Вы находитесь на странице: 1из 6

Актуальные аспекты подготовки тромбоцитов

человека к использованию в регенеративной


медицине
М. С. Макаров, к. б. н., научный сотрудник

ГБУЗ «Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н. В. Склифосовского»


департамента здравоохранения г. Москвы

Actual aspects of human platelets preceeding treatments for use in regenerative medicine
M. S. Makarov
Scientific and Research Institute of Emergency Care n. a. N. V. Sklifosovsky, Moscow, Russia

Резюме Summary
В статье рассматриваются вопросы, связанные с подготовкой тромбоци- The human platelet preparing for different aims of regenerative
тов человека для разных целей регенеративной медицины, в свете совер- medicine was described in the light of upgrading methods,
шенствования методик запуска и реализации биологического потенциала based on platelets’ biological potential stimulation and re-
тромбоцитов. alization.
Ключевые слова: тромбоциты, гранулы, дегрануляция, регенеративная Key word: platelets, granules, degranulation, regenerative
медицина. medicine.

Т ромбоциты человека содержат


большое количество биологически
активных веществ с высоким репара-
бывает снижено при многих патоло-
гиях, иногда это снижение является
очень резким [17]; кроме того, даже
адекватным использование аллогенной
БоТП или ТК. Морфофункциональ-
ный анализ тромбоцитов позволяет
тивным потенциалом [18–20, 29, 30], у здоровых людей содержание био- отбирать дозы с высоким уровнем
который может быть использован в ле- логически полноценных тромбоцитов Dтр.гр. и, соответственно, высоким со-
чении многих тканевых дефектов. Для с гранулами (Dтр.гр.,%) может сильно держанием репаративных факторов.
успешного применения тромбоцитов варьировать [7, 8]. По нашим данным, Если учесть, что объем одной дозы
или их компонентов в регенеративной репаративный эффект аутологичной ТК составляет 100–120 мл, то общее
медицине немаловажную роль игра- БоТП заметно слабеет при уровне Dтр.гр. число тромбоцитов с гранулами в ней
ет доклинический этап, связанный меньше 30 % (норма в циркулирующей может достигать 200 млрд. Стандарт-
с подготовкой тромбоцитов, выбором крови 35–75 %). Стоит отметить, что ная доза БоТП обычно не превышает
наиболее адекватной техники их ис- значения Dтр.гр., равные 20–30 %, до- 10–20 мл и содержит не более 10–15
пользования. В зависимости от типа вольно часто встречаются у пациентов млрд биологически полноценных
патологии стимуляция репаративных и не приводят к развитию геморрагиче- тромбоцитов, поэтому при массовом
процессов и, соответственно, доклини- ских осложнений, однако полученная производстве тромбоцит-насыщенных
ческая подготовка тромбоцитов могут у них аутологичная БоТП может быть препаратов будет удобнее использовать
осуществляться разными способами. недостаточно эффективной для репа- ТК, а не БоТП. При этом у здоровых
рации тканей. Кроме того, у пациентов людей уровень Dтр.гр. в БоТП и афе-
Выбор источника тромбоцитов с воспалительными процессами повы- резных ТК является сходным. В ЛТС,
В настоящее время единственным шена вероятность того, что в БоТП полученном из цельной крови, кон-
эффективным источником тромбоци- попадут лейкоциты или даже целые центрация тромбоцитов может быть
тов человека является кровь, из кото- лейкоцит-тромбоцитарные комплек- в 2–5 раз больше, чем в БоТП или ТК,
рой можно получить богатую тром- сы [30]. Есть мнение, что присутствие однако их качество достоверно ниже
боцитами плазму (БоТП), аферезный лейкоцитов в БоТП увеличивает ее ан- [7, 9, 10]. Простота получения ЛТС
тромбоцитный концентрат (ТК), лей- тибактериальное действие [22], однако сочетается с фактическим неиспользо-
котромбослой (ЛТС) [5, 6]. Считается, при этом часто происходит угнетение ванием этого продукта в трансфузио-
что для регенеративной медицины наи- репаративных процессов [22, 28–30]. логии: фракция ЛТС, по сути, является
более подходит выделенная из крови Поэтому большинство исследовате- «отходом» производства при заготовке
пациента аутологичная БоТП, которая лей рекомендуют применять БоТП без плазмы и эритромассы, хотя потенци-
не вызывает иммунологических ослож- лейкоцитов. В тех случаях, когда репа- ально содержит большое количество
нений [18]. С другой стороны, качество рация не подразумевает прямого и ча- биологически активных тромбоцитов.
тромбоцитов (их структурная целост- стого контакта тромбоцитов с клетками Считается, что ТК, полученные пу-
ность и функциональная активность) циркулирующей крови, представляется тем пулирования тромбоцитов ЛТС,

46 Медицинский алфавит № 28 / 2017, том № 4. Современная лаборатория E-mail: medalfavit@mail.ru


