30.10.

2015_вариант 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Левофлоксацин ФС
Левофлоксацин
Levofloxacinum Вводится впервые

(3S)-3-Метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-
пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота гемигидрат
O
F COOH

1/ H2O
2
N N
N O
H3C CH3

C18H20FN3O4 · 1/2 H2O М.м. 370,39

Cодержит не менее 98,0 % и не более 102,0 % левофлоксацина в пересчете

на безводное вещество.

Описание. Светло-жёлтый кристаллический порошок.

Растворимость. Умеренно растворим в воде, растворим в уксусной
кислоте, мало растворим в спирте 96%.
Подлинность. 1. ИК-спектр. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в
диске с калия бромидом, в области частот от 4000 до 400 см -1 по положению
полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца
левофлоксацина.
 2. ВЭЖХ. Основной пик на хроматограмме испытуемого раствора должен
соответствовать по времени удерживания основному пику на хроматограмме
раствора стандартного образца (см. «Количественное определение»).
*Прозрачность. Раствор 0,5 г субстанции в 100 мл воды должен быть
прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей»).
*Цветность. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора»,
должен выдерживать сравнение с эталоном Y5 или GY5. (ОФС «Степень окраски
жидкостей»).
Удельное вращение. От – 92 до – 106º в пересчёте на безводное вещество
(0,5 % раствор субстанции в метаноле, ОФС «Поляриметрия»).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.
Растворы левофлоксацина защищают от света и используют
свежеприготовленными.
Метод 1.
Буферный раствор. 8,5 г аммония ацетата, 1,25 г меди(II) сульфата и 1,3 г
L-изолейцина растворяют в воде и доводят объём раствора водой до 1000 мл.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол – Буферный раствор (30:70).
Испытуемый раствор. Около 50 мг (точная навеска) субстанции
растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до 50,0 мл.
Раствор сравнения А. Около 50 мг (точная навеска) стандартного образца
левофлоксацина растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до 50,0 мл.
Раствор сравнения Б. 1,0 мл раствора сравнения А доводят ПФ до 50,0 мл.
1,5 мл полученного раствора доводят ПФ до 100,0 мл.
Условия хроматографирования
Колонка 0,46 × 25 см октадецилсилил силикагель, 5,0
мкм
Температура колонки 45 оС
Скорость потока 0,8 мл/мин
Детектор спектрофотометрический, 360 нм
Объём вводимой пробы 25 мкл

2
Время хроматографирования 2-кратное от времени удерживания основного
пика

Хроматографируют испытуемый раствор и растворы сравнения А и Б.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора
сравнения А относительное стандартное отклонение площади пика
левофлоксацина не должно превышать 1,0% (6 определений). На хроматограмме
раствора сравнения Б отношение сигнал/шум (S/N) для пика левофлоксацина
должно быть не менее 10.
Относительные времена удерживания соединений. Левофлоксацин – 1;
Примесь A – 0,47; Примесь B – 0,52 (фактор отклика 0,9); Примесь C – 0,63
(фактор отклика 1,1); Примесь D – 0,73; Примесь E – 1,23.
Примечание:

Примесь A: (3S)-3-Метил-7-оксо-10-(пиперазин-1-ил)-9-фтор-2,3-дигидро-7H-
пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота

Примесь B: (3S)-3-Метил-10-{[2-(метиламино)этил]амино}-7-оксо-9-фтор-2,3-
дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота

Примесь C: 4-{(3S)-6-Карбокси-3-метил-7-оксо-9-фтор-2,3-дигидро-7H-
пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-10-ил}-1-метилпиперазин-1-оксид

Примесь D: (3S)-3-Метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7H-
пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота

Примесь E: (3R)-3-Метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-9-фтор-2,3-
дигидро-7H-пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота

