КЛЕТОЧНОЕ ЯДРО

1. Общая характеристика ядра (размеры, форма, локализация).

2. Строение и функции ядра. Специфические ядерные белки.
3. Ядерная оболочка. Молекулярная организация ядерного комплекса.
Транспорт веществ в ядро и из ядра.
4. Ядерный матрикс: молекулярная организация и функции.
5. Ядрышко и его роль в биогенезе рибосом.
6. Хроматин: молекулярная организация. Эухроматин и гетерохроматин.
7. Уровни упаковки ДНК в хромосомы.
8. Элементы метафазной хромосомы.

1. Общая характеристика ядра (размеры, форма, локализация)

Ядро – это клеточный органоид, который есть во всех эукариотических

клетках, за исключением зрелых эритроцитов. Обычно ядро располагается в
центре клетки или несколько смещено; оно имеет округлую или овальную форму
(рис.1).

Рис. 1. Локализация ядра в клетке

 Большинство клеток имеют одно ядро, но есть клетки с двумя и более
ядрами. Примерами многоядерных клеток могут служить миофибриллы
поперечнополосатых мышц, образующихся путем слияния одноядерных
миобластов. Многоядерными становятся клетки остеокласты, которые
разрушают излишнее костное вещество. Размеры ядра варьируют от 5 до 10
мкм. Обычно ядро занимает до 10 % цитоплазмы. Важным показателем
функциональности клетки является ее ядерно-плазменное отношение, которые
выше в молодых и активных клетках.

Ядро – это центр управления, координации и контроля жизнедеятельности

эукариотической клетки. В качестве информационного центра ядро координирует
все жизненно важные процессы посредством контроля белкового синтеза
клеточных ферментов, а структурную организацию клетки – посредством синтеза
структурных белков. В информационном потоке существуют три ключевые
точки: репликация ДНК, транскрипция и трансляция генетической информации.
Репликация и транскрипция протекают в ядре, в то время как трансляция – в
цитоплазме.
Таким образом, записанная в ДНК генетическая информация реализуется в
процессе синтеза белков. Кроме того, она передается дочерним клеткам в
процессе деления.

2. Строение и функции ядра. Специфические ядерные белки.

Основными элементами ядра являются:

- ядерная оболочка,
- ядерный белковый матрикс,
- ядрышко,
- хроматин,
- нуклеоплазма.

Рис. 2. Структура ядра

Функции ядра:
- хранение и защита генетической информации (около 98% клеточной ДНК),
- реализация генетической информации,
- контроль и регуляция клеточной активности,
- точное распределение генетической информации в дочерние клетки.

Специфические ядерные белки:

1) Белки ядерной оболочки:
- нуклеопорины: образуют ядерные поры,
- транспортины: обеспечивают транспорт веществ из цитоплазмы в ядро
(импортины), и из ядра в цитоплазму (экспортины);
2) Белки ядерного матрикса:
- матрины: основные структурные нерастворимые белки,
- SAP (Scaffold Associated Proteins): обеспечивают упаковку ДНК в
хромосомы,
- нуклеоплазмины: регулируют метаболизм и конфигурацию других белков;
- ламины: фибриллярные белки, обеспечивающие структурные функции и
регуляцию транскрипции в ядре клетки;
3) Гистоны (H1, H2A, H2B, H3, H5): белки, обладающие основными
свойствами и обеспечивающие упаковку ДНК в хромосомы и
неспецифическую регуляцию активности генов;
4) Негистоны:
- HMG (High Mobility Group): фракция небольших негистоновых ядерных
белков, обладающих высокой ДНК-связывающей активностью;
- ферменты репликации, репарации, транскрипции и процессинга мРНК,
- сайт-специфические белки : узнают специфические участки в ДНК и
выполняют разнообразные функции (сворачивание молекулы ДНК,
инициация репликации, контроль транскрипции генов); к ним относятся
«Helix-Turn-Helix» и «Zink finger» белки.

3. Ядерная оболочка. Молекулярная организация ядерного комплекса.

Транспорт веществ в ядро и из ядра.

Внутреннее содержимое ядра отделено от цитоплазмы ядерной оболочкой,

которая состоит из двух мембран и перинуклеарного пространства между ними.
Наружная ядерная мембрана непосредственно связана с гранулярной ЭПС, плавно
переходя в нее, и нередко покрыта рибосомами. Внутренняя мембрана не
содержит рибосом и контактирует с ядерным матриксом; в местах образования
ядерных пор она переходит в наружную мембрану. Пространство между
наружной и внутренней мембранами называется перинуклеарным пространством,
имеет толщину 20-40 нм и сообщается с канальцами ЭПС. Ядерные поры
занимают около 10% всей поверхности ядерной оболочки.

