Вы находитесь на странице: 1из 24

Федеральное агентство по рыболовству

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение


высшего образования
«Астраханский государственный технический университет»
Система менеджмента качества в области образования, воспитания,
науки и инноваций сертифицирована DQS по международному стандарту ISO 9001:2015

Институт рыбного хозяйства, биологии и природопользования

Направление 06.03.01 «Биология»

Профиль «Микробиология»

Кафедра «Прикладная биология и микробиология»

КУРСОВАЯ РАБОТА
по дисциплине: «Водная микробиология»
на тему: «Изучение микрофлоры ерика Солянка»

Допущена к защите «___» _________ 2019 г. Работа выполнена студенткой группы


ДББМБ-31.Бекиевой.Х.Х
Научный руководитель работы
________________
подпись Научный руководитель работы

Оценка полученная на защите


« »
д.б.н.проф. Сопрунова.О.Б

Члены комиссии:
_________________(Сопрунова.О.Б )
подпись Фамилия И.О.
_________________(Еремеева.С.В )
подпись Фамилия И.О.
_________________(Гундарева.А.Н )
подпись Фамилия И.О.

Астрахань, 2020
Содержание

Введение
Глава 1. Литературный обзор
1.1 Микрофлора ерика Солянка
1.2 Характеристика ерика
1.3 Влияние несанкционированных свалок на формирование
микрофлоры водоемов
1.4 Выявление несанкционированных свалок на берегах ерика
Солянка
Глава 2. Объекты и методы исследования
2.1 Объекты исследования
2.2. Методы исследования

Глава 3. Результаты исследования


Выводы
Список литературы
Введение

Проблема загрязнения биосферы бытовым мусором в настоящее время


является одной из глобальных экологических проблем. Человечество на
грани кризиса: количество мусора постоянно растет, а места для свалок
становится все меньше. Большая часть бытового мусора не разлагается в
естественных условиях или имеет очень длительный срок разложения. Доля
такого мусора увеличивается с каждым годом.
К бытовым отходам относятся отходы, образовавшиеся в результате
потребления продукции физическими лицами, а также готовые товары
(продукция), использованные населением для удовлетворения личных
потребностей и утратившие свои потребительские свойства.
В результате загрязнения водоемов коммунальными отходами,
бытовым мусором, удобрениями, гербицидами с полей во время паводка
изменяются физические свойства воды (повышается температура,
уменьшается прозрачность, появляются окраска, привкусы, запахи); на
поверхности водоема появляются плавающие вещества, а на дне образуется
осадок; изменяется химический состав воды (увеличивается содержание
органических и неорганических веществ, появляются токсичные вещества,
уменьшается содержание кислорода, изменяется активная реакция среды и
др.); изменяется качественный и количественный бактериальный состав,
появляются болезнетворные бактерии. Загрязненные водоемы становятся
непригодными для питьевого, а часто и для технического водоснабжения;
теряют рыбохозяйственное значение.
Ерики (небольшие речушки шириной до 30 м) - это основа всей
гидрографической сети дельты. Их количество огромно. Астрахань плотно
покрыта ериками, но со временем многие из них пересохли, уступив свои
места человеку под улочки и постройки.
Ерик Солянка располагается в Астраханской области Наримановском
районе на 46° 22' 7" северной широты и 48° 0' 25" восточной долготы. В
последнее время ерик подвергается высыханию и увеличению количества
несанкционированных свалок.
Целью данной курсовой работы является влияние
несанкционированных свалок на формирование микрофлоры ерика Солянка.
Исходя из цели, были поставлены следующие задачи работы:
1. Проведение анализа влияния несанкционированных свалок на
формирование микрофлоры водоемов;
2. Сбор информации о характеристиках ерика Солянка;
3. Изучение микрофлоры ерика Солянка, в том числе обитающих в нем
микроорганизмов;
4. Выявление несанкционированных свалок на берегах ерика Солянка;
5. Анализ влияния несанкционированных свалок на формирование
микрофлоры ерика Солянка.
Глава 1. Литературный обзор