имеют повышенный риск выбраковки составляют 35 и 20 % соответствен-
в случае контаминации [6], кроме того, но [8]. В процессе выделения тромбо-
тромбоциты ЛТС очень быстро теряют цитов с помощью аппаратного афереза
свою жизнеспособность в процессе используется ускорение 1 тыс. g, при
краткосрочного хранения [8]. Все это этом качество клеток в полученных ТК
снижает пригодность тромбоцитов практически не отличается от того, что
ЛТС для задач регенеративной меди- наблюдалось в исходной крови доно-
цины. С другой стороны, дозы ЛТС ра [10]. Исследования in vitro подтвер-
можно использовать, в частности, как ждают, что ускорение от 1 до 2 тыс. g
первичное сырье для выделения уже значимо не влияет на пул тромбоцитов
отдельных компонентов, секретируе- с гранулами и не снижает их морфо-
мых тромбоцитами. функциональных характеристик [9].
Следовательно, такое ускорение оп-
Оптимизация процедуры тимально для концентрирования тром-
центрифугирования боцитов.
Центрифугирование применяется Таким образом, для наилучшей
практически во всех методах выде- сохранности тромбоцитов с гранулами
ления тромбоцитов. Для получения рекомендуется выделять плазму при
аутологичной БоТП из цельной крови 300–350 g, а затем концентрировать
обычно используют «мягкое» ускоре- при 1–2 тыс. g. В зарубежной лите-
ние от 150 до 500 g [5, 15, 19], хотя ратуре указывается, что для целей
в ряде работ БоТП выделяют при регенеративной медицины наиболее
600–800 g [16–18]. Общая концентра- подходит БоТП, содержащая 2–3 млн
ция клеток в полученных образцах тромбоцитов на 1 мкл [20, 29], хотя
может весьма варьировать; есть мне- и нет четкого обоснования именно
ние, что полноценная БоТП должна такой концентрации. При этом сто-
содержать не менее 1 млн тромбоцитов ит отметить, что ресуспендирование
на 1 мкл [29–31], то есть фактически тромбоцитов можно проводить как
равнозначна тромбоконцентрату. Для плазмой (свободной от клеток), так
Рисунок 1. Адгезия тромбоцитов с гранулами
получения указанной концентра- и другой физиологической средой;
на коллагеновом субстрате: а) в плазме; б)
ции в одних работах рекомендуется в изотоническом растворе хлорида натрия. в бесплазменной среде невозможна
использовать ускорение 700–800 g Витальная окраска трипафлавином и акри- агрегация тромбоцитов, однако если
диновым оранжевым. Увеличение: 1 500×.
[16, 18, 20], в других только 460–500 значения рН и тоничности раствора
g [12, 15]; считается, что правильно по- соответствуют норме, морфофункци-
добранное ускорение позволяет тонко что требует большой предподготовки. ональный статус тромбоцитов сохра-
разделить фракцию плазмы на допол- Гораздо удобнее представляется сле- няется. Это показано нами на приме-
нительные фракции. Собственно БоТП дующая процедура: сначала провести ре 0,15 М фосфатно-солевого буфера
представляет собой та из них, которая «мягкое» центрифугирование крови PBS (рН = 7,2–7,4) и изотоничного
после центрифугирования располо- для выделения плазмы с тромбоцитами, раствора хлорида натрия. Концентри-
жена ближе всего к слою лейкоцитов. которую затем можно концентрировать рование тромбоцитов в бесплазмен-
Над этой фракцией находятся фракции путем «жесткого» центрифугирования, ной среде может быть особенно вос-
с меньшим содержанием тромбоцитов, осаждающего тромбоциты. В транс- требовано при изготовлении тромбо-
их использовать не рекомендуют; от- фузиологии широко распространено цит-насыщенных биотрансплантатов.
бор БоТП осуществляют путем пред- центрифугирование при 3,5–4,5 тыс. g, Так, при контакте БоТП с адгезивным
варительного удаления всех верхних которое разделяет кровь на три фрак- субстратом (коллаген, хитозан и др.)
фракций плазмы или путем аккуратного ции: бесклеточную плазму, лейкотром- все тромбоциты с гранулами чаще все-
аспирирования нижней фракции, что боцитарный слой и эритромассу [15]. го адгезируют с образованием круп-
в обоих случаях создает риск спонтан- Однако в этом случае снижается со- ных уплощенных агрегатов (рис. 1 а)
ного перемешивания плазмы. Во мно- держание биологически полноценных и почти никогда не адгезируют поо-
гих работах описаны идеи оптимизации тромбоцитов: по нашим данным, после диночке. Образование агрегатов резко
этих методик за счет тонкого подбора центрифугирования при 3,5–4,5 тыс. g повышает вероятность быстрой дегра-
ускорения, температурного режима популяция тромбоцитов с гранулами нуляции значительной массы клеток
и времени центрифугирования [18–20, теряет до 25 % от всего своего соста- и потери ими биологически активных
27], однако единого мнения о режимах ва [10]. Если в исходной крови доноров веществ. В то же время в условиях
центрифугирования не найдено. Кроме и в БоТП после мягкого центрифугиро- бесплазменной среды тромбоциты
того, подобную оптимизацию (весьма вания уровень Dтр.гр. составляет в сред- с гранулами адгезируют по отдель-
длительную) необходимо проводить нем 55–56 %, то в ЛТС всего 40–42 %, ности (рис. 1 б), лучше проникают
для каждого типа центрифуги отдельно, а нижние пределы Dтр.гр. в этом случае вглубь адгезивного субстрата, при

