Лекция 7.

Биологическое окисление

1. Реакции переноса электронов как окислительно-восстановительные реакции

2. Сопряжение биологического окисления с фосфорилированием
3. Ферменты и коферменты переноса электронов
4. Сопряжение дыхания и фосфорилирования
5. Разобщители окислительного фосфорилирования и ингибиторы ЦПЭ

7.1. Реакции переноса электронов как окислительно-восстановительные

реакции
Химические реакции, в ходе которых происходит перенос электронов
от одной молекулы к другой, называются окислительно-
восстановительными реакциями (редокс-реакциями).
Соединения, отдающие электроны в такой реакции, это доноры
электронов, восстановители (редуктанты)
Соединения, принимающие электроны, это акцепторы электронов,
окислители (оксиданты).
Окислители и восстановители всегда функционируют как сопряженные
окислительно-восстановительные пары (редокс-пары), подобно тому как кисло-
ты и основания функционируют как сопряженные кислотно-основные пары.
Так, если кислотно-основные реакции описываются следующим общим
уравнением:
Донор протонов ↔ H+ + Акцептор протонов,
То такое же общее уравнение можно написать и для окислительно-
восстановительных реакций:
Донор электронов ↔ e- + Акцептор электронов
Типичным примером окислительно-восстановительной реакции может
служить реакция
Fe2+ ↔ e- + Fe3+,
в которой закисное железо Fe2+ играет роль донора электронов, а окисное Fe3+ -
роль акцептора. Вместе ионы Fe2+ и Fe3+ представляют собой сопряженную
окислительно-восстановительную пару.
Следует, однако, иметь в виду, что в биохимии на самом деле существует
больше способов передачи электронов от одной молекулы к другой.
1. Прямой перенос электронов как от атома (иона) к другому:
Fe2+ ↔ e- + Fe3+
2. Перенос от редокс-пары Fe2+/Fe3+ к другой паре Cu2+/Cu+:
Fe2+ + Cu2+ ↔ Fe3+ + Cu+
3. Перенос электронов в составе атомов водорода. Напомним, что атом во-
дорода состоит из протона Н+ и электрона е-. В этом случае общее уравнение
имеет вид:
AH2 ↔ A + 2e- + 2H+,
 где AH2 – донор водорода (или электронов), А - акцептор водорода, а вместе
они составляют сопряженную редокс-пару. Она, например, способна восста-
навливать акцептор электронов В путем переноса атомов водорода:
AH2 + B ↔ A + BH2,
4. Перенос электронов от донора к акцептору в форме гидрид-иона :Н-, не-
сущего два электрона и имеющего отрицательный заряд. Такое явление имеет
место в случае NAD-зависимых дегидрогеназ.
5. Перенос путем прямого взаимодействия органического восстановителя с
кислородом, приводящего к включению в молекулу ковалентно связанного
кислорода. Примером такой реакции служит окисление метильной группы уг-
леводорода до спиртовой:
R— СН3 + ½ O2 → R—СН2—OH
В этой реакции донором электронов является углеводород, а атом кисло-
рода играет роль акцептора.
Описанные способы переноса электронов отличаются формой существо-
вания передачи электрона, однако все они в той или иной форме встречаются в
живых системах.

Для обозначения количества переданных электронов и протонов в

реакциях окисления-восстановления, с целью некоторого упрощения поль-
зуются такой характеристикой, как «восстановительный эквивалент».
Эквивалентом окислителя (восстановителя) называется такая
часть молекулы окислителя (восстановителя), которая соответствует
одному присоединенному (отданному) электрону в данной редокс-реакции.
Этот термин ничего не говорит нам о том, в какой форме соверша-
ется перенос электрона, т.е. что именно передается - сам электрон как
таковой, водородный атом, гидрид-ион или же передача происходит в ре-
акции с кислородом, приводящей к образованию окисленного продукта. Од-
нако он хорошо описывает процесс с количественной точки зрения.

