Вы находитесь на странице: 1из 19

Тема 4.

Биофизика мембран
ff биологических мембран (ḿ)
Три основные ff био ḿ:
 барьерная — обеспечивает селективный, регулируемый, пассивный и активный
обмен в-вом с ОС;
 матричная - обеспечивает определенное взаимное расположение и ориентацию
ḿ-х белков;
 механическая - обеспечивает прочность и автономность #, внутри#ных структур.
Другие ff:
 Е-кая – синтез АТФ на внутренних ḿḿ митохондрий и фотосинтез в ḿḿ
хлоропластов;
 генерация и проведение биопотенциалов; Биоэлектрогенез ḿ – способность ḿḿ
реализовывать процессы, приводящие к возникновению разности ē-ких
потенциалов по обе ее стороны.
 рецепторная (механическая, акустическая, обонятельная, зрительная,
химическая, терморецепция – ḿ-ные процессы).
 адгезивная – ḿḿобеспечивают меж#ные взаимодействия.
 двигательная – ḿḿ обеспечивают процесс движения #.
 секреторная – ḿḿ обеспечивают процесс экзо- и эндоцитоза.
Проницаемость ḿḿ – способность пропускать атомы, ионы, молекулы как в
прямом, так и в обратном направлениях.
Полупроницаемость ḿḿ – способность пропускать в прямом и обратном
направлениях одни ионы, молекулы, частицы и не пропускать другие.
Селективные ḿḿ – ḿḿ, избирательно переносящие одни ионы, молекулы и не
пропускающие другие.
Краткая история мембранологии
Кто Когда Что
X. фон Моль, 1851 Исследовал плазмолиз и деплазмолиз растительных клеток и пришел к
немецкий выводу, что клеточные стенки функционируют как полупроницаемые
физиолог мембраны, а клетки ведут себя как осмометры.
К. фон Негели, 1855 На интактных и поврежденных растительных клетках исследовал
ботаник проницаемость пигментов в клетки через клеточную поверхность,
которую назвал плазматической мембраной
В.Пфеффер, нем. работал с искусственными осадочными мембранами и провел аналогию
ботаник и физико- их функционирования с клеточными мембранами.
химик
X. де Фриз, Изучал осмотические свойства растительной клетки
шведский ботаник
В. Оствальд, нем. Говорил о возможной роли мембран в происхождении биоэлектрических
физико-химик явлений
Э.Овертон с с 1885 Изучили проницаемость поверхностой мембраны клеток для более чем
сотрудниками до 500 различных веществ, сформулировали эмпирические законы
1902 клеточной проницаемости: зависимость проницаемости мембран от
полярности и величины электрического заряда проникающего иона,
способности проникающего вещества растворяться в липидах и
проникать через мембрану, зависимость скорости проницаемости от
степени диссоциации исследуемого вещества и др.
Гортер и Грендель 1925 Обнаружили двурядное расположение липидов в мембране
С.Гелфан 1928 Проведенные при помощи микроэлектродов работы по измерению
Л.Блинкс 1930 электрического сопротивления поверхностного слоя клеток показали их
большую величину (десятки и даже сотни тысяч Ом на см 2), что
подтверждало липидную структуру биомембран
Дж.Даниелли и 1935 Предложили бутербродную модель (модель сандвича) строения
Х.Давсон биологической мембраны
М.Кноль и Г.Руска 1939 Изобрели электронный микроскоп
А.Ходжкин, 1963 Получили Нобелевскую премию за серию блестящих исследований по
А.Хаксли и выявлению роли биомембран в электрогенезе потенциалов покоя и
Дж.Эклс потенциалов действия
Ф. Лайнен 1964 Получил Н.п. за изучение мембранных липидов, связанных с
биоэнергетикой
Дж.Уолд 1967 Получил Н.п. за исследование мембран зрительных клеток (область
офтальмологии)
Дж.Аксельрод и 1970 Получили Н.п. за изучение роли лизосом в области клеточной патологии
др.
Е.Сазерленд 1971 Получил Н.п. за работы по исследованию мембранных рецепторов
гормонов и вторичных мессенджеров
Дж. Эдельман и др. 1972 Получили Н.п. за выяснение антигенных свойств клеток и клеточных
мембран.
Дж.Робертсон, 1974 Получили Нобелевскую премию за цикл работ по изучению биомембран
Ф.Шестранд при помощи электронной микроскопии
Виды биологических мембран
По происхождению ḿḿ делят на естественные и искусственные; ḿḿ бактерий,
растений, животных. Естественные ḿḿ делят по принадлежности к органоидам:
наружная (цитоплазматическая), ядерная, митохондриальная, эндоплазматическая, ḿ
аппарата Гольджи, лизосомальная и т.д.
По выполняемой f или участию в биологическом процессе существуют
фотосинтетические, рецепторные, энергосопрягающие, возбудимые и невозбудимые
биоḿḿ.
Искусственные липидные ḿḿ в зависимости от включения различных белков-
каналообразователей, переносчиков, ферментов подразделяются на
модифицированные и немодифицированные.
Методы выделения мембран
1. Дезинтеграция (разрушение) осуществляется:
1) растиранием ткани в фарфоровой ступке пестиком с добавлением мела, кварцевого