E-mail: medalfavit@mail.ru Медицинский алфавит № 28 / 2017, том № 4. Современная лаборатория 47


этом вероятность потери гранул за- тоген-инактивированных ТК имеет позволяет получить биологически
метно ниже, чем в плазме. Суспензия такую же динамику, что и в стандарт- безопасные ТК без значительного
тромбоцитов в виде БоТП адекватна ных ТК [13]. Считается, что исполь- снижения качества клеток в их со-
для инъекционного введения, а также зование амотосален-обработанных ставе, однако использовать ТК стоит
для производства биоконструкций, ТК не оказывает значительного отри- непосредственно после инактивации
предназначенных для быстрого ис- цательного влияния на клиническую патогенов.
пользования. Отмывание тромбоцитов эффективность трансфузий, хотя
от плазмы может быть эффективно при этом скорректированное число Пути использования
при производстве сложных компо- прироста тромбоцитов и их выжи- биологического потенциала
зитных биотрансплантантов. ваемость в крови достоверно ниже, тромбоцитов в регенеративной
чем при использовании обычных медицине
Необходимость патоген- ТК [11, 36]. Также отмечается сни- Тромбоциты содержат свыше
инактивации жение коагуляционных свойств ТК 200 типов секреторных белков и по-
В процессе заготовки компонен- in vitro [36, 39]. Наши исследования этому способны стимулировать мно-
тов крови всегда важно максимально показывают, что уже через 10–15 ми- гие физиологические реакции [32].
снизить риск передачи гемотрансмис- нут после патоген-инактивации с ис- In vivo высвобождение тромбоцита-
сивных инфекций. Эта проблема обо- пользованием амотосалена (техно- ми их биологически активных компо-
стряется при активизации массового логия ИНТЕРСЕПТ) ТК теряют от 4 нентов фактически осуществляется
донорства, при работе в регионах с не- до 15 % тромбоцитов с гранулами, лишь одним способом — ​через де-
благоприятной эпидемиологической через одни сутки хранения потери со- грануляцию тромбоцитов в процессе
обстановкой [4, 14], однако даже у ка- ставляют в среднем 29 %, через двое активации. В лабораторных условиях
дровых доноров имеется вероятность суток — ​38 %, через трое — ​90 % [3]. эти компоненты можно также выде-
невыявления контаминаций в усло- Для обычных ТК динамика снижения лить путем криодеструкции тромбо-
виях серонегативного окна [6, 15]. числа тромбоцитов с гранулами через цитов при низких и ультранизких
Поэтому проблема карантинизации 1–3 суток составляет в среднем 8, 15 температурах, с помощью высоких
компонентов крови всегда является и 70 % соответственно [8], то есть доз детергентов (диметилсульфоксид,
актуальной. патоген-инактивация ТК вызывает тритон Х‑100), кроме того, фракцию
Тромбоциты человека могут быть ускоренную потерю пула биологиче- гранул тромбоцитов можно селек-
карантинизированы только в случае ски полноценных клеток. При этом тивно выделить путем центрифуги-
их длительного хранения путем кри- ТК с исходным уровнем Dтр.гр. выше рования БоТП при 12–22 тыс. g [26].
оконсервации. Эффективные методы 60 % после инактивации патогенов При этом нужно учитывать, что
криоконсервирования тромбоцитов сохраняют нормальный морфофунк- высвобождение всего объема тром-
до сих пор очень слабо распростра- циональный статус тромбоцитов в те- боцитарных гранул далеко не всегда
нены в службе крови [2]; в условиях, чение двух суток и, следовательно, адекватно при клинической работе.
когда доступно лишь краткосрочное более предпочтительны для короткого Известно, что компоненты гранул
хранение тромбоцитов (в пределах, хранения. Нужно подчеркнуть, что тромбоцитов участвуют в развитии
установленных регламентом), един- технология инактивации патогенов многих патофизиологических про-
ственным способом устранения риска ИНТЕРСЕПТ не вызывала спонтан- цессов, а также могут ухудшать те-
инфицирования патогенами является ной активации и дегрануляции тром- чение уже имеющихся патологий [23,
их направленная инактивация. К на- боцитов. Можно предположить, что 29, 33]. Поэтому способы реализации
стоящему моменту наиболее распро- снижение уровня Dтр.гр. обусловлено биологического потенциала тром-
странены фотодинамические методы именно структурными нарушениями боцитов должны соответствовать
патоген-инактивации с использова- тромбоцитов. В тромбоцитах нукле- поставленной клинической задаче.
нием ДНК- и РНК-интеркаляторов, иновые кислоты локализованы в ми- Так, использование БоТП с ин-
в первую очередь амотосалена. Счи- тохондриях (кольцевая ДНК, транс- тактными (неактивированными)
тается, что амотосален-индуцирован- портные РНК), в немногочисленных клетками оправданно в случае инъ-
ная обработка компонентов крови рибосомах и в гранулах (микроРНК, екционного введения в ткани, насы-
полностью нейтрализует большин- информационные РНК) [9, 26, 33]. щенные адгезивно привлекательными
ство известных болезнетворных Судя по всему, амотосален не вызы- субстратами. К ним относятся кожа,
микроорганизмов [25]. Действие вает нарушения функций митохон- хрящ, сухожилия и связки; при кон-
амотосалена собственно на сами дрий тромбоцитов и не запускает такте с межклеточным матриксом
тромбоциты достаточно противоре- митохондриальный путь апоптоза. этих тканей (коллаген, гиалуроно-
чиво. Так, есть данные, что обработка Не исключено, что интеркаляция вая кислота, лектины) тромбоциты
амотосаленом не повышает рисков амотосалена с микроРНК вызывает будут массово активироваться и де-
развития спонтанной активации или развитие у последних нестандарт- гранулировать, стимулируя в первую
апоптоза тромбоцитов. В условиях ных реакций, которые приводят к де- очередь ангиогенез и пролиферацию
короткого хранения уровень Р-се- градации тромбоцитарных гранул. диплоидных клеток [24, 28]. В тех
лектина и фосфатидилсерина в па- В целом технология ИНТЕРСЕПТ ситуациях, где для лекарственных

