UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Fundada en 1551
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

UNIDAD DE POST GRADO

Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas y flores de

Otholobium pubescens en la hiperglicemia
experimental en Rattus norvergicus var. Albinus
TESIS
para optar al Grado Académico de:
MAGÍSTER EN RECURSOS VEGETALES Y TERAPÉUTICOS

AUTOR
ENRIQUE JUAN SOLGORRÉ CONTRERAS
ASESOR
Mg. AMÉRICO CASTRO LUNA

LIMA – PERÚ 2005

Table des matières

Dedicace
RESUMEN
SUMMARY
I.- INTRODUCCIÓN
II.- MARCO TEÓRICO

2.1. ASPECTOS BOTÁNICOS

2.1.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA

2.1.2. DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA: CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS.
2.1.3. HÁBITAT

2.2. ASPECTOS QUÍMICOS

2.3. USO EN LA MEDICINA TRADICIONAL
2.4. ESTUDIOS ANTERIORES

III.- PARTE EXPERIMENTAL

3.1. MATERIALES

3.1.1. MATERIAL BIOLÓGICO

3.1.2. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

3.2. MÉTODOS

3.2.1. FASE FITOQUÍMICA

3.2.1.1 RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

3.2.1.2 PRUEBA DE SOLUBILIDAD
3.2.1.3 MARCHA FITOQUÍMICA

3.2.2. FASE FARMACOLÓGICA

3.2.2.1 BIOENSAYO DE TOXICIDAD

3.2.2.2. DETERMINACIÓN DE LA DL50
3.2.2.3. INDUCCIÓN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL

3.2.3. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLOGICO.

 3.2.3.1. DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA SANGUINEA.

3.2.4. ANALISIS ESTADÍSTICO DE LA FASE FARMACOLOGICA.

IV.- RESULTADOS

4.1. PRUEBA DE SOLUBILIDAD

4.2. MARCHA FITOQUÍMICA
4.3. RESULTADO DEL BIOENSAYO DE TOXICIDAD CON Artemia salina
4.4. ENSAYO PARA DETERMINAR LA DL50 EN RATAS UTILIZANDO EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE FLORES Y
HOJAS DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes.
4.5. RESULTADOS DEL TRATAMIENTO FARMACOLÓGICO

V.- DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
ANEXOS

Anexo Nº 1
Anexo Nº 2
Anexo Nº 3

A nuestra querida Universidad Nacional Mayor de San Marcos, le quedo muy agradecido por permitirme
cumplir mis aspiraciones y por los conocimientos impartidos a través de sus abnegados profesores, quienes
siempre permanecerán en mi pensamiento.
Expreso mi inmensa gratitud a mi Asesor Mg. Américo Castro Luna, por su apoyo y paciencia, además por las
acertadas sugerencias para la realización de este trabajo de investigación, contribuciones que serán
gratamente recordadas y apreciadas.
Al glorioso Ejército del Perú, por su excelente política de capacitación a su personal en beneficio de la
Institución.
A mi hijo: Jesús Enrique y Lucero Berioska, por traer tanta alegría a mi vida, quienes colaboraron con su
comprensión y paciencia durante estos años de estudio, que son y serán el motivo de constante superación
en la vida.
A mi Esposa, Madre y Hermanos por el apoyo incondicional y por darme la oportunidad de lograr todo
aquello que he querido ser.
A mis amigos:
Mg. Alexis Arroyo, Q. F. Gloria Gordillo y Eusebio Morales, quines siempre estuvieron presentes con sus
valiosas orientaciones.
Mi agradecimiento a l Jurado Examinador:
Dra. Luisa NEGRÓN BallartePresidente
Dr. Pablo BONILLA RiveraMiembro
Mg. Cesar FUERTES RuitónMiembro
Mg. Américo CASTRO LunaMiembro
Mg. Raúl SORIA LópezMiembro
por sus valiosos aportes para la optimización de este trabajo de investigación y muy en especial por la
valoración y calificación del mismo.

RESUMEN

El objetivo de esta investigación fue determinar el efecto hipoglicemiante de la administración oral del
extracto hidroalcohólico de las hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, en la hiperglicemia
experimental inducida por aloxano en ratas albinas. Se demostró que la administración de 500 mg/kg p.c,
durante 33 días de tratamiento, redujo significativamente los niveles de glicemia de 390 a 223 mg/dl.

Palabras clave: Otholobium pubescens, Fabaceae, Diabetes Mellitus, actividad hipoglicemiante.

SUMMARY

The objective of the present research was to determine the antihyperglicemic activity of oral administration
of leaves and flowers hydroalcoholic extract of Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, in the Alloxan-
induced diabetes rat. it determined that the administration of 500 mg/kg p.c, during 33 days of treatment,
significantly lowered the levels of glucose from 390 to 223 mg/dl.
 Key words: Otholobium pubescens, Fabaceae, Diabetes Mellitus, antihyperglycemic activity.

I.- INTRODUCCIÓN
La diabetes mellitus es una enfermedad común en muchas poblaciones del mundo(1). Las plantas medicinales
con actividad antidiabética pueden aportar una fuente útil de nuevos compuestos orales hipoglicemiantes,
ya sea, como entidades farmacéuticas o coadyuvantes de las terapias existentes.(2,3)

Otra razón importante para estudiar el uso de las plantas es validar científicamente su efectividad para
recomendar su uso y probablemente concluya a reducir el costo del cuidado de la salud de estos
pacientes.(4).

