Вы находитесь на странице: 1из 224

Федеральное агенство научных

организаций

Министерство науки и высшего образования


Российской Федерации

Российская академия наук

International Society for Horticultural Science

ФГБУН «Ордена Трудового Красного


Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН»

ФБГУН Главный ботанический сад им.


Н.В. Цицина Российской академии наук

ГНУ "Центральный ботанический сад


Национальной академии наук Беларуси"

ФБГУН Институт общей генетики им.


Н.И. Вавилова Российской академии наук

ГБУ «Волгоградский региональный


ботанический сад»

РГП «Институт биологии и биотехнологии


растений» Комитета по науке Министерства
Образования и Науки Республики Казахстан
Federal Agency for Scientific Organizations

Ministry of Science and Higher Education of the


Russian Federation

The Russian Academy of Scienes

International Society for Horticultural Science

FSFIS «The Labor Red Banner Order Nikita


Botanical Gardens – National Scientific Centre of
the RAS»

FBSIS N.V. Tsytsin Main Botanical Garden of the


Russian Academy of Sciences

SSI «Central Botanical Garden of the National


Academy of Sciences of Belarus»

FBSIS N.I. Vavilov Institute of General Genetics of


the Russian Academy of Sciences

SBI «Volgograd Regional Botanical Garden»

RSE «Institute of Plant Biology and


Biotechnology» of the Science Committee of the
Ministry of Education and Science of Republic of
Kazakhstan

2
Материалы

VIII Международной научно-практической конференции


«Биотехнология как инструмент сохранения
биоразнообразия растительного мира
(физиолого-биохимические, эмбриологические,
генетические и правовые аспекты)»

г. Ялта, Республика Крым, Россия


01 - 05 октября 2018 г.

Симферополь
ИТ «АРИАЛ»
2018
УДК 504.73:57.085.2
ББК 28.59
М 67
Печатается по постановлению Ученого совета ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский
ботанический сад – Национальный научный центр РАН» № 7 от «14» сентября 2018 г.
Оргкомитет конференции:
Председатель оргкомитета:
И.В. Митрофанова, д.б.н., заведующая отделом биологии развития растений, биотехнологии и
биобезопасности ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН».
Сопредседатели:
И.М. Донник, академик РАН, проф., д.б.н., вице-президент Российской академии наук;
В.А. Багиров, чл.-корр. РАН, д.б.н., директор Департамента координации деятельности организаций в
сфере сельскохозяйственных наук Министерства науки и высшего образования РФ;
Ю.В. Плугатарь, чл.-корр. РАН, д.с.-х.н., директор ФГБУН «НБС-ННЦ»;
О.И. Молканова, к.с.-х.н., заведующая лабораторией биотехнологии растений ФБГУН Главный
ботанический сад им. Н.В. Цицина РАН.
Члены международного научного комитета:
Dr. Jorge M. Canhoto, Professor, University of Coimbra, Department of Life Sciences, CEF - Centre for Functional
Ecology, Coimbra, Portugal; Dr. Maria Antonietta Germana, Associate Professor, Department of Agriculture,
Food and Forest Sciences (SAAF), University of Palermo, Palermo, Italу; Dr. S. Mohan Jain, Professor, Department
of Agricultural Sciences, University of Helsinki, Finland; Dr. Maurizio Lambardi, Professor, National Research
Council (CNR) of Italy, IVALSA/Trees and Timber Institute, Florence, Italy; Dr. Renato Paiva, Full Professor in
Plant Physiology, Department of Biology, Federal University of Lavras (UFLA), Lavras, Minas Gerais, Brazil;
Dr. Željko Prgomet, College Professor on Collegium Fluminense Polytechnic of Rijeka, Croatia; Dr. Kanchit
Thammasiri, Associate Professor, Department of Plant Science, Faculty of Science, Mahidol University, Bangkok,
Thailand; Dr. Alexsander Vainstein, Professor, The Robert H. Smith Institute of Plant Science and Genetics in
Agriculture, Faculty of Agriculture, Food and Environment, The Hebrew University of Jerusalem, Rehovot, Israel;
К.Ж. Жамбакин, чл.-корр АН РК, проф., д.б.н., генеральный директор РГП «Институт биологии и
биотехнологии растений» Комитета науки МОН Республики Казахстан; В.В. Титок, д.б.н., директор ГНУ
«Центральный ботанический сад Национальной академии наук Беларуси»; А.М. Кудрявцев, д.б.н.,
директора ФБГУН Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН; В.П. Упелниек, к.б.н., директор
ФБГУН Главный ботанический сад им. Н.В. Цицина РАН; П.Н. Харченко, академик РАН, научный
руководитель института ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт
сельскохозяйственной биотехнологии»; О.В. Митрофанова, проф., д.б.н., главный научный сотрудник
лаб. биотехнологии и вирусологии растений ФГБУН «НБС-ННЦ»; И.Н. Третьякова, д.б.н., проф., ведущий
научный сотрудник ФГБУН Институт леса им. В.Н.Сукачева СО РАН; В.В. Корженевский, проф., д.б.н., зав.
лаб. флоры и растительности ФГБУН «НБС-ННЦ»; А.В. Смыков, д.б.н., зав. отд. плодовых культур ФГБУН
«НБС-ННЦ»; С.В. Шевченко, проф., д.б.н., главный научный сотрудник лаб. биохимии, физиологии и
репродуктивной биологии растений ФГБУН «НБС-ННЦ»; O.И. Коротков, к.с.-х.н. заместитель директора
по науке ФГБУН «НБС-ННЦ»; А.А. Веевник, к.б.н., заместитель директора по научной и инновационной
работе ГНУ «Центральный ботанический сад Национальной академии наук Беларуси»; И.Ю. Ковальчук,
к.с.-х.н. ведущий научный сотрудник лаб. криосохранения гермоплазмы Института биологии и
биотехнологии растений Комитета науки МОН Республики Казахстан; А.Е. Палий, к.б.н., заведующая лаб.
биохимии, физиологии и репродуктивной биологии растений ФГБУН «НБС-ННЦ»; Т.Б. Губанова, к.б.н.,
ведущий научный сотрудник лаб. биохимии, физиологии и репродуктивной биологии растений ФГБУН
«НБС-ННЦ».
Секретариат оргкомитета:
А.И. Ругузова, к.б.н. – секретарь; Н.Н. Иванова, к.б.н., старший научный сотрудник; В.А. Браилко,
научный сотрудник; С.В. Зубова, директор ООО «Научный сервис».
Члены рабочего оргкомитета:
Паштецкий А.В., Дуганов А.В., Лесникова-Седошенко Н.П., Челомбит С.В., Жданова И.В.,
Кузьмина Т.Н., Гребенникова О.В., Корзин В.В., Бакова Н.Н., Шишкин В.А., Андреев М.С.,
Овчинников С.А., Мельников В.А., Волик Л.Д.
Митрофанова И.В.
М 67 Материалы VIII Международной научно-практической конференции «Биотехнология как
инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира (физиолого-биохимические,
эмбриологические, генетические и правовые аспекты)» ФГБУН «НБС-ННЦ», г. Ялта, Республика
Крым, Россия. 1 – 5 октября 2018 г. – Симферополь : ИТ «АРИАЛ», 2018. – 224 с.
ISBN 978-5-907118-13-3
УДК 504.73:57.085.2
ББК 28.59
© ФГБУН «НБС-ННЦ, 2018
ISBN 978-5-907118-13-3 © ИТ «АРИАЛ», 2018
4
Proceedings
of the VIII International Scientific and Practical Conference
«Biotechnology as an Instrument for Plant Biodiversity
Conservation (physiological, biochemical, embryological, genetic
and legal aspects)»

Yalta, Russia
October 01 - 05, 2018

Simferopol
РР «ARIAL»
2018
UDC 504.73:57.085.2
BBK 28.59
М 67
Published under the auspices by the International Society for Horticultural Science (ISHS)

Organizing Committee:
Chairperson: Irina Mitrofanova, Dr.Sci., the Head of Plant Developmental Biology, Biotechnology and Biosafety
Department, FSFIS «NBG-NSC».

Co-chairmen:
Irina Donnik, Academician of the RAS, Prof., Dr.Sci., Vice President of the RAS;
Vugar Bagirov, Corresponding Member of the RAS, Dr.Sci. the Director of Coordination and Providing Scientific
Organizations` Activities in Agricultural Sciences Department in the Ministry of Science and Higher Education of the
Russian Federation ;
Yurii Plugatar, Corresponding Member of the RAS, Dr.Sci., the Director of FSFIS «NBG-NSC»
Olga Molkanova, Ph.D., the Head of Plant Biotechnology Laboratory, FBSIS N.V. Tsytsin Main Botanical Garden of
the RAS.
International Scientific Organizing Committee:
Dr. Jorge M. Canhoto, Professor, University of Coimbra, Department of Life Sciences, CEF - Centre for Functional
Ecology, Coimbra, Portugal; Dr. Maria Antonietta Germana, Associate Professor, Department of Agriculture, Food
and Forest Sciences (SAAF), University of Palermo, Palermo, Italу; Dr. S. Mohan Jain, Professor, Department of
Agricultural Sciences, University of Helsinki, Finland; Dr. Maurizio Lambardi, Professor, National Research Council
(CNR) of Italy, IVALSA/Trees and Timber Institute, Florence, Italy; Dr. Renato Paiva, Full Professor in Plant
Physiology, Department of Biology, Federal University of Lavras (UFLA), Lavras, Minas Gerais, Brazil; Dr. Željko
Prgomet, College Professor on Collegium Fluminense Polytechnic of Rijeka, Croatia; Dr. Kanchit Thammasiri,
Associate Professor, Department of Plant Science, Faculty of Science, Mahidol University, Bangkok, Thailand; Dr.
Alexsander Vainstein, Professor, The Robert H. Smith Institute of Plant Science and Genetics in Agriculture, Faculty
of Agriculture, Food and Environment, The Hebrew University of Jerusalem, Rehovot, Israel; Kabyl Zhambakin,
Corresponding Member of the NAS RK, Prof., Dr.Sci., the Director of RSE «Institute of Plant Biology and
Biotechnology» of the Science Committee of the Ministry of Education and Science of Republic of Kazakhstan;
Vladimir Titok, Dr.Sci. the Director of the State Scientific Institution Central Botanical Garden of NAS of Belarus;
Alexander Kudryavtsev, Dr.Sci., the Director of FBSIS N.I. Vavilov Institute of General Genetics of RAS; Vladimir
Upelniek, PhD, the Director of N.V. Tsytsin Main Botanical Garden of RAS; Peter Kharchenko, Academician RAS,
Scintific Director of FSBSI “The All-Russian Research Institute for Agricultural Microbiology”; Olga Mitrofanova,
Dr.Sci., Prof. the Main Researcher of Plant Biotechnology and Virology Laboratory, FSFIS «NBG-NSC»; Iraida
Tretyakova, Dr.Sci., Prof., the Leading Researcher, Sukachev Institute of Forest SB RAS; Vladislav Korzhenevsky,
Dr.Sci. Prof. the Head of Flora and Vegetation Laboratory, FSFIS «NBG-NSC»; Anatoly Smykov, Dr.Sci, the Head of
Fruit Cultures Department, FSFIS «NBG-NSC»; Svetlana Shevchenko, Dr.Sci., Prof., the Main Researcher of Plant
Reproductive Biology and Physiology Laboratory, FSFIS «NBG-NSC»; Oleg Korotkov, PhD, Deputy Director for
Science, FSFIS «NBG-NSC»; Alexander Veevnik, Ph.D., Deputy Director for Scientific and Innovation Work “State
Scientific Institution Central Botanical Garden of NAS of Belarus”; Irina Kovalchuk, Ph.D., the Leading Researcher of
the Laboratory of Germplasm Cryopreservation at the Institute of Plant Biology and Biotechnology, Science
Committee of the Ministry of Education and Science of the Republic of Kazakhstan; Anfisa Paliy, Ph.D., the Head of
Plant Biochemistry, Physiology and Reproductive Biology Laboratory, FSFIS «NBG-NSC»; Tatyana Gubanova, Ph.D.,
the Leading Reseacher of Plant Biochemistry, Physiology and Reproductive Biology Laboratory, FSFIS «NBG-NSC».
Secretariat of the Organizing Commitee: Anna Ruguzova, Ph.D. – secretary; Natalya Ivanova, Ph.D., Senior
Researcher; Valentina Brailko, Researcher; Svetlana Zubova, the Director of “Scientific Service”.
Local Working Committee: Andrey Pashtetsky, PhD, Deputy Director; Anatoly Duganov, the Head of the
Department; Nina Lesnikova-Sedoshenko, Researcher; Svetlana Chelombit, Researcher; Irina Zhdanova,
Researcher; Tatyana Kuzmina, Ph.D., Senior Researcher; Oksana Grebenikova, Ph.D., Senior Researcher; Vadim
Korzin, Ph.D., Senior Researcher; Nadezhda Bakova, Ph.D., the Head of the Sector; Valery Shishkin, Ph.D., the Head
of the Laboratory; Michael Andreev, Research Engineer; Sergey Ovchinikov, Research Engineer; Vladimir
Melnikov, Researcher; Lylya Volik, the Head of the Department.

Mitrofanova I.V.
М 67 Proceedings of the of the VIII International Scientific and Practical Conference «Biotechnology as an Instrument
for Plant Biodiversity Conservation (physiological, biochemical, embryological, genetic and legal aspects)»
October, 1-5, 2018 – Simferopol : PP «ARIAL», 2018. – 224 p.
ISBN 978-5-907118-13-3
UDC 504.73:57.085.2
BBK 28.59

© Nikita Botanical Gardens – National Scientific Centre, 2018


ISBN 978-5-907118-13-3 © PP «ARIAL», 2016

6
ОСНОВНЫЕ СПОНСОРЫ КОНФЕРЕНЦИИ
THE MAIN SPONSORS OF THE CONFERENCE

ООО МИП «Никитский сувенир плюс»


8
Приветственное слово
От лица Организационного Комитета мы рады приветствовать всех участников и
гостей VIII научно-практической конференции «Биотехнология как инструмент сохранения
биоразнообразия растительного мира (физиолого-биохимические, эмбриологические,
генетические и правовые аспекты)», которая в этом году и впервые на территории России
проводится под эгидой Международного общества исследований в садоводстве (ISHS).
Межународная конференция под таким названием стала традиционной и третий раз
ФБГУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад – Национальный
научный центр РАН», обладающий ценнейшими коллекциями видов и сортов декоративных,
субтропических и косточковых плодовых культур, пряно-ароматических и лекарственных
растений, принимает данный форум на своей базе.
Сохранению биоразнообразия растений в мире уделяется особое внимание. Основа
стратегии сохранения видов и сортов растений определяется рядом программных
документов, таких как «Конвенция о биологическом разнообразии» (Convention on Biological
Diversity – www.plant-conservation–report-en.pdf), «Global Strategy Plant Conservation»
(www.botanicgardens /ie/gspc/pdfs/gspc.pdf), «Международная программа ботанических садов
по охране растений» (https://www.bgci.org/files/Worldwide/News/SeptDec12/international
_agenda_web.pdf). И биотехнология как самостоятельная наука на принципиально новой
основе призвана решать такие глобальные проблемы современности, как
продовольственная, энергетическая, ресурсная безопасность, защиты окружающей среды и
др. Во многих странах мира развитию биотехнологии придается первостепенное значение. С
80-х годов прошлого столетия началось активное освоение новых биотехнологических
методов, а конец 20 века и начало 21 века в мире ознаменовались бурным развитием не
только биотехнологических исследований, но и наукоемких производств. Практически
каждая страна мира имеет свою программу развития биотехнологий до 2020-2050 гг. В
Никитском ботаническом саду работы в области биотехнологии растений были начаты 60-
70-х годах прошлого столетия. Благодаря комплексным исследоаниям в области вирусологии,
фитопатологии, генетики, селекции, биохимии, физиологии и эмбриологии растений стало
возможным активное развитие и расширение сферы применения биотехнологических
исследований. В рамках программы развития научной организации и гранта Российского
научного фонда (2014-2018 гг.) № 14-50-00079 удалось модернизировать лабораторную базу
учреждения, создав новые современные научно-прораммные комплексы «БИОТРОН» и
«ГЕНОМИКА». Продолжением этих работ является строительство нового современного
«ФИТОТРОНА».
Выражаем искреннюю благодарность всем ключевым и приглашенным докладчикам,
участникам с сессионными и стендовыми докладами за сотрудничество в процессе
подготовки и проведения конференции.
Особую благодарность мы также хотим высказать Федеральному агенству научных
организаций, всем спонсорам конференции, которые постарались, чтобы международный
биотехнологический форум прошел на высоком уровне.
С глубоким уважением и признательностью,
Митрофанова Ирина Вячеславовна, д.б.н.,
зав. отд. биологии развития растений , биотехнологии и биобезопасности ФГБУН «НБС-ННЦ»
Председатель оргкомитета конференции
YaltaBiotech2018
Сопредседатели оргкомитета конференции
YaltaBiotech2018:
Багиров Вугар Алиевич, чл.-корр. РАН, д.б.н., Донник Ирина Михайловна, академик РАН,
директор Департамента координации проф., д.б.н.,
деятельности организаций в сфере вице-президент Российской академии наук
сельскохозяйственных наук Министерства науки
и высшего образования РФ
Плугатарь Юрий Владимирович, Молканова Ольга Ивановна, к.с.-х.н.,
чл.-корр. РАН, д.с.-х.н., зав. лаб. биотехнологии растений ФБГУН Главный
Директор ФГБУН «НБС-ННЦ» ботанический сад им. Н.В. Цицина РАН

9
Welcome Address!
On behalf of the Organizing Committee, we are pleased to welcome all participants and
guests of the VIII scientific and practical conference "Biotechnology as an Instrument for
Plant Biodiversity Conservation (physiological, biochemical, embryological, genetic and legal
aspects)", which this year and for the first time in Russia is under the auspices by the
International Society for Horticultural Science (ISHS). International conference under this
name has become a traditional one and FSFIS "The Labour Red Banner Order Nikita
Botanical Gardens – National Scientific Center of the RAS", which has a valuable collection of
species and cultivars of decorative, subtropical and stone fruit crops, aromatic and medicinal
plants, takes this forum on its base for the third time.
Special attention is paid to the conservation of plant biodiversity in the world. The basis
of the conservation strategy of the species and cultivars of plants is determined by several
programming documents such as “Convention on Biological Diversity” (www.plant-
conservation–report-en.pdf), "Global Strategy for Plant Conservation" (www.botanicgardens/
ie/gspc/pdfs/gspc.pdf), "International Agenda for Botanic Gardens in Conservation"
(https://www.bgci.org/files/Worldwide/News/SeptDec12/international_agenda_web.pdf).
And biotechnology as an independent science on a new basis is intended to solve such
global problems as food, energy, resource security, environmental protection, etc. In many
countries the development of biotechnology is of great importance. Since the 80s of the past
century active development of new biotechnological methods has begun, and the end of the 20th
century and the beginning of the 21st century in the world were marked by the rapid
development of not only biotechnological researches, but also high-tech industries. Almost every
country in the world has its own biotechnology development program until 2020-2050s. In the
Nikitsky Botanical Gardens the works in the field of plant biotechnology were started 60-70s of
the past century. Due to comprehensive researches in the field of virology, phytopathology,
genetics, breeding, biochemistry, physiology and embryology of plants, it became possible to
actively develop and expand the scope of biotechnological researches. As a part of the program
of development of the scientific organization and the grant of the Russian Science Foundation
(2014-2018) № 14-50-00079 it has been managed to modernize the laboratory facilities of the
institution, creating new modern scientific complexes "BIOTRON" and "GENOMICS". The
construction of a new modern "PHYTOTRON" complex continues this work.
We gratefully acknowledge all key and invited speakers, participants with oral and
poster presentations for cooperation in the process of preparation and holding of the
conference.
We also want to express particular gratitude to the Federal Agency of Scientific
Organizations, all the sponsors of the conference, who tried to make the International
Biotechnology forum held at a high level.
With deepest respect and appreciation,
Irina Mitrofanova, Doctor of Biological Sciences,
Head of the Department of plant development biology, biotechnology and biosafety of FSFIS “NBG-NSC”,
Convener of “YaltaBiotech 2018” conference

Co-chairmen of “YaltaBiotech 2018” conference:


Vugar Bagirov, Сorr. member of the RAS, Doctor of Irina Donnik, Member of the Russian Academy of
Biological Sciences, Director of the Department of Sciences, Professor, Doctor of Biological Sciences, Vice-
coordination of activity of organizations in the field of President of the Russian Academy of Sciences
agricultural sciences of the Ministry of science and
higher education of the Russian Federation
Olga Molkanova, Candidate of Agricultural
Sciences, Head of the laboratory of plant biotechnology
Yurii Plugatar, Corr. member of the RAS, Doctor of of FSFIS “Tsytsin Main Moscow Botanical Garden of
Agricultural Sciences, Director of FSFIS “NBG-NSC the Academy of Sciences

10 10
ПЛЕНАРНЫЕ ДОКЛАДЫ

KEY NOTES
12
Haploid technology as valuable support to plant breeding in Citrus and
other fruit crops

Maria Antonietta Germanà


Dipartimento di Scienze Agrarie e Forestali, University of Palermo, c/o Via Panzini 4, 90147
Palermo, Italy; E-mail: mariaantonietta.germana@unipa.it

Due to the characteristics of Citrus and of the majority of fruit crops, (such as the high
heterozygosity of the genomes, the long duration of the generation cycle, the large size,
and, often, the self-incompatibility), the traditional methods (involving several generations
of selfing), are not suitable to produce homozygous lines. The only feasible approach to
achieve homozygosity is “gametic embryogenesis”, that involving the regeneration from
gametes, products of meiotic segregation, allows the single-step development of complete
homozygous lines from heterozygous parents.
Haploids (Hs, plants with gametophytic chromosome number) and doubled haploids
(DHs, haploids that have undergone, spontaneously or in induced way, chromosome
duplication) are ever more goals of fruit breeding programs, as well as of many
agronomical important crops.
According to different genotypes, several innovative methods to produce Hs and DHs
are available, and among them, microspore embryogenesis through in vitro anther or
isolated microspore culture is one of the most efficient and extensively employed.
The purpose of this report is to provide some experiences, recent advancements and
forthcoming progresses on the application of DH technology as a powerful tool to support
plant breeding in fruit crops and especially in Citrus.

Keywords: anther culture, isolated microspore culture, homozygosity, microspore


embryogenesis, gynogenesis.

13
Genetic diversity, erosion, utilization and conservation under the
climate change

Shri Mohan Jain


Department of Agricultural Sciences, University of Helsinki, PL-27, Helsinki,
Finland; E-mail: mohan.jain@helsinki.fi

Global climate has continuously been changing, and is continuously changing gradually and
will have negative impact on global food production and food security in the coming future.
Recently erratic climate change, e.g. variation in annual rainfall, water deficit etc., has been
recorded worldwide that has affected food and agriculture. The developing countries have
more devastated impact due to poor infrastructure, lack of trained manpower and
economic conditions. Climate change and ever-growing human population are major
factors caused loss of genetic resources, arable land deletion and water shortage. Any small
change in global temperature may develop new insect and pests, and disease that may
devastate food and agriculture; and availability of sufficient water is a matter of concern to
sustainable agriculture. Genetic diversity is the key for the survival, evolution of species
and utilization for crop improvement. Genetic variation within a species is important for its
ability to adapt to a changing environment. Species having larger levels of genetic diversity
have a better chance of adaptation, survival and deployment over a wide range of
environmental conditions. Appropriate levels of genetic variation should be maintained in
the populations of a species for conservation planning and prevent genetic erosion. The
conservation of genetic resources should be based on the genetic architecture and
phenology, and how genetic and phenotypic variation is organized and distributed within
and among populations of a species. Induced genetic diversity is caused by radiation and
chemical mutagens in most of the major crops, and used for developing new varieties with
useful traits that had great economic benefit to growers and food supply chain. However,
climate change is a greater challenge on crop production, e.g. water availability, soil quality,
insect and pests. Plant genetic diversity is conserved by cryopreservation (somatic
embryos, embryogenic cell cultures), cold storage (seed and in vitro shoots) and in vivo
(field gene banks), establish germplasm website for exchange and utilization. Plant
regeneration from somatic embryos and embryogenic cell suspension is necessary for
applying cryopreservation by using liquid nitrogen. In cold storage, shoot cultures are
preserved at 4-5°C; however, subcultures are needed even though their number is reduced.
In cryopreservation, subculture is not needed and cultures are stored for longer period.
Seed banks are commonly used in most of the seed crops. Field gene bank is alternate to in
vitro conservation, and is being widely used, however has risk of insect and pest attack. We
will discuss the importance of genetic diversity conservation, climate change and setting up
of gene banks.

Keywords: plant genetic diversity, cold storage, cryopreservation, seed banks, in vitro
conservation, climate change.

14 14
Biotechnology for plant genetic resources conservation: an overview of
in vitro-banking and cryobanking in the world

Maurizio Lambardi1, Claudia Ruta2


1IVALSA/Trees and Timber Institute, National Research Council (CNR), Polo Scientifico, via
Madonna del Piano 10, I-50019 Sesto Fiorentino, Firenze, Italy;
E-mail: lambardi@ivalsa.cnr.it
2Dip. Scienze Agroambientali e Territoriali, University of Bari Aldo Moro, Piazza Umberto I,

1, Bari, 70121, Italy

Today, in vitro culture is a strategic tool to support medium and long-term conservation of
plant genetic resources by using the slow growth storage of shoot cultures and the
cryopreservation of organs and tissues. Over the last 30 years, considerable progresses
were made in the development of both techniques that are nowadays considered as ex situ
conservation strategies complementary to traditional seed banks and in-field clonal
collections. Conservation in slow growth storage consists modifying the medium and/or
culture conditions to reduce the growth of in vitro shoots without affecting their viability
and regrowth potential when moved back to standard culture conditions. The technique
allows medium-term conservation of shoot cultures from a few months to two years and
more. Cryopreservation preserves plant organs and tissues at the ultra-low temperature of
liquid nitrogen (-196°C).
Currently, almost 45,000 accessions of vegetables (mainly potato, cassava, sweet
potato, yam and garlic) and fruit species (mainly apple, mulberry and banana) are
maintained in 21 genetic resources conservation centers, located in 16 Countries and 5
Continents (Europe, Asia, Africa, North and South America). Over 70% of these accessions
are maintained in vitro by means of slow growth storage of shoot cultures, but more recent
cryopreservation is constantly growing, and over 12,500 accessions from vegetables are
stored at -196 °C. In order to avoid too many replications of the same genetic resources in
the different operating centers, a networking work was recently undertaken under the
aegis of Bioversity International, the Global Crop Diversity Trust and the International
Potato Center and led, in July 2017, to a report containing a census on plant genetic
resources in in vitro-banks and in cryobanks, as well as indications and directives on the
organization and costs of these forms of conservation. A first important step towards a
global coordination of conservation strategies in vitro and in liquid nitrogen which will
soon become indispensable.

Keywords: cryopreservation, cryobanks, in vitro banks, micropropagation, slow growth


storage.

15
Somatic embryogenesis and organogenesis as biotechnological ways of
some horticultural plant propagation and conservation

Irina Mitrofanova
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: irimitrofanova@yandex.ru

Modern high-tech horticulture (fruit growing, floriculture, ornamental gardening and


essential oil production) is not develop without using advanced biotechnology methods for
the improvement, propagation and conservation of plant species, cultivars and forms.
In the Nikita Botanical Gardens, biotechnological researches have been carrying out for
many years and new methods of plant production are developed. The main principles of
morphogenesis induction and morphogenetic capacity realization in vitro in a number of
horticulture crops via somatic embryogenesis and organogenesis are determined. The
effective protocols of somatic embryogenesis for ziziphus, common fig, clematis, caladium,
lavandin and other cultures have been improved and developed. High regeneration
capacity was demonstrated in most fruits, ornamentals and essential oil plants. The main
inducers, triggers and inhibitors of cellular dedifferentiation and differentiation,
callusogenesis, direct and indirect regeneration were revealed. As a part of the Global
Strategy for Plant Conservation, a high-performance system for the long-term conservation
of horticultural plants as in vitro collection of slow-growing plants was created on the base
of the complex assessment of the morphometric, physiological and biochemical
characteristics of the studied objects. It has been demonstrated that abiotic stressors had
stimulating effect on regenerative capacity increase in the subsequent plant culture under
standard in vitro conditions and their adaptability in transfer from in vitro conditions to ex
vitro and in vivo.

Studies on the morphogenesis in vitro in some ornamental, essential oil and subtropical fruit
crops, as well as the development of preservation protocols, have been carried out by the
support of the Russian Science Foundation (research grant No. 14-50-00079).

Keywords: fruit, ornamental and essential oil plants, direct and indirect regeneration,
slow-growing plant collection, in vitro.

16 16
Соматический эмбриогенез и органогенез как биотехнологические
пути размножения и сохранения некоторых садовых растений

И.В. Митрофанова
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: irimitrofanova@yandex.ru

Современное высокотехнологическое садоводство (плодоводство, цветоводство и


эфиромасличное производство) невозможно без применения передовых
биотехнологий оздоровления, размножения, получения и сохранения видов, сортов
и форм растений.
В Никитском ботаническом саду на протяжении многих лет проводятся
биотехнологические исследования и разрабатываются новые приемы получения
растений. Определены основные принципы индукции морфогенеза и реализации
морфогенетического потенциала in vitro у целого ряда садовых культур через
соматический эмбриогенез и органогенез. Усовершенствованы и разработаны
эффективные протоколы соматического эмбриогенеза для зизифуса, инжира,
клематиса, каладиума, лавандина и других культур. Продемонстрирован высокий
регенерационный потенциал у большинства плодовых, декоративных и
эфиромасличных растений. Определены основные индукторы, триггеры и
ингибиторы клеточной дедифференциации и дифференциации, каллусогенеза,
прямой и непрямой регенерации. В рамках Глобальной стратегии сохранения
растительного биоразнообразия создана высокофункциональная система
длительного сохранения садовых растений в виде медленно растущей коллекции in
vitro на основе глубокой оценки морфометрических, физиологических и
биохимических характеристик исследуемого объекта. Показана стимулирующая
роль абиотических стрессоров на повышение регенерационной способности при
последующем культивировании растений в стандартных условиях in vitro и
адаптивности при переходе из условий in vitro в условия ex vitro и in vivo.

Исследования, касающиеся морфогенеза in vitro некоторых декоративных,


эфиромасличных и субтропических плодовых культур, а также разработки
протоколов депонирования выполнены при поддержке гранта Российского научного
фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: плодовые, декоративные и эфиромасличные растения, прямая и


непрямая регенерация, медленно растущая коллекция, in vitro.

17
Development of cryopreservation of plant germplasm

Kanchit Thammasiri
Department of Plant Science, Faculty of Science, Mahidol University, Rama VI Road,
Phyathai, Bangkok 10400, Thailand; E-mail: kanchitthammasiri@gmail.com

Plant cryopreservation started by Prof. Dr. Akira Sakai about 60 years ago. The methods
were developed rapidly by many scientists from dormant buds to slow freezing,
encapsulation-dehydration, vitrification, encapsulation-vitrification, droplet-vitrification,
V-cryo-plate and D-cryo-plate with different types of dehydration, respectively. The
knowledge and idea came from the notice of season change and plant survival in cold
weather. The two principles for plant cryopreservation methods are: 1. slow freezing and 2.
vitrification. At present, various methods were applied for many plant species in many
genebanks around the world. This presentation will discuss each plant cryopreservation
method and shows some methods that were applied at Mahidol University, as well as
discussing the future of plant cryopreservation.

Keywords: dormant buds, slow freezing, encapsulation-dehydration, vitrification,


encapsulation-vitrification, droplet-vitrification, V-cryo-plate and D-cryo-plate.

18 18
Specialized metabolic pathways: cues controlling floral scent and color
production

Alexander Vainstein
The Hebrew University of Jerusalem, POBox 12, Rehovot, Israel;
E-mail: alexander.vainstein@mail.huji.ac.il

The survival of many plant species depends on their ability to attract pollinators.
Exhibitionistic characters, such as flower color and fragrance, determined largely by
specialized metabolites, are among the main means adopted by plants to achieve this goal.
Using virus-induced gene silencing/editing and expression approaches for large-scale
identification of floral scent genes, we identified and characterized petunia flower-specific
scent-regulatory genes named EMISSION OF BENZENOIDS (EOBs). We further
demonstrated that PH4, a myb gene that determines final petal hue through pH
homeostasis in the early stages of flower development, is essential for emission, but not
production, of the floral volatile bouquet in mature flowers. We also revealed that petunia
flowers produce significant amounts of sugar-conjugated scent compounds with a unique
diel accumulation pattern that are further catabolized in parallel to scent emission. These
phenylpropanoid glycosides are stored in the vacuoles of petunia flowers, providing first
evidence of subcellular compartmentalization of scent compounds.
We revealed that gibberellin (GA) acts as a developmental cue regulating floral scent
production in petunia. GA-dependent timing of the sequential activation of different
branches of the phenylpropanoid pathway, products of which are responsible for either
color or scent—both necessary for pollinator attraction—may represent an intriguing
machinery developed by plants to enable intimate crosstalk between floral pollination
syndromes.
Knowledge gained from an understanding of the molecular mechanisms underlying
the phenomenon of floral fragrance/pigmentation will enable better insight into nature's
way of ensuring evolutionary success and should also provide general ideas on in-planta
networking for secondary metabolism allowing in the future rational design of plants’
color/scent pallet.

Keywords: Petunia, flower, scent, color.

19
20
УСТНЫЕ ДОКЛАДЫ

ORAL PRESENTATIONS
22
Clonal micropropagation of some Jerusalem artichoke cultivars and
molecular characterization using RAPD and ISSR based markers

Naema Abdalla1, Mohamad Ragab2, Salah El-Deen El-Miniawy2, Hussein Taha1


1National Research Center, Dokki, Cairo, Egypt
2Faculty of Agriculture, Ain Shams University Shubra Gardens, P.O.Box 68, 11241 Cairo,

Egypt; E-mail: mohamedragab99@hotmail.com

Jerusalem artichoke (Helianthus tuberosus L.), a member of family Asterceae, is a perennial


shrub known for its tubers rich in inulin. It is cultivated as a vegetable, fodder crop and a
source of inulin for medical, food and industrial purposes. The present investigation aimed
to achieve intensive clonal micropropagation of J. artichoke for the purpose of expanding
its cultivation in Egypt. An efficient protocol for clonal micropropagation of J. artichoke
(‘Balady’, ‘Fuza’ and Hungarian cultivars) using stem nodes was established. For starting
stage, stem nodes were surface sterilized using 70% ethanol for 1 min followed by 30%
Clorox for 15 min subsequently subjected to 0.02% MC for 60 seconds. Further, sterilized
explants were cultured on ½ MS medium supplemented with different concentrations of
Kanamycin or Cefotax. The lowest contamination correlated with the highest survival
percentages were recorded with ½ MS fortified with 62.5 mg L-1 Cefotax. For
multiplication stage, excited stem nodes from in vitro plantlets were recultured on MS
medium contains various concentrations of BA augmented with 0.1 mg L-1 NAA. The
maximum number of shootlets was obtained using MS supplemented with 1 mg L-1 BA +
0.1 mg L-1 NAA. For rooting stage, the maximum rooting percentage; number of roots
perplantlet; roots length were achieved on ½ MS + 2 mg L-1 IBA + 0.1 mg L-1 NAA + 0.5
mg L-1 Kin. In vitro derived plantlets were successfully acclimatized on a mixture of peat
moss and perlite (1: 1) which gave the highest percentage of survival and plant length.
Moreover, the molecular characterization based RAPD and ISSR techniques was carried
out. The polymorphic percentages between in vivo cultivars recorded 38.09 and 61.53
between in vivo, in vitro and callus of the three cultivars. The dеndogram analysis showed
highly similarity between ‘Balady’ and Hungarian cultivars, followed by ‘Fuza’.

Keywords: Helianthus tuberosus L., clonal micropropagation, multiplication, molecular


characterization.

