Вы находитесь на странице: 1из 10

оригинальные исследования

О влиянии наночастиц оксидов металлов


на физиологию живых организмов

УДК 577.539.199
DOI: 10.17816/RCF14324-33

©© О.А. Зейналов1, С.П. Комбарова1, Д.В. Багров2, М.А. Петросян3,


Г.Х. Толибова3, А.В. Феофанов2, К.В. Шайтан2
1
ООО «ФармГен Технологии»;
2
Биологический факультет Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, Москва;
3
ФГБУ «Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта» СЗО РАМН, Санкт-Петербург
Поступила в редакцию 01.07.2016
Принята к печати 16.08.2016
Ключевые слова:
нанотехнологии; наночастицы оксидов металлов; характериза- В данной работе экспериментально показано, что введение
ция наночастиц; просвечивающая электронная микроскопия; наночастиц оксидов металлов (TiO2, ZnO, Al2O3, CeO2) ла-
биосистемы; биобезопасность; лабораторные мыши; физиоло- бораторным мышам приводит к изменению профилей спец-
гия; интоксикация; первичный контроль; показатели поведения ифических гематологических и  биохимических параметров
животных; клинические и биохимические параметры крови. крови. На основании этого с  целью раннего выявления
признаков интоксикации в  качестве оценочных критериев
Список сокращений: влияния наночастиц оксидов металлов на живые организ-
АСТ  — аспартатаминотрансфераза; ЩФ  — щелочная фос- мы можно рекомендовать экспресс-контроль перифериче-
фатаза; АЛТ — аланинаминотрансфераза. ской крови (показатели красной крови) и  биохимические
параметры сыворотки крови (активности аминотрансфераз
Резюме и  показатели азотистого обмена). Выбранные показатели
В настоящее время стремительно растет количество материа- крови могут служить диагностическими биомаркерами
лов и товаров, производимых с помощью нанотехнологий, что при  разработке экспресс-тестов первичной комплексной
приводит к  увеличению поступления наночастиц в  биосисте- оценки воздействия наночастиц оксидов металлов на био-
мы. Для оценки рисков, связанных с  производством и  обо- системы.
ротом нанопродукции, должны быть разработаны методы экс-
пресс-диагностики нанопатологий.

About the influence of metal oxide nanoparticles


on living organisms physiology

©© О.А. Zeinalov1, S.P. Kombarova1, D.V. Bagrov2, M.A. Petrosyan3, G.H. Tolibova3, A.V. Feofanov2, K.V. Shaitan2
1
LLC “PharmGene Technology”, Moscow, Russia;
2
M.V. Lomonosov Moscow State University, Faculty of Biology, Moscow, Russia;
3
D.O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, Russian Academy of Medical Sciences, Saint Petersburg, Russia
For citation: Reviews on Clinical Pharmacology and Drug Therapy, 2016;14(3):24-33 Received: 01.07.2016
Accepted: 16.08.2016

‹‹ Keywords: nanotechnology; metal oxides nanopartic­ shown that the introduction of metal oxides nanoparticles
les; characterization of nanoparticles; transmission electron (TiO2, ZnO, Al2O3, CeO2) to laboratory mice leads to changes
microscopy; biosystems; biosafety; primary monitoring; some profiles of specific hematological and biochemical
laboratory mice; physiology; intoxication; indicators of animal blood parameters. Therefore for the purpose of early
detection of symptoms of intoxication as benchmarks of the
behavior; hematological and biochemical parameters of blood.
influence of metal oxide nanoparticles on living organisms
‹‹ Abstract. Recently the number of materials and can recommend express monitoring of peripheral blood
goods produced by nanotechnology has been growing (red blood parameters) and biochemical parameters of
rapidly, leading to an increased penetration of nanoparticles blood serum (activity of aminotransferases and indicators of
into biosystems. To assess the risks associated with nitrogen metabolism). The chosen indicators of blood can
the production and circulation of nanoproducts should serve as diagnostic biomarkers in the development of rapid
be developed methods for the rapid diagnostics of tests of primary monitoring of the impact of metal oxide
nanopathology. In this work, it has been experimentally nanoparticles on biological systems.