песка, корунда;
2) использованием механических гомогенизаторов с вращающимися ножами,
пестиком, цилиндром, в том числе и тефлоновым;
3) ультразвуковыми гомогенизаторами, где используют разную длину волны и
разные интенсивности излучения для разрушения ## в жидкой среде;
4) методом замораживания-оттаивания, когда при замораживании кристаллики льда
разрывают ḿḿ и при оттаивании ткани ḿḿ и содержимое их поступает в жидкую
среду;
5) методом осмотического шока: применим к таким ##, как эритроциты.
Для выделения различных фракций ḿḿ в основном используют метод
ступенчатого, последовательного центрифугирования или центрифугирования в
градиенте плотности раствора сахарозы, фикола или хлористого лития.
Центрифужное поле (g) g=1118·10–8·R·N2, где R (см) – радиус от центра ротора
до точки,в которой вычисляется центрифужное поле, N (об/мин) – скорость вращения
ротора.
При дифференциальном центрифугировании частицы и фрагменты # оседают со
скоростью, зависящей от их размера, плотности и формы.
Центрифугирование при малых ускорениях приводит к оседанию только
крупных частиц (неразрушенных ##, ядер). При увеличении относительного
центробежного ускорения до 10000 g оседают преимущественно митохондрии, а при
100000 g в осадок выпадают микросомальные фракции и везикулы, в супернатанте
(надосадочной жидкости) остаются только водорастворимые белки.
Последовательное центрифугирование с увеличением ступенчатого
относительного центробежного ускорения и времени центрифугирования получило
название метода дифференциального центрифугирования суб#ных фракций.
Скорость осаждения частиц будет прямо пропорциональна величине
центробежного ускорения, разности между их плотностью и плотностью среды. S –
единица осаждения Сведберг (помните, рибосомы эукариот 80S состоят из двух
частиц 40S и 60S)
Основные методы изучения биологических мембран
1. Биохимические методы позволяют выделять в максимально чистом виде
отдельные компоненты различных ḿḿ, изучать их физико-химические свойства,
способность образовывать надмолекулярные лабильные комплексы, определять время
«жизни» отдельных компонентов, путей биосинтеза и распада, влияние на метаболизм
различных физико-химических факторов как внутренней, так и внешней среды: ионов,
температуры и т.д.
2. Физиологические методы предусматривают исследование различных ff как
на естественных, так и на искусственных ḿḿ. Физиологическими методами изучают
проницаемость ḿḿ для атомов, ионов, различных молекул; процессы, протекающие в
биоḿḿ при возбуждении, торможении, проведении нервного импульса; поступление,
распределение и выведение ионов и молекул из ## и тканей, влияние физико-
химических FF на состояние ḿḿ и изменение физиологических ff ##.
3. Генетические методы, основанные на использовании мутантов, дефектных
по синтезу определенных ḿ-ных белков, позволяют решать вопросы о роли данных
молекул белка в надмолекулярной организации, изменении ff ḿḿ, их
самоорганизации.
4. Иммунологические методы предусматривают выделение определенных ḿḿ,
использование их как антигенов с целью последующего применения выработанных
антигенов для идентификации специфических участков ḿḿ, распределения антигенов
на изучаемых участках ḿ, выделения комплексов антиген-антитело с последующим
разделением на антиген и антитело.
5. Биофизические методы исследования биологических ḿḿ
- метод ē-ной микроскопии;
- метод ē-ного парамагнитного резонанса (ЭПР) и использования спиновых
меток;
- метод ядерного магнитного резонанса (ЯМР);
- метод флуоресцентной спектроскопии (и использования флуоресцентных
зондов);
- метод дифференциальной сканирующей калориметрии;
- метод моделирования искусственных мембран;
- метод радиоактивных изотопов.
Метод ē-ной микроскопии
Предел разрешения оптического микроскопа в видимой области света
составляет 2000 А, а толщина мембран составляет в среднем 80-120 А . Электронная
микроскопия доводит разрешение до 5-10 А, на уровне размера диаметра атома урана.
Ограничения разрешающей способности светового микроскопа зависят согласно
λ
d=
доказательствам Эрнста Аббе от волновой природы света: n sin α ,
где d - разрешающая способность микроскопа –
то минимальное расстояние между двумя
точками, когда глаз воспринимает их как
раздельные; λ – длина волны источника света; n
– показатель преломления среды, в которой
находится объект; α – апертурный угол, под
которым виден радиус объектива из точки
размещения объекта. Световой микроскоп с
хорошим иммерсионным объективом
обеспечивает разрешающую способность около
0,2 мкм (2000А). Для невооруженного глаза
человека разрешающая способность равна на