23
The diversity of fruit shapes of Prunus armeniaca L. natural populations
in Mountainous Dagestan

Dzhalaludin Anatov, Zagirbeg Asadulayev


Mountain Botanical Garden of the Dagestan Scientific Centre of the Russian Academy of
Sciences, M. Gadjiev Str., 45, Makhachkala, Republic Dagestan, 367000, Russian Federation;
E-mail: djalal@list.ru

The study of natural apricot populations in Dagestan has a great significance for solving
series of questions about taxonomy, genetics, ecology and breeding. Comparative analysis
of Prunus armeniaca L. 418 trees from Mountainous Dagestan natural populations on the
qualitative characteristics of the fruit showed that 91% have small-sized fruits with a
rounded shape (77%), a flat top (71%) with predominance of orange skin color (69%) and
pulp (70%) with acidic taste (74%) and dry consistency (56%). Some kinds of tree (up to
26%) has fruits with a hard and partially detached flesh from the stone, with a blush
(40%). It is not found practically large-fruited forms, as well as forms with cream-colored
fruit and flesh. It is found out that the phenotypic variety of fruits decreases, the percentage
of rounded dried fruit small-bodied with orange coloring of the fruit with acidic taste and
hard-to-remove stone increases according to the distance from the gardens and increasing
of the height above sea level. The clustering of natural apricot populations in Dagestan has
shown that "fetal shape" is the main differentiating sign. The significant role in the
grouping of apricot has the signs of "flesh color" and "skin color", but "fruit taste", "top
form" and "fruit consistency" has a lesser extent. The signs "form of foundation", "depth of
the seam", "presence of blush" and "separation from the stone" are not very informative.

Keywords: apricot, populations, fruits, qualitative characteristics, Mountainous Dagestan.

24 24
Формовое разнообразие плодов природных популяций
Prunus armeniaca L. Горного Дагестана

Д.М. Анатов, З.М. Асадулаев


ФГБУН Горный ботанический сад Дагестанского научного центра РАН, лаб. флоры и
растительных ресурсов, ул. М. Гаджиева, 45, г. Махачкала, Республика Дагестан,
367000, Российская Федерация; e-mail: djalal@list.ru

Изучение природных популяций абрикоса в Дагестане имеет важное значение для


решения ряда вопросов систематики, генетики, экологии и селекции.
Сравнительный анализ 418 деревьев природных популяций Prunus armeniaca L.
Горного Дагестана по качественным признакам плода показало, что 91% имеют
плоды мелких размеров с округлой формой (77%), с плоской верхушкой (71%) при
доминировании оранжевой окраски кожицы (69%) и мякоти (70%), имеющих
кислый вкус (74%) с преобладанием сухой консистенции (56%). Часть деревьев (до
26%) имеют плоды с трудно и частично отделяемой мякотью от косточки, с
румянцем (40%). Практически отсутствуют крупноплодные формы, а также формы с
кремовой окраской плода и мякоти. По мере отдаления от садов и с возрастанием
высоты над уровнем моря уменьшается фенотипическое разнообразие плодов,
увеличивается процент округлых сухофруктовых мелкоплодных с оранжевой
окраской плода с кислым вкусом и трудноотделяемой косточкой. Кластеризация
природных популяций абрикоса в Дагестане показала, что основным
дифференцирующим признаком является признак «форма плода». Также
существенную роль в группировании абрикоса играют признаки «цвет мякоти» и
«окраска кожицы», в меньшей степени «вкус плода», «форма верхушки» и
«консистенция плода». Малоинформативными оказались признаки «форма
основания», «глубина шва», «наличие румянца» и «отделяемость от косточки».

Ключевые слова: абрикос, популяции, плоды, качественные характеристики,


Горный Дагестан.

25
Dynamics of antioxidants accumulation in tea (Camellia sinensis (L.)
Kuntze) at the conditions of Russia subtropics

Oksana Belous, Natalia Platonova


Federal State Budgetary Scientific Institution «Russian Research Institute of Floriculture
and Subtropical Crops», Fabriciusa str. 2-28, Sochi, Krasnodar region, 354002, Russian
Federation; E-mail: oksana191962@mail.ru

Many plants contain substances with antioxidant activity. These substances include
antioxidant enzymes (for example, peroxidase, catalase, SOD, etc.) and non-enzymatic
antioxidants (ascorbic acid, carotenoids, flavonoids, etc.). It is believed that antioxidants,
changing in metabolic reactions the dynamics of many enzymes and possessing
antibacterial action, are indispensable components of the products for humans. This quality
is from tea plants. Tea, as a product included in the daily diet of a person, is the richest in
antioxidants. One of the strong tea antioxidants is ascorbic acid (AA), it plays an important
role in the regulation of redox processes. AA is closely related to plant phenol from the
group of flavonols - vitamin P (rutin). Rutin increases the activity of ascorbic acid,
protecting it from oxidation. Objects of study were samples of black and green tea made
from 2-3 leaf flushes of ‘Kolchida’ and ‘Sochi’ cultivars, radiated mutant № 3823 and №
582, chemical mutant № 855, colchicum mutant № 2264, grown for an experienced
collection area, founded in 1984 – 1985 at the village of Uch-Dere (Sochi, Lazarevsky
region). We show dynamics of accumulation of vitamins C and P in black and green tea
during months. Accumulation of vitamin P (1.5 – 1.7 times) and AA (2.7 – 3.2 times) from
May to August were increased, and in green tea the rutin content in 3 – 4 times, and AA
almost in 4 – 5 times higher than in black. In the accumulation of vitamins C and P of
varietal characteristics are occured. For green tea, the highest number of AA was observed
in samples produced from flushes of cultivar ‘Sochi’ and radiated mutant № 3823 (48.03
and 44.94 mg%, respectively), and the lowest in colchicum mutant № 2264 (29.60 mg%).
In black tea, AA contains radiated mutant № 3828, chemical mutant № 855 and cultivar
‘Sochi’ (9.53; 9.28 and 9.47 mg%, respectively). Other distribution is revealed in contents of
vitamin P, in the samples containing more quantity of AA it is noted less rutin, than in tea
with the low contents of AA.

Keywords: tea, cultivar, mutant form, antioxidant, ascorbic acid, vitamin P, dynamics.

26 26
Динамика накопления антиоксидантов в чае (Camellia sinensis (L.)
Kuntze) в условиях субтропиков России

О.Г. Белоус, Н.Б. Платонова


Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский
научно-исследовательский институт цветоводства и субтропических культур» ул.
Яна Фабрициуса, 2-28, г. Сочи, Краснодарский край, 354002, Российская Федерация;
e-mail: oksana191962@mail.ru

Вещества, обладающие антиоксидантной активностью, содержат многие растения. К


таким веществам относят антиоксидантные ферменты (например, пероксидаза,
каталаза, СОД и др.) и неферментативные антиоксиданты (аскорбиновая кислота,
каротиноиды, флавоноиды и т.д.). Считается, что антиоксиданты, изменяя в
метаболических реакциях динамичность многих ферментов и обладая
антибактериальным действием, являются незаменимыми компонентами
«правильных» для человека продуктов. Данными качествами обладает и растения
чая. Чай, как продукт, входящий в ежедневный рацион человека, наиболее богат
антиоксидантами. Одним из сильных антиоксидантов чая является аскорбиновая
кислота (АК), которая играет важную роль в регуляции окислительно-
восстановительных процессов. АК тесно связана с растительным фенолом из группы
флавонолов – витамином Р (рутином). Рутин повышает активность аскорбиновой
кислоты, защищая ее от окисления. Объектами исследования служили образцы
чёрного и зеленого чая, произведенные из 2-3-х листных флешей сортов Колхида,
Сочи, радиамутант № 3823, радиамутант № 582, химимутант № 855,
колхимутант №2264, выращиваемых на опытном коллекционно-маточном участке,
заложенном в 1984 – 1985 гг. в пос. Уч-Дере (Сочи, Лазаревский р-н). Прослежена
динамика накопления витаминов С и Р в черном и зеленом чае по месяцам. Показано
увеличение накопления витамина Р (в 1,5 – 1,7 раза) и АК (в 2,7 - 3,2 раза) от мая к
августу, причем в зеленом чае содержание рутина в 3 – 4 раза, а АК почти в 4 – 5 раз
выше, чем в черном. В накоплении витаминов С и Р четко проявляются сортовые
особенности. В готовом зеленом чае наибольшее количество АК отмечено в
образцах, произведенных из флешей сорта Сочи и радиамутанта № 3823 (48,03 и
44,94 мг%, соответственно), наименьшее – в колхимутанте № 2264 (29,60 мг%). В
черном чае больше АК содержат радиамутант № 3828, химимутант 855 и сорт Сочи
(9,53; 9,47 и 9,28 мг%, соответственно). Иное распределение выявлено в содержании
витамина Р, в образцах, содержащих больше количество АК рутина отмечено
меньше, чем в чае с низким содержанием АК.

Ключевые слова: чай, сорт, мутантная форма, антиокисидант, аскорбиновая


кислота, витамин Р, динамика.

27
The creation of modern gene pool banks, a fundamental task for solving
the import substitution problem

Antonina Borisova, Ivan Kulikov, Tatiana Tumaeva and Inna Knyazeva


All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery,
Zagorevskaya Str., 4, Moscow, 115598, Russian Federation;
E-mail: vstisp@vstisp.org; tata0909@list.ru

In accordance with the Decree of the President of the Russian Federation of July 21, 2016
No. 350 "On Measures for the Implementation of the State Scientific and Technical Policy in
the Interests of Agricultural Development", as well as Decree No. 996 of the Government of
the Russian Federation of August 25, 2017 "On Approval of the Federal scientific and
technical program for the development of agriculture for 2017-2025", conservation and
replenishment of biodiversity in Russia is a priority task for import substitution. The
creation of gene pool banks of fruit and small fruit plants that must be laid in accordance
with international norms and standards should be based on planting material free from
harmful viruses and dangerous pathogens, which are typical plants tested for productivity
and genetic stability. Along with the formation of field collections, the use of
cryopreservation in vitro of healthy specimens is envisaged. With such system, the task of
creating and introducing new cultivars of fruit and small fruit crops into industrial
plantations in Russia, which are now often laid by imported planting stock, will be
accelerated by orders of magnitude for the established breeding and nursery centers.
Possessing original plants of promising cultivars and hybrids or their clones (if
biotechnological methods and cryopreservation were used in the breeding process),
nurserymens, having patented domestic developments, will be able to reproduce them in
the shortest terms in conditions of modern protected soil without violating genetic
stability. In complex studies conducted by breeders, biotechnologists, virologists,
phytosanitary experts and nurseries, not only digital technologies will be born, but also
mother plantings of the highest quality categories. Only in this way the scientifically-based
system of nursery management, elaborated by the scientists of the All-Russian
Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery (ARHIBAN), will work.
The role of the state here is paramount, since it is necessary to provide comfortable
conditions for conducting scientific research and efficient business functioning.
Today, ARHIBAN has all the prerequisites for the implementation of its developments
in such conditions, supporting innovative technologies by transferring planting material of
higher quality categories for the laying of mother plantations in accordance with the
scientifically based system of nursery management in Russia.

Keywords: import substitution, gene-pool banks, breeding and nursery centers, source
plants, digital technologies.

28 28
Создание современных генбанков – фундаментальная задача для
решения проблемы импортозамещения

А.А. Борисова, И.М. Куликов, Т.А. Тумаева, И.В. Князева


Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский
селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства",
ул. Загорьевская, 4, г. Москва, 115598, Российская Федерация;
e-mail: vstisp@vstisp.org; tata0909@list.ru

В соответствии с Указом Президента Российской Федерации от 21.07.2016 г. № 350


«О мерах по реализации государственной научно-технической политики в интересах
развития сельского хозяйства», а также постановления правительства Российской
Федерации от 25 августа 2017 г. № 996 «Об утверждении федеральной научно-
технической программы развития сельского хозяйства на 2017-2025 годы»
сохранение и пополнение биоразнообразия в России, является приоритетной
задачей для импортозамещения.
Создание банков генофонда плодовых и ягодных растений, которые должны
закладываться в соответствии с международными нормами и стандартами должно
базироваться на свободном от вредоносных вирусов и опасных патогенов
посадочном материале, представляющем собой типичные растения, проверенные на
продуктивность и генетическую стабильность. Наряду с формированием полевых
коллекций предусматривается применение криосохранения in vitro оздоровленных
экземпляров. При такой системе для сформированных селекционно-
питомниководческих центров на порядки ускорится задача создания и внедрения
новых сортов плодовых и ягодных культур в промышленные насаждения России,
которые в настоящее время нередко закладываются импортным посадочным
материалом. Обладая исходными растениями перспективных сортов и гибридов или
их клонами (если в селекционном процессе использовали биотехнологические
методы и крисохранение), питомниководы, имея запатентованные отечественные
разработки, в кратчайшие сроки в условиях современного защищённого грунта
смогут размножить их без нарушения генетической стабильности. В комплексных
исследованиях, проводимых селекционерами, биотехнологами, вирусологами,
специалистами по фитосанитарии и питомниководами будут рождаться не только
цифровые технологии, но и маточные насаждения высших категорий качества.
Только так заработает научно-обоснованная система ведения питомниководства,
разработанная учёными ФГБНУ ВСТИСП. Роль государства здесь первостепенная,
поскольку необходимо обеспечить комфортные условия для проведения научных
исследований и эффективного функционирования бизнеса.
Сегодня ФГБНУ ВСТИСП имеет все предпосылки для внедрения своих
разработок в таких условиях, подкрепляя инновационные технологии передачей
посадочного материала высших категорий качества для закладки маточных
насаждений в соответствии с научно обоснованной системой ведения
питомниководства России.

Ключевые слова: импортозамещение, генбанки, селекционно-питомниководческие


центры, исходные растения, цифровые технологии.

29
Determination of drought resistance of common fig and jujube cultivars
through leaf dehydration

Irina Chernobay, Elena Shishkina


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: chernobaj52@mail.ru

Investigation of fruit-bearing crops efficiency proves that a yield quantity and quality
directly depend on plant stages and susceptibility to the environmental factors. Lately in
many regions, including the Crimea, the specialists have fixed changes of the temperature
regimes. The number of extremely hot days (over 31°C) considerably have grown. In case
of a high temperature and moisture deficit, leaves of common fig and jujube started wilting
earlier than ever, lost turgor, slowed down growth and decreased fruiting. At the same
time, moisture deficit in the organs and tissue causes crop capacity reduction and
aggravation of a fruit quality. Fruits don`t gain the size and taste parameters, which are
typical for a certain cultivar. Purpose of this work is to study characteristics of moisture
regime and potential draught-resistance of different cultivars and forms of Ziziphus
jujuba Mill. and Ficus carica L. under the conditions of the Southern Coast of the Crimea.
The researches were being carried out during 2015-2017 based on the collection
plantations of the Nikita Botanical Garden (NBG). The samples of domestic and foreign
breeding were taken as the study objects. While rating a draught-resistance, capacity of
water-retaining and turgor regenerating in leaf tissue were determined after a wilting
process during maximum high air temperature and aridity. There is a direct dependence
between a leaf capacity to retain moisture and degree of a turgor regenerating, that makes
possible to evaluate a plant potential in resistance to dehydrating factors. If long-term
dehydrating (30 hours), the most of the jujube cultivars and forms from NBG breeding
presented a high reparation capacity - from 70 to 90%. The following jujube cultivars and
forms were distinguished with a high draught-resistance: ‘Tsukerkovy’, ‘Koktebel’, ‘Pl. 5-
27’. The close relation between a water-retaining capacity and leaf adoptability to stand by
the dehydration was determined as the result. Wilting leaves output moisture slowly as
possess resistance to dehydration. The cultivars and forms of common fig in ‘Sabrutsija
Rozovaja’, ‘Figue Blanche’ and ‘Figue Jaune’ were distinguished according to this
parameter. Turgor retaining in leaves tissues ranged from 70 to 100%. The cultivars and
forms with a high water-retaining capacity during critical points of vegetation can be
recommended for a breeding work and creating a new plantation in extra arid regions.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: jujube, common fig, cultivar, leaves, dehydration, wilting, turgor.

30 30
Определение засухоустойчивости сортов инжира и зизифуса по
обезвоживанию листьев

И.Г. Чернобай, Е.Л. Шишкина


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: chernobaj52@mail.ru

Изучение проявления продуктивности плодовых культур показывает, что


количество и качество урожая определяется состоянием растений и
восприимчивостью их к факторам окружающей среды. В последнее время
фиксируется изменение температурного режима во многих регионах, в том числе и в
Крыму. Отмечено, что в последние годы произошел заметный рост числа аномально
жарких дней с температурой воздуха выше 31°C. При высокой температуре и
дефиците влаги у инжира и зизифуса наблюдали преждевременное пожелтение
листьев, потерю тургора и замедление роста и редукцию плодов. Дефицит влаги в
органах и тканях приводит к снижению урожая и ухудшению его качества. Плоды не
приобретают характерных для сорта размер и вкус. Целью данной работы явилось
изучение параметров водного режима и потенциальной засухоустойчивости
различных сортов и форм Ziziphus jujubа Mill. и Ficus carica L. в условиях Южного
берега Крыма. Исследования проводили в течение 2015-2017 гг. на базе
коллекционных насаждений Никитского ботанического сада (НБС). В качестве
объектов исследований послужили образцы отечественной и зарубежной селекции.
При оценке на засухоустойчивость определяли водоудерживающую способность и
способность восстанавливать тургор тканей листа после перенесенного завядания в
период максимально высоких температур и сухости воздуха. Существует прямая
зависимость между способностью листьев удерживать влагу и степенью
восстановления тургора, что дает возможность оценить потенциал растений
противостоять действию обезвоживающих факторов. При длительном
обезвоживании (30 часов) большая часть сортов и форм зизифуса селекции НБС
показали высокую репарационную способность – от 70 до 90%. Высокой степенью
засухоустойчивости выделились сорта и формы зизифуса: Цукерковый, Коктебель,
Пл. 5-27. Установлена тесная зависимость между водоудерживающей способностью
и приспособленностью листьев переносить обезвоживание. Листья, медленно
отдающие воду при завядании, обладают повышенной устойчивостью к
обезвоживанию. По этому признаку выделились сорта: Сабруция Розовая, Figue
Blanche, Figue Jaune. Восстановление тургора тканей листьев составило от 70 до
100%. Сорта и формы, которые обладают высокой водоудерживающей
способностью в критические периоды вегетации, можно рекомендовать для
использования в селекционной работе и создания насаждений в особо засушливых
регионах.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда №14-50-00079.

Keywords: зизифус, инжир, сорт, листья, обезвоживание, завядание, тургор.

31
The growth characteristics of Abies alba seedlings in Voronezh

Valentina Dorofeeva1, Anatolii Odintsov2, Valentina Shipilova2, Olga Komarova2


1Voronezh State University of Forestry and Technologies Named after G.F. Morozov;

Lomonosova street, 105, Voronezh, Russian Federation;


2All-Russian Research Institute of Forest Genetics, Breeding and Biotechnology;

Artamonova str. 8a, 33, 394010, Voronezh, Russian Federation; E-mail: olya34@mail.ru

This research focuses on growth and development of seedlings of European silver fir
(Abies albaL.), native to the Central Europe, in the Central Black Earth Region. The research
aims at introducing this species to forestry and green building in the region. The study is
based on measurements and observations of silver fir seedlings in the forest nursery of All-
Russian Research Institute of Forest Genetics, Breeding and Biotechnology, Voronezh. The
study started in 2010. We used silver fir from the arboretum of Voronezh State University
of Forestry and Technologies as parent trees, which were planted in 1992 by five-year
seedlings. They first produced seeds in 2009, at the age of 22 years. In 2010 we collected
seeds and sowed them after pre-sowing seed treatment. Their germination capacity was
about 90%. After 10-14 days the shoots appeared. By the end of the first growing season
the height of a seedlings was 7.2 cm on average. We continued to monitor their growth and
physiological status on an annual basis. The study demonstrates that two key determinants
of plant growth are temperature and water availability, and during the first half of the
growing season, when soil still has enough water, plant growth depends primarily on the
sum of positive temperatures while during the second half of it, due to water shortage,
upon precipitation patterns. During the final year of the research the average fir growth
was significantly higher than before. The inter-series correlation coefficient between the
years was nearly the same. The first-order autocorrelation between the growth of the
current and previous year was 20-25%, which indicates a stable growth and development
of the seedlings.
Thus, it can be concluded that the silver fir is quite adapted to the conditions of the
region and can be recommended for introduction into forestry practice.

Keywords: European silver fir, introduction, seed production, germination capacity,


growth, correlation.

32 32
Особенности роста сеянцев Abies alba в условиях Воронежа

В.Д. Дорофеева1, А.Н. Одинцов2, В.Ф. Шипилова2, О.В. Комарова2


1Воронежский государственный лесотехнический университет им. Г.Ф. Морозова, ул.

Тимирязева, 8, г. Воронеж, 394087, Российская Федерация;


2Всероссийский научно-исследовательский институт лесной генетики, селекции и

биотехнологии, ул. Ломоносова, 105, г. Воронеж, 394087, Российская Федерация;


e-mail: olya34@mail.ru

Исследование посвящено изучению роста и развития пихты белой (европейской),


интродуцента из средней Европы, в условиях Центрального Черноземья. Цель
работы – обеспечить введение этой породы в лесное хозяйство и зеленое
строительство региона. Материалом данного исследования послужили растения
пихты белой в питомнике Всероссийского научно исследовательского института
лесной генетики, селекции и биотехнологии. Исследование начато в 2010 году. В
качестве маточных деревьев были использованы деревья пихты белой из дендрария
Воронежского государственного лесотехнического университета, высаженные в
1992 году пятилетними саженцами. Первое семеношение у них было отмечено в
2009 году, в возрасте 22 лет. Семена в количестве 5000 штук высеяны в 2010 году
после предварительной обработки. Всхожесть составила 90%. Первые всходы
появились через 10-14 суток. Средняя высота однолетнего сеянца к концу первого
вегетационного периода составляла 7,2 см. Далее наблюдения за приростом и
состоянием сеянцев проводились ежегодно. В процессе наблюдения установлено,
что основными факторами, определяющими суммарную величину роста, являлись
температура и влагообеспеченность, причем в первую половину вегетационного
периода, когда в почве еще достаточны запасы влаги, величина прироста зависела
от суммы положительных температур, а во вторую половину вегетации, когда воды
в почве становится мало – от выпадающих осадков. В заключительном году
исследования средний прирост пихты был значительно выше, чем в предыдущие
годы. Межсериальный коэффициент корреляции между годами приблизительно
одинаков. Величина автокорреляции 1-го порядка между приростами текущего и
предшествующего года составила 20-25 %, что свидетельствует о стабильном росте
и развитии сеянцев.
Таким образом, можно сделать вывод, что пихта белая вполне адаптировалась
к условиям Центрально-Чернозёмного региона и может быть рекомендована для
введения в производство.

Ключевые слова: пихта белая европейская, интродуцент, семеношение, всхожесть,


рост, корреляция.

33
Ultrasound diagnostics of some species of Cupresus L. genus in the plant
collection of the NBG-NSC

Vladimir Gerasimchuk, Yurii Plugatar, Vladimir Koba, Vladimir Papelbu


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: gerasimchuk_vova@mail.ru

The studies have been performed in situ on the territory of the parks of Arboretum of the
Nikita Botanical Gardens. «Arbotom®» a complex of acoustic ultrasound tomography has
been used to investigate the state of trunk wood tissue of Cupressus species, which are
widely used in landscape design in the Southern Coast of the Crimea (SCC): Cupressus
torulosa D.Don, Cupressus arizonica Greene, Cupressus sempervirens L. (var. stricta Ait) and
Cupressus macrocarpa Hartw. The low rate of phytogenic damage is observed in C. torulosa.
The trunk wood tissues of C. marcocarpa are characterized by the highest rates of
phytopathogenic degradation. The graphic presentation of ultrasound scanning in most
part of trunk wood volume of C. macrocarpa is defined by red and purple colors of marking,
which indicates the last stage of trunk wood tissues degradation and the dramatical
decrease of vegetal functions of damaged plants. Correlation analyses of phytopathogenic
damage’s rate and dendrometric features of the studied species of Cupressus genus has
shown, that the intensity of development of root rot at stumpwood has a positive relation
with its sizes. It has been revealed that the species in vegetative phase are the most
vulnerable to the adverse effect of pore fungi. The correlation between the rate of
phytopathogenic damage of trunk wood and the external indexes of vital state is observed
at a tendency level. It is determined by the fact that the external symptoms of the disease
affection do not appear at once. In many cases, the visualization of damages is noticed at
the stage of phytopathogen’s fruiting body formation, when the destructive processes
spread over the most part of trunk wood. The negative impact of pore fungi is one of the
most significant factors decreasing the vegetative functions and limiting the longevity
of Cupressus genus’ species under the conditions of the SCC. The phytopathogenic damage
of wood and the formation of stem rot have an effect on the implementation of the bio-
environmental program of growth and development of a plant, reducing the time scale of
passing certain ontogenesis stages.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Cupressus L., wood tissues, phytopathogenic damage, tomography, vital state.

34 34
Ультразвуковая диагностика состояния растений некоторых видов
рода Cupressus L. коллекционных насаждений НБС-ННЦ

В.Н. Герасимчук, Ю.В. Плугатарь, В.П. Коба, В.В. Папельбу


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: gerasimchuk_vova@mail.ru

Исследования проводили in situ на территории парков Арборетума Никитского


ботанического сада. С использованием комплекса акустической ультразвуковой
томографии «Arbotom®» изучали состояние тканей древесины ствола видов рода
Cupressus, наиболее широко используемых в озеленении ландшафтов Южного берега
Крыма: Cupressus torulosa D.Don, Cupressus arizonica Greene, Cupressus sempervirens L.
(var. stricta Ait) и Cupressus macrocarpa Hartw. Низкий уровень фитогенного
повреждения наблюдался у C. torulosa. Стволовая древесина деревьев C. macrocarpa
характеризовалась наиболее высокими показателями фитопатогенной деградации.
Графическое изображение ультразвукового сканирования в большей части объема
стволовой древесины C. macrocarpa характеризовалось красным и сиреневым
цветом окраски, что свидетельствует о последней стадии деградации тканей
древесины и значительном снижении жизненных функций поврежденных растений.
Корреляционный анализ уровня фитопатогенного повреждения и
дендрометрических характеристик изучаемых видов рода Cupressus показал, что
интенсивность развития стволовой гнили в прикорневой части растений проявляет
положительную связь с его размерами. Выявлено, что особи активного роста в
наибольшей степени подвержены негативному воздействию трутовых грибов. Связь
уровня фитопатогенного повреждения древесины ствола с внешними показателями
жизненного состояния наблюдается на уровне тенденции. Это определяется тем, что
внешние признаки заболевания растений проявляются не сразу, в большинстве
случаев визуализация повреждений отмечается на стадии формирования плодового
тела фитопатогена, когда деструктивные процессы охватывают значительную часть
объема древесины ствола дерева. Негативное воздействие трутовых грибов,
является одним из наиболее значительных факторов, снижающих жизненные
функции и ограничивающим возраст долголетия видов рода Cupressus в условиях
ЮБК. Фитопатогенное повреждение древесины и формирование стволовой гнили
оказывает влияние на реализацию биоэкологической программы роста и развития
растения, сокращая временные масштабы прохождения отдельных этапов
онтогенеза.

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 14-50-00079.

Ключевые слова: Cupressus L., ткани древесины, фитопатогенное повреждение,


томография, жизненное состояние.

35
Water regime peculiarities of apricot cultivars and breeding forms in
conditions of the Southern Coast of Crimea

Valentina Gorina, Vadim Korzin, Natalya Mesyiats, Ruslana Pilkevich


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: korzinv@rambler.ru

Adaptation to environmental conditions is one of the main reasons for apricot plants that
limit their spreading to different climatic zones. A great variety of soil-climatic conditions
of natural regions determines the amplitude of the requirements for cultivars. The
breeders are focused on the degree of adaptation of the genotype being created.
The aim of the research was to study the drought resistance of apricot cultivars and
breeding forms in conditions of the Southern Coast of Crimea, to identify the degree of their
adaptation to the conditions of cultivation and to select promising samples for further use
in breeding for this trait. The 18 genotypes of plants have been studied during 2015-2017.
Water-cut of leaf tissues, water retention capacity and restoration of turgor were
determined by the methods of G. Eremeev (1974); water deficit was estimated according to
the methodology of M. Kushnirenko (1975). It was pointed out that the cultivars and
breeding forms of the Nikita Botanical Gardens are more adapted to the droughty
conditions of the southern region of Russia than the introduced species. The influence of
meteorological conditions of the year on the water-cut of the leaves of apricot is noted. Its
greatest variation was recorded in 2015 (from 23.1 to 67.9%, depending on the genotype).
This year, the average monthly air temperature has been exceeded by 1.2-2.9°C compared
to average long-term standards and the amount of precipitation decreased by 11.6-15.4
mm. In the course of the experiment, it was established that the loss of water during the
withering of leaves depends on the characteristics of the cultivar. The greatest amount of
moisture after 24 hours of wilting following the results of 2015-2017 preserved three
plants. In three years of study, there were eight selected promising cultivars and breeding
forms by the set of indicators.

This study was funded by a research grant № 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: apricot, cultivars, selection forms, drought resistance, water-cut, water deficit,
turgor restoration.

36 36
Особенности водного режима сортов и селекционных форм
абрикоса в условиях Южного Берега Крыма

В.М. Горина, В.В. Корзин, Н.В. Месяц, Р.А. Пилькевич


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: korzinv@rambler.ru

Адаптация к условиям окружающей среды – одна из основных причин


лимитирующих распространение растений абрикоса в различные климатические
зоны. Большое разнообразие почвенно-климатических условий природных
регионов определяет обширность требований, предъявляемых к сортам. В центре
внимания селекционеров стоит степень адаптации создаваемого генотипа. Целью
исследования явилось изучение засухоустойчивости сортов и селекционных форм
абрикоса в условиях Южного берега Крыма, выявление степени их
приспособленности к условиям возделывания и отбор перспективных образцов для
дальнейшего использования в селекции на этот признак. Изучали растения 18
сортов и селекционных форм в течение 2015-2017 гг. Обводнённость тканей
листьев, водоудерживающая способность и восстановление тургора определены
методами Г.Н. Еремеева и А.И. Лищука (1974); водный дефицит – по методике М.Д.
Кушниренко, Г.П. Курчатовой, Е.В. Крюковой (1975). Контролем служил сорт
Крымский Амур. Отмечено, что сорта и формы селекции Никитского ботанического
сада более приспособлены к засушливым условиям южного региона России, чем
интродуценты. Выявлено влияние метеоусловий года на оводнённость листьев
абрикоса. Наибольшее её варьирование зафиксировано в 2015 году (от 23,1 до
67,9%, в зависимости от генотипа). В этом году наблюдали превышение
среднемесячных температур воздуха по сравнению со средними многолетними
нормами на 1,2-2,9°С и уменьшение количества выпавших осадков на 11,6-15,4 мм. В
процессе опыта установлено, что потеря воды при завядании листьев зависит от
особенностей сорта. Наибольшее количество влаги, после 24-х часов завядания по
итогам 2015-2017 гг. сохранили три сорта. За три года изучения, по комплексу
показателей отобрано восемь сортов и селекционных форм.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: абрикос, сорта, селекционные формы, засухоустойчивость,


оводнённость, водный дефицит, восстановление тургора.

37
Genetic diversity assessment of Crimean wild grape forms based on
microsatellites polymorphism

Svitlana Goryslavets, Vitalii Volodin, Yakov Volkov, Аdelina Kolosova, Еlena


Stranishevskaya, Valentina Risovannaya
Federal State Funded Institution of Science «All-Russian National Research Institute of
Viticulture and Winemaking «Magarach» of the RAS», 31 Kirovа Str., Yalta, 298600, Russian
Federation; E-mail: MGR.Magarach@gmail.com

The Crimean peninsula due to its favorable environmental and geological conditions can be
considered as an area for survival and development of Vitis vinifera subsp. sylvestris
(Gmel.). It is believed that wild Vitis vinifera L. vines, including V. vinifera ssp. sativa D.C.
that fell out of cultivation and true wild grape V. vinifera ssp. silvestris Gmel. that survived
since the tertiary period and is believed to be the progenitor of Vitis vinifera, can be found
in the Crimean mountains. To identify habitats of wild growing grapes, the forested areas of
the Crimean mountain-forest natural reserves were examined in the period of 2015-2018.
The territory of Eski-Kermen and Mangup cave towns, the slopes of Baydarskaya,
Yaltinskaya and Alushtinskaya yailas, the gorge of the Chernorechensky canyon and the
couloirs along Alaka, Kalenda, Armanka and others rivers were examined. A total of 345
wild-growing lianas were detected. The identified vine plants primarily grew at 600 m
above sea level in areas with sufficiently moisturized soil. Image-documentation of a shoot,
leaf, inflorescence and cluster (when available) was done. Molecular assessment of the
grape genotypes was performed based on analysis of allelic polymorphism of nine nuclear
microsatellite loci. The standard genetic parameters were calculated using the POPGENE
software (v.1.32); the DARwin software (v.5.0.158) was used to construct a phylogenetic
tree. The share of polymorphic loci made 100%. The average number of alleles/loci was
8.56, the effective number of alleles (ne) was 3.6, the Shannon information index (I) made
1.57. A large number of rare alleles was recorded (25.4%). In the wild vine samples, a
heterozygote deficiency was revealed – the average value of the Wright fixation index
(coefficient of inbreeding) Fis = 0.107.

The research is conducted with the support of the Russian Foundation of Basic Research,
grant No. 15-29-02715.

Keywords: Vitis vinifera ssp. silvestris Gmel., SSR, allelic polymorphism, genetic variability.

38 38
Оценка генетического разнообразия крымских дикорастущих форм
винограда на основе полиморфизма микросателлитных локусов

С.М. Гориславец, В.А. Володин, Я.А. Волков, А.А. Колосова, Е.П. Странишевская,
В.И. Рисованная
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Всероссийский
национальный научно-исследовательский институт виноградарства и виноделия
«Магарач» РАН», ул. Кирова, 31, г. Ялта, 298600, Российская Федерация;
e-mail: MGR.Magarach@gmail.com

Крымский полуостров, за его благоприятные экологические и геологические


условия, можно рассматривать как область для выживания и развития Vitis vinifera
subsp. sylvestris (Gmel.). Считается, что в лесных районах Крымских гор в диком виде
произрастает виноград Vitis vinifera L., к которому относится одичавший виноград V.
vinifera ssp. sativa D.C. и настоящий дикий виноград V. vinifera ssp. silvestris Gmel.,
сохранившийся с третичного периода и который рассматривают как прародитель
культурного винограда. С целью выявления мест обитания дикорастущего
винограда в течение 2015-2018 гг. обследованы лесные районы Крымских гор.
Обследованы территории пещерных городов Эски-Кермен, Мангуп, склоны
Байдарской, Ялтинской, Алуштинской яйлы, ущелья Чернореченского каньона и
вдоль русл рек Алаки, Календы, Арманки, Черной и др. Всего обнаружено 345
дикорастущих лиан. Обнаруженный виноград преимущественно произрастал до 600
м над уровнем моря, в местах с достаточным увлажнением почвы. Создана образ-
документация побега, листа, соцветия и грозди (при наличии). Молекулярная
оценка генотипов винограда выполнена на основе анализа аллельного
полиморфизма 9 ядерных микросателлитных локусов (nSSR). Стандартные
генетические параметры были рассчитаны с использованием программного
обеспечения POPGENE (v.1.32); ПО DARwin (v.5.0.158) использовали для построения
филогенетического дерева. Доля полиморфных локусов составила 100%. Среднее
количество аллелей/локусов ставило 8,56, эффективное количество аллелей (ne) –
3,6, информационный индекс Шеннона (I) – 1,57. Отмечено большое количество
редких аллелей (25,4%). В выборках дикорастущего винограда выявлен дефицит
гетерозигот – среднее значение индекса фиксации Райта (коэффициент
инбридинга) Fis = 0,107.

Исследования выполняются при поддержке РФФИ, гранта №15-29-02715.

Ключевые слова: Vitis vinifera spp silvestris Gmel., SSR, аллельный полиморфизм,
генетическая изменчивость.