24 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ ТОМ 2016/14/3


оригинальные исследования

Введение ме уже через 6–8 ч после нанесения крема. В случае


проблемной кожи проницаемость дермы для нано-
Рынок наноматериалов в  мировой экономике частиц значительно повышается, особенно в местах
является одним из наиболее динамично развиваю- ее растяжений (например, на сгибах суставов и т. п.)
щихся. В  соответствии с  существующими прогно- [14, 15, 21].
зами [9] мировой объем производства в  области Накопленные данные о  воздействии различных
нанотехнологий через 10–15 лет должен превысить наночастиц на лабораторных животных подтверж-
1 трлн долл. США. Одним из важнейших направле- дают их потенциальную опасность. Это связано со
ний развития нанотехнологий является получение способностью наночастиц проникать сквозь защит-
наноразмерных порошков (нанопорошков), не ме- ные барьеры организма  — трансдермально, через
нее 80 % которых составляют нанодисперсные ок- слизистые оболочки дыхательных путей и  пище-
сиды металлов: оксиды титана, цинка, церия, алю- варительной системы, через гистогематические
миния, циркония, железа и некоторые другие [9, 37]. ­барьеры [6, 8, 11, 14, 18, 21, 23, 24, 27, 29, 33].
В настоящее время нанопорошки металлов и ок- На примере наиболее широко используемых
сидов уже используются для твердотопливных ра- наноматериалов на основе наночастиц TiO2  пока-
кетных ускорителей, в  солнечной и  водородной зано, что при ингаляционном введении их крысам
энергетике, в  составах для низкотемпературной частицы размером 20 нм способны накапливаться
пайки в электронике, химической промышленности, в  лимфоидных тканях и  обладают повреждающим
медицине, фармацевтике, ветеринарии, косметоло- действием по отношению к ДНК лимфоцитов и клет-
гии и других областях [7, 37]. кам мозга [28]. Основным механизмом токсического
В Великобритании на основе наночастиц оксида действия наночастиц TiO2  большинство исследова-
церия разработан катализатор сгорания моторного телей [8, 20, 28] считают индукцию активных форм
топлива Envirox, добавление которого в  моторное кислорода, причем активность зависит не только от
топливо (5 мг/л) уменьшает расход топлива, снижа- размеров наночастиц, но и  от того, в  какой форме
ет образование углекислого газа и эмиссию частиц. находится TiO2  — кристаллической или аморфной.
Подобный отечественный катализатор на основе на- Наибольшую опасность представляют наноча-
норазмерных частиц CeO2 разработан в  институте стицы ZnO, также широко распространенные даже
прикладной нанотехнологии [1, 30]. в  антисептических средствах для детей (Деситин,
Еще одно перспективное направление использо- Диадерм и  др.). При изучении in vitro токсичности
вания наночастиц оксидов металлов  — это фотока- наночастиц ZnO, TiO2, Fe3O4, Al2O3 и CrO3 (30–47 нм,
талитическая очистка воды [22]. Подобные системы Sigma Inc. and Nanoscale Inc.), используемых или
очистки воды, использующие TiO2, уже производят- предложенных для использования в  ряде отраслей
ся американской компанией Lokheed Martin и функ- промышленности, показана высокая токсичность
ционируют во Флориде (США) [39]. наночастиц ZnO; умеренная токсичность TiO2; на-
На основе наночастиц TiO2  разрешен к  приме- ночастицы Fe3O4 и  Al2O3  проявляли незначитель-
нению пищевой краситель E171, получаемый из ми- ную токсичность лишь при концентрациях более
неральных пород и применяемый для защиты цвета 200 мкг/мл. В присутствии наночастиц ZnO (от 50 до
и упаковки продуктов от ультрафиолетового излуче- 100 мкг/мл) значительно подавлялась функция ми-
ния [38, 40]. тохондрий клеток Neuro-2A (мышиной нейробласто-
В последнее время появилось первое истинно мы, CCL-131, ATCC), а  также увеличивалась утечка
медицинское применение нанопорошков  — проч- из них лактатдегидрогеназы, что приводило к апоп-
ные, биологически совместимые импланты и  био- тозу клеток [19].
активные покрытия. Разработан процесс синтеза из Недостаточно изучено мутагенное воздействие
нанопорошков оксидов TiO2 и  Al2O3 наноструктури- нанопорошков на живые организмы (в основном
рованных покрытий имплантов [7]. в  тестах in vitro). ДНК-повреждения выявлены при
После проведения широкомасштабных исследо- исследовании влияния наночастиц TiO2 на лимфо-
ваний нанопорошки планируется также использо- бласты человека; а  также покрытых церием нано-
вать для доставки лекарств к определенным органам частиц TiO2, активируемых видимым светом, —  на
[36]. В  качестве таких носителей продемонстриро- клетки гепатомы человека Bel7402 [34]; наночастиц
ван высокий потенциал наночастиц CeO2 [31]. TiO2 без фотоактивации —  на бронхиальные эпите-
Значительная доля косметических препаратов лиоциты человека BEAS-2B [16].
на сегодняшний день уже содержит наночастицы. В целом количество производимых наноматери-
Из 1200 солнцезащитных кремов примерно 228 со- алов и нанотоваров ежегодно стремительно растет,
держат оксид цинка, 363 — диоксид титана, а  в 73 что приводит к существенному увеличению поступ­
включены оба эти соединения. При этом в 70 % кре- ления наночастиц в биосистемы. Поэтому до начала
мов, содержащих TiO2, и  в 30 % кремов, содержа- коммерциализации необходимо оценить воздей-
щих ZnO, эти оксиды находятся в  наноформе [12]. ствие наночастиц на окружающую среду, здоровье
Однако мало кто задумывается о  том, что частицы и  безопасность людей. Их проникновение в  био-
TiO2 проникают в кожу и обнаруживаются в эпидер- сферу может быть чревато многими последствиями,
ТОМ 2016/14/3 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ 25
оригинальные исследования

прогнозировать которые пока не представляет- 0,15 мл). Введение осуществляли в течение 5 суток.