48 Медицинский алфавит № 28 / 2017, том № 4. Современная лаборатория E-mail: medalfavit@mail.ru


сред требуется повышенная прони- жизнедеятельности клеток. Однако надеживающие результаты экспе-
кающая способность, очень эффек- если тромбоцитарные компоненты риментов, эта техника требует еще
тивной может быть БоТП с 30–40 % не находятся в культуральной среде значительной оптимизации.
диметилсульфоксида (ДМСО). Для непосредственно, то подобное уг- Интересным является вопрос
медицинских целей ДМСО исполь- нетение может отсутствовать. Так, об изготовлении биотрансплантатов,
зуется преимущественно в качестве при использовании тромбоцитар- насыщенных интактными тромбо-
трансдермального агента; в то же ного геля (полученного из БоТП цитами. С одной стороны, наличие
время известно, что при 30–40 % путем активации 10-процентным в трансплантате биологически ак-
в БоТП происходит быстрая и мас- хлоридом кальция) с общим содер- тивных тромбоцитов увеличивает
совая дегрануляция всех биологи- жанием тромбоцитов с гранулами надежность выделения ими гранул.
чески активных тромбоцитов [10]. свыше 200 млн жизнедеятельность Если тромбоцитарные факторы на-
Таким образом, комбинация БоТП фибробластов человека нисколько ходятся в растворенном виде, высока
с ДМСО позволила бы доставлять не снижается, более того, отмеча- вероятность их быстрого вымывания
секретируемые тромбоцитами факто- ется дозозависимый эффект стиму- и потери при нанесении на рану; если
ры репарации внутрь плотных тканей ляции пролиферации фибробластов тромбоцитарные факторы инкорпори-
с плохо развитой системой сосудов, по мере повышения общего числа рованы внутрь матрицы, они могут
например, при лечении ревматиче- тромбоцитов с гранулами в геле оказаться недостаточно аттрактив-
ских заболеваний и амилоидоза. от 100 до 800 млн. По всей види- ными для клеток организма и не про-
В работе с клеточными куль- мости, тромбоцитарные факторы извести желаемого эффекта. В то же
турами in vitro интенсивный рост в составе такого геля оказываются время наличие в биотрансплантате
клеток наблюдается при использо- инкорпорированы внутрь своеобраз- жизнеспособных тромбоцитов с гра-
вании предварительно активиро- ной матрицы, которая затрудняет нулами при контакте с активирующим
ванной или криодеструктированной их тотальный выход в суспензию, агентом в ране создаст направленный
БоТП [16, 21]. Судя по всему, наибо- вследствие чего клетки в культуре массовый выход биологически актив-
лее адекватным активатором тром- испытывают воздействие материала ных веществ. Однако нельзя забывать,
боцитов в данном случае является не от 800 млн тромбоцитов с гра- что тромбоцит представляет собой
коллаген, поскольку другие широко нулами, а от гораздо меньшего их клетку «одноразового» действия, ко-
доступные активаторы (тромбин, числа. Гель на основе аутологичной торая после полной активации сразу
адреналин, 10-процентный хлорид БоТП весьма эффективен при лече- переходит в состояние инактивации
кальция) дают меньший рост-сти- нии хронических трофических ран, и уже не способна к функционирова-
мулирующий эффект. Компоненты некоторых дефектов кости, однако нию. Кроме того, выброс гранул тром-
тромбоцитарных гранул при введе- и здесь критическую роль играет ка- боцитами in vivo всегда носит массо-
нии в культуральную среду способны чество исходных тромбоцитов [12, вый характер, поскольку дегрануляция
значительно усилить пролифератив- 27, 38]. Кроме того, тромбоцитар- одной клетки автоматически приводит
ную активность клеток, в том числе ный гель требует регулярной заме- к дегрануляции большого числа тром-
мультипотентных [16, 21, 22, 35]. Од- ны с периодичностью не реже семи боцитов [24]. Таким образом, тром-
нако в данном случае особенно остро суток, что легко осуществимо, если боцит-насыщенные трансплантаты
встает проблема расчета адекватной использование геля носит форму создадут первоначально большой при-
дозы БоТП. В большинстве работ аппликаций [12]. Однако если гель ток биологически активных веществ
она просто отсутствует, в отдельных помещают в толщу ткани (в первую в область раны, но без поддержки его
случаях оценивается концентрация очередь при лечении дефектов опор- в последующем. В норме дегрануля-
определенных факторов из гранул но-двигательного аппарата), то его ция тромбоцита занимает не больше
тромбоцитов без определения ка- замена представляется уже затруд- одного часа [24, 32]; не исключено
чества самих клеток. В результате нительной. Для этих целей требу- что этот процесс можно искусственно
в работе с культурами разных типов ется использовать более стабильные удлинить, то есть сделать так, чтобы
неоднократно показано ингибирую- и долгоживущие матрицы. Инкорпо- не все гранулы выходили из клеток
щее и про-апоптотическое действие рирование компонентов тромбоцитов единовременно, или добиться поэ-
БоТП [23, 37]. По нашим данным, внутрь композитных структур, орга- тапной дегрануляции тромбоцитов
диплоидные клетки (фибробласты нических и неорганических матриц из разных областей трансплантата
человека, ММСК костного мозга) представляется весьма оправданным (при которой сначала дегранулируют
имеют наибольшую пролифера- при создании биологических транс- клетки на поверхности, затем клет-
тивную активность без снижения плантатов, часто комбинированных ки, лежащие глубже, и т. д.). Однако
их жизнеспособности при исполь- с диплоидными клетками. На сегод- в любом случае последовательная,
зовании 100–150 млн тромбоцитов няшний такой подход применяют растянутая во времени дегрануляция
с гранулами в расчете на 100 тыс. в основном для создания костных тромбоцитов будет ограничена корот-
клеток в культуре. При уровне тром- трансплантатов, в том числе с ис- ким сроком их жизни, который in vivo
боцитов с гранулами 200 млн и выше пользованием методик трехмерной составляет 7–8 суток [32], а в лабора-
происходит выраженное угнетение печати [30, 38, 40]. Несмотря на об- торных условиях значительно сокра-