39
Old abandoned terraces surveying and restoration as a contribution to
the adaptive forest landscape restoration of the Shouf Biosphere
Reserve (Lebanon)

Nizar Hani1, Pedro Regato2, Marco Pagliani2, Mishal Khaddazh3, Yuri Vernyuk3, Rawya Bu
Hussein1, Lina Sarkis4, Monxer Buwadi1, Vadim Plyushchikov3
1Shouf Biosphere Reserve (SBR), Park House, Village Square,Maaser, Lebanon;
2SBR International consultants, San Gerardo 8, 28035 Madrid, Spain;
3Peoples’ Friendship University of Russia (RUDN University), Miklukho-Maklaya, 6,

Moscow, 117198, Russian Federation; E-mail: mishal_2@mail.ru


4Native Nurseries sarl, Rafic Salman blg, Ramlieyeh, Lebanon

The Shouf Biosphere Reserve (SBR), with a surface of 50,000 hectares is located in Mount
Lebanon. SBR harbors a rich flora with about 1,100 species, many of them with edible,
aromatic and medicinal properties. The landscape includes a mosaic of agro-silvo-pastoral
systems, characterized by pastures, forests - including the largest expanse of Cedrus libani
forests in Lebanon – and traditional agriculture terraces (olives, fruit trees). Landscape in
the SBR is the result of: (i) overuse of habitats and wild plant species; (ii) inadequate
policies on land use planning; (iii) rural abandonment resulting in soil erosion, agro-
biodiversity loss, and the conversion of agricultural land into chaotic urbanization; (iv)
agriculture intensification, pollution. Climate change trends in the region are already
exacerbating environmental risks (forest fires, water scarcity). Building resilience in the
SBR through forest landscape restoration entails interventions to strengthen the adaptive
capacity of the social and ecological politics in the region. The project developed protocols
for the production and sustainable use of high quality plant material of more than 40 native
plant species. An advanced method for monitoring and large scale detailed mapping was
used to improve the investigation of terraces. More than 12 hectares of degraded terraces
were restored and planted with native fruit tree species and shrubs. Sustainable farming in
the restored terraces implied combined actions on: (i) biodiversity conservation – both the
diversification of planted species and cultivars, and the conservation and management of
marginal habitats linked to farming system; (ii) organic food production, and (iii) the
management of agriculture waste to reduce environmental risks while generating new
revenues.

Keywords: agriculture terraces, forest landscape restoration, climate change adaptation,


high quality plant material, biodiversity conservation, socio-economic development.

40 40
Осмотр и восстановление старых заброшенных террас в качестве
вклада в восстановление адаптивного лесного ландшафта
биосферного заповедника Шуф (Ливан)

Низар Хани1, Педро Регато2, Марко Паглиани2, Мишаль Хаддаж3, Ю.И. Вернюк3,
Рауья Бу Хусейн1, Лина Саркис4, Монзер Бувади1; В.Г. Плющиков3
1Биосферный заповедник Шуф (БЗШ), г. Маасер, Ливан;
2Международные консультанты (БЗШ) , ул. Сан Герардо, 8, г. Мадрид, 28035,

Испания;
3Российский университет дружбы народов (РУДН), ул. Миклухо-Маклая, 6, г. Москва,

117198, Российская Федерация; e-mail: mishal_2@mail.ru


4Натив Нерсериз сарл, г. Рамлиье, Ливан

Биосферный заповедник Шуф (БЗШ) с площадью 50 000 гектаров расположен в


центральной части горного Ливана. В БЗШ имеется богатая флора с примерно 1100
видами, многие из которых обладают съедобными, ароматическими и лечебными
свойствами. Ландшафт включает в себя мозаику агро-лесо-пасторальных систем,
характеризующихся пастбищами, лесами, включая самое большое пространство где
растут ливанские кедры (Cedrus libani) в Ливане, а также традиционные
сельскохозяйственные террасы (маслины, фруктовые деревья). Ландшафт в БЗШ
является результатом: (i) чрезмерного использования мест обитания и видов диких
растений; (ii) неадекватной политики в области планирования землепользования;
(iii) отток сельского населения, приводящий к эрозии почв, утрате
агробиоразнообразия и превращению сельскохозяйственных земель в хаотическую
урбанизацию; (iv) интенсификации сельского хозяйства, загрязнение. Тенденции
изменения климата в регионе уже усугубляют экологические риски (лесные
пожары, нехватка воды). Укрепление устойчивости в БЗШ посредством реставрации
лесных ландшафтов влечет за собой вмешательство с целью укрепления
адаптационных возможностей социальной и экологической политики в регионе. В
проекте разработаны протоколы для производства и устойчивого использования
высококачественного растительного материала более чем 40 видов местных
растений. Для улучшения исследования террас использовался прогрессивный метод
мониторинга и крупномасштабного детального картографирования. Более 12
гектаров деградированных террас были восстановлены и засажены местными
видами фруктовых деревьев и кустарниками. Устойчивое земледелие на
восстановленных террасах подразумевало совместные действия по: (i) сохранению
биоразнообразия – как диверсификации посаженных видов и сортов, так и
сохранению и управлению маргинальными местообитаниями, связанными с
системой земледелия; (ii) производству органической пищи и (iii) управлению
отходами сельского хозяйства для снижения экологических рисков при получении
новых доходов.

Ключевые слова: сельские террасы, восстановление лесного ландшафта, адаптация


к изменению климата, высококачественный растительный материал, сохранение
биоразнообразия, социально-экономическое развитие.

41
Effect of some modifications in tissue culture media for commercial
banana multiplication

Mazen Isamil1, Sahar Youssef2, Gehan Safwat1, Ahmed Shalaby2


1Modern Science and Arts University, 26 July Mehwar Road, Intersection with Wahat road,

Egypt; E-mail: mazenashraf44@gmail.com


2Plant Pathology Research institute, Virus and Phytoplasma Department, 9 El gamaa str.,

Giza, Egypt

The goal of this study was to find cheaper alternatives for micropropagation of banana
(Musa sp.). Low-cost options adopted in this study included lowering MS concentration in
media, lowering benzylaminopurine (BAP) in media, and replacement of distilled water
with tap water in media preparation. The effect of 4 different concentrations of BAP (0.6
mg L-1, 0.8 mg L-1, 1.0 mg L-1, 1.2 mg L-1) on bud development initiation and shoot length
was investigated. The experiment tested the effect of lowering MS concentration in media
with threedifferent concentrations (3.0 g L-1, 3.5 g L-1, 4.4 g L-1) in order to reduce the cost
of media ingredients. The effect of replacing distilled water with tap water was also
studied. The investigated concentrations of BAP has shown that using lower concentrations
of BAP (0.6 mg L-1, 0.8 mg L-1) will produce a slightly lower number of buds while
producing higher shoot length if compared to standard concentrations (1.0 mg L-1, 1.2
mg L-1). The study shows that using low MS concentration (3.0 g L-1) provides a higher
number of bud development and shoot length when compared to the standard (4.4 g L-1).
Using tap water instead of distilled water was effective in lowering cost of production
without compromising the quality of plants. Tested media with lowered ingredients (BAP:
0.6 mg L-1, MS: 3.0 g L-1, tap water) was tested against standard media and it showed no
difference in the number of bud dvelopment while producing higher shoot length plantlets.
Using the tested media will cut the cost of media preparation by nearly 50%.

Keywords: banana, tissue culture, micropropagation, growth hormones, tap water.

42 42
The use of high-throughput sequencing to investigate the diversity of
defense protein genes of cucumber inoculated with cucumber green
mottle mosaic virus

Ekaterina Istomina, Andrey Shelenkov, Anna Slavokhotova, Tatyana Korostyleva, Tatyana


Odintsova
Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Science, Gubkina str. 3, Moscow,
119333, Russian Federation; E-mail: mer06@yandex.ru

Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) is an RNA virus from tobamoviruses group
that infects plants from the Cucurbitaceae family, causing a loss of up to 40% of the crop.
The resistance genes to CGMMV have not been described, so attenuated strains are used for
plant protection, which do not cause symptoms of the disease, but provide protection
against pathogenic strains. CGMMV genome regions determined its pathogenicity were
revealed earlier, but no studies were conducted to investigate the changes in transcriptome
of cucumber Cucumis sativus upon its inoculation with viruses, which allow detecting
proteins forming plant immune response, including antimicrobial peptides (AMP). Here
this investigation was made by sequencing the transcriptomes of eight cucumber samples
in two technical repeats on Illumina Hiseq 2500 platform: healthy plants, plants treated
with an attenuated and pathogenic strain, and vaccinated plants to which an additional
pathogenic virus strain was applied. About 50 million reads with a length of 150 bp were
obtained for each sample. Transcriptome assembly was performed using Trinity. The
number of transcripts obtained by the program was 55,000-65,000 with the median
transcript length in the range of 840-961. The search for plant defense proteins in the
transcripts obtained using Blast2Go, SPADA and Cysmotif searcher allowed to reveal about
100 proteins involved in response to pathogens in each of the samples. In addition, infected
and vaccinated plants had more AMPs than healthy plants. Preliminary data on defense
proteins differential expression allow identifying transcripts involved in the genetic
regulation of the plant response to inoculation by various strains of CGMMV. Currently we
perform additional investigations of the regulation and searching for new AMPs, and to
develop practical applications of new defense proteins revealed in the process of
sequencing data analysis.

This work was supported by the Russian Science Foundation (Project No. 16-16-00032).

Keywords: antimicrobial peptides, plant transcriptomes, NGS, bioinformatics analysis,


CGMMV.

43
Использование высокопроизводительного секвенирования для
исследования разнообразия генов защитных белков огурца, при
заражении вирусом зеленой крапчатой мозаики огурца

Е.А. Истомина, А. Шеленков, А. Славохотова, Т.В. Коростылева, Т.И. Одинцова


Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук,
ул. Губкина 3, г. Москва, 119333, Российская Федерация; e-mail: mer06@yandex.ru

Вирус зеленой крапчатой мозаики огурца (ВЗКМО) представляет собой РНК-


содержащий вирус из группы тобамовирусов, поражающий растения семейства
Тыквенные, вызывая потерю до 40% урожая. Гены устойчивости к ВЗКМО не
описаны, поэтому для защиты растений применяются аттенуированные штаммы, не
вызывающие появления симптомов заболевания, но обеспечивающие защиту от
патогенных штаммов вируса. Ранее были локализованы участки генома ВЗКМО,
отвечающие за его патогенность, но исследования по изучению изменений
транскриптома огурца Cucumis sativus после его заражения вирусами не
проводилось, что позволит выявить белки, формирующие иммунный ответ
растений, в том числе, антимикробные пептиды (АМП). В настоящей работе такое
исследование проводилось посредством секвенирования на платформе Illumina
Hiseq 2500 транскриптомов восьми образцов растений огурца: здоровые растения,
растения, обработанные аттенуированным и патогенным штаммом, и группа
вакцинированных растений, на которые был дополнительно нанесен патогенный
штамм вируса. Эксперимент проводили в двух технических повторностях. Для
каждого образца в среднем было получено около 50 млн. прочтений длиной 150 п.о.
Сборка транскриптомов выполнялась с помощью программы Trinity. Количество
собранных программой транскриптов составляло 55-65 тыс. при медианной длине
транскрипта в диапазоне 840-961. Поиск защитных белков растений в полученных
транскриптах с помощью программ Blast2Go, SPADA и Cysmotif searcher позволил
выявить около 100 белков, вовлеченных в ответ на патогены, в каждом из образцов.
Кроме того, при поиске АМП в транскриптомах в зараженных и вакцинированных
растениях было найдено больше АМП по сравнению со здоровыми растениями.
Предварительные данные по анализу дифференциальной экспрессии защитных
белков в изучаемых транскриптомах позволили выявить транскрипты,
потенциально вовлеченные в генетическую регуляцию ответа растения на
заражение различными штаммами ВЗКМО. В настоящее время проводятся
дополнительные исследования по изучению регуляции и поиску новых АМП, а
также изучению возможностей практического применения ранее неизвестных
защитных белков, обнаруженных в процессе анализа данных секвенирования.

Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 16-16-00032.

Ключевые слова: ВЗКМО, траскриптомы растений, генетическая регуляция, NGS.

44 44
Effect of cold shock proteins on increasing cold and frost resistance in
winter rape

Pavel Khvatkov2,3, Maria Chernobrovkina2, Vasiliy Taranov2, Sergey Dolgov1,2,3


1 The Branch of the M.M. Shemyakin and Yu.A. Ovchinnikov Institute of Bioorganic

Chemistry of the RAS, Prospect Nauki, 6, Puschino, Moscow region, 142290, Russian
Federation;
2 All-Russia Research Institute of Agricultural Biotechnology, Timirayzevskaya Str., 42,

Moscow, 127550, Russian Federation;


3 Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: dolgov@bibch.ru

The increased demand for vegetable oil for food purposes and high - protein feed for
livestock and poultry encourages Russian producers to expand the production of various
oil crops, while occupying as the acreage of the southern part of Russian central region and
Volga region, where the winter frosts with the temperatures below -20°C are common.
Improvement of cold and frost resistance of cultivated crops would significantly increase
yield and the profitability of oil production and expand the range of rape cultivation in
Russia. Domestically selected winter rape of the ‘Severyanin’ cultivar was used as an object
of research. Commercial value of this cultivar is high seed and fodder productivity, high
quality of oil and meal, and resistance to major diseases. The vector constructs pBI121-
CSPA-plant and pBI-TsCSDP3, which were created on the basis of pBI121 vector by
replacing the ß-glucoronidase synthesis gene with the target cspA gene isolated from
Escherichia coli, with the optimized codon composition for the plants of the cabbage family
(Brassicaceae) (cspA-plant), and the target tscsdp3 gene, encoding the protein with the cold
shock domain of Thellungiella salsuginea (Pall.), were used in the experiments,
respectively. Transformation was performed by co-cultivation of hypocotyl explants with
Agrobacteria for 48 hours. As a result of the studies, 9 kanamycin-resistant lines were
obtained. PCR analysis revealed 6 transgenic rapeseed lines with the introduction of the T-
DNA construct pBI121-CSPA-plant and 3 lines with the insertion of the T-region of plasmid
pBI-TsCSDP3.These lines were adapted to in vivo conditions and planted in a greenhouse
to obtain the seed generation T1. After germination of T1 generation seeds in the presence
of 650 mg L-1 kanamycin, 40 resistant plants of each line were selected for assays to
determine the expression level of heterologous genes and to identify the effectiveness of
introduced genes for increasing the cold resistance of transgenic rapeseed lines.

Studies were carried out in accordance with the State Order (0574-2014-0024), State
registration number АААА-А17-117082950004-9 and State Order (0829-2016-0001), State
registration АААА-А18-118012300084-8.

Keywords: winter rape, cold shock protein, transformation.

45
Изучение эффективности применения белков холодового шока для
повышения холодостойкости и морозоустойчивости озимого рапса

П.А. Хватков2,3, М.А. Чернобровкина2, В.В. Таранов2, С.В. Долгов1,2,3


1 ФГБУН Филиал института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина

и Ю.А. Овчинникова РАН, г. Пущино, Россиийская Федерация


2 ФГБНУ Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной

биотехнологии, г. Москва, Россиийская Федерация


3 ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; E-mail: dolgov@bibch.ru

Возросшие потребности в растительном масле для пищевых целей и в


высокобелковых кормах для животноводства и птицеводства побуждают
российских производителей расширять производство различных масличных
культур, занимая при этом посевные площади как южных регионов, так и
Центрального Нечерноземья и Поволжья, в которых в зимний период морозы с
температурой ниже - 20 °С обычное явление. Повышение холодостойкости и
морозоустойчивости возделываемых культур позволило бы существенно увеличить
урожайность, повысить рентабельность производства масла и расширить ареалы
возделывания в России.
В качестве объекта исследований был использован сорт озимого рапса
(Brassica napus) Северянин отечественной селекции (ФНЦ «ВИК им. В.Р. Вильямса»).
Коммерческая ценность данного сорта состоит в высокой семенной и кормовой
продуктивности, высоком качестве масла и шрота и устойчивости к основным
болезням. В экспериментах использовали векторные конструкции pBI121-CSPA-plant
и pBI-TsCSDP3, которые были созданы на основе вектора pBI121 путем замены гена
синтеза ß-глюкоронидазы на целевой ген cspA, выделенный из Escherichia coli, c
оптимизированным кодонным составом для растений семейства капустные
(Brassicaceae) (cspA-plant), и на целевой ген tscsdp3, кодирующий белок с доменом
холодового шока растения Thellungiella salsuginea (Pall.), соответсвенно.
Трансформацию осуществляли методом кокультивации эксплантов гипокотилей,
прекультивированных в течение 15 дней на агаризованной среде MS, дополненной
1,0 мг/л 2,4-D. Экспланты кокультивировали с агробактериями в течение 48 часов.
Отбор регенерантов проводили методом негативной селекции на среде MS,
содержащей: BA 4мг/л, зеатин 2 мг/л, AgNO3 5 мг/л, тиментин 150 мг/л и канамицин
50 мг/л. В результате проведенных исследований было получено 9 канамицин-
устойчивых линий. Методом ПЦР-анализа выявлено 6 трансгенных линий рапса с
интродукцией Т-ДНК конструкции pBI121-CSPA-plant и 3 линии со вставкой Т-
региона плазмиды pBI-TsCSDP3. Данные линии были адаптированы к условиям in
vivo и высажены в теплицу для получения семенного поколения Т1. После
проращивания семян поколения Т1 в присутствии 650 мг/л канамицина было
отобрано по 40 устойчивых растений каждой линии для проведения анализов по
определению уровня экспрессии гетерологичных генов и выявлению
эффективности виляния интродуцированных генов на увеличение холодостойкости
трансгенных линий рапса.

Исследования проведены в рамках выполнения ГЗ (0574-2014-0024) №


госрегистрации АААА-А17-117082950004-9 и ГЗ (0829-2016-0001) №
госрегистрации АААА-А18-118012300084-8

Ключевые слова: озимый рапс, белок холодового шока, трансформация.

46 46
Evaluation of the Nikita Botanical Gardens genefund collection of
persimmon with parameters of the ideal cultivar

Sergey Khokhlov, Vladimir Melnikov, Euvgeniya Panyushkina


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: ocean-10@mail.ru

Persimmon Oriental, as a fruit crop, has become widespread almost on all continents of our
planet. In the fruit growing of the Crimea, persimmon has been actively cultivated since the
beginning of the XIX century. However, in practice, introduced cultivars of foreign breeding
acclimatize in the soil and climatic conditions of the Crimean peninsula with great
difficulty. To solve this problem, the Department of Subtropical Fruit Crops was established
in the Nikita Botanical Gardens in 1937, whose staff began a complex works on the
introduction and breeding of persimmons using scientifically based approaches (Clyde,
1948). The approaches and methods used in the breeding of fruit crops are continuously
improved. For complex evaluation of promising and classic cultivars, the model of an ideal
persimmon cultivar was developed based on the following characteristics: yield (20 t/ha),
weak affection by fungal diseases (1 point), fruit mass (200 g), lack of fruity stiffness in the
solid state (3 points ), sugar content (25%), fruit taste (5 points), absence of seeds (3
points). For comparison with the model, 13 cultivars of persimmon were selected from the
genefund collection of the Nikita Botanical Gardens. The studies results were processed
using the Statistics 10 program by the cluster analysis method. As a result, persimmon
cultivars with economically valuable characteriestics corresponded to the parameters of
the model of the ideal cultivar have been selected. By the similarity and magnitude of the
common characteristics persimmons are grouped into clusters (groups): I – ‘Zolotistaya’; II
– ‘Hyakume’, ‘Hachia’, ‘Nikitskaya Bordovaya’, ‘Yuzhnaya Krasavitsa’, ‘Mechta’, ‘Sidles’,
‘Gayley’; III – ‘Costata’, ‘Zvezdochka’, ‘Zenjimaru’, ‘Fuyu’, ‘Nikitsky Prevoskhodny’.
According to the results of the complex evaluation, the closest to the ideal model are the
following cultivars: ‘Zolotistaya’, ‘Costata’, ‘Zvezdochka’, ‘Mechta’ and ‘Sidles’.

This study was funded by a research grant № 14-5-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: persimmon, ideal cultivar model, cluster analysis.

47
Оценка генофондовой коллекции хурмы Никитского ботанического
сада по параметрам идеального сорта

С.Ю. Хохлов, В.А. Мельников, Е.С. Панюшкина


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: ocean-10@mail.ru

Хурма восточная, как плодовая культура, получила широкое распространение


практически на всех континентах нашей планеты. В плодоводстве Крыма хурма
активно культивируется с начала XIX века. Однако на практике,
интродуцированные сорта зарубежной селекции с большим трудом
акклиматизируются в почвенно-климатических условиях Крымского полуострова.
Для решения данной проблемы в Никитском ботаническом саду в 1937 году был
создан отдел субтропических плодовых культур, сотрудники которого начали
комплекс работ по интродукции и селекции хурмы с применением научно
обоснованных подходов (Клайда, 1948). Приемы и методы, используемые в селекции
плодовых культур, непрерывно совершенствуется. Для комплексной оценки
перспективных и классических сортов была разработана модель идеального сорта
хурмы по следующим признакам: урожайность (20 т/га), слабая поражаемость
грибными болезнями (1 балл), масса плода (200 г), отсутствие терпкости плода в
твёрдом состоянии (3 балла), сахаристость плода (25%), вкус плода (5 баллов),
отсутствие семян (3 балла). Для сравнения с моделью было отобрано 13 сортов
хурмы из генофондовой коллекции Никитского ботанического сада. Результаты
проведенных исследований были обработаны с использованием программы
Статистика 10 методом кластерного анализа. В результате были выделены сорта
хурмы, которые по комплексу хозяйственно ценных признаков в максимальной
степени соответствуют параметрам модели идеального сорта. По схожести и
величине общих признаков сорта хурмы объединены в кластеры (группы): I -
Золотистая; II - Хиакуме, Хачиа, Никитская Бордовая, Южная Красавица, Мечта,
Сидлес, Гейли; III - Костата, Звёздочка, Зенджи - Мару, Фуйю, Никитский
Превосходный. Согласно результатам комплексной оценки наиболее близкими к
идеальной модели являются следующие сорта: Золотистая, Костата, Звёздочка,
Мечта, Сидлес.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: хурма, сорта, идеальная модель сорта, кластерный анализ.

48 48
Somatic hybridisation as a potential tool for Pelargonium improvement

Evelyn Klocke, Holger Budahn


Julius Kuehn Institute, Erwin-Baur-Str. 27, D-06484 Quedlinburg, Germany;
E-mail: evelyn.klocke@julius-kuehn.de

Every year, millions of garden geraniums are being produced for decoration throughout
the world. They have been derived from the wild species of Pelargonium indigenous to
South Africa and crossings between them. Interspecific crossings may allow the use of the
broad genetic pool of the genus Pelargonium. As such crossings remain difficulty, somatic
hybridisation could be an alternative to overcome crossing barriers. Here, we present the
production of asymmetric somatic hybrids between P. × hortorum ‘Antik Pink’ and
Pelargonium wild type 662. Hypocotyl protoplasts of ‘Antik Pink’ and mesophyll
protoplasts of 662 were isolated. Before fusion, mesophyll protoplasts of 662 were
irradiated with UV light at 254 nm and 0.07 J cm-2. Thus, the DNA of wild type 662 was
completely inactivated as it was shown for the irradiated protoplast control. The irradiated
protoplasts did not develop further in protoplast culture medium. Protoplast fusion was
performed using polyethylene glycol 6000. Already after one week, cell wall was re-
established and the cells proliferated well in protoplast culture medium. On solid media
protoplast calli developed shoots. Thirty-five plants were planted in soil. RAPD profiles of
twelve hybrid plants displayed characteristic DNA fragments of both protoplast donors. By
RFLP, the cytoplasmic genome of the regenerated plants was analysed. In six fusion plants
DNA recombination of mitochondrial and plastid genome occurred. By flow cytometry, the
DNA amount of the plants was investigated. Protoplast donor ‘Antik Pink’ and 35 fusion
plants had the same peak position indicating that only a small part of 662 DNA was
included in the asymmetric somatic hybrids. Plants flowered and 32 plants including nine
somatic hybrids formed seeds.

Keywords: Pelargonium, protoplast fusion, PEG, plant regeneration, RAPD, RFLP, UV


irradiation.

49
Species diversity and current status of Quercus L., representative genus
of natural flora of Crimea

Vladimir Koba, Tatiana Sakhno, Yurii Plugatar


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: plugatar.y@mail.ru

In Crimean forests, these trees grow naturally: Q. pubescens, Q. petraea, Q. robur and
Q. petraea subsp. medwedievii. Oak formations occupy about 142 thousand hectares, or
54.7% of the total area of peninsula’s natural forests. The most extensive formation is the
stands of Q. petraea – 78.3% and Q. pubescens − 21.5% of the area of all oak trees. The
distribution of different types of Quercus and theirs satellites depends on climatic and soil
conditions. The stands of Q. petraea are not productive enough: this area is dominated by
plantations of IV-V bonitet classes. The age structure of natural forests of Q. petraea is
dominated by stands of VII-XI age classes, occupying 82.6% of the area of stands of this
species in Crimea. Age structure of forest stands of Q. pubescens, as well as Q. petraea is
characterized by maldistribution. The extremely limited number of plantings under 50
years testifies to the demographic imbalance of natural populations of Q. pubescens and low
level of natural revegetation processes. Currently, in the forest formations of Q. pubescens
in Crimea the low-tree stands of vegetative origin are dominating. In the existing situation,
plantings of Q. pubescens are losing their protective functions and degrading, especially in
the southern macroslope of the Main ridge of Crimean Mountains. Generally, the formation
of oak forests of Crimea is characterized by an unsatisfactory state, which is related to the
irrational forest management in the past. The issue that is important at the present time in
conservation of the natural plantations of Quercus genus in Crimea is a complex measures'
system building to improve the efficiency of their reproduction, using the biotechnology
methods.

Keywords: species diversity, oak, natural populations, productivity, age structure, seed,
reforestation.

50 50
Видовое разнообразие и текущее состояние представителей рода
Quercus L. природной флоры Крыма

В.П. Коба, Т.М. Сахно, Ю.В. Плугатарь


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: plugatar.y@mail.ru

В лесах Крыма естественного произрастают: Q. pubescens, Q. petraea, Q. robur и


Q. petraea subsp. medwedievii. Дубовыми формациями занято около 142 тыс. га, или
54,7% всей площади естественных лесов полуострова. Наиболее обширными
является формации Q. petraea − 78,3% и Q. pubescens − 21,5% от площади всех
дубовых насаждений. Распространение различных видов Quercus L. и его спутников
зависит от климатических и почвенных условий. Древостои Q. petraea недостаточно
продуктивны: по площади преобладают насаждения IV-V классов бонитета. В
возрастной структуре естественных лесов Q. petraea преобладают древостои VII-XI
классов возраста, занимающие 82,6% площади древостоев данного вида в Крыму.
Возрастная структура древостоев Q. pubescens также, как и Q. petraea
характеризуется неравномерным распределением. Крайне ограниченная
численность насаждений моложе 50 лет свидетельствует о демографическом
дисбалансе природных популяций Q. pubescens и низком уровне процессов
естественного возобновления. В настоящее время в составе лесных формаций
Q. pubescens в Крыму преобладают низкоствольные древостои вегетативного
происхождения. В сложившейся ситуации насаждения Q. pubescens теряют свои
защитные функции и деградируют, особенно, на южном макросклоне Главной гряды
Крымских гор. В целом формации дубовых лесов Крыма характеризуется
неудовлетворительным состоянием, что связано с нерациональным
лесопользованием в прошлом. Наиболее актуальным вопросом сохранения
естественных насаждений видов рода Quercus в Крыму является формирование
системы комплексных мероприятий по повышению эффективности их
возобновления, включая и использование биотехнологических методов.

Ключевые слова: видовое разнообразие, дуб, природные популяции,


продуктивность, возрастная структура, семенное возобновление.

51
The management of the growth of microplants of woody fruit crops

Sergey Kornatskiy
Peoples’ Friendship University of Russia, 6 Micklukho-Maklaya Str., Moscow, 117198,
Russian Federation; E-mail: vitrolab@rambler.ru

The success of the method of clonal micropropagation are obvious, but there is an
unresolved problem of effective growth of adapted microplants. Earlier we repeatedly
noted that microplants of such crops as sour cherry, sweet cherry, plum and garden
ashberry through 1-1,5 months after adaptation stop growing, fall into a state of rest, which
lasts for 3-7 months. The purpose of the research was to study the growth characteristics
of adapted microplants in simulating the seasonal rhythm of development under artificial
conditions. We suggested the reception of preliminary preparation of adapted micro-plants
for transplantation for growth. Microplants in a state of rest, were treated with low positive
temperatures + 2 ... + 6° C for 2.5 months in artificial conditions. Such influence allowed to
provide plants with active and effective development after creation optimal conditions for
vegetation. After 2-3 days, the plants had a synchronous onset of development, which
allowed a growth of 15-30 cm in length for 2-3 weeks in the initial plant height of 5-7 cm.
After this, a cyclic scheme was developed for alternating vegetation and rest periods in the
control of environmental factors. During the calendar year, we managed to realize growth
cycle 3 (1.5 months of vegetation + 2.5 months of rest) and almost completely reduce the
loss of material. The use of this scheme allowed to increase the microplants of the studied
crops to a height of 60-110 cm in the greenhouse in one year, which ensured their survival
in the field.

Keywords: microplants, adaptation, growing season, rest period

52 52
Управление ростом адаптированных микрорастений древесных
плодовых культур

С.А. Корнацкий
Российский университет дружбы народов, ул. Миклухо-Маклая, 6, г. Москва, 117198,
Российская Федерация; e-mail: vitrolab@rambler.ru

Успехи метода клонального микроразмножения очевидны, но существует


нерешенная проблема эффективного доращивания адаптированных
микрорастений. Ранее мы неоднократно отмечали, что микрорастения таких
культур как вишня, черешня, слива, рябина садовая через 1-1,5 мес после адаптации
прекращают рост, впадают в состояние покоя, который длится в течение 3-7 мес.
Целью исследований было изучение особенностей роста адаптированных
микрорастений при имитации сезонной ритмики развития в искусственных
условиях.
Нами был предложен прием предварительной подготовки адаптированных
микрорастений к пересадке для доращивания. Микрорастения в состояние покоя,
подвергали обработке низкими положительными температурами +2…+6°С в течение
2,5 мес в искусственных условиях. Такое воздействие позволило обеспечить
растениям активное и эффективное развитие после создания оптимальных для
вегетации условий. Спустя 2-3 суток у растений наблюдалось синхронное начало
развития, что позволило получить у исходных растений высотой 5-7 см прирост
длиной 15-30 см в течение 2-3 недель. После этого была разработана циклическая
схема чередования периодов вегетации и покоя при контроле факторов среды. В
течение календарного года нам удалось реализовать 3 ростовых цикла (1,5 мес
вегетации + 2,5 мес покоя) и при практически полностью сократить потери
материала. Использование данной схемы позволило дорастить микрорастения
изучаемых культур до высоты 60-110 см в теплице за один год, что гарантировало
их приживаемость в полевых условиях.

Ключевые слова: микрорастения, адаптация, период вегетации, период покоя.

53
Genetic diversity of Tulipa suaveolens in the Crimea based on ISSR data

Tatyana Kritskaya, Alexandr Kashin


Chernyshevsky Saratov State University, 83 Astrakhanskaya str., Saratov, 410012, Russian
Federation; E-mail: kritckaiata@gmail.com

ISSR analysis revealed significant polymorphism in Tulipa suaveolens Roth.


(= T. schrenkii Regel) populations in the Crimea and the adjacent territories of Russia. In
terms of the number of polymorphic ISSR fragments, these populations far exceed the
previously studied populations in the Lower and Middle Volga regions and the Orenburg
oblast. The gene flow between the populations is 0.73 individuals per generation; and that
figure is in accordance with the figures for other Tulipa species. The existence of gene flow
and the hybrid nature of the majority of specimens are confirmed by the results obtained in
NewHybrids program as well. The mountain population from the adjacencies of Yalta lacks
any isolation which provides support for its inclusion in T. suaveolens species. The fact that,
according to STRUCTURE, this population coalesces with the populations from the Rostov
oblast provides evidence for E. V. Wulff’s hypothesis (1930) that T. suaveolens got into the
Crimea through the Isthmus of Perekop from the north. However, the obtained results do
not dismiss the possibility that the species dispersal could have gone in the reversed
direction. The pattern of the species’ genetic polymorphism in the Crimea is further
complicated by the fact that specimens from the Kerch populations form a discrete genetic
group. Furthermore, there is a mixed population near the Koktebel town located between
the mountain population near Yalta and the Kerch populations. This population is
constituted of the specimens from both genetic groups. The genetic group that was
identified by means of ISSR analysis in the specimens from the Kalmykia population was
not the one that formed the structure of genetic polymorphism of the species’ populations
in the Crimea. There is evidence that the genetic group revealed for the specimens in the
Markotkh population (Krasnodarsky region) was the one forming the structure of genetic
polymorphism of the species, but, more likely, its contribution to the gene flow was not
significant. In general, ISSR markers allow only for tentative conclusions. In order to draw
more definitive conclusions, further analysis by means of the DNA sequencing method is
required.

The research is partially funded by Russian Foundation of Basic Research under grant № 16-
04-00142.

Keywords: Tulipa suaveolens, Tulipa schrenkii, ISSR, Crimea.

54 54
Генетическое разнообразие Tulipa suaveolens в Крыму по данным
ISSR маркирования

Т.А. Крицкая, А.С. Кашин


Саратовский национальный исследовательский государственный университет
им. Н.Г.Чернышевского, ул. Астраханская, 83, г. Саратов, 410012, Российская
Федерация; e-mail: kritckaiata@gmail.com

Анализ ISSR маркеров позволил выявить высокий уровень полиморфизма в


популяциях Tulipa suaveolens Roth. (= T. schrenkii Regel) Крыма и прилегающих
территорий России. По числу полиморфных ISSR фрагментов они значительно
превосходят изученные ранее популяции, произрастающие на севере ареала вида в
пределах европейской части России. Между изученными популяциями существует
поток генов 0.73 особи на поколение, что согласуется с данными для других
видов Tulipa. На наличие потока генов и гибридную природу большей части
выборки также указывают результаты, полученные в программе NewHybrids.
Отсутствие какой-либо обособленности горной популяции из окр. г. Ялта
подтверждает её принадлежность виду T. suaveolens. Факт объединения этой
популяции с популяциями из Ростовской области по данным STRUCTURE указывает
в пользу гипотезы Е.В. Вульфа (1930), согласно которой T. suaveolens проник в Крым
с севера, через Перекопский перешеек. Однако по результатам исследования нельзя
исключить и то, что расселение вида могло происходить в обратном направлении.
Картину генетического полиморфизма вида в Крыму усложняет и то, что в качестве
самостоятельной генетической группы в этой части его ареала выделяются образцы
из популяций Керченского полуострова. При этом обнаружена смешанная
популяция в окр. г. Коктебель, территориально произрастающая между горной
популяцией из окр. Ялты и керченскими популяциями. Она представлена образцами,
содержащими в значительной мере обе эти генетические группы. Генетическая
группа, обнаруженная по результатам ISSR анализа у образцов из популяции
Калмыкии, не участвовала в формировании структуры генетического
полиморфизма крымских популяций вида. С большей вероятностью в этом могла
принимать участие генетическая группа, обнаруженная у образцов из популяции с
горы Маркотх (Краснодарский край), но, скорее, лишь обеспечивая незначительный
поток генов. Однако, в целом, ISSR маркеры не позволяют сделать однозначных
выводов, поэтому высказанные предположения носят лишь предварительный
характер.

Работа выполнена при частичной поддержке гранта РФФИ № 16-04-00142.