ся возможным из-за недостатка информации. Для Для получения необходимых концентраций и  объ-
дальнейшего развития нанотехнологий необходимо ема исходные суспензии оксидов непосредственно
более четкое понимание как свойств самих наноча- перед их введением разводили в 2 раза дистиллиро-
стиц и  наноматериалов, так и  механизмов их взаи- ванной водой. Контрольная группа животных парал-
модействия с  биологическими объектами. В  связи лельно с подопытными получала дистиллированную
с этим, в частности, актуальны исследования влияния воду тем же способом в сопоставимых объемах.
наночастиц оксидов металлов на физиологию живых С целью выявления признаков интоксикации во
организмов и изучение возможности разработки экс- всех экспериментальных группах, включая контроль,
пресс-контроля наночастиц с использованием мето- изучали показатели индивидуального поведения
дов клинической лабораторной диагностики. животных, а  также гематологические и  биохимиче-
Целью данной работы явилась оценка влияния ские параметры крови [2, 4, 10].
высоких доз препаратов, содержащих наночастицы 1. Показатели поведения животных
оксидов металлов (TiO2, Al2O3, ZnO, CeO2), на пове- Наблюдения за характером поведения животных
дение экспериментальных животных, морфологиче- во всех экспериментальных группах проводили еже-
ские и биохимические показатели крови. дневно с первого дня введения препаратов до окон-
чания эксперимента. При этом оценивались сле-
дующие показатели: общее состояние животных,
Экспериментальная часть интенсивность и характер двигательной активности,
координация движений, состояние волосяного, кож-
В работе использованы взрослые белые аутбред- ного покрова и положение хвоста, частота и глубина
ные мыши-самцы с исходной массой 25–35 г. Лабо- дыхания, реакция на тактильные, болевые и  звуко-
раторные животные были получены из ФГУП «Пи- вые раздражители, потребление корма и  воды, из-
томник лабораторных животных “Рапполово” РАМН» менения массы тела.
и содержались в регламентированных условиях ви- 2. Гематологические показатели
вария ФГБУ «НИИАГ им. Д.О. Отта» СЗО РАМН при Для проведения морфологического исследо-
соблюдении всех правил содержания лабораторных вания периферической крови кончик хвоста мыши
животных (время и порядок проведения карантина, протирали асептическим раствором, давали вы-
маркировка особей, постоянный санитарный кон- сохнуть, после чего скальпелем отсекали кончик
троль, стандартный рацион питания, свободный хвоста животного. Первую каплю крови наносили
доступ к воде и пище, автоматический режим осве- на обезжиренное предметное стекло, предметным
щения «день — ночь» и др.) при полном исключении шлифованным стеклом готовили тонкий мазок, вы-
отрицательных воздействий [3–5]. сушивали его на воздухе, после чего окрашивали.
Исследование выполнено на 75 эксперимен- Окраску мазков проводили по Романовскому — Гим-
тальных животных, из которых было сформировано зе с  использованием автоматической системы для
5 групп: одна  — контрольная и  четыре  — подопыт- окраски гематологических мазков Hema-Tek (Bayer
ные. Каждая группа состояла из 15 животных, кото- Diagnostics, Германия).
рые получали соответствующее группе испытуемое На окрашенном мазке анализировались следую-
вещество. Все препараты вводили животным в виде щие показатели:
водных суспензий в желудок per os с использовани- –– лейкоцитарная формула — морфологическое ис-
ем металлического зонда ежедневно в течение 5 су- следование форменных элементов крови прово-
ток в дневные часы с 12 до 15 часов. дилось методом Меандра;
Контрольная группа животных получала дистил- –– тромбоциты  — учет проводился с  помощью
лированную воду (Milli-Q), подопытные группы — ок- автоматического счетчика клеток ABX Micros
сиды металлов TiO2, Al2O3, CeO2, ZnO (Sigma-Aldrich). 60 (Франция) и визуально при подсчете лейкоци-
Исходные препараты оксидов металлов (TiO2, тарной формулы;
Al2O3, CeO2) представляли собой водные суспензии –– морфология эритроцитов — исследование окра-
(10 масс. %), оксид цинка (ZnO) — нанодисперсный шенных мазков крови с помощью иммерсионной
порошок. Суспензию наночастиц ZnO в дистиллиро- системы микроскопа.
ванной воде (10 масс.%) готовили непосредственно Для проведения общеклинического анализа кро-
перед использованием путем диспергирования на ви (лейкоциты, эритроциты, гемоглобин, тромбо-
ультразвуковом дезинтеграторе Elmasonic S  60 H циты) использовали автоматизированный гемато-
(Elma, Германия). Суспензию озвучивали 30 мин при логический анализатор ABX Micros 60 (Франция),
мощности УЗ 30 Вт и  частоте 35 кГц (размеры ре- применяемый для диагностического тестирования
зервуара Ш/Г/В  — 194/84/60, наполнитель  — вода цельной крови in vitro.
Milli-Q). Сус­пензия ZnO сохраняла стабильность 3. Биохимические показатели крови
в течение 2 суток. Для биохимических исследований крови во всех
Ежесуточная доза вводимых суспензий оксидов экспериментальных группах, включая контрольную,
металлов составляла 250 мкг/г животного (в объеме на следующий день после введения препаратов из

