Вы находитесь на странице: 1из 16

1

Тема 7. Электропроводность биологических систем


Ω присущи пассивные электрические свойства: сопротивление и емкость
(диэлектрическая проницаемость). Ω обладают свойствами как проводников, так и
диэлектриков. Наличие свободных ионов в ## и тканях обусловливает проводимость Ω.
Диэлектрические свойства Ω и величина диэлектрической проницаемости определяются
структурными компонентами и явлениями поляризации.
Электропроводность для постоянного тока
Электропроводность био© – это количественная характеристика способности
биомембран, ##, тканей проводить ē-ток. Электропроводность L – это величина, обратная
сопротивлению R проводника:
1 l
L= R= ρ
R . Сопротивление выражается формулой S ,
где ρ – удельное сопротивление; l – длина проводника; S – сечение проводника.
Сопротивление является коэффициентом пропорциональности между разностью
потенциалов U и током I (закон Ома):
U=I·R.
Живой Ω, его ##, ткани являются проводником второго рода, перенос ē тока
зависит от величины направленного движения ионов в ē поле. Чем  свободных
подвижных ионов, тем  электропроводность объекта. В ## животных основные катионы
– это ионы калия и основные анионы, в первую очередь – ионы органических кислот
(угольной, лимонной, уксусной, молочной и др.). В меж#ной, межтканевой жидкостях
животных основными ионами являются Na+ и Cl–. Ионы биополимеров (белков,
нуклеиновых кислот, их комплексов) не оказывает заметного влияния на величины
электропроводности.
При пропускании постоянного тока через живые ткани
было установлено, что сила тока не остается постоянной во
времени, хотя прикладываемое напряжение не изменяется.
Сила тока после наложения разности потенциалов начинает
непрерывно $ и через некоторое время устанавливается на
постоянном уровне. При этом она $ в сотни и даже тысячи раз
по сравнению с исходным значением.
а – значение тока при Получается как бы отклонение от закона Ома, согласно
отсутствии поляризации, б – которому при постоянной разности потенциалов ток в
при наличии поляризации.
проводнике тоже должен быть постоянным.
Уменьшение тока во времени обусловлено явлениями поляризации, проходящими
в ткани.
При прохождении постоянного тока через био© в ней возникает нарастающая до
некоторого предела ЭДС противоположного направления – ЭДС поляризации, которая
уменьшает приложенную к объекту эффективную ЭДС, что и приводит к уменьшению
тока. ЭДС поляризации P(t) является функцией времени. Тогда закон Ома для
биологического объекта следует записать:
V −P(t )
I=
R
2
Возникновение ЭДС поляризации связано со способностью живых ## накапливать
заряды при прохождении через них тока, т.е. с емкостными, диэлектрическими
свойствами био©, обусловленными явлениями поляризации.
Виды поляризаций
Вещества обладают свободными и связанными зарядами. Свободные заряды –
электроны и ионы – под действием поля имеют возможность перемещаться от одного
электрода к другому, создавая ток проводимости. Следует отметить, что в ## свободные
ионы могут перемещаться под действием поля в ограниченных объемах – от одной
мембраны до другой. Связанные заряды под действием поля имеют возможность
перемещаться только в некоторых, часто очень ограниченных пределах. При своем
перемещении они создают токи смещения.
Процесс перемещения связанных зарядов под действием ē-го поля и образование
вследствие этого электродвижущей силы, направленной против внешнего поля,
называется поляризацией. Поляризация по своей природе делится на несколько видов.
Электронная поляризация представляет собой
смещение электронов на своих орбитах относительно
положительно заряженных ядер в атомах и ионах. В
результате такого смещения атом или ион превращается в
индуцированный, наведенный диполь с направлением,
противоположным внешнему полю. Время возникновения
электронной поляризации после мгновенного наложения
поля, называемое временем релаксации, равняется 10–16–10–14
с. Возникающий дипольный момент имеет небольшую
величину.
Ионная поляризация – смещение иона в
кристаллической решетке с возникновением ЭДС обратного
приложенному направления. Время релаксации ионной
поляризации 10–14-10–12 с.
Электронная и ионная поляризации не играют
существенной роли в ©.
Дипольная (ориентационная) поляризация свойственна полярным молекулам.
Вода, спирты, белки обладают значительными дипольными моментами. Время
релаксации (τ) дипольной поляризации совпадает со временем поворота молекул,
колеблется от 10–13 до 10–7 с и определяется по формуле: τ = 4πηr3/kT,
где η – вязкость среды; r – радиус молекулы; Т – абсолютная температура, k–постоянная
Больцмана.
Макроструктурная поляризация зависит от неоднородности электрических
свойств проводящей среды и связана с чередованием слоев высокой и низкой
проводимости и накоплением свободных зарядов на границе слоев с низкой
проводимостью, что свойственно био© с их гетерогенностью и развитой сетью мембран
и мембранных структур, имеющих сопротивление порядка 1000 Ом/см 2 . Время
релаксации макроструктурной поляризации 10–8-10–3 с.
Поверхностная поляризация свойственна поверхности с двойным электрическим
слоем. В электрическом поле происходит смещение ионов диффузной части в одну, а
частиц – в противоположную стороны. Время релаксации – 10–3 - 1 с.
3
Электролитическая поляризация означает изменение концентрации зарядов в
приэлектродном слое. Время релаксации этой поляризации – 10–4 - 102 с.
Для устранения различных видов поляризации измерение электропроводности
проводят на переменном токе различной частоты. На высоких частотах (10 10 - 1011 Гц)
поляризация практически исключается.
