ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»

1. Протокол процесса валидации/верификации метода в

ГОСТ Р 50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты
из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных Издание: 02
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов ИЛ
ФГБУ «Красноярский референтный центр
Россельхознадзора»
Ф 02-18-03-2013 Лист: 1 из 5

Протокол процесса валидации/верификации метода ГОСТ Р

50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты из мяса
птицы. Метод определения количества мезофильных аэробных и
факультативно-анаэробных микроорганизмов в ИЛ ФГБУ
«Красноярский референтный центр Россельхознадзора».
(Ф 02-18-03-2013, Издание №2).
Наименование Учреждения ФГБУ «Красноярский референтный
центр Россельхознадзора»
Наименование ИЛ ИЛ ФГБУ «Красноярский референтный
центр Россельхознадзора»
Руководитель ИЛ Гук О.О.
РСП Якименко Е.Е.
Ответственные исполнители: Якименко Е.Е.
Сочинская Е.А.

1. Цель верификации – документировано подтвердить, что при

реализации методики ГОСТ Р 50396.1-2010 в бактериологическом отделе
получают результаты испытаний, которые подтверждают точность
выполнения исследований.

2. Условия выполнения измерений.

- температура окружающего воздуха (20-25⁰С);
- относительная влажность воздуха – не более 80%.
- атмосферное давление 630-800 мм.рт.ст.

3. Персонал.
Испытания проводили сотрудники:
- ведущий микробиолог Якименко Е.Е.
- ветврач Сочинская Е.А.
в период с 06.03.17г по 09.03.2017г,
с 28.03.17г по 31.03.2017г

4. Средства измерений, вспомогательные устройства и материалы:

- Весы электронные Scout Pro SPS 601F.
- Весы электронные LP 220S.
- Бокс БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2.
 ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»
1. Протокол процесса валидации/верификации метода в
ГОСТ Р 50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты
из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных Издание: 02
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов ИЛ
ФГБУ «Красноярский референтный центр
Россельхознадзора»
Ф 02-18-03-2013 Лист: 2 из 5

- Термостат электрический суховоздушный охлаждающий ТСО-1/80

СПУ.
- Стерилизатор паровой ГК-100-3.
- Лабораторный автоклав MLS-2420U.
- Лабораторный рН-метр HI-2211.
- Гомогенизатор BAGMIXER 400.
- Воздушный программируемый инкубатор с системой охлаждения
MIR-253.
- Плита электрической Lysva.
- Физиологический раствор 0,85% (Использован хлористый натрий).
- Физиологический раствор 0,85% (Использованы таблетки Рингера).
- Мясо-пептонный агар с глюкозой.
- Питательная среда для определения КМАФАнМ (общего количества
микроорганизмов).

5. Результаты исследования.
Для определения параметра расширенной неопределенности
использовались образцы мяса птицы замороженного. Результаты
исследований приведены в таблице 1.

Таблица 1. Результаты исследования по КМАФАнМ в мясе птицы

замороженном.

Результат исследований по
Номер Дата выдачи
Дата посева КМАФАнМ
пробы результата
Энграф Я.А. Ястребова Н.И.
4
14п 06.03.17 09.03.17 2,0*10 2,7*104
15п 06.03.17 09.03.17 2,5*102 3,1*102
16п 06.03.17 09.03.17 2,0*104 2,0*104
17п 06.03.17 09.03.17 3,5*104 2,0*104
18п 28.03.17 31.03.17 9,0*104 5,1*104
19п 28.03.17 31.03.17 3,0*104 7,2*104
20п 28.03.17 31.03.17 2,5*103 1,0*103
21п 28.03.17 31.03.17 Более 3,0*106 Более 3,0*106
22п 28.03.17 31.03.17 1,9*105 1,7*105
23п 28.03.17 31.03.17 3,0*105 1.4*105
 ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»
1. Протокол процесса валидации/верификации метода в
ГОСТ Р 50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты
из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных Издание: 02
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов ИЛ
ФГБУ «Красноярский референтный центр
Россельхознадзора»
Ф 02-18-03-2013 Лист: 3 из 5

Якименко Е.Е. /___________

Ответственный исполнитель:
Сочинская Е.А. /___________
Согласовано: РСП_Якименко Е.Е. /___________

6. Расчет внутрилабораторного стандартного отклонения

воспроизводимости.
Для вычисления расширенной неопределенности необходимо знать
значение внутрилабораторного стандартного отклонения
воспроизводимости.
Расчётные данные стандартного отклонения воспроизводимости
представлены в таблице 2. Расчёты проводились в соответствии с «ГОСТ
54502-2011. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных.
Руководство по оценке неопределенности измерений при количественных
определениях».
Вычисления стандартного отклонения воспроизводимости SR для n
образцов данной матрицы проводятся по уравнению:

n
(Yi A  Yi B ) 2 / 2
SR  
i 1 n ,
где i – индекс выборки i=1 до n (n ≥ 10);
Yij – логарифмически трансформированные данные испытаний,
выраженные как log10 (КОЕ/г);
j – индекс условий воспроизводимости j =А или В.

