EQUIPO 4.

CUESTIONARIO

1.- Explica qué tipo de factores contribuyen en la desviación de la línea recta al

graficar la absorbancia contra concentración (desviaciones a la ley de Beer).

Los factores que mas influyen son la concentración y los equipos debido a
que es algo que nos podría arrojar un error considerable en las mediciones.

2.- De acuerdo al fundamento de los dos métodos de cuantificación de proteínas

aplicados en está práctica ¿cuáles son las principales diferencias entre ambos
métodos? Considera los costos, facilidad, sensibilidad, el material utilizado.
PRINCIPIO VENTAJAS LIMITACIONES

ABSORCIÓN EN EL UV. Es el método más rápido: Se puede hacer una

La mayoría de las
proteínas absorben en el
UV a 280nm, debido
básicamente a los grupos
cromóforos de tirosina y
triptófano. Si se considera
que la cantidad de estos
dos aminoácidos es
siempre constante. La
absorbancia debe ser
proporcional a la
concentración de proteína.
requiere de muy poca
cantidad de proteína. El
sulfato de amonio no
interfiere, mientras que en
la mayoría de los métodos
si. La muestra no se
destruye y puede ser
utilizada en otros análsis.
corrección por presencia
de ácidos nucleicos, pues
éstos absorben a 260nm.
Variación de la cantidad de
aa entre proteínas.

BIURET Es el método más simple Se requiere de 20-40mgde

Las sustancias que
contienen dos o más
enlaces peptídicos forman
un complejo púrpura-
violeta con sales de cobre
en soluciones alcalinas. Es
posible que el color se
desarrolle por la formación
de un ión coordinado
tetracúprico con dos
grupos –CO-NH-
adyacentes.
La intensidad del color es
determinada
espectroscópicamente a
540nm con una curva
para medir la proteína
total.
Muy pocas interferencias
de otros compuestos en
desarrollo del color.
proteína.
Existen varios pigmentos
que absorben a 540nm.
La presencia de NH4+
interfiere en la reacción.
El desarrollo del color es
diferente en cada proteína.
Interferencia de líquidos e
hidratos de carbono pr
formación de complejos
con el ión coordinado.
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patrón.

LOWRY Es el método más Requiere de muchos

sensible, 100 veces más cuidados en la
Se basa en el desarrollo de sensible que el de Biuret. estandarización y que:
un color azul debido a: Relativamente 1h.
1.La intensidad de color
1. La reacción de varía entre proteínas.
Biuret.
2. Reducción del 2.El color no siempre es
reactivo de proporcional a la
fosofomolibdeno-
concentración.
volframato por
aminoácidos como
Existe interferencia de
tirosina y triptófano
presentes enlas sacarosa, lípidos,
proteínas. amortiguadores de pH,
Se requiere de una monosacáridos y
curva patrón. hexoaminas, yaque
reaccionan con los
La sensibilidad va reactivos de Lowry.
desde 0.2µ g 300g.

3.- ¿Qué sustancias pueden interferir con cada una de las determinaciones?

pH, concentracion de reactivos,

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4.- Grafica ambas curvas patrón en una sola gráfica y compara la cantidad de
proteína que se necesita para tener una absorbancia de 0.15 en ambos métodos.
¿Qué te dicen ambos valores respecto a la sesibilidad de cada uno de los
métodos? Compara tus datos con los de tus compañeros y analiza ¿Qué tan
reproducibles son los datos?

5.-¿Se obtiene una línea recta después de graficar absorbancia vs μg proteína?

Si

6.- De acuerdo a tus resultados, ¿cuál es el intervalo en el que se podría

determinar la concentración de una proteína en una muestra utilizando la curva
estándar de determinación de proteínas por Lowry? Da una explicación.

7.- ¿Cuáles son las aplicaciones en general de una curva de calibración o

estándar?
disminuir al máximo el error y que los resultados se encuentren lo mas cerca
posible del valor verdadero