К внутренней мембране прилегает густая сеть белковых фибрилл, которая

называется ядерная ламина. Она состоит из белков ламинов (А, В и С) и
выполняет ряд важных функций:

- поддерживает целостность и форму ядра;

- участвует в дезинтеграции и реорганизации ядерной оболочки в процессе
деления клетки;
- обеспечивает фиксацию хроматиновых нитей в интерфазе;
- обеспечивает работу порового комплекса.

Поровый комплекс ядра

Особенностью ядерной оболочки является наличие пор, количество которых в

среднем около 3000, но зависит от типа и возраста клетки. Количество пор в
ядерной оболочке тем больше, чем интенсивней происходят в клетке процессы
жизнедеятельности. Поры окружены большими кольцевыми структурами,
называемыми поровыми комплексами. В его состав входят 3 кольца белковых
гранул, в каждом из которых 8 глобулярных белков. В центре – канал,
работающий по принципу диафрагмы. Ядерная пора взаимодействует с ядерным
матриксом посредством нитей диаметром 4-8 нм, которые прикреплены одним
концом к центральному кольцу (рис 3).
 Основной функцией пор является транспорт веществ в ядро и из ядра. Из
цитоплазмы в ядро импортируются белки ядерного матрикса, ферменты синтеза
нуклеиновых кислот, негистоновые белки, рибосомальные белки. Для
прохождения через поры в ядро белки имеют специальные сигнальные участки.

Из ядра в цитоплазму экспортируются предшественники рибосом, молекулы РНК

(мРНК, тРНК). Молекулы РНК переносятся в форме комплексов с белками.
Сигнальные участки могут быть как в РНК, так и в белках. Данный транспорт
является активным и требует затрат энергии. Малая ядерная РНК выходит из
ядра в цитоплазму, где она связывается со специальными белками, образуя
сплайсосомы, которые возвращаются в ядро и участвуют в вырезании интронов
из незрелой мРНК.

Ядерная ламина
Ядерная ламина выстилает внутреннюю ядерную мембрану со стороны
цитоплазмы. Она состоит из фибриллярной сети белковой природы и образована
проежуточными филаментами. Ядерная ламина взаимодействует со структурами
ядерного матрикса, а также с фибриллярными компонентами порового комплекса.
Внутренняя ламина вместе с поровым комплексом составляет часть ядерного
скелета, названного ламино-поровым комплексом. Ядерный скелет комплекса
ламино-пора содержит 2-3% от общего количества белков ядра. Состоит в
основном из негистоновых белков (95%), среди которых преобладают кислые
белки. На внутренней поверхности комплекса ламино-пора локализуется
нуклеозид-3-фосфатаза, предположительно принимающая участие в транспорте
РНК к цитоплазме.
 Ламина сформирована последовательностью одинаково ориентированных
белков промежуточных филаментов, называемых ламинами. В клетках человека
она формируется в основном из ламина А , ламина В и ламина С. Ламин А есть в
дифференцированных тканях и некоторых стволовых клетках. Ламин В имеется в
каждой клетке, а ламин С – только в некоторых тканях.

Ядерная ламина выполняет следующие функции:

• поддерживает целостность и форму ядра,
• отвечает за дезинтеграцию и реорганизацию ядерной оболочки в процессе
митоза,
• обеспечивает фиксацию хроматиновых нитей в интерфазе,
• обеспечивает положение ядерных пор и работу порового комплекса.
 4. Ядерный матрикс: молекулярная организация и функции

Понятие ядерного матрикса было предложено в 1975 году на основании

экспериментов, которые показали, что после специфической обработки ядра в
нем остается сеть нерастворимых белков. Предполагают, что это белковый скелет,
сходный с цитоскелетом клетки.

Ядерный матрикс состоит из двух частей:

1) лабильная фракция, состоящая из растворимых белков с низкой

молекулярной массой, неорганических веществ и воды;
2) собственно ядерный матрикс, представленный белковой сетью,
состоящей из нерастворимых стабильных белков с высоким
молекулярным весом – негистонов, ферментов, нуклеоплазминов.