Otholobium pubescens (Poiret) Grimes ha sido usada como hierba medicinal por muchos años(5, 6). Es
consumida en la medicina tradicional del Perú como un extracto acuoso para el tratamiento de la diarrea y
la diabetes. (7). En un trabajo anterior Acosta & otros reportaron que la administración oral de “culén”
disminuyó los niveles de glicemia en ratas diabéticas tan igual como el fármaco Clorpropamina. (8)

Recientemente, experimentos realizados en ratas y ratones, con hiperglicemia inducida por

estreptozotocina, se demostró el efecto hipoglicemiante del extracto de Otholobium pubescens y el
compuesto bakuchiol aislado del mismo.(9)

El objetivo principal de la presente investigación ha sido comprobar la actividad hipoglicemiante del extracto
hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, “Culén”, que es la forma común
que se utiliza en la medicina tradicional.

II.- MARCO TEÓRICO

2.1. ASPECTOS BOTÁNICOS

2.1.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA

La especie vegetal fue clasificada en el Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor de San
Marcos, siendo determinada según el Sistema de Clasificación de Engler y Prantl, modificada por Melchior en
1964, como sigue:

DIVISIÓN: ANGIOSPERMAE

CLASE: DICOTYLEDONEAE

SUB CLASE: ARCHYCHLAMYDAE

ORDEN: ROSALES

FAMILIA: FABACEAE (LEGUMINOSAE)

GENERO: Otholobium

ESPECIE: Otholobium pubescens (Poiret) Grimes

NOMBRE COMÚN: Culén, Huallhua, Colin macho, Huayllana, Albahaquilla, Hierba de mataduras, Albaquilla.

2.1.2. DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA: CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS.

La especie Otholobium pubescens (Poiret) Grimes popularmente conocida como “Culén”, es un arbusto
erguido, ampliamente ramificado que alcanza entre 1.50 a 3.00 metros de altura.
CUADRO Nº 1: DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes “Culén”

TALLO: Aéreo, erguido, semileñoso; densamente pubescente de color blanquecino.

HOJAS: Compuestas trifoliadas. Aromáticas. Presenta foliolos oblongo-lanceolados, de borde entero de 5 a 8 cm de longitud
por 1,5 a 2,5 cm de ancho, pubescente con largos tricomas en el nervio de la cara inferior.
FLORES: Inflorescencia racimosa axilar alargada de 10 a 15 cm de longitud. Pedúnculos densamente vellosos. Las flores
pequeñas de color lila azulada o purpúreo, de 10 a 12 mm de longitud, corola papilonada pentámera cigomorfa
(forma de mariposa); el primer estandarte de los pétalos es aovado orbicular. Androceo diadelfo. Gineceo completo.
Ovario súpero, unicarpelar, uniovular. Cáliz pentámero lobulado.
FRUTO: Seco pequeño, oval, acuminado e indehiscente, legumbre que contiene una semilla.
TALLO: Aéreo, erguido, semileñoso; densamente pubescente de color blanquecino.

La reproducción de esta especie puede hacerse por semillas sembradas durante el verano o por estacas en la
época otoñal. Es de crecimiento rápido en condiciones de humedad apropiada.(5, 10)

FIGURA Nº1: OTHOLOBIUM PUBESCENS (POIRET) GRIMES “CULEN”

2.1.3. HÁBITAT

El Otholobium pubescens (Poiret) Grimes es una planta silvestre que crece en la región andina del Perú,
Chile, Bolivia y Argentina; crece de preferencia en lugares húmedos de los valles y las quebradas de la
precordillera.

En el Perú esta planta se desarrolla entre los 2 000 a 4 000 m.s.n.m., en los departamentos de Ayacucho,
Apurímac, Cusco, Puno, Junín, Cajamarca, Ica y Huancavelica. En Lima se encuentra en las provincias de
Huarochirí y Chosica (800 a 900 m.s.n.m.). (5,8)

2.2. ASPECTOS QUÍMICOS

El Otholobium pubescens (Poiret) Grimes contiene: Aceites esenciales (psoraleno), taninos, gomas, resinas,
furocumarinas, terpenoides, tiene como componente mayoritario al bakuchiol, terpenoide fenólico, con
actividades antimicrobianas y citotóxicas. Este trabajo se orientó a efectivar la actividad citotóxica
mediante la quimiomodulación, realizando para ello, modificaciones sobre los dobles enlaces 7 y 12. Los
derivados semisintéticos obtenidos se sometieron a ensayos de citotoxicidad sobre células neoplásicas
(A-549, HT-29 y MEL-28), resultando con mayor potencia citotóxica aquellos que se encuentran epoxidados
en 7 y simultáneamente funcionalizados en las posiciones C-12 y C-13.(5)

Asimismo Hirzel et. al., mencionan que (Otholobium glandulosum (L.) Grimes) es una planta medicinal que
ha adquirido gran importancia debido a su alto contenido de psoraleno de estructura cumarínica
(6)..Recientemente se ha aislado e identificado al componente Bakuchiol del Otholobium pubescens (Poiret)
Grimes al cual se le ha demostrado propiedad hipoglicemiente(9). Se le atribuye también, propiedades
medicinales posiblemente a la presencia de taninos, que tiene efecto astringente.(11)

FIGURA Nº 2: ESTRUCTURA QUÍMICA DEL BAKUCHIOL, TERPENOIDE PRESENTE EN Otholobium pubescens

(Poiret) Grimes. “Culén”
2.3. USO EN LA MEDICINA TRADICIONAL

Las informaciones recogidas del uso empírico y popular de esta especie, refieren su empleo como
carminativo, digestivo, antiespasmódico, hipoglucemiante, antidiarreico, laxante y vermífugo; lo cual se
utiliza la planta entera en forma de cocimiento o infusión. Además le atribuyen propiedades de ser
antiinflamatoria, astringente, catártica, hemostática y antiinfecciosa.

