Вы находитесь на странице: 1из 10

Лабораторная работа № 2

«Обнаружение белков, углеводов, липидов


с помощью качественных реакций»

Цель работы: Познакомиться с качественными реакциями, которые можно


использовать для обнаружения биомолекул (белков, аминокислот и углеводов).
Материалы и оборудование:
Раствор сульфата меди (СuSO4), раствор щелочи 6% (NaOH), водно-спиртовой
раствор йода, раствор йода в присутствии йодида калия, реагент нингидрин
(спиртовой раствор), реагенты, содержащие нитрат серебра (в водном и водно-
аммиачном растворе).

Определяемые образцы:
1. Белки различной природы: человеческий сывороточный альбумин, желатин,
яичный белок;
2. Аминокислоты: глицин, аспарагиновая кислота, аргинин, триптофан;
3. Углеводы: раствор глюкозы различной концентрации, раствор крахмала.

Ход работы:
Описать все реакции проводимые, в ходе данной лабораторной работы с
использованием видео по ссылке: https://www.youtube.com/watch?v=fU6wSs3Ep48

1. Биуретовая реакция (реакция для обнаружения белка).


Биуретовая реакция — качественная реакция на все без исключения белки, а
также продукты их неполного гидролиза, которые содержат не менее двух
пептидных связей. К 1 мл исследуемого раствора доливают 1 мл 10 % раствора
гидроксида натрия (NaOH) и 2-3 капли 1 % раствора сульфата меди (CuSO4). При
положительной реакции появляется фиолетовая окраска с красным либо синим
оттенком. При взаимодействии с углеводами желтое окрашивание. С крахмалом
такая реакция не идет с солями меди.

Описание опыта и наблюдения:

Пробирка №1

Проведём вышеописанные действия с р-ром человеческого сывороточного


альбумина. Под воздействием CuSO4р-р. он не меняет свой цвет или становится
бледно-голубого оттенка, так как CuSO4 – сине-голубой. Видимой реакции нет
(осадков, газа и др.).
Добавим к данному р-ру NaOHр-р. (6%), перемешаем их вращательными
движениями. Новый р-р окрашивается в бледно-фиолетовый/фиолетовый цвет.

CuSO4 + NaOH + р-р человеческого сывороточного альбумина = фиолетовый р-р


(с присутствием белка человеческого сыворотчного альбумина).

1.Вывод: мы получили положительную реакцию на наличие белка в р-ре, о чем


говорит фиолетовая окраска согласно биуретовой реакции.
Пробирка №2

Проведём вышеописанные действия с р-ром желатина. Под воздействием


CuSO4р-р. он становится бледно-голубого оттенка, так как CuSO4 – сине-
голубой. Видимой реакции нет (осадков, газа и др.).
Добавим к данному р-ру NaOHр-р. (6%), перемешаем их вращательными
движениями. Новый р-р окрашивается в бледно-фиолетовый/фиолетовый цвет.

CuSO4 + NaOH + р-р желатина = фиолетовый р-р (с присутствием белка


желатина).

2.Вывод: мы получили положительную реакцию на наличие белка в р-ре, о чем


говорит фиолетовая окраска согласно биуретовой реакции.

Пробирка №3

Проведём вышеописанные действия с р-ром яичного белка. Под воздействием


CuSO4р-р. он становится бледно-желтого оттенка, так как CuSO4 – сине-
голубой. Видимой реакции нет (осадков, газа и др.).
Добавим к данному р-ру NaOHр-р. (6%), перемешаем их вращательными
движениями. Из-за гелеобразности яичного белка смешение может происходить
хуже, поэтому рекомендуется использовать пипетку. Новый р-р окрашивается в
бледно-фиолетовый/фиолетовый цвет.

CuSO4 + NaOH + р-р яичного белка = фиолетовый р-р (с присутствием яичного


белка).

3.Вывод: мы получили положительную реакцию на наличие белка в р-ре, о чем


говорит фиолетовая окраска согласно биуретовой реакции.

Вывод 1 (по первому пункту): исходя из полученных наблюдений путем


эксперимента, мы можем сделать вывод, что действительно биуретовая
реакция – это реальный метод для выявления любого белка в р-ре, показателем
является его фиолетовая окраска при данном смешении химических реагентов.
Теперь проверим данную реакцию на аминокислотах и углеводах:

Пробирка №4

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р глицина. Под


воздействием р-ра CuSO4 и р-ра NaOH видимой реакции или показательного
изменения цвета не происходит, фиолетовая окраска отсутствует.

CuSO4 + NaOH + р-р глицина = полупрозрачный р-р (c присутствием


аминокислоты глицин).

1.Вывод: согласно биуретовой реакции в данном р-ре белки не присутствуют.