При ферментативном окислении молекул биологических субстратов от-

щепляется обычно по два восстановительных эквивалента, так как каждый атом
конечного акцептора – кислорода - присоединяет к себе тоже два восстанови-
тельных эквивалента в виде атомов водорода. Поэтому «единицей» биологиче-
ского окисления принято считать перенос одной пары восстановительных экви-
валентов от субстрата на кислород.

7.2. Сопряжение биологического окисления с фосфорилированием

Что такое биологическое окисление?
Известно, что превращения органических веществ в живых организмах со-
провождается потреблением кислорода O2 и выделением диоксида углерода
СО2. Этот процесс называют тканевым дыханием.
 Рис. 7.1. – Схемы биологического окисления и фосфорилирования

Процесс окисления такого субстрата S(+CH), содержащего определенное

количество водорода и углерода, можно представить следующим уравнением:
S(+CH) + O2 → S + H2O +CO2
Кислород в этом процессе рассматривается как акцептор водорода от
окисляемых доноров электронов - дегидрируемых веществ (субстратов). В ре-
зультате процесса синтезируется вода и диоксид углерода.
Под фосфорилированием мы понимаем процесс соединения АДФ с моле-
кулой неорганического фосфата, т.е. фосфорной кислоты, с образованием АТФ.
Процесс биологического окисления (дегидрирования) органических суб-
стратов является экзергоническим процессом, тогда как фосфорилирование –
экзергоническим.

Химические реакции, самопроизвольно протекающие при данных усло-

виях называются экзергоническими;
реакции, которые могут протекать только при оказании постоянно-
го энергетического воздействия извне, называются эндергоническими.

Рис. 7.2. – Схема сопряжения окисления и фосфорилирования

Энергия, освобождающаяся в ходе реакций окисления в неживой природе,
обычно полностью рассеивается в виде тепла (сгорание угля, древесины, угле-
водородов). А вот в живых организмах энергия как выделяется в виде тепла, так
и тратится на фосфорилирование АДФ, на образование высокоэнергетических
(макроэргических) связей. В такой форме организм запасает около 40% энер-
гии, выделяющейся при окислении.
Многие организмы используют этот способ, или сходные с ним, как ос-
новной источник получения и запасания энергии. В качестве терминального
акцептора водорода может быть не кислород, а другие соединения. Таким пу-
тем клетка превращает химическую энергию питательных веществ, поступив-
ших извне, в энергию, используемую на разные виды работы в клетках и тка-
нях.
Реакция дегидрирования и способ превращения выделившейся энергии пу-
тем синтеза АТФ - это энергетически сопряженные реакции.
Указанное наверху уравнение окислительно-восстановительной реакции
представляет собой упрощенную форму, так как изображает процесс окисления
субстратов как прямое дегидрирование, причем кислород выступает в роли
непосредственного акцептора водорода. На самом деле кислород получает
электроны несколько иным образом.
Существуют промежуточные переносчики при транспорте электронов от
исходного донора электронов SH2 к терминальному акцептору О2. Эти перенос-
чики могут существовать как в окисленном, так и восстановленном виде.

Рис. 7.3. – Схема биологического окисления с участием переносчиков

электронов
Каждый промежуточный переносчик принимает электроны и протоны и
переходит в восстановленную форму. Затем он передает электрон следующему
переносчику и снова возвращается в окисленное состояние. На последней ста-
дии переносчик передает электроны кислороду, который восстанавливается до
воды.
Полный процесс представляет собой цепь последовательных окислитель-
но-восстановительных реакций, в ходе которых происходит взаимодействие
между переносчиками. Совокупность этих последовательных реакций называ-
ется цепью переноса электронов ЦПЭ, или дыхательной цепью.
Перенос электронов и протонов идет по градиенту ОВП, т.е. при движении
по цепи он возрастает от -320 мВ у НАД до +821 мв у О2.
 Образующаяся при переносах энергия тратится на выкачивание протонов
из матрикса в межмембранное пространство.
В дыхательной цепи есть три участка, в которых выделяется энергия,
достаточная для синтеза АТФ.
Последний переносчик отдает электрон на кислород и восстанавливает его
до воды.