Негистоновые белки – это семейство гетерогенных белков, разных как по

молекулярной массе, так и по химическим особенностям. В отличие от гистонов,
основная часть этих белков богата триптофаном; обладает способностью
видоизменяться в широких пределах, быстро переходя из одного
функционального состояния в другое. Ядерные ферменты катализируют, главным
образом, синтез ДНК, РНК и процессинг.

Функции ядерного матрикса:

- обеспечивает форму, внутреннюю организацию и стабильность

интерфазного ядра;
- участвует в упаковке хроматина;
- обеспечивает процессы репликации и транскрипции.

Ядерный матрикс может изменить текучесть ядерной мембраны, которая

необходима для выполнения основных функций матрикса и в особенности
транспорта субъединиц рибосом через поровый комплекс. Ядерный матрикс
может модифицировать структуру хроматина, что имеет большое значение в
репликации ДНК и транскрипции РНК (активации и инактивации генов). В
процессе митоза 95% белков ядерного матрикса распределяется в цитоплазме. Во
вновь образующемся ядре после деления, в сборке этих белков большое значение
имеют процессы гликозилирования. В ядрышке скелет выполняет опорную
функцию при депонировании субъединиц рибосом.
 5. Ядрышко и его роль в биогенезе рибосом

Ядрышко присутствует во всех эукариотических клетках за исключением

бластомеров, не имеющих собственного белкового синтеза (рис.4). В ядре может
содержаться как одно, так и несколько ядрышек. Оно состоит из следующих
основных компонентов: ДНК – 3%, РНК – 7%, белки – 90%.

Ядрышко не отделено от остальной части ядра какой-либо мембраной.

Ядрышки занимают около 30% от общего объема ядра. Существует соотношение
между объемом ядра и ядрышка – ядерно-ядрышковый объем. Чем активнее
клетка, тем больше это соотношение.
В электронном микроскопе в ядрышке можно различить 3 компонента:
- гранулярный компонент, в состав которого входят частицы диаметром 15-20
нм, представляющие собой предшественники рибосом;
- плотный фибриллярный компонент, состоящий из множества тонких (5 нм)
фибрилл, представляющих собой ДНК и РНК–транскрипты;
- аморфный компонент - на периферии ядрышка.
Таким образом, ядрышко – это не отдельная от хроматина структура, а его
производная. В составе ядрышка выявляются большие петли ДНК, содержащие
гены рРНК. Эти петли носят название ядрышковые организаторы и у человека
представлены фрагментами 5 пар хромосом (13, 14, 15, 21, 22 пары), которые
контролируют образование ядрышка в конце митоза.
Основная роль ядрышка – синтез рибосомной РНК и образование
предшественников рибосом.
 Биогенез рибосом: в ядрышке происходит синтез трех фракций
рибосомной РНК (5,8S, 18S, 28S) и образование предшественников рибосом. С
ДНК синтезируется первичный транскрипт – рРНК 45S, который специфически
расщепляется на три фракции (5,8S, 18S, 28S). Фракция рРНК 5S синтезируется
вне ядрышка. При образовании субъединиц рибосомы, молекулы рРНК
ассоциируются с рибосомными белками, которые были синтезированы в
цитоплазме и импортированы в ядро. Рибонуклеопротеидные комплексы (РНП)
транспортируются в цитоплазму в форме малой и большой субъединиц рибосомы
(40S и 60S).

6. Хроматин: молекулярная организация. Эухроматин и гетерохроматин.

Хроматином называют нуклеопротеиновые структуры, локализованные в

ядре и представляющие собой деспирализованную форму хромосом в интерфазе.

Хроматин состоит из ДНК (40%), гистоновых белков (40%), негистоновых

белков (15%) и РНК (5%).

ДНК (40%) – в 46 хромосомах диплоидного набора клеток человека

содержатся 46 линейных молекул ДНК длиной в 7х109 нуклеотидных пар;
Гистоновые белки (40%) - основные (щелочные) белки, содержат свыше
22% основных аминокислот, преимущественно аргинин и лизин. Существуют
пять фракций гистонов: Н1, Н2А, Н2В, Н3, Н4 (табл.1). Гистоновые белки не
имеют тканеспецифичного характера.