E-mail: medalfavit@mail.ru Медицинский алфавит № 28 / 2017, том № 4. Современная лаборатория 49


щается [8–10]. Насыщать же повторно дегрануляции. На сегодняшний день
трансплантат тромбоцитами, когда он нами отработаны методики по стаби-
уже находится в ране, представляет- лизации тромбоцитов с помощью ан-
ся проблематичным. Таким образом, тиагреганта тикагрелора и наночастиц
на сегодняшнем этапе имеет смысл серебра (рис. 2); ведется работа по ис-
использовать тромбоцит-насыщенные следованию возможности с помощью
биотрансплантаты для тех случаев, наносеребра вызывать избирательную
когда материал тромбоцитов способен дегрануляцию тромбоцитов, то есть
давать быстрый эффект и есть воз- выделение ими гранул лишь с опре-
можность регулярной смены транс- деленными веществами. Это направ-
плантата. Это возможно при лечении ление в клеточных технологиях пока
обширных ран кожи, трофических язв, отсутствует, однако есть основания
ожогов; кроме того, по нашим данным, считать избирательную дегрануля-
однократное введение комбинаций цию тромбоцитов возможной. Пока-
коллагена и БоТП значительно уско- зано, что внутри одного тромбоцита
ряет рост костной ткани и достаточно гранулы могут отличаться по хими-
для восполнения экспериментальных ческому составу и скорости выхода
тканевых дефектов [1, 27, 34]. Есть из клетки в процессе активации [24].
основания считать, что использование Не исключено, что стабилизация и из-
биотрансплантатов с живыми тромбо- бирательная дегрануляция тромбо-
цитами откроет новые направления цитов позволит получать суспензии,
в регенеративной медицине. обогащенные определенным набором
биологически активных веществ. Это
Селекция качественных создаст возможность на основе одного
тромбоцитов и того же материала (БоТП) получать
Уже неоднократно говорилось разнотипные лекарственные формы.
о важности отбора тромбоцитных Тромбоциты человека являются
доз с высоким уровнем функцио- Рисунок 2. Селективное выделение тромбо- многофункциональными клетками,
нально активных клеток [5, 10, 14, цитов с гранулами: а) тромбоциты с грану- но при этом имеют лишь один фи-
лами, адгезирующие на  стеклянных буси-
19]. По нашим данным, значение зиологический способ реализации
нах в присутствии наночастиц серебра; б)
Dтр.гр. и в крови доноров, и в ТК обыч- тромбоциты с гранулами после отделения своих репаративных функций, кото-
но не превышает 74–75 %; уровень от бусин. Витальная окраска трипафлавином рый напрямую связан с гранулами
и акридиновым оранжевым. Увеличение: 400×.
Dтр.гр. свыше 80 % наблюдается толь- и дегрануляцией. Это создает опре-
ко у некоторых пациентов, в первую деленную сложность в выборе адек-
очередь на пике тромботических ос- нейшего клинического использования ватной тактики лечения тканевых
ложнений [17]. Опыт показывает, что тромбоцитов. Кроме того, разделение дефектов с помощью тромбоцитов.
тромбоцитные дозы с нормальным тромбоцитов на сортере MoFlo ча- Вместе с тем не вызывает сомнений,
значением D тр.гр. (35–75 %) эффек- сто сопровождается их спонтанной что тромбоциты являются очень цен-
тивны не только в трансфузиологии, дегрануляцией. Более эффективной ным и перспективным объектом для
но и при решении других клинических представляется технология разделе- решения многих медико-биологиче-
задач [1, 3, 12]. Вместе с тем может ния тромбоцитов, основанная на их ских задач.
возникнуть ситуация, когда наличие адгезии. При контакте БоТП с суб-
биологически неполноценных тром- стратом тромбоциты с гранулами Список литературы
боцитов (лишенных гранул, функци- адгезируют, тогда как тромбоциты 1. Ваза А. Ю., Макаров М. С., Сласти-
онально неактивных) будет мешать без гранул останутся в суспензии. нин В. В., Боровкова Н. В., Клюквин И. Ю.,
эффективному применению БоТП Удаление биологически полноценных Похитонов Д. Ю., Пономарев И. Н. Эф-
фективность комбинации аллогенной
в регенеративной медицине. Удалять тромбоцитов с адгезивного субстрата богатой тромбоцитами плазмы с  кол-
тромбоциты без гранул из готовых доз можно проводить с помощью протеаз лагеном при лечении дефектов бе-
БоТП или ТК на базе трансфузиоло- или хелатирующих агентов, при этом дренной кости у крыс // Трансплантоло-
гия. —2016. —№ 2. — ​С. 36–44.
гических отделений на сегодняшний нужно учитывать, что дегрануляция
2. Высочин И. В., Кобзева Е. Н. Криоконсер-
день не представляется возможным. начинается уже через 10–15 минут вирование тромбоцитов. Технологиче-
Использование проточных сортеров после контакта тромбоцита с субстра- ские подходы замораживания и  мето-
(системы MoFlo) позволяет разделить том. В настоящее время в НИИ скорой ды контроля качества (обзор литерату-
ры) // Трансфузиология. — 2012. — № 4,
тромбоциты с гранулами и без гра- помощи имени Н. В. Склифосовского Т. 13. —С. 31–41.
нул на две отдельные фракции, од- ведутся работы по изучению способов 3. Высочин И. В., Макаров М. С., Кобзе-
нако это требует предварительного стабилизации адгезирующих тромбо- ва Е. Н. Влияние технологии инактивации
витального окрашивания, что может цитов, то есть блокировки их на ран- патогенов на качество клеток тромбо-
цитных концентратов // Вестник гемато-
оказаться неприемлемым для даль- ней стадии адгезии, препятствующей логии. —2016. — ​Т. 12, № 4. —С. 32–33.

50 Медицинский алфавит № 28 / 2017, том № 4. Современная лаборатория E-mail: medalfavit@mail.ru