Рис. 7.3. – Схема митохондриальной цепи переносчиков электронов (дыха-

тельной цепи). I, III и IV - высокомолекулярные комплексы, расположенные во
внутренней мембране митохондрий;

На схеме показано, что вышеупомянутые переносчики располагаются не

произвольно, а объединены в так называемые ферментные комплексы, или по-
лиферментные системы:
I - ФМН
II - ФАД -зависимая сукцинатдегидрогеназа (на схеме не представлена).
III - QН2-дегидрогеназа
IV – Цитохромоксидаза.
Они существуют также и вне этих комплексов:
Кофермент Q - небелковый компонент ЦПЭ.
Цитохром с - низкомолекулярный гемсодержащий белок.
FeS - железосерные белки, содержат негеминовое железо.

Функции комплексов:
1 – перенос от НАДН к коэнзиму Q,
2- перенос от сукцината сразу к коэнзиму Q (минуя 1 комплекс),
3 – перенос от коэнзима Q к цитохрому с
4 – перенос от цитохрома с к кислороду.
5 – окислительное фосфорилирование, образование АТФ
 7.3. Ферменты и коферменты переноса электронов
НАД+/НАД·Н2 никотинамидадениндинуклеотид
ФАД/ФАД·Н2 флавинадениндинуклеотид
ФМН флавинмононуклеотид
Q кофермент Q (убихинон)
Цитохромы гемсодержащие белки (b, c1, c, a, a3)
FeS Белки, содержащие негеминовое железо
Процесс начинается с переноса протонов и электронов от окисляемого
субстрата на коферменты НАД+ или ФАД, которые входят в состав НАД-
зависимой или ФАД– зависимой дегидрогеназы.

НАД - является коферментом и выполняет роль акцептора водорода.

Рис. 7.4. Структурные формулы рабочей части коферментов НАД и НАД·Н2

В окисленной форме никотинамидные коферменты обозначают как НАД+

и НАДФ+, так как они несут положительный заряд. При восстановлении присо-
единяет 1 протон и два электрона в форме гидрид-иона (:Н-), а второй протон
H+ переходит в среду. В обратной реакции НАД·Н2 и НАДФ·Н2 выступают в
качестве доноров электронов и протонов.
ФМН - это простетическая группа многих ферментов оксидоредуктаз,
например, ФАД – зависимой дегидрогеназы (Рис. 7.5.).
ФАД-зависимая дегидрогеназа также выполняет функцию первичной де-
гидрогеназы. ФАД - кофермент принимает от нее отщепленный водород, т.е.
является акцептором водорода от субстрата. В ходе реакции ФАД и ФМН при-
соединяют два электрона и два протона, катализируемых ФАД-зависимой и
НАД·Н2 –дегидрогеназами. Тип участвующей первичной дегидрогеназы зави-
сит от природы субстрата.
Простетическая группа - небелковый (и не аминокислотный) компо-
нент, ковалентно связанный с белком и выполняющий важную роль в его
биологической активности.
Коферменты, или коэнзимы — малые небелковые молекулы, обра-
тимо соединяющиеся с белками и играющие роль активного центра или
простетической группы фермента.
 Рис. 7.5. Структурные формулы ФАД и ФМН

Вне зависимости от свойств исходного субстрата электроны и протоны от

флавинов переносятся к коферменту Q.

Кофермент Q - производное изопрена, его название возникло из-за по-

всеместной распространенности в природе. Количество изопреновых остатков в
боковом радикале может быть от 5 до 9.

Рис. 7.6. Структура убихинона (кофермента Q),

n - число изопреноидных звеньев (n=5-9)
 Убихинон может принимать один электрон и превращаться в семихинон, а
получая два электрона из матрикса митохондрий, он восстанавливается в гид-
рохинон. Дальше он передает электроны на следующие компоненты ЦПЭ - ци-
тохромы.
Цитохромы - это гемопротеины, содержащие в качестве простетической
группы гем, прочно связанный с белковой частью координационными связями.
Атом железа в геме может менять валентность, присоединяя или отдавая элек-
троны:
Fe3+ +e- ↔ Fe2+
В дыхательной цепи цитохромы располагаются в порядке возрастания
окислительно-восстановительного потенциала: b, c1, c, а, а3.Все они сосредото-
чены в 3 и 4 ферментных комплексах ЦПЭ.

