Вы находитесь на странице: 1из 17

Тема 7 Питание микроорганизмов

7.1. Понятие об обмене веществ


Физиология микроорганизмов Изучает процессы их роста, развития, питания, способы
получения энергии для осуществления этих процессов, их взаимодействия с окружающей средой.
Знание физиологических процессов микроорганизмов создает научную основу для
проведения культивирования (выращивания) и идентификации (распознавания) видов микробов, а
также  получения биологических и лечебных препаратов (заквасок, витаминов, ферментов,
аминокислот, антибиотиков, вакцин и др.).
Понятие об обмене веществ. Обмен веществ (метаболизм) - это совокупность
химических превращений веществ, которые протекают в клетке в тесном взаимодействии с
окружающей средой.
Обмен веществ у микроорганизмов слагается из двух процессов: процессов
конструктивного обмена (питание) и энергетического (дыхание).
Процесс питания организма состоит из поступления и усвоения пищи (ассимиляция).
Анаболизм (питание; ассимиляция; конструктивный или строительный обмен; обмен
веществ) сводится к усвоению, т.е. использованию микробами питательных веществ,
поступивших из внешней среды,  для биосинтеза компонентов собственного тела. Это достигается
чаще восстановительными эндотермическими реакциями, для течения которых требуется энергия.
Катаболизм (дыхание, диссимиляция, биологическое окисление) характеризуется
расщеплением (окислением) сложных органических веществ до более простых продуктов с
освобождением заключенных в них энергии. Эта энергия используется микроорганизмами для
синтеза веществ данной клетки.
Это так называемый строительный обмен, поскольку постоянно происходит обновление
клеточной структуры организма. Этот процесс преобладает в период роста.

7.2 Поступление питательных веществ в клетку


Питание – это процесс усвоения микробной клеткой питательных веществ, поступающих
из окружающей среды, в результате которого они превращаются в составные части биологических
структур клетки или откладываются в ней в виде запасных веществ. Питание в первую очередь
обеспечивает размножение и метаболизм клетки.
Среди необходимых питательных веществ выделяют органогены – это восемь химических
элементов, концентрация которых в бактериальной клетке превосходит 10 моль. К ним относят
углерод, кислород, водород, азот, фосфор, калий, магний, кальций.
Кроме органогенов, необходимы микроэлементы. Они обеспечивают активность
ферментов. Это цинк, марганец, молибден, кобальт, медь, никель, вольфрам, натрий, хлор.
Поступление питательных веществ и воды в клетку, а также выделение продуктов обмена в
окружающую среду происходят у микроорганизмов через всю поверхность их тела.
Возможность проникновения веществ извне, в клетку обусловлена многими факторами:
 величиной и структурой молекул этих веществ;
 способностью растворяться в компонентах цитоплазматической мембраны;
 концентрацией веществ в клетке и в среде;
 свойствами клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, являющихся
барьерами, через которые должны проникнуть в клетку питательные вещества;
 имеет значение электрический заряд поверхности клетки и др.
Вещества питательной среды могут поступать в клетку только в растворенном состоянии.
Нерастворимые сложные органические соединения должны подвергнуться расщеплению
на более простые вне клетки, что происходит с помощью экзоферментов микроорганизмов (рис.
7.1.).

Рис. 7.1. Схема внеклеточного пищеварения:


А – выделение клеткой гидролитических экзоферментов;
Б – ферментативный гидролиз сложных веществ;
В – проникновение продуктов гидролиза внутрь клетки

7.3 Способы питания и поступления в клетку различных веществ.


Существуют следующие виды питания микроорганизмов:
- голофитный способом питания или внеклеточное пищеварение (обладает
большинство м/о) - происходит в окружающей среде (субстрате) под влиянием экзоферментов
микроорганизмов;
- голозойный тип питания, так называемое внутриклеточное пищеварение, которое
происходит внутри клетки под действием эндоферментов.
Клеточная стенка (оболочка) проницаема и задерживает лишь макромолекулы.
Цитоплазматическая мембрана обладает полупроницаемостью и служит осмотическим
барьером; проницаемость ее для различных веществ неодинакова. Известно несколько путей
проникновения питательных веществ в клетку.
Существует 4 механизма проникновения веществ из окружающей среды через клеточную
мембрану в цитоплазму клетки.