Una de las formas de preparar el cocimiento de este recurso fitoterapéutico por su uso como
hipoglucemiante es la siguiente:

En un litro y medio de agua, se agrega 100 gramos de hojas y flores, se hace hervir hasta que
quede alrededor de un litro de agua; se filtra y se toma 4 a 5 copas al día.
El uso popular de esta planta es haciendo hervir 30 gramos de ramas de Culén descortezadas,
dejar en reposo y tomarlo cada 6 horas durante veinticuatro horas.
Para el empacho se hace hervir una cucharada de corteza en un litro de agua. Este cocimiento se
usa también para expulsar parásitos.(5,12)

El zumo de las hojas es aplicado a las heridas y las hojas machacadas de la misma las cubrían, siendo
cambiadas diariamente. (12,13)

Es un arbusto muy noble, y es utilizado como antidiarreico pediátrico y como vermífugo, utilizándose la
planta entera tierna. (12)

Para combatir los ardores del sol, las hojas frescas se coloca debajo del sombrero debido a la frescura que
brinda. Para combatir las almorranas, se aplica como lavado o aplicando los vapores de su cocimiento
(Hoffmann et al. 1992). Estudios realizados en la granja Homa de Limache-Chile, acerca del uso y beneficio
de esta especie, le atribuyen usos alimenticios, aromáticos (incienso) y curativos.(11) En el tratamiento de la
Diabetes mellitus Tipo II, étnicamente lo prepara tratando, 100 gramos de hojas y flores en un litro y medio
de agua, se hierve hasta que reduzca a 1 litro; se filtra y se toma 4 a 5 veces al día. (8,15) Otros beneficios
curativos de esta planta son: almorranas, anorexia, diarrea (infusión de tallos), empachos, heridas (jugo de
hojas) jaquecas, carminativo, emético (raíz), emoliente febrífugo, purgante (cenizas de los tallos). (5,14,15)

2.4. ESTUDIOS ANTERIORES

En 1994, Grossi,(2) presentó en el Congreso Médico Latinoamericano celebrado en Buenos Aires, llevando
importante comunicación de sus profundas investigaciones acerca de la planta “Culén” y su efecto
hipoglucemiante, trabajo que se publicó el 28 de mayo de ese año en la “Argentina Médica” y que figura en
el libro “Medicina Casera”, donde se detallan un sinnúmero de propiedades y se dan recetas para la
preparación de las pócimas.

En un estudio realizado sobre el efecto hipoglucemiante del fruto de Momordica charantia L., refieren que
cerca de cuatrocientas especies vegetales son conocidas popularmente como hipoglucemiantes en nuestro
país, sin embargo, sólo el 12,5% han sido estudiadas.(18)

Según estudios realizados por Valdivia & Hidalgo (1996), en el Hospital “Guillermo Almenara”, a pacientes
diagnosticados con Diabetes Mellitus No Insulino Dependiante (DMNID) (Tipo II), cerca del 70% de los
pacientes ingirieron algún producto tradicional en su tratamiento teniendo entre ellos los descritos en el
cuadro Nº 2, de los cuales los resultados obtenidos merecen mayor investigación.(8, 11)

La Sociedad Farmacéutica de Japón, en su Boletín Biológico Farmacéutico, Nº 22, del año 1999, presenta un
trabajo de Krenisky, J. & otros, quienes realizaron el aislamiento y la determinación de la actividad
antihiperglicémica de Bakuchiol del Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, concluyendo que el “Culén”
posee actividad antihiperglicémica, por acción de uno de sus componentes denominado Bakuchiol. (9)
CUADRO Nº 2: PLANTAS ANTIHIPERGLICEMIANTES

Nombre común Nombre científico

Berros Naturtium aquatioum
Botoncillo Spilanthes americana
Casco de vaca Bauhinia variegata
Balsamina Momordica charantia
Cholan Tecoma stans
Marañon Anacardium occidentales
Orégano Origanum vulgare
Hercampuri Gentianella alborocea
Caigua Cyclantera pedata
Pasuchaca Geranium ayabacense
Chancapiedra Phyllantus niruri
Canchalagua Asteraceae sckuhria
Tuna Opuntia ficus.
Diente de león Taraxacum officinalis
Sangre de grado Crotón sp
Uña de gato Uncaria tomentosa Wild
Yacón Smallanthus sonchifolia (Benth) Rob.
Culen Otholobium pubescens (Poiret) Grimes
 Nombre común Nombre científico

Fuente:Libro de Resumen del II Congreso Interamericano de Medicina Tradicional. Lima - Perú. (1988). (11)

FIGURA Nº 3: HIPÓTESIS ETIOLÓGICA DE LA DIABETES TIPO II

III.- PARTE EXPERIMENTAL

3.1. MATERIALES

3.1.1. MATERIAL BIOLÓGICO

Hojas y flores desecadas de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes.

Huevos de Artemia salina.
Ratas albinos hembras de 250 – 300 g. de peso, de 3 meses de edad.