Ключевые слова: Tulipa suaveolens, Tulipa schrenkii, ISSR, Крым

55
Genetic diversity and population structure of the rare species, Artemisia
hololeuca detected by AFLP analysis

Alexander Kudryavtsev, Aya Trifonova


Vavilov Institute of General Genetics of the Russian Academy of Sciences, Gubkina Str. 3,
Moscow, 119333, Russian Federation; E-mail: kudryav@vigg.ru

Genetic diversity is an important parameter determining adaptation of species to changing


environmental conditions. Therefore, knowledge of genetic diversity is important for
developing conservation strategies for rare and endangered plant species. Genetic diversity
of rare plant species, Artemisia hololeuca M. Bieb. ex Besser listed in the Russian Red Data
Book (rarity status 2(V), species, numbers of which is decreasing) was investigated for the
first time. 89 samples of A. hololeuca from 13 populations collected in the Volgograd region
were analyzed using the AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) technique. Four
combinations of AFLP primers were used. High level of A. hololeuca intraspecific
polymorphism (88.79%) was detected. However, indices of intrapopulation genetic
diversity were lower: the polymorphism level varied from 18.8% to 39.5%; the effective
number of alleles – from 1,090 to 1,268; the Shannon´s diversity index – from 0.087 to
0.223; the expected heterozygosity – from 0.056 to 0.152. Interpopulation diversity of
A. hololeuca was also analyzed. The highest value of Nei´s genetic distance coefficient
(0.251) was noted for geographically remote populations, the lowest value (0.023) – for
geographically close populations. The Mantel test showed a high correlation between
geographical and genetic distances (R2=0.520, p=0.01). The among-population genetic
differentiation index was 0.516. Analysis of molecular variance (AMOVA) showed that 43%
of total genetic variation accounts to interpopulation polymorphism. Principal coordinates
analysis showed that A. hololeuca populations are divided into three groups, mainly due to
their geographical location. Thus, level of A. hololeuca intrapopulation diversity was
sufficiently low and level of genetic differentiation was high, especially considering the
limited sampling area. High level of differentiation may be due to the predominantly
vegetative reproduction of A. hololeuca and its habitats (bedrock dense layers of chalk)
which have a local distribution. The obtained data should be taken into account when
developing a program for A. hololeuca conservation.

Keywords: Artemisia hololeuca, genetic diversity, AFLP-analysis, rare species.

56 56
Генетическое разнообразие и популяционная структура редкого
вида Artemisia hololeuca на основании данных AFLP-анализа

А.М. Кудрявцев, А.А. Трифонова


Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук, г. Москва,
Российская Федерация; e-mail: kudryav@vigg.ru

Генетическое разнообразие является важным параметром, определяющим


адаптацию вида к изменяющимся условиям среды. Поэтому, знания о генетическом
разнообразии, очевидно, важны для разработки эффективных программ по
сохранению редких и исчезающих видов растений.
В данной работе впервые проведено исследование генетического разнообразия
редкого вида полынь беловойлочная (Artemisia hololeuca M. Bieb. ex Besser),
занесенного в Красную книгу России, как сокращающийся в численности вид (статус
2(V)). С помощью метода AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) были
проанализированы 89 образцов A. hololeuca из 13 популяций, собранные на
территории Волгоградской области. Для проведения AFLP-анализа было
использовано 4 комбинации праймеров.
В результате выявлен высокий уровень внутривидового полиморфизма A.
hololeuca – 88,79%. Однако показатели генетического разнообразия внутри
популяций были ниже: уровень полиморфизма варьировал от 18,8% до 39,5%;
эффективное число аллелей – от 1,090 до 1,268; информационный индекс Шеннона –
от 0,087 до 0,223; ожидаемая гетерозиготность – от 0,056 до 0,152. Также
проанализировано межпопуляционное разнообразие изучаемого вида. Наибольшее
значение генетического расстояния Нея (0,251) отмечалось для географически
отдаленных популяций, наименьшее (0,023) – для популяций собранных в
географически близких точках. Тест Мантеля выявил высокую корреляцию между
географическими и генетическими расстояниями (R2=0,520, p=0,01). Показатель
подразделенности популяций составил 0,516. Анализ молекулярной дисперсии
(AMOVA) показал, что на межпопуляционный полиморфизм приходится 43% от
общей гетерогенности вида. На графике главных координат, построенном по
результатам AFLP-анализа, можно выделить три группы популяций A. hololeuca
дифференциация между которыми связана в основном с их географическим
положением.
Таким образом, проанализировав генетическое разнообразие A. hololeuca
можно говорить о достаточно низком уровне внутрипопуляционного разнообразия
и высоком уровне дифференциации этого вида, особенно учитывая ограниченность
района сбора образцов A. hololeuca. Высокий уровень дифференциации можно
связать с наличием вегетативного размножения A. hololeuca, а также с его
приуроченностью только к выходам коренных плотных слоев мела, которые имеют
локальное распространение. Данные, полученные в ходе исследования, необходимо
учитывать при разработке программы по сохранению A. hololeuca.

Ключевые слова: Artemisia hololeuca, генетическое разнообразие, AFLP-анализ,


редкие виды

57
Experimental variability of grapes in Vitaceae family based on the use of
allotetraploidy and in vitro embryo culture

Svetlana Levchenko, Vladimir Volynkin, Valerii Zlenko, Alla Polulyakh, Vladimir


Lihovskoi, Irina Vasylyk
All-Russian National Scientific Research Institute of Viticulture and Winemaking
"Magarach" 298600 Kirov Str., 31, Yalta, Russian Federation;
E-mail: svelevchenko@rambler.ru

Formation of grapes samples occurred in the course of natural evolution and is possible in
the process of experimental evolution under artificial generative hybridization. Crossing
forms of grapes with a different number of chromosomes suggest the need to combine
several methods that take into account the physiological characteristics of the initial forms.
An attempt was made to achieve intergeneric hybrids Vitis  Ampelopsis and
Vitis  Parthenocissus within the Vitaceae family using tetraploid genotypes of the initial
forms. In order to obtain tetraploid seedlings (diploid gametes), buds broken from
dormancy and flower clusters were treated with 0.5%, 1% and 2% colchicine for 5-14 days
before meiosis. The intergeneric incompatibility was circumvented by growing seedlings
from in vitro cultured embryos isolated from immature seeds for 40 days after pollination.
An intermediate dissection pattern of the leaf typical of the species of the genera Vitis and
Ampelopsis used in intergeneric hybridization by the allotetraploidy method was registered
in a number of hybrid seedlings. More than that, this is a proof of the biologically
determined possibility that forms from distant crosses may have emerged in nature in the
course of natural evolution. Due to the fact that it was more successful to obtain plants
from the hybridization of Vitis vinifera cultivars of the genus Vitis with the forms of
Ampelopsis genus species, in comparison with the crossing of the Vitis vinifera cultivars
with the forms of the Parthenocissus genus species, can be assume a closer genetic
relationship in the Vitaceae family between the genera Vitis and Ampelopsis, which are
closer in terms of the evolution of the grapes culture as a whole.

Keywords: grapes, diploid gametes, meiosis, colchicines, pollination, seedlings, evolution.

58 58
Экспериментальная изменчивость винограда семейства Vitaceae на
основе использования аллотетраплоидии и культуры эмбриоидов
in vitro

С.В. Левченко, В.А. Волынкин, В.А. Зленко, А.А. Полулях, В.В. Лиховской,
И.А. Васылык
Всероссийский национальный научно-исследовательский институт виноградарства
и виноделия "Магарач" ул. Кирова, 31, г. Ялта, 298600, Российская Федерация;
e-mail: svelevchenko@rambler.ru

Формирование образцов винограда происходило в процессе естественной эволюции


и возможно в процессе экспериментальной эволюции при искусственной
генеративной гибридизации. Скрещивание форм винограда с различным
количеством хромосом требует необходимости сочетания нескольких методов,
учитывающих физиологические характеристики исходных форм. Была предпринята
попытка получения межродовых гибридов Vitis  Ampelopsis и Vitis  Parthenocissus в
семействе Vitaceae с использованием тетраплоидных генотипов исходных форм.
Чтобы получить тетраплоидные сеянцы (диплоидные гаметы), почки, вышедшие из
покоя и цветущие соцветия, за 5-14 суток до мейоза, обрабатывались 0,5%, 1% и 2%
колхицином. Межродовая несовместимость была преодолена путем выращивания
сеянцев из культивированных эмбриоидов in vitro, выделенных из незрелых семян
через 40 суток после опыления. Промежуточная степень рассеченности листа,
типичная для видов родов Vitis и Ampelopsis, используемых в межродовой
гибридизации методом аллотетраплоидии, была зарегистрирована у некоторых
гибридных сеянцев. Более того, это является доказательством биологически
определенной возможности того, что формы от отдаленных скрещиваний могут
возникнуть в природе в ходе естественной эволюции. В связи с тем, что было более
успешным получать растения от гибридизации сортов Vitis vinifera рода Vitis с
формами рода Ampelopsis, по сравнению со скрещиванием сортов Vitis vinifera с
формами видов рода Parthenocissusus, можно предполагать более близкое
генетическое родство в семействе Vitaceae между родами Vitis и Ampelopsis, которые
ближе в эволюции культуры винограда в целом.

Ключевые слова: виноград, диплоидные гаметы, мейоз, колхицин, опыление,


сеянцы, эволюция.

59
Regeneration peculiarities of in vitro berry cultures

Elena Malaeva1,2, Olga Molkanova3


1SBI «Volgograd Regional Botanical Garden», Metallurgov, 68, Volgograd, 400007, Russian

Federation; E-mail: e.malaeva@mail.ru;


2Volgograd State Social & Pedagogical University, V.I. Lenin Avenue, 27, Volgograd, 400066,

Russian Federation;
3FSFIS The Main Botanical Garden named after N. V. Tsitsin RAS, Botanicheskaya Str., 4,

Moscow,127276, Russian Federation

In vitro collection of berry crops in Volgograd Regional Botanical Garden and Main
Botanical Garden named after N.V. Tsitsin of RAS has more than 300 accessions and consist
of representatives of the following families and genera: Grossulariaceae DC. (Grossularia
Mill., Ribes L.) Caprifoliaceae Juss. (Viburnum L., Lonicera L.), Rosaceae Аdans. (Rubus L.,
Cerasus Mill., Armeniaca Mill., Sorbus L., Prunus L.), Actinidiaceae Van-Tieghem (Actinidia
Lindl.). The optimal period of isolation of berry crop explants is the phase of the beginning
of active growth (April-May), while the yield of viable explants averaged 83%. To obtain a
sterile culture of fruit plants, in particular Actinidia, raspberries, honeysuckle, Lysoformin
3000 was used at a concentration of 5%, the exposure time was 3 min. When used, the
yield of sterile explants was maximum and was about 90%. The stage of micropropagation
used the following growth regulators combinations: 6-benzylaminopurine (6-BAP), 6-
benzylaminopurine ribozid, zeatin, kinetin – 6-furfurylaminopurine (KIN), kinetin ribozid,
2-isopentenyladenine (2-iP), thidiazuron (TDZ), Indole-acetic acid (IAA), indolebutyric acid
(IBA) and gibberellic acid (GA3). A comparative analysis of the study of the influence of
different cytokinins on representatives of the genus Actinidia showed that when using 2-iP
multiplication factor, A. kolomikta and A. arguta significantly exceeded the value of this
indicator in environments with 6-BAP. For A. polygama, the maximum value of the
multiplication factor on media containing 6-BAP (0.5 mg L-1) or zeatin (5.0 mg L-1) was
noted. At the same time, the content of zeatin in the medium increased the multiplication
factor in all studied Actinidia samples, simultaneously stimulating the formation of callus,
which subsequently slightly hampered the adaptation of regenerated plants in vivo. For
representatives of the genus Lonicera is quite reasonable use of cytokinins in combination
with auxins. The highest reproduction rate (18±0.2) was observed at 6-BAP 1.0 mg L-1 and
IBA 0.5 mg L-1. At the stage of rooting for Actinidia, optimal concentration is IAA 1.0 mg L-1;
for primocane raspberry – IAA 5.0 mg L-1; for honeysuckle – IBA 1.0 mg L-1. At the stage of
adaptation of berry crops, the use of two-stage adaptation is very effective. The yield of
adapted plants averaged 70-95%.

Keywords: berry cultures, in vitro, micropropagation, culture medium.

60 60
Особенности регенерации in vitro ягодных культур

Е.В. Малаева1,2, О.И. Молканова3


1ГБУ ВО «Волгоградский региональный ботанический сад», пос. Металлургов, 68,

г. Волгоград, 400007, Российская Федерация; e-mail: e.malaeva@mail.ru;


2ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный социально-педагогический

университет», проспект им. В.И. Ленина, 27, г. Волгоград, 400066, Российская


Федерация;
3 ФГБУН Главный ботанический сад им. Н.В. Цицина РАН, ул. Ботаническая, 4,

г. Москва, 127276, Российская Федерация

Коллекция in vitro ягодных культур Волгоградского регионального ботанического


сада и Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН насчитывает более 300
сортообразцов и включает представителей следующих семейств и родов:
Grossulariaceae DC. (Grossularia Mill., Ribes L.) Caprifoliaceae Juss. (Viburnum L, Lonicera
L.), Rosaceae Аdans. (Rubus L., Cerasus Mill., Armeniaca Mill., Sorbus L., Prunus L.),
Actinidiaceae Van-Tieghem (Actinidia Lindl.). Оптимальным сроком изоляции
эксплантов ягодных культур является фаза начала активного роста (апрель-май),
при этом выход жизнеспособных эксплантов в среднем составил 83%. Для
получения стерильной культуры плодовых растений, в частности актинидии,
малины, жимолости использовали Лизоформин 3000 в концентрации 5%, время
экспозиции 3 минуты. При его использовании выход стерильных эксплантов был
максимальным и составлял около 90%. На этапе микроразмножения использовали
следующие регуляторы роста их сочетания: 6-бензиламинопурин (6-БАП), 6-
бензиламинопурин рибозид (6-БАПр), зеатин (Z), кинетин – 6-фурфуриламинопурин
(К), кинетин рибозид (Кр), 2-изопентиниладенин (2-iP), тидиазурон (TDZ),
Индолилуксусная кислота (ИУК), индолилмасляная кислота (ИМК), гиберелловая
кислота (ГК). Сравнительный анализ изучения влияния различных цитокининов на
представителей рода Actinidia показал, что при использовании 2-iP коэффициент
размножения A. kolomikta и A. arguta существенно превышал значение этого
показателя на средах с 6-БАП. Для A. polygama отмечено максимальное значение
коэффициента размножения на средах, содержащих 6-БАП (0,5 мг/л) или Z (5,0
мг/л). При этом, содержание в среде зеатина увеличивало коэффициент
размножения у всех исследуемых образцов актинидии, одновременно стимулируя
образование каллуса, что в последствии незначительно затрудняло адаптацию
полученных растений in vivo. Для представителей рода Lonicera вполне
обоснованным является использование цитокининов в сочетании с ауксинами.
Наибольший коэффициент размножения наблюдали на среде с 1,0 мг/л 6-БАП и 0,5
мг/л ИМК, при этом коэффициент размножения составил 18±0,2. На этапе
укоренения для актинидии оптимальной является концентрация ИУК 1,0 мг/л; для
малины ремонтантного типа – ИУК 5,0 мг/л; для жимолости – ИМК 1,0 мг/л. На этапе
адаптации ягодных культур весьма эффективно использование двухстадийной
адаптации. Выход адаптированных растений в среднем составил 70-95%.

Ключевые слова: ягодные культуры, in vitro, клональное микроразмножение,


питательная среда.

61
Biological diversity of aromatic and medicinal plants in the Nikita
Botanical Gardens

Natalya Marko, Oksana Shevchuk, Lydia Logvinenko, Sergey Feskov


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: nataly-marko@mail.ru

Preservation of plant biological diversity is an integral part of the work of botanical


gardens, consisting in the creation and expansion of gene pool collections of plants by
methods of introduction and selection. In the period 2015-2017 years in the Nikita
Botanical Gardens (NBG), through expedition trips, replenishment of gene pool collections
with new species and cultivars was carried out.. The aim of the work is to preserve and
expand the biodiversity of aromatic and medicinal plants to create a biological basis for
breeding of highly productive cultivars and forms of essential oil and medicinal crops for
the south of Russia. Of the natural flora and botanical gardens of Central China (Beijing),
the Caucasus and the Crimea, 166 samples of 119 species of aromatic and medicinal plants
from 85 genera were brought in and planted in the NBG. Habitat in the new conditions in
the Southern Coast of the Crimea, 104 samples of 79 plant species from 62 genera and 28
families, as well as 15 cultivars of foreign breeding that is 63% of the total number of plants
brought. The primary introductory study was carried out and included in the collection of
89 samples of 63 species from 52 genera belonging to 24 plant families, representing 54%
of the total number of introduced species. New species for the genefund collection of
aromatic and medicinal plants of the NBG were species of the natural flora of the Caucasus
and the Crimea: Helleborus caucasicus A. Br., Periploca graeca L., Dioscorea caucasica
Lipsky, Betonica macrantha C. Koch., Phlomis tuberosa (L.) MOENCH, Polygonum carneum
C. Koch, etc. Over the three years of operation, the species diversity of the collection was
expanded by 19%, generic by 47%, cultivars by 23%. In 2017, a collection of aromatic and
medicinal plants totaled 389 species and forms belonging to 162 genera belonging to 48
families. The collection includes 82 cultivars of aromatic and medicinal crops, 40 of which
are the NBG's breeding. Among the introduced species, promising species and cultivars
have been identified as sources of biologically valuable substances, as well as for
introduction into the culture and in the breeding process: Dioscorea caucasica Lipsky,
Saturea laxiflora K. Koch, Phlomis tuberosa (L.) MOENCH, Prunella grandiflora L., Prunella
vulgaris L., Perovskia × hybrid Hort. cultivar ‘Blue Gaz’. and Rosmarinus oficinalis L.

This study was funded by the Russian Science Foundation, grant No. 14-50-00079

Keywords: aromatic and medicinal crops, collection, introduced species.

62 62
Биологическое разнообразие ароматических и лекарственных
растений в Никитском ботаническом саду

Н.В. Марко, О.М. Шевчук, Л.А. Логвиненко, С.А. Феськов


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: nataly-marko@mail.ru

Сохранение фиторазнообразия является неотъемлемой частью работы ботанических


садов, заключающееся в создании и расширении генофондовых коллекций растений
методами интродукции и селекции. В период 2015-2017 гг. в Никитском
ботаническом саду (НБС) путем экспедиционных выездов проводилось пополнение
генофондовых коллекций новыми видами и сортами.
Цель работы – сохранение и расширение биоразнообразия ароматических и
лекарственных растений для создания биологической основы селекционных работ,
направленной на получение высокопродуктивных сортов и форм эфиромасличных и
лекарственных культур для юга России. Из природной флоры и ботанических садов
Центрального Китая (г. Пекин), Кавказа и Крыма были привезены и высажены в НБС
166 образцов 119 видов ароматических и лекарственных растений из 85 родов.
Прижились в новых условиях Южного берега Крыма 104 образца 79 видов растений
из 62 родов и 28 семейств, а так же 15 сортов иностранной селекции, что составляет
63% от общего числа привезенных растений. Первичное интродукционное изучение
прошли и вошли в состав коллекции 89 образцов 63 видов из 52 родов,
принадлежащих 24 семействам растений, что составляет 54% от общего числа
интродуцируемых видов. Новыми для генофондовой коллекции ароматических и
лекарственных растений НБС-ННЦ являются виды природной флоры Кавказа и
Крыма: Helleborus caucasicus A.Br., Periploca graeca L., Dioscorea caucasica Lipsky,
Betonica macrantha C. Koch., Phlomis tuberosа (L.) MOENCH, Polygonum carneum C. Koch и
др. За три года работы видовое разнообразие коллекции было расширено на 19%,
родовое на 47%, сортовое на 23%. На сегодняшний день коллекция ароматических и
лекарственных растений, насчитывает 389 видов и форм, принадлежащих 162
родам, относящимся к 48 семействам. В составе коллекции 82 сорта ароматических и
лекарственных культур, из них 40 сортов селекции НБС. Среди интродуцентов
выделены перспективные виды и сорта как источники биологически ценных
веществ, а также для введения в культуру и в селекционный процесс: Dioscorea
caucasica Lipsky, Saturea laxiflora K. Koch, Phlomis tuberosа (L.) MOENCH, Prunella
grandiflora L., Prunella vulgaris L., Perovskia × hybrida Hort. сорт Blue Gaz., Rosmarinus
oficinalis L.

Исследования выполнены при поддержке гранта РНФ № 14-50-00079.

Ключевые слова: ароматические и лекарственные растения, коллекция,


интродуценты.

63
Genetic modification of jasmonate biosynthesis pathway in wheat alters
plant tolerance to necrotrophic fungi

Dmitri Miroshnichenko1,2, A. Pigolev1, Alexander Pushin1,2, Sergey Dolgov2,


Tatyana Savchenko1
1Institute of Basic Biological Problems RAS, Institutskaya Str., 2, Pushchino, Moscow region,

142290, Russian Federation; E-mail: savchenko_t@rambler.ru


2The Branch of the M.M. Shemyakin and Yu.A. Ovchinnikov Institute of Bioorganic

Chemistry of the RAS, Prospect Nauki, 6, Puschino, Moscow region, 142290, Russian
Federation

Jasmonates, phytohormones produced in allene oxide synthase (AOS) branch of oxylipin


biosynthesis pathway, regulate plant growth and development, flower formation, gene
expression, fertility, photosynthesis and stress responses. 12-oxophytodienoic acid (12-
OPDA) formed in chloroplasts and jasmonic acid (JA) and JA derivatives synthesized in
peroxisomes are major metabolites of the pathway displaying biological activity. Many
research studies performed on a model plant Arabidopsis thaliana demonstrate the
involvement of jasmonates in regulation of plant tolerance to necrotrophic
phytopathogenic fungi. Here we report on the generation of transgenic bread and emmer
wheat plants, constitutively expressing Arabidopsis genes AtAOS and 12-OPDA REDUCTASE
3 (AtOPR3), coding for the key enzymes of jasmonates biosynthesis pathway, chloroplast-
targeted AOS and peroxisome-targeted OPR3, correspondingly. Homozygous lines
constitutively expressing AtAOS and AtOPR3 genes have been isolated and tested for the
tolerance to necrotrophic fungi Botrytis cinerea. Plants expressing AtAOS exhibited
enhanced tolerance to B. cinerea, while plants expressing AtOPR3 were, unexpectedly, more
sensitive to this pathogen. Exogenous application of synthetic jasmonates on infected
leaves revealed that JA application accelerates the disease symptoms development. Unlike
wheat, in Arabidopsis, jasmonates improved tolerance to B. cinerea, when produced in
plants or exogenously applied. Obtained results demonstrate that the jasmonates-regulated
defense mechanisms may differ significantly between monocotyledonous wheat and
dicotyledonous Arabidopsis.

The work was supported by the Russian Science Foundation, grant No 16-14-10155.

Keywords: wheat, jasmonates, necrotrophic fungi, Botrytis cinerea.

64 64
Изменение пути биосинтеза жасмонатов путем генетической
модификации пшеницы приводит к изменению устойчивости
растений к некротрофным грибам

Д.Н. Мирошниченко1,2, А. Пиголев1, А. Пушин1,2, С.В. Долгов2, Т.В. Савченко1


1Институт фундаментальны проблем биологии РАН, ул. Институтская, 2, г. Пущино,
Московская обл., 142290, Российская Федерация; e-mail: savchenko_t@rambler.ru;
2 Филиал Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и

Ю.А. Овчинникова РАН, Проспект Науки, 6, г. Пущино, Московская обл., 142290,


Российская Федерация

Жасмонаты, растительные гормоны, которые образуются в алленоксидсинтазной


ветви пути биосинтеза оксилипинов, регулируют рост и развитие растения,
формирование цветов, экспрессию генов, фертильность, фотосинтез и ответы на
стрессы. Образующаяся в хлоропластах 12-оксофитодиеновая кислота (12-ОФДК) и
синтезируемая в пероксисомах жасмоновая кислота (ЖК) и ее производные
являются основными метаболитами биосинтетического пути, обладающими
биологической активностью. Множество исследований, проведенных на модельном
растении Arabidopsis thaliana демонстрируют участие жасмонатов в регуляции
устойчивости растений к некротрофным фитопатогенным грибам. В данной работе
сообщается о создании трансгенных растений хлебной пшеницы и полбы, в которых
конститутивно экспрессируются гены Арабидопсиса AtAOS и 12-OPDA REDUCTASE 3
(AtOPR3), кодирующие ключевые ферменты пути биосинтеза жасмонатов,
хлоропластный фермент AOS и пероксисомный фермент OPR3, соответственно. Были
получены гомозиготные линии растений, в которых конститутивно
экспрессируются гены AtAOS и AtOPR3 и проведены анализы устойчивости
полученных трансгенных растений к некротрофному грибу Botrytis cinerea.
Растения, экспрессирующие AtAOS, оказались более устойчивы к B. cinerea по
сравнению с диким типом, в то же время растения, экспрессирующие AtOPR3,
неожиданно оказались более чувствительны к данному патогену. Экзогенная
обработка инфицированных растений синтетическими жасмонатами показала, что
ЖК ускоряет развитие симптомов заболевания. В отличие от пшеницы жасмонаты
повышали устойчивость растений арабидопсиса к B. cinerea и в случае биосинтеза в
растении и в случае экзогенной обработки. Полученные результаты показывают,
что защитные механизмы, регулируемые жасмонатами, могут значительно
различаться у однодольных растений пшеницы и двудольного арабидопсиса.

Работа поддержана Российским научным фондом, грант № 16-14-10155.

Ключевые слова: пшеница, жасмонаты, некпотрофные грибы, Botrytis cinerea.

65
Structure of the leaf blades in some horticultural plants cultured in vitro

Irina Mitrofanova, Valentina Brailko, Svetlana Chelombit, Natalya Ivanova, Olga


Mitrofanova
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: valentina.brailko@yandex.ru

Methods of plant tissue culture in vitro are widely used in modern fundamental and applied
researches in plant physiology, genetics, embryology and developmental biology. One of
the main topics is the investigations of plant assimilating organ structure, which is
associated with their successful adaptation in vivo. Thus, histological analyzes of the leaf
blades in a number of valuable essential oil, fruit and ornamental plants: Diospyros kaki
Thunb., Ficus carica L., Lavandula angustifolia Mill., Lavandula  intermedia Emeric ex
Loiseleur, Rosa  damascene Mill., Rosa chinensis, Chrysanthemum  morifolium Ramat.,
Clematis L. и Canna  hybridа hort. ex Backer. were carried out. The explants were cultured
for 12 months on the modified MS media in a growth chamber at 24±1°C, 16-hour
photoperiod and light intensity 37.5 μmol m-2s-1.
The leaf thickness in the in vitro propagated plants varied from 91 μm (R. 
damascene) to 235 μm (C.  hybridа). There was thin cuticle on epidermis surface (3-7 μm)
in Rosa  damascene, Rosa chinensis, Lavandula angustifolia, Lavandula hybrida. and Ficus
carica. Multiple simple and glandular trichomes (81-303 μm) were noted on a leaf blade
surfaces in L. angustifolia, L. hybrida, F. carica, Chrysanthemum  morifolium and Diospyros
kaki. Amphistomatic leaves were in Canna  hybrida and Ch.  morifolium, in the other
studied species, they were hypostomatic. The number of stomatal apparatus per 1 mm2
varied from 15 (C.  hybridа) to 265 ones (R.  damascene). Mechanical and vascular tissues
were well developed in all the studied cultivars. Differentiated palisade and spongy tissues
were characteristics of F. carica, R.  damascene, R. chinensis, L. anustustifolia, L. hybrida,
some D. kaki and Clematis cultivars. Palisade index varied from 0.32 to 0.58. Homogeneous
mesophylls with large intercellular spaces was noted in C. × hybrida, most cultivars of
D. kaki, Ch.  morifolium and Clematis. Thus, it has been identified a number of cultures
which under in vitro propagation demonstrated structural features typical for ex situ
plants, providing their better adaptation ex vitro and in vitro.

This study was funded by research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: in vitro plantlets, leaf blades, anatomy, mesophyll.

66 66
Структура листовых пластинок некоторых садовых растений,
культивируемых in vitro

И.В. Митрофанова, В.А. Браилко, С.В. Челомбит, Н.Н. Иванова, О.В. Митрофанова
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: valentina.brailko@yandex.ru

Методы культуры тканей растений in vitro находят все большее применение в


фундаментальных и прикладных исследованиях в области физиологии, генетики,
эмбриологии и биологии развития растений. Наиболее актуальной проблемой
является изучение строения ассимилирующих органов растений, что связанно с их
последующей успешной адаптацией in vivo. В связи с этим, были проведены
гистологические анализы листовых пластинок микропобегов ряда ценных
плодовых и декоративных растений: Diospyros kaki Thunb., Ficus carica L., Lavandula
angustifolia Mill., Lavandula  intermedia Emeric ex Loiseleur, Rosa  damascene Mill., Rosa
chinensis, Chrysanthemum  morifolium Ramat., Clematis L. и Canna  hybridа hort. ex Backer.
Культивирование в течение 12 месяцев, проходило на модифицированных средах
MS в климатической камере при 24 ± 1˚С, 16-часовом фотопериоде и интенсивности
освещения 37,5 μmol m-2s-1.
Толщина листа у in vitro размножаемых растеньиц составила от 91 мкм (R.×
damascene) до 235 мкм (Canna  hybridа). Кутикулярный покров выявлен у сортов
родов Rosa, Lavandula и Ficus. Множественные простые и железистые трихомы (81-
303 мкм) отмечены на листовых пластинках L. аngustifolia, L.  intermedia, F. carica, Ch.
 morifolium и D. kaki. Амфистоматические листья у Canna  hybridа и Ch.  morifolium, у
остальных – гипостоматические. Количество устьичных аппаратов на 1 мм2
составило от 15 (Canna  hybridа) до 265 (R.  damascene) штук. Механические и
проводящие ткани развиты у всех сортов. Дифференциация хлоренхимы на
палисадную и губчатую ткань характерна для F. сarica, R.  damascene, R. сhinensis,
L. аngustifolia, L.  intermedia, некоторых сортов D. kaki и Clematis. Палисадный индекс
изменяется от 0,32 до 0,58. Гомогенных мезофилл с крупными межклетниками
определен у Canna  hybridа, большинства сортов D. kaki, Ch.  morifolium и Clematis.
Таким образом, определен ряд культур, которые при размножении in vitro
формируют типичные для ex situ черты организации, позволяющие им лучше
адаптироваться к культивированию ex vitro и in vivo.

Исследования выполнены при финансовой поддержке РНФ, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: in vitro растеньица, листовые пластинки, анатомия, мезофилл.

67
Light intensity as the determining factor for in vitro regeneration in
some relic endemic species of the Crimea flora

Olga Mitrofanova, Irina Mitrofanova, Natalya Ivanova, Valentina Brailko, Tatyana


Kuzmina, Nina Lesnikova-Sedoshenko, Irina Zhdanova
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: invitro_plant@mail.ru

One of the least studied aspects of the Crimean flora relict endemics propagation and
preservation in vitro is the effect of physical factors (light intensity and spectrum,
photoperiod) on the regeneration capacity. In the presented studies, the shoot nodal
segments of the species Lamium glaberrimum (K.Koch) Taliev, Scrophularia exilis Popl.,
Heracleum ligusticifolium M. Bieb., Lagoseris callicephala Juz., Lagoseris purpurea L. and
Silene jailensis N.I. Rubtzov were used. In the experiments, influence of white or red light
with the intensity 2,000; 3,000 and 4,000 lux with 16-h photoperiod and white light (2,500
lux) with 14-h photoperiod at the constant temperature (21-22°C) on regeneration
capacity were investigated.
Positive effect of the white light on the microshoot regeneration in Lam. glaberrimum,
Scr. exilis, L. callicephala, L. purpurea and S. jailensis was revealed at the light intensity of
2,000 lux and 16-hour photoperiod. However, in Lam. glaberrimum microshoot length, the
number of leaves and internodes were significantly higher in comparison with other species.
Under the same physical factors in the species Scr. exilis, the number of microshoots per
explant was significantly higher (18 ones). An increase in the white light intensity up to
3,000-4,000 lux caused leaf chlorosis in Lam. glaberrimum and Scr. exilis, as well as
microshoot lengthening, chlorotic leaves appearance and hydration in S. jailensis. Light
intensity 3,000-4,000 lux induced an increase in the number of adventitious shoots and
hydrated leaves in L. callicephala and L. purpurea. The red light with an intensity of 2,000-
4,000 lux caused leaf and microshoot hydration in Lam. glaberrimum and Scr. exilis. At light
intensity of 2,000 lux, the shoots of S. jailensis were thinned, with long internodes, at 3,000
and 4,000 lux intensity and they elongated greatly (had long internodes and chlorotic
leaves). Active formation of adventitious shoots under the red light and 2,000 lux intensity
was noted in L. callicephala and L. purpurea. Leaf yellowing and hydration were observed at
3,000-4,000 lux. Data obtained for H. ligusticifolium species are of great interest.
Regeneration frequency increased 2-2.5 times under the red light, 2,000 lux intensity and 16-
h photoperiod was demonstrated. An increase of the light intensity to 3,000-4,000 lux
resulted in the hydrated shoot and leaf formation.
Thus, original data on the development biology in six relict endemic species of the
Mountain Crimea flora have been obtained for the first time and it was demonstrated that the
physical factors of culture had a significant effect on the morphogenetic capacity realization
in vitro.

Keywords: rare species, regeneration capacity, light intensity, light spectrum, photoperiod, in
vitro.

68 68
Освещенность как определяющий фактор регенерации in vitro
некоторых видов реликтовых эндемиков флоры Крыма

О.В. Митрофанова, И.В. Митрофанова, Н.Н. Иванова, В.А. Браилко, Т.Н. Кузьмина,
Н.П. Лесникова-Седошенко, И.В. Жданова
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: invitro_plant@mail.ru

Одним из наименее изученных аспектов размножения и сохранения реликтовых


эндемиков флоры Крыма является влияние физических факторов (освещенности,
спектра света и фотопериода) на регенерационный потенциал в условиях in vitro. У
видов Lamium glaberrimum (K. Koch) Taliev, Scrophularia exilis Popl., Heracleum
ligusticifolium M. Bieb., Lagoseris callicephala Juz., Lagoseris purpurea L. и Silene jailensis
N.I. Rubtzov использовали сегменты побегов с узлом. В опытах использовали белый
или красный спектры света с интенсивностью освещения 2, 3 и 4 клк с
фотопериодом 16 ч и белый спектр света (2,5 клк) с фотопериодом 14 ч при
постоянной температуре (21-22°С).
Выявлено положительное влияние белого спектра света при интенсивности
освещения 2 клк и 16-часовом фотопериоде на регенерацию микропобегов видов
Lam. glaberrimum, Scr. exilis, L. callicephala, L. purpurea и S. jailensis. При этом у Lam.
glaberrimum длина микропобегов, количество листьев и междоузлий была
достоверно выше по сравнению с другими видами. При аналогичных физических
факторах у вида Scr. exilis количество микропобегов/эксплант было значительно
выше (18 шт.). Увеличение интенсивности освещения белого света до 3-4 клк
вызывало хлоротичность листьев у видов Lam. glaberrimum и Scr. exilis, а также
вытягивание микропобегов, появление хлоротичных листьев и оводненности у S.
jailensis. Освещенность 3-4 клк индуцировало увеличение количества адвентивных
побегов и оводненных листьев у L. callicephala и L. purpurea. Красный спектр света с
интенсивностью 2-4 клк вызывал оводненность листьев и микропобегов у Lam.
glaberrimum и Scr. exilis. При 2 клк побеги S. jailensis были истонченные, с
удлиненными междоузлиями, при 3 и 4 клк – сильно вытягивались (с удлиненными
междоузлиями и хлоротичными листьями). Отмечено активное образование
адвентивных побегов при красном спектре света и 2 клк у L. callicephala и L. purpurea.
Пожелтение и оводненность листьев наблюдали при 3-4 клк. Особый интерес
представляют данные, полученные для вида H. ligusticifolium. Показано повышение в
2-2,5 раза частоты регенерации при красном свете, освещенности 2 клк и
фотопериоде 16 часов. Увеличение интенсивности освещения до 3-4 клк вызывало
образование оводненных побегов и листьев.
Таким образом, впервые получены оригинальные данные по биологии развития
6 видов реликтовых эндемиков Горного Крыма и показано, что физические факторы
культивирования оказывают значительное влияние на реализацию
морфогенетического потенциала in vitro.

Ключевые слова: редкие виды, регенерационный потенциал, интенсивность


освещения, спектр света, фотопериод, in vitro.

