Вы находитесь на странице: 1из 13

МИНОБРНАУКИ РОССИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение


высшего образования
«САРАТОВСКИЙНАЦИОНАЛЬНЫЙИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙУНИВЕРСИТЕТИМЕНИН.Г.ЧЕРНЫШЕВСКОГО»

Кафедра микробиологии и физиологии растений

ВЫЯВЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПОРЧИ МОРКОВИ ПРИ ХРАНЕНИИ

Отчет по большому практикуму


Студентов 3 курса бакалавриата, 322 группы
Направления 06.03.01«Биология»
биологического факультета
Коробейниковой Анастасии Сергеевны
Кулагина Максима Андреевича

Проверил:
доцент, канд. биол. наук __________ А. М. Петерсон

Саратов 2021
ВВЕДЕНИЕ

Актуальность:

В Продовольственной программе нашей страны как на задачу


первостепенной важности указана необходимость снижения потерь
сельскохозяйственной продукции при сборе урожая, транспортировании,
хранении и реализации. Основной причиной потерь свежих плодов и овощей
в период после сбора являются микробные поражения.

Микробиологическая порча является главной проблемой так


называемых «портящихся продуктов» – свежих фруктов и овощей. К
микроорганизмам, способным вызывать порчу пищевых продуктов,
относятся бактерии, грибы (плесени и дрожжи), вирусы и микопаразиты.
Рост большинства микроорганизмов можно предотвратить или замедлить
посредством контроля их начального содержания, контроля температуры
хранения, снижения активности воды и pН, применения консервантов и
использования соответствующей упаковки. 

Тема: Выявление возбудителей порчи моркови при хранении

Цель: Изучить возбудителей порчи моркови

Задачи:

1) Выявить и идентифицировать возбудителей порчи моркови;


2) Сравнить полученные данные с литературными;
3) Выявить бактерий-антагонистов возбудителей порчи моркови;
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1 Материал и методы исследований


1.1 Материал исследований
Материалом для микробиологических исследований послужили
корнеплоды моркови с признаками порчи, приобретённые в торговых сетях г.
Саратова и загородного участка (таблица 1).

Таблица 1 – Материал микробиологических исследований.

Образе Описание Фото


Происхождение
ц характера порчи

Сухая гниль, Торговые ряды


1 плесневая рынка
поверхность «Славянский»

Торговые ряды
2 Мокрая гниль рынка
«Славянский»

Белая мокрая «Ашан», ТАУ-


3
гниль галерея
Белый налет,
Огород на даче,
4 плесневая
станция 279 км.
поверхность

Белая мокрая Огород на даче,


5
гниль станция 279 км.

1.2 Методы исследований


1.2.1 Методы выделения возбудителей порчи

Разведение растительного материала:


Взвешиваем 0,1 г. образца, измельчаем его в профломбированной ступке,
добавляем 9,9 мл. 0,9% NaCl, получаем разведение исходного образца 1:100
Используемые питательные среды:
ГРМ
Среда Кинга
PDA
Сроки и условия культивирование:
Чашки Петри с засеянными штрихом образцами убираем в термостат на 28°С
на 7 дней.
Через 7 дней производим пересев чистых культур на скошенные питательные
среды.
1.2.2. Методы идентификации выделенных микроорганизмов
1.2.2.1 Методы идентификации бактерий
Используемые питательные среды:
ГРМ-агар + 7,5 NaCl
ГРМ-агар (рН 5)
ГРМ-агар (рН 10)
ГРМ-агар (10°)
ГРМ-агар (43°)
ГРМ-агар + 1% крахмал
Нитратный бульон
МПЖ
Среда Симмонса
Среда Кларка
Глюкоза (на анаэробов)
Сахароза
Маннит
Лактоза
Шт. 1 – белые блестящие колонии, дающие бактериальный рост.
Шт. 6 – бесцветные, полупрозрачные колонии, антагонист к штамму 4.
При определении бактерий пользовались определителем Берджи.
1.2.2.2 Методы идентификации грибов

Шт. 2 - гриб с белым пухом, дающий розовый пигмент на среде PDA


Шт. 3 - гриб с черными точками
Шт. 4 - гриб с серым налетом
Шт. 5 - гриб с белым пухом без пигмента на PDA
Шт. 7 - гриб зеленого цвета на PDA (цвет морской волны)
При определении грибов пользовались определителем Д. Саттона, А.
Фотергилл, М. Ринальди 2001 года.

1.2.3.Методы выявления фитопатогенных свойств выделенных


штаммов микроорганизмов
Использовали чашки Петри с голодным агаром. Фрагменты
корнеплодов моркови размером 1 х 1 см раскладывали на поверхность
голодного агара на расстоянии 2-3 см друг от друга. Для инфицирования
использовали 14-суточные культуры бактерий и 14-суточные культуры
грибов. Культура тестируемого микроорганизма наносилась петлёй на
поверхность растительного материала. Культивировали во влажной камере
(секвенаторе) в течение 14 суток. Оценивали наличие роста на растительном
материале и наличие мацерации.

1.2.4. Методы выявления антагонистической активности

Выявлено 5 штаммов с антагонистической активностью.


Будем проверять способность этих антагонистов подавлять рост 5
штаммов грибов и 1 бактериального штамма.
На чашки со средой PDA наносили петлей 5 штаммов-антагонистов и
один штамм гриба или бактерии (схема 1). Так делаем со всеми штаммами,
влияние антагонистов на которые хотим проверить.

