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Capítulo 19
Cinética Enzimática
-\ cinética enzimática, estudo da velocidade de uma reacção em presença de um enzima, constitui um
J\ capítulo fundamental da enzimologia. Para afirmá-lo, basta ter em conta a sua contribuição para o estudo
~ "1ecanismos de reacção enzimática. Em muitos estudos cinéticos não se exigem formas purificadas de enzima,
-:Jamentos sofisticados e os protocolos são relativamente simples - motivos que têm contribuído para a
~laridade da cinética enzimática entre os bioquímicos.
cÇe capítulo faz-se o estudo cinético de uma reacção de um substrato e de um produto à qual se aplica a
~...ação de Michaelis-Menten (também designada por equação de Henri-Michaelis-Menten). Descrevem-se os
-é-.;x!os de determinação dos parâmetros cinéticos de uma reacção enzimática. Finalmente, apresentam-se os
-ecanismos mais comuns de inibição da actividade enzimática.
-'-
"'"-
- --" -
lJI--

~omenclatura e Mecanismos de Ter ou Quad. Assim, por exemplo, uma reacção

~;3
- ~ção de Cleland é usada para descrever inter-
~ entre enzima e substratos: os substratos são
~.:,dDSpelas letras A, B, c... de acordo com a
::;;.de ligação ao enzima e os produtos por P, Q e
jc acordo com a ordem de dissociação a partir
...:Jmplexosenzimáticos:
~~~formas enzimáticas são representadas por
<mlalinha horizontal, sendo a adição de subs-
Jatos (ou outros ligandos) e a libertação de
?Wdutos representadas por setas verticais.
.-.cSsetas podem incluir as constantes de velo-
cidade (kb k.h kz, k.z...).
.~ diferentes formas de enzima, por exemplo os
~mplexos enzimáticos e as formas livres,
representam-se sob a linha horizontal.
::; número de substratos e produtos envolvidos
~ processo enzimático é designado por Uni, Bi,
que envolva dois substratos e dois produtos é
designada por BiBi, mas se apenas ocorrer a
formação de um produto a partir de dois subs-
tratos é uma reacção BiUni. Estes termos usam-
-se conjuntamente com a designação do tipo de
mecamsmo.
Mecanismos em que a ligação dos substratos e/
ou a libertação de produtos não ocorre numa ordem
determinada são designados por mecanismos ao
acaso; pelo contrário, um mecanismo é ordenado
quando existe uma ordem determinada na ligação
(Fig. 19.1). Se todos os substratos se ligarem ao
centro activo do enzima antes da saída de qualquer
produto, o mecanismo é designado por sequencial;
no entanto, um enzima pode catalisar a transfor-
mação de um substrato em produto, antes da ligação
de um segundo substrato - mecanismo ping-pong
(não sequencial) (Fig. 19.2). Um exemplo de me-
. 272 BIOQuíMICA - Organização Molec~ ~

(a) A B P Q 19.2. Cinética de uma Reacção L"

A equação de Henri-Michaelis-Me-
-I I ! ! No âmbito deste capítulo, estudar-se-á a c~-
uma reacção UniUni segundo o modelo de ~::......
E EA EPQ EQ
GEABJ E -Menten (Fig. 19.3). Esta situação pode, por e--
aplicar-se a hidrolases (H20 em excesso), iSG:::.:'."
e à maioria dos liases.
(b)

I r
E EA E
Figura 19.3. Mecanismo Uni Uni representado pela ~.::
Cleland.

B A Q P
Figura. 19.1. Mecanismo BiBi ordenado (a): o substrato B liga-se ao O modelo admite implicitamente que:
complexo EA; após a "isomerização" do complexo ternário EAB em
EPQ, libertar-se-ão os produtos da reacção. Mecanismo BiBiao acaso
(b): neste mecanismo, não existe ordem preferencial para a ligação
. A catálise ocorre através da formaçãc :::
reversível de um complexo (EA) entre =::
,

de substratos e/ou libertação de produtos.

(E) e substrato (A).
. Só se considera um passo com imporiZ;; - :..;
ponto de vista cinético entre o comple=. ~
a libertação de produto (P) com regener ~,'!II
enZlma.

i r r r . O passo da formação de produto é irr.:' :-;;,'1

E EA'\ E' E'B'\
GE'P) Eq)
Figuras 19.2. Mecanismo BiBi ping-pong: trata-se de um mecanismo
não sequencial, pois o substrato B liga-se após a libertação do
produto P. Entende-se que a sua ligação ao enzima só pode ocorrer
se este for previamente modificado. No exemplo da reação de
transaminação, essa modificação do enzima tem a ver com a alte-
ração do cofactor fosfato de piridoxal.
canismo ping-pong observa-se nas reacções catali-
sadas por aminotransferases ("transaminases"). O en-
zima encontra-se ligado ao fosfato de piridoxal; após
a ligação de um aminoácido (A), este transforma-se
em oxoácido (P) que é libertado. Com a saída do
primeiro produto de reacção, o grupo amina fica
ligado ao cofactor, formando uma piridoxina. A sua
regeneração a fosfato de piridoxal, sempre ligado
(cinética de velocidades iniciais).
E
kl k2
A + E ~ EA ~ E + P
kl
Apesar das limitações do modelo de ~fi ::
-Menten, a sua aplicação tem sido útil no es-"~'"
um elevado número de reacções enzimáticas.. =::::"
com enzimas com mais de um substrato. NeSte' -'
variando apenas a concentração de um substn..JIIII
observar-se uma cinética de Michaelis-Menrcr.
Define-se para uma reacção, uma veloci~ ]
cial (vo) que deve ser proporcional à cooc~
inicial de enzima presente, isto é,
Vo = k(Eo1
Para uma concentração de enzima c.;::.
observa-se que a velocidade inicial depenck ~ ,~j

ao enzima, só ocorre com a ligação de um novo centração inicial de substrato. Para muitos ~]II
substrato (B), um oxoácido que passa então a ami- esta relação pode ser representada por me. =-~-
noácido (Q). hipérbole (Fig. 19.4); a cinética de uma rea :