ЛИПОПРОТЕИНЫ

И
АТЕРОСКЛЕРОЗ

А.Д. Денисенко

13 марта 2018г.
Ученый Совет факультета стоматологии и
медицинских технологий СПбГУ
 Свободный
Фосфолипид
Эфиры ХС
Белок

МОДЕЛЬ СТРОЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИНА

 Липопротеины плазмы крови
Плотность (г/мл)
0,95 ЛОНП ХМ

ЛПП
1,006 Ремнанты ХМ

ЛНП
1,019

ЛВП2
1,06
ЛВП3
Диаметр частиц (нм)
1,20
6-7 7 - 12 19 - 24 25 - 75 100 - 1100
 Схема образования ЛП
Цитоплазма АпоВ АпоВ

Т
Г

Протеаза
МТБ

Т
Г

ЛП

Просвет ЭР
 "Липолитический каскад"

ЛВП ЛВП ЛВП

ТГ ЛПЛ ТГ
ЭХС
ЛПЛ ТГ
ЛПЛ
ЭХ
С
ЛОНП ЛНП
Альбумин - ЖК Альбумин - ЖК
Альбумин - ЖК
Захват печенью ЛП, содержащих апо В-100 или апо В-48

ЛП ЛП
П П
В-48 В-
100
Синусои
д
SO4 ● Е
SO4 ● Е
ЛП
ЛН
П Пространс
SO4 ● Е П
Е В-48
Е
тво Диссе

ЛП SO4 ● Е ЛП
ЛП П П
ЛП П В-
SO4 ● ЛПЛ В-
П
В-48
Е В-48 100 SO4 ● ПТГЛ100 Альбумин - ЖК
Е Е
Е

Е- В,Е- Протеогли
Рецептор Рецептор кан Гепатоци
 Созревание Созревание ЛВП

ЛВП Насцентные ЛВП

ЛХАТ Превращение
ЛВП секретируются печенью и ХС в ЭХС
кишечником в дискоидальной
форме

ЛВП3
Получая ХС из тканей и
других липопротеинов и Дальнейшее
увеличение ЛП
эстерифицируя его с за счет
ЛХАТ
помощью ЛХАТ в ЭХС, поступление и
эстерификация
которые наполняют ядро ХС
частицы, ЛВП созревают в
сферическую форму ЛВП2
 Обратный транспорт холестерина
Периферическая клетка

ХС

ЛВП
ЛВП

ЭХТБ

ЭХС

ЛНП

ЛНП CP-B1

Гепатоцит
 Bile Acids
Желчные к-ты,ХС ЛНП
LDL
Пищевые жиры
Dietary fat Cholesterol
Рецептор
LDL-R

кишка
INTESTINE печень
LIVER EXTRA-HEPATIC
Периф. ткани
TISSUE

ЛОНП ЛПП
Ремнанты
VLDL IDL LDL
Хиломикроны
Chylomicrons ЛВП
HDL

ЛХАТ
LCAT
ЛПЛlipase
Lipoprotein ЛПЛlipase
Lipoprotein

Жирные
Free к-ты
fatty acids Жировая
adipose Жирные
Free к-ты
fatty acids Жировая
adipose
ткань
tissue tissueткань
Стенка артерий
 Этапы развития
атеросклероза
• I. Избыточное накопление липопротеинов в
интиме артерий.
• II. Формирование первичных
атеросклеротических поражений (липидных
пятен, полосок), представляющих собой
скопление нагруженных липидами клеток.
• III. Трансформация первичных практически
бессимптомных поражений в развитые
(бляшки, атеромы), приводящие к
выраженной клинической симптоматике.
 I. Избыточное накопление
липопротеинов в интиме
артерий.
• Дислипопротеинемия

• Очаговое увеличение проницаемости

эндотелия

• Задержка прохождения ЛНП через

интиму
Эндотелий на самых ранних стадиях развития
атеросклероза
Анализ неспецифического эндоцитоза показал, что объем
занимаемый везикулами в цитоплазме ЭК выше в
пораженных участках аорты по сравнению с этим
показателем в нормальных участках аорты (р < 0,01)
ВЕЗИКУЛЯРНЫЙ ТРАНСПОРТ ЛНП
ЧЕРЕЗ ЭНДОТЕЛИЙ
 Транспорт различных белков плазмы
через монослой эндотелия
Альбумин (3 нм) Апо А1 (6-12 нм) Апо В (20-25 нм) IgM (40 нм)
20,00
% транспортируемого белка