Все описанные явления поляризации в той или иной степени присущи
биологическим объектам. При наложении внешней разности потенциалов в тканях
возникает противоположно направленное электрическое поле, которое значительно
уменьшает внешнее поле и обусловливает высокое удельное сопротивление тканей
постоянному току (порядка 106–107 Ом·см). При этом вначале возникают те виды
поляризации, которые имеют меньшее время релаксации.
Все явления поляризации могут быть описаны с помощью диэлектрической
проницаемости вещества. Диэлектрическая проницаемость ε характеризует $ величины
ē-го поля в веществе по сравнению с величиной ē-го поля в вакууме. Если
напряженность однородного поля, образуемого некоторыми зарядами, в вакууме
равняется Е0, а напряженность поля, создаваемого этими же зарядами, в веществе – Е, то
Е0
ε=
Е
Если, например, диэлектрическая проницаемость воды равняется 80, то это значит,
что напряженность поля между двумя пластинами, между которыми находится вода, в 80
раз $ напряженности поля, создаваемого этими же зарядами в вакууме. И это $
напряженности поля обусловлено дипольной поляризацией, вызванной вращением
(ориентацией) полярных молекул воды в ē-ком поле.
Величина ε определяется как отношение емкости конденсатора С, между
обкладками которого находится данное вещество, к емкости С0 того же конденсатора в
вакууме:
С
ε=
С0
Электропроводность для переменного тока
Так как био© способны накапливать ē-кие заряды при прохождении через них
тока, то их ē-кие свойства недостаточно описывать с помощью омического
сопротивления. Необходимо пользоваться также понятием ē-кой емкости.
Емкость является коэффициентом пропорциональности между зарядом и
потенциалом и определяется как отношение изменения заряда Δq проводника к
изменению его потенциала Δφ:
Δq
С=
Δϕ .
ē-кая емкость при равных условиях геометрии объекта определяется его
диэлектрической проницаемостью, т. е. явлениями поляризации. Для плоского
конденсатора она определяется по формуле:
εS
С=
4 πd
где S – площадь пластин; d – расстояние между ними.
Измеряемая емкость биообъекта определяется поляризационной емкостью, которая
возникает в момент прохождения тока. Поляризационная емкость отражает отношение
4
изменения заряда объекта к изменению его потенциала при прохождении переменного
тока.
t
Δq=∫ Idt
Изменение заряда за время t 0 , а изменение потенциала Δϕ=R ( I 0 −I t ) .
t

∫ Idt
0
C p=
R ( I 0 −I t )
Тогда поляризационная емкость ,
где I0 и It – начальное и конечное значения силы тока; I – ток мгновенный; R –
сопротивление объекта.
К поляризационной емкости биообъекта присоединяется значительная по величине
статическая емкость мембран (1 мкф/см2). Как следует из уравнения, величина
поляризационной емкости зависит от времени действия поля и может на низких частотах
превышать величину статической емкости. На более высоких частотах (порядка 10 кГц)
статическая емкость на несколько порядков  поляризационной. А так как эти емкости
соединены последовательно, то на высоких частотах общая величина емкости
определяется меньшей по величине поляризационной емкостью.
Электрическая модель биообъекта может быть
представлена в виде различных комбинаций емкостей и
сопротивлений – в виде различных эквивалентных схем.
Наиболее простыми являются эквивалентные схемы с
последовательным и параллельным соединением С и R.
Так как биологические объекты обладают как
Эквивалентные схемы проводимостью, так и емкостью, то они будут
биообъектов характеризоваться как активным, так и реактивным
сопротивлением.
Реактивное (емкостное) сопротивление Хс зависит от частоты, на которой
проводится его определение: Хс = 1/ωС, где С – емкость ©, ω – круговая частота,
которую рассчитывают по формуле: ω = 2π f, где f – частота в герцах.
Общее сопротивление Z (импеданс) при последовательном соединении Z = R + Хс,
где R – активное (омическое) сопротивление. При параллельном соединении
2 2 2
реактивного и активного сопротивлений импеданс равен: Z =R √1+ω R c .
Для измерения импеданса биообъектов используют мосты постоянного и
переменного токов; применяют металлические и угольные электроды. Для измерения
импеданса цитоплазматических мембран используют неполяризующиеся электроды
(хлорсеребряные). Микроэлектрод вводят в #, а второй (макроэлектрод) находится
снаружи.
При гибели, медленном отмирании тканей происходит  электропроводности на
низких частотах, что объясняют повышением проницаемости биомембран для ионов.
Б.Н.Тарусов предложил определять коэффициент дисперсии К = RН/RВ, где RН и RВ –
соответственно сопротивления, измеренные на низкой и высокой частотах. Выбор частот
определяется диапазоном α-дисперсии. Для мышечной ткани RH – 103 Гц, RВ – 106 Гц, для
клеток крови и жировой ткани RH – 104 Гц, RВ – 107 Гц, для кожи RH – 102 Гц, RВ – 104 Гц и
т.д.
5
Можно вычислить ионную проводимость и объем межклеточных промежутков и
цитоплазмы, проницаемость мембран для ионов, величины емкости биомембран.
Физические (ионизирующее и УФ излучения, повышение t°) и химические
факторы (кислоты, щелочи, спирты, органические растворители) обычно 
проницаемость мембран для ионов, что приводит к $ импеданса и емкостного
сопротивления.