3.1.2. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

EQUIPOS

Balanza analítica digital

Bomba de vacío
Equipo de extracción Soxhlet
Equipo para ensayo de toxicidad con Artemia salina

Equipo generador de oxígeno

Fuente de calor
Cámara oscura con compartimiento iluminado

Lámpara UV
 Molino de cuchilla Willey.
Espectrofotómetro
Microcentrífuga
Cronómetro

MATERIALES

Matraz erlenmeyer de 100, 250 y 500 ml

Papel platino
Vasos de Precipitación de 100, 250 y 500 ml
Lunas de reloj
Pipeta de 10 ml
Mortero
Probeta graduada de 10 y 100 ml
Pipetas graduadas de 0.5, 5 y 10 ml
Tubos de ensayo
Algodón
Capilares de hematocrito heparinizados
Jeringas hipodérmicas de 1, 2, 5 y 20 ml
Papel universal indicador de pH

REACTIVOS

Reactivos para la fase fitoquímica

Solventes químicos
Aloxano monohidratado
Etanol 95%
Set de Glicemia enzimática Wiener
D (+) Glucosa
Agua de mar

3.2. MÉTODOS

3.2.1. FASE FITOQUÍMICA

3.2.1.1 RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

La muestra en estudio, constituida por la planta entera (hojas, flores y tallos) de Otholobium pubescens
(Poiret) Grimes se recolectó la cantidad de 2 kg aproximadamente, en el Departamento de Ica, Distrito de
Yauca del Rosario; durante los meses de diciembre del 2 000 y Mayo – Julio del 2 001, siendo clasificada en
el Museo de Historia Natural de la UNMSM (Herbario de San Marcos). El secado se realizó en el mismo lugar
de recolección considerando las condiciones para tal operación (en sombra, con corriente de aire,
temperatura ambiente).Una vez secas fueron sometidas a molienda en un molino eléctrico, luego se pesó
200 gramos y se llevó a maceración hidroalcohólica al 80%, posteriormente se filtró y se concentró hasta el
secado del extracto a unos 40-45ºC. Una vez seco el extracto se procedió al desengrasado en un equipo
Soxhlet con éter de petróleo manteniendo la temperatura entre 40 y 60 grados centígrados. Obtenido el
extracto en polvo, se procedió a realizar la Marcha Fitoquímica para determinar la presencia de metabolitos
secundarios, mediante reactivos de coloración y precipitación. (19)
FIGURA Nº 3: DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA OBTENCIÓN DEL EXTRACTO DE Otholobium pubescens (Poiret)
Grimes

3.2.1.2 PRUEBA DE SOLUBILIDAD

Se realizó utilizando solventes en función a su polaridad creciente (éter etílico, benceno, n-hexano,
n-butanol, n-propanol, cloroformo, acetato de etilo, acetona, etanol, metanol, agua destilada); para lo cual
se pesó 1 gramo del extracto hidroalcohólico seco y se colocó en tubos de ensayo, a los cuales se les agregó
2 ml de cada solvente para verificar su solubilidad.(8, 20)

3.2.1.3 MARCHA FITOQUÍMICA

Se realizaron pruebas cualitativas para determinar la presencia de metabolitos secundarios presentes en el

extracto hidroalcohólico de flores y hojas secas del Otholobium pubescens. (Poiret) Grimes. (19, 21, 22)

3.2.2. FASE FARMACOLÓGICA

Los animales de experimentación fueron ratas de la raza Sprague Dowley, obtenidas del Centro Nacional de
Producción de Biológicos del Instituto Nacional de Salud, correspondientes a la especie Rattus norvergicus
var. Albinus, hembras de 3 meses de nacidas con un peso promedio de 262 gramos Las ratas fueron
colocadas en jaulas independientes con agua y alimento. La alimentación de estos animales fue con
productos elaborados por la planta de alimentos del Departamento de Nutrición de la Facultad de Zootecnia
de la Universidad Nacional Agraria – La Molina; formada por una mezcla de torta de soya, harina de trigo,
aminoácidos sintéticos y antifúngicos.

3.2.2.1 BIOENSAYO DE TOXICIDAD

La Artemia salina es la especie de artrópodos más usado en bioensayos en la investigación fitoquímica, para
la detección de sustancias bioactivas, debido a que su ciclo biológico es bien conocido, es de fácil manejo en
el laboratorio y su cultivo es relativamente sencillo y barato.

La toxicidad en Artemia salina con el extracto de hidroalcohólico de flores y hojas secas del Otholobium
pubescens. (Poiret) Grimes, se expresa como CL50 (Concentración letal 50) que es la concentración de un
extracto que mata al 50% de una población determinada de este crustáceo. (21)

METODOLOGÍA:

a) Se preparó agua de mar artificial (3.8 gramos de sal comercial en 100 ml de agua destilada) y se filtró,
luego de airear por espacio de una hora.
b) Se colocó aproximadamente 50 mg de huevos de Artemia salina en una cámara oscura con un
compartimiento iluminado del cual salieron las larvas, y se les incubó a temperaturas entre 25–28º C por
aproximadamente 24 ó 30 horas, al cabo de las cuales vio las larvas.

c) Se procedió a hacer una solución de trabajo que contuvo 10 mg de extracto hidroalcohólico por ml de
solución.

d) A partir de esta solución se prepararon diluciones de 1000, 100 y 10 ppm, se hicieron réplicas y un control
negativo de cada concentración.

e) Se transfirió a cada recipiente 10 nauplios, por medio de una pipeta pasteur o tubos capilares.

f) Se incubó los recipientes por 24 horas, en las mismas condiciones que los huevos, al cabo de los cuales, se
contó el número de individuos muertos.

g) Se calculó la CL50 con la ayuda del programa de computación EPA PROBIT ANÁLISIS PROGRAM.

3.2.2.2. DETERMINACIÓN DE LA DL50

Por definición la DL50 es la cantidad de droga o dosis administrada a una población que causa alteraciones o
muerte al 50% de ellos.

El ensayo se determinó con una población de 15 ratas divididas en 3 grupos (5 ratas por grupo). Se
administró el extracto hidroalcohólico en dosis de 250, 500 y 750 mg/kg p.c., por vía oral y con los
resultados se determinó la DL50. Antes de dar inicio al experimento, se les suprimió el alimento 12 horas
antes del ensayo.