расстоянии 25 см от глаза 0,2 мм; таким
образом, полезное увеличение составляет 1000
раз.
В 1924 г. Л. де Бройль теоретически предсказал
периодичность движения электрона, которому
можно приписать определенную длину волны:
150 где V – энергия ē в электрон-вольтах, измеряемая разностью потенциалов
λ=
√,
V между раскаленной нитью катода и сеткой анода в ē-ной пушке. В этом
случае при подаче напряжения в 60 000В движущиеся ēē будут иметь
λ=0,05 А , что в 100 000 раз меньше длины волны видимого света.
Бушем разработана теория ē-ных линз. Было
установлено, что пучок ēē в магнитном или ē-ком
поле может сходиться в другой точке оси симметрии
или расходиться из другой точки оси. Для
магнитных линз можно определить фокусное
расстояние, которое можно менять за счет
изменений силы проходящего в линзах тока. Буш
обосновал возможность создания ē-ной оптики.
Первый ē-ный микроскоп был сконструирован в
1932 г. М.Кноллем и Г.Руска. ē-ные микроскопы с
разрешающей способностью 20 А появились в
продаже уже в 1945 г. Дж. Гильер довел
разрешающую способность их до 10 А. Изображение
в ē-ном микроскопе монохроматично и
интенсивность освещенности отдельных участков
зависит только от способности разных участков
объекта рассеивать ēē.
Для изучения биомембран используют различные виды ē-ной микроскопии:
 ē-ная микроскопия светлого поля (наиболее распространенная). Светлыми
выглядят участки, мало рассеивающие ēē;
 ē-ная микроскопия темного поля. Светлыми выглядят участки, сильно
рассеивающие ēē;
 панорамное ē-ное микроскопирование;
 сканирующая ē-ная микроскопия.
Для проведения ē-ной микроскопии в мембранологии применяют ряд методов
приготовления образцов и получения контрастного изображения:
 ē-ная микроскопия ультратонких (около 0,1 мкм = 1000 А) срезов
биоткани;
 методика замораживания-скалывания (нож микротома не срезает, а
скалывает образец по липидному бислою);
 методика травления (солями или соединениями тяжелых металлов);
 методика приготовления реплик (на образец напыляют в вакууме золото,
платину, углерод и получают «слепок» с поверхности объекта).
Метод ē-ного парамагнитного резонанса
ЭПР - резонансное поглощение Е ē-магнитных колебаний в сантиметровом или
миллиметровом диапазоне длин волн в-вами, содержащими парамагнитные частицы
(молекулы, атомы, ионы, свободные радикалы, слабо связанные с атомом ēē).
Интерес в мембранологии к методу ЭПР значительно возрос после разработки
метода спиновых меток, когда стабильный малореакционный свободный радикал
присоединяют к молекуле биополимера известной структуры и f. Синтез стабильных
нитроксильных радикалов в нашей стране был осуществлен Э.Г.Розанцевым: на их
основе были созданы ЭПР-зонды (спиновые зонды), которые были использованы для
характеристики микровязкости мембран, для определения степени упорядоченности
микроокружения зонда, его поступательной и вращательной подвижности, степени
диффузии меченых молекул при изменении t°, [липидов], воздействии различными
ионами металлов.
Метод ядерного магнитного резонанса (ЯМР)
ЯМР - резонансное поглощение ē-магнитной Е веществом, обусловленное
переориентацией системы магнитных моментов атомных ядер в постоянном
магнитном поле.
Магнитным моментом обладают, например, такие ядра, как 11Н, 136C, 3115Р. Не
обладают магнитным моментом такие ядра, как 42Не, 168О, 126C. В биологическом
объекте содержится много ядер 11Н - протонов, что дает возможность применять для
их исследования ЯМР.
В мембранологии метод ЯМР позволил сопоставить подвижность различных
жирнокислотных цепей в липидном бислое. Увеличение подвижности звеньев в цепи
растет по направлению от эфирной связи к метальному концу.
Метод флуоресцентной спектроскопии
Методы флуоресцентной спектроскопии в мембранологии используют для
получения информации о подвижности молекул, входящих в состав ḿḿ (латеральной
диффузии в пределах одного слоя; флип-флоп переходов – перемещения молекул из
одного слоя в другой; для определения локализации молекулы в ḿ от поверхности ḿ;
для характеристики измерения микровязкости; для определения скорости
проникновения ряда веществ через ḿ; для исследования трансформации Е в
энергосопрягающих ḿḿ; для исследования влияния ряда блокаторов ē-транспортной
цепи; для изучения ряда ферментативных р-ций, в осуществлении которых принимает
участие фермент-мембраносвязанный комплекс.
Изучение интенсивности
флуоресценции при введении
флуоресцентных зондов в био
ḿ и ## позволяет выяснить
изменение относительной
микровязкости ḿḿ в
зависимости от t°, действия
многовалентных катионов,
неполярных растворителей, [H]
и других FF.