69
Conservation and clonal micropropagation of rare endemic species
Aristolochia manshuriensis Kom.

Olga Molkanova, Yuri Gorbunov, Darya Egorova


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: molkanova@mail.ru

In order to conserve plant biodiversity in vitro, methods have been successfully used in
recent years. A collection of rare plant species preserved in the form of meristem has been
created in Laboratory of Plant Biotechnology of the FSFIS The Main Botanical Garden
named after N. V. Tsitsin RAS. Aristolochia manshuriensis Kom. is a relict liana, endemic of
the Manchurian floristic region with limited habitat, gradually shrinking due to
anthropogenic impact. This species is listed in the Red Book of Russian Federation as
endangered one. A. manshuriensis hardly multiplies generative and vegetative ways, so to
obtain a sufficient amount of material for the further reintroduction purpose, clonal
micropropagation is used. For the representatives of the family Aristolochiaceae
(Aristolochia manshuriensis) at the first stage, the influence of the explant age and its
morphological features on the regeneration ability were investigated. As a result, it was
found that the explants taken from immature and virgin (not older than 4-6 years) plants
A. manshuriensis, characterized by a higher ability to proliferate shoots compared with
plants that have reached 12 years. The higher morphogenetic capacity was characterized
by the explants taken from 2-3-year-old plants. The highest multiplication factor
(14.84±0.8) was achieved on Murashige and Skoog medium with addition of 0.8 mg L-1 6-
BAP and 0.05 mg L-1 IAA. The optimum culture medium for rooting: ½MS containing 3.0 mg
L-1 IBA. The long-term storage in vitro not only allows to preserve of rare plant species, but
it is also a basis for studying the processes of morphogenesis and regeneration in tissue
culture including adaptation of microclones ex vitro.

Keywords: Aristolochia manshuriensis, rare species, clonal micropropagation.

70 70
Сохранение и клональное микроразмножение редкого эндемичного
вида Aristolochia manshuriensis Kom.

О.И. Молканова, Ю.Н. Горбунов, Д.А. Егорова


Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Главный ботанический
сад им. Н.В. Цицина Российской академии наук, ул. Ботаническая, 4, г. Москва,
127276, Российская Федерация; e-mail: molkanova@mail.ru

В последние годы для сохранения биоразнообразия растений успешно используются


методы культуры in vitro. В лаборатории биотехнологии растений ФГБУН Главного
ботанического сада им. Н.В. Цицина Российской академии наук создана коллекция
редких видов растений, сохраненных in vitro.
Aristolochia manshuriensis Kom. – реликтовая лиана, эндемик Маньчжурского
флористического района с ограниченным ареалом, постепенно сокращающимся из-
за антропогенного воздействия. Вид занесен в Красную книгу РФ как находящийся
под угрозой исчезновения. A. manshuriensis трудно размножается генеративным и
вегетативным способами, поэтому для получения достаточного количества
материала с целью дальнейшей реинтродукции используется клональное
микроразмножение. На представителях семейства Aristolochiaceae (Aristolochia
manshuriensis) на первом этапе исследовали влияние возраста экспланта и его
морфологических особенностей на регенерационную способность. В результате
было установлено, что экспланты, взятые с имматурных и виргинильных (не старше
4–6 лет) растений A. manshuriensis, характеризовались более высокой способностью
к пролиферации побегов по сравнению с растениями, достигшими 12 лет.
Наибольшим морфогенетическим потенциалом характеризовались экспланты,
взятые с 2–3-летних растений. Максимальный коэффициент размножения (14,84 ±
0,8) был получен на питательной среде Мурасиге и Скуга с добавлением 0,8 мг/л 6-
БАП и 0,05 мг/л ИУК. Оптимальная питательная среда для укоренения: ½МС,
содержащая 3,0 мг/л ИМК. Длительное сохранение in vitro не только способствует
депонированию редких видов растений, но и является основой для изучения
процессов морфогенеза и регенерации в культуре ткани и исследованию процессов
адаптации микроклонов к условиям ex vitro.

Ключевые слова: Aristolochia manshuriensis, редкие виды, клональное


микроразмножение.

71
The increase of the effectiveness of small-fruit crop clonal
micropropagation by biophotonics

Svetlana Muratova, Roman Papikhin, Igor Melekhov, Nataliya Subbotina


Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Michurinsk State
Agrarian University", Internationalnaya str. 101, Michurinsk, Tambov region, 393760,
Russian Federation; E-mail: smuratova@yandex.ru

A series of experiments has been conducted to improve the effectiveness of clonal


micropropagation by biophotonics. The effect of helium neon laser (λ=632.8 nm) and red
semiconductor laser (λ=655 nm) on viability of plant tissues, intensity of proliferation and
rhizogenesis of microshoots, as well as the growth of small-fruit sprouts in vitro has been
studied. For the sample of the Schizandra chinensis (Turcz.) Baill, it has been shown that
ray treatment of microshoots by helium neon laser at the stage of propagation, the
irradiation time 120 s, has increased the number of microshoots with the propagation
coefficient more than 0.1 from 44.4 in control to 75.5%, the number of microshoots being
longer than 1.5 from 36.7% to 64.3%. The frequency of rooting of Schizandra chinensis
microcuttings at optimal expositions was 48.0 and 60.0 %, that is 1.8-2.2 times higher than
the control (26.9 %). The average length of the roots at the exposition time 60s has
increased by 2.7 versus the unirradiated control. When the rhizogenesis process
accelerated when the irradiation parameters were optimal and the quality of the root
system of all the studied forms considerably improved including the good rooting capacity
in vitro of such plants as blackberry and actinidia. The intensifying effect takes place when
either helium neon laser or semiconductor laser is used but the exposition time is different.
The degree of the effect nonlinearly depends on the exposition time, to optimize the laser
treatment mode it is necessary to use different irradiation time: 4-6 expositions. The light
spectrum had a big influence on the effectiveness of clonal micropropagation of small-fruit
crops. Thus, the use of light-emitting diode lamp with the regulated light spectrum enabled
the acceleration of roots growth, increase in rooting frequency, and the number of roots
per rooted microcuttings and their growth acceleration in comparison with the control
with the luminescent white lamps. Thus, in two weeks of cultivation the rooting frequency
of Aronia mitschurinii in the control with luminescent lamps was 23.5%, while in the
experiment sample with the set radiant power of the irradiator “red” 25%, “white” 50%,
“blue” 25 % with the total value of the laser phased array 13.2 Wt/m 2 with the light level
2900 lux the rooting frequency was 75.1 %. The average number of roots per rooted
microcutting was 6.27 pieces in comparison to 2.81 pieces in the control.

Keywords: small-fruit crops, clonal micropropagation, laser irradiation, light emitted


diode, rhizogenesis process, microcuttings.

72 72
Повышение эффективности клонального микроразмножения
ягодных культур средствами биофотоники

С.А. Муратова, Р.В. Папихин, И.Д. Мелихов, Н.С. Субботина


Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
образования «Мичуринский государственный аграрный университет»,
ул. Интернациональная 101, г. Мичуринск, Тамбовская обл., 393760, Российская
Федерация; e-mail: smuratova@yandex.ru

Проведена серия экспериментов с целью повышения эффективности клонального


микроразмножения ягодных культур средствами биофотоники. Изучено влияние
гелий-неонового (λ=632,8 нм) и красного полупроводникового лазера (λ=655 нм)
на жизнеспособность растительных тканей, интенсивность пролиферации и
ризогенез микрочеренков, а также рост побегов ягодных культур in vitro. На примере
лимонника китайского показано, что облучение микропобегов гелий-неоновым
лазером на этапе размножения при экспозиции облучения 120 с повысило долю
микропобегов с коэффициентом размножения больше единицы с 44,4 в контроле
до 75,5%, долю побегов больше 1,5 см с 36,7% до 64,3%. Частота укоренения
микрочеренков лимонника при оптимальных экспозициях составила 48,0 и 60,0%,
что в 1,8-2,2 раза превышает контроль (26,9%.). Средняя длина корней при
экспозиции 60 с возросла в 2,7 раза по отношению к необлученному контролю. При
оптимальных параметрах облучения ускорялся процесс ризогенеза, и значительно
улучшалось качество корневой системы у всех изучаемых форм, в том числе и с
хорошей способностью к укоренению in vitro, таких как ежевика и актинидия.
Стимулирующий эффект имеет место как при использовании гелий-неонового, так и
полупроводникового лазера, но при разных экспозициях. Степень достигнутого
эффекта нелинейно зависит от продолжительности воздействия, для оптимизации
режимов лазерной обработки необходимо использовать различные длительности
облучения: 4-6 экспозиций. Большое влияние на эффективность клонального
микроразмножения ягодных культур оказывал спектральный состав света. Так,
использование светодиодных облучателей с регулируемым спектром света
позволило ускорить процесс образования корней, повысить частоту укоренения,
увеличить число корней на укорененный микрочеренок и ускорить их рост по
сравнению с контролем с люминесцентными белыми лампами. Так, через две
недели культивирования частота укоренения аронии Мичурина в контроле с
люминесцентными лампами составила 23,5%, тогда как в варианте опыта при
установленной мощности излучателей «красный» 25%, «белый» 50%, «синий» 25%
при суммарном значение ФАР 13,2 Вт/м2 и освещенности 2900 лк частота
укоренения составила 75,1%. Среднее число корней на укорененный микрочеренок
в итоге составило 6,27 шт. по сравнению с 2,81 шт. в контроле.
Таким образом, изучение способов и механизмов регуляции морфогенеза
средствами фотоники позволяет оптимизировать режимы культивирования
растений в условиях in vitro и повысить эффективность размножения садовых
культур.

Ключевые слова: ягодные культуры, клональное микроразмножение, лазерное


облучение, светодиоды, процесс ризогенеза, микрочеренки.

73
Some biochemical features of Olea europaea L. frost resistance

Anfisa Paliy, Tatyana Gubanova, Ivan Paliy


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: runastep@mail.ru

The effect of freezing temperatures on the biochemical parameters of leaves in Olea


europaea L. cultivars in the collection of the Nikita Botanical Gardens was studied. The
objects of the research were: frost-resistant cultivar 'Nikitskaya', slightly frost-resistant
cultivars - 'Askolyano', 'Razzo', 'Correggiolo' and subspecies – O. europaea subsp. cuspidata.
In the studies of biochemical parameters under controlled conditions, the method of
artificial freezing was used. In the olive leaves collected in field, peroxidase activity was
1.13-1.58 a.u. g-1 s-1. The maximum activity of this enzyme was noted in the frost-resistant
cultivar 'Nikitskaya'. After the exposure of freezing temperatures, peroxidase activity
increased in most the studied samples, except the cultivar 'Nikitskaya' (the activity was
unchanged). The activity of polyphenol oxidase after freezing increased in all the studied
cultivars. The greatest increase in enzyme activity was observed in O. europaea subsp.
cuspidate and 'Correggiolo' cultivar. Catalase activity, in the experiment treatments,
changed diversely. In the cultivars 'Askolyano' and 'Correggiolo', catalase activity
decreased, in the cultivars 'Nikitskaya', 'Razzo' and subspecies O. europaea subsp. cuspidate
it increased. The decrease in catalase activity in the cultivars 'Askolyano' and 'Correggiolo'
was, probably, associated with a significant increase in peroxidase activity and was due to
the competition of these enzymes over the substrate. In the olive cultivars leaves collected
in field, the total content of phenolic compounds was 955-1160 mg/100 g, flavonoids 234-
523 mg/100 g, proline 14-24 μg g-1. The effect of low-temperature stress did not cause
significant changes in the content of phenolic compounds and flavonoids, but it resulted in
a significant increase in proline concentration. Thus, a precise correlation between the
frost resistance of the studied O. europaea cultivars with the changes in redox enzymes
activity and proline content was revealed. The presented data suggested the participation
of the above mentioned biochemical indicators in the process of European olive adaptation
to the effect of freezing temperatures.

Keywords: oliva, enzyme activity, phenolic compounds, flavonoids, proline, low


temperature stress.

74 74
Биохимические аспекты морозостойкости Olea europaea L.

А.Е. Палий, Т.Б. Губанова, И.Н. Палий


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: runastep@mail.ru

Изучено влияние отрицательных температур на биохимические параметры листьев


Olea europaea L. из коллекции Никитского ботанического сада. Объектами
исследования служили: морозостойкий сорт ‘Никитская’, слабоморозостойкие –
‘Асколяно’, ‘Рaццо’, ‘Кореджиоло’ и подвид O. europaea subsp. cuspidata. При
исследовании биохимических показателей в контролируемых условиях
использовали метод искусственного промораживания. В листьях сортов маслины,
отобранных в полевых условиях активность пероксидазы колебалась в пределах
1,13-1,58 усл. ед/г·с. Максимальной активностью данного фермента отличался
морозостойкий сорт Никитская. После воздействия отрицательных температур
происходило увеличение пероксидазной активности у всех образцов, за
исключением сорта Никитская (активность оставалась неизменной). Активность
полифенолоксидазы после промораживания возрастала у всех исследованных
сортов. Наибольшее увеличение активности фермента наблюдалось у подвида O.
europaea subsp. cuspidata и сорта Кореджиоло. Изменение активности каталазы в
опытных вариантах происходило разнонаправленно. У сортов Асколяно и
Кореджиоло каталазная активность снижалась, у сортов Никитская, Раццо и подвида
O. europaea subsp. cuspidata наоборот, возрастала. Снижение активности каталазы у
сортов Асколяно и Кореджиоло, по-видимому, связано со значительным
увеличением пероксидазной активности и обусловлено конкуренцией этих
ферментов за субстрат. В листьях сортов маслины, отобранных в полевых условиях,
содержание суммы фенольных соединений составляло 955-1160 мг/100 г,
флавоноидов – 234-523 мг/100 г, пролина – 14,5-24,3 мкг/г. Воздействие
низкотемпературного стресса не вызывало существенных изменений в содержании
суммы фенольных соединений, флавоноидов и приводило к значительному
увеличению концентрации пролина. Таким образом, выявлена четкая связь
морозостойкости изученных сортов O. europaea с изменением активности
окислительно-восстановительных ферментов и содержанием пролина. Полученные
данные позволяют предположить участие вышеперечисленных биохимических
показателей в процессе формирования адаптации маслины европейской к
воздействию отрицательных температур.

Ключевые слова: Olea europaea, активность ферментов, фенольные соединения,


флавоноиды, пролин, низкотемпературный стресс.

75
The dynamics of the optimums of net-photosynthesis changes and
transpiration of Prunus laurocerasus L. and Viburnum tinus L. during a
vegetative period in the conditions of the Southern Coast of the Crimea

Andrey Pashtetskiy, Oleg Ilnitsky


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: pashteckiy@gmail.com

The dependence of a visible photosynthesis intensity of Prunus laurocerasus L. and


Viburnum tinus L. on the environmental factors (an air temperature, humidity and light
intensity), leaf temperature, transpiration and their variation during vegetation in the
Southern Coast of the Crimea has been studied. Species differ in their relation to moisture
and light intensity: Prunus laurocerasus is a mesophyte, a hygrophilous plant, shade-
tolerant one; Viburnum tinus is a xerophyte, a mesophyte; a photophilous plant. The
intensity of net-photosynthesis, transpiration and the environmental parameters and the
plants have been determined by Monitor of photosynthesis RTM-48A (Rebublic of
Moldova). The analysis of the measurement results has shown that for Prunus laurocerasus,
the optimal value of a visible photosynthesis for June-October had gone down by 22.3%,
the intensity of transpiration – by 41.18%, the air temperature – by 17.86%, the air
humidity deficit – by 53.4%, the leaf temperature – by 12.13%, PHA light intensity – by
33.34%. For Viburnum tinus, a visible photosynthesis had gone down by 12%, the
transpiration intensity – by 63.64%, the air temperature – by 15.7%, the humidity deficit –
by 42.86%, the leaf temperature – by 15.7 %, the light intensity of phased arrays – by
34.38%.
The studies explain the causes of these changes: a genetically determined attitude to
moisture and environmental factors, changes in plant vegetation phases (cessation of an
active growth), weather conditions and aging of leaves, which lead to the change in the
temperature-light optima of the studied processes.

Keywords: Prunus laurocerasus L., Viburnum tinus L, intensity of a visible photosynthesis,


temperature-light optimums, ecological-physiological characteristics.

76 76
Динамика изменения оптимумов нетто-фотосинтеза, транспирации
Prunus laurocerasus L. и Viburnum tinus L. в течение вегетации в
условиях Южного берега Крыма

А.В. Паштецкий, О.А. Ильницкий


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: pashteckiy@gmail.com

Изучена зависимость интенсивности видимого фотосинтеза Prunus laurocerasus L. и


Viburnum tinus L. от факторов внешней среды (температуры и влажности воздуха,
освещенности), температуры листьев, транспирации и их изменение в ходе
вегетации в условиях Южного берега Крыма. Виды различаются отношением к влаге
и освещенности: Prunus laurocerasus L. мезофит, влаголюбивое растение,
теневыносливое; Viburnum tinus L. – ксерофит, мезофит; светолюбивое растение.
Интенсивность нетто-фотосинтеза, транспирацию и параметры окружающей среды
и растения определяли «Монитором фотосинтеза РТМ-48А». Анализ результатов
измерений показал, что для Prunus laurocerasus L. оптимальное значение видимого
фотосинтеза за июнь – октябрь уменьшилось на 22,3%, интенсивность
транспирации – на 41,18%, температура воздуха – на 17,86%, дефицит влажности
воздуха – на 53,4%, температура листа – на 12,13% , освещенность ФАР – на 33,34%.
Для Viburnum tinus L. видимый фотосинтез за это время уменьшился на 12%,
интенсивность транспирации – на 63,64%, температура воздуха – на 15,7%, дефицит
влажности воздуха – на 42,86%, температура листа – на 15,7% , освещенность ФАР –
на 34,38%.
Проведенные исследования объясняют причины этих изменений: генетически
детерминированное отношение к влаге и факторам внешней среды, изменение фаз
вегетации растения (прекращение активного роста), погодных условий, а также
старения листьев, которые приводят к изменению температурно-световых
оптимумов изучаемых процессов.

Ключевые слова: Prunus laurocerasus, Viburnum tinus, интенсивность видимого


фотосинтеза, температурно-световые оптимумы, эколого-физиологическая
характеристика.

77
Strategy for sustentation of phytodiversity in the Crimea

Yurii Plugatar , Vladislav Korzhenevsky


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: herbarium.47@mail.ru

The pace of phytodiversity reducing is impressive and the efforts to reign it in have not
been crowned with success yet. Some dystopian naturalists entertain an idea on waste of
money and irresistibility of attributable to evolution elimination of species, which have lost
their ecological niche. In opposition to them, realists try to take meaningful steps on
conservation for the species, which are threatened with extinction. To form a complete
meaningful program for conservation (strategy for sustentation) that could protect and
even recreate endangered species, it is critical to understand their populations’ condition
in wildlife, as well as to elicit how the populations react on different environmental
conditions and among other things on the climate transformation. It is important to know a
natural history and ecology of the species, as well. The strategic plan includes six
successive operations: 1. Estimation of a factor gradient length for the critical species
according to “Ecodata” database (297 vascular plants’ species are legislate under
guardianship of the law in the Crimea). “Ecodata” database contains the unified-standard
information on the state of plants’ species on the environmental factors’ gradients:
luminance-shadowing, a thermal regime, an ombrogenious regime, a cryogenic regime,
continentality, a moisture variability, a substrate acidity, an anionic structure,
calcareousness, a nitrogen content, a substrate granulometric texture; 2. Description of
critical species communities in wildlife (in situ); 3. Estimation species packaging density on
the environmental factors’ gradients with the use of an original program «Pover», which
allows to estimate wildlife habitual areas’ capacity and spot an optimum point position.
The species packing factor on short gradients is in evidence higher than that on the long
ones. A vector dimension is a length of a realized gradient (an amount of occupied with
gradations) of the studied factors-conditions and factors-sources shows an existential
source in the ecotope; 4. Elimination of a biological material for domestication (ex situ);
5. Propagation in the cultivar with subsequent adaptation to environmental conditions;
6. Repatriation to preselected ecotopes with a convenient ecological niche.

This study was funded by a research grant № 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: strategy of sustentation, ecological niche, environmental gradients, cultivation.

78 78
Стратегия поддержания фиторазнообразия в Крыму

Ю.В. Плугатарь, В.В. Корженевский


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: herbarium.47@mail.ru

Темпы сокращения фиторазнообразия внушительны, а попытки их притормозить,


пока не увенчались особым успехом. Пессимистически настроенные натуралисты
придерживаются мысли о пустой трате финансов и невозможности противостоять
эволюционно обусловленной элиминации видов, утративших свою экологическую
нишу. В противовес им реалисты пытаются принимать конкретные меры по
сохранению видов, находящихся под угрозой исчезновения. Для формирования
полноценной программы сохранения (стратегии сохранения), способной защитить и
даже восстановить находящиеся в опасности виды, жизненно необходимо понять
состояние их популяций в дикой природе, выявить, как реагируют эти популяции на
различные условия среды обитания, в том числе и трансформацию климата, знать
естественную историю и экологию этих видов. Стратегический план включает
шесть последовательных операций: 1. Оценка длины градиентов факторов для
критических видов по базе данных «Экодата» (в Крыму 297 видов сосудистых
растений законодательно взяты под охрану). База данных «Экодата», содержит
унифицированную информацию о положении видов растений на градиентах
следующих факторов среды: освещённость-затенение, терморежим, омброрежим,
криорежим, континентальность, увлажнение, переменность увлажнения,
кислотность субстрата, анионный состав, содержание карбонатов, содержание азота,
гранулометрический состав субстрата; 2. Описание сообществ критических видов в
природных условиях (in situ); 3. Оценка плотности упаковки видов на градиентах
факторов среды с помощью оригинальной программы «Pover», позволяющей
оценивать ёмкость местообитаний и устанавливать положение точку оптимума.
Степень упаковки видов на коротких градиентах заметно выше, чем на длинных.
Размер вектора - длина реализованного градиента (количество занятых градаций)
изученных факторов-условий и факторов-ресурсов указывает наличный ресурс в
экотопе; 4. Отбор биологического материала для введения в культуру (ex situ);
5. Размножение в культуре с последующей адаптацией к природным условиям;
6. Репатриация в заранее выбранные экотопы с подходящей экологический нишей.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант


№ 14-50-00079.

Ключевые слова: стратегия сохранения, экологическая ниша, градиенты среды,


культивирование.

79
Reproductive peculiarities of some hybrid tea-roses in the collection of
the Nikita Botanical Gardens

Svetlana Plugatar, Zinaida Klimenko, Vera Zykova, Danil Kuzmenko


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: gardenroses@mail.ru

There are about 250 cultivars of the most popular in horticulture garden group of hybrid
tea-roses in the collection of the Nikita Botanical Gardens (NBG). The study of the
reproductive peculiarities of hybrid tea-roses allows supplementing their introductive
estimation in the conditions of the Southern Coast of the Crimea because the ability to form
full-blown fruits and seeds is one of the introduction success criteria. What is more the
knowledge on the ability of cultivars to form fruits and seeds as well as their pollen quality
is needed to involve the cultivars into hybridization as father- or mother seed parent forms.
The comparative study of the pollen quality of 100 highly decorative hybrid tea-roses by
the method of pollen grains staining with acetocarmine has been done. The pollen has been
gathered during the first blossoming phenological phase. It has been elucidated that the
studied cultivars are essentially different in the quantity of normally formed (being
stained) pollen, which is from 5 to 81.9%. As the results, the collection cultivars have been
enrolled by the quantity of morphologically full-blown painted pollen into five groups: up
to 20% (16 cultivars), from 20.1 to 40% (22 cultivars), from 40.1 to 60% (43 cultivars),
from 60.1 to 80% (15 cultivars), and more than 80.1 % (two cultivars). 60 cultivars, which
belong to three last-named groups, are recommended to use as father seed parent forms
while hybridization. Having studied fructification of hybrid tea-roses cultivars, it has been
determined that 32 cultivars do not set fruits, 24 cultivars set singular fruits and only 44
set fruits massively and are recommended to use as mother seed parent forms while
hybridization.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: pollen, fructification, hybridization, father seed parent form, mother seed
parent form

80 80
Репродуктивные особенности некоторых сортов чайно-гибридных
роз коллекции Никитского ботанического сада

С.А. Плугатарь, З.К. Клименко, В.К. Зыкова, Д.К. Кузменко


Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Ордена Трудового
Красного Знамени Никитский ботаничческий сад – Национальный научный центр
РАН", пгт Никита, г. Ялта, 298648, Российская Федерация; e-mail: gardenroses@mail.ru

В коллекции садовых роз Никитского ботанического сада (НБС) представлено около


250 сортов, относящихся к одной из наиболее популярных в цветоводстве садовой
группе чайно-гибридных роз. Изучение репродуктивных особенностей сортов
чайно-гибридных роз позволяет дополнить их интродукционную оценку в условиях
Южного берега Крыма, т.к. способность к формированию полноценных плодов и
семян является одним из критериев успешности интродукции. Кроме того, знания о
способности сортов к формированию плодов и семян, а также о качестве их пыльцы
необходимы для вовлечения сортов в гибридизацию в качестве отцовских, либо
материнских родительских форм. Был проведен сравнительный анализ качества
пыльцы 100 высоко декоративных сортов чайно-гибридных роз методом
окрашивания пыльцевых зёрен ацетокармином. Пыльцу собирали в
фенологическую фазу первого цветения. Установлено, что изученные сорта
существенно различаются по количеству нормально сформированной
(окрашивающейся) пыльцы, которое составило от 5 до 81,9%. В результате
проведенного исследования сорта коллекции распределены по количеству
морфологически полноценной, окрашенной пыльцы на 5 групп: до 20% (16 сортов),
от 20,1 до 40% (22 сорта), от 40,1 до 60% (43 сорта), от 60,1 до 80% (15 сортов) и
более 80,1% (2 сорта). 60 сортов, относящихся к последним трем группам,
рекомендуются для использования в качестве отцовских родительских форм при
гибридизации. При изучении плодоношения сортов чайно-гибридных роз было
выявлено, что 32 сорта не завязывают плодов, 24 сорта завязывают единичные
плоды и только 44 сорта завязывают плоды массово и рекомендуются для
использования при гибридизации в качестве материнских родительских форм.

Исследования выполнены при поддержке гранта Российского Научного Фонда (№ 14-


50-00079).

Ключевые слова: пыльца, плодоношение, гибридизация, отцовская родительская


форма, материнская родительская форма.

81
Essential oil characteristics and expression analysis of scent-related
genes in four landraces of Damask rose

Omid Rasouli1, Nima Ahmadi1, Sajad Rashidi Monfared2, Fatemeh Sefidkon3


1Department of Horticultural Sciences, Tarbiat Modares University , P. O. Box 14115-336,

Tehran, Iran; E-mail: ahmadin@modares.ac.ir


2Department of Agricultural Biotechnology, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
3Research Institute of Forests and Rangeland, Tehran, Iran

The main volatile compounds emitted from flower of Rosa damascena are monoterpenes.
To evaluate the essential oil content, flower physiochemical characteristics and gene
expression, this experiment was conducted on four landraces of Damask rose. The cDNA of
GGPPS gene was isolated from this plant applying nested-PCR method. This gene with
accession No. KX661005, encodes for a putative protein of 365 amino acid. Quantitative
real-time PCR analysis of GGPPS, DXR and CCD1 was done on mRNA samples extracted
from 3 floral developmental stages (A, B and C) of four landraces of damask roses including
‘Ghalhar’, ‘Lavasanat’, ‘Kamoo’ and ‘Minab’. Results indicated difference in expression levels
of genes and floeral stages, as the lowest level expression was revealed for GGPPS gene,
compared with those of genes CCD1 and DXR. In addition to molecular study, physiological
and phytochemical parameters were characterized focusing on relationship between main
volatile compounds and colors. Varying petal color from light pink to deep pink, the light
color flowers showed higher carotenoids and lower anthocyanin contents. During flower
development from A to C stages, main monoterpenes compounds likes citronellol, geraniol
and neral were increased till stage B, then reduced at stage C. However, these results
suggested that GGPPS as a key gene could be involved in monoterpenes biosynthesis and
could be important to enhance main volatile production.

Keywords: anthocyanin, carotenoid, developmental stages, gene isolation.

82 82
In vitro shoot multiplication of an ornamental aquatic plant, Lobelia
cardinalis L.

Suphat Rittirat1, Kanchit Thammasiri2, Sutha Klaocheed3


1Faculty of Science and Technology, Nakhon Si Thammarat Rajabhat University, 1 Moo 4,

Mueang District, Nakhon Si Thammarat 80280, Thailand; E-mail: suphat.nstru@gmail.com


2Department of Plant Science, Faculty of Science, Mahidol University, Rama VI Road,

Phayathai, Bangkok 10400, Thailand


3Department of Technology and Industries, Faculty of Science and Technology, Prince of

Songkla University, 181 Moo 6, Mueang District 94000, Thailand

The shoots of an ornamental Aquatic Plant, Lobelia cardinalis L. from ex vitro were surface
sterilized using 4% Clorox® (5.25% sodium hypochlorite, NaOCl) for 10 min followed by
rinsing three times with sterile distilled water. They were again surface sterilized for
another 2% Clorox® for 5 min. All shoot tip explants were cultured on MS (Murashige and
Skoog, 1962) medium for multiple shoot regeneration. The media were further augmented
with various concentrations of growth regulators namely N6-benzylaminopurine (BAP; 0.0,
1.0, 2.0 or 3.0 mg L-1) and α-naphthaleneacetic acid (NAA; 0.0, 1.0, 2.0 or 3.0 mg L-1).
Presence of BAP in the medium significantly increased shoot numbers. MS medium
supplemented with 1.0 mg L-1 BAP was significantly different compared to other
treatments, with the highest number of 5.8±0.74 shoots per explant and shoot formation at
100% after 60 days of culture. The result revealed that MS medium supplemented without
plant growth regulators was significantly different compared to other treatments, with the
highest number of roots per shoot 11.4±2.00 roots per explant and root length at
22.37±1.67 mm. Rooted plantlets were subsequently hardened, acclimatized and
successfully established in field with 95% survival rate. Acclimatized plantlets of Lobelia
cardinalis L. were vigorously growing without any symptoms of diseases even after 30 day
of acclimatization.

Keywords: micropropagation, shoot multiplication, Lobelia cardinalis, aquatic plant.

83
Macro and trace element accumulation by species of genus Artemisia at
the Southern Coast of Crimea

Oksana Shevchuk1 , Nadezhda Golubkina2, Lidia Logvinenko1, Anna Molchanova2,


Yurii Plugatar1
1Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: oksana_shevchuk1970@mail.ru;
2Federal Scientific Center of Vegetable production, VNIISSOK, Selectsionnaya Str., 14,

Odintsovo district, Moscow region, 143072, Russian Federation

Element composition of herbs is an important quality parameter indicating the degree of


herbs safety and the impact of mineral content on its biological activity. The genus
Artemisia L. (wormwood) includes more than 400 species widely used in traditional
medicine, nutrition and as a medicinal raw material in the pharmaceutical industry. The
main attention of researchers is attracted by the amount and chemical composition of
Artemisia essential oil, as well as antioxidant activity indicators. Using inductively coupled
plasma-mass spectrometry (ICP-MS) accumulation of 26 elements by seven Artemisia
species: A. abrotanum L., A. annua L., A. dranculucus L., A. feddei Levl. &. Vant., A. santonica
L., A. taurica Wild. and A. scoparia W.D., grown in ecologically clean area (Nikita Botanic
Gardens, Southern Coast of Crimea) was investigated for the first time. A. dranculucus and
A. abrotanum demonstrated the highest content of minerals, while the lowest levels were
typical for A. taurica. Among the species studied, a new natural Se accumulator was
identified: A. dracunculus cultivar ‘Izumrud’, containing up to 23 mg Se/kg d.w. with
coefficient of biological accumulation value reaching 88. A. scoparia was shown to
accumulate elevated levels of heavy metals (Al, As, Cr, Pb and V). A. annua plants were
characterized by maximum levels of Cu, Mn, I and Zn. Great variations in Na content
allowed to indicate A. santonica as a species with the highest Na concentration (1,525
mg/kg d.w.), and A. feddei – with the lowest one (46.6 mg/kg d.w.). The results may be
important in view the human Se status optimization via A. dracunculus (cultivar ‘Izumrud’)
utilization, quality evaluation of edible Artemisia species and in investigations of
physiological peculiarities of plant tolerance to soil salinization.

Keywords: Artemisia, element composition, selenium.

84 84
Накопление макро- и микроэлементов видами рода Artemisia в
условиях Южного берега Крыма

О.М. Шевчук1, Н.А. Голубкина2, Л.А. Логвиненко1, А.В. Молчанова2, Ю.В. Плугатарь1
1ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: oksana_shevchuk1970@mail.ru
2ФГБНУ Федеральный научный центр овощеводства, пос. ВНИИССОК,

ул. Селекционная 14, Одинцовский район, Московская обл., 143072, Российская


Федерация

Элементный состав лекарственных растений является важным показателем


качества лекарственного сырья как в отношении безопасности потребления, так и в
вопросе возможного положительного влияния на биологическое действие
препаратов. Род Artemisia L. (полынь) включает более 400 видов, широко
использующихся в традиционной медицине, питании и в качестве лекарственного
сырья в фармацевтической промышленности. Основное внимание исследователей
привлекает количество и химический состав эфирного масла Artemisia, а также
показатели антиоксидантной активности. Используя метод индуктивно связанной
плазма- масс спектрометрии (ИСП-МС) впервые проведена оценка накопления 26
макро- и микроэлементов в надземной массе растений семи видов рода Artemisia,
выращиваемых в экологически чистых условиях (Никитский ботанический сад,
Южный берег Крыма): A. abrotanum L., A. annua L., A. dranculucus L., A. feddei Levl. &.
Vant., A. santonica L., A. taurica Wild., A. scoparia W.K. Установлено, что наиболее
богатый минеральный состав характерен для A. dranculucus и A. аbrotanum.
Наименьшее содержание минералов оказалось характерным для A. taurica. Среди
изученных видов обнаружен новый природный Se-накопитель: сорт A. dracunculus
Изумруд, содержащий до 23 мг Se/кг с.м. с коэффициентом биологического
накопления, достигающим 88. Показано, что A. scoparia накапливает повышенные
уровни тяжелых металлов (Al, As, Cr, Pb, V). У растений A. annua отмечены
максимальные уровни Cu, Mn, I и Zn. Большие вариации содержания Na позволили
указать A. santonica как вид с самой высокой концентрацией Na (1525 мг/кг м.д.), а A.
feddei – с самой низкой (46,6 мг/кг с.м). Результаты могут быть важны для решения
вопроса селенодефицита в организме человека при использовании A. dracunculus
(сорта Изумруд), оценки качества пищевых видов рода Artemisia, а также в
исследованиях физиологических особенностей толерантности растений к
засолению почв.

Ключевые слова: Atremisia, элементный состав, селен.

85
NBS-LRR resistance genes polymorphism in apple (Malus domestica
Borkh.) landraces inferred from NBS-profiling

Anna Shlyavas1, Aya Trifonova2, Liliya Dedova2, Ksenia Boris2, Alexander Kudryavtsev2
1FRC The N. I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic Resources (VIR), Bol’shaya

Morskaya, Str., 42- 44, St. Petersburg, 190000, Russian Federation;


E-mail: ann2668@yandex.ru
2Vavilov Institute of General Genetics of the Russian Academy of Sciences, Gubkina Str., 3,

Moscow, 119333, Russian Federation

At Pushkin and Pavlovsk Laboratories of VIR, a diverse collection of apple landraces is


maintained. Apple landraces are known for their ecological plasticity, increased adaptation
to abiotic stress, disease resistance and may be of interest for breeders as donors of new
resistance genes. One of the effective methods for assessing plant resistance genes
polymorphism is NBS-profiling. NBS-profiling was used to study NBS-LRR resistance genes
polymorphism in 94 apple landraces from the collection of Pushkin and Pavlovsk
Laboratories of VIR. Standard NBS2 and NBS7 primers were chosen for the analysis.
Electrophoresis of the amplified products was performed using 6% polyacrylamide gels,
followed by silver staining. As a result, 488 NBS-fragments were identified (229 for NBS2
and 259 for NBS7), 390 of the detected fragments were polymorphic. Thus, the detected
NBS-LRR resistance genes polymorphism level was rather high at 79.92%. For each of the
studied landraces specific NBS-patterns were revealed, except for two accessions –
‘Antonovka obyknovennaya’ (K74) and ‘Antonovka Monastyrskaya’ (K68), which are likely
duplicates in the collection. Dice genetic similarity coefficient varied from 0.960 between
two ‘Antonovka obyknovennaya’ accessions (К74 and К21190) to 0.621 between ‘Pudovka’
(K10140) and ‘Lesnoe Otti’ (K10112) and averaged 0.777. The most genetically distinct
accessions were ‘Medovoe ot Verevkina’ (K20275), ‘Lesnoe Otti’ (K10112) and ‘Raspisnoe’
(K10126).
Thus, NBS-LRR resistance genes polymorphism in 94 apple landraces from VIR
collection was studied for the first time. For each of the accessions specific NBS-patterns
were detected. Significant NBS-LRR resistance genes variability of the apple landraces was
shown compared to previously studied Russian and foreign modern M. domestica cultivars,
which confirms the potential of apple landraces for breeding, as new sources of disease
resistance.