КК 6
ГРИБ ИЛИ БАКТЕРИЯ

МИ 10

НН 12

КБ 8

КХ 2

Схема 1- Распределение антагонистов и исследуемых штаммов грибов и


бактерий на чашке Петри.

2 Результаты исследований
2.1 Спектр микроорганизмов, выделяемых при порче моркови

В результате проведённых исследований была выявлена достаточно


разнообразная микрофлора исследованного растительного материала
(таблица 2).

PDA ГРМ-агар Кинга


Проба 1
Проба 2
Проба 3
Проба 4
Проба 5

Таблица 2 – Первичный посев корнеплодов моркови с признаками


порчи на различных питательных средах.

Из корнеплодов моркови с признаками порчи было изолировано 2 вида


бактерий и 4 вида плесневых грибов (таблица 3, таблица 4).

Bacillus sonorensis Bacillus lentus

Штамм 1 Штамм 6

Бактерии
Fusarium dimerum Aspergillus niger Penicillum Aspergillus terreus Penicillum citrinum
chrysogenum

Штамм 2 Штамм 3 Штамм 4 Штамм 5 Штамм 7

Грибы

Таблица 3 - Чистые культуры микроорганизмов, выделенные с


исследованных корнеплодов моркови.

Среды Количественное
№ пробы Выделенные виды
выделения содержание, КОЕ/г
Бактери Bacillus
ГРМ-агар 103
и sonorensis
1
Fusarium
Грибы PDA, Кинга 103, 103
dimerum

2 Bacillus
Бактери ГРМ-агар 103
sonorensis
и
Bacillus lentus Кинга 103
Грибы Aspergillus
PDA, Кинга 103, 103
niger

Penicillum PDA, Кинга 103, 103


chrysogenum

Бактери Bacillus
ГРМ-агар 103
и sonorensis

Fusarium
3 PDA 103
dimerum
Грибы
Penicillum
PDA 103
citrinum

Бактери Bacillus
ГРМ-агар 103
и sonorensis

Penicillum
4 PDA, Кинга 103, 103
chrysogenum
Грибы
Aspergillus
PDA 103
terreus

Бактери Bacillus
ГРМ-агар 103
и sonorensis

Penicillum
PDA, Кинга 103, 103
chrysogenum
5
Fusarium
Грибы PDA 103
dimerum

Aspergillus
PDA 103
terreus

Таблица 4 - Характеристика микробной обсеменённости


исследованных проб корнеплодов моркови.

При анализе полученных результатов было установлено, что при


исследованных видах порчи наиболее часто изолируются бактерии ….
(встречаемость 100%) , грибы Fusarium dimerum и Penicillum chrysogenum
(встречаемость 60%) (таблица 5).

Все виды имели примерно равные количественные показатели.

Таблица 5 - Экологическая характеристика доминирующих видов


микроорганизмов.
Количественное
Виды микроорганизмов Встречаемость; %
содержание; КОЕ/г
Бактери Bacillus sonorensis 100 107
и Bacillus lentus 20 107
Грибы Fusarium dimerum 60 107
Aspergillus niger 20 107
Penicillum chrysogenum 60 107
Aspergillus terreus 40 107
Penicillum citrinum 20 107

2.2 Способность выделенных изолятов вызывать патологические


изменения тканей корнеплодов моркови

На следующем этапе работы мы оценили способность выделенных


микроорганизмов вызывать патологические изменения тканей корнеплодов
моркови. Было установлено, что ни один из видов бактерий или грибов не
вызвал рост на здоровом овоще или его мацерацию (таблица 6).

Наличие
Вид
микроорганизма мацерации растительных
роста культуры
тканей
Bacillus sonorensis - -
Fusarium dimerum - -
Aspergillus niger - -
Penicillum - -
chrysogenum

Aspergillus terreus - -
Penicillum citrinum - -
Таблица 6 - Наличие патологических изменений тканей корнеплодов
моркови через 14 суток после инфицирования исследуемыми
микроорганизмами.

Таким образом, в проведенном опыте было выявлено, что ни один вид


микроорганизма не вызывал роста культуры на здоровом овоще и не вызывал
мацерацию его тканей.

2.3 Поиск бактерий-антагонистов выделенных возбудителей порчи


корнеплодов моркови

На заключительном этапе работы мы исследовали антагонистическую


активность бактерий, изолированных с различной овощной продукции, по
отношению к выделенным нами возбудителям порчи (рисунок 1).

Рисунок 1 – Выявление антагонистической активности бактерий по


отношению к выделенным возбудителям порчи корнеплодов моркови.

Было установлено, что ни один из штаммов бактерий-антагонистов не


подавлял роста выявленных возбудителей (таблица 7).

Виды Штаммы бактерий-антагонистов


микроорганизмо Bacillus Bacillus Bacillus Bacillus
КБ 8
в lentus psychroduran oleroius psychrodurans
s
– возбудителей
порчи
Bacillus sonorensis - - - - -
Fusarium dimerum - - - - -
Aspergillus niger - - - - -
Penicillum - - - - -
chrysogenum

Aspergillus terreus - - - - -
Penicillum citrinum - - - - -

Таблица 7 - Антагонистической активности бактерий по отношению к


выделенным возбудителям порчи корнеплодов моркови.

ВЫВОДЫ