Метод дифференциальной сканирующей микрокалориметрии


Изменение фазового состояния биоḿ при постоянном давлении сопровождается
поглощением или выделением тепла. В биоḿ можно выявлять переход от
жидкокристаллического состояния в твердокристаллическое и обратно при понижении
или повышении t° образца.
Чем длиннее жирнокислотная цепь фосфолипида, чем меньше содержится в ней
непредельных жирнокислотных остатков, тем выше t° фазового перехода.
Метод радиоактивных меток
Преимущества:
 высокая чувствительность: 10–14 – 10–13 моль/л;
 малые количества в-в (мкг);
 возможность исследования динамики процессов;
 возможность следить за превращением меченных двойной меткой молекул в
процессе метаболизма;
 возможность количественных измерений процессов и р-ций, протекающих в
ограниченном числе ##.
Радиоактивный распад атомных ядер является самопроизвольным процессом,
протекает в естественных условиях с постоянной скоростью для данного вида изотопа.
Из нескольких типов ядерных реакций наибольшее значение для биологических
исследований имеют радиоизотопы, испускающие β-частицы (ēē) и γ-лучи (фотоны).
В любой момент времени число атомов радиоактивного вещества,
распадающихся за единицу времени, пропорционально общему числу имеющихся
радиоактивных атомов:
dN dN
− =λN 0 −
dt где dt – число атомов, распадающихся за отрезок времени dt; λ
, -постоянная радиоактивного распада; N0 - число радиоактивных атомов
при t = 0.
−λt
N t =N 0 e
Обычно постоянную распада λ выражают через период полураспада – время, в
течение которого скорость распада (радиоактивность) самопроизвольно уменьшится в
2
τ =ln =0 , 693 λ
два раза и составит половину от исходной: λ .
Если учесть, что биологические объекты, будучи предметами химической
эволюции, построены в основном из легких элементов, то набор радиоактивных
изотопов, применяемых в биологических исследованиях, весьма ограничен.
Характеристика используемых в биологии радиоактивных изотопов
Изотоп Испускаемая Еmax, МэВ Период полураспада
3
Н β 0,018 12,3 года
14
С β 0,155 5568 лет
24
Na β 1,39 14,974 ч
24
Na γ 1,7; 2,75 14,974 ч
32
P β 1,7 14,2 дня
35
S β 0,167 87 дней
40
K β 1,33; 1,46 1,25·109 лет
45
Ca β 0,254 164 дня
131
I β 0,335; 0,608 8,1 дня
131
I γ 0,284; 0,364; 0,637
В мембранологии метод радиоактивных меток в основном используют для
решения проблем мембранной проницаемости для ионов, молекул, изучения кинетики
проницаемости мембран в зависимости от меняющихся условий и действия ряда FF
(изменения концентрации ионов и в-в, разные значения рН среды, изменения степени
диссоциации молекул и др.).
Метод моделирования мембран
Метод моделирования, получения искусственных мембран много дал для
количественных измерений, изучения электрических параметров и свойств,
исследования мембранной проницаемости для ионов, атомов, молекул, изучения
биоэлектрогенеза возбудимых мембран, исследования воздействия факторов внешней
среды (температуры, ионной силы, концентрации различных катионов, в том числе
иона водорода, и других факторов).
Искусственные ḿḿ
подразделяют на:
1) монослой – ḿ, состоящая из одного слоя молекул липида на границе полярной фазы
(1/2 биоḿ);
2) бислой (двойной монослой) – ḿ, состоящая из двух слоев молекул липида = биоḿ (5
– 7 нм);
3) мультиламеллярные липосомы – везикулы, ḿḿ которых образованы несколькими
бислоями (d липосом составляет несколько микрон);
4) моноламеллярные липосомы – везикулы, ḿḿ которых образованы одним бислоем
(d липосом от 20 до 100 нм);
5) протеолипосомы — липосомы, в состав ḿḿ которых включены белки.
В силу природной амфифильности липидов их молекулы будут
ориентироваться на поверхности и внутри полярного (вода) и неполярных
растворителей (ацетоне, эфире, хлороформе) вполне определенным способом, образуя
на границе раздела монослои (липидные пленки), бислои (мембраны), и в объеме
растворителя - мицеллы.

Фосфолипидная мицелла Фосфолипидный бислой


Монослои
При нанесении на поверхность воды раствора
липида в летучем органическом растворителе
(эфире, ацетоне и др.) пленка свободно растекается
по поверхности при отсутствии ее ограничений.
Полярные головки при этом обращены к воде, а
углеводородные неполярные хвосты ориентированы
в воздух. Молекулы липида практически не
взаимодействуют друг с другом.

По мере ограничения поверхности (сжатия пленки)


происходит увеличение плотности упаковки
провзаимодействовавших липидных молекул.
Конденсированный монослой: S на 1 молекулу
липида – min.
При достижении определенной величины давления
происходит сдвиг слоев, наползание их друг на
друга (давление коллапса).
Мицеллообразование. Мицеллы – это простейшие агрегаты липидов в объеме
растворителя. Липиды в полярном растворителе (воде) образуют мицеллы обычного,
классического типа, а в органических растворителях - обращенные мицеллы.

Мицелла классического типа Неполярный растворитель + следы воды


Обращенная мицелла
Легко образуют мицеллы в воде липиды, обладающие объемистой или
заряженной головкой и небольшой углеводородной цепью, фосфолипиды с одной
углеводородной цепью или с двумя, но короткими цепями.
В неполярных растворителях (гексане, бензоле, декане и др.) более легкому
формированию мицелл способствует малый размер полярной головки, малая величина
ее заряда и наличие длинных углеводородных цепей (яичный фосфатидилхолин в
бензоле).
Бислои
В 1962 г. П.Мюллер и Д.Рудин разработали способ получения больших
двуслойных мембран (d до 1 мм), используя тефлоновую пластинку, разделяющую две
водные фазы. Нанесение капли р-ра липида на отверстие d 1-2 мм в гидрофобном
материале - тефлоне, полиэтилене. Образуется ḿ за счет сил поверхностного
натяжения. ḿ не отражает падающий свет и кажется черной.
Метод «сухих» бислойных липидных ḿḿбыл
впервые предложен японским ученым М.Такаги с
сотрудниками в 1965 г. и позднее в 1972-1974 гг.
был усовершенствован М.Монталом. Сущность
данного метода состоит в механическом
соединении (соприкосновении) двух
мономолекулярных слоев на границе раздела
вода-воздух. Таким способом получают
асимметричные мембраны из липидных слоев
разного липидного состава.