1.1. Характеристика ерика Солянка

В Астрахани очередным объектом благоустройства стал участок улицы


Пушкина, протянувшийся вдоль ерика Солянка.
На неприглядный участок, заросший камышом и заваленный сухостоем
обратили внимание. Силами районной администрации на данном участке
выкосили порядка 5 тысяч квадратных метров зарослей камыша, обрезали
более 50 деревьев и вывезли 30 кубов сухой растительности и мусора. Об
этом сообщает пресс-служба администрации Астрахани. Работа по расчистке
городских территорий будет продолжена. Астраханцев просят уважительно
относиться к труду коммунальных служб и не устраивать свалки близ
собственных домов.
Один из астраханских протоков превращается в высохшее русло. Такая
судьба вскоре ждёт ерик Солянка, уверены местные жители. Уже несколько
лет они пишут во все инстанции о проблеме заиливания и обмеления этой
водной артерии. (Рисунок 1).

Рис.1
Так выглядел умирающий ерик летом и осенью 2019-го года.
Состояние протока достигло критической отметки. Жители села Солянка
тогда спасали маленьких сомят, завязших в иле. Но страдают не только
представители водной фауны. Последствия обмеления водной артерии в
полной мере ощутили и астраханские садоводы. «Ерик находится сейчас в
ужасном состоянии. Он – буквально – пересох, и вода в ближайшие садовые
товарищества не поступает», – рассказывает общественник Александр
Иванушкин. «Даже если нам дадут воду, которая сама придёт у нас весной,
то мы не сможем больше месяца пользоваться этой водой. Наших заборники,
если они прикроются водой немного, на месяц хватит. Потом они будут
наружу, и мы не сможем качать», – отмечает председатель СНТ
"Коммунальник" Лидия Соловьева «Забитое илом русло, заросли камыша.
Именно в таком состоянии сегодня видят астраханцы один из наших
знаменитых ериков – ерик Солянка», – комментирует корреспондент ГТРК
“Лотос” Игорь Глуховский. Ерик Солянка раскинулся от АЦКК до садовых
товариществ недалеко от военного городка. Солянку чистили около 10-ти лет
назад. Но только до "парковского моста". Весь проток далее него продолжал
тихо умирать. Трагедия заболачивания ерика Солянка не ограничивается
исчезновением поливной воды для садоводов. «Проблема заключается в том,
что в летний период здесь из-за замедления происходит заболачивание и
возникает риск развития инфекций. Буквально в 100 метрах от ерика
находится школа, поэтому не исключен риск эпидемии», – заметил
общественник Александр Иванушкин. К сожалению, на наши запросы в
профильные организации по поводу состояния ерика и возможности его
возрождения ответов мы так и не получили. По некоторым расчётам,
стоимость оздоровления многострадального ерика может составить около
150 миллионов рублей. Астраханцы же надеются, что в будущем ерик
Солянка снова станет полноценной водной артерией. И они вновь смогут там
купаться, ловить рыбу и пользоваться его водой для полива садовых
насаждений.