Пробирка №5

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р глюкозы. Под


воздействием р-ра CuSO4 и р-ра NaOH видимой реакции или показательного
изменения цвета не происходит, фиолетовая окраска отсутствует. Однако
через 5-10 минут после начала реакции мы можем наблюдать желтый осадок
(видимый признак реакции).

CuSO4 + NaOH + р-р глюкозы = CuOH (гидроксид меди I, желтый осадок).


2CuOH = Cu2O + H2O (разложение гидроксида при температуре в теплой воде,
приобретение оранжевой окраски).

2.Вывод: согласно биуретовой реакции в данном р-ре белки не присутствуют.


Взаимодействие с ионами меди дало желтый осадок гидроксида меди (I) CuOH.

Пробирка №6

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р крахмала. Под


воздействием р-ра CuSO4 и р-ра NaOH видимой реакции или показательного
изменения цвета не происходит, фиолетовая окраска отсутствует.

CuSO4 + NaOH + р-р крахмала= полупрозрачный р-р (c присутствием углевода


крахмал).

3.Вывод: согласно биуретовой реакции в данном р-ре белки не присутствуют.

Вывод 2 (по первому пункту): мы доказали, что биуретовая реакция и правда


действенна только для определения белков, некторые углеводы могут
показывать отличительные признаки в ходе данной реакции из-за его
индивидуальных св-в (например, осадок желто-оранжевого цвета в случае р-ра
глюкозы).
2. Нингидриновая реакция (взаимодействие белков и аминокислот с
нингидрином).
Нингидрин - это специфический реагент на белки и аминокислоты. Он реагирует
со свободными аминогруппами. Если свободные аминогруппы есть, то
происходит желтое окрашивание, если нет, то такой белок реагировать с
нингидрином будет очень медленно.

Описание опыта и наблюдения:


Пробирка №1

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р человеческого


сывороточного альбумина. Добавим в него р-р нингидрина в спирте. Смешаем их.

р-р ЧСА + р-р нингидрина в спирте = желтый р-р (с присутствием белка ЧСА).

1.Вывод: в данном случае белок взаимодействует с нингидрином, р-р имеет


желтую окраску.

В пробирках 2-5 находятся аминокислоты:

Пробирка №2

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р глицина. Добавим в него
р-р нингидрина в спирте. Смешаем их.

р-р глицина + р-р нингидрина в спирте = фиолетовый р-р (с присутствием


аминокислоты глицин).

2.Вывод: в данном случае аминокислота взаимодействует с нингидрином, р-р


имеет фиолетовую окраску, хотя данная аминокислота имеет свободную амино-
группу (в видео не объясняется).

Пробирка №3

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования аспарагиновую кислоту.


Добавим в него р-р нингидрина в спирте. Смешаем их.

аспарагиновая к-та + р-р нингидрина в спирте = желтый р-р (с присутствием


аспарагиновой аминокислоты).

3.Вывод: в данном случае аминокислота взаимодействует с нингидрином, р-р


имеет желтую окраску.
Пробирка №4

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р аргинина. Добавим в него
р-р нингидрина в спирте. Смешаем их.

р-р аргинина + р-р нингидрина в спирте = желтый р-р (с присутствием


аминокислоты аргинин).

4.Вывод: в данном случае аминокислота взаимодействует с нингидрином, р-р


имеет желтую окраску.

Пробирка №5

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р триптофана. Добавим в


него р-р нингидрина в спирте. Смешаем их.

р-р триптофана + р-р нингидрина в спирте = желтый р-р (с присутствием


аминокислоты триптофан).

5.Вывод: в данном случае аминокислота взаимодействует с нингидрином, р-р


имеет желтую окраску.

Вывод (по второму пункту): с помощью нескольких нингидриновых реакций при


взаимодействии белков и аминокислот с нингидрином мы выяснили
показательность данных реакции на наличие свободной амино-группы в белках
(яичный) и аминокислотах, как следствие выявление желтой окраски.

3. Реакция биомолекул с Йодом (реакция для обнаружения углеводов).


Углеводы с раствором йода дают фиолетовое окрашивание.
При взаимодействии крахмала и гликогена с йодом образуются комплексные
адсорбционные соединения, окрашенные в реакции с крахмалом в синий цвет, а с
гликогеном - в красно-бурый. Различие в цвете комплексов обусловлено
химической структурой крахмала и гликогена.

Описание опыта и наблюдения:


Пробирка №1

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р человеческого


сывороточного альбумина и добавим в него р-р йода в присутствии KI.
Значимого изменения окраски нет, видимых признаков реакции нет.

ЧСА + р-р йода (с KI) = светло-желтый р-р (с присутствием белка ЧСА).