На бислое исследованы:
 ē-св-ва ḿ: ḿ потенциал, потенциал пробоя, ē-емкость, проводимость.
 влияние включений на проницаемость ḿ для различных в-в.
 созданы первые биосенсорные устройства.

Примером моделирования био ḿ являются липосомы (А.Бэнгхем, 1965) –


замкнутые ḿ-ные пузырьки, содержащие водную фазу внутри и находящиеся в водной
среде. Липосомы формируют из липида (например, фосфатидилхолина,
фосфатидилсерина) в водной среде путем обработки ультразвуком, быстрого
смешения раствора липида в этаноле с водой или пропуская через тонкую иглу
раствор липида. Липосомы имеют почти правильную сферическую форму диаметром
около 50 нм.
В стенку липосомы легко включаются мембранные белки, образуя
протеолипосомы, которые могут моделировать транспортные, ферментативные и
структурные свойства и функции биологических мембран.
При образовании липосом вещества, содержащиеся в воде, включаются во
внутреннее пространство липосом. Таким путем включают в липосомы пептиды,
лекарственные вещества, витамины, гормоны, антибиотики, различные белки и т.д.
Подвижность компонентов ḿ
Температура фазового перехода, tп - переход из твердого (кристаллического,
гелевого) в жидкокристаллическое (жидкое) состояние.
Повышение t° до значения tп приводит к плавлению липидного бислоя: #
вращательная и колебательная подвижности молекул за счет # скорости гош - транс-
изомеризации, появления кинков в цепях, # межлипидного расстояния, $ толщины
бислоя. Липидный бислой становится менее упорядоченным.

tп $ при : – введении цис-двойной связи,


– введении CH3- группы в середину цепи,
– # размеров полярной головки.
– $ длины насыщенной цепи.
Фазовый переход зависит от изменения [H+], ионного состава среды (Са2+),
добавления мембранотропных веществ, изменения липидного состава бислоя.

Компоненты ḿ подвижны: липиды осуществляют вращательное движение


вокруг длинной оси. t поворота угол 1 рад в биоḿ (в жидком состоянии) = 10–9 с.
Латеральная диффузия липидов = 10–7 – 10–8
см2/с: молекула за 1 с перемещается на 5000 нм
(весь Er). v латеральной диффузии зависит от
липидного состава ḿ и t°. Xолестерин + к
яичному летицину = $ v латеральной диффузии
в 2 раза.
Флип-флоп переход - переход липида из
одного ряда в другой. Полупериод флип-флопа
= 10-20 ч.
При добавлении к мембранам
клиновидных молекул, а также при действии
фосфолипаз v флип-флоп перехода резко #.
Специальные белки – флиппазы, осуществляющие перевод липида из одного
слоя в другой:
Латеральная (10–10 – 10–12 см2/с) и вращательная (10–4 – 10–6с) подвижность
белков существенно ниже.
Образование кинков:

Транс- и цис- конформации

Гипотеза петли (кипка) предполагает, что плавление


цепей ЖК при фазовом переходе обусловлено
вращательной изомеризацией. Наименьшей Е
обладает транс-, а наибольшей — цис-конфигурация
ЖК. Формирование кинка сопровождается $
эффективной длины цепи на 0,13 нм. При этом часть
цепи отодвигается на 0,15 нм, образуя свободный
объем. Согласно современным представлениям
структура кинка способна к диффузии. Образование
одного кинка облегчает возникновение кинков в
соседних цепях, стимулируя их чередование в
липидах биоḿ. Появление в ходе такого процесса так
называемых кинк-блоков (нескольких кинков)
приводит, как правило, к разупорядочености
структуры ḿ. Вероятно, трансмембранный перенос
малых молекул через мембрану осуществляется
внутри свободного объема кинк-блока.
Межмолекулярные контакты в мембране
осуществляются за счет липид-липидных, липид-белковых и белок-белковых
взаимодействий.
Липид-липидные взаимодействия зависят от:
1) Е электростатических сил;
2) стерического фактора локализации в ḿ фосфолипидных «головок» и «хвостов»;
3) Е гидратации и образования водородных связей;
4) образования фосфолипидных доменов.
Липид-белковые взаимодействия определяются:
1) сорбцией и электростатическим взаимодействием белка и липида на поверхности
монослоя;
2) внутримембранным встраиванием и взаимодействием белка и липида (аннулярный
слой) в биоḿ.
Белок-белковые взаимодействия обусловлены поверхностной и внутримембранной
ориентацией молекул белка (образование кластеров).
Ферментативная функция Необходимые липиды
Митохондриальный электронный транспорт Общие липиды митохондрий
Na+, K+-AТФаза Фосфатидилсерин, фосфатидилглицерол
Гликозо-6-фосфатаза Са2+-АТФаза Фосфатидилэтаноламин
Лизофосфатидилхолин, фосфатидилхолин,
нейтральные детергенты
Комплекс переносчиков НАД-цитохром-с- Фосфатидилхолин: лизофосфатидилхолин (1:1)
редуктазы

Дополнительный материал (прочитать хотя бы 1 раз!)