1.2 Микрофлора ерика Солянка


Характер микрофлоры водоемов определяется особенностями
конкретной водной среды. Микрофлору водоемов образуют две группы:
аутохтонные (собственно водные) и аллохтонные (попадающие извне при
загрязнении) микроорганизмы.
Аутохтонная микрофлора – савокупность микроорганизмов, постоянно
живущих и размножающихся в воде. Микробный состав воды напоминает
микрофлору почвы, с которой вода соприкасается (придонные и прибрежные
почвы).
В состав специфической водной микрофлоры входят Micrococcus candicans и
M. roseus ,Sarcina litea, Bacterium aquatilis communis, Pseudomonas fluorescens,
различные виды Proteus и Leptospira. Среди анаэробов в незагрязненных
водоемах выделяют Вacillus cereus, B. mycoides, Chromobacterium
violaceum,виды Clostridium.
Аллохтонная микрофлора - совокупность микроорганизмов, случайно
попавших в воду и сохраняющихся в ней сравнительно короткое время.
Количественные соотношения микроорганизмов в открытых водоемах
варьируют в широких пределах, что зависит от типа водоема, степени его
загрязнения, смены метеорологических условий сезона и т.д.
Микроорганизмы воды играют значительную роль в круговороте веществ,
расщепляя органические вещества животного и растительного
происхождения и обеспечивая питательными веществами другие организмы
живущие в воде.
В реках вода загрязняется больше всего отбросами населенных пунктов. В
озерах, особенно прудах и болотах вода не всегда содержит большое
количество микроорганизмов. Вполне понятно, что в открытые водоемы
большинство микробов попадает из почвы. Поэтому в озерах, прудах, реках
больше всего микробов у берегов.
В воде обитают все известные группы микробов, но наиболее существенный
компонент населения водоемов – бактерии. Как известно,
цитоплазматическая мембрана бактерий обладает способностью
транслокации, то есть активного переноса через клеточную стенку
питательных веществ. Благодаря этому бактерии способны потреблять
питательный субстрат, присутствующий в ничтожно малых концентрациях и
не доступных другим организмам (1-5 мг/л). используя различные источник
жизни бактерии синтезируют органическое вещество своего тела. Процесс
окисления бактериями органических и минеральных веществ воды и
сопряженного с ним бактериального синтеза являются на ряду с
фотосинтезом водорослей самыми крупномасштабными биологическими
процессами, протекающими в водоемах.
Бактериями осуществляется круговорот серы в водоемах. Наполнение
данных отложений полезных ископаемых также происходит с участием
микробов.
В водоемы попадает огромное количество органических веществ, микробы
окисляют их до минеральных соединений. Загрязнение воды, в том числе
болезнетворными микробами может быть препятствием для использования
воды
1.3 Влияние несанкционированных свалок на
формирование микрофлоры водоемов

Загрязнение воды преимущественно происходит вследствие сброса в нее


промышленных, бытовых и сельскохозяйственных отходов. В некоторых
водоемах загрязнение настолько велико, что произошла их полная
деградация как источников водоснабжения.Небольшое количество
загрязнений не может вызвать значительное ухудшение состояния водоема,
так как он имеет способность биологического очищения, но проблема
состоит в том, что, как правило, количество загрязняющих веществ,
сбрасываемых в воду, очень велико и водоем не может справиться с их
обезвреживанием.Водоснабжение и водопользование часто осложняется
биологическими помехами: зарастание каналов снижает их пропускную
способность, цветение водорослей ухудшает качество воды, ее санитарное
состояние, обрастание создает помехи в навигации и функционировании
гидротехнических сооружений. Поэтому разработка мер с биологическими
помехами приобретает большое практическое значение и становится одной
из важнейших проблем гидробиологии.Из-за нарушения экологического
равновесия в водоемах создается серьезная угроза значительного ухудшения
экологической обстановки в целом. Поэтому перед человечеством стоит
огромная задача охраны гидросферы и сохранения биологического
равновесия в биосфере.

Круговорот воды, этот долгий путь ее движения, состоит из нескольких стадий:


испарения, образования облаков, выпадения дождя, стока в ручьи и реки и снова
испарения, На всем своем пути вода сама способна очищаться от попадающих в
нее загрязнений - продуктов гниения органических веществ, растворенных газов
и минеральных веществ, взвешенного твердого материала.