Рис. 7.7. - Цитохромы b, c1, c, a, a3 в составе дыхательных комплексов III и IV:

III - QН2-дегидрогеназа, IV – Цитохромоксидаза, с – свободный цитохром с,
белки FeS содержат негеминовое железо

QН2-дегидрогеназа, или комплекс III представляет собой комплекс цито-

хромов b и c1, которые последовательно переносят электроны атомами железа
на цитохром c.
Цитохромоксидаза, или комплекс IV, включает цитохромы а и а3, и пере-
носит электроны с цитохрома c на кислород. В этом участвуют сначала ионы
железа цитохромов а и а3, а затем ион меди цитохрома а3.
Каждый из атомов молекулы кислорода присоединяет по два электрона и
протона, образуя при этом молекулу воды.
 Белки, содержащие негеминовое железо. Некоторое количество атомов
железа в митохондриях связано не в геме цитохромов, а образует комплексы с
другими белками. Эти белки называют также железосерными, так как атомы
железа связаны с атомами серы цистеиновых остатков. Белки, содержащие не-
геминовое железо, участвуют в переносе электронов в составе комплексов I и
III. Механизм их действия до настоящего времени не ясен.

7.4. Сопряжение окисления и фосфорилирования

Энергия, образующаяся при прохождении потока электронов по дыхатель-
ной цепи, используется для сопряженного фосфорилирования АДФ.
Эффективность сопряжения этих двух процессов – биологического окис-
ления и фосфорилирования АДФ с синтезом АТФ, определяют по коэффициен-
ту Р/О.

Эффективность окислительного фосфорилирования оценивают по

коэффициенту окислительного фосфорилирования P/O: количество
фосфата Рi, использованное на синтез АТФ, приходящееся на 1 грамм-
атом восстановленного О (моль АТФ на 1/2 моль О2).
В ЦПЭ есть 3 участка сопряжения переноса e- и синтеза АТФ.
Для субстратов НАД-зависимой дегидрогеназы Р/О=3 (полный путь e-
и H+ по ЦПЭ),
Для субстратов ФАД-зависимых дегидрогеназ Р/О=2 (e- и H+ переда-
ются на убихинон Q, минуя комплекс I).

Соотношение окисления и фосфорилирования определяется коэффициен-

том P/O, показывающим, какое количество Рi используется на образование
АТФ при превращении одного грамм-атома О2 в Н2О (количество моль фосфо-
рилированного АДФ на 1/2 моль кислорода). Коэффициент Р/О называется ко-
эффициентом окислительного фосфорилирования и зависит от точки вхож-
дения восстановительных эквивалентов в цепь транспорта электронов. Напри-
мер, для субстратов, окисляемых НАД-зависимой дегидрогеназой, Р/О=3, так
как в дыхательной цепи есть три участка, где перенос электронов сопряжен с
синтезом АТФ. Не все субстраты передают электроны и протоны на НАД, не-
которые окисляются ФАД -зависимыми дегидрогеназами, которые переносят
протоны и электроны сразу на убихинон, минуя комплекс I. В этом случае
Р/О=2.
В действительности коэффициент фосфорилирования всегда меньше тео-
ретической величины, потому что часть энергии, высвобождающейся при
транспорте электронов, расходуется не на синтез АТФ, а для переноса веществ
через митохондриальную мембрану.
Представление о значении процесса окислительного фосфорилирования в
организме человека может дать следующий расчет.
 Потребление энергии взрослого
человека с сидячей работой 2800 ккал/сут.
Энергия гидролиза связи АТФ 7,3 ккал/моль.
В сутки требуется гидролизовать: 2800/7,3 = 384 моль,
или 190 кг АТФ
Среднее содержание АТФ в организме: 50 г = 0,05 кг
Число реакций синтеза/гидролиза 190 кг : 0,05 кг = 3800

Вывод: Для получения требуемой энергии каждая молекула АТФ должна рас-
щепиться до AДФ и фосфата и повторно синтезироваться 3800 раз в сутки.