Рис. 7.2. Схема транспорта веществ через цитоплазматическую мембрану.


1. Пассивная диффузия.
Пассивная диффузия подчиняется законам осмоса. При осмотическом проникновении
веществ через полупроницаемую мембрану движущей силой является разность осмотических
давлений (концентраций веществ) ∆С в растворах по обе стороны мембраны, т.е. между средой и
клеткой. Такой пассивный перенос веществ – по градиенту концентрации (от более высокой к
более низкой) – протекает до уравнивания концентрации и не требует затраты энергии клеткой.
Вода – основное вещество, которое проникает в клетку и выделяется из нее путем пассивной
диффузии.
2. Облегченная диффузия.
Большинство питательных веществ поступает в клетку путем переноса их через
мембрану специфическими белками переносчиками – пермеазами (от англ, permeable –
проницаемый), локализованными в цитоплазматической мембране. Пермеазы сходны с
ферментами; они обладают субстратной специфичностью – каждая транспортирует определенное
вещество. На внешней стороне цитоплазматической мембраны пермеаза адсорбирует вещество,
вступает с ним во временную связь и диффундирует комплексно через мембрану, отдавая на
внутренней стороне ее транспортируемое вещество в цитоплазму.
В клетку из питательной среды могут поступать только те вещества, для которых в
цитоплазматической мембране имеются соответствующие пермеазы. Таким образом, мембрана
является не только осмотическим барьером, но и обладает избирательной проницаемостью.
Перенос вещества с помощью пермеаз может протекать, как и при пассивной диффузии, по
законам осмоса – по градиенту концентрации. Это так называемая облегченная диффузия,
протекающая без затрат энергии.

Рис. 7.4 Облегченная диффузия


3. Активный транспорт. Совместно с белком-переносчиком функционирует
специальная система, обеспечивающая процесс переноса с использованием энергии. Система
связана с биологическим окислением в клетке, при котором в дыхательной цепи мембраны
происходит выброс протонов, обеспечивающих мембранный потенциал. В процессе
жизнедеятельности происходит постоянный вынос протонов из клетки в среду, вследствие чего их
концентрация в клетке снижается. Таким образом, образовавшийся вне клетки комплекс
переносчик-протон-субстрат, проникнув внутрь клетки, распадается за счет отсоединения
протона, и субстрат остается в цитоплазме.

4. Перенос групп. Отличается от активного транспорта тем, что субстрат появляется


внутри клетки в виде фосфорного эфира.

7.3 Типы питания микроорганизмов.


