекомбинации). Изменение было получено при помощи генетической
конструкции с помощью технологии эмбриональных стволовых клеток;

/
3. вставлена последовательность для cre-рекомбиназы, но она находится под
контролем гена FoxP3 - это тот фактор, который определяет дифференцировку
Т-лимфоцитов (FoxP3-CreTg).
Таким образом, во всех клетках всё нормально, КРОМЕ Т-регуляторных клеток,
в которых произошло вырезание одного специфического гена. Здесь не
использована индуцибельная версия, но, в принципе, cre могла быть
индуцирована. Тогда надо было бы модифицировать рекомбиназу. Хороший
индуктор - тамоксифен, тк связан с действием “ядерных гормонов” (в онкологии
используется вещество). Тогда действие рекомбиназы ограничено не только
промотором, но и действием тамоксифена. Для получения 3 мутаций отдельно
выводятся мыши с 1 мутацией, а затем происходит их скрещивание (получили
мышей с hTNF и hTNFR2f/f отдельно, скрестили этих 2 мышей -> потомство
получилось с hTNF+hTNFR2f/f, затем так скрестили с мышами с FoxP3-CreTg.
Стоит отметить, что не все мыши получаются с нужным генотипом, но, в
принципе, методика эффективна). Итак, сам эксперимент: контроль -
гуманизированы по первым 2 генам, считаются за дикий тип (чёрные кружочки
на рисунке). Красные кружочки - мыши с генотипом hTNF x hTNFR2f/f x
FoxP3-CreTg (то есть в рецепторе произошло вырезание благодаря cre).
Смотрели на экспрессию лимфоидных органов и в центральной нервной
системе (ЦНС) важных белков, которые важны для физиологии Т-регуляторных
клеток. Это, во-первых, сам FoxP3. Оказывается, если вырезать кусок
рецептора TNF, Т-регуляторные клетки не получают сигнал от TNF, то FoxP3,
который нужен для поддержание их идентичности (функциональной и просто
идентичности), то он экспрессируется на существенно низком уровне. Второй
белок - α-цепь рецептора IL-2R (CD25). Это 1 из механизмов, с которым
Т-регуляторные клетки конкурируют за фактор роста IL-2 с другими Т-клетками.
У Т-регуляторных клеток повышена концентрация CD25 -> повышена
концентрация высокоаффинного рецептора. Если плавают Т-клетки с разными
концентрациями высокоаффинного рецептора, то цитокин связывается в
первую очередь с теми клетками, у кого этого рецептора больше.
Т-регуляторные клетки обкрадывают другие клетки. И в лимфоидных органах, и
в ЦНС существенно снижалась экспрессия, значит, с точки зрения своей
физиологической активности эти Т-регуляторные клетки недостаточно
функциональны.

/
?10.10. Что такое тоцилизумаб и почему он помогает при
COVID-19.
Тоцилизумаб - иммунодепрессор, рекомбинантное гуманизированное
моноклональное тело против рецептора интерлейкина-6 (IL-6R). При COVID-19
именно этот интерлейкин “штормит” сильнее всего. Помогает снизить
последствия шторма?

?10.11. Какой белок коронавируса является наиболее


перспективной мишенью при разработке вакцин, и почему.
Я думаю, что тут ответ - спайк-белок. Так-то именно на него и создаются
вакцины (Спутник-V от Гамалеи, например). Можно ингибировать и различные
ферменты, необходимые для репродукции вируса, но не дать вирусу
проникнуть в клетку вообще за счёт его уничтожения до контакта безопаснее.

10.12. Какие терапевтические мишени используются при


высокоэффективной анти-ретровирусной терапии при лечении
ВИЧ/СПИД?
Основной терапевтический подход к лечению ВИЧ/СПИД -
использование

/
антиметаболитов нуклеиновых кислот в варианте высокоактивной
антиретровирусной
терапии (high active antiretroviral therapy, HAART). Эффективным дополнением
служит применение препаратов интерферонов, а также лечение сопутствующих
заболеваний и вирусных инфекций.
В состав препаратов входят 3-4 компонента, направленные на остановку
воспроизведения частиц вируса в организме:

1. ингибиторы обратной транскриптазы двух видов — нуклеозидные и


ненуклеозидные.
2. ингибиторы протеазы.
3. ингибиторы интегразы.
4. ингибиторы слияния (фузии).
5. ингибиторы рецепторов.

10.13. Назовите известные вам свойства ВИЧ-1, которые


осложняют борьбу с ним.
ВИЧ-СПИД с нами уже с начала 80-х годов, это тоже пандемия так-то.

ДНК-копия вируса интегрируется в геном, хотя вирус содержит РНК. Вытащить


копию вируса из генома практически невозможно. Ключевые ферменты -

/
мишени для лекарств, сейчас действительно применяют коктейль из
ингибиторов. Сложность здесь состоит в том, что вирус может заражать
практически любые клетки.
Ж/ц ВИЧ: рецептор CD4 (есть ещё другой иммунологический
ко-рецептор), высвобождается вирусный геном, ДНК-копия выставляется в ядро
(провирус). С этой ДНК-копии происходит трансляция, есть структурные белки,
неструктурные белки, а также белков которые ответственны за особенности
вируса. В частности, белок Nef.