Химический состав биологических мембран
Биоḿḿ обладают сложной гетерогенной структурной организацией, зависящей
как от разнообразия их компонентов, так и от образования надмолекулярных
относительно стабильных комплексов. Но если рассматривать компоненты биоḿḿ с
биохимической точки зрения, то практически все биоḿḿ состоят в основном из
полярных липидов и белков.
Классификация, принципы построения и характеристика ḿ-ных липидов
Липиды (от греч. lipos - жир) - низкомолекулярные органические вещества,
активные компоненты биоḿḿ, извлекаемые из ## растений и животных
органическими растворителями (хлороформом, ацетоном, эфиром, бензолом).
Липиды - обширная группа природных органических соединений, включающая
жиры и жироподобные вещества.
Молекулы простых липидов представляют собой соединения спирта,
высокомолекулярных жирных кислот и других компонентов. Стерины не содержат
жирных кислот. К простым липидам относятся триглицериды, диольные липиды,
воски.
Сложные липиды - это комплексы с белками (липопротеины), производные
ортофосфорной кислоты (фосфатиды или фосфолипиды). Молекулы сложных липидов
содержат также остатки трехатомного спирта глицерина (глицеринфосфатиды) или
сфингозина (сфинголипиды).
К липидам относят вещества, не являющиеся производными жирных кислот, -
стерины, убихиноны, терпены. Из семи важнейших классов липидов биоḿ бактерий,
клеток растений и животных содержат три основных класса: глицерофосфатиды
(фосфолипиды), глицерогликолипиды (гликолипиды) и сфингофосфолипиды
(стероиды).
Фосфолипиды делят на глицерофосфолипиды (производные фосфатидной
кислоты) - фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин,
фосфатидилинозит и сфингофосфолипиды (производные церамида, сфингомиелины).
Важнейшие классы липидов
Простые липиды
1. Воски 2. Диольные липиды 3. Триглицериды
Сложные липиды
1. Глицерофосфатиды 2. 3. Сфингогликолипиды 4.
(фосфолипиды) Глицерогликолипиды Сфингофосфолипиды
Лецитины Цереброзиды (х- Сфингомиелины
(холипфосфатиды) моносахарид)
Кефалины Ганглиозиды (х- Фитосфинголипиды
(этаноламинфосфатиды и олигосахарид,
серинфосфатиды) содержащий остатки
сиаловых кислот)
Фосфатидиловые (х-инозитилгликозид)
кислоты
Полиглицерофосфатиды
(фосфатидилглицерин,
кардиолипин (х-
фосфатидил глицерин))
Фосфатидилинозиты (х-
инозитил)
х - углеводородная цепь.
Молекулы липидов хорошо стерически «соответствуют» друг другу, несмотря
на большое разнообразие индивидуальных соединений фосфолипидов за счет
присоединения к гидроксильным группам молекулы глицерина радикалов как
насыщенных, так и ненасыщенных жирных кислот, а их в состав мембран входит
довольно значительное количество.
Липиды биоḿ подразделяют на фосфолипиды, гликолипиды, холестерин,
триглицерол, стероиды и свободные жирные кислоты.

Принципы построения липидных молекул


Содержание липидов в биоḿḿ колеблется от 30 до 70%, а в миелиновых ḿḿ
может доходить до 83-85%. Липиды ḿḿ отличаются структурным многообразием за
счет вхождения в гидрофобные «хвосты» различных жирных кислот.
Однако в структуре ḿ-ных липидов можно выделить единый принцип: липиды
построены на базе спиртов (глицерина, этиленгликоля). Молекула липида включает
гидрофобные «хвосты», из предельных или непредельных жирных кислот и полярной
головки, состоящей из фосфорной кислоты и этиленамина, серина, холина, инозита и
др.
Одна часть молекулы липида гидрофобна, другая – гидрофильна, т.е. обладает
сродством как к полярным, так и к неполярным растворителям (амфифильна). Их
молекулы склонны к агрегации. Гидрофобные участки молекул стремятся попасть в
гидрофобную фазу, образуя неполярные области, а полярные группы располагаются
на границе с водой. Амфифильность ḿ-ных липидов определяет разнообразие
липидных агрегатов и надмолекулярных структур в зависимости от природы
компонентов, их количественных соотношений, концентрации, t° образца.
Связующими звеньями между полярной головкой липида и неполярным
(гидрофобным) хвостом обычно служат многоатомные или алифатические спирты,
содержащие три (глицерин) или две (этиленгликоль) гидроксильные группы.
Глицеролипиды (глицериды) составляют более половины липидов,
встречающихся в природе и занимают по распространенности первое место среди
липидов. Это производные трехатомного спирта - глицерина (1, 2, 3 - пропантриола):