Различают углеродное и азотное питание микроорганизмов.
По отношению к углероду.
1) гетеротрофы – питающийся другими (heteros – другой) – получают углерод в
составе органических соединений.
Гетеротрофы — возбудители различного рода брожений, гнилостные микробы, а также все
болезнетворные микроорганизмы: возбудители туберкулеза, бруцеллеза, листсриоза,
сальмонеллеза, гноеродные микроорганизмы — стафилококки, стрептококки, диплококки и ряд
других патогенных для животного организма возбудителей.
Гетеротрофы включают в себя две подгруппы: метатрофных и паратрофных
микроорганизмов.
Метатрофы, или сапрофиты, живут за счет использования мертвых субстратов.
Сапрофиты (sapros — гнилой, fhyton — растение) — гнилостные микробы.
Паратрофы (греч. parasites — нахлебник) паразиты, живущие на поверхности или внутри
организма хозяина и питающиеся за его счет.
В качестве источника углерода гетеротрофы чаще всего используют углеводы, спирты,
различные органические кислоты. Наиболее полноценными источниками углерода для питания
этих микробов являются сахара (особенно гексозы), многоатомные спирты (глицерин, маннит,
сорбит и др.), а также карбоновые кислоты (например, глюкуроновая) и оксикислоты (молочная,
яблочная и др.). Все эти источники углерода обычно и включают в состав искусственных
питательных сред для выращивания микроорганизмов.
2) аутотрофы - питающийся самостоятельно (autos – сам, trophe – пища) –
микроорганизмы, которые используют диоксид углерода СО 2 в качестве единственного или
главного источника углерода для синтеза органических веществ тела.
К ним относят нитрифицирующие бактерии, железобактерии, серобактерии и др.
Аутотрофы превращают воспринятую углекислоту в сложные органические соединения
путем хемосинтеза, т. е. путем окисления химических соединений (аммиак, нитриты, сероводород
и др.). Таким образом, аутотрофные микробы обладают способностью создавать органические
вещества из неорганических, таких как угольная кислота, аммиак, нитриты, сероводород и др.
Поскольку такие микробы не нуждаются в органических соединениях углерода, входящего в
состав животных и человека, они не являются болезнетворными.
Однако среди аутотрофов встречаются микробы, обладающие способностью усваивать
углерод из СО2 воздуха и из органических соединений. Такие микробы определены как
миксотрофы (миксо — смесь, т. е. смешанный тип питания).
Отдельные виды аутотрофных микробов питание осуществляют подобно зеленым
растениям за счет фотосинтеза. Так, пурпурные серобактерии вырабатывают особый пигмент типа
хлорофилла — бактериопурпурин, при помощи которого и происходит использование световой
энергии (фотосинтез) для построения органических веществ своего тела из угольной кислоты и
неорганических солей.
По отношению к энергии:
1) фототрофы – организмы, которые пользуются энергией солнечного света процесс
называют фотосинтезом. В процессе фотосинтеза лучистая энергия солнца преобразуется в
химическую энергию;
2) хемотрофы – пользуются энергией химических реакций окисления неорганических
соединений; этот процесс называется хемосинтезом;
2*) гетеротрофы – хемотрофы – необходимую энергию получают путем окисления
органических соединений.
Таким образом все микроорганизмы можно разделить на 4 группы:
 фотогетеротрофы,
 фотоавтотрофы,
 хемогетеротрофы.
 хемоавтотрофы,
Помимо источника углерода и энергии при характеристике типа питания микроорганизмов
принимается во внимание и природа окисляемого субстрата – донора водорода (электронов).
Микроорганизмы, использующие в качестве донора водорода органические соединения (т.е.
получают энергию за счет разложения органических веществ), называют органотрофными, а
способные использовать неорганические доноры электронов (Н2, NH3, H2S, и др.) –
литотрофными (получающие энергию за счет окисления неорганических веществ).
Таким образом существует 8 видов питания.