В местах большого скопления людей и животных природной чистой воды обычно


не хватает, особенно если ее используют для сбора нечистот и переноса их
подальше от населенных пунктов. Если нечистот в почву попадает не много,
почвенные организмы перерабатывают их, заново используя питательные
вещества, и в соседние водотоки просачивается уже чистая вода. Но если
нечистоты попадают сразу в воду, они гниют, и на их окисление расходуется
кислород. Создается так называемая биохимическая потребность в кислороде.
Чем выше эта потребность, тем меньше кислорода остается в воде для живых
микроорганизмов, особенно для рыб и водорослей. Иногда из-за недостатка
кислорода гибнет все живое. Вода становиться биологически мертвой в ней
остаются только анаэробные бактерии; они процветают без кислорода и в
процессе своей жизнедеятельности выделяют сероводород - ядовитый газ со
специфическим запахом тухлых яиц. И без того безжизненная вода приобретает
гнилостный запах и становится совсем непригодной для человека и животных.
Подобное может произойти и при избытке в воде таких веществ, как нитраты и
фосфаты; они попадают в воду из сельскохозяйственных удобрений на полях или
из сточных вод, загрязненных моющими средствами. Эти биогенные вещества
стимулируют рост водорослей, водоросли начинают потреблять много кислорода,
а когда его становится недостаточно, они гибнут. В природных условиях озеро,
прежде чем заилиться и исчезнуть, существует около 20 тыс. лет. Избыток
биогенных веществ ускоряет процесс старения, и уменьшает срок жизни озера. В
теплой воде кислород хуже растворяется, чем в холодной. Некоторые
предприятия, особенно электростанции, потребляют огромное количество воды
на охлаждение. Нагретая вода сбрасывается обратно в реки и еще больше
нарушает биологическое равновесие водной системы. Пониженное содержание
кислорода препятствует развитию одних живых видов и дает преимущество
другим. Но эти новые, теплолюбивые виды тоже сильно страдают, как только
прекращается подогрев воды. Органические отбросы, биогенные вещества и тепло
становятся помехой для нормального развития пресноводных экологических
систем только тогда, когда они перегружают эти системы. Но в последние годы на
экологические системы обрушились огромные количества абсолютно чужеродных
веществ, от которых они не знают защиты. Пестициды, применяемые в сельском
хозяйстве, металлы и химикалии из промышленных сточных вод сумели
проникнуть в пищевую цепь водной среды, что может иметь непредсказуемые
последствия. Виды, стоящие в начале пищевой цепи, могут накапливать эти
вещества в опасных концентрациях и становятся еще более уязвимыми для других
вредных воздействий. Загрязненную воду можно очистить. При благоприятных
условиях это происходит естественным путем в процессе природного круговорота
воды. Но загрязненным бассейнам-рекам, озерам и т. п. - для восстановления
требуется значительно больше времени. Чтобы природные системы сумели
восстановиться, необходимо, прежде всего, прекратить дальнейшее поступление
отходов в реки. Промышленные выбросы не только засоряют, но и отравляют
сточные воды. Несмотря ни на что, некоторые городские хозяйства и
промышленные предприятия все еще предпочитают сбрасывать отходы в
соседние реки и весьма неохотно отказываются от этого только тогда, когда вода
становится совсем непригодной или даже опасной.

В своем нескончаемом кругообороте вода то захватывает и переносит множество


растворенных или взвешенных веществ, то очищается от них. Многие из
примесей в воде являются природными и попадают туда вместе с дождем или
грунтовыми водами. Тот же путь проходят и некоторые из загрязняющих веществ,
связанных с деятельностью человека. Дым, пепел и промышленные газы вместе с
дождем оседают на землю; химические соединения и нечистоты, внесенные в
почву с удобрениями, попадают в реки с грунтовыми водами. Некоторые отходы
следуют по искусственно созданным путям - дренажным канавам и
канализационным трубам. Эти вещества обычно более ядовиты, но их сброс легче
контролировать, чем тех, которые переносятся в процессе природного круговорота
воды.

Общемировое водопотребление на хозяйственные и бытовые нужды составляет


примерно 9% суммарного стока рек. Поэтому не прямое водопотребление
гидроресурсов вызывает нехватку пресных вод в тех или иных регионах земного
шара, а их качественное истощение. За последние десятилетия все более
значительную часть круговорота пресных вод стали составлять промышленные и
коммунальные стоки. На промышленные и бытовые нужды потребляется около
600-700 куб. км воды в год. Из этого объема безвозвратно расходуется 130-150 куб.
км, а около 500 куб. км отработанных, так называемых сточных вод сбрасывается
в реки, озера и моря
1.4 Выявление несанкционированных свалок на берегах ерика
Солянка

Главными одноразовыми загрязнителями стали окурки, они занимают


почти треть от всего найденного пластика. В топ-10 также вошли: небольшие
пластиковые пакеты и мягкие пачки от продуктов, бутылки из-под напитков,
пластиковые крышки, кусочки пластика (включая поролон и провода),
влажные салфетки, пакеты-майки, фасовочные пакеты, стаканчики для
напитков и крышки от них, а также пищевые контейнеры, включая упаковку
от фастфуда. 
людей волнует проблема пластикового загрязнения, а самое главное —
что в России есть запрос на законодательное ограничение одноразового
пластика. Уже 127 стран используют разные механизмы, чтобы снизить
потребление одноразовых пластиковых изделий. Только законодательное
ограничение одноразового пластика и переход к альтернативам с долгим
сроком службы позволят существенно сократить количество пластиковых
отходов, которые загрязняют окружающую среду