Таблица 1. Характеристика гистоновых белков

Тип
Преобладающие Число Молекулярная
гистон
аминокислоты аминокислот масса
а
Н1 Лизин 215 21500
Н2А Лейцин, лизин 129 144000
Серин, пролин,
Н2В 125 13775
лизин
Н3 Аргинин, цистеин 135 15320
Н4 Аргинин, лизин 102 11280

Гистоновые белки стабилизируют двойную спираль ДНК, образуя

третичную структуру ДНК у эукариот. Гистоновые белки являются
неспецифическими ингибиторами транскрипции, препятствуя связыванию РНК-
полимеразы с молекулой ДНК.
 Негистоновые белки – кислые белки (20%) с большим содержанием
кислых аминокислот (глутаминовая, аспарагиновая). Они гетерогенны, имеют
высокую мобильность, выполняют каталитические функции в метаболизме ДНК и
экспрессии генов (полимеразы, лигазы, топоизомеразы, факторы транскрипции и
др.). К ним относятся также сайт-специфические белки (SAP, zinc-finger) и белки
хромосомной оси. Негистоновые белки содержатся в большем количестве в
активных тканях, в то время как гистоновые присутствуют в одинаковых
количествах во всех тканях.
РНК содержится в хроматине, являясь продуктом транскрипции с ДНК, в
особенности первичные транскрипты и мяРНК (например, РНК в составе
праймазы, теломеразы и др.)

В хроматине выделяют два типа участков (эухроматин и гетерохроматин),

которые отличаются по: степени окраски, степени спирализации и конденсации,
последовательностям ДНК, времени репликации и генетической активности.
Эухроматин представляет собой слабо окрашенные участки хроматина,
содержащие структурные гены, и представленные активными участками ДНК,
которые транскрибируются. Эухроматин слабо спирализован и реплицируется в
начале S-фазы клеточного цикла.
Гетерохроматин представляет фрагменты конденсированной формы
хроматина, который транскрипционно не активен. Высококонденсированный
хроматин реплицируется в конце S-фазы клеточного цикла. Различают
конститутивный и факультативный гетерохроматин. Конститутивный
гетерохроматин содержит повторяющиеся последовательности ДНК (или
сателлитную ДНК) и локализуется на идентичных участках гомологичных
хромосом. Конститутивный гетерохроматин никогда не переходит в эухроматин.
Факультативный гетерохроматин представлен последовательностями, которые в
определенных условиях могут деспирализоваться и превращаться в эухроматин.

7. Уровни упаковки ДНК в хромосомы

Упаковка ДНК в хромосому предполагает существование нескольких уровней

организации или конденсации, каждый из которых отвечает за определенную
степень укорачивания ДНК. Уровни упаковки ДНК отличаются по: степени
конденсации ДНК, толщине хроматиновой нити, механизму образования, уровню
транскрипционной активности и периоду клеточного цикла, когда они
представлены.
 Первый уровень – нуклеосомный. Это результат взаимодействия ДНК с
гистонами с образованием хроматиновой (нуклеосомной) нити диаметром около
11 nm (рис.5).

Рис. 5. Строение нуклеосомы

Каждая нуклеосома содержит набор из 8 молекул гистонов – по 2 молекулы

Н2А, Н2В, Н3, Н4. Этот гистоновый октамер является по сути белковой
сердцевиной нуклеосомы (core), на который накручивается примерно 2 витка
молекулы ДНК, длиной в 146 пар оснований. Каждая нуклеосома отделена от
следующей линкерной последовательностью ДНК, длиной 8-114 пар
оснований. Благодаря наличию нуклеосом ДНК укорачивается примерно в 6 раз, а
хроматин напоминает нитки бус. На этом уровне возможна транскрипция.
Второй уровень – соленоид – представляет нить хроматина диаметром 30
нм, в которой нуклеосомы сближаются
друг с другом, образуя суперспираль.
При этом ДНК укорачивается в 40-60
раз (рис.6). Соленоид представляет
собой правозакрученную спираль,
которая содержит по 6 нуклеосом в
каждом витке (рис.6. В, С).
Переход хроматина с I на II
уровень и обратно определяется
химическими превращениями гистона
Н1. Фосфорилирование гистона Н1
вызывает суперспирализацию ДНП, а
дефосфорилирование гистона Н1 –

Рис. 6. Второй уровень упаковки ДНК

деспирализацию соленоида (рис.6 А). Этот механизм важен в регуляции
экспрессии генов. Гистон Н1 связан как с нуклеосомной сердцевиной, так и с
линкерной ДНК, являясь, таким образом стабилизирующим фактором для
нуклеосом. На этом уровне происходит блокирование транскрипции ДНК.
Третий уровень – петли (300-700 нм) – образуется и поддерживается при
помощи ДНК- связывающих белков (SAR-белки – Scaffold Associated Regions),
которые узнают определенные нуклеотидные последовательности двух отдельных
участков хроматиновой фибриллы (рис.7). SAR–белки образуют хромосомную
ось, к которой прикрепляются петли. Следует отметить, что длина петель
неодинакова и предполагают, что она связана с функциональными особенностями
различных участков хроматина. Транскрипция ДНК на этом уровне
заблокирована.