The work was supported by RFBR project No. 17-29-08020.

Keywords: apple, landraces, genetic resources, resistance genes, NBS-profiling.

86 86
Полиморфизм NBS-LRR генов устойчивости сортов яблони (Malus
domestica Borkh.) народной селекции по данным NBS-профайлинга

А.В. Шлявас1, А.А. Трифонова2, Л.В. Дедова2, К.В. Борис2, А.М. Кудрявцев2
1Всероссийский институт генетических ресурсов растений имени Н.И. Вавилова,

г. Санкт-Петербург, 190000, Россия; e-mail: a.shlyavas@vir.nw.ru


2Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук,

ул. Губкина 3, г. Москва, 119333, Российская Федерация

В Пушкинских и Павловских лабораториях ВИР поддерживается большая коллекция


сортов яблони народной селекции, которые обладают высокой экологической
пластичностью, повышенной адаптивностью к абиотическим стрессам,
устойчивостью к заболеваниям и могут представлять интерес для селекционеров
как доноры новых генов устойчивости. Одним из эффективных методов изучения
полиморфизма генов устойчивости растений является NBS-профайлинг. В данном
исследовании было проведено изучение полиморфизма NBS-LRR генов
устойчивости у 94 сортов яблони народной селекции из коллекции Научно-
производственной базы «Пушкинские и Павловские лаборатории ВИР» с помощью
NBS-профайлинга. Для исследования были использованы стандартные праймеры
NBS2 и NBS7. Анализ проводили методом электрофореза в 6% полиакриламидном
геле с последующим окрашиванием нитратом серебра. В результате получено 488
фрагментов (229 для праймера NBS2 и 259 для праймера NBS7), 390 из которых
оказались полиморфными. Таким образом, уровень полиморфизма NBS-LRR генов
устойчивости исследованных образцов оказался достаточно высоким – 79,92%. Для
каждого из проанализированных образцов выявлено специфичное сочетание NBS-
фрагментов, за исключением двух образцов Антоновки – Антоновка обыкновенная
(к-74) и Антоновка Монастырская (к-68), которые, возможно, являются дублями.
Коэффициент генетического сходства Дайса варьировал от 0,960 (между двумя
образцами Антоновки обыкновенной (к-74 и к-21190)) до 0,621 (между образцами
Пудовка (к-10140) и Лесное Отти (к-10112)) и в среднем составил 0,777. Наиболее
генетически отдаленными являются образцы Медовое от Веревкина (к-20275),
Лесное Отти (к-10112) и Расписное (к-10126).
Таким образом, впервые проанализирован полиморфизм NBS-LRR генов
устойчивости 94 образцов яблони народной селекции из коллекции ВИР. Для
каждого образца был выявлен специфичный набор NBS-фрагментов. Показан
высокий уровень разнообразия NBS-LRR генов устойчивости изученных сортов
яблони народной селекции по сравнению с ранее полученными данными о
вариабельности генов устойчивости современных отечественных и зарубежных
сортов M. domestica. Это еще раз подтверждает высокий потенциал изученных
сортов для селекции и возможность их применения в селекционных программах как
новых источников устойчивости к заболеваниям.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 17-29-08020.

Ключевые слова: яблоня, сорта народной селекции, генетические ресурсы, гены


устойчивости, NBS-профайлинг.

87
The role of introduction in increasing peach (Persica vulgaris Mill.)
genetic diversity at the Nikita Botanical Gardens collection

Anatoliy Smykov, Olga Fedorova, Iuliia Ivashchenko, Vladislav Fedorov


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: selectfruit@yandex.ru

By means of introduction and breeding, the Nikita Botanical Gardens created a gene pool of
peach, consisting of 559 cultivars, which comprises 288 cultivars by NBG (51.5%), 101
cultivars from USA (18.1%), 21 from China (3.8%), 55 (9.8%) from Central Asia and
Transcaucasia, eight from Canada (1.4%), 57 (10.1%) from 14 European countries and 29
(5.2%) cultivars of unknown origin. Ecogeographical groups and ecotypes were classified
in accordance with fruit quality (consistency and coloration of flesh, coating coloration,
weight, stone freeness, ripening time and taste). There was detected the incidence of each
trait in ecogeographycal groups and ecotypes. North Chinese and Iranian ecogeographical
groups comprised mostly cultivars of European (168 and 182, respectively) and American
(32 and 77) ecotypes. The research of 128 mid-season cultivars (40.8%) showed that most
of them belonged to European ecotype of North Chinese (75) and Iranian (74)
ecogeographical groups. 38.5% of cultivars of the peach collection of the NBG present a
good separable stone. 126 of them belonged to Iranian ecogeographical group and 89 to
North Chinese one. The largest fruit cultivars belonged to European ecotype of North
Chinese (31) and Iranian (46) ecogeographical groups. In Iranian ecogeographical group,
the part of cultivars with harmonious taste of fruits accounted for about 60%, in the North
Chinese one – 40%. These cultivars belonged mostly to European and American ecotypes.
Within the framework of breeding programs, 46 cultivars have been developed and
included into commercial range of peaches by the use of 22 initial cultivars. So far, the
Nikita Botanical Gardens obtained the RF patents for 30 cultivars of peach.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: introduction, peach cultivars, gene pool, breeding, patents.

88 88
Значение интродукции в расширении генетического разнообразия
генофонда персика (Persica vulgaris Mill.) коллекции Никитского
ботанического сада

А.В. Смыков, О.С. Федорова, Ю.А. Иващенко, В.В. Федоров


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: selectfruit@yandex.ru

Никитский ботанический сад со времени своего основания в 1812 г. активно


занимался интродукцией плодовых культур. До настоящего времени
интродуцированы сотни сортов из различных природных регионов: Америки,
Европы, Средней Азии, Закавказья. В результате интродукции и селекции в
Никитском ботаническом саду сформирован генофонд персика в количестве 559
сортов, в том числе 288 сортов селекции НБС (51,5%); 101 сорт из США (18,1%), 21
(3,8%) из Китая; 55 сортов (9,8%) – из Средней Азии и Закавказья; 8 сортов (1,4%) –
из Канады; 29 (5,2%) – неизвестного происхождения; 57 сортов (10,1%) – из 14 стран
Европы. Проведено распределение эколого-географических групп и экотипов по
качеству плодов (консистенция, цвет мякоти, покровная окраска, масса плода,
отделяемость косточки, срок созревания, вкус). Показана частота встречаемости
каждого признака у эколого-географических групп и экотипов: В северокитайской и
иранской эколого-географических группах преобладали сорта европейского
(соответственно 168 и 182 сорта) и американского экотипов (32 и 77 сортов).
Изучение 128 сортов средних сроков созревания (40,8%) показало, что большинство
из них встречаются в европейском экотипе северокитайской (75) и иранской
эколого-географических групп. У 38,5% сортов персика коллекции НБС косточка
отделяется хорошо. Из них 126 сортов принадлежало к иранской эколого-
географической группе и 89 – к северокитайской. Наибольшее количество
крупноплодных сортов встречалось в европейском экотипе северокитайской (31) и
иранской (46) эколого-географических групп. Сорта персика с гармоничным вкусом
плодов у иранской экогруппы составляли около 60% сортов, а у северокитайской –
40%. В основном, к ним относились сорта европейского и американского экотипа. В
результате использования 22-х сортов в селекционных программах, было выведено
46 сортов, включенных в разные годы в промышленный сортимент персика. В
настоящее время Никитским ботаническим садом получены патенты РФ на 30
сортов персика.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант


№ 14-50-00079.

Ключевые слова: интродукция, сорта персика, генофонд, селекция, патенты.

89
Influence of ecological and geographical conditions on the biochemical
potential of the genotype of golden currant

Vladimir Sorokopudov1, Julia Burmenko1, Olga Sorokopudova1, Inna Knyazeva1,


Tatiana Baranova2
1Federal State Budgetary Scientific Institution All-Russian Horticultural Institute for

Breeding, Agrotechnology and Nursery, Zagor'evskaya Str., 4, Moscow, 115598, Russian


Federation;
E-mail: sorokopud2301@mail.ru
2Voronezh State University, Federal State Autonomous Educational Institution,

Universitetskaya square 1, Voronezh, 394018, Russian Federation

Golden currant is a valuable food culture, which has a wide ecological plasticity, which
allows to cultivate it in the conditions where other types of currants feel oppressed. Golden
currant berries contain sugar (6.3-17.0 %), dry matter (17-25%), vitamin C (23.2-125
mg/100 g), pectin (0.6-2.9%), organic acids (up to 2.1%), anthocyanins (200-470 mg/100
g). According to the content of carotene in berries (8-19 mg/100 g in terms of β-carotene),
golden currant takes the first place in the genus currants, the maximum content of these
biologically active substances is typical for the most dark-colored forms.
It was made a long-term (2010-2016) comparison of three golden current cultivars:
‘Venus’, ‘Lyaysan’ and ‘Shafak’ in the Belgorod region (a temperate continental climate) and
the Republic of Bashkortostan (a continental climate) in Russia. The change in temperature
and water conditions lead to changes not only in the content of fruit’s biological substances,
but also in size. With an increase in humidity by 16% and decrease in temperature by 13°C
(Bashkortostan), the content of dry soluble substances increased from 1.3% (‘Lyaysan’) to
11.9% (‘Venus’) and vitamin C increased in the cultivars ‘Venus’ (4.5 mg/100 g) and
‘Shafak’ (11.8 mg/100 g). For the cultivar ‘Lyaysan’, the content of vitamin C decreased by
9.1 mg/100 g, also average sugar content among the cultivars decreased by 2%. The
influence of ecological and geographical conditions on the content of anthocyanins and
carotenoids in the studied fruits is not significant.

Keywords: golden current, genotype, ecological and geographical conditions, biochemical


composition of fruits.

90 90
Влияние эколого-географических условий на биохимический
потенциал генотипа смородины золотистой

В.Н. Сорокопудов1, Ю.В. Бурменко1, О.А. Сорокопудова1, И.В. Князьева1, T.В.


Баранова2
1Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский

селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства",


ул. Загорьевская, 4, г. Москва, 115598, Российская Федерация;
e-mail: sorokopud2301@mail.ru
2ФГБОУ ВО «Воронежский государственный университет», Университетская пл., 1,

г. Воронеж, 394018, Российская Федерация

Смородина золотистая ценная пищевая культура, обладающая широкой


экологической пластичностью, что позволяет ее возделывать в условиях, где иные
виды смородины чувствуют себя угнетенно. В ягодах смородины золотистой
содержатся сахара (6,3-17,0%), сухие вещества (17-25%), витамин С (23,2-125 мг /
100 г), пектин (0,6-2,9%), органические кислоты (до 2,1%), антоцианы (200-470 мг /
100 г). По содержанию в ягодах каротина (8-19 мг / 100 г в пересчете на β-каротин)
смородина золотистая стоит на первом месте в роде смородин, максимальное
содержание этих биологически активных веществ характерно для наиболее
темноокрашенных форм.
Проведено многолетнее (2010-2016 гг.) сравнение трех сортов смородины
золотистой Венера, Ляйсан и Шафак в условиях Белгородской области (умеренно-
континентальный климат) и республике Башкортостан (континентальный климат)
в России. Выявлено, что изменение температурного и водного режима приводят к
изменению не только содержанию биологических веществ в плодах, но и их размера.
При увеличении влажности на 16% и снижении температуры на 13°С
(Башкортостан) происходит повышение содержания сухих растворимых веществ от
1,3% (‘Ляйсан’) до 11,9% (‘Венера’) и витамина С в сортах Венера (4,5 мг / 100 г) и
Шафак (11,8 мг / 100 г), для сорта Ляйсан снижению на 9,1 мг / 100 г, снижению
содержания сахаров в среднем по сортам на 2%. Влияние эколого-географических
условий на содержание антоцианов и каротиноидов у исследуемых плодов не
значительно.

Ключевые слова: смородина золотистая, генотип, эколого-географические условия,


биохимический состав плодов.

91
SSR-fingerprinting and genetic relationship study of modern peach
cultivars from the germplasm collection of the Nikita Botanical Gardens

Ivan Suprun1, Anatoliy Smykov2, Iliya Stepanov1, Sergey Tokmakov1, Olga Fedorova2, Iuliia
Ivashchenko2
1Federal State Budget Scientific Institution “North Caucasian Federal Scientific Center of

Horticulture, Viticulture, Wine-Making”, 40-Letiya Pobedy Str., 39, Krasnodar, 350901,


Russian Federation; E-mail: supruni@mail.ru
2Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation

A sub collection of 40 peach (Prunus persica (L.) Batsch) cultivars from the collection of
genetic resources of the Nikita Botanical Gardens was evaluated by microsatellite DNA-
markers for estimation of genetic diversity and relationship within studied group of
cultivars. Totally 12 SSR markers were used for genotyping. Markers showed different level
of polymorphism: from three (for markers UDP98-410 and BPPCT028) to nine
(BPPCT017) alleles per locus with mean value 5.417 alleles per locus while number of
effective alleles varied from 3.970 to 1.261 with mean value 2.512. Expected and observed
heterozygosity varied within the ranges 0.207–0.748 and 0.075–0.875, respectively.
According to the level of polymorphism, several markers are recommended as perspective
for using in the further studies of genetic diversity. For all the studied cultivars unique SSR-
fingerprints were obtained. According to results of UPGMA–analysis, three main groups of
cultivars may be determined. By the way, few cultivars were separated into out groups.
These are: Chinese cultivar ‘Dzyu-yus-tszyuy’, which was determined as the most
genetically distanced from all of the cultivars and additionally two cultivars – ‘Dostoyniy’
(breeding of the Nikita Botanical Gardens) and ‘Andrey Lupan’ (Moldavian breeding) which
have specific fruit traits – highly crispy and low melting flesh. Distribution in the main
three clusters in some cases is corresponding with genealogy of cultivars. The obtained
data has showed genetic relationship among studied peach cultivars, that represent the
modern assortment from the collection of the Nikita Botanical Gardens.

Keywords: Prunus persica (L.) Batsch, genetic diversity, SSR-markers, DNA-fingerprints.

92 92
SSR-фингерпринтинг и изучение генетических взаимосвязей
современных сортов персика из коллекции генофонда Никитского
ботанического сада

И.И. Супрун1, А.В. Смыков2, И.В. Степанов1, С.В. Токмаков1, О.С. Федорова2,
Ю.А. Иващенко2
1Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Северо-Кавказский

федеральный научный центр садоводства, виноградарства, виноделия», ул. 40-летия


Победы, д. 39, г. Краснодар, 350901, Российская Федерация; e-mail: supruni@mail.ru
2Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Ордена Трудового

Красного Знамени Никитский ботанический сад – Национальный научный центр


РАН", пгт. Никита, г. Ялта, 298648, Российская Федерация

Субколлекция, включающая 40 сортов персика (Prunus persica (L.) Batsch) из


коллекции генетических ресурсов Никитского ботанического сада была оценена
микросателлитными ДНК-маркерами для анализа генетического разнообразия и
взаимосвязей в изученной группе сортов. Всего для генотипирования
использовалось 12 SSR-маркеров. Маркеры показали различный уровень
полиморфизма: от 3 (для маркеров UDP98-410 и BPPCT028) до 9 (BPPCT017) аллелей
на локус со средним значением 5,417 аллелей на локус, тогда как число
эффективных аллелей варьировало от 3,970 до 1,261 при среднем значении 2,512.
Ожидаемая и наблюдаемая гетерозиготность варьировала в пределах 0,207-0,748 и
0,075-0,875 соответственно. Согласно уровню полиморфизма рекомендуется
несколько маркеров в качестве наиболее перспективных для использования в
дальнейших исследованиях генетического разнообразия целевой культуры. Для
всех изученных сортов были получены уникальные SSR-фингерпринты. По
результатам UPGMA-анализа сорта распределились на три основные группы сортов
и несколько сортов были выделены в аутгрупы. Это: китайский сорт Дзю-юс-цзюй,
который был определен как наиболее генетически удаленный от всех сортов и
дополнительно два сорта – Достойный (селекции Никитского ботанического сада) и
Андрей Лупан (молдавская селекция), которые имеют особые характеристики
плодов – плотная хрустящая мякоть. Распределение в основных трех кластерах в
некоторых случаях соответствует генеалогии сортов. Полученные данные показали
генетические взаимосвязи среди изученных сортов персика, представляющих
современный сортимент из коллекции генофонда Никитского ботанического сада.

Ключевые слова: Prunus persica (L.) Batsch, генетическое разнообразие, SSR-


маркеры, ДНК-фингерпринты.

93
Micropropagation of Larix sibirica L. by somatic embryogenesis in
culture in vitro

Iraida Tretyakova1, M. Park1, G. Akhiyarova2, G. Kudoyarova2


1Laboratory of Forest Genetics and Selection, Sukachev Institute of Forest of the Siberian

Branch of the RAS - Division of Federal Research Center «Krasnoyarsk Scientific Center of
the Siberian Branch of the RAS», 50/28Akademgorodok, Krasnoyarsk, 660036, Russian
Federation
2 Laboratory of Plant Physiology, Institute of Biology of Ufa Federal Research Centre of

Russian Academy of Sciences, 69 Prospect Oktyabrya, Ufa, 450054, Russian Federation;


E-mail: culture@ksc.krasn.ru

The isolated megagamethophytes and zygotic embryos at the stages of cotyledon initiation
were used as the explants for induction of somatic embryogenesis of Siberian larch (Larix
sibirica L.). The explants were cultivated on AI medium (patent №2456344
http://www.freepatent.ru/patents/2456344). The 42 proliferating embryogenic cell lines
(Cls) of Siberian larch have been received in different years (2008-2017) from two
genotypes No. A4 and No.10 as a result of opened and controlled pollination. Produced Cls
of L sibirica. were characterized by high embryogenic productivity. But CLs were initially
different in embryo production. Some CLs produced more somatic embryos than others,
under the same culture conditions. In highly productive (Cl4) embryos maturated and
germinated more actively. CL5 was a special case. Although somatic embryos did occur in
it, they did not maturate on the medium with ABA. According to immunohistochemical
staining of the cells, the globules contained IAA, zeatin and ABA, which varied among
different Сls and absent in embryonic tube of suspensor. Microsatellite analysis of
proliferating cell lines of L. sibiricah have shown weak allelic variability. Multiplication of
somatic embryos actively passed as a result of cleavage of embryos, suspensor budding and
embryonal tubes of suspensor proliferation. Mature somatic embryos outcome from the
primary number of globular somatic embryos in different CLs ranged from 0.6% to 33%.
Germination of somatic embryos was carried out on a non-hormonal ½AI medium, The
most regenerants are characterized by the formation of callus in the area of the hypocotyl
and between hypocotyl and root. But they are regenerants (Cl4) with good roots. For
adaptation, regenerants were planted in sterile soil in a growth chamber, then in a
greenhouse and further into the forest nursery soil, where cloned seedlings actively grow
for seven years. Genotyping of microsatellite loci in seedlings showed full compliance with
their CL6 from which they were derived.

The work is executed at financial support of RFBR grant No. 15-04-01427 and grant No.18-
54-00010 Bel_a.

Keywords: Larix sibirica, culture in vitro, somatic embryogenesis.

94 94
Micropropagation of berry crops for creation of germplasm cryobanks

Timur Turdiev, Zinat Mukhitdinova, Sergey Frolov, Akzhol Nogaibayev, Irina Kovalchuk
Institute of Plant Biology and Biotechnology, 45 Timiryazev Str., Almaty, 050040,
Kazakhstan; E-mail: turdievtt@mail.ru

One of the main stages of cryopreservation of meristematic tissues in vegetative plants is a


clonal micropropagation, which includes isolating the explants of the raw material in vitro
and optimizing the culture medium for micropropagation.
As the result of our studies, the optimal periods for in vitro micropropagation are: first –
isolation of explants from initiated shoots of dormant buds (blackcurrants and raspberries)
in January-March; the second – from actively growing shoots (blackcurrants and
raspberries) in May-June, from the formed mustache (strawberry) in July-August. The
optimal drugs for sterilization of raspberry explants are: a) 0.1% HgCl2 (6 min), then 3%
H2O2 (15 min); b) chlorine-containing bleach «Domestos» in the dilution of H2O 1:9 (10
min). For blackcurrant: a) 0.1% HgCl2 (5 min) in combination with 0.1% fungicide "Topaz"
(10-30 min); b) 0.1% HgCl2 (5 min) in combination with the treatment with KMnO4 (30
min); c) "Domestos" in the dilution of H2O 1:5 (20 min). For strawberry: a) 0.1% HgCl2 (5-7
min) followed by treatment with 3% H2O2 10-20 (min); b) 1% deochlor (7 min), 3% H2O2
(10 min); c) "Domestos" in the dilution of H2O 1:5 (8 min). Optimal compositions of culture
media for micropropagation of blackcurrant – MS medium with 0.5 mg L-1 BAP, 0.5 mg L-1
GA3, 0.1 mg L-1 IBA and 20 g L-1 glucose. For raspberry –MS medium with 0.5 mg L-1 BAP,
0.1 mg L-1 IBA, 10 mg L-1 iron chelate and 30 g L-1 sucrose. For strawberry – MS medium
with 0.3 mg L-1 BAP, 0.01 mg L-1 IBA, 0.2 mg L-1 GA3, 10 mg L-1 iron chelate and 30 g L-1
sucrose.
Based on these studies, the cryobank was created, which include the germplasm of in
vitro meristematic tissues in 66 cultivars, hybrids and wild-growing forms of blackcurrant,
raspberry and strawberry.

This study was funded by Ministry of Education and Science of the Republic of Kazakhstan, project
No. AP05131764.

Keywords: berry crops, micropropagation, cryobank, germplasm.

95
Magnetic-pulse processing at micropropagation and cleaning up of fruit
and small fruit crops from viruses

Mikhail Upadyshev, Ivan Kulikov, Vladislav Donetskich, Anna Petrova, Klavdia Metlitskaya
and Galina Upadysheva
All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery,
Zagorievskaya Str., 4, Moscow, 115598, Russian Federation; E-mail: upad8@mail.ru

Outer low-frequency magnetic fields can have influence on the process of plant growth,
development and cleaning up from viruses. The effects depend on the magnetic field
characteristics, on the biological peculiarities of the culture and the kind of pathogen. The
purpose of the research was to study the magnetic-pulse processing action on the
micropropagation and cleaning up process from harmful viruses of apple, pear, sweet
cherry and raspberry plants. The explants cultivated on Murashige and Skoog culture
medium, and infected by the viruses have been processed with the help of the
programmable devices designed according to our own construction (patents of the Russian
Federation No.2573349 and No.2652818) by the magnetic induction impulses with the
frequency from 0.5 to 130 Hz. The microplants testing was fulfilled by the ELISA-test. The
usage of magnetic processing on apple and pear plants provided 86% of the explant
cleaning up from the complex of viruses ASPV, ASGV, ACLSV and ApMV, on sweet cherry
plants – up to 29% from the complex of viruses PPV, PNRSV and PDV. On raspberry plants
the magnetic processing caused virus RBDV inhibition, on raspberry-blackberry hybrid –
from viruses RBDV and TBRV (the output of virus-free plants – up to 67%). The magnetic
processing encouraged the improvement of explant development at the micropropagation
stage: the microshoots length grow up in 1.5-2.9 times, their number – in 1.3-2.7 times
depending on the crops. At the stage of rooting ability, the magnetic processing increased
this ability for the microshoots in 2-3.3 times, the roots number and length – in 1.6-3.1
times, the microplant acclimatization in non-sterile conditions – on 7-27%. The advantages
of the magnetotherapy are the absence of phytotoxicity, universality, higher output of
health plants, processing automatisation and ecological safety.

Keywords: apple, pear, sweet cherry, raspberry, magnetic-pulse influence, in vitro.

96 96
Магнитно-импульсная обработка при микроразмножении и
оздоровлении от вирусов плодовых и ягодных культур

М.Т. Упадышев, И.М. Куликов, В.И. Донецких, А.Д. Петрова, К.В. Метлицкая,
Г.Ю. Упадышева
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский
селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства»,
ул. Загорьевская, 4, г. Москва, 115598, Российская Федерация; e-mail: upad8@mail.ru

Внешние низкочастотные магнитные поля способны оказывать влияние на


процессы роста, развития и оздоровления растений от вирусов. Эффекты зависят от
характеристик магнитного поля, биологических особенностей культуры и вида
патогена. Целью исследований являлось изучение действия магнитно-импульсной
обработки на процессы микроразмножения и оздоровления от вредоносных вирусов
растений яблони, груши, черешни, малины. Культивируемые на модифицированной
питательной среде Мурасиге и Скуга зараженные вирусами экспланты
обрабатывали с помощью разработанных нами программно управляемых приборов
(патенты Российской Федерации №2573349 и №2652818) импульсами магнитной
индукции с частотой от 0,5 до 130 Гц. Тестирование микрорастений проводили
методом ИФА. Применение магнитной обработки на подвоях яблони и груши
обеспечивало оздоровление до 86% эксплантов от комплекса вирусов ASPV, ASGV,
ACLSV и ApMV, на подвое черешни – до 29% от комплекса вирусов PPV, PNRSV и PDV.
На малине магнитная обработка приводила к ингибированию вируса RBDV, на
малино-ежевичном гибриде – вирусов RBDV и TBRV (выход свободных от вирусов
растений до 67%). Магнитная обработка способствовала улучшению вегетативного
развития эксплантов на этапе микроразмножения: длина побегов возрастала в 1,5-
2,9 раза, их число в 1,3-2,7 раза в зависимости от культуры. На этапе укоренения
укореняемость микропобегов в результате магнитной обработки возрастала в 2-3,3
раза, число и длина корней – в 1,6-3,1 раза, приживаемость микрорастений в
нестерильных условиях – на 7-27%. Преимуществами метода магнитотерапии
являются отсутствие фитотоксичности, универсальность, более высокий выход
здоровых растений, автоматизация процесса обработки, экологическая
безопасность.

Ключевые слова: яблоня, груша, черешня, малина, магнитно-импульсное


воздействие, in vitro.

97
Biodiversity of distant hybrids of cereals in the collection of the Tsitsin
MBG RAS

Vladimir Upelniek, Andrey Fisenko, Lubov Ivanova, Lubov Gluhova, Nina Kuzmina,
Pavla Loshakova, Sergey Zavgorodny, Sergey Gradskov
FSFIS The Main Botanical Garden named after N. V. Tsitsin RAS, Botanicheskaya Str., 4,
Moscow, 127276, Russian Federation; E-mail: vla-upelniek@yandex.ru

In Main Botanical Garden named after N.V. Tsitsin RAS more than 70 year scientists have
been working on preservation, studying and involvement the cultural and wild-growing
flora representatives of the cereal family in breeding process. The creation of distant
hybrids and their studying allow to solve not only fundamental problems, but also to obtain
new forms and species for breeding practice and production. In that regard, distant
hybridization offers exciting possibilities for using genome potential of wild plant species.
The creation of new synthetic species Trititrigia cziczinii Tzvel. (2n=56) can be considered
as the obvious success. Trititrigia cziczinii Tzvel. (2n=56) is the new species, based on
crossbreeding of varieties of different wheat species with wheatgrass species. The genome
is presented by 42 wheat chromosomes and 14 wheatgrass chromosomes. This species
representatives are characterized by new attributes, non-typical for common wheat
(perennity and ability to grow shoots after mowing) and also by bread-making quality
(protein 21%). The modern collection includes more than 250 Trititrigia cziczinii Tzvel.
forms. The wheatgrass collection involves both initial natural populations of different
geographical origin and set of two species inbred lines (in total not more than 5,000 plants)
Elytrigia elongata (Host) Nevski, Elytrigia intermedia (Host) and of two reciprocal hybrids:
× Elytrigia intel Cicin. and Elytrigia elint Cicin. Apart wheatgrass, collections of other wild-
growing species and genera of the cereals family are preserved and studied: wild
ruttishness (Elymus dahuricus Turcz. Ex Griseb, El. canadensis L., El. pungens (Pers.)
Melderis., El. farctus (Viv.) Runemark. ex Melderis), fescue (Festuka rubra L., F. ovina L.),
bluegrass (Poa annua L., P. pretense L.), goat grass (Aegilops tauschii Coss., Ae. longissima
Schweinf. & Muschl., Ae. speltoides Tausch.) and lyme grass (Léymus arenárius L.). The
collection of wheat-wheatgrass hybrids totals 120 samples. The collection of spring and
winter tritici type wheat-wheatgrass hybrids includes 520 samples. The new forms of
distant hybrids obtained in recent years by the hybridization of triticale and trititrigia
(Triticosecale × Trititrigia) are of the especial interest. A large number of essential for
breeding samples makes this collection really unic not only from the point of view of
preserving the genetic diversity of cereals, but also as an important source of economic
characters and gene associations in breeding practices and genetic studies.

Keywords: biodiversity of cereals, distant hybridization, wheat-wheatgrass hybrids.

98 98
Биоразнообразие отдаленных гибридов злаков в коллекции ГБС
РАН

В.П. Упелниек, А.В. Фисенко, Л.П. Иванова, Н.П. Кузьмина, П.О. Лошакова,
С.В. Завгородний, С.М. Градсков
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Главный ботанический
сад им. Н.В. Цицина Российской академии наук, Ботаническая ул., 4, г. Москва,
127276, Российкая Федерация; e-mail: vla-upelniek@yandex.ru

В Главном ботаническом саду им. Н. В. Цицина более 70 лет ведется работа по


сохранению, изучению и привлечению в селекционный процесс представителей
культурной и дикорастущей флоры семейства злаков. Создание отдаленных
гибридов и их изучение позволяет решать не только фундаментальные проблемы,
но и получать новые формы и виды для селекционной практики и производства. В
этом отношении отдаленная гибридизация, открывает широкие возможности для
использования геномного потенциала диких видов растений. Очевидным успехом в
этой области можно считать создание нового синтетического вида Trititrigia cziczinii
Tzvel. (2n=56). Trititrigia cziczinii Tzvel. (2n=56) – новый вид, получен на основе
скрещивания сортов разных видов пшеницы с видами пырея. Геном представлен 42
хромосомами пшеницы и 14 хромосомами пырея. Представители данного вида
характеризуются новыми признаками не характерными для обычной пшеницы
(многолетность и способность к отрастанию побегов после скашивания). а также
высокие показатели качества зерна (белок до 21%). Современная коллекция
включает более 250 форм Trititrigia cziczinii Tzvel . Коллекция пыреев включает, как
исходные природные популяции различного географического происхождения, так и
набор инцухтированных линий (всего более 5000 растений) двух видов Elytrigia
elongata (Host) Nevski, Elytrigia intermedia (Host) Nevski и двух реципроктных
гибридов × Elytrigia intel Cicin. и Elytrigia elint , Cicin. Помимо пырея, сохраняются и
изучаются коллекции других дикорастущих видов и родов семейства злаков:
элимусы (Elymus dahuricus Turcz. ex Griseb, El.canadensis L., El.pungens (Pers.) Melderis.,
El.farctus (Viv.) Runemark. ex Melderis), овсяницы (Festuka rubra L., F. ovina L.), мятлики
(Poa annua L., P.pratense L.), эгилопсы (Aegilops tauschii Coss., Ae.longissima Schweinf. &
Muschl., Ae.speltoides Tausch.), колосняк (Léymus arenárius L.). Коллекция пшенично-
элимусных гибридов насчитывает 120 образцов. Коллекция яровых и озимых ППГ
пшеничного типа насчитывает 520 образцов. Особый интерес представляют новые
формы отдаленных гибридов, полученные в последние годы при гибридизации
тритикале и трититригии (Triticosecale × Trititrigia). Большое количества
селекционно-ценных образцов, делает эту коллекцию поистине уникальной не
только с точки зрения сохранения генетического разнообразия злаков, но и как
важный источник хозяйственно-ценных признаков и генных ассоциаций в
селекционной практике и в генетических исследованиях.

Ключевые слова: биоразнообразие, отдаленная гибридизация, пшенично-


пырейные гибриды.

99
Cytogenetics, phenology and development of biotechnological methods
for the conservation of Jatropha costaricensis

Marta Fermina Valdez1, Elmer García Díaz1, Andres Gatica-Arias1, Pablo Bolaños-Villegas2,
Nien Weng-Huang3
1School of Biology, University of Costa Rica, Ciudad Universitaria Rodrigo Facio, San Pedro

Montes de Oca, San Jose , Costa Rica; E-mail: marta.valdez@ucr.ac.cr


2Fabio Baudrit-Moreno Station, University of Costa Rica, 11501-2060 Alajuela Alajuela,

Costa Rica
3Faculty Pharmacy, University of Costa Rica, Ciudad Universitaria Rodrigo Facio, San Pedro

Montes de Oca, 11501-2060 San Jose San Jose, Costa Rica

The genus Jatropha belongs to the Euphorbiaceae family and comprises 3 500 species. The
genus has a cosmopolitan distribution, including species native to Mesoamerica. Jatropha
plants are non-food oleaginous crops capable of adapting to different edaphic, ecological
and climatological conditions. Jatropha species found in Costa Rica include J. costaricensis,
J. curcas, J. integerrima, J. podagrica and J. stevensii. The species J. costaricensis was
described in 1978 and is an endangered species with only three populations, which are
found in the Province of Guanacaste, Costa Rica. It is not known to occur in other countries.
The aim of this project is to study the cytogenetics, phenology and phytochemical profile of
J. costaricensis, as well as to develop biotechnological methods for the establishment of cell
cultures in vitro, in order to allow massive micropropagation of plants, via organogenesis,
for their conservation. Also, it is of great importance to explore the potential of this wild
species in relation to an eventual capacity for the production of natural compounds for
pharmaceutical use.
The species was described as dioecious, but our preliminary observations indicate
that individuals having only male flowers coexist with trees having only female flowers, but
also with monoecious trees. The analysis of the lipid profile of J. costaricensis showed a
total of 12 fatty acids, with an overall lipid content of 38.5%, and an average seed weight of
1.425 g. These values are much higher than those of the commercial species J. curcas,
described in the literature: four fatty acids, 40% content and an average seed weight of 0.8
g. J. costaricensis has a high potential both as a genetic resource for the commercial variety
of the genus, J. curcas, and in relation to its own characteristics that make it very promising
from the pharmaceutical and cosmetically point of view.

Keywords: Jatropha costaricenses, biotechnology, cytogenetics, phenology, in vitro culture.

100 100
Ontomorphogenesis of axillary meristem-derived micropropagated
plants of Rosa canina rootstock

Olga Vasilyeva, Elena Ambros, Tatyana Novikova


Central Siberian Botanical Garden of the Siberian Branch of the RAS, Zolotodolinskaya Str.,
101, Novosibirsk, 630090, Russian Federation; E-mail: vasil.flowers@rambler.ru

Problem of garden roses reproduction in Western Siberia is connected with the absence of
seed plantations of winter-hardy rose-rootstocks. In CSBG SB RAS (Novosibirsk) a
comparative study of the plants ontomorphogenesis of the selected highly winter-hardy
Rosa canina form obtained by clonal micropropagation, seeds and green cuttings was
conducted in 2013-2018.
Primary explants for in vitro multiplication were meristems with two leaf primordia,
isolated from the axillary buds of annual shoots. The initiation of shoot formation was
carried out in MS liquid medium supplemented with 100 mg L-1 glutathione, followed by
cultivation on MS induction medium with 2.0 mg L-1 BA and 1.0 mg L-1 IAA. At the
micropropagation stage, the maximum number of microshoots per explant (7.5 ± 0.7) was
registrated on medium with 1 mg L-1 BA. For rooting of the microshoots, ½ MS hormone-
free medium supplemented with 1.0 mg L-1 IAA was used. The regenerants were
acclimatized in containers with sterile sand, followed by transferring into pots containing a
peat with perlite, mold, sand and coconut substrate. To date, in vivo conditions, the
ontogenesis of R. canina of microclonal origin, including three ontogenetic states of the
pregenerative period and two states of the generative period, has been described for the
first time. In the selective form studied, all the shoot formation systems (SFS) were
preserved completely. They formed fruit shoots with 1-5 gipantia with full fruit-nuts.
The technology of clonal micropropagation of selected forms of rootstock intended
for seed plantations is effective for accelerated reproduction, since there is no need in
stratification, and there is no vulnerable seedling in outdoor conditions. In addition, in vitro
technique used makes it possible to obtain a clonal stock material regardless of the season,
unlike green cuttings, which is important for conditions with a short vegetative period.

