Вы находитесь на странице: 1из 4

Russian Clinical Laboratory Diagnostics.

2016; 61(7)
DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-7-401-404

Biochemistry

14. Modlin I.M., Gustafsson B.I., Moss S.F., Pavel M., Tsolakis A.V., 16. Vinik A.I., Silva M.P., Woltering E.A., Go V.L., Warner R., Caplin
Kidd M. Chromogranin A - biological function and clinical utility M. Biochemical testing for neuroendocrine tumors. Pancreas. 2009;
in neuroendocrine tumor disease. Ann. Surg. Oncol. 2010; 17(9): 38(8): 876—89.
2427—43. 17. Nikou G.C., Marinou K., Thomakos P., Papageorgiou D., Sanzanidis
15. Singh S., Law C. Chromogranin A: a sensitive biomarker for the de- V., Nikolaou P. et al. Chromogranin a levels in diagnosis, treatment
tection and post-treatment monitoring of gastroenteropancreatic neu- and follow-up of 42 patients with non-functioning pancreatic endo-
roendocrine tumors. Expert Rev. Gastroenterol. Hepatol. 2012; 6(3): crine tumours. Pancreatology. 2008; 8(4-5): 510—9.
313—34. Received 29.03.16

© Коллектив авторов, 2016

УДК 616-092.612.017.1]-074

Алчинова И.Б.1, Яковенко Е.Н.1, Санадзе А.Г.2, Карганов М.Ю.1

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ НАНОЧАСТИЦ ДИОКСИДА ТИТАНА И СЫВОРОТКИ КРОВИ


БОЛЬНЫХ АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
1
ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии », 125315, Москва; 2Государственное бюджетное учреждение
здравоохранения города Москвы «Городская клиническая больница №51 Департамента здравоохранения города
Москвы», 121309, Москва, Российская Федерация

Работа посвящена исследованию взаимодействия наночастиц оксида титана и сыворотки крови людей с верифициро-
ванными диагнозами «миастения» и «аллергия». Исследование раствора нанопорошка оксида титана методом лазер-
ной корреляционной спектрометрии (ЛКС) показало, что основной вклад в светорассеяние вносят частицы, имеющие
радиус 4,64—8,42 нм. Данные о размерах частиц, полученные с помощью ЛКС, согласуются с данными анализа этих
частиц различными физическими методами. Наночастицы оксида титана, стабилизированные фосфорной кислотой,
при взаимодействии с сывороткой крови вызывают образование и осаждение комплексов с альбуминами и глобулинами.
Взаимодействие наночастиц двуокиси титана с сывороткой крови пациентов с миастенией приводит к удалению из нее
значительной (40%) доли циркулирующих иммунных комплексов. В сыворотке крови пациентов с бронхиальной астмой
наночастицы двуокиси титана связывают преимущественно белки небольшого размера.
К л ю ч е в ы е с л о в а : лазерная корреляционная спектрометрия; диоксид титана; нанотехнологии; аутоиммунные
комплексы.
Для цитирования: Алчинова И.Б., Яковенко Е.Н., Санадзе А.Г., Карганов М.Ю. Взаимодействие наночастиц диоксида
титана и сыворотки крови больных аутоиммунными заболеваниями. Клиническая лабораторная диагностика. 2016;
61(7): 401-404. DOI: 10.18821/0869-2084-2016-7-401-404
Alchinova I.B.1, Yakovenko E.N.1, Sanadze A.G.2, Karganov M.Yu.1
The interaction of nano-particles of titanium dioxide and blood serum in patients
with autoimmune diseases
1
The research institute of general pathology and pathophysiology, 125315 Moscow, Russia; 2The municipal clinical hospital
№51 of the Moscow health department. 121309 Moscow, Russia
The article considers interaction of nano-particles of titan oxide and blood serum of patients with verified diagnoses of "myasthenia"
and "allergy". The analysis of solution of nano-powder of titan oxide using technique of laser correlated spectrometry demonstrated
that main input into light scattering is made by particles with radius of 4.64-8.42 nm. The data concerning dimensions of particles
received with laser correlated spectrometry matches data of analysis of these particles with various physical techniques. The
nano-particles of titan oxide stabilized with phosphoric acid at interaction with blood serum cause development and sedimentation
of complexes with albumins and globulins. The interaction of nano-particles of titan oxide with blood serum of patients with
myasthenia results in elimination from it the significant percentage (40%) of circulating immune complexes. In blood serum of
patients with bronchial asthma, nano-particles of titan oxide bind proteins of small size mainly.
K e y w o r d s : laser correlated spectrometry; titan dioxide; nano-technology; autoimmune complex
For citation: Alchinova I.B., Yakovenko E.N., Sanadze A.G., Karganov M.Yu. The interaction of nano-particles of titanium
dioxide and blood serum in patients with autoimmune diseases. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical
Laboratory Diagnostics) 2016; 61 (7): 401-404 (in Russ.)
DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-7-401-404
F o r c o r r e s p o n d e n c e : Alchinova I.B., candidate of biological sciences; leading research worker . e-mail: alchinovairina@
yandex.ru
Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests.
Financing. The study had no sponsor support
Received 02.04.2016
Accepted 15.04.2016