26 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ ТОМ 2016/14/3


оригинальные исследования

опыта выводили по три животных. После декапи- тивная погрешность таких измерений составляла не
тации мышей проводили тотальный забор крови. более 5 пикселей (1,0–2,5 нм) в зависимости от уве-
Кровь собирали в  центрифужные пробирки, отста- личения и контрастности частиц. По результатам из-
ивали 30 мин, затем центрифугировали при 1000 g мерений (объем выборки составлял N = 100–130 для
в  течение 15 мин. Сыворотку отделяли и  использо- каждого типа частиц) вычисляли средний размер
вали для анализа следующих показателей: и средний форм-фактор. Для того чтобы охарактери-
–– аспартатаминотрансфераза (АСТ —  AST IFCC, зовать распределение частиц по размерам, рассчи-
colorimetric Konelab[TM]); тывали стандартное отклонение.
–– аланинаминотрансфераза (АЛТ— ALT IFCC, colo-
rimetric Konelab[TM]);
–– щелочная фосфатаза (ЩФ — Alkaline Phoshatase Результаты исследований
SCE, colorimetric Konelab[TM]); и их обсуждение
–– креатинин (Creatinine Jaffe, colorimetric Konelab
[TM]); В медицине в  качестве биологических индика-
–– мочевина (Urea, colorimetric Konelab[TM]); торов токсических процессов нередко используют
–– белок общий (Total protein, colorimetric Konelab гематологические показатели (содержание тромбо-
[TM]). цитов в  периферической крови, гематокрит, лейко-
Биохимические исследования сыворотки крови цитарную формулу и др.) и биохимические параме-
проводили в  день забора крови с  использованием тры крови (активности АСТ, АЛТ, ЩФ, уровни азота
диагностических наборов фирмы Konelab/Thermo мочевины, креатинина, общего белка, желчных кис-
Fisher Scientific (Финляндия) на аппарате Vitalab лот и  др.). Количественными маркерами оксида-
Flexor (Голландия). тивного стресса и  цитотоксичности могут служить
Для статистической обработки всех полученных также уровни глутатиона, малонового диальдегида,
результатов применяли пакет прикладных программ лактатдегидрогеназы и др. При изучении токсично-
Microsoft Excel. В каждой группе рассчитывали сред- сти наноматериалов в  ряде работ уже применяли
ние значения и ошибку среднего. Достоверность раз- некоторые показатели крови в  качестве характери-
личий с соответствующей контрольной группой оце- стических индикаторов интоксикации организмов
нивали по t-критерию Стьюдента при р < 0,05. наночастицами [13, 19, 20, 23, 27–29, 32, 35].
4. Характеризация наночастиц оксидов ме- Например, изучение хронической токсичности
таллов препарата Синерм (на основе наночастиц Fe2O3) на
Использованные в  работе наночастицы были крысах и  собаках выявило увеличение активности
охарактеризованы методом просвечивающей элек- АСТ и АЛТ в крови животных, что коррелировало с ци-
тронной микроскопии [34–36]. Для определения томорфологическими изменениями в печени [35].
размеров и  формы наночастиц использовали про- Однократное пероральное введение кры-
свечивающий электронный микроскоп LEO912 AB сам ­наночастиц ТiО2 размером 25 и  80 нм в  дозе
OMEGA. Суспензии наночастиц исследовали на сет- 5000 мг/кг привело к повышению в сыворотке кро-
ках, покрытых формваром. ви уровней лактатдегидрогеназы и  α-гидрокси­
Обработка изображений осуществлялась с помо- бутират-дегидрогеназы (25 нм), а  также к  увели­
щью программы ImageJ. Для каждой частицы вручную чению массы печени и некрозу гепатоцитов (80 нм)
измеряли размеры вдоль двух направлений, их сред- у экспериментальных животных [13].
нее принималось за размер частицы, а отношение — В данной работе на первом этапе изучения влия-
за форм-фактор. Хотя такой способ обработки вносит ния наночастиц оксидов металлов (TiO2, Al2O3, CeO2,
субъективную погрешность в измерения, именно он ZnO) на лабораторных мышах была проведена ха-
был выбран для характеристики образцов, поскольку рактеризация наночастиц методом просвечиваю-
часть частиц наблюдалась в виде агрегатов (предпо- щей электронной микроскопии.
ложительно они слипались при высыхании капли на Нужно отметить, что размер всех исследованных
сетке). Поэтому использовать автоматизированные типов наночастиц оказался в  пределах размеров,
средства обработки изображений не удавалось. Из- сообщаемых поставщиком Sigma-Aldrich. Результа-
мерения проводили только на тех частицах, у которых ты измерений собраны в табл. 1. Типичные изобра-
можно было зрительно определить границы. Субъек- жения наночастиц показаны на рис. 1.
■■ Таблица 1. Характеристика наночастиц по размерам

Стандартное отклоне- Средний Размер, сообщаемый


Материал частиц Средний размер, нм
ние размера, нм форм-фактор ­поставщиком, нм
Оксид церия, CeO2 11,3 ± 1,3 3,2 1,50 ± 0,10 ≤ 25
Оксид титана, TiO2 17,0 ± 3,0 9,0 1,28 ± 0,05 ≤ 75
Оксид цинка, ZnO 54,0 ± 5,0 27,0 1,70 ± 0,10 ≤ 100
Оксид алюминия, Al2O3 10,0 ± 2,0* 3,0 1,40 ± 0,20 ≤ 50
* В образце присутствовали единичные крупные (более 250 нм) частицы, которые не были включены в выборку

ТОМ 2016/14/3 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ 27


оригинальные исследования

Рис. 1. Изображения наночастиц, полученные на электронном микроскопе

■■ Таблица 2. Лейкоцитарная формула периферической крови контрольных и  подопытных животных после введения
испытуемых препаратов

Морфологический состав периферической крови


Группа
животных, Дни опыта нейтрофилы, % моноциты, эозинофилы, лимфоциты,
препарат % % %
палочкоядерные сегментоядерные
Контроль (дистил. вода) 1–5 1,4 ± 0,2 18,5 ± 3,0 1,6 ± 0,2 0,6 ± 0,1 65,0 ± 5,0
TiO2 1 2,0 ± 0,5 21,0 ± 3,3 3,0 ± 0,4 0 49,0 ± 4,0
2 1,5 ± 0,3 20,5 ± 3,3 2,5 ± 0,3 0 50,5 ± 4,0
3 1,0 ± 0 20,0  ± 3,0 2,0 ± 0,2 1,0 ± 0,2 58,5 ± 4,5
4 1,5 ± 0,3 18,8 ± 2,4 1,8 ± 0,2 1,0 ± 0,2 60,2 ± 3,8
5 1,5 ± 0,3 19,5 ± 2,7 1,6 ± 0,1 1,5 ± 0,3 62,5 ± 3,0
Al2O3 1 1,0 ± 0 17,5 ± 2,0 1,6 ± 0,1 0 65,5 ± 4,5
2 1,5 ± 0 25,0 ± 3,5 2,3 ± 0,2 2,0 ± 0,5 51,0 ± 3,5
3 1,5 ± 0,3 23,0 ± 2,8 2,2 ± 0,3 3,0 ± 0,6 50,5 ± 3,2
4 1,5 ± 0,3 15,0 ± 2,0 2,1 ± 0,2 2,0 ± 0,4 61,5 ± 4,0
5 1,5 ± 0 13,2 ± 2,0 1,9 ± 0,2 1,0 ± 0,2 67,5 ± 4,8
ZnO 1 1,3 ± 0,2 32,5 ± 3,9 2,5 ± 0,4 0 42,0 ± 2,5
2 1,0 ± 0 34,5 ± 4,5 2,3 ± 0,3 1,0 ± 0 40,3 ± 1,8
3 1,0 ± 0 24,5 ± 3,6 2,0 ± 0,2 0,5 ± 0,05 55,2 ± 3,2
4 1,0 ± 0 25,5 ± 3,8 2,0 ± 0,2 0,5 ± 0,05 53,0 ± 2,8
5 1,0 ± 0 30,2 ± 3,6 1,9 ± 0,1 1,0 ± 0 45,5 ± 2,5
CeO2 1 1,0 ± 0 42,0 ± 4,7 1,6 ± 0,1 1,0 ± 0,2 37,4 ± 2,0
2 2,0 ± 0,3 29,0 ± 3,4 2,2 ± 0,3 1,5 ± 0,3 46,9 ± 3,1
3 1,5 ± 0,2 23,5 ± 2,5 2,0 ± 0,2 2,5 ± 0,5 57,7 ± 4,4
4 1,0 ± 0 18,7 ± 2,4 2,0 ± 0,2 0 60,7 ± 4,5
5 1,0 ± 0 17,5 ± 2,0 1,5 ± 0,1 0,5 ± 0 66,0 ± 5,3