CUADRO Nº 3: ENSAYO FINAL PARA DETERMINACIÓN DEL DL50

Dosis (mg//kg p.c.) N° de Muestras

250 5
500 5
750 5

3.2.2.3. INDUCCIÓN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL

Aloxano

Pese a conocerse desde hace mucho tiempo esta sustancia, se desconoce el mecanismo de acción. Algunos
estudios indican que hay una alta afinidad del fármaco por las membranas de las células del islote de
Langerhans que se hallan en el páncreas. Existen también evidencias que los cambios de la membrana
podrían explicar la necrosis selectiva.

Inducción de la hiperglicemia experimental

Se procedió a seleccionar a las ratas, para la administración de aloxano en dosis de 160 mg/kg por peso
corporal (p.c.), por vía intradérmica,(3) previamente fueron sometidos a un ayuno de 12 horas. La
hipoglucemia tipo II se indujo con la administración del aloxano por tres días consecutivos.

3.2.3. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLOGICO.

Las 40 ratas raza Sprague Dowley, especie Rattus norvergicus var. Albinus, hembras de 3 meses de nacidas
con un peso promedio de 262 gramos fueron agrupadas en 4 grupos: el primero para recibir un tratamiento
con el extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, el segundo grupo
para ser tratadas con Glibenclamida, el tercer grupo no recibiría ningún tratamiento y el cuarto grupo sería
el grupo control.

Las ratas fueron preparadas con un ayuno de 12 horas y se procedió a determinar la glicemia basal a todas
las ratas. Luego se les administró aloxano 160 mg/kg p.c, vía intradérmica, al primer, segundo y tercer
grupo de ratas. Al cuarto grupo que actuó como grupo control, no se le administró aloxano.
 Posteriormente, al primer grupo de ratas aloxanadas se les administró por vía oral un tratamiento diario con
el extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes a una dosis de 500
mg/kg p.c.

Al segundo grupo de ratas aloxanadas se les administró un tratamiento diario con el fármaco glibenclamida
que es utilizado como hipoglucemiante, a una dosis de 5 mg/kg p.c. por vía oral.

El tercer grupo de ratas aloxanadas no recibió ningún tipo de tratamiento, para poder comparar el efecto
hipoglucemiante del extracto en estudio y del fármaco glibenclamida.

El cuarto grupo de ratas no aloxanadas no recibió tratamiento.

A los cuatro grupos se les hizo tomas de sangre en los días 1, 2, 3, 7, 8, 11, 15, 21, 24, 27, 30 y 33 día, para
determinar los niveles de glicemia.

3.2.3.1. DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA SANGUINEA.

Este análisis se realizó utilizando un Set de Glicemia enzimática WIENER, que contuvo los siguientes
reactivos:

Estándar: Solución de glucosa 1g/l

Enzimas: (GOD/POD): solución de oxidasa 3000 U/l y peroxidasa 400 U/l.
Reactivo 4-AF: Solución de 4-aminofenazona, 1,25 μM.
Reactivo fenol: solución de fenol 2,75 μM.

Las muestras sanguíneas de las ratas se obtuvieron por el método de corte de cola, evaluándose
cuantitativamente con un espectrofotómetro a la longitud de onda de 505 nm.

3.2.4. ANALISIS ESTADÍSTICO DE LA FASE FARMACOLOGICA.

Al conjunto de valores de los niveles de glicemia los agrupamos en 3 períodos (del día 1 al 10, el primer
periodo, del día 11 al 21 el segundo período; y del día 22 al 30, el tercer período) para mejorar el estudio
estadístico. A los periodos de tratamiento se les determinó la media y la desviación estándar para así
determinar si existe diferencia significativa entre los grupos por cada periodo mediante un t calculado, a un
nivel de significancia de = 0,05, utilizando la respectiva fórmula estadística.

IV.- RESULTADOS

4.1. PRUEBA DE SOLUBILIDAD

El extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, mostró mayor
solubilidad en el agua, poco soluble en acetato de etilo y no soluble en éter etílico.

CUADRO Nº 4. PRUEBA DE SOLUBILIDAD

Solventes Muestra H2O/EtOH

Eter etílico -
Benceno -
n-Hexano -
n-Butanol +
n-Propanol +
Cloroformo -
Acetato de etilo +
Acetona ++
Etanol +++
Metanol +++
Agua ++++

(-) Insoluble,
(+ -) Escasamente soluble

(+) Poco soluble

(++) Medianamente soluble

(+++) Soluble

(++++) Muy soluble

4.2. MARCHA FITOQUÍMICA

La Marcha fitoquímica realizada con el extracto hidroalcohólico de de hojas y flores Otholobium pubescens
(Poiret) Grimes detecta la presencia de taninos, antraquinonas, saponinas, triterpenoides y/o esteroides,
flavonoides, azucares reductores; no se observó la presencia de alcaloides.

CUADRO Nº 5: MARCHA FITOQUÍMICA

GRUPO FUNCIONAL REACTIVOS RESULTADO

TANINOS Extracto + Rvo. de Gelatina pp. blanco +
Extracto + Tricloruro de fierro Coloración azul +
ANTRAQUINONAS Extracto + Rvo. de Bortranger Ms/bz (NaOH 5%) aq. pp. rojo +
SAPONINAS 1g de extracto en polvo + 10 ml de agua estéril + Persistencia de espuma por 30’ +
agitación 30’
TRITERPENOIDES Y/O Extracto en cloroformo + Rvo de Lieberman- pp. verde, azul verdoso (vira de rojo +
ESTERIODES Burchard) a azul)
FLAVONOIDES Rvo. de Shinoda Ms + Limadura de Mg + HCl conc. Coloración roja +
ALCALOIDES Extracto + Rvo. de Dragendorf No hubo cambio de coloración -
AZUCARES REDUCTORES Extracto + Rvo. de Fehling pp roja +
Extracto + Rvo. de Molish Coloración violeta +

pp Precipitado

Rvo. Reactivo

4.3. RESULTADO DEL BIOENSAYO DE TOXICIDAD CON Artemia salina

CUADRO Nº 6: BIOENSAYO DE TOXICIDAD. Cantidad de nauplios vivos a las 24 horas (n = 10