Д л я к о р р е с п о н д е н ц и и : Алчинова Ирина Борисовна, канд. биол.наук, вед. науч.сотр. ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофи-
зиологии», е-mail: alchinovairina@yandex.ru

401
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2016; 61(7)
DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-7-401-404

БИОХИМИЯ

Введение. Современный уровень научно-технического нанопорошков на организмы лабораторных животных, их


прогресса предполагает появление материалов с новыми цитотоксическое действие на опухолевые и бактериальные
свойствами и новых областей применения для уже извест- клетки. В то же время антибактериальный эффект нанопо-
ных технологий. В настоящее время существует возмож- рошков стимулирует ускоренное (в 1,5 раза) заживление ран
ность создавать и применять материалы с размерами частиц и ожогов [2].
10-9 м [1]. И если области и способы использования таких Одной из проблем, препятствующих широкому распро-
материалов в металлургии, автомобилестроении и т.п. давно странению наночастиц в качестве терапевтического средства,
известны и подробно описаны, в медицине они пока что яв- является их низкий уровень накопления в ткани-мишени,
ляются новшеством. обычно не превышающий 10% [3, 4] при системном введении.
Нанопорошки, состоящие из частиц размером ≤ 100 нм, Повышение дозы вводимых частиц чревато токсическими
благодаря своим мелким размерам обладают повышенной эффектами в здоровых тканях. Взаимодействие наночастиц с
биологической активностью и высокой возможностью про- компонентами крови изменяет их физические свойства и влия-
никновения в организм. Проникнув в клетку, наночастицы ет на биораспределение [5]. С другой стороны, наночастицы
способны взаимодействовать со структурными компонента- могут избирательно связывать отдельные вещества, содержа-
ми клетки, вызывая их повреждения. Наночастицы, попав- щиеся в избыточных количествах. Эти обстоятельства обу-
шие в организм, могут выступать в роли катализаторов обра- словливают актуальность изучения вопроса взаимодействия
зования токсичных веществ. Доказано токсическое действие наночастиц с компонентами сыворотки крови.
Титан и оксид титана рас-
сматриваются как биологиче-
ски совместимые материалы.
Целью настоящей работы яв-
лялось исследование взаимо-
действия сыворотки крови с
наночастицами оксида титана.
Для этого было необходимо по-
добрать оптимальные условия,
подтвердить факт взаимодей-
ствия и определить направле-
ние происходящих процессов.
Материал и методы. В рабо-
те была использована стандарт-
ная сыворотка, приготовленная
из крови условно здоровых лю-
дей, а также сыворотки людей
с верифицированными диагно-
зами «миастения» (10 пациен-
тов) и «бронхиальная астма»
(20 пациентов). Эти заболевания
относятся к аутоиммунным, что
Рис. 1. ЛК-гистограммы стандартной сыворотки и сывороток крови людей с верифициро- предполагает повышенное со-
ванными диагнозами. держание аутоантител.
Здесь и на рис. 2: по оси абсцисс — размер частиц в нм, по оси ординат — процентный вклад частиц опреде- Наночастицы оксида титана
ленного размера в светорассеяние. * — сравнение стандартной сыворотки и миастении, — сравнение были предоставлены компанией
стандартной сыворотки и астмы, — сравнение миастении и астмы, критерий Манна—Уитни, p < 0,05. Plasmachem GmbH (Германия).
Они имеют диаметр 20 нм, ста-
билизированы фосфорной кис-
лотой и представляют собой порошок белого цвета.
Свойства этих наночастиц при взаимодействии с
биологическими жидкостями не изучены. При сме-
шивании наночастиц с физиологическим раствором
образуется прозрачная взвесь. Данные наночасти-
цы являются новым объектом для изучения при-
менительно к биологическим объектам, поэтому их
рабочая концентрация была определена эмпириче-
ским путем и составила 7,8 мг/мл.
Для выявления процессов, происходящих при
взаимодействии наночастиц и сыворотки, исполь-
зовали метод ЛКС. В его основе лежит изменение
спектральных характеристик монохроматического
когерентного излучения гелий-неонового лазера в
результате светорассеяния при прохождении через
дисперсную систему (плазма, сыворотка крови,
моча, ротоглоточные смывы) [6, 7]. Результатом
обработки является гистограмма, по оси ординат
которой отложен процентный вклад частиц в свето-
Рис. 2. ЛК-гистограммы стандартной сыворотки крови: до и после взаи- рассеяние, а по оси абсцисс — их размер в нано-
модействия с наночастицами оксида титана. метрах [8, 9]. Общее содержание белка определяли