Keywords: Rosa canina, rootstock, micropropagation, ontogenesis, Western Siberia.

101
101
Онтоморфогенез подвоя Rosa canina L., полученного в результате
микроразмножения из меристем пазушных почек

О.Ю. Васильева, Е.В. Амброс, Т.И. Новикова


Центральный сибирский ботанический сад СО РАН, ул. Золотодолинская 101, г.
Новосибирск, 630090, Российская Федерация; e-mail: vasil.flowers@rambler.ru

Размножение садовых роз в Западной Сибири тормозится из-за отсутствия


маточных семенных плантаций зимостойких шиповников–подвоев. В ЦСБС СО РАН
(г. Новосибирск) в 2013-2018 гг. проведено сравнительное изучение
онтоморфогенеза растений отборной высоко зимостойкой формы Rosa canina,
полученных путем клонального микроразмножения и семенного размножения, а
также зеленого черенкования.
Первичными эксплантами для размножения в условиях in vitro послужили
меристемы с двумя листовыми примордиями, выделенные из пазушных почек
однолетних побегов. Инициация побегообразования проведена на жидкой
питательной среде по прописи Мурасиге и Скуга – МС, дополненной 100 мг/л
глутатиона с последующим культивированием на индукционной среде MС с 2,0 мг/л
БА и 1,0 мг/л ИУК. На стадии микроразмножения максимальное количество
микропобегов на эксплант (7,5±0,7) наблюдали на средах с 1 мг/л БА. Для
укоренения полученных микропобегов использовали безгормональную среду ½ МС,
дополненную 1,0 мг/л ИУК. Акклиматизацию регенерантов осуществляли
ступенчато. На первом этапе в контейнерах со стерильным песком, затем в горшках с
субстратом, состоящим из смеси торфа с перлитом, перегноя, песка и кокосового
субстрата (1:1:0.5:0.5). К настоящему времени в условиях in vivo впервые описан
онтогенез Rosa canina, размноженой путем клонального микроразмножения,
включающий 3 онтогенетических состояния прегенеративного периода и 2
состояния генеративного периода. У изучаемой отборной формы все системы
побегов формирования (СПФ) сохранились полностью, на них образовались
укороченных плодовые побеги с 1-5 гипантиями с полноценными плодами-
орешками.
Технология клонального микроразмножения отборных форм подвоев
шиповников, предназначенных для семенных маточных плантаций, эффективна для
ускоренной репродукции, поскольку отпадает необходимость в стратификации, а
также отсутствует уязвимое в открытом грунте состояние проростка. Кроме того,
применяемая методика in vitro позволяет получать материал клоновых подвоев
независимо от сезона в отличие от растений, размноженных методом зеленого
черенкования, что важно для условий с коротким вегетационным периодом.

Ключевые слова: Rosa canina, подвой, микроразмножение, онтогенез, Западная


Сибирь.

102 102
Antioxidant activity of Solidago L. complex

Yulia Vinogradova1, Olena Vergun2, Olga Grygorieva2, Jan Brindza3


1N.V. Tsitsin Main Botanical Garden of Russian Academy of Sciences, Botanichaeskaya, Str.

4, Moscow, Russian Federation; E-mail: gbsad@mail.ru


2M.M. Gryshko National Botanical Gardens of Ukraine, National Academy of Sciences,

Timiryazevska 1, 01014 Kyiv, Ukraine


3Institute of Biological Conservation and Biosafety, Slovak University of Agriculutre in

Nitra, Tr. Andrea Hlinku 2, Nitra, Slovak Republic

The total antioxidant activity was evaluated by DPPH method (Brand-Williams, 1995) on
the dry plants (leaves and inflorescences). We compared 13 samples grown from seeds at
the experimental plots in the vicinity of Moscow: 1) native Solidago virgaurea L.; 2)
invasive S. altissima L. (=S. canadensis s.l) (Hungary); 3) invasive S. altissima (Belarus); 4)
invasive S. canadensis L. s.str (Hungary); 5) invasive S. gigantean Aiton (Hungary); 6,7)
hybridogenous × S. niederedery Khek. (=S. virgaurea × S. canadensis); 8-11) hybridogenous
× S. snarsksii Gudžinskas & Žalneravičius (=S. virgaurea × S. gigantea); 12) invasive
S. graminifolia (L.) Nutt. (=Euthamia graminifolia) (Belarus); 13) alien S. graminifolia (L.)
Nutt. (Brno). The antioxidant activity of alcohol extracts for all specimens was very high
and comparable to that of Juniperus sabina (Elisovetcaia et al., 2018) or Tussilago farfara
(Ivanišová et al., 2016). The total antioxidant activity in the leaves had 75.28-92.77%
(methanol extracts), 44.34-91.52% (ethanol extracts) and 21.55-68.51% (water extracts).
The total antioxidant activity in the inflorescences was higher: 90.77-94.07% (methanol
extracts), 90.20-95.66% (ethanol extracts) and 37.69-64.47% (water extracts). Alcohol
extracts in all experiments had 2.5-3.0 times higher antioxidant activity than aqueous
extracts. The lowest antioxidant activity in alcohol extracts was shown by S. snarsksii No.
11 (leaves), and in the aqueous extract – S. snarsksii No. 10 (leaves). This taxon, in general,
demonstrates the greatest variability of characters, which apparently is a reflection of its
hybridogenic nature. The alcohol extracts from the leaves of both samples of S. graminifolia
also show reliably lower antioxidant activity (84 vs. 91% in methanol and 85 vs. 90% in
ethanol), which to some extent is an indirect confirmation of the correctness of its transfer
to the genus Euthamia.
Consequently, alien Solidago species, as well as their hybridogenic taxa (excluding
S. snarsksii), are similar in antioxidant activity to the native S. virgaurea included in the
official pharmacopoeia. In this way, alien Solidago taxa have a potential source of useful
bioactive compounds.

Keywords: Solidago, antioxidant activity, alien species.

103
103
In vitro conservation of essential oil rose cultivars

Natalia Yegorova1,2, Valentina Brailko1, Irina Stavtzeva2, Irina Mitrofanova1


1 Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
2Federal State Funded Institution of Science “Research Institute of Agriculture of Crimea”,

295493 Simferopol, Russian Federation; E-mail: yegorova.na@mail.ru

The effect of explants сonservation in essential oil rose cultivars (Rosa spp.) during 1 year
on their morphometric and physiological parameters during preservation (under
conditions of slow growth) and after transfer to standard in vitro culture has been
investigated. The segments of the microshoots (5-7 mm) of cultivars ‘Raduga’, ‘Lany’,
‘Lada’, ‘Michurinka’, and ‘Festivalnaya’ were kept at 4-6°С and light intensity 1,000 lx.
During storage, viability of the explants of all investigated genotypes was at a high level
(90-100%). Herewith, depending on a cultivar, in 85.7-100% of explants, a slow
development (formation of new leaves, additional buds and shoots) was observed. The best
growth of adventitious shoots was in the cultivars ‘Festivalnaya’ and ‘Lany’ (1.8 and 2.1
pieces per explant, respectively). At low temperature, the work of photosystem-2 in the
leaves of all cultivars was reduced: the relative photosynthetic activity was 0.41-0.50 a.u.
At the same time in control (during а clonal micropropagation in meristem culture) in the
studied cultivars shoots the active light conversion was observed, which indicated normal
functioning of their assimilation apparatus. After one year of conservation, explants were
transferred to a fresh culture medium and cultured at 24-26°C with light intensity 2,000-
3,000 lux under 16-h photoperiod. For all the cultivars within a month, active shoot growth
and adventitious shoot formation (from 2.1 to 4.6 pieces per explant, respectively) were
observed. The multiplication index varied from 4.2 (‘Lada’) to 7.6 (‘Festivalnaya’). Some
morphometric parameters were on the control level, and for ‘Festivalnaya’ and 'Lany' even
higher. The analysis of the parameters of chlorophyll fluorescence induction of plant
material after transfer to standard in vitro culture conditions indicates restoration of
production processes. The cultivars ‘Raduga’ and ‘Michurinka’ showed a slight photo
inhibition.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Rosa spp., in vitro collection, explants, micropropagation, photosynthetic


activity.

104 104
Сохранение in vitro сортов эфиромасличной розы

Н.А. Егорова1,2, В.А. Браилко1, И.В. Ставцева2, И.В. Митрофанова1


1ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация;
2ФГБУН «Научно-исследовательский институт сельского хозяйства Крыма»,

ул. Киевская, 150, г. Симферополь, 295493, Российская Федерация;


E-mail: yegorova.na@mail.ru

Исследовано влияние хранения эксплантов сортов эфиромасличной розы в течение


1 года на их морфометрические и физиологические параметры при депонировании
(в условиях замедленного роста) и после переноса в обычные условия
культивирования in vitro. В качестве эксплантов использовали сегменты
микропобегов (5-7 мм) сортов ‘Радуга’, ‘Лань’, ‘Лада’, ‘Мичуринка’, ‘Фестивальная’
(Rosa spp.), которые депонировали при +4-6оС и освещении 1 клк. Установлено, что
при хранении жизнеспособность эксплантов всех генотипов была на высоком
уровне (90,0-100%). При этом, в зависимости от сорта, у 85,7-100,0% эксплантов
наблюдали незначительное развитие – образование новых листьев,
дополнительных почек и побегов. Лучшее формирование адвентивных побегов
отмечено у сортов ‘Фестивальная’ и ‘Лань’ (1,8 и 2,1 шт./эксплант). Выявлено, что
при низкой температуре работа фотосистемы-2 листьев всех сортов была снижена:
относительная фотосинтетическая активность составила 0,41-0,50 отн. ед. В то же
время в контроле (при клональном микроразмножении в культуре меристем) у
побегов изученных сортов наблюдали активное светопреобразование, что
свидетельствует о нормальном функционировании их ассимиляционного аппарата.
После года сохранения экспланты переносили на свежую питательную среду и
культивировали при +24-26оС, освещении 2-3 клк с 16-часовым фотопериодом. У
всех сортов в течение месяца наблюдали активный рост побегов и адвентивное
побегообразование (от 2,1 до 4,6 шт./эксплант). Коэффициент размножения
варьировал от 4,2 (‘Лада’) до 7,6 (‘Фестивальная’). Некоторые морфометрические
параметры были на уровне контроля, а у ‘Фестивальной’ и ‘Лани’ даже выше. Анализ
параметров индукции флуоресценции хлорофилла растительного материала после
переноса в стандартные условия культивирования in vitro указывает на
восстановление продукционных процессов. Незначительное фотоингибирование
отмечено у сортов ‘Радуга’ и ‘Мичуринка’.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: Rosa spp., коллекция in vitro, эксплант, микроразмножение,


фотосинтетическая активность.

105
105
Integration of molecular and geographical data analysis of Iranian
Prunus scoparia populations in order to assess genetic diversity and
conservation planning

Mehrshad Zeinalabedini1, Parastoo Majidian2, Reyhaneh Ashori3, Ameneh Gholaminejad4,


Mohammad Ali Ebrahimi3, Pedro Martinez-Gomez5
1Agriculture Biotechnology Research Institute of Iran, Agricultural Research, Education and

Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran; E-mail: m_zeinalabedini@yahoo.com


2Mazandaran Agricultural and Natural Resources Research and Education Center,

Mazandaran, Sari, Iran


3Department of Agricultural Biotechnology, Payame Noor University, Tehran, Iran
4Faculty of Basic Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
5Department of Plant Breeding, CEBAS-CSIC, Murcia, Spain

Evaluation of spatial and non-spatial distribution is of great importance for protection of


plant genetic resources. Prunus scoparia, a wild almond species, is an important
economically and ecologically food resource plant in Iran with specific characteristics such
as self-compatibility, resistant to drought and fungus, bitterness, as well as small nuts. This
wild species can provide an enlarged gene pool and may be considered as a valuable
germplasm source for breeding cultivated almonds. In this study, the conservation
planning and genetic variation of 158 Prunus scoparia accessions was investigated with the
aid of 36 SSR markers to reveal genetic distinctness and structure. The molecular markers
studied showed quite high level of genetic diversity on the basis of Na = 6.47, Ho =0.603 and
He = 0.737. The result of Neighbor net analysis was not in parallel with STRUCTURE data as
classified samples into two and 12 main groups, respectively. On the other hand, the results
of GENELAND analysis ensured the population classification and the genetic relatedness
between populations from STRUCTURE analysis due to use of geographical data. All
samples were grouped based on their geographical location. Moreover, utilization of GIS
data accompanied by appropriate number of SSR markers could provide the possibility of
prioritizing of distribution regions in natural and unnatural environments. The species
distribution modeling would also help gain comprehensive information on conservation
strategies of this wild almond species.

Keywords: Prunus scoparia, SSR markers, structure analysis

106 106
Technology of sugar beet dihaploid lines development

Elena Vasilchenko1, Olga Zemlyanukhina2, Nikita Karpechenko1, Vladislav Kalaev2


1Federal State-Funded Scientific Institution “A.L. Mazlumov All-Russia Research and

Development Institute of Sugar Beet”(VNIISS), Voronezh Region, Ramonsky District


396030, Russian Federation
2Federal State-Funded Educational Institution of Higher Education “Voronezh State

University” (VSU), Universitetskaya Ploschad 1, Voronezh 394006, Russian Federation;


E-mail: oz54@mail.ru

The methods used to create homozygous lines of sugar beet dihaploids when cultivating
unfertilized ovules under in vitro conditions are represented. At the first stage, use of
phenotype traits of seed-bearing plants, morphological and cytological features of formed
buds and unfertilized ovules is of vital importance to induce haploids. The main part of the
technology is devoted to presentation of the two-stage method for cultivation of isolated
ovules using liquid and agar-like consistencies of Gamborg’s culture medium (В5) which
regulates explants’ supply with hormones and nutrients. Identifying characteristic of this
method is a culture medium consistence change that allows differentiation of cultured
tissues in liquid phase and, when transferred to agar-like medium, induction of haploid
regenerants formation. Hormonal composition of Gamborg’s culture medium is an
important factor that effectively controls direction of morphogenetic development in
isolated ovules through direct regeneration (embryogenesis) or via callus
(gemmorhizogenesis) that testifies to totipotency of both sexual and somatic explant cells.
When producing lines of doubled haploids, stabilizing selection promotes detection of
valuable morphological characteristics in regenerants. Last stage is rooting of dihaploid
regenerants which success is determined by their transplanting to a new culture medium
with changed composition of auxins. Microclones with vigorous root system and well
developed leaf surface are used to obtain planting material. The method of induced
parthenogenetic plant selection includes cytophotometric ploidy evaluation from the
content of nuclear DNA at the stabilization stage of haploid regenerants and after
diploidization. Molecular-genetic studies of amplified DNA fragments of mitochondrial
genome allow genotyping of regenerants according to sterile and fertile cytoplasm types.
Final processes of the technology are: transfer of the rooted microclones with vigorous root
system and well-developed leaf surface to a greenhouse, growing seed-bearing plants from
them and obtaining seeds.

Keywords: sugar beet, in vitro, haploids, dihaploids, technology.

107
107
Технология создания дигаплоидных линий сахарной свеклы

Е.Н. Васильченко1, О.А. Землянухина2, Н.А. Карпеченко1, В.Н. Калаев2


1 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский

научно-исследовательский институт сахарной свеклы и сахара им.А.Л.Мазлумова»,


п. ВНИИСС 84, Рамонский р-н, Воронежская область, 396030, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего

профессионального образования "Воронежский государственный университет»,


Университетская площадь, 1, г. Воронеж, 394006, Российская Федерация;
e-mail: oz54@mail.ru

В представленной технологии отражены методы, используемые для создания


дигаплоидных линий сахарной свеклы при культивировании неоплодотворенных
семязачатков в условиях in vitro. Показано, что на первом этапе для индуцирования
развития гаплоидов существенное значение имеет использование фенотипических
признаков семенных растений, морфологических и цитологических особенностей
формирующихся бутонов и неоплодотворенных семязачатков. Основная часть
технологии посвящена изложению метода двухэтапного культивирования
изолированных семязачатков при использовании питательной среды Гамборга (В5),
которая регулирует обеспеченность эксплантов гормонами и питательными
веществами. Особенностью данного метода является изменение консистенции
питательной среды, что позволяет в жидкой фазе проводить дифференциацию
культивируемых тканей, а при переносе на агаризированную среду, индуцировать
формирование гаплоидных регенерантов. Гормональный состав питательной среды
по Гамборгу служит важным фактором, который эффективно регулирует
направление морфогенетического развития у изолированных семязачатков – через
прямую регенерацию (эмбриоидогенез) или через каллус (гемморизогенез), что
свидетельствует о тотипотентности, как половых, так и соматических клеток
экспланта. Стабилизирующий отбор при создании линий удвоенных гаплоидов
способствует выявлению ценных морфологических признаков регенерантов.
Последним этапом процесса культивирования in vitro является укоренение
диплоидизированных регенерантов, успех которого определяется пересадкой их на
новую питательную среду с измененным составом ауксинов. Микроклоны с мощной
корневой системой и хорошо развитой листовой поверхностью используют для
получения посадочного материала. Метод отбора индуцированных
партеногенетических растений включает оценку плоидности цитофотометрически
по содержанию ядерной ДНК на этапе стабилизации гаплоидных регенерантов и
после диплоидизации. Молекулярно-генетические исследования
амплифицированных фрагментов ДНК митохондриального генома позволяют
проводить генотипирование регенерантов по стерильному и фертильному типам
цитоплазмы. Заключительными процессами технологии являются: перевод в
условия закрытого грунта укорененных микроклонов с мощной корневой системой
и хорошо развитой листовой поверхностью, выращивание из них семенных
растений и получение семян.

Ключевые слова: сахарная свекла, in vitro, гаплоиды, дигаплоиды, технология.

108 108
Detection and partial molecular characterization of viruses
infecting chrysanthemum in Russia

Alexander Zakubanskiy2, Irina Mitrofanova1, Natalya Smykova1, Olga Mitrofanova1,


Sergey Chirkov1,2

1 Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita
Botanical Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian
Federation;
2 Lomonosov Moscow State University, Моscow, 119234, Russian Federation;

E-mail: s-chirkov1@yandex.ru

Chrysanthemum virus B (CVB, genus Carlavirus, family Betaflexiviridae) and Tomato


aspermy virus (TAV, genus Cucumovirus, family Bromoviridae) were identified in the
cultivar collection of chrysanthemum (Chrysanthemum morifolium Ramat.)
maintained in Nikita Botanical Gardens (Yalta, Russia) by reverse transcription
polymerase chain reaction (RT-PCR). Total RNA was isolated from leaves of twelve
cultivars displaying symptoms of mosaic, vein clearing or chlorotic spots using
RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). Random hexamer primers and MuMLV reverse
transcriptase were used for the first strand cDNA synthesis. CVB was detected in local
and introduced cultivars ‘Zolotovoloska’, ‘Antonov’, ‘Symphonia’, ‘Daystar Yellow’,
‘Diana’, ‘Chita’, ‘Demurral Lilac’ and hybrid 7-15. In RT-PCR with the virus-specific
primers P1/P2 targeting the coat protein (CP) gene, a product of expected size of
≈950 bp was amplified and sequenced. The isolates from different cultivars shared
91.8 to 98.5% and 95.2 to 99.3% identities at the nucleotide and amino acid levels,
respectively. Phylogenetic analysis of CP sequences available in GeneBank assigned
the Crimean isolates in two groups with 99% bootstrap support. Isolates from
cultivars ‘Diana’, ‘Daystar Yellow’, ‘Antonov’ and hybrid 7-15 were clustered with
Indian isolates Guwahati (AJ812735) and Haryana (AJ629843). Those from cultivars
‘Zolotovoloska’, ‘Chita’, ‘Demurral Lilac’, ‘Symphonia’ were grouped with the Indian
ones Bangalore (AJ585240), Chail (AJ876635) and isolate S60150 from Germany.
TAV was identified in cultivars ‘Symphonia’, ‘Yunost’ and hybrid 7-15 using primers
Bromo-Fv/Bromo-Rv specific to the bromo/cucumovirus group, CPTALL-3/CPTALL-
5 specific to cucumoviruses, and TAV-specific primers. PCR products of expected sizes
of about 350, 940 and 650 bp, respectively, were generated. The CP sequences from
cultivars ‘Symphonia’ and ‘Yunost’ were identical to one another and also the
Hungarian isolate P-TAV from pepper (L15335) and the Australian isolate C-TAV
from chrysanthemum (AJ277268). CVB and TAV were not detected in cultivars
‘Sirenevye Dali’, ‘Skazka’ and ‘Yuzhnaya Notch’.

This work was funded by the Russian Science Foundation, grant No 14-50-00079.

Keywords: Chrysanthemum morifolium, chrysanthemum virus B, tomato aspermy


virus, phylogenetic analysis.

109
109
Обнаружение и частичная молекулярная характеризация
вирусов хризантемы в России

А.В. Закубанский2, И.В. Митрофанова1, Н.В. Смыкова1, О.В. Митрофанова1,


С.Н. Чирков1,2
1 ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация;
2Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, г. Москва,

119234, Российская Федерация; e-mail: s-chirkov1@yandex.ru

Хризантемный вирус В (Chrysanthemum virus B, CVB, род Carlavirus, сем.


Betaflexiviridae) и вирус аспермии томатов (Tomato aspermy virus, TAV, род
Cucumovirus, сем. Bromoviridae) выявлены в сортовой коллекции хризантемы
Chrysanthemum morifolium Ramat. Никитского ботанического сада (г. Ялта,
Россия) методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией
(ОТ-ПЦР). Тотальную РНК из листьев растений 12 сортов c признаками
мозаики, просветления жилок или хлоротической пятнистости выделяли с
помощью набора RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). Для синтеза кДНК использовали
случайную затравку и обратную транскриптазу MuMLV (Евроген). CVB
обнаружен на местных и интродуцированных сортах Золотоволоска, Аntonov,
Симфония, Dalystar Yellow, Diana, Chita, Demurral Lilac и гибриде 7-15. В ОТ-ПЦР
с вирусоспецифичными праймерами P1/P2, таргетирующими ген белка
оболочки (БО), образовывался продукт ожидаемого размера около 950 пар
оснований (п.о.), который был секвенирован. На нуклеотидном и
аминокислотном уровнях изоляты из разных сортов идентичны между собой
на 91,8 - 98,5% и 95,2 - 99,3%, соответственно. Филогенетический анализ всех
последовательностей гена БО CVB, доступных в GenBank, показал, что крымские
изоляты CVB с вероятностью 99% делятся на две группы. Изоляты из сортов
Diana, Dalystar Yellow, Аntonov и гибрида 7-15 кластеризуются с индийскими
изолятами Guwahati (AJ812735) и Haryana (AJ629843). Изоляты из сортов
Золотоволоска, Chita, Demurral Lilac, Симфония группируются с индийскими
Bangalore (AJ585240), Chail (AJ876635) и изолятом S60150 из Германии. TAV
обнаружен на сортах Симфония, Юность и гибриде 7-15. Вирус выявлялся с
помощью группоспецифичных праймеров Bromo-Fv/Bromo-Rv к бромо- и
кукумовирусам, CPTALL-3/CPTALL-5, специфичных к кукумовирусам, и TAV-
специфичных праймеров с образованием продуктов ПЦР ожидаемых размеров
около 350, 940 и 650 п.о., соответственно. Ген БО изолятов из сортов Симфония
и Юность был амплифицирован с помощью праймеров CPTALL-3/CPTALL-5 и
секвенирован. БО оказался идентичен у обоих изолятов, а также идентичен БО
венгерского изолята P-TAV из перца (L15335) и австралийского изолята C-TAV
из хризантемы (AJ277268). В растениях сортов Сиреневые Дали, Сказка и
Южная Ночь CVB и TAV не обнаружены.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда,
грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: Chrysanthemum morifolium, хризантемный вирус B, вирус


аспермии томатов, филогенетический анализ.

110 110
N-Acethylcysteinate- 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine as a plant
growth regulator

Irina Zhigacheva1, Irina Rusina2


1Emanuel Institute of Biochemical Physics, Russian Academy of Sciences, Kosygin st., 4,
Moscow, 119334, Russian Federation; E-mail: zhigacheva@mail.ru
2Semenov Institute of Chemical Physics, Russian Academy of Sciences Kosygin st., 4,

119334 7 Moscow, Russian Federation

The attention of chemists-synthetic and biologists has been attracted by compounds of 3-


hydroxypyridine (3-HP), that efficiently regulate oxidation and peroxidation processes.
They are structural analogues of the compounds of the group of pyridoxine (vitamin B 6)
that are significant to the function of the body, including performing the role of
physiological antioxidants. We investigated the biological activity of the 3-HP derivative, in
particular N-acetylcysteinate 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine, on mitochondria
isolated from etiolated pea seedlings (Pisum sativum L., cultivar‘Alfa’), that allowed to judge
the possibility of using this preparation as a regulator of plant growth and development.
The incubation of mitochondria in a hypotonic incubation medium activated lipid
peroxidation: the fluorescence intensity of lipid peroxidation (LPO) products increased 5-
fold as compared to the control. N-acetylcysteine-2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine in
concentrations of 10-6 to 10-11M and 10-13M reduced the fluorescence intensity of LPO
products almost to control values that, probably, testified about the presence of anti-stress
properties of the preparation. The verification of these properties was carried out using
mitochondria isolated from 5 - day etiolated pea seedlings under water deficiency. The
fluorescence intensity of LPO products in mitochondrial membranes under these
conditions increased 6 times. The treatment of seeds and seedlings with 10-6M solution of
the preparation led to a decrease in the fluorescence intensity of LPO products to the
control level. Water deficiency inhibited the growth of seedlings, and the treatment of pea
seeds and sprouts with the test preparation prevented the inhibition of the growth of roots
and shoots. It can be assumed that the protective effect of the preparation due to its
antiradical and antioxidant properties: - coefficient of interaction of the preparation with
peroxyl radicals (kInH) is 3.3 to 3.84×104 (Mc)-1. Preventing the activation of LPO, N-
acetylcysteinate 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine apparently contributes to
maintaining the functional state of mitochondria, which is reflected in the preservation of
physiological parameters under stress.

Keywords: 3-hydroxypyridines, antiradical activity, mitochondria.

111
111
N-ацетилцистеинат 2-этил-6_метил-3-гидроксипиридин в
качестве регулятора роста растений

И.В. Жигачева1, И.Ф. Русина2,


1ФГБУН Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН, ул. Косыгина, 4,

г. Москва, 119334 7, Российская Федерация; e-mail: zhigacheva@mail.ru


2ФГБУН Институт химической физики им Н.Н. Семенова РАН, ул. Косыгина, 4,

г. Москва, 119334 7, Российская Федерация

В последние годы внимание химиков-синтетиков и биологов привлекли соединения


производных 3-гидроксипиридина (3-ОП), в качестве перспективных соединений,
эффективно регулирующих процессы окисления и пероксидации. Они являются
структурными аналогами соединений группы пиридоксина (витамина B6), имеющих
значение в жизнедеятельности организма, в том числе выполняющих роль
физиологических антиоксидантов. В связи с этим данные соединения, по-видимому,
могут выступать в качестве потенциальных защитных агентов при действии на
организм различных повреждающих факторов. Мы исследовали биологическую
активность производного 3-ОП, в частности N-ацетилцистеинат 2-этил-6-метил-3-
гидроксипиридина, на митохондриях, выделенных из этиолированных проростков
гороха (Pisum sativum L.), сорт Альфа, что позволило судить о возможности
использования этого препарата в качестве регулятора роста и развития растений.
Инкубация митохондрий в гипотонической среде активировала перекисное
окисление липидов (ПОЛ). При этом интенсивность флуоресценции продуктов ПОЛ
(оснований Шиффа) возрастала в 5 раз по сравнению с контролем. N-
ацетилцистеинат-2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина в концентрациях 10-6-10-11М
и 10-13М снижал интенсивность флуоресценции продуктов ПОЛ почти до
контрольных значений, что, возможно, свидетельствовало о наличии у препарата
антистрессовых свойств. Проверку этих свойств проводили, используя митохондрии,
выделенные из 5-дневных этиолированных проростков гороха, находящихся в
условиях дефицита воды. Интенсивность флуоресценции продуктов ПОЛ в
мембранах митохондрий в условиях дефицита воды возрастала почти в 6 раз.
Обработка семян и проростков 10-6М раствором препарата вызывала снижение
интенсивности флуоресценции продуктов ПОЛ почти до контрольного уровня.
Антистрессовые свойства препарата отразились на физиологических показателях, в
частности – на ростовых процессах. Дефицит воды тормозил рост проростков, а
обработка семян и проростков гороха исследуемым препаратом предотвращала
торможение роста корней и побегов в этих условиях. Можно предположить, что
защитный эффект препарата обусловлен его антирадикальными и
антиоксидантными свойствами: - коэффициент взаимодействия препарата с
пероксильными радикалами (kInH) составляет 3,3 - 3,84×10-4 (Mc)-1. Снижение
интенсивности процессов свободно радикального окисления находит отражение в
низкой интенсивности ПОЛ. Предотвращая активацию ПОЛ, N-ацетилцистеинат-2-
этил-6-метил-3-гидроксипиридин, по-видимому, способствует сохранению
функционального состояния митохондрий, что находит отражение в сохранении
физиологических показателей в условиях стресса.

Ключевые слова: 3-оксипиридины, антирадикальная активность, митохондрии.

112 112
The Nikita Botanical Gardens ornamental plants' collections biodiversity
extension

Vera Zykova, Zinaida Klimenko, Natalнa Zubkova, Ludmila Alexandrova, Irina


Ulanovskaya, Svetlana Plugatar, Natalya Smykova, Irina Kravchenko
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: zykova.vk@mail.ru

The collection of 8 ornamental plants in the Nikita Botanical Gardens (garden roses, irises,
daylilies, tulips, lilacs, cannas, clematis and chrysanthemum) account for 2,456 species,
cultivars and forms. The collections’ renewal is carried out by introduction, and also by
creating new domestic cultivars. A wide range of morphological and biological
characteristics qualitative variability within the species or the genus in each is represented
by the time being. The collections’ cultivars belong to different groups according to their
ornamental and biological characteristics: coloring, doubling, a flower form, flowering
duration, flowering term. The cultivars, which have been introduced over the last years, are
got through the process of introductive testing and are bred to put in the collections. As the
result of the introductive work, the collections’ biodiversity has been expanded constantly.
For the time being, the study of the new cultivars for the garden groups – hybrids
Hulthemia, spray roses, patio roses, the group of English roses’ cultivars by D. Austin’s
introduction, Atragene, Flammula, Tangutica, Texensis clematis’groups and Veridiflora
tulips’ garden class is being done. The cultivars with the new characteristics are prepared
to put in the collection: polypetalous lilac cultivars, garden roses’ cultivars with a coffee
and blue coloring, with carved edges of petals, daylilies with a spider flower form, hybrid
irises with a spatial continuation of a beard that looks like a horn and a petaloid,
chrysanthemum cultivar with a filiform spider narrow-tubular inflorescence form, garden
cannas with a dark-violet – almost black-color of the leaves. These cultivars are the sources
of the new valued biological characteristics for the breeding work to create the perspective
domestic cultivars in the conditions of the south of Russia.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: garden roses, lilac, tulip, iris, daylily, chrysanthemum, clematis, canna.

113
113
Расширение биологического разнообразия коллекций цветочно-
декоративных растений Никитского ботанического сада

В.К. Зыкова, З.К. Клименко, Н.В. Зубкова, Л.М. Александрова, И.В. Улановская,
С.А. Плугатарь, Н.В. Смыкова, И.В. Кравченко
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: zykova.vk@mail.ru

Коллекции 8 цветочно-декоративных культур Никитского ботанического сада


(садовые розы, ирисы гибридные, лилейники, тюльпаны, сирени, канны, клематисы,
хризантемы) насчитывают 2456 видов, сортов и форм. Пополнение коллекций
осуществляется путем интродукции, а также путем создания новых отечественных
сортов. К настоящему моменту в каждой коллекции цветочно-декоративных
растений представлен широкий диапазон изменчивости морфологических и
биологических признаков в пределах данного вида или рода. Цветочные коллекции
включают от 2 до 34 садовых групп. Сорта коллекций относятся к разным группам
по основным декоративным и биологическим признакам: окраске, махровости,
форме цветка, продолжительности цветения, сроку цветения. Сорта,
интродуцированные в последние годы, проходят процесс интродукционного
испытания и размножаются для последующего введения в коллекции. В результате
интродукционной работы биологическое разнообразие коллекций постоянно
расширяется. В настоящее время проходят изучение сорта новых для коллекций
садовых групп – гибридов Hulthemia, роз спрей, роз патио, группа сортов английских
роз селекции Д.Остина у садовых роз, групп Atragene, Flammula, Tangutica, Texensis у
клематисов, садового класса Veridiflora у тюльпанов. Готовятся к введению в
коллекцию сорта с новыми для коллекции признаками: мультилепестковые сорта
сирени, сорта с кофейной и «голубой» окраской и сорта с резными краями
лепестков у садовых роз, сорта с пауковидной формой цветка у лилейника, сорта с
пространственным продолжением бородки в виде рога и петалоида у цветков ириса
гибридного, сорт с нитевидно-пауковидной, узкотрубчатой формой соцветия у
хризантем, сорта с тюльпанообразной формой цветка у клематиса, сорта с темно-
фиолетовой, почти черной окраской листьев у канны садовой. Эти сорта являются
источниками новых ценных биологических признаков для селекционной работы по
созданию отечественных перспективных сортов для условий Юга России.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант №


14-50-00079.

Ключевые слова: садовые розы, сирень, тюльпан, ирис, лилейник, хризантема,


клематис, канна.

114 114
Постерные презентазии
Poster Presentations

115
115
116 116
The role of a number of culture medium components in obtaining viable
regenerating plants of alfalfa

Sadagat Asadova
Institute of Molecular, Biology and Biotechnology, Matbuat avenue, 2A, Baku, Azerbaijan;
E-mail: biotexnoloqaz@mail.ru

It is known that with the use of certain methodological approaches, most plants can be
regenerated from cell tissue. But not always these techniques are quite effective, since the
reaction of different plant species to similar chemical and physical conditions of cultivation
is not the same. Regulation of the expression of certain genes by metabolic processes is an
undeniable fact, but direction and nature of metabolism in in vitro conditions has its own
specifics. If micropropagation involves the production of regenerating plants via indirect
morphogenesis, then this process consists of three stages: the induction of callusogenesis,
organogenesis or somatic embryogenesis, the production of regenerating plants. At each of
the three stages the mineral and hormonal composition in the culture medium varies to a
certain extent. Until now it is unclear what role one or another component of the culture
medium used at the stage of initiation of cell culture can play in the production of normal
regenerating plants. Moreover, interactions between mineral and hormonal components
can take place. And the question of how these interactions can influence the whole process
of micropropagation still remains undetermined. Therefore, with the use of the method of
mathematical experiment planning in the example of alfalfa, we tried to trace the degree of
participation of a number of culture medium components in the process of obtaining
normal viable regenerating plants.
A regular plan for fractional factorial analysis 210-5 (1/32 complete factorial analysis
210) was adopted for the planning of the experiment. The number of normal regenerating
plants obtained on the five arbitrarily taken embryoids was taken as optimization
parameters. Based on the obtained data 3 regression equations, optimum for
callusogenesis, embryogenesis and regenerative plants were calculated.