1.Вывод: согласно реакции биомолекул с йодом в данном р-ре углеводы не


присутствуют.
Пробирка №2

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р глюкозы и добавим в него
р-р йода в присутствии KI. Значимого изменения окраски нет, видимых признаков
реакции нет.

р-р глюкозы + р-р йода (с KI) = светло-желтый р-р (с присутствием


моносахарида глюкоза).

2.Вывод: в данной реакции отсутствует фиолетовое окрашивание р-ра,


следовательно, данная реакция не является показательной для углеводов-
моносахаридов (на примере глюкозы).

Пробирка №3

Возьмем в качестве основного в-ва для исследования р-р крахмала и добавим в


него р-р йода в присутствии KI. Мы наблюдаем изменение окраски на темно-
синюю.

р-р крахмала + р-р йода (с KI) = темно-синий р-р (с присутствием углевода


крахмал).

3.Вывод: при взаимодействии крахмала с йодом образовалось комплексное


адсорбционное соединение, окрашенное в реакции с крахмалом в синий цвет,
следовательно, данная реакция для углеводов-полисахаридов является
показательной (на примере крахмала).

Вывод (по третьему пункту): с помощью качественных реакций с участием


белка, углевода-моносахарида и углевода-полисахарида мы выяснили, что данная
реакция с р-ром йода в присутствии KI является показательной только для
обнаружения полисахаридов/полимеров (углеводы) и не является эффективной
для моносахаридов/мономеров (углеводы) и белков, комплексные адсорбционные
соединения с ними не образуются, в отличие от углеводов-полисахаридов
(крахмал).

4. Реакция на йод после воздействия фермента амилазы слюны.


Известно, что в природе есть фермент амилаза, который может расщеплять
полимер крахмал до мономеров глюкозы. Такой фермент содержится в слюне.
Следовательно, активность этого фермента можно проверить на крахмале. В
пробирку с крахмалом добавить слюну и через некоторое время посмотреть будет
ли изменяться окраска в пробирке при добавлении раствора йода. Если окраска
будет слабее или исчезнет, то значит фермент катализирует реакцию и крахмал
полностью разложился до глюкозы.
Описание опыта и наблюдения:
Пробирка №1

Добавим в одну пробирку р-р крахмала и человеческую слюну (фермент амилаза),


перемешаем их и оставим на время (15 минут). Фермент амилаза постепенно
должен расщеплять полимер крахмал до мономеров глюкозы.
После определенного времени добавим в пробирку р-р йода (с KI). Мы наблюдаем
темно-коричневую окраску р-ра.

р-р крахмала + человеческая слюна (фермент амилаза) + р-р йода (с KI) =


темно-коричневый р-р.

1.Вывод: коричневая окраска говорит о том, что степень полимеризации


крахмала заметно уменьшилась и комплекс, который образует йод с крахмалом,
менее устойчивый, его окраска близка к цвету молекулы йода, который
находится в обычном водном р-ре вне комплекса. Следовательно, ферменты
слюны – амилаза – катализируют реакцию гидролиза крахмала.

Пробирка №2

Добавим в одну пробирку р-р крахмала и человеческую слюну (фермент амилаза),


перемешаем их и оставим на время (15 минут). Фермент амилаза постепенно
должен расщеплять полимер крахмал до мономеров глюкозы.
После определенного времени добавим в пробирку р-р CuSO4 и р-р NaOH.

CuSO4 + NaOH + р-р крахмала + человеческая слюна (фермент амилаза) = сине-


фиолетовый р-р (небольшой белый осадок).

Если присутствует глюкоза, то должен появиться осадок желто-оранжевого


цвета (как в случае пробирки №5 пункта 1), в нашем случае его не было.

2.Вывод: в данном эксперименте крахмал гидролизуется не до мономеров


глюкозы, а до олигомеров, которые не взаимодействуют с ионами меди, поэтому
желто-оранжевой окраски нет (пример качественной реакции на глюкозу
можно увидеть в пункте 1 пробирка №5).

Вывод (по четвёртому пункту): фермент амилаза расщепляет полимер крахмал


до более мелких звеньев (мономеров и олигомеров), реакция на йод после
воздействия фермента амилазы человеческой слюны является показательной,
как и качественная реакция р-ра крахмала с сульфатом меди в щелочной среде,
окраска при этом различна.
5. Качественная реакция на водно-аммиачный раствор нитрата серебра.
Реакция серебряного зеркала - это реакция восстановления серебра из аммиачного
раствора оксида серебра. При наличии малейших загрязнений серебро выделяется
в виде серого рыхлого осадка. Реакция «серебряного зеркала» может
использоваться как качественная реакция на альдегиды.
Альдегиды - класс органических соединений, содержащих альдегидную группу
(-CHO). Альдегидная группа содержится во многих природных веществах, таких,
как углеводы и некоторые витамины.