/
CD4 - рецептор Т-хэлперов, есть и на других клетках (макрофагах, в частности).
Корецепторы - рецепторы химокинов, у разных HIV разная тропность к типу
клеток, которая обусловлена способностью связываться с корецептором. FDC -
один из главных резервуаров вируса (когда были открыты, об этом и узнали).
Оказалось, что есть люди с мутацией CCR5 - достаточно много в Европе и у
нас. Такие люди за счёт того, что этот рецептор не может служить
корецептором более чувствительны к ВИЧ. Китаец тогда отредактировал ген
CCR5 CRISPR/Cas-9 эмбрионы, “вывел” людей, устойчивых к ВИЧ.
У каждого рецептора, как правило, есть более, чем 1 хемокин. А каждый
хемокин действует более чем на 1 тип клеток. Очаг воспаления -> миграция
дендритных клеток в лимфоидные органы -> миграция клеток адаптивного
иммунитета в места активного иммунного ответа -> выход лимфоцитов из крови
-> миграция в тимусе, по компартментам в тимусе происхлдит селекция - это
всё контролируется хемокинами. Большая часть рецепторов есть на более, чем
1 типе клеток, например, моноциты могут реагировать на много хемокинов, тк
рецепторов много. Рецептор CCR5 находится на клетках, которые участвуют в
воспалительном и противоинфекционном ответе.

/
Течение ВИЧ может занимать несколько лет. Важные показатели, на
которые обращают внимание в клинике: кол-во CD4+ Т-клеток на 1 мм3 (в
норме в порядке 1000, когда кол-во падает ниже 200, то считается, что
ВИЧ-инфицированный человек переходит в стадию СПИД, то есть падение в
4-5 раз происходит). На графике Т-клетки отмечены синим (на последних
стадий уже люди не могут сопротивляться любой инфекции, умирают от
оппортунистических инфекций), а красным - кол-во копий вирионов. На первых
стадиях пик вируса (цитокиновый шторм тут же), потом понижается, а затем
ещё одно повышение происходит в конце развития заболевания.

/
/
Сбоку написаны цитокины и хемокины. Странно, что на данном графике нет
IL-6, при COVID именно он “штормит” сильнее всех.
ГЛАВНОЕ В ЭТОМ ВОПРОСЕ - ЭТОТ СЛАЙД:

Важный пункт 3 - если взять на анализ вирус в человеке, то обнаружатся


десятки “новых” вирусов, ВИЧ постоянно мутирует. Это делает трудным
создание эффективных вакцин, нейтрализующих антител и тд.

10.14. Основные факторы иммунодефицита при СПИД.


(Мне кажется, что здесь всё то же, что и в вопросе 10.13)
ДНК-копия вируса интегрируется в геном, хотя вирус содержит РНК.
Вытащить копию вируса из генома практически невозможно. Ключевые
ферменты - мишени для лекарств, сейчас действительно применяют коктейль
из ингибиторов. Сложность здесь состоит в том, что вирус может заражать
практически любые клетки.
Ж/ц ВИЧ: рецептор CD4 (есть ещё другой иммунологический
ко-рецептор), высвобождается вирусный геном, ДНК-копия выставляется в ядро
(провирус). С этой ДНК-копии происходит трансляция, есть структурные белки,
неструктурные белки, а также белков которые ответственны за особенности
вируса. В частности, белок Nef.

/
CD4 - рецептор Т-хэлперов, есть и на других клетках (макрофагах, в частности).
Корецепторы - рецепторы химокинов, у разных HIV разная тропность к типу

/
клеток, которая обусловлена способностью связываться с корецептором. FDC -
один из главных резервуаров вируса (когда были открыты, об этом и узнали).
Оказалось, что есть люди с мутацией CCR5 - достаточно много в Европе и у
нас. Такие люди за счёт того, что этот рецептор не может служить
корецептором более чувствительны к ВИЧ. Китаец тогда отредактировал ген
CCR5 CRISPR/Cas-9 эмбрионы, “вывел” людей, устойчивых к ВИЧ.
У каждого рецептора, как правило, есть более, чем 1 хемокин. А каждый
хемокин действует более чем на 1 тип клеток. Очаг воспаления -> миграция
дендритных клеток в лимфоидные органы -> миграция клеток адаптивного
иммунитета в места активного иммунного ответа -> выход лимфоцитов из крови
-> миграция в тимусе, по компартментам в тимусе происхлдит селекция - это
всё контролируется хемокинами. Большая часть рецепторов есть на более, чем
1 типе клеток, например, моноциты могут реагировать на много хемокинов, тк
рецепторов много. Рецептор CCR5 находится на клетках, которые участвуют в
воспалительном и противоинфекционном ответе.

Течение ВИЧ может занимать несколько лет. Важные показатели, на


которые обращают внимание в клинике: кол-во CD4+ Т-клеток на 1 мм3 (в
норме в порядке 1000, когда кол-во падает ниже 200, то считается, что
ВИЧ-инфицированный человек переходит в стадию СПИД, то есть падение в

/
4-5 раз происходит). На графике Т-клетки отмечены синим (на последних
стадий уже люди не могут сопротивляться любой инфекции, умирают от
оппортунистических инфекций), а красным - кол-во копий вирионов. На первых
стадиях пик вируса (цитокиновый шторм тут же), потом понижается, а затем
ещё одно повышение происходит в конце развития заболевания.

/
Сбоку написаны цитокины и хемокины. Странно, что на данном графике нет
IL-6, при COVID именно он “штормит” сильнее всех.

Важный пункт 3 - если взять на анализ вирус в человеке, то обнаружатся


десятки “новых” вирусов, ВИЧ постоянно мутирует. Это делает трудным
создание эффективных вакцин, нейтрализующих антител и тд.
Основные факторы иммунодефицита при СПИД:

/
1. Снижение содержания CD4+ Т-клеток.
2. Ослабление функции CD4+ Т-клеток.
3. Дисбаланс субпопуляций CD4+ Т-клеток (сдвиг в сторону Th2).
4. Усиление роли Tregs (хотя и они заражаются).