Измерение активного сопротивления, емкости и дисперсии ē-го сопротивления
позволили вычислить статическую емкость мембраны #. Ее величина оказалась около 1
мкФ/см2, а это, в свою очередь, обосновало предположение о том, что толщина
липидного бислоя составляет 5,0-6,0 нм.
Импеданс объектов изменяется при изменении частоты тока, на котором
производится измерение, при  частоты реактивная составляющая импеданса $.
Зависимость импеданса или емкостного сопротивления от частоты называют дисперсией
электропроводности.
Изменение импеданса с частотой обусловлено также зависимостью поляризации от
периода действия переменного тока. Если время, в течение которого электрическое поле
направлено в одну сторону, больше времени релаксации какого-либо вида поляризации,
то поляризация достигает своего максимального значения и вещество будет
характеризоваться определенным постоянным значением эффективной диэлектрической
проницаемости и проводимости. До тех пор пока полупериод переменного тока больше
времени релаксации, эффективная диэлектрическая проницаемость и проводимость
объекта не будут изменяться с частотой. Если же при увеличении частоты полупериод
переменного тока становится меньше времени релаксации, то поляризация не успевает
достигнуть максимального значения. После этого диэлектрическая проницаемость
начинает $ с частотой, а проводимость – . При значительном  частоты данный вид
поляризации практически будет отсутствовать и диэлектрическая проницаемость и
проводимость снова станут постоянными величинами. Они будут определяться другими
видами поляризации с меньшим временем релаксации.
При изучении частотных зависимостей сопротивления и
емкости биологических объектов было обнаружено три
области дисперсии:
α-Дисперсия занимает область низких частот звукового
диапазона, примерно до 1 кГц. В данной области $
диэлектрической проницаемости био© обусловлено только
уменьшением эффекта поляризации поверхности #, поскольку
Дисперсия ē-кий ток с частотой до 1 кГц протекает практически только по
диэлектрической межклеточникам, так как сопротивление # для токов низкой
проницаемости
мышечной ткани частоты велико.
β-Дисперсия занимает более широкую область частот: 10 3–107 Гц. Наиболее полно
ē-кие свойства биообъектов в области β-дисперсии описываются электрохимическая
теория поляризации био©. Согласно этой теории:
 емкость и проводимость био© в данной области частот определяются
макроструктурной поляризацией, обусловленной гетерогенностью структуры
6
– в первую очередь наличием мембран, как #-ной мембраны, так и мембран
цитоплазмы.
 сущностью макроструктурной поляризации является перераспределение
ионов на границе макроструктурного объема, т. е. электролитическая
поляризация границы раздела. При описании электрических свойств тканей
учитыватся биологические особенности объекта – #-ная проницаемость и
наличие ионных потоков через мембрану.
γ-Дисперсия диэлектрической проницаемости тканей наблюдается на частотах
выше 1000 МГц. Уменьшение диэлектрической проницаемости в данном диапазоне
обусловлено ослаблением эффекта поляризации, вызываемой диполями воды. Величина
γ-дисперсии будет зависеть от содержания свободной воды в исследуемых тканях. В
области 400 МГц (между (β- и γ-дисперсией) величина ε для тканей (кроме жировой,
костной и мозговой) лежит в пределах 40–60 в зависимости от содержания свободной
воды.
В области сверхвысоких частот (больше 1010 Гц) эффект поляризации,
обусловленный диполями воды, будет отсутствовать. Диэлектрическая проницаемость
будет иметь небольшие значения, определяемые ионной и электронной поляризацией,
имеющей самое малое время релаксации.
На три основных дисперсионных явления, обусловленных поверхностной
поляризацией, макроструктурной поляризацией и дипольной поляризацией воды,
накладываются дополнительные, сравнительно меньшие эффекты поляризации:
1) поляризация белковых и других органических молекул, обладающих
дипольными моментами. Дисперсия данного вида поляризации происходит на частотах в
несколько мегагерц;
2) поляризация гидратных оболочек макромолекул (связанной воды). Дисперсия
наблюдается в диапазоне частот 100–1000 МГц;
3) поляризация связанных полярных групп макромолекул, имеющих меньшее
время релаксации, чем макродиполи молекул. Область дисперсии этого вида
поляризации 100–1000 МГц.
Общая картина частотной зависимости ē-ких параметров сохраняется для всех
тканей, что обусловлено единством структуры и химического состава ##. В каждом
конкретном случае индивидуальные особенности объектов обусловливают характер
частотной зависимости. К таким особенностям относятся размеры и форма ##, величина
их проницаемости, соотношение между объемом ## и меж#ных пространств, содержание
свободных ионов в ##, содержание свободной воды и пр.
Применение метода измерения электропроводности в биологических и
медицинских исследованиях
Удобство в применении данного метода заключается в том, что используемые
напряжения (менее 50 мВ) не вносят существенных изменений в физико-химические
процессы, происходящие в биологическом объекте, и тем более не повреждают его.
Метод нашел широкое применение при изучении процессов, происходящих в
живых ## и тканях при изменении физиологического состояния, при патологических
состояниях, при действии повреждающих факторов: t°, излучения, ультразвука и т. д.
Например, работы по измерению емкости и сопротивления мембраны при
прохождении потенциала действия. На низких частотах сопротивление объекта может
7
служить мерой проницаемости мембран, поэтому с помощью метода
электропроводности можно изучать проницаемость мембран для ионов.
При патологических процессах в тканях также происходит изменение их ē-ких
свойств. Например, при воспалении в первых стадиях процесса происходит 
сопротивления тканей. Особенно сильный эффект наблюдается при измерении на низких
частотах, когда все измеряемое сопротивление представлено в основном сопротивлением
межклеточных пространств. При воспалении происходит набухание ##, объем
межклеточных пространств $, в результате чего и  омическое сопротивление.