Расчёт результатов. Содержание каждой примеси ( X ¿ в левофлоксацине

в процентах рассчитывают по формуле:
Sприм
X= ∙100 %
S ст ∙ F
где
Sприм – площадь пика примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

Sст– площадь пика левофлоксацина на хроматограмме испытуемого раствора;

3
F – фактор отклика (если указан).

Допустимое содержание примесей

- Примесь A – не более 0,2%;

- Примесь B – не более 0,3%;

- Примесь C – не более 0,3%;

- Примесь D – не более 0,3%;

- Примесь E – не более 0,8%;

- любая другая примесь – не более 0,1%;

- суммарное содержание примесей – не более 0,5%, не считая примесь Е.

Метод 2.
Буферный раствор. 3,08 г аммония ацетата и 8,43 г натрия перхлората
растворяют в воде, доводят рН раствора до 2,2 ± 0,1 фосфорной кислотой и
разбавляют водой до 1000 мл.
Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил – Буферный раствор (16:84 о/о).
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил – Метанол – Буферный раствор
(30:20:50 о/о/о).
Испытуемый раствор. Около 40 мг (точная навеска) субстанции
растворяют в 8 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до 100,0 мл.
При необходимости используют ультразвуковую баню.
Стандартный раствор субстанции 1. Около 40 мг (точная навеска)
стандартного образца левофлоксацина растворяют в 8 мл ацетонитрила и
доводят объем раствора водой до 100,0 мл (0,4 мг/мл). При необходимости
используют ультразвуковую баню.
Стандартный раствор субстанции 2. 1,0 мл стандартного раствора
субстанции 1 разбавляют смесью ацетонитрил-вода (1:10) и доводят этим же
растворителем до 20,0 мл (20 мкг/мл).

4
 Стандартный раствор примеси А. 5,0 мг стандартного образца примеси А
левофлоксацина растворяют в 0,2% растворе аммония гидроксида в метаноле и
доводят объём этим же растворителем до 100,0 мл (50 мкг/мл).
Стандартный раствор примеси F. 10,0 мг стандартного образца примеси
F левофлоксацина ((3S)-3-Метил-7-оксо-9,10-дифтор-2,3-дигидро-7H-
пиридо[1,2,3-de][1,4]бензоксазин-6-карбоновая кислота) растворяют в метаноле,
используя при необходимости ультразвуковую баню; доводят метанолом до 50,0
мл (0,2 мг/мл). 10,0 мл полученного раствора доводят метанолом до 50,0 мл
(40 мкг/мл).
Раствор сравнения А. К 1,0 мл стандартного раствора субстанции 2
прибавляют 1,0 мл стандартного раствора примеси F и доводят объём раствора
смесью ацетонитрил-вода (1:10) до 50 мл (0,4 мкг/мл левофлоксацина и 0,8
мкг/мл примеси F).
Раствор сравнения Б. К 5,0 мл стандартного раствора субстанции 1
прибавляют 2,0 мл стандартного раствора примеси А и доводят объём раствора
водой до 20,0 мл (100 мкг/мл левофлоксацина и 5 мкг/мл примеси А).

Условия хроматографирования
Колонка 0,4 × 15 см, октадецилсилил силикагель,
5,0 мкм
Температура колонки 38 оС
Скорость потока 1,0 мл/мин
Детектор спектрофотометрический, 280 нм
Объём вводимой пробы 10 мкл

Градиентное элюирование
Время, мин ПФА, % ПФБ, %
0 100 0
5 100 0
10 82 18
15 40 60
30 40 60

5
 30,1 100 0
38 100 0

Хроматографируют испытуемый раствор и растворы сравнения А и Б.