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

Объектом исследований являлись пробы воды из ерик Солянка,


находящейся в городе Астрахани, отобранные в Трусовском районе по улице
Набережная вблизи моста.
Пробы воды отбирались несколько раз в разные водные режимы.
1) Проба воды, отобранная (не помню) февраля 2020 года, при
следующих погодных условиях: температура воздуха -4 ᵒС, 751 мм рт. ст.,
скорость ветра 6 м/с, влажность воздуха 45% температура воды +1ᵒС. Проба
отбиралась в зимний период из рыбацкой лунки, в связи с ледоставом на
реке. Цель отбора: оценка органолептических показателей, исследование
физиологических и перифитонных групп микроорганизмов.
2) Проба воды, отобранная 25 февраля 20120 года, для санитарно-
микробиологического исследования воды. Погодные условия: температура
воздуха +8 ᵒС, 766 мм рт. ст., влажность воздуха 75%, скорость ветра 11 м/с
температура воды +1ᵒС.

2.2 Схема эксперимента

Отбор проб для анализа

Органолептические Микробиологические
показатели Гидрохимические показатели
показатели
Определение Численность
характера микроорганизмов
запаха воды различных
физиологических
Определение
биохимического
потребления
Определение кислорода в
интенсивности воде
цветности Качества анализа
воды перифитонных
сообществ
Определение
наличие Санитарно-
мутности воды микробиологичес
кий анализу проб
воды
Определение
прозрачности

БГКП

2.3 Методы исследования

2.3.1 Отбор проб воды

Воду для исследований отбирали из поверхностного горизонта из ерика


Солянка10-15 см (в зимний период) или от нижней кромки льда (в зимний
период) при помощи стерильной посуды из темного стекла. После
наполнения емкость закрыли стерильной пробкой, обеспечивающей
герметичность. Отобранную пробу маркировали и сопровождали сведениями
с указанием места, даты, времени забора и другой информации (температуры
воды и погодных условий). Транспортировали в лабораторию с соблюдением
условий, пробы для санитарно-микробиологического анализа отбирали
непосредственно за 4 часа до начала исследований (ГОСТ 31861-2012).

2.3.2 Определение органолептических показателей

Определение запаха. Чистую (без запаха) коническую колбу


ополаскивали 2-3 раза анализируемой водой, после чего заполняли водой
примерно на одну треть объема. Колбу закрыли пробкой, содержимое колбы
несколько раз взбалтывали вращательным движением руки, после чего колбу
открывали и тут же органолептические определяли характер и интенсивность
запаха. При определении запаха воздух вдыхали осторожно (особенно в
первый момент), не допуская глубокий вдохов.
По характеру запахи делят на две группы:
1) естественного происхождения (землистый, гнилостный и тому
подобное);
2) искусственного происхождения (нефтепродуктов, хлорный и тому
подобное).
Интенсивность запаха определяют по 5-балльной шкале:
0 - не ощущается;
1 - обнаруживается только опытным исследователем;
2 - слабый, обнаруживается потребителем только в том случае, если
указать на него;
3 - заметный, обнаруживается потребителем и вызывает его
неодобрение;
4 - отчетливый, обращающий на себя внимание и делающий воду
непригодной для питья;
5 - очень сильный, делающий воду совершенно непригодной.
Запахи описывают, придерживаясь следующей терминологии, которая
представлена в таблице

Таблица 1
Виды запахов

Символ Характер запаха


А Ароматный
Б Болотный
Г Гнилостный
Д Древесный
З Землистый
П Плесневый
Р Рыбный
С Сероводородный
Т Травянистый
Н Неопределенный