Описание опыта и наблюдения:


Пробирка №1

Добавим в одну пробирку р-р ЧСА и водно-аммиачный р-р AgNO3. Смешаем их.
Видимых признаков протекания реакции нет.

р-р ЧСА + водно-аммиачный р-р AgNO3 = прозрачный р-р.

1.Вывод: качественная реакция на водно-аммиачный раствор нитрата серебра в


данном случае не показательна, альдегиды отсутствуют.

Пробирка №2

Добавим в одну пробирку р-р глюкозы и водно-аммиачный р-р AgNO3. Смешаем


их. Получим серо-белый осадок серебра.

р-р глюкозы + водно-аммиачный р-р AgNO3 = Ag (осадок металлического


серебра) + студенистый/мутный р-р (с присутствием углевода глюкоза).

Для реакции “серебряного зеркала” нагреем данный р-р. Сначала р-р при
температуре начинает темнеть (приобретает коричневую окраску), а спустя
время на стенках пробирки появляется серебряный металлический налёт.

2.Вывод: качественная реакция на водно-аммиачный раствор нитрата серебра


является показательной, так как глюкоза содержит альдегидную группу,
глюкоза восстанавливает серебро из р-ра AgNO3.

Пробирка №3

Добавим в одну пробирку р-р крахмала и водно-аммиачный р-р AgNO3. Смешаем


их. Видимых признаков протекания реакции нет.

р-р крахмала + водно-аммиачный р-р AgNO3 = прозрачный р-р.


3.Вывод: качественная реакция на водно-аммиачный раствор нитрата серебра в
данном случае не показательна, альдегиды отсутствуют. В молекуле полимера
мономеры глюкозы связаны таким образом, что они уже не могут
восстанавливать соединения серебра.

Вывод (по пятому пункту): качественная реакция на водно-аммиачный раствор


нитрата серебра является показательной для альдегидной группы веществ и
веществ, способных к восстановлению серебра из нитрата серебра,
действительна для определения класса альдегидов органических соединений.

6. Выявление хлорид иона в биологических средах.


Биологические препараты могут содержать неорганические соединения хлорид
ионы, т.к. NaCl входит в состав физиологических сред организма. В
биологических жидкостях могут содержаться фосфаты – компоненты
биологических систем. Фосфаты входят в состав нуклеиновых кислот и АТФ. Для
обнаружения этих анионов используют водный раствор нитрата серебра. Хлорид
анион образует белый осадок, а фосфат – ярко желтый.

Описание опыта и наблюдения:


Пробирка №1

Добавим в одну пробирку р-р желатина и р-р AgNO3. Смешаем их. Видимых
признаков протекания реакции нет.

р-р желатина + р-р AgNO3 = прозрачный р-р (с присутствием белка желатин).

1.Вывод: согласно реакции выявления хлорид иона и фосфат-иона в


биологических средах в желатине не содержится анионов хлора и фосфат-
анионов.

Пробирка №2

Добавим в одну пробирку р-р яичного белка и р-р AgNO3. Смешаем их.
Образуется белый творожистый осадок хлорида серебра из-за присутствия в
яичном белка хлорид иона.

р-р яичного белка + р-р AgNO3 = р-р с AgCl (белый творожистый осадок).

2.Вывод: согласно данной реакции в яичном белке содержится хлорид ион, так
как образовался творожистый белый осадок AgCl при взаимодействии с р-ром
нитрата серебра.
Показательная реакция:

Пробирка № 3

Для показательной реакции с фосфат-ионом проведем реакцию неорганического


фосфата с р-ром AgNO3. Смешаем их. Образуется ярко-желтый осадок
ортофосфата серебра из-за присутствия в неорганическом соединении фосфат-
иона.

Неорганический фосфат + р-р AgNO3 = р-р с Ag3PO4 (ярко-желтый осадок).

3.Вывод: согласно данной реакции в неорганическом фосфате содержится


ортофосфат-ион, так как образовался ярко-желтый осадок Ag3PO4 при
взаимодействии с р-ром нитрата серебра.

Вывод (по шестому пункту): согласно реакции выявления хлорид иона и


фосфат-иона в биологических средах мы подтвердили эффективность и
показательность такой реакции экспериментальным путём с помощью яичного
белка (белый творожистый осадок), желатина (нет признаков реакции) и
неорганического фосфата (ярко-желтый осадок).

Вывод по работе:

Я познакомилась с качественными реакциями, которые можно использовать для


обнаружения биомолекул (белков, аминокислот и углеводов), изучила их
показательность, действительность и эффективность экспериментальным
методом с помощью необходимых биологических и химических веществ.