Увеличение сопротивления при сохранении емкости всегда свидетельствует о набухании
тканей, а $ сопротивления при сохранении емкости, наоборот, указывает на $ объема
клеток. В более поздних стадиях воспаления происходят глубокие структурные
изменения, дальнейшее увеличение #-ной проницаемости, что сопровождается $ емкости
и сопротивления. Таким образом, измерение электрических параметров тканей может
служить средством для диагностики воспалительных процессов.
В физиологии и медицине метод электропроводности применяется для оценки
кровенаполнения органов. При увеличении наполнения органа кровью во время систолы
сердца его сопротивление $, так как кровь обладает меньшим удельным сопротивлением,
чем ##. При диастоле сердца сопротивление органа . Метод регистрации изменении
сопротивления органов, обусловленных изменением кровенаполнения, называется
реографией. Одновременно регистрируется и первая производная сопротивления,
которая характеризует скорость кровенаполнения. Можно изучать перераспределение
крови между органами в различных условиях. Метод реоэнцефалографии позволяет
исследовать мозговое кровообращение и имеет большое значение в диагностике ряда
заболеваний.
С помощью метода электропроводности можно изучать процессы связывания
ионов молекулами белков или других органических соединений. Если в раствор
электролита добавить белок, то электропроводность раствора $. Понижение
электропроводности определяется главным образом тем, что часть ионов раствора будет
связываться молекулами белков. По уменьшению электропроводности можно вычислить
количество ионов, связанных одной молекулой белка.
Помимо этого, метод электропроводности позволяет определять,
степень гидратации белковых молекул. Если измерить
диэлектрическую проницаемость раствора белка на низких
частотах, то ее значение будет выше значения для воды. Это
объясняется тем, что на низких частотах она определяется
поляризацией диполей воды и диполей белков. На высоких
частотах диэлектрическая проницаемость раствора будет
меньше диэлектрической проницаемости воды.
Это обусловлено тем, что на высоких частотах поляризация диполей белков
отсутствует. А так как часть молекул воды входит в гидратные оболочки белковых
молекул, то в поляризации принимают участие не все молекулы воды. По величине
уменьшения диэлектрической проницаемости раствора можно вычислять степень
гидратации белков.
В медицине с лечебной целью широко применяется искусственный нагрев тканей
токами высокой частоты (диатермия), высокочастотным магнитным полем (ин-
8
дуктотермия), ультравысокочастотным электрическим полем (УВЧ-терапия). Энергия
переменного электрического и электромагнитного полей, вызывающая различные виды
поляризации в тканях, в конечном счете превращается в тепло. Тепловой эффект
применяемых факторов зависит как от параметров действующих физических факторов,
так и от величин диэлектрической проницаемости и сопротивления тканей и их
частотных характеристик. Максимальный нагрев тканей происходит в зоне дисперсии
электропроводности, когда поляризация наиболее интенсивна.
Электрокинетические явления
К электрокинетическим явлениям относят движение фаз гетерогенной ©
друг относительно друга при наложении внешнего ē-кого поля или же возникновение
разности потенциалов в © при механическом движении фаз под действием каких-
либо сил. К таким явлениям относятся электрофорез, электроосмос, потенциалы течения
(протекания) и потенциалы оседания (седиментации).
Возникновение электрокинетического потенциала
Для возникновения разности потенциалов между фазами гетерогенной © на
границе раздела необходимо наличие двойного электрического слоя. Образование его
связано с возникновением на поверхности дисперсной фазы свободных электрических
зарядов. Электрические заряды на поверхности коллоидных частиц или на поверхности
## и #-ных органоидов могут возникать в результате двух процессов: диссоциации
ионогенных групп и адсорбции ионов дисперсионной среды на поверхности
дисперсной фазы, которая сама не способна образовывать ионы.
1) Возникновение поверхностного заряда за счет ионизации может, например,
происходить в белках и других органических электролитах, содержащих карбоксильные,
аминные и другие полярные диссоциирующие группы. Благодаря наличию кислотных и
щелочных групп белки представляют собой биполярные ионы. В кислых растворах белок
играет роль катиона.
Например, при действии НС1 происходит При действии NaOH происходит такая
реакция: реакция:

В результате ионизации групп NH2 и СООН одни ионы – так называемые


противоионы – уходят в дисперсионную среду, а другие – потенциалообразующие ионы
– остаются фиксированными на поверхности, содержащей данные молекулы белка.
Поверхность, содержащая белки, будет иметь заряд того знака, который имеют
потенциалобразующие фиксированные ионы (NН3+ в первом случае и СОО– – во втором),
а дисперсионная среда будет иметь заряд, создаваемый противоионами. Такая группа (©)
ионов, в целом нейтральная, называется двойным электрическим слоем.
2) Вторым процессом, ведущим к образованию двойного электрического слоя,
является адсорбция ионов поверхностью дисперсной фазы из дисперсионной среды.
Адсорбция ионов может происходить на полисахаридах, липидах, холестерине, белках.
9
Адсорбция ионов сильно связана с наличием полярных недиссоциирующих групп:
гидроксильных, карбонильных, пептидных и пр.
Адсорбироваться могут как катионы, так и анионы, однако
преимущественно адсорбируются анионы, что связано с их
меньшей степенью гидратации. Ионы, которые адсорбируются
поверхностью, являются потенциалобразующими – от них
зависит знак заряда поверхности; в дисперсионной среде
остаются противоионы, которые и определяют ее заряд.