Источник Окисляемый Источник углерода


энергии субстрат Органические соединения Углекислый газ
Свет Органические Фотоорганогетеротрофный Фотоорганоавтотрофный
соединения (часть пурпурных и (довольно редкий механизм
цианобактерий) питания, при котором окисляются
неусваиваемые вещества.
Встречается у некоторых пурпурных
бактерий)
Неорганическ Фотолитогетеротрофный Фотолитоавтотрофный
ие соединения (гелиобактерии, часть (некоторые зеленые, пурпурные и
пурпурных, зеленых и цианобактерии)
цианобактерий)
Органические Органические Хемоорганогетеротрофный Хемоорганоавтотрофный
соединения соединения (большинство видов бактерий) (некоторые представители
аминобактерий (Aminobacter),
метилобактерий (Methylobacterium),
флавобактерий (Flavobacterium),
псевдомонад (Pseudomonas))
Неорганически Неорганическ Хемолитогетеротрофный Хемолитоавтотрофный
е соединения ие соединения (некоторые водородные (водородные, нитрифицирующие,
бактерии) серо-, железобактерии)
Рис. 7.3. Схема классификации микроорганизмов по типам питания
Наиболее широко распространены 2 вида питания:
Фотолитоавтотрофный: для синтеза органических веществ тела получают углерод из
СО2 («автотрофы»), используют световую энергию («фото») и неорганический донор водорода
(электронов) («лито»). К ним относятся цианобактерии, пурпурные и зеленые серные бактерии.
Это преимущественно водные бактерии, содержащие различные пигменты (каротиноидные,
бактериохлорофиллы); которые поглощают свет. Донором водорода (для восстановления СО 2) у
цианобактерий служит Н2О, а у серобактерий – H2S, при этом в клетках накапливается сера;
фотосинтез протекает без выделения молекулярного кислорода.
Хемоорганогетеротрофный: Для хемоорганогетеротрофов (хемогетеротрофов)
источником углерода, энергии и донора водорода являются органические соединения. Такой тип
питания характерен для многочисленных бактерий, грибов и дрожжей. Среди хемогетеротрофов
есть микробы-паразиты (паратрофы), живущие в теле другого организма – хозяина, питающиеся
веществами его тела. К паразитам относятся возбудители заболеваний человека, животных,
растений.
Остальные виды питания встречаются в специфических условиях.
Фотоорганотрофы для синтеза органических веществ используют СО2, световую
энергию и простые органические соединения. Это живущие в водоемах пурпурные несерные
бактерии.
Для хемолитоавтотрофов источником углерода служит СО2, источником энергии –
реакция окисления неорганических соединений. Бактерии, относящиеся к этой группе, живут в
водоемах, в почве; они специфичны в отношении окисляемого ими вещества. Это бактерии,
окисляющие водород с образованием воды (водородные бактерии), аммиак – до нитратов
(нитрифицирующие бактерии), сероводород – до серной кислоты (бесцветные серобактерии), а
также окисляющие Fe (II) в Fe (III) (железобактерии). Эти микроорганизмы играют большую роль
в круговороте веществ в природе.
Основным источником азотного питания у аутотрофов являются неорганические
соединения азота, т. е. соли азота. У гетеротрофных микроорганизмов — аминокислоты, которые
они используют из белков животного организма, если в нем паразитируют, или получают их
готовыми из питательных сред.
По источникам азота микроорганизмы делят на 3 группы:
1) могут развиваться только при наличии сложных органических форм азота
(молочнокислые, гнилостные бактерии);
2) могут развиваться при наличии одной или двух аминокислот, остальные
синтезируют сами (многие грибы, актиномицеты);
3) усваивают азот из атмосферы, затем восстанавливают азот до аммиака, из которого
синтезируют аминокислоты (клубеньковые бактерии).
Азот входит в состав жизненно важных компонентов микробной клетки.
Все аутотрофные микроорганизмы усваивают азот из неорганических его соединений.
У хемогетеротрофов по отношению к источнику азота проявляется избирательность, как и
по отношению к источнику углерода.
Паразиты используют органические азотсодержащие вещества клеток хозяина.
Источником азота для сапрофитов могут служить как органические, так и неорганические
азотсодержащие соединения. Многие сапрофиты (бактерии, грибы, дрожжи) вообще не
нуждаются в органических соединениях азота, используя его неорганические соединения;
лучшими являются соли аммония. Используя в качестве источника азота нитраты и нитриты,
микроорганизмы восстанавливают эти окисленные формы азота с образованием аммиака, который
и участвует в биосинтетических процессах.
Существуют сапрофиты, способные использовать молекулярный азот (N 2). Они переводят
его в связанное состояние – восстанавливают в аммиак. Эти микроорганизмы называют
азотфиксаторами или азотсобирателями.
Специфичностью отношений микроорганизмов к источнику углерода и азота определяется