Таблица 2. Расчет внутрилабораторного стандартного отклонения

воспроизводимости

i XiA XiB YiA(log10 XiA) YiB(log10XiB) (YiA - YiB)²/2

1 2,00E+04 2,70E+04 4,30 4,43 0,0170

2 2,50E+02 3,10E+02 2,40 2,49 0,0087
3 2,00E+04 2,00E+04 4,30 4,30 0,0000
4 3,50E+04 2,00E+04 4,54 4,30 0,0295
5 9,00E+04 5,10E+04 4,95 4,71 0,0304
6 3,00E+04 7,20E+04 4,48 4,86 0,0723
 ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»
1. Протокол процесса валидации/верификации метода в
ГОСТ Р 50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты
из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных Издание: 02
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов ИЛ
ФГБУ «Красноярский референтный центр
Россельхознадзора»
Ф 02-18-03-2013 Лист: 4 из 5

7 2,50E+03 1,00E+03 3,40 3,00 0,0792

8 3,00E+06 3,00E+06 6,48 6,48 0,0000
9 1,90E+05 1,70E+05 5,28 5,23 0,0012
10 3,00E+05 1,40+05 5,48 5,15 0,0548
0,0170  0,0087  0,0000  0,0295  0,0304  ...  0,0548
SR   0,17(log10) КОЕ / г
10

XiA – результаты исследований исполнителя Якименко Е.Е.;

XiB – результаты исследований исполнителя Сочинская Е.А.
Вывод: Использование внутрилабораторного стандартного
отклонения воспроизводимости в качестве меры неопределенности дает
лаборатории основания связать найденную величину неопределенности с
результатами, получаемыми самой лабораторией и сообщаемыми в
отчетах по испытаниям, и обеспечить таким образом выполнение
требований об указании неопределенности результатов анализов.

Якименко Е.Е./___________
Ответственный исполнитель:
Сочинская Е.А. /___________
Согласовано: РСП_Якименко Е.Е. /___________

7. Расчет расширенной неопределенности.

При наличии роста на чашках Петри производится подсчет выросших
колоний на всех платах ∑С (исключается использование результатов, при
которых обнаруженное число колоний меньше 10). Расчет
среднеарифметического числа микроорганизмов N, присутствующих в
пробе, проводят с соответствии с «ГОСТ ISO 7218-2011. Микробиология
пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
рекомендации по микробиологическим исследованиям».
Если результат испытаний выражен как y=log10x, то расширенная
неопределенность U, с учетом того, что коэффициент охвата равен 2,
может быть определена по уравнению (1).

, (1)
где SR – стандартное отклонение воспроизводимости;
 ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»
1. Протокол процесса валидации/верификации метода в
ГОСТ Р 50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты
из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных Издание: 02
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов ИЛ
ФГБУ «Красноярский референтный центр
Россельхознадзора»
Ф 02-18-03-2013 Лист: 5 из 5

∑С – это сумма всех результатов подсчета колоний на всех платах.

В случае высоких значений КОЕ второе слагаемое в сумме,
находящейся под знаком квадратного корня, зависящее от величины ∑С,
настолько мало, что им можно пренебречь; тогда уравнение (1)
упрощается:
U=2SR (2)
Предельное значение Сlim вычисляется по уравнению

(3)

Различают два случая:

Если ∑С > Сlim, то для определения U используется уравнение (2);
Если ∑С ≤ Сlim, то для определения U используется уравнение (1).

Пример.
Результат испытаний: (10-2-210КОЕ; 10-3-19КОЕ; 10-4-2КОЕ);
∑С=229; N=2,1*104 КОЕ/г, т.е. у=4,3 [log10(КОЕ/г)],

Сlim = 1,75/0,172 = 61
∑С > Сlim → U=2SR =2*0,17 = 0,34 => U=0,34

В протоколе исследований результат испытаний можно представить

одним из следующих способов:

1) 4,3±0,34 [log10(КОЕ/г];
2) 4,3[log10(КОЕ/г] [4,64; 3,96];
4 4 4
3) 2,1*10 КОЕ/г [4,4*10 ; 0,9*10 ];
4
4) 2,1*10 КОЕ/г [-110%; +57%].

Вывод:
Внутрилабораторное стандартное отклонение воспроизводимости,
рассчитанное по результатам исследований проб мяса птицы
 ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»
1. Протокол процесса валидации/верификации метода в
ГОСТ Р 50396.1-2010 Мясо птицы, продукты и полуфабрикаты
из мяса птицы. Метод определения количества мезофильных Издание: 02
аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов ИЛ
ФГБУ «Красноярский референтный центр
Россельхознадзора»
Ф 02-18-03-2013 Лист: 6 из 5

замороженного, и равное 0.17 log10 (КОЕ/г), позволяет вычислять

расширенную неопределенность при проведении исследований на
КМАФАнМ в мясе птицы замороженном в бактериологическом отделе
ФГБУ «Красноярский референтный центр Россельхознадзора»

Якименко Е.Е. /___________

Ответственный исполнитель:
Сочинская Е.А. /_________
Согласовано: РСП_Якименко Е.Е. /___________