При недостаточно отчетливом характере запаха воду в колбе можно


нагреть на водяной бане или другим способом до температуры (60±2) °С,
после чего определение повторить. Интенсивность запаха оценивают по
пятибалльной системе согласно таблице 1 (ГОСТ33.51 - 74).
Определение прозрачности. Исследуемую воду налили в цилиндр,
под дно которого подкладывали на расстоянии 4 см шрифт. Сливали воду до
тех пор, пока сверху через слой можно будет отчетливо прочесть этот шрифт.
Высоту столба оставшейся воды измеряли по шкале, нанесенной на стенке
цилиндра. Определение производили при хорошем дневном рассеянном
освещении на расстоянии 1 м от светонесущей стены.
Оборудование:
1) цилиндр с плоским дном, на стенку которого нанесена сан-
тиметровая шкала
2) шрифт, высота букв которого составляет 2 мм, а толщина линий букв
- 0,5 мм (ГОСТ 31861-2012).
2.3.3 Определение гидрохимических показателей качества воды
2.3.3.1 Биохимическое потребление кислорода

В воде фиксируют растворенный кислород, для чего в колбу вводят


отдельными пипетками 1 мл раствора хлорида марганца и 1мл  щелочного
раствора йодида калия. Пипетку погружали до середины склянки, чтобы не
перемещивать с О2. Затем быстро закрывают колбу стеклянной пробкой
таким образом, чтобы в ней не оставалось пузырьков воздуха и содержимое
тщательно перемешивают 15 - 20-кратным переворачиванием колбы до
равномерного распределения осадка в воде. Осадку давали отстояться мин
10, затем приливали 3 мл НСl, закрывали пробкой, перемещивали до
растворения осадка. Отбирали 50 мл, переносили в колбу для титрования,
титровали 0,02 раствором тиосульфата, до появления слабо-желтой окраски.
Добавляли 1 мл свежесваренного раствора крахмала, титровали пока не
исчезнет синяя окраска (РД 52.24.420 – 2006).
Массовую концентрацию растворенного в воде кислорода X, мг/дм3,
находили по формуле (1):

M ∗Cm∗V m∗V∗1000
X= (1)
50∗¿ ¿

Где М - молярная масса КВЭ кислорода, равная 8 мг/ммоль.


C m- концентрация раствора тиосульфата натрия, моль/дм 3 КВЭ;

V m- объем раствора тиосульфата натрия, пошедший на титрование,см 3;

V – вместимость кислородной склянки, см 3.


V 1 - суммарный объем растворов хлорида марганца и йодида калия,

добавленных в склянку при фиксации растворенного кислорода, см 3


Биохимическое потребление кислорода разбавляющей воды БПК (мг/
дм 3), находили по формуле (2):

БПК = Х Н − Х К (2)
где Х н - массовая концентрация растворенного кислорода в пробе
анализируемой воды (или разбавляющей воды) до инкубации, мг/дм 3;
Х к- массовая концентрация растворенного кислорода в пробе
анализируемой воды (или разбавляющей воды) после 5 суток инкубации, мг/
дм 3;

В соответствии с результатом исследования по величинам БПК


(таблица 2) определяли степень загрязненности водоема.

Таблица 2
Величины БПК5 в водоемах с различной степенью загрязненности

Степень загрязнения (классы БПК5, мг 02/дм3


водоемов)
Очень чистые 0,5-1,0
Чистые 1,1-1,9
Умеренно загрязненные 2,0-2,9
Загрязненные 3,0-3,9
Грязные 4,0-10,0
Очень грязные 10,0
(РД 52.24.420 – 2006)

2.3.4 Определение микробиологических показателей качества воды


2.3.4.1 Определение численности бактерий в воде методом
люминесцентной микроскопии

Колбу с отобранной водой встряхивали. Отобрали микропипеткой из


колбы 0,01 мл воды и нанесли на тщательно обезжиренное предметное
стекло, равномерно распределяя петлей на площади 4 см 2. Препарат
высушили на воздухе при комнатной температуре. Затем зафиксировали
легким нагреванием над пламенем спиртовки, окрасили препараты водным
раствором акридина оранжевого (2-4 мин). Избыток флурохрома удалили в
процессе промывки, стекла погрузили на 10 мин в стакан с водопроводной
водой. Окрашенные препараты высушивали при комнатной температуре. Для
микрокопирования на препарат нанесли каплю воды и покрыли покровным
стеклом. Препарат просматривали на люминесцентном микроскопе. Подсчет
бактериальных клеток вели в 20 полях зрения.
Количество клеток в 1 см 3суспензии вычисляют по формуле 3:
M=PS∗K (3)
где M – общее количество клеток в 1 см3, P – площадь мазка, S –
диаметр поля зрения, K – среднее число клеток в 20 полях зрения
(Дзержинская, 2004).