круговорот этих элементов в природе. Такая особенность гетеротрофов проявляется и при порче
многих пищевых продуктов, при смене развития одних форм другими.
В качестве универсального источника азота и углерода в питательных средах для
патогенных микробов применяют пептоны.
Источники зольных элементов.
Для синтеза клеточных веществ нужны и различные зольные элементы: сера, фосфор,
калий, кальций, магний, железо. Потребность микроорганизмов в зольных элементах
незначительна. Необходимые для их жизни минеральные соли (сера, фосфор и др.) почти всегда
имеются в естественной питательной среде. Хотя потребность в них и невелика, но при недостатке
в питательной среде даже одного из этих элементов микроорганизмы не будут развиваться и могут
погибнуть. Больше всего требуется фосфора: он входит в состав нуклеиновых кислот, АТФ, АДФ,
принимает участие в различных биохимических превращениях. Лишь немногие микроорганизмы
хорошо усваивают серу и фосфор из органических соединений.
Для большинства микроорганизмов источниками зольных элементов являются
минеральные соли.
Микроэлементы нужны для роста микроорганизмов в незначительных количествах и могут
быть использованы ими также из минеральных солей.
7.4 Факторы роста микроорганизмов
Некоторые виды микроорганизмов не способны сами синтезировать отдельные
органические вещества: аминокислоты, азотистые основания, витамины, вследствие чего не могут
расти при их отсутствии в питательной среде.
Такие соединения являются для них факторами роста. Микроорганизмы, нуждающиеся в
определенном факторе роста, называются ауксотрофными в отличие от прототрофных, которые
способны синтезировать все необходимые для них соединения. Примером природных
ауксотрофных микроорганизмов являются молочнокислые бактерии, которые зависят от наличия в
среде почти всех аминокислот и витаминов.
В 1901 г. Вильдье в дрожжах нашел особое вещество, названное им «биос» — ростовое
вещество.
В 1904 г. наш соотечественник Никитинский установил такие же стимуляторы роста в
культурах плесневых грибов. В дальнейшем подобные вещества были выявлены у патогенных
микроорганизмов и простейших. Одновременно было установлено, что у ряда микробов под
воздействием ничтожно малых количеств ростовых веществ увеличивается накопление микробной
массы и изменяется обмен веществ. Новейшие данные показали, что по химической структуре и
физиологическому действию стимуляторы являются подлинными витаминами или
витаминоподобными веществами.
Все изученные бактерии нуждаются в витаминах или ростовых веществах, которые играют
главным образом роль катализаторов (ускорителей) биохимических процессов бактерийной
клетки. Они же являются структурными единицами при образовании некоторых ферментов.
Какие же витамины необходимы микробам? К витаминам, необходимым для развития
микробов, относят биотин (витамин Н), витамины группы В: витамин B 1 (тиамин),
В2 (рибофлавин), В3 (пантотеновая кислота), В4 (холин), В5 (никотинамид), В6 (пиридоксин),
В7 (гемин), — витамин К и др.
Концентрация витаминов в питательной среде выражается в микрограммах (мкг),
потребность в них колеблется в пределах 0,05—40 мкг/мл. Избыток витаминов задерживает рост
бактерий.
Микробиологическим путем получают эргостерин (провитамин D), рибофлавин (витамин
В2), кобамидцианид (витамин B12), каротиноиды (в том числе и провитамин А) и др.
В промышленности эргостерин получают, используя дрожжи Saccharomyces cerevisiae и
Sacch. carlsbergensis, a также некоторые мицелиальные грибы.
Для получения кристаллического витамина D используют грибы родов Aspergillus,
Penicillium и др.
Концентрат рибофлавина получают с помощью гриба Eremothecium ashbyii.
Продуцентами витамина В12 являются некоторые актиномицеты, пропионово-кислые и
метанообразующие бактерии. В мировой практике для получения витамина В 12 наиболее часто
используют Pseudomonas denitrificans.
Продуцентами β-каротина являются дрожжи рода Rhodotorula, а высокопродуктивным
мутантом, синтезирующим β-каротин, – дрожжи Rhodospоridium diobovatum. Каротин
синтезируют и некоторые актиномицеты, миксобактерии и грибы.
Витамины микробиальной природы широко используют в сельском хозяйстве, медицине,
пищевой промышленности, для косметических средств и других целей.
Кроме витаминов, к факторам роста бактерий относятся пуриновые и пиримидиновыс
основания и их производные (аденин, гуанин, цитозин, тимин, урацил, ксантин и гипоксантин).
Например, для гемолитического стрептококка фактором роста является аденин, для золотистого
стафилококка — урацил, возбудителя столбняка — аденин или гипоксантин.
Некоторые микроорганизмы в качестве фактора роста используют аминокислоты,
синтезирующиеся самой микробной клеткой или находящиеся в среде в готовом виде.
7.4 Питательные среды