18,00
16,00
*
14,00
12,00
10,00
#
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
2 4 8 12 26
Время инкубации, ч
*Достоверность различий транспорта во времени при p<0,0001 (Friedman ANOVA test),
#Достоверность различий транспорта между отдельными белками при p<0,01
(Kruskal-Wallis ANOVA test).
 Регуляция транспорта липопротеинов в
сосудистую стенку
1. Трансэндотелиальный транспорт ЛНП
осуществляется, главным образом, клатрин-
опосредуемым трансцитозом.

2. СРБ, ФНО-альфа и иммунные комплексы

ЛП-антитело активируют
трансэндотелиальный транспорт ЛНП.

3. Адипонектин не влияет на транспорт

липопротеинов через эндотелий
 Трансэндотелиальный перенос белков:
влияние C-реактивного белка
Альбумин IgM

% транспортируемого белка
% транспортируемого белка

25,00 16,00
14,00
20,00
12,00
15,00 10,00
8,00
10,00 6,00
5,00 4,00
2,00
0,00 0,00
0 5 10 15 20 25 30 0 5 10 15 20 25 30
Время инкубации, ч Время инкубации, ч
Апо В

% транспортируемого белка
Апо А1 14,00
% транспортируемого белка

25,00 12,00
20,00 10,00
8,00
15,00
6,00
10,00 4,00
5,00 2,00
0,00
0,00 0 5 10 15 20 25 30
0 5 10 15 20 25 30 Время инкубации, ч
Время инкубации, ч
 Возможные причины активации
трансэндотелиального транспорта
липопротеинов
• Гемодинамические факторы (в том числе
гипертензия)
• Дислипопротеинемия
• Продукты перекисного окисления липидов
• Иммунные комплексы
• Курение (свободные радикалы, СО)
• Вазоактивные амины (гистамин, серотонин и
т.д.)
• Вирусы
• Цитокины (ФНО-альфа)
• Гипергомоцистеинемия
• Гипергликемия
• СРБ
 Однако
даже при наличии очаговой активации
эндотелиальных клеток атеросклероз
не развивается, если уровень ЛНП в
плазме ниже определенного порогового
уровня.
И, наоборот, при высоком
, уровне ЛНП
в крови атеросклеротические
поражения могут возникать и местах,
где отсутствует гемодинамическая
активации эндотелия.
 Причины задержки
липопротеинов в интиме

• Утолщение интимы

• Взаимодействие ЛНП с компонентами

межклеточного матрикса
а) гликозаминогликаны (ГАГ)
б) эластиновые и коллагеновые волокна

• Агрегация ЛНП (окисление, фосфолипаза А2,

протеиназы)
 Причины задержки
липопротеинов в интиме

• Утолщение интимы

• Взаимодействие ЛНП с компонентами

межклеточного матрикса
а) гликозаминогликаны (ГАГ)
б) эластиновые и коллагеновые волокна

• Агрегация ЛНП (окисление, фосфолипаза А2,

протеиназы)
 Задержка ЛНП в интиме.

• Мутация апо В у мышей в

положении К3363Е (лизин 
глутаминовая кислота),
приводящая к потере способности
ЛНП связываться с
гликозаминогликанами, вызывала
устойчивость к атеросклерозу,
индуцированному диетой.
 Причины задержки
липопротеинов в интиме
• Утолщение интимы

• Взаимодействие ЛНП с компонентами

межклеточного матрикса
а) гликозаминогликаны (ГАГ)
б) эластиновые и коллагеновые волокна

• Агрегация ЛНП (окисление, фосфолипаза А2,

протеиназы и др. модификации)
 II. Формирование липидных
пятен

• Модификация ЛНП

• Инфильтрация интимы моноцитами

• Захват макрофагами
модифицированных ЛНП и
формирование пенистых клеток
 Основные типы модификации
ЛНП
• Неферментативное окисление ЛНП
активными формами кислорода
• Модификация ЛНП липоксигеназами
• Модификация ЛНП фосфолипазой А2
• Модификация ЛНП миелопероксидазой
• Частичный протеолиз
• Гликирование
• Гомоцистеинирование
Отложения модифицированных белков в стенке аорты
человека (фиброзная бляшка)