Взрослый здоровый человек весом 70 кГ при сидячей работе потребляет в

день около 2800 ккал. Для того чтобы такое количество энергии было получено
за счет гидролиза АТФ, требуется 2800/7,3 = 384 моль, или 190 кг АТФ. Между
тем в организме человека содержится всего около 50 г АТР. Отсюда следует,
что для удовлетворения потребности организма в энергии эти 50 г АТФ долж-
ны на протяжении суток 3800 раз расщепиться до AДФ и фосфата и повторно
синтезироваться.
Очевидно также, что скорости обмена АТФ и окислительного фосфорили-
рования должны регулироваться в очень широких пределах - от минимальной
во сне до максимальной в периоды напряженной мышечной работы.
Действительно, эти два процесса взаимозависимы: окисление не может
протекать в отсутствие АДФ, и наоборот, скорость дыхания митохондрий мо-
жет контролироваться концентрацией АДФ. Как это происходит? По принципу
обратной связи.
Гидролиз АТФ → Концентрация АДФ увеличивается →
→ Ускоряется скорость фосфорилирования →
→ Растет концентрация АТФ
Результат:
1. Повышение концентрации АДФ стимулирует работу ЦПЭ
2. Увеличение содержания АТФ ее снижает.
Энергия, необходимая клетке для совершения работы, поставляется за счет
гидролиза АТФ. Концентрация АДФ при этом увеличивается; в результате со-
здаются условия для ускорения дыхания, что и ведет к восполнению запасов
АТФ. Таким образом, повышение концентрации АДФ стимулирует работу
ЦПЭ, а увеличение содержания АТФ ее снижает.
 Хемоосмотическая теория сопряжения окисления и фосфорилирования
предложена английским биохимиком П. Митчеллом в 1961 г.
Значительный вклад был внесен В.П.Скулачевым и соавторами.
Согласно этой теории, фактором, сопрягающим окисление и фосфорилирова-
ние, является электрохимический протонный потенциал ΔµH+, возникающий
на мембране митохондрий при прохождении электронов по ЦПЭ.
Он состоит из двух слагаемых:
ΔµH+ = ΔpH + ΔΨ, где
+
ΔрН - разность концентраций Н на внутренней мембране митохондрий,
ΔΨ - разность электрических потенциалов.
ΔµH+ используется:
на 40-45% для фосфорилирования;
на 25% для транспорта веществ через мембрану
на 30-35% для теплопродукции.
В основе хемоосмотической теории П.Митчелла лежит главенствующая
роль электрохимического градиента ионов Н+ (протонного потенциала), состо-
ящего из двух компонентов.
Созданный в ЭТЦ электрохимический потенциал используется на: 40-45%
для фосфорилирования; на 25% для транспорта веществ через мембрану и на
30-35% для теплопродукции.
Ранее мы указывали, что комплексы I, III и IV цепи переноса электронов
тратят энергию окислительно-восстановительных реакций на выброс протонов
через мембрану, т.е. работают как протонные помпы. Создается разность кон-
центраций Н+ на сторонах митохондриальной мембраны: более высокая кон-
центрация снаружи и более низкая - внутри. Возникающий градиент концен-
трации Н+ и одновременно разность электрохимических потенциалов стимули-
рует протоны двигаться в обратном направлении, но по определенным участ-
кам - протонным каналам. Обратный перенос протонов в матрикс является эн-
дергоническим процессом, высвобождающаяся при этом энергия используется
на фосфорилирование АДФ. Катализирует процесс фермент АТФ-синтаза.