402
Russian Clinical Laboratory Diagnostics. 2016; 61(7)
DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-7-401-404

Biochemistry

дается увеличение вклада в светорассеяние частиц


размером от 4 до 15 нм, у пациентов с миастенией
— 404—1794 нм. Вероятно, это связано с выражен-
ным воспалительным процессом, который сопрово-
ждает течение бронхиальной астмы, а именно — с
эффектами комплекса цитокинов и других маркеров
инфекционно-аллергического процесса.
Добавление к сыворотке наночастиц сопро-
вождалось выпадением белого осадка. По нашим
предположениям, наночастицы неспецифически
связывались с белками. С одной стороны, это при-
вело к удалению мелких белков, а с другой в сыво-
ротке сохранялись комплексы, которые не удалось
полностью осадить центрифугированием.
ЛКС-исследование показало, что из проб уда-
ляются именно частицы, по размеру соответствую-
щие основным белкам сыворотки, при этом проис-
ходит перераспределение в сторону более крупных
частиц, которые представлены гликолипидами, гли-
копротеидами и комплексами «антиген-антитело».
Рис. 3. ЛК-гистограммы сыворотки крови пациентов с астмой: до и по- Приведенные на рис. 2—4 ЛК-гистограммы от-
сле взаимодействия с наночастицами оксида титана. ражают сходство этих процессов.
Приведены значимые различия, критерий Манна—Уитни, p < 0,05. При исследовании сыворотки пациентов как с
астмой, так и (даже в большей степени) с миасте-
нией наблюдается уменьшение вклада частиц раз-
мером свыше 223 нм, которые служат показателем
аутоиммунизации.
Для доказательства того, что из сыворотки кро-
ви удаляются белки, использовали метод определе-
ния содержания белка по Бредфорд [10]. Показано,
что после взаимодействия наночастиц и сыворот-
ки крови удаляется до 40% белка в случае, если
это сыворотка крови пациентов, и до 70% — если
это стандартная сыворотка. Вероятно, это связано
не столько с количеством белка, сколько с его до-
ступностью. Для приготовления стандартной сы-
воротки используется кровь здоровых людей, при
этом соблюдается точное соотношение основных
компонентов. Для крови людей с аутоиммунными
заболеваниями характерно наличие крупных ком-
плексов, и доступ к разным белкам может быть за-
труднен вследствие их связи с другими веществами
или изменения конформационной структуры.
В результате лиофильной сушки были получе-
Рис. 4. ЛК-гистограммы сыворотки крови пациентов с миастенией: до и ны осадки, образующиеся в результате взаимодей-
после взаимодействия с наночастицами оксида титана. ствия компонентов сыворотки крови с наночасти-
Приведены значимые различия, критерий Манна—Уитни, p < 0,05. цами, при этом масса осадка позволяет говорить о
том, что осадок состоит не только из наночастиц,
по Бредфорд [10]. Лиофильную сушку продуктов взаимодей- а представляет собой комплексы наночастиц с белками сы-
ствия сыворотки крови и наночастиц оксида титана осущест- воротки.
вляли на аппарате Alpha I-5 («Martin Ehrist», Германия). Таким образом, наночастицы оксида титана, стабили-
Результаты и обсуждение. Исследование раствора нано- зированные фосфорной кислотой, при взаимодействии с
порошка оксида титана методом ЛКС показало, что основной сывороткой крови вызывают образование и осаждение ком-
вклад в светорассеяние вносят частицы с радиусом 4,64— плексов с альбуминами и глобулинами. Взаимодействие на-
8,42 нм, что соответствует данным, заявленным в описании ночастиц двуокиси титана с сывороткой крови пациентов с
частиц (радиус 10 нм). Кроме того, видно, что небольшой миастенией приводит к удалению из нее значительной доли
вклад в светорассеяние вносят частицы размером 37—50 и (40%) циркулирующих иммунных комплексов. В сыворотке
300—545 нм, которые, вероятно, возникают в результате сли- крови пациентов с бронхиальной астмой наночастицы двуо-
пания. Данные о размерах частиц, полученные с помощью киси титана связывают преимущественно белки небольшого
ЛКС, согласуются с данными анализа этих частиц различны- размера. В результате взаимодействия сывороточных белков
ми физическими методами. с наночастицами на последних образуется так называемая
Соотношение частиц в сыворотке крови людей с вери- «белковая корона» [11].
фицированными диагнозами отличается от ЛК-гистограммы Есть все основания полагать, что интерес к наноразмер-
стандартной сыворотки: можно отметить преобладание ча- ным частицам будет сохраняться еще долгое время — в связи
стиц в зоне от 20 до 67 нм у больных людей и в зоне 123 и с тем, что они занимают промежуточное положение между
300 нм — в стандартной сыворотке (рис. 1). При сравнении атомно-молекулярным и конденсированным состояниями
ЛК-гистограмм сыворотки крови пациентов с астмой наблю- вещества. Фундаментальными задачами остаются установ-