МДА-
Ацетилирован Малеилирова
модифицирова
ные белки нные белки
нные белки
 Атерогенные эффекты перекисно-
модифицированных ЛНП
• Формирование пенистых клеток
• Индукция синтеза адгезионных молекул
эндотелиальными клетками
• Хемотактичность для моноцитов
• Индукция синтеза клетками интимы
макрофагального хемотактического пептида-1
(МСР-1)
• Ингибирование миграции макрофагов
• Цитотоксичность
• Ингибирование эндотелий-зависимой релаксации
артерий
• Индукция синтеза клетками интимы ростовых
факторов
• Индукция иммунного ответа
 Окислительная модификация
ЛНП в интиме – надо ли ее
предупреждать?
• ЛНП не могут удалиться из интимы
самостоятельно (без помощи клеток)

• Модификация ЛНП в интиме неизбежна

• Другие типы модификаций ЛНП мало

изучены
Окислительная модификация ЛНП в
плазме – связана ли она с
атерогенезом?
• Концентрация окисленных ЛНП в плазме
очень низкая из-за быстрого удаления их из
крови

• Поступление их в интиму артерий

незначительное

• Антиоксиданты не предупреждают
сосудистые события

• Содержание окисленных ЛНП в крови

коррелирует с наличием ИБС
 Факторы, обеспечивающие
поступление моноцитов в
интиму
• Хемокины (продукты перекисной
модификации липопротеинов,
секретируемые резидентными
макрофагами)
• Адгезионные молекулы на поверхности
эндотелиальных клеток
• Секреция макрофагами ростовых
факторов
 Адгезия моноцитов на
неповрежденном эндотелии в зоне
липидного пятна
 Поступление моноцитов в
интиму через эндотелий аорты
 Концентрация аутоиммунных комплексов ЛП-АТ в
плазме крови практически здоровых мужчин и больных
ИБС

Группы Количество Концентрация IgG

обследованных обследованных иммуных комплексов
ЛП-АТ (нг/мл)

Здоровые лица 38 32 ± 3

Больные ИБС 99 292 ± 51 *

*р<0,001 по сравнению с контролем

Содержание аутоиммунных комплексов ЛП-АТ в плазме
крови и в тканевой жидкости аорты человека (среднее
из 10 опытов)

160 154 6

140 5,28
5 4,93
120
4
100

80 3
60
2
40

20 16 1
7,5 0,27
0 0
Плазма Непораж. Атер. Плазма Непораж. Атер.
интима интима интима интима
мкг/мл %
Захват макрофагами свободных ЛП и комплексов ЛП-АТ
(включение 14C-олеиновой кислоты в эфиры ХС)

0,2
0,18
нмоль/мг белка клетки

0,16
0,14
0,12
0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
0
Контроль ЛП плазмы ЛП-АТ плазмы ЛП-АТ аорты
Захват макрофагами свободных ЛП и комплексов ЛП-АТ
(включение 14C-олеиновой кислоты в эфиры ХС)

0,5
0,45
нмоль/мг белка клетки

0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
Контроль ЛП плазмы ЛП-АТ ЛП-АТ ЛП аорты
плазмы аорты
 Ингибирующий эффект человеческих
аутоантител к МДА-ЛНП на захват МДА-ЛНП
макрофагами

0,35

0,3
Синтез ЭХС (нмоль/мг)

0,25
.

0,2
без ААТ
0,15 +анти-МДА
..

0,1

0,05

0
ЛПНП нат МДА-ЛПНП
Трансформация перитонеальных мышиных макрофагов
в пенистые клетки

мЛНП+IgG, 48 ч. мЛНП, 48 ч. инкубации

инкубации
Пенистая клетка
ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ
КОМПЛЕКСОВ ЛП-АТ
 Инкубация перитонеальных мышиных макрофагов с
иммунным комплексом (ЛНП+АТ) в течение 48 ч.