Структура двойного электрического слоя не зависит от
механизма возникновения заряда на поверхности, т.е. от того,
происходит ли образование заряда путем диссоциации
ионогенных групп или за счет адсорбции ионов из раствора.

Двойной электрический слой имеет следующее строение. Часть ионов находится


на молекулярном расстоянии от поверхности, образуя плотный гельмгольцевский слой.
Этот слой состоит из потенциалообразующих ионов и некоторой части противоионов.
Противоионы удерживаются на поверхности частицы силами специфической адсорбции,
поэтому этот слой называется адсорбционным слоем. Противоионы адсорбционного
слоя всегда перемещаются вместе с частицами дисперсной фазы. Остальная часть
противоионов, не находящихся в адсорбционном слое, остается в дисперсионной среде и
образуется так называемый диффузионный слой. Диффузионный слой может отставать
от движения частицы с адсорбционным слоем.
Полная разность потенциалов Е между дисперсной фазой и дисперсионной средой
называется полным электротермодинамическим потенциалом. Разность потенциалов
ζ, (дзета-потенциал) между адсорбционным слоем и дисперсионной средой называется
электрокинетическим потенциалом, ζ -потенциал всегда меньше термодинамического
потенциала, и это уменьшение обусловлено присутствием части противоионов в
адсорбционном слое (по существу в дисперсной фазе).
Любые факторы, влияющие на строение двойного электрического слоя, изменяют
величину ζ-потенциала. При  концентрации ионов в дисперсионной среде толщина
диффузионного слоя $ и $ ζ -потенциал. Если двойной электрический слой возникает в
результате диссоциации ионогенных групп, то величина электрокинетического
потенциала в большой степени будет зависеть от рН дисперсионной среды.
Электрокинетический потенциал возникает в очень тонком слое жидкости,
прилегающем непосредственно к поверхности дисперсной фазы, поэтому его нельзя
зарегистрировать с помощью электродов. Величину ζ -потенциала можно рассчитать
только косвенно, по скорости движения фаз в электрическом поле.
Электрофорез
Если к гетерогенной системе приложить постоянную разность потенциалов, то
фазы этой системы прядут в движение вследствие взаимодействия с электрическим
полем. Движение частиц дисперсной фазы в электрическом поле по направлению к
10
противоположно заряженному электроду называется электрофорезом.
Электрофорез был открыт Ф. Рейссом в 1807 г.
Скорость передвижения частиц дисперсной фазы можно найти из уравнения
Смолуховского:
εEζ
v=
4 πη
где v – скорость передвижения частиц; ε – диэлектрическая проницаемость
дисперсионной среды; Е – градиент потенциала внешнего электрического поля; ζ –
электрокинетический потенциал; η – коэффициент вязкости дисперсионной среды.
Уравнение применимо в тех случаях, когда размеры частиц значительно
превышают толщину двойного электрического слоя, составляющую доли нанометра.
Оно полностью применимо для Er, лейкоцитов, микроΩΩ и других ##. Для белковых
молекул и коллоидных частиц, размер которых сравним с толщиной двойного
электрического слоя, электрофоретическая подвижность зависит от их размера и формы.
Для расчетов в уравнение вводят коэффициент, зависящий от размера и формы частиц.
Уравнение применяется для вычисления величины электрокинетического потенциала.
Для этого необходимо знать напряженность внешнего поля, диэлектрическую
проницаемость и коэффициент вязкости среды, а также скорость движения дисперсной
фазы.
Обычно применяют два метода электрофореза: макро- и микроэлектрофорез. Один
из макрометодов электрофореза заключается в следующем. Исследуемую дисперсную
систему помещают на дно U -образной трубки и наливают над ней в боковые колена
чистый буферный раствор для того, чтобы электрофорез происходил при постоянном рН.
При этом добиваются, чтобы между исследуемой жидкостью и буферным раствором
имелась отчетливая граница раздела. Погружают в каждое колено U-образной трубки
электроды, соединенные с источником постоянного тока. Создаваемое электрическое
поле вызывает перемещение дисперсной фазы исследуемого раствора, и граница между
дисперсной © и буферным раствором перемещается. Перемещение границы
регистрируется с помощью длиннофокусной оптики. Если исследуемая смесь содержит
несколько компонентов, то каждый компонент движется со скоростью,
пропорциональной величине ζ-потенциала. В результате этого смесь разделяется на ряд
фракций. При регистрации получается кривая, имеющая ряд пиков, где высота пиков
служит количественным показателем данных фракций.
С помощью описанного метода удается выделить и исследовать, например,
отдельные фракции белков кровяной плазмы. Данный метод получил особенно широкое
распространение после разработки техники этого метода Тизелиусом. Для диагностики
многих заболеваний необходимо производить качественный и количественный анализ
фракций белков кровяной плазмы. В связи с этим методы электрофореза широко
применяются в клинико-лабораторной практике.
В настоящее время более широко применяется менее точный, но более простой
метод электрофореза на бумаге, предложенный Виландом и Фишером. На специальную
фильтровальную бумагу, смоченную буферным раствором, наносят определенное
количество исследуемого раствора. Концы этой полоски бумаги соединяют через
ванночки, заполненные буфером, с угольными электродами и источником постоянного
11
тока. При включении тока происходит электрофоретическое перемещение компонентов
исследуемой смеси. Электрофоретическая подвижность пропорциональна величине ζ-
потенциала отдельных компонентов. После окончания опыта исследуемые вещества в
зависимости от величины электрофоретической подвижности и величины
взаимодействия с бумагой располагаются на различном расстоянии от линии нанесения –
линии старта. Ленту бумаги высушивают и окрашивают красителем, проявляющим
исследуемые вещества. В дальнейшем разделенные компоненты подвергают
количественному определению путем фотометрирования.