403
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2016; 61(7)
DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-7-401-404

БИОХИМИЯ

ление их электронной структуры, характера взаимодействия 14. Карганов М.Ю., Ковалева О.И., Санадзе А.Г., Сиднев Д.В., Пи-
со средой, изучение состояния поверхности и ее влияния на воваров В.В., Ланда С.Б. Сравнительный анализ информатив-
устойчивость наночастицы, способности оказывать катали- ности радиоиммунологического исследования и лазерной кор-
тическое действие на протекание разнообразных химиче- реляционной спектроскопии при миастении и миастенических
ских реакций. синдромах. Неврологический журнал. 2003; 8(S1): 26—9.
Поступила 02.04.16
Следует отметить, что в настоящее время определение
размеров наноструктур довольно проблематично. Большин-
ство методов контроля размеров либо не позволяют прово- References
дить измерения в диапазоне наноструктур, либо чрезвычай- 1. De Jong W.H., Borm P.J. Drug delivery and nanoparticles: Applications
но трудоемки. Однако применение методов динамического and hazards. Int. J. Nanomedicine. 2008; 3(2): 133—49.
светорассеяния и решение обратной задачи методом регуля- 2. Thevenot P., Cho J., Wavhal D., Timmons R.B., Tang L. Surface
ризации позволяет получить распределение частиц по раз- chemistry influences cancer killing effect of TiO2 nanoparticles.
мерам из спектра флуктуаций рассеянного на этих частицах Nanomedicine. 2008; 4(3): 226—36.
света. Диапазон предлагаемой методики лежит в границах от 3. Bae Y.H., Park K. Targeted drug delivery to tumors: Myths, reality
единиц нанометров до десятков и даже сотен микрометров and possibility. J. Control. Release. 2012; 153(3): 198—205.
(5—6 порядков), что не достижимо никаким другим методом 4. Mirshafiee V., Mahmoudi M., Lou K., Cheng J., Kraft M.L. Protein
[12, 13]. Полученные в настоящем исследовании результаты corona significantly reduces active targeting yield. Chem. Commun.
позволяют утверждать, что метод лазерной корреляционной 2013; 49: 2557—9.
спектроскопии представляет собой адекватный и удобный 5. Dell’Orco D., Lundqvist M., Oslakovic C., Cedervall T., Linse S.
Modeling the time evolution of the nanoparticle-protein corona in a
инструмент для изучения взаимодействия нанообъектов с
body fluid. PLoS One. 2010; 5(6): e10949.
компонентами биологических жидкостей. 6. Lebedev A.D., Levchuk Yu.N., Lomakin A.V., Noskin V.A. Laser
В практическом аспекте обнаруженное связывание нано- Correlation Spectroscopy in Biology [Lazernaya korrelyatsionnaya
частиц с крупными иммунными комплексами, характерными spektroskopiya v biologii]. Kiev: Naukova dumka; 1987. (in
для тяжелых форм миастении [14], представляет несомнен- Russian)
ный интерес. В настоящее время для удаления циркулиру- 7. Karganov M.Yu., Kiselev M.F., Komarov G.D., Kuinzhi N.N.,
ющих иммунных комплексов из кровотока при миастении Kurneshova L.E., Kuchma V.R. et al. Polysystemic Sanogenetic
применяют процедуру плазмафереза. Обнаруженное нами Monitoring [Polisistemnyy sanogeneticheskiy monitoring]. Moscow:
взаимодействие наночастиц с компонентами сыворотки от- MIPKRO; 2001. (in Russian)
крывает новые перспективы для разработки нанотехнологий 8. Titov V.N., Karganov M.Yu., Rotenko A.A., Dmitriev V.A.,