Клетки, погибшие по Клетки, вступившие в

механизму некроза апоптоз
 Повреждение эндотелия сонной артерии кролика,
вызванное иммунным комплексом ЛНП-IgG

Разрыв плазматической Транспорт 125I-ЛНП через

мембраны эндотелиальной поврежденную
клетки эндотелиальную клетку
 УЧАСТИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЛПНП
(мЛПНП) И ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ
«мЛНП-АНТИТЕЛО» В АТЕРОГЕНЕЗЕ
пероксидация
гликозилирование
ограниченный протеолиз появление
десиалирование и др. аутоантигенности
процессы
комплекс
нативные мЛНП
мЛНП - антитело
ЛНП

агрегаты или скэвенджер- и рецепторы к

др. рецепторы Fc-фрагменту
нерастворимые иммуноглобулина
и
ассоциаты фагоцитоз C3-комплементу

катаболизм через
ЛПНП-рецепторы макрофаг артериальной
клеток стенки

пенистая клетка
атеросклеротическая бляшка
Формирование липидного пятна
Артерия

Эндотелий

Накопление
ХС

Задержка Модификация
Макрофаг
 III. Формирование развитых
атеросклеротических поражений

• Развитие воспаления в ответ на накопление

модифицированных липопротеинов.

• Фенотипическая модификация (активация) ГМК

• Образование некротического ядра

атеросклеротической бляшки

• Формирование фиброзной покрышки.

Атеросклеротическая бляшка
 Фенотипическая модификация
(активация) ГМК

• Ростовые факторы

• Цитокины

• Модифицированные ЛНП
 ОСТРЫЙ КОРОНАРНЫЙ СИНДРОМ

• Две трети случаев ОКС вызваны разрывом

покрышки атеросклеротических бляшек с
последующим образованием тромба

• Одна треть случаев ОКС вызвана бляшками

которые имеют выраженный стеноз и/или
эрозию (апоптоз эндотелиальных клеток и их
слущивание)

Virmani R. et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol 2000;20:1262–75.

• При этом, только около 5% всех
атеросклеротических поражений,
присутствующих в артериях пациентов,
имеют клинические проявления
Фиброзная покрышка, ГМК и
макрофаги
 Индукторы апоптоза
• Модифицированные ЛПНП
• Фактор некроза опухолей-альфа
• Гомоцистеин
• Окисленные фосфолипиды
• Гипоксия
• NO
• Пероксинитрит (NOOH)
• Отсутствие ростовых факторов
• Оксистерины
• Fas-лиганд
• Накопление свободного ХС в клетках
Нормальный и нарушенный
фагоцитоз апоптозных клеток
 Способность ЛВП предупреждать
апоптоз макрофагов
• ЛПВП предупреждают апоптоз
макрофагов, индуцированный
модифицированными ЛНП и ФНО-ά

• Антиапоптотический эффект ЛВП

связан с активацией
фосфорилирования проапоптотических
белков BAD и FoksO с помощь
протеинкиназ PI3K/AKT и А.
 Антиатерогенные эффекты ЛВП

• Противовоспалительное действие
• Обратный транспорт ХС
• Предупреждение модификации ЛНП
• Предупреждение поступления ЛНП в
интиму
• Предупреждение гибели клеток
(апоптоза)
• Нормализация обмена ЛП
Эволюция атеросклеротической
бляшки
Спасибо за внимание!
 ЗАВИСИМОСТЬ СМЕРТНОСТИ ОТ
КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХС КРОВИ
7 ЛЕТ НАБЛЮДЕНИЯ
(на 1000 человеко-лет наблюдений в каждой группе)
14

12

10 Общая
смертность
8
ИБС
6

4
Рак
2

0
1 2 3 4 5
Квинтили ХС
 ЗАВИСИМОСТЬ СМЕРТНОСТИ ОТ
КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХС КРОВИ
20 ЛЕТ НАБЛЮДЕНИЯ
(на 1000 человеко-лет наблюдений в каждой группе)

14

12

10

6 ИБС
4

0
1 2 3 4 5
Квинтили ХС
 ХС и смертность от ИБС по периодам

0.20
<194
195-216
217-240
>240
0.15
смертность, доля умерших

0.10
0.05
0.00

0-5 5-10 10-15 15-20 20-25 25-30

Длительность наблюдения, лет