DILUCIÓN TUBO 24 HORAS

10 ppm 1 7
2 7
3 8
100 ppm 1 5
2 6
3 5
1000 ppm 1 3
2 1
3 2
BLANCO 1 9
2 8
3 9

Se utilizó el programa de computación EPA PROBIT ANÁLISIS PROGRAM para el procesamiento de datos del
Cuadro Nº 6, para calcular los valores de CL50, determinándose el valor 175.2037. Este valor nos indicó la
presencia de actividad biológica de la planta en observación. (Ver Anexo Nº 1).
4.4. ENSAYO PARA DETERMINAR LA DL50 EN RATAS UTILIZANDO EL
EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE FLORES Y HOJAS DE Otholobium
pubescens (Poiret) Grimes.

CUADRO Nº 7: ENSAYO FINAL PARA DETERMINAR EL DL50. PORCENTAJE DE MORTALIDAD UTILIZANDO EL EXTRACTO

DOSIS (mg/kg N° DE % OBSERVACIÓN

p.c.) MUESTRAS MORTALIDAD
250 05 00 Los animales se comportan de manera normal.
250 05 00
250 05 00
500 05 00 El comportamiento de los animales casi normal, ligeramente
estresadas.
500 05 00
500 05 00
750 05 00 Los animales se tornan nerviosos y ofuscados.
750 05 00
750 05 00

4.5. RESULTADOS DEL TRATAMIENTO FARMACOLÓGICO

CUADRO Nº 8: NIVELES DE GLICEMIA PROMEDIO DE LOS DIFERENTES GRUPOS DE ESTUDIO Y LA GLICEMIA

BASAL

GRÁFICO Nº 1: VARIACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA DE LAS RATAS SOMETIDAS A EXPERIMENTACIÓN

Tto. = Tratamiento

CUADRO Nº 9: EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE FLORES Y HOJAS D

Grimes. (500 mg/kg p.c) Y LOS PORCENTAJES DE VARIACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA

Niveles de Glicemia (mg/dl)

Rata 1er día 33avo día % Variación
1 396 221 44.19
2 387 224 42.12
3 402 231 42.54
4 378 233 38.36
5 401 244 39.15
6 390 222 43.08
7 411 218 46.96
8 394 217 44.92
9 395 216 37.21
10 399 208 47.87
PROMEDIO % EFECTIVIDAD 42.64
 CUADRO Nº 10: EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DE Glibenclamida (5 mg/kg p.c.) Y LOS PORCENTAJES DE
GLICEMIA.

Niveles de Glicemia (mg/dl)

Rata 1er Día 30avo día % Variación
1 397 103 74.06
2 400 94 76.50
3 385 98 74.55
4 393 0 70.00
5 395 90 77.22
6 379 87 77.04
7 382 89 76.70
8 380 104 72.63
9 392 110 71.94
10 401 105 73.82
PROMEDIO % EFECTIVIDAD 74.44

CUADRO Nº 11: NIVELES DE GLICEMIA POR PERIODO, SEGÚN TRATAMIENTO CON EL EXTRACTO EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE
FLORES Y HOJAS DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes (500mg/kg p.c.) Y GRUPO SIN TRATAMIENTO

Niveles de Glicemia (mg/dl)

n=10 Ratas A. tratadas con Extracto Ratas Aloxanadas sin tratamiento t teórico t c

Media ± D. E. Media ± D. E.
1º Periodo del 1 al día 10 387.20 ± 19.93 391.45 ± 71.76 2.101 2.28 Existe dif.sig.
2º Periodo del 11 al día 21 348.48 ± 31.98 383.05 ± 70.62 2.101 2.99 Existe dif.sig.
3º Periodo del 22 al día 30 253.05 ± 28.59 335.190 ± 42.71 2.101 5.92 Existe dif.sig.

CUADRO Nº 12: NIVELES DE GLICEMIA POR PERIODO, SEGÚN TRATAMIENTO CON GLIBENCLAMIDA (5 mg/kg p.c.) Y GRUPO SIN
TRATAMIENTO

Niveles de Glicemia (mg/dl)

n=10 Ratas aloxanadas tratadas con Ratas Aloxanadas sin t t c
glibenclamida tratamiento teórico
Media ± D. E. Media ± D. E.
1º Periodo del 1 al día 294.59 ± 75.56 391.45 ± 71.76 2.101 3.77 Existe
10 dif.sig.
2º Periodo del 11 al día 167.18 ± 59.60 383.05 ± 70.62 2.101 10.61 Existe
21 dif.sig.
3º Periodo del 22 al día 107.29 ± 25.73 335.190 ± 42.71 2.101 20.13 Existe
30 dif.sig.

V.- DISCUSIÓN
En la actualidad hay pocos antecedentes de estudio a la planta Otholobium pubescens (Poiret) Grimes. En
1904, Grossi, en un estudio realizado en Chile documenta sus investigaciones acerca de la planta “Culén” y
su efecto hipoglucemiante.