терапии этого инвалидизирующего заболевания. Alchinova I.B., Arkhipova E.N. Biological functions and biological
Финансирование. Исследование не имело спонсорской reactions. Laser correlation spectroscopy in an assessment of purity
поддержки. of the intercellular environment - functions of an endoekologiya
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии (lecture). Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2009; (6): 21—
конфликта интересов. 36. (in Russian)
9. Karganov M., Alchinova I., Arkhipova E., Skalny A.V. Laser
Correlation Spectroscopy: Nutritional, Ecological and Toxic Aspects.
Л итература (п.п. 1—5, 9—11 In: Misra A.N., ed. Biophysics. InTech; 2012: 1—16.
см. R e f e r e n c e s ) 10. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of
6. Лебедев А.Д., Левчук Ю.Н., Ломакин А.В., Носкин В.А. Лазер- microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye
ная корреляционная спектроскопия в биологии. Киев: Наукова binding. Anal. Biochem. 1976; 72: 248—54.
думка; 1987. 11. Cedervall T., Lynch I., Lindman S., Berggеrd T., Thulin E., Nilsson
7. Карганов М.Ю., Киселев М.Ф., Комаров Г.Д., Куинжи Н.Н., Кур- H. et al. Understanding the nanoparticle-protein corona using meth-
нешова Л.Е., Кучма В.Р. и др. Полисистемный саногенетический ods to quantify exchange rates and affinities of proteins for nanopar-
мониторинг. М.: МИПКРО; 2001. ticles. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2007; 104: 2050—5.
8. Титов В.Н., Карганов М.Ю., Ротенко А.А., Дмитриев В.А., Алчи- 12. Zhdanov R.I., Strazhevskaya N.B., Shmyrina A.S., Krylov A.S.,
нова И.Б., Архипова Е.Н. Биологические функции и биологиче- Zarubina T.V., Karganov M.Yu. et al. Instability of genomic DNA
ские реакции. Лазерная корреляционная спектроскопия в оценке and change of composition of fatty acids of the DNA-connected lip-
чистоты межклеточной среды - функции эндоэкологии (лекция). ids of a spleen of rats at the folat-induced hyperhomocysteinemia.
Клиническая лабораторная диагностика. 2009; (6): 21—36. Patogenez. 2006; 4(4): 82—92. (in Russian)
12. Жданов Р.И., Стражевская Н.Б., Шмырина А.С., Крылов А.С., 13. Piruzyan L.A., Kovalev I.E., Kovaleva V.L., Tyumentseva E.S., Bal-
Зарубина Т.В., Карганов М.Ю. и др. Нестабильность геномной abolkin I.I., Karganov M.Yu. et al. Laser correlation spectroscopy of
ДНК и изменение состава жирных кислот ДНК-связанных ли- macromolecular complexes in blood serum as an effective method of
пидов селезенки крыс при фолат-индуцированной гипергомоци- an assessment of a course of a disease of bronchial asthma at chil-
стеинемии. Патогенез. 2006; 4(4): 82—92. dren. Doklady Akademii nauk. 2004; 395(6): 832—6. (in Russian)
13. Пирузян Л.А., Ковалев И.Е., Ковалева В.Л., Тюменцева Е.С., 14. Karganov M.Yu., Kovaleva O.I., Sanadze A.G., Sidnev D.V., Pivo-
Балаболкин И.И., Карганов М.Ю. и др. Лазерная корреляцион- varov V.V., Landa S.B. Comparative analysis of the information con-
ная спектроскопия макромолекулярных комплексов в сыворот- tent of radioimmunoassay and laser correlation spectroscopy with
ке крови как эффективный метод оценки течения заболевания myasthenia gravis and myasthenic syndromes. Nevrologicheskiy
бронхиальной астмой у детей. Доклады Академии наук. 2004; zhurnal. 2003; 8(S1): 26—9. (in Russian)
Received 02.04.16
395(6): 832—6.

404