Идентификация примесей. Хроматограмма раствора сравнения Б
используется для идентификации пика примеси А, хроматограмма раствора
сравнения А используется для идентификации пика примеси F.
Относительные времена удерживания соединений. Левофлоксацин – 1;
примесь А – около 0,9; примесь F – около 2,9.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора
сравнения Б относительное стандартное отклонение площади пика
левофлоксацина не должно превышать 2,0% (6 определений).
Расчёт результатов. Содержание примеси F в левофлоксацине
рассчитывают по формуле:

Sисп ∙ aср
X= ∙ 100 %
S ср ∙a исп ∙ 125
где
Sисп – площадь пика примеси F на хроматограмме испытуемого раствора;

Sср – площадь пика примеси F на хроматограмме раствора сравнения А;

a ср – навеска стандартного образца примеси F, мг;

a исп – навеска субстанции левофлоксацина, мг.

Содержание других примесей рассчитывают по формуле:

Sисп ∙ aср
X= ∙ 100 %
S ср ∙a исп ∙ 1000
где
Sисп – площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

Sср – прощадь пика левофлоксацина на хроматограмме раствора сравнения А;

a ср – навеска стандартного образца левофлоксацина, мг;

a исп – навеска субстанции левофлоксацина, мг.

6
 Допустимое содержание примесей
- Примесь А – не более 0,2 %;
- примесь F – не более 0,13 %;
- любая другая примесь – не более 0,1 %;
- суммарное содержание примесей – не более 0,5 % .
Вода. От 2,0 % до 3,0 % (ОФС «Определение воды»).
Сульфатная зола. Не более 0,2 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для
определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.
Тяжёлые металлы. Не более 0,002 %. Определение проводят в
соответствии с требованиями ОФС «Тяжёлые металлы» в зольном остатке,
полученном после сжигания 0,5 г субстанции (ОФС «Сульфатная зола»).
Остаточные органические растворители. В соответствии с
требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».
*Бактериальные эндотоксины. Не более 0,5 ЕЭ на 1 мг левофлоксацина
(ОФС «Бактериальные эндотоксины»).
*Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксична (ОФС
«Аномальная токсичность»). Тест-доза – 2,5 мг субстанции в 0,5 мл воды для
инъекций на мышь, вводят внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.
Примечание: Испытания проводят для субстанций, предназначенных для
производства стерильных лекарственных форм.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС

«Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ.
Буферный раствор. 8,5 г аммония ацетата, 1,25 г меди(II) сульфата и 1,3 г
L-изолейцина растворяют в воде и доводят водой до 1000 мл.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол – Буферный раствор (3:7).
Испытуемый раствор. Около 50 мг (точная навеска) субстанции
растворяют в ПФ и доводят объем ПФ до 50,0 мл.

7
 Стандартный раствор. Около 50 мг (точная навеска) стандартного
образца левофлоксацина растворяют в ПФ и доводят объем ПФ до 50,0 мл.

Условия хроматографирования
Колонка 0,46 × 25 см октадецилсилил силикагель, 5 мкм
Температура колонки 45 оС
Скорость потока 0,8 мл/мин
Детектор спектрофотометрический, λ 360 нм
Объём вводимой пробы 25 мкл

Пригодность хроматографической системы. На хроматограммах

стандартного раствора
- фактор ассиметрии должен быть от 0,5 до 1,5;
- относительное стандартное отклонение площади пика левофлоксацина не
должно превышать 1,0 % (6 определений).
1
Содержание левофлоксацина C18H20FN3O4 · /2 H2O в субстанции в
процентах ( X ¿ вычисляют по формуле:

S исп ∙ aср
X= ∙100 %
S ср ∙a исп
Где
Sисп – площадь пика левофлоксацина на хроматограмме испытуемого раствора;

Sср – прощадь пика левофлоксацина на хроматограмме стандартного раствора;

a ср – навеска стандартного образца левофлоксацина, мг;

a исп – навеска субстанции левофлоксацина, мг.

Хранение. В защищённом от света месте при температуре не выше 25 оС.

*Контроль по показателям качества «Прозрачность», «Цветность»,

«Бактериальные эндотоксины», «Пирогенность» и «Аномальная токсичность»

8
проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных
препаратов для парентерального применения.