4. Г у б а н о в а   М .  Н . , М а д з а е в   С .  Р . , Ж и - 16. Сергеева Н. С., Шанский Я. Д., Свиридо- products on angiogenesis and tissue re-
бурт Е. Б. Распространенность и встреча- ва И. К., Кирсанова В. А., Ахмедова С. А., pair: a concise update // Front Physiol. —
емость инфекций у доноров крови в Рос- Кувшинова Е. А., Мейснер И. С. Биоло- 2015. —Vol. 6. — ​P. 290.
сии // Вопросы вирусологии. — 2015. —Т. 60, гические эффекты тромбоцитарного 29. Mazzocca A. D., McCarthy M.B., Chowan-
№ 6. — ​С. 29–31 лизата при добавлении в среду культиви- iec D. M., Dugdale E. M., Hansen D., Cote M. P.,
5. Жибурт Е. Б., Коденев А. Т., Ващенко Г. А., рования клеток человека // Гены и клет- Bradley J. P., Romeo A. A., Arciero R. A., Beitzel
Капустов В. И. Совершенствование полу- ки. — 2014. — ​Т. 9, № 1. — ​С. 77–85. K. The positive effects of different platelet-rich
чения концентрата тромбоцитов // Вест- 17. Хватов В. Б., Макаров М. С., Боровко- plasma methods on human muscle, bone,
ник службы крови России. — 2010. — № 2. — ​ ва Н. В. Морфологическая оценка ад- and tendon cells // Am. J. Sports Med. —
С. 22–25. гезивной активности тромбоцитов с по- 2012. — ​Vol. 40, № 8. — ​P. 1742–1749.
6. Жибурт Е. Б. Переливание крови: новые мощью витального окрашивания // Кли- 30. Mehta S., Watson J. T. Platelet rich concen-
возможности // Поликлиника. — 2015. — ническая лабораторная диагностика. — trate: basic science and current clinical ap-
№ 7. — ​С. 93–96. 2013. — № 7. — ​С. 58–61. plications // J Orthop Trauma. — 2008. — ​Vol.
7. Макаров М. С., Боровкова Н. В., Кобзе- 18. Amable P. R., Carias R. B., Teixeira M. V., da 22, № 6. — ​P. 432–438.
ва Е. Н., Высочин И. В., Хватов В. Б. Способ Cruz Pacheco I., Correa do Amaral R. J., 31. Mishra A., Tummala P., King A., Lee B., Kraus
оценки морфофункционального статуса Granjeiro J. M., Borojevic R. Platelet-rich M., Tse V., Jacobs C. R. Buffered plate-
тромбоцитов человека и его применение plasma preparation for regenerative med- let-rich plasma enhances mesenchymal
в клинической практике // Медицинский icine: optimization and quantification of stem cell proliferation and chondrogenic
Алфавит. Современная лаборатория. — cytokines and growth factors // Stem Cell differentiation // Tissue Eng. Part C. Meth-
2012. — № 3. — ​С. 32–34. Res. Ther. — 2013. — ​Vol. 4, № 3. — ​P. 67. ods. — 2009. — ​Vol. 15, № 3. — ​P. 431–435.
8. Макаров М. С., Кобзева Е. Н., Высочин И. В., 19. Anitua E., Andia I., Ardanza B., Nurden 32. Michelson A. D. Platelets. 3rd ed. — ​Amster-
Боровкова Н. В. Хватов В. Б. Применение P., Nurden A. T. Autologous platelets as a dam: Academic Press, 2013, 1351 p.
витального окрашивания для морфо- source of proteins for healing and tissue
regeneration // Thromb. Haemost. — 2004. — ​ 33. Nomura S., Ozaki Y., Ikeda Y. Function and
функционального анализа тромбоцитов
Vol. 91, № 1. — ​P. 4–15. role of microparticles in various clinical
человека короткого хранения // Альма-