Макрометоды электрофореза применяют в основном для разделения и
исследования электрохимических свойств коллоидных растворов. Для изучения
электрохимических свойств суспензий различных ##: Er, лейкоцитов, бактерий, половых
клеток и пр., а также клеточных органоидов – значительно более пригодны микрометоды
электрофореза. При этом суспензии клеток в небольшом количестве помещают в
специальную камеру, заполненную буферным раствором. В эту камеру вводят также
электроды, соединенные с источником постоянного тока. Под действием электрического
поля клетки начинают двигаться к противоположно заряженному электроду. Скорость
перемещения клеток определяется с помощью микроскопа, снабженного окулярным
микрометром.
С помощью методов электрофореза получены важные данные, характеризующие
электрохимические свойства биологических поверхностей. На основе многочисленных
экспериментов установлено, что живая протоплазмагическая поверхность всегда
заряжена отрицательно, т.е. все биологические поверхности обладают
отрицательным электрокинетическим потенциалом. Не известно ни одного примера
ясно выраженного положительного потенциала поверхности живого объекта.
Величина ζ-потенциала может иметь различные значения для разных клеток.
Большое количество работ посвящено изучению ζ-потенциала Er. Величина ζ-
потенциала Er у различных млекопитающих при рН 7,4 колеблется от 7 до 22 мВ. У
человека она составляет в данных условиях 16,3 мВ. ζ -Потенциал Er – очень стабильная
величина. В пределах одного вида, например у человека, нет никаких различий в
величине ζ-потенциала Er у представителей различных рас и пола. Они не наблюдаются
также между представителями разных групп крови. Электрофоретическая подвижность
Er не изменяется при ряде заболеваний крови, в том числе при многих формах анемий.
ζ -потенциал Er сохраняет свою величину даже после их полного гемолиза. Можно
отметить, что электрохимические свойства поверхности Er отличаются большой
стойкостью и постоянством, ζ-потенциал Er зависит от рН. Изоэлектрическая точка Er
соответствует рН 1,7, что не совпадает ни с изоэлектрической точкой гемоглобина (рН
6,8), ни с изоэлектрической точкой белков плазмы (рН 4,7). Анализируя приведенные
данные и учитывая химический состав оболочек Er, ученые пришли к выводу, что
электрокинетический потенциал Er обусловлен диссоциацией кислотных групп молекул
фосфолипидов (кефалина) на поверхности Er и не связан с процессами адсорбции белков
и ионов. Величина электрокинетического потенциала Er меняется в том случае, если
происходит изменение физико-химического состава самой поверхности клетки. Это
наблюдается при некоторых заболеваниях, например гемобластозах, лимфосаркоме.
Для других форменных элементов крови ζ-потенциал изучен значительно слабее,
чем для Er. Лейкоциты при электрофорезе, как и эритроциты, движутся к аноду, но их
12
подвижность примерно в 2 раза ниже подвижности Er. Электрофоретическая
подвижность лейкоцитов весьма близка к подвижности кварцевых частиц,
адсорбировавших на своей поверхности молекулы сывороточных белков. Это делает
вероятным предположение, что электрокинетический потенциал лейкоцитов обусловлен
диссоциацией ионогенных групп белков сыворотки крови, адсорбированных на
поверхности лейкоцитов.
По мнению Г. Абрамсона, явление электрофореза наблюдается при миграции
лейкоцитов в воспалительные очаги. Хотя лейкоциты обладают активным
хемотаксическим движением, электрокинетические явления могут способствовать
миграции лейкоцитов. В воспаленных участках происходят процессы разрушения
структур и накопления свободных молекул, главным образом органических кислот, что
приводит к сдвигу рН в кислую сторону (до рН 6,2–6,5). В результате этих физико-
химических изменений пограничный участок между воспаленной и невоспаленной
тканью приобретает избыточный положительный потенциал величиной до 100–150 мВ.
А так как лейкоциты обладают отрицательным электрокинетическим потенциалом, то
они движутся через стенку капилляра в ткань по направлению к положительно
заряженному воспаленному участку.
Большое количество работ посвящено исследованию электрокинетического
потенциала бактериальных клеток. Бактериальные клетки обладают отрицательным ζ-
потенциалом, который может меняться в очень широких пределах: от нуля до десятков
милливольт. Благодаря изучению зависимости ζ-потенциала от рН среды большинство
бактерий удалось разделить на две группы. К первой группе принадлежат бактерии,
поверхность которых имеет белковую природу. Диссоциация ионогенных групп
белковых молекул обусловливает заряд и ζ-потенциал таких клеток, ζ-потенциал этих
клеток меняется при изменении рН среды, так как степень диссоциации ионогенных
групп зависит от рН. Ко второй группе относятся бактерии, поверхность которых
состоит из полисахаридов. Заряд клеток в данном случае обусловлен адсорбцией ионов
из дисперсионной среды полисахаридами поверхности. Электрофоретическая
подвижность таких клеток практически не зависит от рН среды.
Однако такое деление оказывается довольно условным, так как свойства
поверхности бактериальных клеток могут изменяться при изменении внешних условий
существования. Так, например, ζ-потенциал золотистого стафилококка при обычных
условиях культивирования остается постоянным при большом изменении рН среды.