Глицеролипид Молекула фосфолипида фосфатидилхолина, представленная


схематически (А), химической формулой (Б), в виде
пространственной модели (В) и символом (Г)
Обычно в полярных глицеролипидах биоḿḿ две гидроксильные группы
глицерина связаны сложноэфирными связями с двумя высшими жирными кислотами,
а третья гидроксильная группа соединяется с гидроксильной головкой.
Липиды, построенные на основе сфингозина
На базе аминоспирта сфингозина или его аналогов построена группа
сфинголипидов:

Сфингозин Сфинганин Галактоцереброзид (нервон)


Сфинголипиды входят в состав мембран нервных клеток, особенно высоко их
содержание в головном и спинном мозгу.
Сфингозиновые основания связаны во всех сфинголипидах амидной связью с
жирными кислотами: полученные при этом вещества носят название церамидов.
Несмотря на единый план строения фосфолипидов, что обеспечивает их
стерическое соответствие друг другу, существует большое разнообразие
фосфолипидов благодаря включению различных жирных кислот в неполярные
«хвосты» молекул. Так, выделено несколько десятков природных видов
фосфатидилхолина и фосфатидилсерина, отличающихся по своим физическим и
химическим свойствам (по t°плавления, по способности окисляться и т.д.).
Гликолипиды ḿḿ подразделяют на цереброзиды, сульфатиды и ганглиозиды. Их
объединяет содержание углеводных компонентов.
Цереброзиды (гликосфинголипиды) – углеводные производные церамида,
поэтому они носят еще название гликозилцерамиды.
Наиболее распространены галакто- и глюкозоцереброзиды. Цереброзиды
содержатся в тканях животных, растений и микроорганизмах. Это нейтральные
соединения.
Сульфатиды или сульфоцереброзиды представляют собой сулкфоэфиры. Они
образуются при участии группы –ОН углевода и имеют кислую реакцию.
Ганглиозиды относятся к гликолипидам, у которых концевыми остатками
углевода служит N-ацетилнейраминовая кислота.
Стероиды мембран представлены в основном холестерином (у животных),
ситостерином и стигмастерином (у растений), эргостерином (у грибов).
ḿḿ прокариот содержат плазмалогены и глицероацетали. Особенности
липидного состава мембран бактерий иногда служат отличительным признаком для их
классификации.
Несмотря на большое разнообразие жирных кислот, в ḿḿ в значительных
количествах обнаруживают только две или три. Так, у высших растений – это в
основном пальмитиновая, олеиновая и линолевая кислоты. Жирные кислоты с четным
числом атомов углерода (20, 22, 24) обнаруживаются очень редко; почти не
содержится стеариновой кислоты. В то же время в тканях животных эта кислота
наряду с пальмитиновой и олеиновой
Соединение Тривиальное название
является преобладающей.
кислоты
Наиболее распространенные жирные
С12:0 Лауриловая
кислоты в составе мембранных липидов
С14:0 Миристи новая Примечание. В классификации жирных кислот
С16:0 Пальмитиновая указывают число углеродных атомов, через
С17:0 Маргариновая двоеточие - количество двойных связей; в скобках -
С18:0 Стеариновая номер первого углеродного атома при двойной
С20:0 Арахидоновая связи, считая от СООН-группы.
С22:0 Бегеновая Анализ данных табл. показывает, что
С24:0 Лигноцериновая основными липидами ḿḿ ## животных
служат фосфатидилхолин и
С16:1(9) Пальмитоолеиновая
фосфатидилэтаноламин, в то же время в
С18:1(9с) Олеиновая
митохондриях содержится мало холестерина
С18:1(9) Элаидиновая
и свыше 22% кардиолипина.
С18:1(7) Вакценовая
Основную структурную f в ḿ выполняет
C24:l(9) Нервоновая двухрядный бислой липидов, состоящий
С18:2(9,12) Линолевая главным образом из фосфолипидов.
С8:2(9,12,15) Линоленовая Минорные соединения ḿḿ наряду с белками
С20:4(5,8,11,14) Арахидоновая
С22:5(7,10,13,16.19) Клупанодоновая
С22:6(4,7,10,13,16,19) Докозагексагеновая
определяют ряд своеобразных ff. Так, ганглиозиды участвуют в дифференцировке
нейрональной ткани, могут модифицировать иммунную реакцию, блокировать
действие лимфоцитов (киллеров), а гликолипиды иммунокомпетентных клеток
принимают участие в иммунной реакции.
Липидный состав некоторых биоḿḿ (% различных липидов от общего их количества)
Название липида Эритроциты Миелин Митохондрии Мембраны
человека человека сердца быка E.coli
Фосфатидиновая к-та 1,5 0,5 0,0 0
Фосфатиднлхолин 19,0 10,0 39,0 0
Фосфатидилэтаноламин 18,0 20,0 27,0 65
Фосфатидилглицерин 0,0 0,0 0,0 18
Фосфатидилинозит 1,0 1,0 7,0 0
Фосфатидилсерии 8,5 8,5 0,5 0
Кардиолипин 0,0 0,0 22,3 12
Сфингомиелин 17,5 8,5 0,0 0
Гликолипиды 10,0 26,0 0,0 0
Холестерин 25,0 26.0 3,0 0
Жирнокислотный состав липидов ḿ животных хотя и разнообразен, но
относительно постоянен, тогда как у бактерий и растительных ΩΩ встречаются
своеобразные соединения, характерные для данного семейства или класса.
Белки биоḿ
Белки ḿḿ выполняют ряд ff (#-ное узнавание, рецепция, соединение отдельных