settings // Thromb Res. — 2008. — ​Vol. 123,
нах клинической медицины. — 2014. — 20. Civinini R., Macera A., Nistri L., Redl B., Inno- № 1. — ​P. 8–23.
№ 30. — ​С. 83–87. centi M. The use of autologous blood-derived
growth factors in bone regeneration // Clini- 34. Oktay А. O., Demiralp B., Demiralp B. Ef-
9. Макаров М. С., Боровкова Н. В., Хватов В. Б.,
cal Cases in Mineral and Bone Metabolism. — fects of platelet rich plasma and chitosan
Кобзева Е. Н. Влияние центрифугирова-
2011. — ​Vol. 8, № 1. — ​P. 25–31. combination on bone regeneration in ex-
ния на  биологическую полноценность
perimental rabbit cranial defects // The
тромбоцитов человека // Вестник службы 21. Copland I. B., Garcia M. A., Waller E. K., Ro- Journal of Oral Implantology. — 2010. — ​Vol.
крови России. — 2015. —№ 1. — ​С. 41–44. back J. D., Galipeau J. The effect of platelet 36, № 3. — ​P. 175–184.
10. Макаров М. С. Влияние высоких концен- lysate fibrinogen on the functionality of
траций диметилсульфоксида на биоло- MSCs in immunotherapy // Biomaterials. — 35. Pelttari K., Winter A., Steck E., Goetzke K., Hen-
гическую активность тромбоцитов чело- 2013. — ​Vol. 34, № 32. — ​P. 7840–7850. nig T., Ochs B. G., Aigner T., Richter W. Prema-
века в плазме // Медицинский Алфавит. ture induction of hypertrophy during in vitro
22. Freire V., Andollo N., Etxebarria J., Durán J. A., chondrogenesis of human mesenchymal
Современная лаборатория. — 2016. — Morales M. C. In vitro effects of three blood
№ 2. — ​С. 48–52. stem cells correlates with calcification and
derivatives on human corneal epithelial vascular invasion after ectopic transplanta-
11. Накастоев И. М., Грачев А. Е., Гемджян Э. Г., cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. — 2012. — ​ tion in SCID mice // Arthritis Rheum. — 2006. — ​
Цыба Н. Н., Журавлев В. В., Кречетова А. В., Vol. 53, № 9. — ​P. 5571–5578. Vol. 54, № 10. — ​P. 3254–3266.
Кастрикина И. С., Ватагина Е. А., Рыж- 23. Golebiewska E. M., Poole A. W. Secrets of
ко В. В., Городецкий В. М. Клиническая эф- 36. R a m s e y G .   H e m o s t a t i c e f f i c a c y o f
platelet exocytosis — ​what do we really pathogen-inactivated blood compo-
фективность переливаний концентратов know about platelet secretion mecha-
тромбоцитов, подвергнутых инактивации nents // Semin. Thromb. Hemost. — 2016. — ​
nisms? // Br. J. Haematol. — 2014. — ​Vol. 165, Vol. 42, № 2. — ​Р. 172–182.
патогенов // Терапевтический архив. — № 2. — ​P. 204–216.
2013. — ​Т. 85, № 8. — ​С. 77–80. 37. Ranly А. M., McMillan J., Keller T. Plate-
24. Italiano J. E., Richardson J. L., Patel-Hett S., let-derived growth factor inhibits deminer-
12. Оболенский В. Н., Ермолова Д. А., Мака-
Battinelli E., Zaslavsky A., Short S., Ryeom S., alized bone matrix-induced intramuscular
ров М. С., Конюшко О. И., Сторожева М. В.,
Folkman J., Klement G. L. Angiogenesis is cartilage and bone formation: a study of
Боровкова Н. В., Лаберко Л. А., Семено-
regulated by a novel mechanism: Pro- and immunocompromised mice // Journal of