Для решения основных задач бактериологического исследования (выделение чистых


культур бактерий, определение их биологических свойств и т. д.) необходимо уметь выращивать
микробов в лабораторных условиях. Это осуществляется на питательных средах.
В состав питательных сред должны входить:
1. Вещества, необходимые для роста и размножения, а также для построения
бактериальной клетки: источники азота, углерода, кислорода и водорода.
2. Неорганические соединения в виде различных солей.
3. Бактериальные витамины, или так называемые факторы роста.
Помимо этого, питательные среды должны иметь определенную вязкость, влажность и
реакцию среды. Микробы приспосабливаются к некоторым колебаниям этой реакции, но для
каждого микроба имеются границы, пределы которых эти колебания не должны переходить.
Для культивирования бактерий используют питательные среды, к которым предъявляется
ряд требований.
Требования, предъявляемые к средам:
1) должны быть питательными, т. е. содержать в легко усвояемом виде все вещества,
необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. Ими являются
источники органогенов (углерод, кислород, водород, азот, фосфор, калий, магний, кальций) и
минеральных (неорганических) веществ, включая микроэлементы. Минеральные вещества не
только входят в структуру клетки и активизируют ферменты, но и определяют физико-химические
свойства сред (осмотическое давление, рН и др.). При культивировании ряда микроорганизмов в
среды вносят факторы роста - витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может
синтезировать;
Внимание! Микроорганизмы, как все живые существа, нуждаются в большом
количестве воды.
2) должны иметь оптимальную концентрацию водородных ионов - рН, так как только при
оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут
усваивать питательные вещества.
Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (рН 7,2-7,4).
Исключение составляют холерный вибрион - его оптимум находится в щелочной зоне (рН 8,5-9,0)
и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции (рН 6,2-6,8).
Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их
жизнедеятельности не изменили рН, среды должны обладать буферностью, т. е. содержать
вещества, нейтрализующие продукты; обмена;
3) должны быть изотоничными для микробной клетки; т. е. осмотическое давление в среде
должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальна среда,
соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида;
4) должны быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту
изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды (состав, рН и др.);
5) плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов
консистенцию;
6) должны обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, т. е.
соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH 2. Этот
потенциал показывает насыщение среды кислородом. Для одних микроорганизмов нужен высокий
потенциал, для других - низкий. Например, анаэробы размножаются при RH 2 не выше 5, а аэробы -
при RH2 не ниже 10. Окислительно-восстановительный потенциал большинства сред
удовлетворяет требованиям к нему аэробов и факультативных анаэробов;
7) быть по возможности унифицированным, т. е. содержать постоянные количества
отдельных ингредиентов. Так, среды для культивирования большинства патогенных бактерий
должны содержать 0,8-1,2 г/л аминного азота NH2, т. е. суммарного азота аминогрупп
аминокислот и низших полипептидов; 2,5-3,0 г/л общего азота N; 0,5% хлоридов в пересчете на
натрия хлорид; 1% пептона.
Желательно, чтобы среды были прозрачными - удобнее следить за ростом культур, легче
заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