2.3.4.2 Определение численности микроорганизмов различных


физиологических групп

Для определения численности различных физиологических групп


проводили высев проб воды методом предельных разведений на следующие
питательные среды: питательный агар – для выявления сапротрофов, среда
Сабуро – для выявления глюкозолитиков, среда Чапека – для выявления
сахаролитиков. Чашки с посевами инкубировали при температуре (37 ± 1) °С
в течение (24 ± 2) ч (Нетрусов,2004).
По 1 мл посевного материала из каждого разведения вносили в
стерильную чашку Петри, заливали агаризованной средой и помещали в
термостат крышками вниз. Чашки выдерживали в термостате в течение 1-7
суток в зависимости от роста микроорганизмов (Егоров, 1995).
Метод определяет в пробах воды общее число мезофильных аэробных
и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных
образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °C в течение
24 ч, видимые с увеличением в 2 раза. После тщательного перемешивания
пробы воды внесли по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая
крышки. После внесения воды в каждую чашку влили 8 – 12 мл (на чашку
диаметром 90 - 100 мм) расплавленного и остуженного до 45 - 49 °C
питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он
содержится. Затем быстро смешали содержимое чашек, равномерно
распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха,
попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производили на
горизонтальной поверхности, где чашки оставили до застывания агара. После
застывания агара чашки с посевами поместили в термостат.
Чашки с посевами инкубировали при температуре (37 ± 1) °С в течение
(24 ± 2) ч (Нетрусов,2004).

2.3.5. Отбор проб воды для санитарно-бактериологических


исследований
2.3.5.1 Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
методом мембранной фильтрации (основной метод)

Отмеренный объем воды (100 мл) фильтровали через мембранные


фильтры. Фильтры поместили на среду Эндо. Чашки с фильтрами
инкубировали посевы при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч.
Если на фильтрах обнаружили рост изолированных типичных
лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим
блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на
обратной стороне фильтра, подсчитывали число колоний каждого типа
отдельно и приступали к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.
Каждую выбранную изолированную колонию исследовали на:
1) наличие оксидазной активности;
Готовые бумажные системы смочили дистиллированной водой. Часть
изолированной колонии петлей нанесли штрихом на подготовленную
фильтровальную бумагу. Реакция считалась положительной, если в течение 1
мин появлялось фиолетово-коричневое или синее окрашивание штриха. При
отрицательной реакции цвет в месте нанесения культуры не менялся. При
положительном результате эту колонию из дальнейшего исследования
исключали (МУК 4.2.1018—01).
2) принадлежность к Граму (при наличии Г+ бактерий эту колонию из
дальнейшего исследования исключали).
3) ферментацию лактозы до кислоты и газа (оставшуюся часть
оксидазоотрицательной грамотрицательной изолированной колонии засевали
параллельно в две пробирки с лактозной средой) (МУК 4.2.1018-01).