28 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ ТОМ 2016/14/3


оригинальные исследования

а а

б
б
контроль
контроль
Рис. 2. Общеклиническое исследование (уровень гемоглоби- Рис. 3. Общеклиническое исследование (уровень лейкоцитов и
на и эритроцитов) крови экспериментальных животных после тромбоцитов) крови экспериментальных животных после вве-
введения испытуемых препаратов дения испытуемых препаратов

В результате наблюдения за общим состояни- в поведении лабораторных мышей не наблюдалось,


ем животных контрольных и  подопытных групп по- поэтому параметры поведения животных не могут
сле введения им изучаемых препаратов (TiO2, Al2O3, быть использованы в качестве первичных критериев
CeO2, ZnO) в  выбранной дозе (250 мкг/г животного ранних стадий интоксикации живых организмов на-
в сутки) внешних признаков проявления интоксика- ночастицами оксидов металлов.
ции отмечено не было. Однако после введения пре- В процессе исследований во всех эксперимен-
паратов у  мышей всех подопытных групп наблюда- тальных и  контрольной группах оценку изменений
ли изменение цвета стула, что, вероятно, связано морфологических параметров периферической
с цветом введенных препаратов. крови и  биохимических показателей сыворотки
Во всех экспериментальных группах животные не крови проводили ежесуточно. Результаты гемато-
проявляли беспокойства. Потребление воды и пищи логических исследований периферической крови
не отклонялось от нормы. Каких-либо изменений самцов мышей представлены в табл. 2 и на рис. 2, 3;

а
в
контроль

Рис. 4. Биохимическое исследование (активность ферментов)


крови экспериментальных животных после введения испыту-
б емых препаратов

ТОМ 2016/14/3 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ 29


оригинальные исследования

казатель оставались в норме. Со второго по четвертый


день эксперимента в анализах отмечалось уменьшение
количества лейкоцитов, на протяжении всего периода
наблюдался тромбоцитоз (см. рис. 3).
В сыворотке крови животных после первого вве-
дения оксида титана TiO2 (250 мкг/г животного в сут-
ки) отмечен некоторый подъем уровня креатинина
и  мочевины (см. рис. 5). В  дальнейшем каких-либо
изменений со стороны показателей азотистого об-
а мена не зафиксировано. На второй день наблюдал-
ся незначительный рост активности АЛТ, АСТ и спад
активности ЩФ (см. рис. 4). В последующие дни ис-
следуемые биохимические показатели крови стаби-
лизировались.
ZnO. Низкие показатели, характеризующие
красную кровь, отмечались также в течение первых
2 дней введения мышам оксида цинка, после чего
нормализовались (см. рис. 2).
б После введения первой дозы ZnO (250 мкг/г жи-
контроль вотного в сутки) происходило также увеличение ко-
личества тромбоцитов и лейкоцитов (см. рис. 3), а в
Рис. 5. Биохимическое исследование (уровень мочевины и кре-
лейкоцитарной формуле  — повышение уровня мо-
атинина) крови экспериментальных животных после введения
испытуемых препаратов ноцитов (см. табл. 2). Это отличает данный препарат
от других и указывает на иммунный ответ организма
на введение оксида цинка.
результаты биохимического анализа сыворотки кро- На протяжении всего периода наблюдений, на-
ви — на рис. 4, 5. чиная со второго дня эксперимента, введение ZnO
Для всех групп животных, включая контроль- вызывало увеличение активности аминотрансфераз
ную, в  течение всего периода наблюдений за- и показателей азотистого обмена (см. рис. 4, 5). Уве-
регистрирован умеренный тромбоцитоз (кон- личение ферментативной активности может свиде-
троль — 1025 ± 100 × 103/мм3), установленный при тельствовать о  потенциальном гепатотоксическом
визуализации мазка крови (см. рис. 3). Известно, воздействии наночастиц оксида цинка, а  повыше-
что подобные изменения клеток крови могут наблю- ние концентрации креатинина и мочевины — о воз-
даться при сильном стрессе, вызванном травмой, можном нарушении выделительной и фильтрацион-
операцией или большой кровопотерей. В  данном ной функции почек.
случае необходимый объем крови для клиническо- Al2O3. При введении экспериментальным живот-
го исследования составлял 200 мкл, что для мыши ным оксида алюминия, как и в случае приведенных
массой примерно 30 г  можно рассматривать как выше препаратов, на всех этапах эксперимента от-
большую кровопотерю. Кроме того, нельзя не учи- мечалось уменьшение концентрации гемоглоби-
тывать стрессовое воздействие на животное в  ре- на, количества эритроцитов и  уровня гематокрита
зультате процедуры взятия крови. (см. рис. 2). На второй день наблюдали увеличение
Во всех подопытных группах мышей в первые два числа тромбоцитов и  падение уровня лейкоцитов.
дня введения исследуемых препаратов, а  в груп- Количество лейкоцитов оставалось низким до 4-го
пе оксида цинка в течение всего периода отмечено дня (контроль  — 17,6 ± 1,9 × 10 3/мм3), после чего
уменьшение содержания лимфоцитов (см. табл. 2). наблюдался подъем (см. рис. 3).
Такое явление может быть показателем начальной Изменения биохимических показателей крови
стадии возможного токсического процесса. при проверке наночастиц Al2O3  зарегистрированы
Количество эозинофилов в мазках крови находи- после введения третьей дозы препарата, что проя-
лось в пределах нормальных колебаний, что указы- вилось в повышении активности аминотрансфераз.
вает на отсутствие аллергической реакции организ- Последующее введение оксида алюминия приве-
ма животных. При подсчете лейкоцитарной формулы ло к  незначительному увеличению активности ЩФ,
во всех мазках крови молодые клетки (мие­лоциты, белка и  креатинина (см. рис. 4, 5). На пятый день
метамиелоциты, базофилы и  плазмоциты) не вы- эксперимента биохимические показатели крови по-
явлены (см. табл. 2). Полихромазия наблюдалась допытных животных нормализовались и колебались
у всех экспериментальных животных. в пределах естественных физиологических норм.
TiO2. Введение мышам оксида титана TiO2  в первые CeO2. Введение оксида церия CeO2 в  течение
три дня приводило к снижению концентрации гемогло- 5 дней эксперимента характеризовалось разнона-
бина, эритроцитов и  уровня гематокрита (см.  рис. 2). правленным влиянием на основные показатели пе-
При этом средний объем эритроцитов и цветовой по- риферической крови мышей. Наиболее выраженные