Рис. 7. Присоединение петель к

белкам хромосомной оси (Scaffold)

Четвертый уровень представляет собой наивысший уровень упаковки

ДНК с образованием метафазной хромосомы из двух хроматид. Каждая
хроматида имеет толщину от 700 до 900 нм. Таким образром, молекула ДНК в
хромосоме укорачивается в 10000 раз. Благодаря свойству хроматина
упаковываться, в ядре клетки человека, имеющем диаметр около 4 мкм,
помещается 46 молекул ДНК общей длиной около 2 м. Механизм упаковки на
этом уровне заключается в полном фосфолирилировании белка Н1, а также в
фосфорилировании ламины и диссоциации ядерной оболочки. Транскрипция на
этом уровне безусловно невозможна.
Исследованиями последних лет показана роль химических изменений
гистонов в упаковки ДНК в хромосомы и регуляции активности генов:

• Метилирование H3 (Lys4) – активная экспрессия гена,

• Метилирование H3 (Lys9) – атенуация (ослабление) транскрипции,

• Ацетилирование гистонов – расплетание хроматина, транскрипция,

 • Дезацетилирование гистонов – упаковка хроматина, инактивация
транскрипции,

• Фосфорилирование H1 – сверхконденсация ДНК,

• Дефосфорилирование H1 – деконденсация хроматина.

8. Элементы метафазной хромосомы

Метафазная хромосома состоит из двух идентичных сестринских хроматид,

соединенных центромерой на уровне первичной перетяжки (рис.8).
Центромера состоит их конститутивного
гетерохроматина и представляет собой точку
соединения сестринских хроматид при участии
белков коэзинов и сборки кинетохор.
Центромера разделяет хромосому на два плеча:
проксимальное плечо (р) – короткое и
дистальное плечо (q) – длинное. Центромерная
область хромосомы состоит из ДНК и
специальных белков. Центромерная ДНК
содержит тандемно повторяющиеся
последовательности, богатые А/Т парами.
Функции центромеры:
- Объединение двух хроматид до анафазы
митоза;
Рис. 8. Строение метафазной хромосомы
- Место образования кинетохор;
- Распознавание гомологичных хромосом в
мейозе;
- Взаимодействие с микротрубочками веретена деления.

Теломеры (от греч. телос – конец и мерос –

часть) представляют собой комплексы ДНК и
специализированных белков, которые
формируют концы хромосом у эукариот. О
Рис.9. Строение теломеры существовании специальных структур на концах
хромосом сообщили в 1938 году генетики, лауреаты Нобелевской премии Барбара
Мак-Клинток и Герман Мёллер. Независимо друг от друга они обнаружили, что
фрагментация хромосом (под действием рентгеновского облучения) и появление
у них дополнительных концов ведут к хромосомным перестройкам и деградации
хромосом. В сохранности оставались лишь области хромосом, прилегающие к их
естественным концам. Следовательно, заключили они, естественные концы
линейных хромосом защищены специальными структурами. В 1932 Г. Мёллер
предложил называть их теломерами (от греч. телос - конец и мерос - часть).
Хромосома имееет две теломеры. У человека теломеры содержат многократно
повторяющиеся последовательности –GGGTTA-, которые образуют петлю
посредством некомплементарных, неспецифических водородных связей (рис.9).

Функции теломерных участков

Теломеры выполняют три существенные функции. Во-первых, они

обеспечивают включение самых дистальных концов хромосом в репликацию
ДНК. Во-вторых, теломеры защищают концы хромосом эукариот от деградации и
расщепления экзонуклеазами, а также подавляют слияние с другими
хромосомами. У прокариот молекулы ДНК имеют кольцевую форму, что
препятствует их расщеплению. В-третьих, у многих организмов теломеры
облегчают коньюгацию и правильную рекомбинацию хромосом в мейозе.

Кроме того, было показано, что теломеры ответственны за прикрепление

хромосом к ядерному матриксу. Таким образом, они играют важную роль в
создании специфической архитектуры и внутренней упорядоченности клеточного
ядра.