Otro antecedente fue presentado por Krenisky; J. & otros, quienes realizaron una investigación sobre el
“Aislamiento y determinación de la actividad antihiperglicémica de Bakuchiol del Otholobium pubescens
(Poiret) Grimes”, en el cual trabajaron con “culén” recolectado en el Perú, y realizaron la experimentación
en ratas y ratones, concluyendo que el “culén” posee actividad antihiperglicémica. La estructura del
Bakuchiol no lleva ninguna semejanza a la secretada por la insulina, a los inhibidores de la salida de la
glucosa hepática, a los sensibilizadores de la insulina, o a los inhibidores de la glucosa actualmente
 disponibles para el tratamiento de la diabetes del tipo 2,sino a la capacidad de bajar perceptiblemente las
concentraciones de la glucosa de la sangre, en modelos de animales con diabetes tipo 2.

En la investigación realizada luego de los procesos detallados para la determinación del DL50, (cuadro Nº 7)
se determinó que la Dosis Letal Media efectiva es a concentraciones mayores de 750 mg/kg p.c., lo cual
permitió que se fije una dosis de trabajo de 500 mg/kg p.c, porque como podemos ver en el cuadro Nº 7 el
grupo de ratas sometidas a ensayo con la administración del extracto a dosis de 750 mg/kg p.c sufrieron
ofuscación y se pusieron nerviosas, mientras que a la dosis de 500 mg/kg p.c su comportamiento era casi
normal, solo un ligero estresamiento.

Del cuadro Nº 8 se puede apreciar la variación entre los niveles de glicemia del día 1 y 33, para el primer
grupo de ratas tratadas con el extracto hidroalcohólico de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes lográndose
una reducción de 390.2 ± 18.52 mg/dl hasta 223.40 ± 10.24 mg/dl lo cual representa un promedio de
efectividad de 42.64% (cuadro Nº 9); mientras que con el tratamiento de Glibenclamida se logró reducir de
309.4 ± 8.28 mg/dl hasta 97.78 ± 8.18 mg/dl que determina un promedio de efectividad de 74.44% (cuadro
Nº 10), con respecto al primer día de tratamiento.

Podemos apreciar del párrafo anterior que el porcentaje de efectividad del la glibenclamida (74.44%) es
mayor a la de nuestra planta en estudio (42.64%) pues es un fármaco industrializado y aditado de otros
componentes hipoglucemiantes.

Otro índice del efecto hipoglucemiante es la tendencia descendente de los niveles de concentración de
glucosa para todos los casos de las ratas tratadas con el extracto. Esto se puede notar claramente en el
Gráfico Nº 01, pues conforme avanzaba día a día el tratamiento, los valores descendían notablemente. Con
la ampliación de días de tratamiento y dieta es posible que se llegue a igualar los valores de la glucosa basal.
Esto igualmente es notado en el caso de ratas tratadas con glibenclamida que muestra una tendencia
descendente de los valores de concentraciones de glucosa, acercándose a la glucosa basal, y era de esperar,
ya que es un fármaco de efecto hipoglucemiante largamente demostrado.

De la fase fitoquímica realizada se alcanza a entender que el efecto hipoglicemiante de la planta en estudio
se debería a los componentes químicos que se hallan en mayor cantidad en el extracto hidroalcohólico tales
como: taninos, antraquinonas, saponinas, triterpenoides y/o esteroides, flavonoides, azúcares reductores y
de manera muy particular compuestos químicos en los que se hallan presentes los grupos funcionales
hidroxilos de naturaleza fenólica, tal como se ha demostrado en el aislamiento del Bakuchiol, según Hirzel el.
at. (6)

CONCLUSIONES
Por los resultados obtenidos en el presente trabajo de investigación, sobre el extracto hidroalcohólico de las
hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, se puede concluir que:

1. La administración de una dosis de 500 mg/kg p.c. del extracto hidroalcohólico de las flores y hojas de
Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, “Culén” en ratas Rattus norvergicus var. Albinus., con hiperglicemia
experimental, disminuyó los niveles de glicemia de 390.2 ± 18.58 mg/dl a 223.4 ± 10.24 mg/dl en 33 días de
tratamiento. Asimismo, el fármaco glibenclamida, administrado en una dosis de 5 mg/ kg p.c. en ratas
Rattus norvergicus var. Albinus., con hiperglicemia experimental, produjo una disminución de la
hiperglicemia al disminuir los niveles de glicemia de 390.4 ± 8.29 a 97.78 ± 8.18 mg/dl en 30 días de
tratamiento.

2. En relación a la estructura de los componentes químicos hallados en la fase fotoquímica, se ha encontrado

la presencia de taninos, antraquinonas, saponinas esteroidales y/o saponinas terpenoidales, flavonoides,
otros fenoles y azúcares reductores; y que la interrelación de estos metabolitos sean responsables del efecto
hipoglucemiante de la planta en estudio.

3. De la prueba para determinar la DL50, luego de un ensayo preliminar y otro final se determinó por el
método de observación a las ratas que la Dosis Letal Media efectiva es a concentraciones mayores de 750
mg/kg p.c.

BIBLIOGRAFÍA

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ANEXOS

Anexo Nº 1

Cálculo del CL50 por EPA PROBIT

GRÁFICO Nº 2: Otholobium pubescens (Fabaceae) Grimes - CULEN

Anexo Nº 2

Datos experimentales y gráficos de niveles de glicemia en animales de experimentación

CUADRO Nº 13: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS TRATADAS CON EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE Otolobium pubesce
(Poiret) Grimes (Dosis = 500 mg/kg p.c.)