30 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ ТОМ 2016/14/3


оригинальные исследования

изменения произошли на второй день. Они прояви- можно рекомендовать основные параметры крови
лись в  уменьшении количества эритроцитов, гемо- млекопитающих: экспресс-контроль перифериче-
глобина и гематокрита при одновременном подъеме ской крови и  показатели биохимического исследо-
уровней лейкоцитов и тромбоцитов (см. рис. 2, 3). вания сыворотки крови.
В сыворотке крови после первого введения ок- Таким образом, необходимо проведение даль-
сида церия CeO2 (250 мкг/г животного в  сутки) от- нейших исследований потенциальной токсичности
мечалось увеличение содержания креатинина наиболее часто используемых наночастиц оксидов
и  ЩФ. На второй день незначительно повысилась металлов, разработка и  стандартизация экспресс-
концентрация общего белка (на 17 % при контроле методов их определения в  воздухе, воде и  биоси-
50,0 ± 2,5 г/л). На третий день произошло некоторое стемах.
увеличение активности аминотрансфераз, которое
сохранилось до конца эксперимента (см. рис. 4).
В целом оценка морфологического состава пе- ЛИТЕРАТУРА (References)
риферической крови и  биохимические исследова-
ния сыворотки крови экспериментальных животных 1. Абрамян А., Беклемышев В., Вартанов Р., и  др. На-
продемонстрировали наличие первичной реакции нокатализаторы в  топливе для транспорта. Нано без
животных на введение наночастиц оксидов метал- границ... // Наноиндустрия. — 2007. — Т. 4. — С. 26–28.
лов в  первые 2–3 суток эксперимента. В  основном [Abramyan A, Beklemyshev V, Vartanov R, et al.
это проявлялось в  снижении концентрации гемо- Nanocatalysts in fuel for transport. Nano without
глобина, эритроцитов и  уровня гематокрита. По- borders … Nanoindustry. 2007;4:26-28. (In Russ).]
добные изменения характерны для начальной ста- 2. Медицинские лабораторные технологии /  Под ред.
дии развития нормохромной анемии. Кроме того, А.И. Карпищенко. —  СПб.: Интермедика, 2002. —
наблюдалось повышение уровней ферментативной Т. 2. —  600 с. [Medical laboratory technology. Ed by
активности АЛТ и АСТ, что может указывать на потен- А. Karpishchenko. Saint Petersburg: Intermedica;
циальное гепатотоксическое воздействие наноча- 2002;2:600 р. (In Russ).]
стиц. К концу эксперимента (4–5-е сутки) исследуе- 3. Методические указания МУ 1.2.2520-09. 1.2. Гигиена,
мые морфологические показатели периферической Токсикология, Санитария. Токсиколого-гигиеническая
крови и  биохимические анализы сыворотки крови оценка безопасности наноматериалов.  — М.: Феде-
стабилизировались и  возвращались к  исходному ральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотреб-
физиологическому уровню. надзора, 2009. [Methodical instructions MU 1.2.2520-09.
Таким образом, методы клинической лабора- 1.2. Hygiene, Toxicology, Sanitation. Toxicological and
торной диагностики, такие как гематологические hygienic safety evaluation of nanomaterials. Moscow:
и  биохимические исследования крови, оказались Federal Center for Hygiene and Epidemiology of
достаточно информативными (см. табл. 2, рис. 2–5) Rospotrebnadzor; 2009. (In Russ).]
для выявления ранних стадий патологических со- 4. Методические указания МУ 1.2.2635-10. 1.2. Гиги-
стояний, которые могут вызывать наночастицы, на- ена, Токсикология, Санитария. Медико-биологиче-
пример, оксидов металлов, поэтому их можно ре- ская оценка безопасности наноматериалов.  — М.:
комендовать для первичной оценки воздействия Федеральный центр гигиены и  эпидемиологии Рос­
наночастиц и  наноматериалов на биосистемы. потребнадзора,  2010. [Methodical instructions MU
В частности, для наночастиц оксидов металлов диа- 1.2.2635-10. 1.2. Hygiene, Toxicology, Sanitation.
гностическими маркерами могут служить показа- Medico-biological safety assessment of nanomaterials.
тели красной крови (см. рис. 2), а  также биохими- Moscow: Federal Center for Hygiene and Epidemiology of
ческие параметры, такие как активность некоторых Rospotrebnadzor; 2010. (In Russ).]
ферментов (АЛТ, АСТ и ЩФ) и показатели азотистого 5. Общая токсикология: руководство для врачей /  Под
обмена (креатинин, мочевина и др.) (см. рис. 4, 5). ред. А.О. Лойта.  — СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2006.  — 224 с.
[General toxicology: a  guide for physicians. Ed. by
A.О. Loit. Saint Petersburg: ELBI Saint Petersburg; 2006.
ВЫВОДЫ 224 p. (In Russ).]
6. Петрицкая Е.Н., Рогаткин Д.А., Абаева Л.Ф., и  др.
Приведенные в  настоящей работе данные под- К  вопросу о  влиянии наночастиц диоксида титана на
твердили опубликованные ранее другими исследо- внутренние органы при пероральном введении у  эк-
вателями отдельные сведения о потенциальной ток- периментальных животных // Нанотехника. — 2012. —
сичности наночастиц оксидов металлов для живых Т. 2.  — С. 84–86. [Petritskаyа Е, Rogatkin D, Abaeva L,
организмов. Это свидетельствует о необходимости et al. To the question about the influence of titanium
разработки новых методов немедленного реагиро- dioxide nanoparticles on the internal organs when oral
вания. Для этой цели, основываясь на полученных administration in an experimental animals. Nanotechnics.
в данном исследовании экспериментальных резуль- 2012;2:84-86. (In Russ).]
татах, в качестве биомаркеров в комплексной оцен- 7. Прогноз научно-технологического развития России:
ке токсического влияния высоких доз наночастич 2030. Новые материалы и нанотехнологии / Под ред.