2.3.5.2 Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий


титрационным методом

Исследуемую воду в определенных количествах высевают в пробирки с


глюкозо – пептонной средой в количестве 11,11 мл, 10 мл воды. Посев 100 мл
и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной глюкозо-пептонной
среды, посев 1 мл воды – в 10 мл среды обычной концентрации.
Посевы инкубировали при (37 ± 1) °С в течение 48 ч. Не ранее 24 часов
инкубации проводили предварительную оценку посевов.
При отсутствии газообразования и помутнения через 48 ч инкубации
выдают отрицательный ответ.
При наличии в посевах признаков роста (помутнения и
газообразования или только помутнения) производят высев на среду Эндо и
инкубируют в течение 18—24 ч при температуре 37±10С. При наличии роста
на поверхности среды Эндо розовых или красных колоний, малиновых с
металлическим блеском или без него проводят микроскопию колоний с
последующей постановкой оксидазного теста. На поверхность
индикаторного диска, смоченного водой наносят петлей биомассу
исследуемой колонии, выжидают 15 – 20 секунд, если не наблюдается синее
окрашивание, оксидазный тест отрицательный, если окрашивается, то
положительный.
БГКП относятся к грамотрицательным тонким, прямым и слегка
изогнутым палочкам. Имеют металлический блеск и оксидаза отрицательный
тест. Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий (общих и термотолерантных
колиформных бактерий) – вычисляют по специальным справочным
таблицам, определяя, коли/титр, коли/индекс (МУК 4.2.1018-01).
ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ МИКРОФЛОРЫ ВОДЫ ЕРИКА
СОЛЯНКА
3.1 Органолептические свойства воды ерика Солянка

Проведены исследования определения качества воды по


органолептическим показателям. Для определения цвета воды в стаканы из
бесцветного стекла налили исследуемую и дистиллированную воду и
рассматривали их на фоне белой бумаги при дневном освещении сбоку и
сверху (ГОСТ 1030-81).
Для исследования характера запаха воду налили в колбу с широким
горлом, накрыли пробкой, встряхивали вращательным движением, при
открывании пробку и быстро определяли органолептический характер и
интенсивность запаха или его отсутствие
Наличие мутности определяли по степени четкости изображения при
попытке прочитать надписи сверху вниз через слой воды в цилиндре. Данные
исследования приведены в таблице 3.
Таблица 3
Органолептические свойства воды
Цвет Характер запаха и Мутность
интенсивность
желтый Запах болотный, 4 балла
Интенсивность достаточно мутно
запаха - хлорный,4 балл буквы почти не видны

В соответствии с требованиями ГОСТ Р 57164—2016 отклонений в


анализируемой пробе воды ерика солянка по органолептическим показателям
обнаружено.
Цветность не соответствует природному тону воды, что
свидетельствует об присутствие загрязнителей, ухудшающих
органолептические свойства и оказывающих отрицательное влияние на
развитие водных растительных и животных организмов.
Присутствие мутности говорит о том, что в воде есть грубодисперсных
примесей, характерных для загрязненных и эвтрофных водоемов.

3.2 Гидрохимические свойства воды


3.2.1 Определение количества биохимического потребления кислорода

Исследования определения БПК5 в воде ерика Солянка проведены с


целью оценки содержания биохимических окисляемых органических
веществ, условий обитания гидробионтов и в качестве интегрального
показателя загрязненности анализируемой воды.
Согласно нормативному документу РД 52.24.420- 2006
«Биохимическое потребление кислорода в водах» следует, что вода в ерика
Солянка относится к классу «Грязные» вследствие большого содержания
органических загрязнителей, пагубно влияющих на условия обитания для
микроорганизмов и гидробионтов. Как правило, органические загрязнения
попадают в водоем разными путями, главным образом в результате
антропогенного воздействия, а именно со сточными водами.
3.3 Микробиологические показатели качества воды
3.3.1 Определение численности бактерий в воде методом
люминесцентной микроскопии
Количество клеток микроорганизмов в 1 мл исследуемого субстрата
вычислялось по формуле:

910
M= 10 ∗91=1.51×106кл/мл

В соответствии с требованиями СанПин 2.1.5.980-00 «Гигиенические


требования к охране поверхностных вод» количество клеток не повышенное.
Это может указывать на пониженное содержание органических веществ в
воде.Связано с сезонном периодом отбора проб .

ВЫВОДЫ

1. В ходе проведенного исследования было установлено, что вода по


органолептическим показателям отвечает не всем требованиям приведенным
в ГОСТ Р 57164—2016.
2. По гидрохимическим показателям вода в р. Царева относится к
классу «загрязненная» согласно нормативному документу РД 52.24.420-
2006.
3. Численность микроорганизмов в исследуемой пробе, отобранной на
набережной ерика Солянки составляет 8,84×105 КОЕ /мл.