Классификация сред
Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов
неодинакова. Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор
той или иной среды влияют цели исследования.
В настоящее время предложено огромное количество сред* в основу классификации
которых положены следующие признаки.
1. Исходные компоненты. По исходным компонентам различают натуральные и
синтетические среды.
Натуральные среды готовят из продуктов животного и растительного происхождения. В
настоящее; время разработаны среды, в которых ценные пищевые продукты (мясо и др.) заменены
непищевыми: костной и рыбной мукой, кормовыми дрожжами, сгустками крови и др. Несмотря на
то, что состав питательных сред из натуральных продуктов очень сложен и меняется в
зависимости от исходного сырья, эти среды нашли широкое применение.
К средам такого типа относятся овощные или фруктовые соки, ткани животных, молоко,
отвары мяса, вытяжки почвы, различные части растений, клетки микроорганизмов.
На натуральных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, поскольку такие
среды содержат все компоненты, необходимые для их роста и развития. Однако эти среды имеют
сложный, непостоянный химический состав и мало пригодны для изучения обмена веществ
микроорганизмов, так как в них трудно учесть потребление ряда компонентов и образование
продуктов метаболизма. Натуральные среды используются главным образом для поддержания
культур микроорганизмов, накопления биомассы и для диагностических целей.
Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и
неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворенных в дважды
дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в том, что состав их постоянен
(известно, сколько и какие вещества в них входят), поэтому эти среды легко воспроизводимы.
Они широко используются при исследовании обмена веществ, физиологии и биохимии
микроорганизмов.
Наряду с натуральными и синтетическими выделяют полусинтетические среды.
Главными компонентами полусинтетических сред являются соединения известного химического
состава – углеводы, соли аммония или нитраты, фосфаты и др. Однако в них всегда включаются
вещества неопределенного состава, такие как дрожжевой, почвенный, кукурузный экстракт или
гидролизат казеина. Эти среды находят широкое применение в промышленной микробиологии
для получения аминокислот, витаминов, антибиотиков и других важных продуктов
жизнедеятельности микроорганизмов.
2. Состав. Среды делят на простые и сложные.
К простым относят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), бульон и
агар Хоттингера, питательный желатин и пептонную воду.
Сложные среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и
другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма.
3. Консистенция (физическое состояние, степень плотности). Среды бывают жидкие,
полужидкие, плотные и сыпучие.
Жидкие среды применяют для накопления биомассы или продуктов обмена, для
исследования физиологии и биохимии микроорганизмов.
Сыпучие среды применяют главным образом в промышленной микробиологии для
культивирования некоторых продуцентов физиологически активных соединений. К таким средам
относятся, например, разваренное пшено, отруби и др.
Плотные среды используют для выделения чистых культур, определения количества
жизнеспособных микроорганизмов, хранения культур в коллекциях, для накопления биомассы и
др.
Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым для получения среды
нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар желатин или силикагель (кремнекислый
гель).
Агар-агар - полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Он не
является для микроорганизмов питательным веществом и служит только для уплотнения среды. В
воде агар плавится при 80-100° С, застывает при 40-45° С. Поэтому на агаризованных средах
можно культивировать микроорганизмы при относительно высокой температуре.
Желатин - белок животного происхождения, это экстракт, получаемый из субстратов,
богатых коллагеном – белком костей, хрящей, сухожилий, чешуек.
При 25-30° С желатиновые среды плавятся, поэтому культуры на них обычно выращивают
при комнатной температуре. Плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается, и они
плохо застывают. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество -
при их росте среда разжижается. Это свойство желатина ограничивают его применение в качестве
уплотняющего средства.
Силикагель используют как твердую основу для синтетических сред строго определенного
состава.
Кроме того, в качестве плотных сред применяют свернутую сыворотку крови, свернутые
яйца, картофель, среды с селикагелем.
4. Назначение:
а) основные (общеупотребительные) среды служат для культивирования большинства
патогенных микробов. Это МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода;
б) специальные среды служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не
растущих на простых средах. Например, для культивирования стрептококка к средам прибавляют
сахар, для пневмо- и менингококков - сыворотку крови, для возбудителя коклюша - кровь;
в) элективные (избирательные) среды служат для выделения определенного вида
микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих
микроорганизмов. Так, соли желчных кислот, подавляя рост кишечной палочки, делают среду