ТОМ 2016/14/3 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ 31


оригинальные исследования

Л.М. Гохберга, А.Б. Ярославцева. — М.: Министерство 19. Jeng HA, Swanson J. Toxicity of metal oxide nanoparticles
образования и  науки Российской Федерации, На- in mammalian cells. J of Environmental Science and
циональный исследовательский университет «Выс- Health. Part A. 2006;41(12):2699-2711.
шая школа экономики»,  2014.  — 52 c. [Forecast of 20. Jiang J, Oberdrster G, Elder A, et al. Does nanoparticle
scientific and technological development of Russia: 2030. activity depend upon size and crystal phase?
New materials and nanotechnology. Ed by L. Gokhberg, Nanotoxicology. 2008;2(1):33-42.
A. Yaroslavtsev. Moscow: The Ministry of education and 21. Jonaitis TS, Card JW, Magnuson B. Concerns regarding
science of the Russian Federation, National Research nano-sized titanium dioxide dermal penetration and
University “Higher School of Economics”; 2014. 52 p. toxicity study. Toxicology Letters. 2010;192(2):268-269.
(In Russ).] doi: 10.1016/j.toxlet.2009.10.007.
8. Проданчук Н.Г., Балан Г.М. Нанотоксикология: состо- 22. Kahru A, Dubourguier HC, Blinova I, et al. Biotests
яние и  перспективы исследований // Современные and Biosensors for Ecotoxicology of Metal Oxide
проблемы токсикологии. — 2011. — № 3–4. — С. 11–27. Nanoparticles: A Minireview. Sensors. 2008;8:5153-5170.
[Prodanchuk N, Balan G. Nanotoxicology: status and doi: 10.3390/s8085153.
prospects of research. Modern problems of toxicology. 23. Lewinski N, Colvin V, Drezek R. Cytotoxicity of
2011;4:11-27. (In Russ).] Nanoparticles. Small-journal. 2008;4(1):26-49. doi:
9. Шабанова Н.А., Попов В.В., Саркисов П.Д. Химия 10.1002/smll.200700595.
и  технология нанодисперсных оксидов.  — М.: ИКЦ 24. Oberdörster G, Elder A, Rinderknecht A. Nanoparticles and
Академкнига, 2007.  — 309 с. [Shabanova N, Popov V, the Brain: Cause for Concern? J  Nanosci Nanotechnol.
Sarkisov PD. Chemistry and technology of nanodispersed 2009;9(8):4996-5007. doi: 10.1166/jnn.2009.gr02.
oxides. Moscow: Academkniga; 2007: 309 p. 25. Oberdörster G, Maynard A, Donaldson K, et. аl.
(In Russ).] Principles for characterizing the potential human health
10. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / effects from exposure to nanomaterials: elements of
Под ред. Н. Тица. —  М.: Лабинформ, 1997. —  960 c. a screening strategy. Part. and Fibre Toxicology. 2005;2:8.
[Encyclopedia of clinical laboratory tests. Ed by N. Tietz. doi: 10.1186/1743-8977-2-8.
Moscow: Labinform; 1997. 960 р. (In Russ).] 26. Oberdörster G, Oberdörster E, Oberdörster J.
11. Albanese A, Tang PS, Chan WC. The effect of nanoparticle Nanotoxicology: an emerging discipline evolving from
size, shape, and surface chemistry on biological systems. studies of ultrafine particles. Environ Health Perspect.
Annu Rev Biomed Eng. 2012;14:1-16. doi: 10.1146/ 2005;113(7):823-839.
annurev-bioeng-071811-150124. 27. Oberdörster G. Safety assessment for nanotechnology
12. A review of the scientific literature on the safety of and nanomedicine: concepts of nanotoxicology. J internal
nanoparticulate titanium dioxide or zinc oxide in medic. 2010;267(1):89-105.
sunscreens. Australian government/OTC Medicines 28. Ostiguy C, Soucy B, Lapointe G, et al. Health Effects of
Section/Therapeutic Goods Administration. 2009. 32 p. Nanoparticles-Second Edition, Studies and Research
www.tga.gov.au. Projects. Report R-589. Montréal, IRSST. 2008.
13. Bermudez E, Mangum JB, Asgharian B, et. аl. Long-term 114 р.
pulmonary responses of three laboratory rodent species 29. Panyala N, Pena-Mendez E, Havel J. Silver or silver
to subchronic inhalation of pigmentary titanium dioxide. nanoparticles: a hazardous threat to the environment and
Toxicol Sci. 2002;70(1):86-97. human health? J Appl Biomed. 2008;6:117-129.
14. Brayner R. The toxicological impact of nanoparticles. 30. Park B, Donaldson K, Duffin R, et al. Hazard and risk
Nano Today. 2008;3(1-2):48-55. doi:10.1016/S1748- assessment of a  nanoparticulate cerium oxide-based
0132(08)70015-X. diesel fuel additive — a case study. Inhalation Toxicology:
15. Friends of the Earth, Nanomaterials, Sunscreens and International Forum for Respiratory Research. 2008;
Cosmetics: Small Ingredients, Big Risks/ Soil Association 20(6):547-566. doi: 10.1080/08958370801915309.
first organisation in the world to ban nanoparticles - 31. Patil S, Reshetnikov S, Haldar MK, et al. Surface-
potentially toxic beauty products that get right under your derivatized nanoceria with human carbonic anhydrase
skin. Soil Association Press Release. 2008. II inhibitors and fluorophores: a  potential drug delivery
16. Gurr JR, Wang AS, Chen CH, Jan KY. Ultrafine titanium device. J Phys Chem. 2007;111:8437-8442.
dioxide particles in the absence of photoactivation can 32. Sahoo SK, Parveen S, Panda JJ. The present and future
induce oxidative damage to human bronchial epithelial of nanotechnologyin human health care. Nanomedicine:
cells. Toxicology. 2005;213(1-2):66-73. Nanotechnolog, Biology and Medicine. 2007;3(1):20-31.
17. Hassellöv M, Readman JW, Ranville JF, Tiede K. 33. Shang L, Nienhaus K, Nienhaus G. Engineered nanoparticles
Nanoparticle Analysis and Characterization Methodologies interacting with cells: size matters. J  Nanobiotechnology.
in Environmental Risk Assessment of Engineered 2014;12(5):1-11. doi: 10.1186/1477-3155-12-5.
Nanoparticles. Ecotoxicology. 2008;17(5):344-361. doi: 34. Wang J, Sanderson B, Wang H. Cyto- and genotoxicity of
org/10.1007/s10646-008-0225-x. ultrafine TiO2 particles in cultured human lymphoblastoid
18. Hoet PH, Bruske-Hohlfeld I, Salata OV. Nanoparticles  — cells. Mutat Res. 2007;628(2):99-106.
known and unknown health risks. J  Nanobiotechnology. 35. Withdrawal assessment report for Sinerm. Report EMEA.
2004;2(1):12. CHMP London. 11527. 2008.