Если же бактерии культивируются в среде, богатой глюкозой, то наблюдается
зависимость ζ-потенциала от величины рН. Это, по мнению многих авторов, следствие
накопления на поверхности клеток ионогенных групп белковой природы.
Таким образом, метод электрофореза является хорошим средством изучения
электрохимических свойств биологических поверхностей: способности к ионизации и
способности к адсорбции молекул и ионов.
Электроосмос
Электроосмос – это движение дисперсионной среды в электрическом поле по
направлению к электроду, заряженному противоположно дисперсионной среде и
одноименно с частицами дисперсной фазы. Для наблюдения электроосмоса удобно,
чтобы дисперсная фаза была фиксирована неподвижно. Тогда при наложении
электрического поля наблюдается ток жидкости (дисперсионной среды), содержащей
13
противоионы, к противоположно заряженному полюсу. Электроосмотическое движение
жидкости может происходить через поры пластинчатых тканей: кожу лягушки,
брыжейку млекопитающих, а также через различные капилляры, стенки которых
обладают электрическим зарядом, и через осадки мелких частиц, например глины.
Впервые электроосмос через осадок частиц глины наблюдал в 1809 г. Рейсе.
Если взять сосуд с раствором Рингера и разделить
его кожей лягушки, а в каждую половину опустить
электроды, соединенные с источником
постоянного тока, то можно получить
электроосмотическое движение раствора через
поры кожи. Кожа лягушки обладает
отрицательным зарядом, дисперсионная среда
(раствор Рингера) – положительным.
При замыкании цепи раствор движется через
поры к отрицательно заряженному электроду и
уровень жидкости в одной половине сосуда будет
понижаться, а в другой – повышаться.
В настоящее время считают, что электроосмотические явления имеют место при
работе секретирующих клеток и органов выделения, в частности почек. В клетках
проксимального канальца нефрона функционируют механизмы активного переноса
ионов натрия и калия. За счет работы этих механизмов, а также за счет пассивного
движения ионов между апикальной и базальной поверхностями клеток канальца
возникает разность потенциалов величиной 50–60 мВ. Поэтому через стенку
проксимального канальца наряду с обычным осмосом возможен и электроосмотический
ток жидкости.
Ионофорез
Ионофорез – это метод введения через неповрежденную кожу и слизистые
оболочки в организм различных лекарственных веществ с помощью постоянного
тока. Метод был предложен Ледюком в 1907 г. Из катионов таким путем вводят
кальций, цинк, ртуть и другие металлы, а также алкалоиды: хинин, адреналин, новокаин;
из анионов – главным образом йод и салицилат. Для введения катионов
соответствующим солевым раствором пропитывают анод, покрытый марлей или губкой;
при введении анионов действуют катодом. При включении тока происходит движение
ионов – ионофорез – через кожу под действием электрического поля.
Кожа человека в обычных условиях обладает очень малой проницаемостью для
ионов. Это связано с тем, что поры кожи заполнены воздухом. Крупные органические
ионы вообще не могут проникать через кожу. Так как стенки кожных пор обладают
электрическим зарядом, то при наложении внешнего электрического поля возникает
электроосмотическое движение жидкости через поры либо изнутри, либо снаружи,
пропорциональное величине электрокинетического потенциала поверхности поры.
Воздух при этом вытесняется из пор и они заполняются жидкостью, в результате чего
проницаемость кожи значительно увеличивается. Проникновение ионов через кожу при
ионофорезе будет обусловлено двумя процессами: собственно ионофорезом частиц и
14
электроосмосом жидкости, в которой находятся частицы. Электроосмос по направлению
может совпадать, а может быть и противоположным ионофорезу.
Количество введенного при ионофорезе вещества будет зависеть от количества
электричества, прошедшего через электроды, и от концентрации вводимого вещества во
внешнем растворе. Главное медицинское достоинство ионофореза состоит в
возможности строго локализованного, местного действия на ткань.
Имеются данные, что явления ионофореза играют важную роль в поступлении
питательных веществ к костным клеткам – остеоцитам. Остеоциты обычно расположены
сравнительно далеко от кровеносных сосудов, а каналы, по которым перемещается
жидкость в кости, составляют всего 3% ее поперечного среза. Поэтому поступление
питательных веществ к остеоцитам путем диффузии было бы затруднительным.
В 1953 г. Ясуда обнаружил, что кость обладает пьезоэлектрическим свойствами –
при ее механической деформации возникают электродвижущие силы. Участки кости,
которые под действием давления приобретают вогнутую форму, заряжены отрицательно,
и наоборот, участки, образующие выпуклую поверхность, заряжены положительно.
На основе этого Бессет предположил, что меняющий свое направление
электрический импульс, возникающий при незначительных физиологических
деформациях скелета, служит как бы насосом, обеспечивающим приток к остеоцитам и
отток от них ионов и заряженных молекул, в результате чего обеспечивается нормальное
питание остеоцитов. Эта гипотеза подтверждается убедительными экспериментами. Так,
в бедро собакам имплантировали небольшие, не причиняющие боли батарейки таким
образом, что два электрода проникали в костно-мозговую полость. После длительного
пропускания небольшого тока было обнаружено, что в области отрицательного
электрода усиливался рост кости и происходило ее новообразование. Немецкие врачи
Фриденберг и Брайтон на основе подобных экспериментов разработали метод
заживления костных переломов, который применяется в лечебной практике.