элективной для возбудителя брюшного тифа. Среды становятся элективными при добавлении к
ним определенных антибиотиков, солей, изменении рН.
Жидкие элективные среды называют средами накопления. Примером такой среды служит
пептонная вода с рН 8,0. При таком рН на ней активно размножается холерный вибрион, а другие
микроорганизмы не растут;
г) дифференциально-диагностические среды позволяют отличить (дифференцировать)
один вид микробов от другого по ферментативной активности, например среды Гисса с
углеводами и индикатором. При росте микроорганизмов, расщепляющих углеводы, изменяется
цвет среды;
д) консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки
исследуемого материала; в них предотвращается отмирание патогенных микроорганизмов и
подавляется развитие сапрофитов. Пример такой среды - глицериновая смесь, используемая для
сбора испражнений при исследованиях, проводимых с целью обнаружения ряда кишечных
бактерий.
Приготовление питательных сред
Основные питательные среды
Наиболее распространенной жидкой средой является мясо-пептонный бульон. Он
готовится на мясной воде
Мясная вода. Мелко нарубленное мясо, освобожденное от жира и сухожилий, смешивают с
двойным по весу количеством воды (500 г+1 л воды), настаивают 24 часа при комнатной
температуре, фильтруют через кусок полотна и тщательно отжимают мясо, оставшееся на нем.
Мясная вода представляет собой красноватую жидкость кислой реакции. Она содержит
растворимые белковые вещества (альбумины), экстрактивные вещества и некоторые соли.
Мясную воду кипятят до свертывания белка и фильтруют через бумажный фильтр. При
необходимости сохранить мясную воду ее разливают по флаконам или бутылкам и стерилизуют в
автоклаве при 120° в течение 20 минут (см. стр. 74). В настоящее время также широко
применяется способ горячей экстракции фарша без замачивания его в холодной воде. Мясной
фарш с водой прогревают 1/2 часа, не доводя до кипения, а затем уже кипятят 1 час. Этим методом
лучше пользоваться в летнее время.
Приготовление мясо-пептонного бульона. Бульон готовят из мясной воды, к которой для
повышения питательных свойств прибавляют пептон (1%) и хлористый натрий (0,5%), т. е. на 1 л
мясной воды берут 10 г пептона и 5 г хлорида натрия. Смесь кипятят 10—15 минут при
постоянном помешивании. При этом пептон и соль растворяются. Полученный бульон имеет
кислую реакцию, при которой большинство патогенных микробов не дает роста.
Необходимо поэтому сделать реакцию слабо щелочной.
Приготовление мясо-пептонного  агара. К мясо-пептонному бульону прибавляют от 2 до
4% (в зависимости от сорта) мелко нарезанного агар-агара и кипятят до полного растворения.
Затем дают остыть до 50° и прибавляют для просветления яичный белок (на 1 л агар берут
взбитый и размешанный с небольшим количеством воды белок одного яйца), хорошо взбалтывают
и помещают на 4—5 минут в автоклав. Белок во время кипячения свертывается и увлекает за
собой взвешенные частицы. Полученную мутную жидкость фильтруют в горячем виде через вату,
смоченную горячей водой. Можно обойтись и без яичного белка, но агар получается недостаточно
просветленным. Горячий профильтрованный агар разливают в пробирки по 5— 8 мл или в колбы
по 50—500 мл и стерилизуют в автоклаве 20 минут при 120—125°. После стерилизации пробирки
с еще жидким агаром следует положить почти горизонтально, чтобы агар застыл в скошенном
положении с большой поверхностью, или дать ему застыть в виде столбика.
Среда Эндо. Готовится непосредственно перед употреблением. К 100 мл мясо-пептонного
агара (pH 7,6) стерильно добавляют 1 г химически чистой лактозы, растворенной в 5 мл
стерильной воды, охлаждают до 70° и добавляют смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного
фуксина и 1,25 мл свежеприготовленного 10% раствора сернистокислого натрия, взбалтывают и
разливают по чашкам. Для подсушивания открытые чашки помещают на 30 минут в термостат при
37°.
На среде Эндо кишечная палочка дает колонии красного цвета с металлическим оттенком, а
бактерии тифозно-паратифозной и дизентерийной группы — бесцветные колонии (см. рис. 77 на
вклейке).
Сухие питательные среды
Применение сухих питательных сред приобретает все большее практическое значение.
Стандартность, простота хранения, транспортировки и изготовления делают сухие питательные
среды весьма удобными для работы.
Сухие питательные среды представляют собой светло-желтые гигроскопические порошки
без комков, с влажностью до 10%. В сухом месте, в хорошо закупоренной посуде их можно
хранить длительное время. Они должны хорошо растворяться в дистиллированной воде при
комнатной температуре в концентрации 1,5—6%.
Фильтрование и разливка питательных сред
Жидкие питательные среды и расплавленную желатину фильтруют либо через складчатый
фильтр из фильтровальной бумаги, предварительно смоченной водой, либо через фильтровальное
полотно, накладываемое на стеклянную воронку. Практичнее пользоваться полотняными
фильтрами, ибо они могут служить долгое время, тогда как бумажные фильтры употребляются
лишь однократно. Для фильтрования агаровых сред применяют ватно-марлевый фильтр. Агар
наливают на фильтр горячим. После фильтрования питательные среды разливают в посуду
(флаконы, пробирки).