32 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ ТОМ 2016/14/3


оригинальные исследования

36. Yoo JW, Irvine DJ, Discher DE, Mitragotri S. Bio-inspired, 38. http://www.edobavkam.net/e171.html.
bioengineered and biomimetic drug delivery carriers. Nat Rev 39. http://www.tallevast.info/pdfs/102006tallevastinfoWEB.pdf.
Drug Discov. 2011;10(7):521-535. doi: 10.1038/nrd3499. 40. http://www.ukfoodguide.net/e171.htm.
37. http://abercade.ru/research/analysis.

◆ Информация об авторах ◆ Information about the authors


Орхан Ахмедович Зейналов — канд. биол. наук, главный спе- Orkhan А. Zeinalov — PhD, Chief Specialist, Research and
циалист ООО «НПК«СКиФФ». E-mail: office@skiff-pharm.ru. Production Company “SK&FF” Ltd. E-mail: office@skiff-pharm.ru.

Светлана Петровна Комбарова — канд. биол. наук, старший Svetlana P. Kombarova — PhD, Senior Researcher, Research and
научный сотрудник ООО «НПК«СКиФФ». Production Company «SK&FF» Ltd.
E-mail: kombarsv@rambler.ru. E-mail: kombarsv@rambler.ru.
Дмитрий Владимирович Багров — канд. физ.-мат. наук, на- Dmitry V. Bagrov — PhD, Researcher at the Department of
учный сотрудник кафедры биоинженерии биологического фа- Bioengineering, Lomonosov Moscow State University.
культета МГУ им. М.В.Ломоносова. E-mail: dbagrov@gmail.ru. E-mail: dbagrov@gmail.ru.
Мария Анатольевна Петросян — канд. биол. наук, старший Mariya A. Petrosyan — PhD, Senior Researcher at the Laboratory of
научный сотрудник гр. фармакологии ФГБНУ «Научно-иссле- Pharmacology D.O.Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology
довательский институт акушерства, гинекологии и репродук- and Reproductology. E-mail: mariya@labpharm.spb.ru.
тологии им. Д.О.Отта». E-mail: mariya@labpharm.spb.ru.
Гулрухсор Хайбуллоевна Толибова — канд. мед. наук, старший Gulrukhsor H. Tolibova — PhD, MD, Senior Researcher at the
научный сотрудник лаб. клеточной биологии отдела патомор- Laboratory of Cell Biology, Department of Pathomorphology,
фологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушер- D.O.Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology and
ства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О.Отта». Reproductology. E-mail: gulyatolibova@yandex.ru
E-mail: gulyatolibova@yandex.ru.
Алексей Валерьевич Феофанов — д-р биол. наук, профес- Alexey V. Feofanov — Dr. Sci., Professor at the department of
сор кафедры биоинженерии биологического факультета МГУ bioengineering, Lomonosov Moscow State University.
им. М.В. Ломоносова. E-mail: avfeofanov@yandex.ru. E-mail: avfeofanov@yandex.ru.
Константин Вольдемарович Шайтан — д-р физ.-мат. наук, про- Konstantin V. Shaitan — Prof., Dr. Sci., Professor at the
фессор кафедры биоинженерии биологического факультета department of bioengineering, Lomonosov Moscow State
МГУ им. М.В.Ломоносова. E-mail: shaytan49@yandex.ru. University. E-mail: shaytan49@yandex.ru.

ТОМ 2016/14/3 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ 33