комплексов и т. д.) и подразделяются на интегральные и периферические.
Интегральные белки пронизывают липидный бислой и связаны с фосфоинозитидами.
Периферические белки локализованы на поверхности ḿ (ферменты; белки,
координирующие форму цитоскелета; белки, связанные с гликокаликсом).
Основные общие морфологические свойства биоḿ зависят от структуры и ff
липидного непрерывного бислоя. Однако многочисленные и разнообразные
специфические ff биоḿ осуществляются в основном ḿ-ными белками. Типы и
содержание белка в ḿ зависят от выполняемой специализированной f #.
Так, в миелиновой ḿ нервной # ḿ выполняет в основном f изолятора.
Содержание белка в ней менее 20% от массы ḿ. В то же время в ḿḿ органелл, в
которых совершаются энергетические превращения (митохондрии, хлоропласта), на
долю белков приходится более 75% ее массы. В среднем в обычной плазматической
(наружной) ḿ ## соотношение белков и липидов составляет около 50% от сухой
массы. В этом случае на одну молекулу белка приходится 70-80 молекул липидов.
Если средний размер большой оси липида равен 25-30 А, то для молекулы белка
он превышает 80-100 А , что обеспечивает различное расположение белковой
молекулы по отношению к бислою липидов (трансмембранное, тангенциальное,
частичное погружение в бислой липидов).
Мембранные белки классифицируют по их положению мембране –
поверхностные и интегральные; по взаимодействию с липидами и степени погружения
и пронизывания мембран - моно-, би- и политопические.
Монотопическая (А), битопическая Четыре способе ассоциации мембранных белков с липидным
(Б) и политопическая (В) локализация бислоем 1 - интегральные белки пронизывают мембрану
белков в мембране; N и С-концы насквозь; 2 - поверхностные белки погружены в липидный
политпептидной цепи бислой частично; 3 - белки, удерживающиеся
нековалентными взаимодействиями с другими мембранными
белками; 4 - белки, ковалентно соединенные с одной или
двумя цепями жирных кислот
Наиболее распространено деление белков в зависимости от основной
выполняемой функции: белки-ферменты, белки структурные, белки-рецепторы, белки
транспортные и т.д.
Мембранные белки являются амфипатическими соединениями, их выделение и
фракционирование возможно лишь только при использовании детергентов,
нарушающих гидрофобные взаимодействия и приводящих к разрушению бислоя
липидов. Мембранные белки имеют гидрофобные и гидрофильные участки, т.е. они -
амфифильные соединения.
Низкомолекулярный детергент состоит из гидрофильной головки и
гидрофобного хвоста. Так как взаимодействие гидрофобных участков молекулы
детергента с гидрофобными участками мембранного белка сильнее, чем
взаимодействие липида с белковой молекулой, то гидрофобные участки детергента
вытесняют липиды и связываются с белками. Полярные группы детергента
взаимодействуют с молекулами воды. Мембранные белки переходят в воду в виде
комплекса молекулы белка с детергентами, а в ряде случаев с частью прочно
связанных с молекулой белка молекул липидов.
Периферические белки являются монотопическими, а интегральные - би- и
политопическими.
Разнообразные ff ḿ-ных белков зависят от их высокой конформационной
подвижности, способности переходить в напряженное (state tensed) и расслабленное
(state relaxed) состояния. Эти состояния обратимы (R  T-переходы), что связано с
изменением четвертичной и третичной структур белковых молекул.
Процесс синтеза ḿ-ных белков протекает в рибосомах эндоплазматической сети.
К месту функционирования он поступает за счет диффузии на короткое расстояние,
путем контактов между различными органеллами, в результате чего происходит обмен
молекулами белка. На значительные расстояния молекулы ḿ-ного белка переносятся
везикулами, формирующимися в аппарате Гольджи.
Углеводы мембран
Углеводы в свободном состоянии в мембранах практически не обнаруживаются.
Они входят в состав белков (гликопротеины и протеогликаны) и в состав липидов
(гликолипиды), что составляет соответственно около 10% всех белков и от 5 до 26%
липидов. В гликопротеинах наиболее часто встречаются такие моносахариды, как
глюкоза, галактоза, манноза, глюкозамин, нейраминовая кислота; в протеогликанах -
галактоза, ксилоза, глюкуроновая кислота, глюкозамин, галактозамин.
Гликолипиды включают глюкозу, галактозу, фруктозу, глюкозамин,
нейраминовую кислоту и др.
Углеводная часть белковой молекулы находится на внешней стороне ḿ, что
связано с их f-ной ролью: осуществлением межклеточных взаимодействий,
ограничением подвижности белковых молекул, обеспечением иммунных реакций.
Включение углевода в состав белков защищает их от протеолиза во время
транспорта к месту функционирования, обеспечивает молекулярное узнавание и
закрепление белковой молекулы в определенном месте ḿ.