Потенциалы течения и оседания
Потенциалы течения возникают в результате движения жидкости под действием
гидростатического давления через капилляры или поры, стенки которых обладают
электрическим зарядом. Это явление, обратное электроосмосу. При электроосмосе
наложение разности потенциалов вызывает движение дисперсионной среды; в данном
случае, наоборот, движение дисперсионной среды вызывает появление разности
потенциалов. Система, изображенная на рис. 36, является обратимой: если повышением
гидростатического давления в левой половине сосуда вызвать фильтрацию жидкости в
правую половину, то между ними возникнет разность потенциалов. При этом жидкость,
находящаяся справа от перегородки, приобретает положительный потенциал по
отношению к жидкости, находящейся слева.
Потенциалы течения впервые обнаружены Квинке в 1859 г.
15
Потенциалы оседания возникают между верхними и нижними
слоями гетерогенной системы при оседании (седиментации)
частиц дисперсной фазы под действием силы тяжести. Данное
явление обратно электрофорезу, при котором внешнее
электрическое поле вызывает движение частиц дисперсной
фазы. Потенциал оседания возникает, например, при стоянии
крови. Форменные элементы крови (эритроциты, лейкоциты,
тромбоциты), удельный вес которых больше, чем плазмы,
оседают на дно сосуда (рис. 37).
Противоионы диффузионного слоя – катионы – отстают от движения форменных
элементов.
В результате этого нижние слои приобретают отрицательный заряд, а верхние –
положительный.
Впервые потенциал оседания был описан Дорном в 1878 г.
Электрокинетический потенциал и агглютинация
Стабильность коллоидных растворов и взвесей клеток в большой степени зависит
от величины дзета-потенциала частиц. Для того чтобы произошло склеивание
(агглютинация) частиц, необходимо их сближение на достаточное расстояние. При
сближении частиц одноименно заряженные ионы диффузионных слоев испытывают
взаимное отталкивание и это препятствует дальнейшему сближению частиц, их
агглютинации и седиментации. Величина сил отталкивания возрастает пропорционально
толщине диффузионного слоя и, следовательно, величине ζ-потенциала частиц. Факторы,
которые вызывают уменьшение ζ-потенциала, приводят к усилению коагуляции
коллоидов и агглютинации взвешенных клеток. Величина ζ-потенциала снижается при
увеличении концентрации ионов в дисперсионной среде. При этом происходит сжатие
диффузионного слоя и адсорбция противоионов на поверхности частиц, что и приводит к
уменьшению ζ-потенциала. Коагулирующее действие электролитов зависит от
валентности иона, знак заряда которого противоположен знаку заряда коллоидной
частицы, (правило Шульце–Гарди). Такая же зависимость существует и для
агглютинации взвешенных клеток. Например, агглютинацию Er и бактериальных клеток
ускоряют соли многовалентных металлов: алюминия, тория, лантана. Катионы этих
солей сорбируются на отрицательно заряженной поверхности клеток и уменьшают ζ-
потенциал. При снижении ζ-потенциала ниже некоторой критической величины
начинается интенсивная агглютинация клеток, усиливающаяся по мере дальнейшего
понижения потенциала. В случае образования двойного электрического слоя путем
диссоциации ионогенных групп величина ζ-потенциала зависит от рН среды. Поэтому
для соответствующих клеток скорость агглютинации будет зависеть от рН окружающего
раствора.
Однако во многих случаях скорость агглютинации клеток возрастает без
уменьшения ζ-потенциала. Например, при беременности значительно ускоряется
агглютинация Er, показателем которой является скорость оседания Er (СОЭ), но ζ-
потенциал при этом не изменяется.
Кроме этого, было замечено, что у некоторых клеточных взвесей стабильность
меньше, чем у других, несмотря на то что значение ζ-потенциала у данных клеток выше.
16
Например, ζ-потенциал Er лошади больше ζ-потенциала Er быка. В то же время
стабильность Er лошади значительно ниже стабильности Er быка.
Приведенные данные, а также ряд других заставляют сделать вывод, что
стабильность клеточных взвесей зависит не только от величины сил отталкивания,
определяемых ζ-потенциалом, но и от величины сил сцепления – кохезионных сил,
склеивающих клетки при их достаточном сближении. Если силы отталкивания больше
кохезионных сил, то клеточная взвесь являются стабильной. Таким образом, силы
сцепления определяют ту критическую величину ζ-потенциала клеток, которая
необходима для создания уравновешивающих сил отталкивания, обусловливающих
стабильность взвеси. Для бактерий тифа кролика, например, минимальная, критическая
величина ζ-потенциала составляет 13 мВ. При увеличении сил сцепления или же
приуменьшении ζ-потенциала стабильность взвеси клеток будет уменьшаться.
Описанные положения в какой-то мере объясняют механизм действия иммунных
веществ – агглютининов. При выработке иммунитета в крови образуются специальные
вещества – агглютинины, способные адсорбироваться определенными бактериями.
Агглютинины адсорбируются на поверхности бактерий и увеличивают силы сцепления
клеток. Имеющаяся величина ζ-потенщиала клеток оказывается меньше критической,
что и приводит к агглютинации бактерий и быстрому их оседанию.. Агглютинировавшие
же бактерии не способны проявлять болезнетворного действия. Кроме увеличения сил
сцепления, адсорбция агглютининов изменяет электрохимические свойства поверхности
клеток. ζ-Потенциал при этом может снижаться. Например, при агглютинации Er
добавлением сыворотки крови другой группы ζ-потенциал Er снижался от 25–26 до 12–
18 мВ. Снижение ζ-потенциала при адсорбции агглютининов также приводит к
уменьшению стабильности взвеси клеток.