ва Т. В. Стимуляция регенераторных про-
anti-angiogenic proteins are organized into Bone and Joint Surgery A. — 2005. — ​Vol. 87,
цессов в хронических ранах с помощью
separate platelet {alpha}-granules and № 9. — ​P. 2052–2064.
богатой тромбоцитами плазмы // Клини-
differentiall released // Blood. — 2008. — ​Vol.
ческая и экспериментальная хирургия. 38. Roy S., Driggs J., Elgharably H., Biswas S.,
111, № 3. — ​P. 1227–1233.
Журнал имени академика Б. В. Петров- Findley M., Khanna S., Gnyawali U., Berg-
ского. — 2016. — № 1. — ​С. 38–43. 25. Keil S. D. Bengrine A., Bowen R., Marschner S., dall V. K., Sen C. K. Platelet-rich fibrin matrix
Hovenga N., Rouse L., Gilmour D., Duverlie improves wound angiogenesis via induc-
13. Огородникова М. Д., Заботина Т. Н., Бору-
G., Goodrich R. P. Inactivation of viruses ing endothelial cell proliferation // Wound
нова А. А., Очеева Н. Ю., Кадагидзе З. Г.,
in platelet and plasma products using a Repair Regen. — 2011. —  ​V ol. 19, № 6. — ​
Рукавицын О. А. Влияние фотохимиче-
riboflavin-and-UV-based photochemical P. 753–766.
ской обработки и  гамма-облучения
treatment // Transfusion. — 2015. — ​Vol. 55,
на  экспрессию маркеров активации 39. Van Aelst B., Feys H. B., Devloo R., Van-
№ 7. — ​P. 1736–1744.
и апоптоза тромбоцитов // Вопросы ге- hoorelbeke K., Vandekerckhove P., Com-
матологии, онкологии и иммунопатоло- 26. Lannan K. L., Sahler J., Kim N., Spinelli S. L., pernolle V. Riboflavin and amotosalen
гии в педиатрии. — 2011. — ​Т. 10, № 1. — ​ Maggirwar S. B., Garraud O., Cognasse photochemical treatments of platelet
С. 15–20. F., Blumberg N., Phipps R. P. Breaking the concentrates reduce thrombus formation
mold: transcription factors in the anucle- kinetics in vitro // Vox Sang. — 2015. — ​Vol.
14. Потапский В. М., Неминущая Е. И. Алго-
ate platelet and platelet-derived micro- 108, № 4. — ​Р. 328–339.
ритм активизации донорского движения
particles // Front. Immunol. — 2015. — ​Vol.
среди студентов и  курсантов учебных 40. Yun J. H., Han S. H., Choi S. H. Effects of bone
6. — ​P. 48.
заведений Москвы // Трансфузиология. — marrow derived mesenchymal stem cells
2011. — ​Т. 12, № 3. — ​С. 4–16. 27. Malhotra A., Pelletier M., Oliver R., Christou and platelet-rich plasma on bone regen-
C., Walsh W. R. Platelet-rich plasma and eration for osseointegration of dental im-
15. Руководство по приготовлению, исполь-
bone defect healing // Tissue Eng. Part A. — plants: preliminary study in canine three-wall
зованию и обеспечению качества ком-
2014. — ​Vol. 20, № 19–20. — ​P. 2614–2633. intrabony defects // J. Biomed. Mater. Res.
понентов крови/ Европейский комитет
по переливанию крови. — 16 изд. — ​Нанси 28. Martínez C. E., Smith P. C., Palma Alvara- B. Appl. Biomater. — 2014. — ​Vol. 102, № 5. — ​
(Франция): Bialec. — 2010. — 490 с. do V. A. The influence of platelet-derived P. 1021–1030.

E-mail: medalfavit@mail.ru Медицинский алфавит № 28 / 2017, том № 4. Современная лаборатория 51