7.5. Разобщители окислительного фосфорилирования и ингибиторы

ЦПЭ
Существование сопряжения работы ЦПЭ с процессом синтеза АТФ было
сделано экспериментально. Опыты показали, что можно ингибировать образо-
вание АТФ, не нарушая процесса транспорта электронов, причем это обратимо.
Это достигалось особыми веществами - разобщителями.
 Разобщители снижают величину электрохимического градиента,
увеличивают скорость движения e- по ЦПЭ, снижают синтез АТФ и уско-
ряют катаболизм.
Два принципиальных способа уменьшить электрохимический гради-
ент – нивелировать разность зарядов или разность концентрации H+.

Ионофоры (от ионы и греч. phoros - несущий) – органические веще-

ства, осуществляющие перенос ионов (как катионов, так и анионов) че-
рез биологические мембраны.
Протонофоры – вещества, переносящие ионы водорода. При этом
уменьшаются оба компонента электрохимического градиента.

Классическим протонофором является динитрофенол (рис. 6.7), жирорас-

творимое соединение, присоединяющие ионы водорода на внешней поверхно-
сти внутренней митохондриальной мембраны (внизу) и переносящее их на
внутреннюю поверхность.

Рис. 7.8 - Механизм разобщения дыхания и фосфорилирования.

2,4-динитрофенол переносит H+ через внутреннюю мембрану митохондрий
и препятствует образованию протонного градиента

Таким образом, 2,4-динитрофенол выравнивает концентрацию протонов по

обе стороны мембраны митохондрий, в результате существенно снижает элек-
трохимический потенциал и скорость синтеза АTФ, хотя окисление субстратов
при этом происходит.
Энергия дыхательной цепи в основном рассеивается в виде теплоты. Этим
объясняется пирогенное действие разобщителей. Разобщающим действием об-
ладают некоторые антибиотики, такие, как валиномицин и грамицидин. Это
липофильные антибиотики, нарушающие окислительное фосфорилирование в
митохондриях путем циклического переноса других ионов - К+, Rb+, Cs+, но с
тем же эффектом.
Аналогичным действием обладают жирные кислоты (рис. 7.9).
 Рис. 7.9. - Механизм разобщающего действия жирных кислот (ЖК):
1- выкачивание протонов дыхательной цепью; 2 - протонирование аниона
ЖК; 3 - диффузия протонированной ЖК к внутренней поверхности
мембраны; 4 - диссоциация ЖК с образованием RCOO- и Н+; 5 – пере-
нос аниона ЖК посредством АТФ/АДФ-антипортера наружу

Ингибиторы ЦПЭ подавляют активность ферментных комплексов (I, II,

III и IV), вызывают замедление или полное прекращение работы ЦПЭ, в ре-
зультате происходит замедление или полное прекращение синтеза АТФ.
Ингибиторы, блокирующие дыхательную цепь, действуют в определенных
местах, препятствуя работе дыхательных ферментов. Места действия ингиби-
торов ЦПЭ: I – амитал, ротенон, прогестерон, барбитураты; II – малоновая кис-
лота; III – антибиотик антимицин А; IV – цианиды CN-, угарный газ СО, серо-
водород H2S.
В результате их действия дыхание снижается и человек впадает в сон (бар-
битураты), либо дыхание прекращается совсем (цианиды, CO) и человек умира-
ет.

Заключение
1. Биологическое окисление органических веществ в живых организмах
происходит как последовательность целого ряда окислительно-
восстановительных реакций.
2. Эти реакции при помощи биологических переносчиков электронов осу-
ществляется в цепи переноса электронов (дыхательной цепи).
3. С реакциями биологического окисления сопряжен процесс синтеза АТФ
из АДФ и фосфата. Совместный процесс, окислительное фосфорилирование,
позволяет запасать живым организмам энергию.
4. Механизм сопряжения и регуляции объясняется с позиций хемоосмоти-
ческой теории.
5. Существуют вещества, способные тормозить процессы окислительного
фосфорилирования (ингибиторы) или обратимо снизить его эффективность
(разобщители).