Nº Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30° 33°
1 121 396 400 390 380 375 360 330 280 275 251 226 221
2 75 387 395 394 378 370 365 326 292 290 252 242 224
3 85 402 402 403 396 391 380 359 319 315 265 252 231
4 86 378 389 385 380 378 375 364 306 304 270 261 233
5 90 401 405 401 388 379 373 370 312 316 255 249 244
6 81 390 388 392 379 372 369 358 314 308 252 243 222
7 72 411 409 407 390 389 379 349 295 276 236 228 218
8 95 394 394 392 379 370 368 348 300 270 248 227 217
9 120 344 339 330 325 322 322 310 310 286 255 247 216
10 98 399 397 396 383 383 381 374 322 288 268 233 208
Media 92.3 390.2 391.8 389.0 377.8 372.9 367.2 348.8 305.0 292.8 255.2 240.8 223.4
D.E. 16.89 18.58 19.70 21.74 19.47 19.34 17.29 20.77 13.17 16.94 10.21 11.92 10.24
 Nº Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

GRÁFICO Nº 3: NIVELES DE GLICEMIA EN RATAS ALOXANADAS Y TRATADAS CON EL EXTRACTO

HIDROALCOHÓLICO DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes (Dosis 500 mg/kg p.c.)

GRÁFICO Nº 4: COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATAS
ALOXANADAS TRATADAS CON EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes
(Dosis 500 mg/kg p.c.)
CUADRO Nº 14: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS TRATADAS CON GLIBENCLAMIDA (Dosis = 5 mg/Kg p.c.)

Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30°
1 90 397 325 275 228 202 195 190 165 161 121 103
2 85 400 296 199 185 180 130 130 110 96 100 94
3 107 385 286 185 184 160 151 147 106 153 96 98
4 96 393 291 190 190 162 116 103 95 87 68 *
5 89 395 248 250 196 147 132 117 101 99 98 90
6 95 379 302 270 172 135 107 96 97 95 93 87
7 84 382 302 240 205 199 170 121 93 82 74 89
8 90 380 350 347 341 320 307 273 215 170 129 104
9 101 392 300 278 270 257 235 214 170 107 138 110
10 93 401 376 321 277 232 233 209 165 151 123 105
Media 93 390.4 307.6 255.5 224.8 199.4 177.6 160 131.7 120.1 104 97.78
D. E. 7.09 8.28 35.48 54.24 54.52 56.91 64.38 58.47 43.14 34.28 23.25 31.87
 Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

GRÁFICO Nº 5: NIVELES DE GLICEMIA EN RATAS ALOXANADAS Y TRATADAS CON GLIBENCLAMIDA (Dosis 5

mg/kg p.c.)

GRÁFICO Nº 6: COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATAS
ALOXANADAS TRATADAS CON GLIBENCLAMIDA (Dosis 5 mg/kg p.c.)
 CUADRO Nº 15. NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS QUE NO RECIBIERON TRATAMIENTO

Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE observación

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30° 33°
1 93 401 556 500 580 506 480 410 480 * * * *
2 97 396 580 501 516 501 509 508 520 490 430 290 *
3 93 379 280 300 280 296 296 288 296 300 280 290 296
4 91 395 310 400 380 386 382 384 390 384 386 340 350
5 84 403 370 365 360 370 377 373 364 360 310 * *
6 90 377 314 320 310 310 311 316 370 371 308 309 309
7 94 390 386 380 379 365 365 359 353 350 341 340 340
8 100 379 378 373 370 361 345 335 337 340 325 * *
9 90 372 380 381 375 369 357 355 342 343 344 327 316
10 96 399 387 380 376 377 569 355 355 351 321 316 315
Media 92.8 389.1 394.1 390 392.6 384.1 399.1 368.3 380.7 365.4 338.3 316 321
D. E. 4.44 11.35 99.13 65.59 89.66 69.25 89.77 59.87 68.11 52.20 45.16 21.11 20.16

* = Rata muerta

GRAFICO Nº 7: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS QUE NO RECIBIERON TRATAMIENTO

GRÁFICO Nº 8: COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATAS
ALOXANADAS QUE NO RECIBIERON TRATAMIENTO
 CUADRO Nº 16: NIVELES DE GLICEMIA EN RATAS DEL GRUPO CONTROL (AGUA + COMIDA)

Rata Glucosa Basal(mg/dl) DÍAS DE CONTROL

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30° 33°
1 92 93 93 97 90 94 91 98 90 92 97 96 94
2 97 95 93 97 101 93 95 95 90 92 91 97 93
3 114 98 96 97 99 105 101 96 92 96 93 92 94
4 80 85 83 85 81 89 83 82 87 85 80 81 83
5 91 92 90 94 100 95 90 97 91 95 93 90 93
6 87 87 87 89 93 90 89 90 86 85 80 84 85
7 93 90 93 95 99 97 100 97 95 102 97 91 90
8 90 95 91 95 92 93 97 94 91 98 93 100 93
9 101 97 94 95 101 102 96 91 93 93 94 96 95
10 101 101 102 97 94 95 94 98 93 96 97 100 98
Media 94.6 93.3 92.2 94.1 95 95.3 93.6 93.8 90.8 93.4 91.5 92.7 91.8
D. E. 9.30 4.97 5.09 4.01 6.36 4.97 5.46 4.98 2.74 5.34 6.40 6.41 4.59

GRÁFICO Nº 9: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS DEL GRUPO CONTROL (AGUA + COMIDA)

GRÁFICO Nº 10:COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATAS
DEL GRUPO CONTROL (AGUA Y COMIDA)
 CUADRO Nº 17: BIOENSAYO DE TOXICIDAD, MORTALIDAD DE NAUPLIOS (Artemia salina)

DILUCIÓN TUBO 24 HORAS % MORT. PROMEDIO %

10 ppm 01 03 30 26.66
02 03 30
03 02 20
100 ppm 01 05 50 46.66
02 04 40
03 05 50
1000 ppm 01 07 70 80.00
02 09 90
03 08 80
BLANCO 01 01 10 13.33
02 02 20
03 01 10

Anexo Nº 3

Fotos del trabajo de investigación

Consultar en formato impreso