Keywords: factorial experiment, optimization parameter, biologically active substances,


mineral components, interfactor interactions, regeneration efficiency, viability of
regenerants.

117
117
The genetic resources database of fruit plants in Mountainous Dagestan
as a basis for development of adapted cultivars

Zagirbeg Asadulaev, Dzhalaludin Anatov, and Makhach Gaziev


Mountain Botanical Garden of the Dagestan Scientific Centre of the Russian Academy of
Sciences, M. Gadjiev Str., 45, Makhachkala, Republic Dagestan, 367000, Russian Federation;
E-mail: asgorbs@mail.ru

The results of a longtime (20 years) study of natural populations and local cultivars of
apricot, apple, pear, plum, peach and grapes in Mountainous Dagestan are presented. Their
diversity (361 cultivars and forms) are explained by the intensity of microevolutional
processes and the duration of civilization. The experimental plot s collection of clones and
selectional hybrids of studied fruit crops is developed and become more complete. A
number of limitations are noted in the forms and cultivars available in the collection: early
flowering of the apricot which for many years results to the loss of the greater part of the
crop because of recurrent frosts, lethality by rusty spotting and scab of pear and apple
cultivars and forms, wilt (Monilia) and shot-hole disease (Clasterosporium carpophilum) for
apricot and peach cultivarss. The developed selection program for creating its own adapted
apple tree assortment (87 hybrid forms) and apricot (22 hybrid forms) with the
involvement of the gene pool of Central Asian apricots with genetically fixed later flowering
is presented. The prospect of new direction in horticulture is grounded. It is intended to
enrich the gardens with cultivars containing a large number of biologically active
substances and antioxidants. The advantage of local cultivars and natural forms in the
significant content of these substances is shown in comparison with the introduced
cultivars that are widespread in the region. Methods for optimizing the location and
acceleration of fruiting have been developed and introduced in testing of large number of
hybrids’ seed progeny, material from natural population, introductions and grafting
selection forms.

Keywords: genetic resources, fruit crops, population forms, local cultivars, collections,
Mountainous Dagestan, adapted cultivars.

118 118
База данных генетических ресурсов природных популяций и
местных сортов плодовых растений Горного Дагестана как основа
для создания адаптированных сортов

З.М. Асадулаев, Д.М. Анатов, М.А. Газиев


ФГБУН Горный ботанический сад Дагестанского научного центра РАН, лаб. флоры и
растительных ресурсов, ул. М. Гаджиева, 45, г. Махачкала, Республика Дагестан,
367000, Российская Федерация; e-mail: asgorbs@mail.ru

Представлены результаты длительного (20 лет) изучения природных популяций и


местных сортов абрикоса, яблони, груши, сливы, персика, винограда в Горном
Дагестане, наличие большого разнообразия, которых (361 сортов и форма)
объясняется интенсивностью микроэволюционных процессов и длительностью
культуры. Создана и пополняется полевая коллекция клонов и селекционных
гибридов изученных плодовых культур. Отмечен ряд недостатков у имеющихся в
коллекции форм и сортов: у абрикоса раннее цветение, что во многие годы из-за
возвратных заморозков приводит к потере большей части урожая; поражаемость
ржавчиной и паршой сортов и форм груши и яблони, монилиозом и
клястериспориозом сортов абрикоса и персика. Приведена разработанная
селекционная программа по созданию собственного адаптированного сортимента
яблони (87 гибридных форм), и абрикоса (22 гибридные формы) с привлечением
генофонда среднеазиатских абрикосов с генетически закрепленным поздним
цветением. Обоснована перспективность нового направления в садоводстве,
ставящее своей задачей обогащение садов сортами, содержащими большое
количество биологически активных веществ и антиоксидантов. Показано
преимущество местных сортов и природных форм в значительном содержании этих
веществ по сравнению с интродуцированными сортами, имеющими широкое
распространение в регионе. Разработаны и внедрены методы оптимизации
размещения и ускорения плодоношения при испытании многочисленного
семенного гибридного потомства, материала из природных популяций,
интродуцентов и привитых селекционных форм.

Ключевые слова: генетические ресурсы, плодовые культуры, популяционные


формы, местные сорта, коллекции, Горный Дагестан, адаптированные сорта.

119
119
Screening hybrids seedling of Iris × germanica L. to salinity

Mohammad Hossein Azimi1, Asghar Ebrahimi2


1Department of Genetic and Breeding, Ornamental Plants Research Center (OPRC),

Horticulture Sciences Research Institute (HSRI), Agricultural Research, Education and


Extension Organization (AREEO), Mahallat, Iran; E-mail: m.h.azimi58@gmail.com
2Municipality of Mahallat, Iran

In order to identify the salt tolerance of hybrids an experiment was conducted with four
different hybrids of German Iris under different levels of salinity tension with
concentrations of 4, 6, 8 and 12 ds/m from a source of sodium chloride. This experiment
was factorial based on randomized complete blocks design (RCB) with three replications in
the research park of Mahallat municipality. The result showed that by physiological and
morphological factors, the hybrids with code=23 were better than other hybrids, and the
less level of morphological factors was observed in the hybrids with code=14; the less rate
of physiological factors was identified in the hybrids with code=18, and the highest level of
proline was specified in the hybrids with code=14. The result showed that the highest level
of peroxidase was at the salinity level of 8 ds/m; the highest level of chlorophyll (a, b) and
carotenoid were noted at salinity level of 6 ds/m and the highest level of proline was
observed at salinity level of 12 ds/m. The interaction result showed that the highest level of
chlorophyll (a, b) was evaluated in the hybrid with code=54 at the salinity level of 12 ds/m.
Also the highest level of carotenoid at the salinity level of 6 ds/m was identified in the
hybrid with code=54; the highest level of proline at the salinity level of 4 ds/m was
observed in the hybrid with code=54. The different levels of salinity make it is possible to
screen different hybrids and special selection hybrids for a specific salinity level, and we
consider this method as a rather promising one.

Keywords: German Iris, hybrid, proline, peroxidase, chlorophyll, level of salinity.

120 120
Biologically active compounds in Myrtus communis L.

Nadezhda Bakova1, Ekaterina Bakova1, Anfisa Paliy1, Dmitri Konovalov2


1Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: tkdizain@yandex.ru
2Pyatigorsk Medical-Pharmaceutical Institute-Branch of the State Public Health Service of

the Volga Federal Medical University of the Russian Ministry of Health, 11 Kalinin Prospect,
Pyatigorsk, Stavropol Krai, 357532, Russian Federation

The common myrtle (Myrtus communis L.) is a promising medicinal plant for the creation
of herbal medicines with anti-inflammatory, antidiabetic, anti-mutagenic, proapoptotic,
antiatherogenic, antiulcer, insecticidal and protozoicidal properties. Thus, the dynamics of
polyphenolic compounds and myrtle essential oil extraction depending on the ethyl
alcohol volume fraction in the extractant (water-ethanol mixture) was studied in the
samples grown under the conditions of the Southern coast of Crimea. The total phenolics
content was determined according to the Folin-Ciocalteu method using Uv-Vis
spectrophotometry. Investigations of the phenolic complex qualitative composition was
carried out using the HPLC/DAD method. Component composition of the aromatic
substances in the aqueous ethanol extracts was found out using the GC/MS method. The
maximum of total phenolics was revealed in 70% water-ethanol extract. The analysis of
the phenolic compounds qualitative composition demonstrated that in aqueous and 20%
water-ethanol extracts, the maximum amount of gallic acid (up to 708 mg/dm3) was
presented. An increase in the ethanol volume fraction in the extractant to 90% led to
decrease in the gallic acid concentration to 25.8 mg/dm3. Ethanol volume fraction in the
extractant has a slight effect on the ellagic acid extraction – from 21.9 to 42.3 mg/dm3.
When the ethanol volume fraction was from 20 to 40% quercetin glycosides were
extracted. The maximum of myricetin-3-O-rhamnoside (1,045.48 mg/dm3) was obtained
when the raw material was extracted with 70% aqueous ethanol. The studies of the
volatile substances qualitative composition in the water-ethanol extracts demonstrated
that the main components of myrtle essential oil (myrtenyl acetate, linalool and
eucalyptol) were identified only in 70% and 90% aqueous ethanol extracts. Thus, 70%
water-ethanol extract of the myrtle raw material had the maximum concentrations of total
phenolics, gallic acid and myricetin-3-O-rhamnoside, as well as all the main myrtle volatile
compounds (myrtenyl acetate, linalool and eucalyptol) were also found in the extract. This
extract is a promising source of biologically active substances.

Keywords: common myrtle, water-ethanol extracts, total phenolics, phenolic acids,


flavonoids, volatile components of essential oil.

121
121
Биологически активные соединения Myrtus communis L.

Н.Н. Бакова1, Е.Ю. Бакова1, А.Е. Палий1, Д.А. Коновалов2


1ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: tkdizain@yandex.ru
2Пятигорский медико-фармацевтический институт-филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ

Минздрава России, пр. Калинина, 11, г. Пятигорск, Ставропольский край, 357532,


Российская Федерация

Мирт обыкновенный Myrtus communis L. является перспективным лекарственным


растением для создания растительных препаратов с противовоспалительным,
противодиабетическим, противомутагенным, проапоптозным, антиатерагенным,
противоязвенным, инсектицидным, протозоицидальным действием. В связи с этим
изучена динамика извлечения полифенольных соединений и эфирного масла мирта,
выращиваемого в условиях Южного берега Крыма в зависимости от объемной доли
этилового спирта в экстрагенте (водно-этанольной смеси). Суммарное содержание
фенольных соединений определяли методом Фолина-Чиокальтео с помощью Uv-Vis
спектрофотометрии. Исследование качественного состава фенольного комплекса
проводили с помощью метода ВЭЖХ с диодно-матричным детектированием.
Компонентный состав ароматических веществ в водно-этанольных экстрактах
устанавливали с помощью метода ГХ/МС. Максимальное содержание суммы
фенольных соединений выявлено в 70% водно-этанольном экстракте. Анализ
качественного состава фенольных соединений показал, что в водном и 20% водно-
этанольном экстрактах содержатся максимальные количества галловой кислоты до
708 мг/дм3. Увеличение объемной доли этанола в экстрагенте до 90% приводит к
уменьшению концентрация галловой кислоты до 25,8 мг/дм3. Объемная доля
этанола в экстрагенте незначительно влияет на извлечение эллаговой кислоты – от
21,9 до 42,3 мг/дм3. При объемной доле этанола от 20 до 40% экстрагируются
гликозиды кверцетина. Максимальное извлечение мирицетин-3-О-рамнозида –
1045,48 мг/дм3 происходит при экстрагировании сырья 70% водным этанолом.
Изучение качественного состава летучих веществ полученных водно-этанольных
экстрактов показало, что основные компоненты эфирного масла мирта (миртенил
ацетат, линалоол и эвкалиптол) идентифицированы только в 70% и 90% водно-
этанольных экстрактах.
Таким образом, 70% водно-этанольный экстракт из растительного сырья
мирта обыкновенного содержит максимальные концентрации суммы фенольных
соединений, галловой кислоты и мирицетин-3-О-рамнозида, в экстракте также
обнаружены все основные летучие соединения мирта (миртенил ацетат, линалоол и
эвкалиптол). Данный экстракт является перспективным источником биологически
активных веществ.

Ключевые слова: мирт обыкновенный, водно-этанольные экстракты, фенольные


соединения, фенольные кислоты, флавоноиды, летучие компоненты эфирного
масла.

122 122
Clonal propagation of grapes in vitro and adaptation ex vitro

Abdulmalik Batukaev1,2, Eliza Sobralieva1


1Chechen State University1, Dudayev Boulevard, 17a, Grozny, 364060, Russian Federation
2Complex Research Institute of the Russian Academy of Sciences, Grozny, Russian

Federation; E-mail: batukaevmalik@mail.ru

To improve the plants today different biotechnology methods are used. Micropropagated
in vitro plants are not directly transfer to environmental conditions and need a period of
adaptation.
The objects were complex-resistant grape cultivars. As an initial material, intensively
growing green shoots of grapes were taken, which were cut into single-eyed cuttings and
further carried out the isolation of meristems in laminar flow cabinet. The experiments
included cultivars ‘Augustin’ and ‘Moldova’.
Growth regulators are one of the most important and indispensable components of
the culture medium. Their careful selection and identification of optimal concentrations
make it possible to increase the effectiveness of grape micropropagation method. The
experiments showed that shoot regeneration from isolated apexes occurred at all
concentrations of 6-BAP. More effective was 6-BAP at 0.5-1.0 mg L-1. To accelerate the
process of microshoots elongation the effect of gibberellic acid (GA3) in various
concentrations and combination with 6-BAP was investigated. The combination of 0.5 mg
L-1 6-BAP and 1.0 mg L-1 GA3 the best result was shown. This combination of growth
regulators accelerated the elongation of microshoots, and in two weeks the size of shoots
reached 25-26 mm.
At the stage of ex vitro plant adaptation the effect of lignohumate was studied due to a
number of its positive properties, first of all, the ability to increase the resistance of plants
to unfavorable environmental factors. By the soluation of this drug roots were treated, and
also after planting the plants immediately watered the substrate. For optimal effect
establishing the, different concentrations of the drug were studied. As a control the distilled
water was used. Lignohumate at all concentrations had a positive effect on plants. It is
especially necessary to note the positive effect of lignohumate on the leaf area increase.
The height of the plant was increased after 30 day adaptation with 1.0 g L -1 drug
concentration.

Keywords: grape cultivar, plant micropropagation, growth regulators, lignohumate.

123
123
Клональное размножение винограда in vitro и адаптация ex vitro

А.А. Батукаев1,2, Э.А. Собралиева1


1Чеченский государственный университет, Бульвар Дудаева, 17а, г. Грозный, 364060,

Российская Федерация;
2Комплексный научно-исследовательский институт РАН, г. Грозный, Российская

Федерация; e-mail: batukaevmalik@mail.ru

Для улучшения качества растений в настоящее время используются различные


биотехнологические методы. In vitro размноженные растения не приспособлены к
непосредственной пересадке в условия окружающей среды, поэтому при высадке их
в нестерильные условия необходим период адаптации.
Объектом исследований были комплексно-устойчивые сорта винограда. В
качестве исходного материала были взяты интенсивно растущие зеленые побеги
винограда, которые разрезали на одноглазковые черенки и далее проводили
вычленение меристем в ламинарных боксах. В эксперимент были включены сорта
Августин и Молдова.
Одним из важнейших и неотъемлемых компонентов питательной среды
являются регуляторы роста. Их тщательный подбор и выявление оптимальных
концентраций позволяют повысить эффективность метода клонального
микроразмножения винограда. Проведенные эксперименты показали, что
регенерация побегов из изолированных апексов происходила при всех
концентрациях 6-БАП. Эффективное влияние 6-БАП оказал в диапазоне
концентрации 0,5-1,0 мг/л. Для ускорения процесса удлинения микропобегов
параллельно проводили изучение действия гибберелловой кислоты (ГК) в
различных концентрациях в сочетании с 6-БАП. Как показал опыт, при сочетании 0,5
мг/л 6-БАП и 1,0 мг/л ГК был достигнут наилучший результат. Такое сочетание
препаратов ускоряло вытягивание побегов, и через две недели размер побегов
достигал 25-26 мм.
На этапе адаптации растений в условиях ex vitro изучение действия
лигногумата связано, прежде всего, с рядом его положительных свойств, особый
интерес из которых представляет способность повышать устойчивость растений к
неблагоприятным факторам среды. Водным раствором препарата проводили
обработку корней, а также поливали им субстрат сразу после высадки растений. С
целью установления оптимального эффекта изучали различные концентрации
препарата. Контролем служила дистиллированная вода. Лигногумат при всех
концентрациях оказывал положительное действие на растения. Особенно
необходимо отметить положительное влияние лигногумата на увеличение площади
листьев. Достоверно можно утверждать также об увеличении высоты растений на
30 сутки адаптации при концентрации препарата 1,0 г/л.

Ключевые слова: сорта винограда, микроразмножение растений, регуляторы роста,


лигногумат.

124 124
Biochemical composition changes in Hydrangea macrophylla leaves
during vegetative period

Viktor Bekhterev, Valentina Malyarovskaya, Oksana Belous


Federal State Budgetary Scientific Institution «Russian Research Institute of Floriculture
and Subtropical Crops, Fabriciusa st. 2-28, Sochi, 354002, Krasnodar region, Russian
Federation; E-mail: oksana191962@mail.ru

The gas chromatography-mass spectrometry method was used to study ethanol extracts of
Hydrangea macrophylla Ser. leaves. As a result, 11 endogenous organic substances were
identified and extracted: isovaniline, vanillic acid, ethyl ester, ethyl carbohydrate, α-d-
glucopyranoside, palmitic acid, palmitic acid ester, acyclic monounsaturated diterpene,
alcohol - phytol, octadecyl and aromatic hydrocarbon from the group of diarylethylenes
2,4'-Dihydroxy-stilbene, squalene, vitamin E, phytosterols γ-sitosterol / β-sitosterol. The
most interesting among them are antioxidants, in particular aromatic hydrocarbon from
the group of diarylethylenes (2,4'-dihydroxy-stilbene), squalene, phytosterols γ-sitosterol /
β-sitosterol. During the vegetative period from March to November, changing in the
content of these compounds in plant leaves was observed. In the most favorable period
with optimal hydrothermal conditions at the beginning of vegetation (March-April)
maximum concentration in the leaves was noted (2,4'-Dihydroxy-stilbene - 14.0%, γ-
sitosterol / β-sitosterol - 5.7%). During this period, there was no squalene observed.
However, during the flowering period coinciding with unfavorable hydrothermal
conditions for H. macrophylla in the region, the content of 2,4'-dihydroxy-stilbene and γ-
sitosterol / β-sitosterols decreased to 8.5% and 1.7%, respectively. In the unfavorable
conditions Squalene was found in all H. macrophylla cultivars, its content was 2.4% in
average. Cultivar effect is important on the intensity of metabolic processes in H.
macrophylla plants. So relatively resistant cultivars ('Altona', 'Draps Wonder', 'Admiration')
were characterized by the greatest content of 2,4'-Dihydroxy-stilbene (10.6%, 10.8% and
15.6%, respectively ) and γ-sitosterol / β-sitosterol (2.0%, 1.9% and 2.1%, respectively)
during the period of intensive vegetation. On the other hand, drought susceptible cultivars
'Madame Faustin' and 'Harlequin' showed the lowest content of these substances (5.1%
and 1.6%) and (1.1% and 1.4%), respectively.

Keywords: Hydrangea macrophylla Ser., organic substances, gas chromatography-mass


spectrometry, vegetative period, hydrothermal factors, antioxidants.

125
125
Динамика биохимического состава листьев Hydrangea macrophylla в
течение вегетации

В.Н. Бехтерев, В.И. Маляровская, О.Г. Белоус


Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский
научно-исследовательский институт цветоводства и субтропических культур»,
ул. Яна Фабрициуса, 2-28, г. Сочи, Краснодарский край, 354002, Россия;
e-mail: oksana191962@mail.ru

Методом газовой хромато-масс-спектрометрии проведено изучение этанольных


экстрактов листьев Hydrangea macrophylla. Было определено и идентифицировано
11 эндогенных органических веществ: изованилин, этиловый эфир ванилиновой
кислоты, этил α-d-глюкопиранозид, пальмитиновая кислота, эфир пальмитиновой
кислоты, ациклический одноненасыщенный дитерпеновый спирт – фитол,
октадецил, ароматический углеводород из группы диарилэтиленов, сквален,
витамин E, фитостерины γ-ситостерол/β-ситостерол. Среди которых наибольший
интерес представляют антиоксиданты, в частности 2,4'-дигидрокси-стильбен,
сквален и фитостерины. Содержания этих соединений в листьях растений
изменяется с марта по ноябрь. Максимальная концентрация (2,4'-дигидрокси-
стильбен - 14,0%; γ-ситостерол/β-ситостерол – 5,7%) отмечена в начале вегетации
(март-апрель), в наиболее благоприятный для роста и развития растений
промежуток времени. К III-декаде июля (период массового цветения растений)
складываются неблагоприятные гидротермические условия в регионе, что привело
к уменьшению содержания 2,4'-дигидрокси-стильбена и γ-ситостерол/β-
ситостеролов до 8,5% и 1,7%, соответственно. В этот период у всех сортов
H. macrophylla был определен сквален, содержание которого в среднем для культуры
составило – 2,4%. Сортовые особенности определяли интенсивность
метаболических процессов в растениях гидрангеи крупнолистной. Относительно
устойчивые сорта (Altona, Draps Wonder, Admiration) в напряженный летний период
вегетации характеризовались наибольшим содержанием 2,4'-дигидрокси-стильбен
(10,6%, 10,8% и 15,6%, соответственно) и γ-ситостерола/β-ситостерол (2,0%, 1,9% и
2,1%, соответственно), а неустойчивые сорта Madame Faustin и Harlequin напротив
наименьшим содержанием этих веществ (5,1% и 1,6%) и (1,1% и 1,4%),
соответственно.

Ключевые слова: Hydrangea macrophylla Ser., органические вещества, газовая


хромато-масс-спектрометрия, период вегетации, гидротермические факторы,
антиоксиданты.

126 126
Intraspecific polymorphism of Linum usitatissimum L. by
morphophysiological parameters of seeds

Nina Bome, K. Korolev, A. Bome


Tyumen State University, 6 Volodarskogo Street, Tyumen, 625003, Russian Federation;
E-mail: bomena@mail.ru

To provide a growing people population with organic food and in the context of a climate
change, the expansion of the range of cultivated plants is gaining increased attention. The
culture of flax, which has become widespread in the Republic of Belarus, remains poorly
studied in the agricultural zone of the Tyumen region.
Successful introduction is determined by the high ecological and biological potential of the
seeds. The aim of the research is to search morphophysiological criteria of seeds for rapid
testing during the introduction of flax.
Seeds of 17 cultivars of flax grown on cultivated sod-podzolic soil (humus – 3.67, pH -
6.6) of the experimental biostation Tyumen State University "Lake Kuchak" (Tyumen
region, Nizhnetavdinsky region) in germination energy and laboratory germination
corresponded to the State standard (GOST) and not inferior to the seeds of the Belarusian
reproduction. In comparison, the average population values of studied reproductions by
the morphometric parameters (length, width) and the shape of the seeds, length of shoots
and roots of the seedlings, no statistically significant differences were found. In structure of
raw biomass of seedlings from the seeds of both reproductions, the proportion of shoots
has been predominated (66.6-62.4%). At the same time, sprouts of cultivars ‘Vesta’,
‘Velizhsky Kriazh’, ‘Fliz’ and ‘Biruza’ from the seeds of Tyumen reproductions formed more
powerful primary root system (44.5-64.3%).
To understand the mechanism of adaptation of flax in northern agrocenoses and to
study the physiological status of seeds, was used optical counter of chlorophyll Spad 502
(Minolta Camera Co., Ltd., Tokyo, Japan) which provides express diagnostics without
seizure of plants. The Spad measurement is based on the optical density calculated from
the absorbance of leaf at 650 nm (maximum absorption of chlorophylls a and b) and optical
density at 940 nm, taking into account the thickness of the leaf. The informative nature of
the application of this criterion in the selection of adaptive forms of flax is confirmed by the
positive correlation with the dimensions (length, width) and the mass of 1000 seeds (r =
0.20, 0.65, 0.49), root length (r = 0.71), linear the size of the leaves (r = 0.16, 0.49).
The selection of forms with valuable characteristics can be carried out at the initial
stages of ontogenesis in simulated conditions. In this case, an objective evaluation is
achieved on basis of a complex of characteristics of the biological status of seeds and the
morphophysiological properties of seedlings.

Keywords: chlorophyll, Spad 502, flax, introduction, adaptation.

127
127
Внутривидовой полиморфизм Linum usitatissimum L. по
морфофизиологическим показателям семян

Н.А. Боме, К.П. Королев, А.Я. Боме


Федеральное государственное образовательное учреждение высшего образования
«Тюменский государственный университет, ул. Володарского, д. 6, г. Тюмень,
Тюменская область, 625003, Российская Федерация; e-mail: bomena@mail.ru

Чтобы обеспечить растущее население людей органическими продуктами питания и


в контексте изменения климата, расширение ассортимента культурных растений
приобретает все большее внимание. Культура льна, которая получила широкое
распространение в Республике Беларусь, остается плохо изученной в
сельскохозяйственной зоне Тюменской области. Успешное внедрение определяется
высоким экологическим и биологическим потенциалом семян. Целью исследования
является поиск морфофизиологических критериев семян для быстрого
тестирования во время введения льна. Семена 17 разновидностей льна,
выращенного на культивируемой дерново-подзолистой почве (гумус – 3,67, рН - 6,6)
экспериментальной биостанции Тюменского государственного университета «Озеро
Кучак» (Тюменская область, Нижнетавдинский район) в области прорастания и
лабораторного прорастания соответствовали Государственный стандарт (ГОСТ) и не
уступает семенам белорусского воспроизводства. Для сравнения были найдены
средние значения популяции изученных репродукций по морфометрическим
параметрам (длина, ширина) и форма семян, длина побегов и корней сеянцев,
статистически значимых различий. В структуре сырой биомассы саженцев из семян
обоих репродукций преобладает доля побегов (66,6-62,4%). В то же время проростки
сортов Веста, Велижский кряж, Флиз, Бирюза из семян тюменских репродукций
формировали более мощную первичную корневую систему (44,5-64,3%).
Для понимания механизма адаптации льна в северных агроценозах и изучения
физиологического статуса семян использовался оптический счетчик хлорофилла
Spad 502 (Minolta Camera Co., Ltd., Токио, Япония), который обеспечивает экспресс-
диагностику без захвата растений. Измерение спада основано на оптической
плотности, рассчитанной по поглощению листьев при 650 нм (максимальное
поглощение хлорофиллов a и b) и оптической плотности при 940 нм с учетом
толщины листа. Информативный характер применения этого критерия при выборе
адаптивных форм льна подтверждается положительной корреляцией с размерами
(длиной, шириной) и массой 1000 семян (r = 0,20; 0,65; 0,49), длиной корня ( r = 0,71),
линейный размер листьев (r = 0,16; 0,49).
Выбор форм с ценными характеристиками может осуществляться на
начальных этапах онтогенеза в моделируемых условиях. В этом случае объективная
оценка достигается на основе комплекса характеристик биологического статуса
семян и морфофизиологических свойств рассады.

Ключевые слова: хлорофилл, Spad 502, лен, интродукция, адаптация.

128 128
Development of large-scale ecological-phytocoenotic maps as an
informational basis for regional plant diversity monitoring and
conservation

Nikolay Ermakov, Vladislav Korzhenevskiy, Yurii Plugatar


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: brunnera@mail.ru

Modern geobotanical maps give a synthetic knowledge about the regional flora and
vegetation. They play an important role for fundamental and applied studies of nature
conservation and biological resources. The main aim of the study is development of the
large-scale vegetation map of steppe biome in Crimea peninsula for the assessment of
ecological peculiarities of biotopes, phytocoenology and various parameters of plant
species distribution. The basis for the study was 340 relevés of steppe communities
collected from Kazantip peninsula (Eastern Crimea). The classification of plant
communities was carried out using the Braun-Blanquet approach. The plot records were
classified by TWINSPAN. Syntaxa ecology was studied with DCA ordination. The spatial
structure of steppe vegetation was studied using satellite image WorldView-2 (resolution
1.8 m). The total diversity of steppe biome plant communities was assigned to five classes
14 orders, 16 alliances and 26 associations. Results of DCA ordination demonstrated an
arrangement of vegetation associations along leading ecological factors. The Axis 1 was
interpreted as complex gradient of two factors – soil salinity and soil moisture regime. Axis
2 of the DCA was explained in terms of substrate type (petrophytic factor). Four ecological
sets of syntax observed along leading axes represent micro-combinations of plant
communities related to certain landforms in the landscape. These micro-combinations
were used as basic spatial categories for the map legend construction. Application of
satellite images of high resolution (1.8 m) allowed developing the large-scale vegetation
map representing tree levels of spatial vegetation structure of halophytic-steppe vegetation
mosaic – certain plant communities, micro- and meso-combinations of vegetation types.
The map was used for evaluation of ecology and distributions of Red Data Book plant
species in their biotopes and for monitoring.

This study was funded by research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: vegetation mapping, biodiversity, rare species, plant ecology, steppe, Crimea.

129
129
Создание крупномасштабных эколого-фитоценотических карт как
информационная основа мониторинга и сохранения регионального
фиторазнобразия

Н.Б. Ермаков, В.В. Корженевский, Ю.В. Плугатарь


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, Никита, г. Ялта,
Республика Крым, 298648, Российская Федерация; e-mail: brunnera@mail.ru

Современные геоботанические карты представляют синтетическое знание о


региональной флоре и растительности. Они играют важную роль в
фундаментальных и прикладных исследованиях биологических ресурсов и охраны
природы. Основная цель исследования - создание крупномасштабной карты
растительности степного биома для оценки экологических особенностей биотопов,
фитоценологии и различных параметров распространения ценных видов растений.
Основой исследования выступили 340 геоботанических описаний степных
сообществ, собранные на полуострове Казантип (Восточный Крым). Классификация
растительных сообществ выполнена с использованием метода Браун-Бланке.
Пробные площади были классифицированы в TWINSPAN. Экология синтаксонов
изучена с использованием DCA ординации. Пространственная структура степной
растительности исследована с использованием космических снимков WorldView-2
(разрешение 1,8 м). Общее разнообразие сообществ степного биома представлено
пятью классами, 14 порядками, 16 союзами и 26 ассоциациями. Результаты DCA
ординации демонстрируют распределение ассоциаций растительности вдоль
ведущих экологических факторов. Ось 1 интерпретирована как комплексный
градиент двух факторов – засоления почвы и режима почвенного увлажнения. Ось 2
демонстрирует важность фактора типа субстрата (фактор петрофитности). Четыре
экологических ряда синтаксонов наблюдаемые вдоль ведущих осей ординации
представляют микрокомбинации растительных сообществ, которые связаны с
определенными формами рельефа ландшафта. Эти микрокомбинации были
использованы как базовые пространственные категории при создании легенды
геоботанической карты. Использование космических снимков высокого разрешения
(1,8 м) позволило создать крупномасштабную карту, включающую три уровня
пространственной организации галофитно-степной мозаики растительности -
отдельные сообщества, микро- и мезокомбинации типов растительности. Созданная
карта была использована для оценки экологических свойств и распространения
видов Красной Книги в их биотопах, а также для организации мониторинга.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант


№ 14-50-00079.

Ключевые слова: картографирование растительности, биоразнообразие, редкие


виды, экология растений, степи, Крым.

130 130
Drought resistance and photoactivity of leaf apparatus of peach cultivars
under conditions of the Southern Coast of Crimea

Olga Fedorova, Anatoly Smykov, Iuliia Ivashchenko, Yuriy Ivashchenko


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: immergruen@yandex.ru

Local climate is highly suitable for the cultivation of various fruits including peach (Prunus
persica (L.) Batsch). Peach fruits are in great demand all over the world. The main limiting
factor for the peach growing in the Crimea is the moisture deficit during the setting of
reproductive buds and the ripening time. Therefore, the study on the mechanism for
adapting the peach leaf apparatus to dehydratation is a very important challenge under
conditions of the Southern Coast of Crimea.
Investigations were carried out in the Nikita Botanical Gardens. The project
comprised six cultivars of foreign origin. The cultivar ‘Cardinal’ has been used as control.
The weather conditions during the experimental period were extremely unfavorable for
the plants. This fact made it possible to evaluate objectively the introduced peach cultivars
for their adaptivity to the drought conditions (at 30.2°С on average and 37.0°С maximally
and under precipitation of 0 mm). The water content in leaves, the water loss over the
course of wilting and the turgor restoration ability have been measured according to
conventional techniques (Lishchuk et al., 1991; 1999). The photosynthetic activity has been
evaluated according to indicators of chlorophyll fluorescence induction (Kautsky effect)
determined by means of the portable fluorimeter "Floratest". It has been ascertained that
studied peaches were mainly susceptible to drought under stress conditions of August. The
maximum turgor restoration was shown by cultivars ‘Asmik’ (80%) and ‘Zempush’ (68%),
the minimum one – by ‘Favorita’ (22%). The use of parameters of photo-induced curve of
chlorophyll fluorescence (Fm; (Fm-Fst)/Fm; Fm/Fst) allowed to make an objective assessment
of introduced peach cultivars relating to their resistance to the summer drought and to
determine the varietal differences. The cultivars ‘Asmik’ and ‘Zempush’ have kept the most
sustainable photosynthetic activity.

This study was funded by the research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Prunus persica, introduced cultivars, fluorescence, photosynthetic activity,


drought, water regime.

131
131
Устойчивость к засухе и фотоактивность листового аппарата сортов
персика в условиях Южного берега Крыма

О.С. Федорова, А.В. Смыков, Ю.А. Иващенко, Ю.В. Иващенко


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: immergruen@yandex.ru

Климат Крымского полуострова является оптимальным для успешного


возделывания многих плодовых культур, в том числе и персика (Prunus persica
(L.) Batsch). Плоды персика пользуются большим спросом у населения всего мира.
Основным лимитирующим стресс-фактором выращивания персика в Крыму
является дефицит влаги в период созревания плодов и закладки генеративных
почек. Изучение механизмов адаптационной способности к фактору обезвоживания
листового аппарата персика в условиях Южного берега Крыма является весьма
актуальным.
Исследования проводили в Никитском ботаническом саду. В изучении
находилось 6 сортов персика иностранного происхождения. Контрольный сорт –
Кардинал. Климатические условия в период проведения опыта для растений
оказались экстремальными, что позволило объективно оценить
интродуцированные сорта персика на адаптивость к засушливым условиям
произрастания (температура воздуха средняя – 30,2°С, максимальная – 37,0°С,
количество осадков 0 мм). Показатели содержания воды в листьях, потери влаги в
процессе завядания и способность восстанавливать тургор определяли в
соответствии с общепринятыми методиками (Лищук и др., 1991, 1999).
Фотосинтетическую активность характеризовали по показателям индукции
флуоресценции хлорофилла (эффект Каутского), полученным с помощью
портативного флуориметра «Флоратест». Установлено, что в стрессовых условиях
августа сорта персика были подвержены воздействию засухи в разной степени.
Максимальным восстановлением листьями тургора отличились сорта Асмик (80 %)
и Земпуш (68 %), минимальным – Фаворита (22 %). Использование параметров
фотоиндуцированной кривой флуоресценции хлорофилла (Fm; (Fm-Fst)/Fm; Fm/Fst)
позволило объективно оценить интродуцированные сорта персика на устойчивость
к засушливым условиям летнего периода и выявить сортовые различия. Наиболее
стабильную фотосинтетическую активность сохраняли сорта Асмик и Земпуш.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: Prunus persica, интродуцированные сорта, флуоресценция,


фотосинтетическая активность, засуха, водный режим.

132 132
Effectiveness of high cytokinin levels on strelitzia micropropagation

Junia R Mendonça Figueiredo1, Patrícia Duarte de Oliveira Paiva2, Diogo Pedrosa Corrêa
da Silva2, Renato Paiva3, Rafaela Ribeiro de Souza3, and Michele Valquíria dos Reis3
1Universidade Vale do Rio Verde UNINCOR, Três Coraçes-MG, Brazil
2Universidade Federal de Lavras UFLA, Departamento de Agricultura, 37200-000 Lavras-

Minas Gerais, Brazil; E-mail: patriciapaiva@dag.ufla.br


3Universidade Federal de Lavras , Departamento de Biologia, 37200-000 Lavras-Minas

Gerais, Brazil

The in vitro propagation of strelitzia (Strelitzia reginae Banks) seedlings may have
limitations during multiplication, and alternatives to optimize this process are needed
which may contribute to improve the propagation of many other species. In this way, the
objective was to optimize the multiplication process of strelitzia by modifying the cytokinin
concentrations, using light levels of these compounds. Shoots with 2.0 cm long obtained
from in vitro embryo germination were excised and inoculated in MS medium
supplemented with 0, 5, 10 and 20 μM 6-benzylaminopurine (BAP) or 0, 5, 10 and 15 μM
thidiazuron (TDZ) and maintained for 60 days in a growth room. The results showed that
20 μM BAP provided a better shoot formation, with an average of 1.46 shoots per explant,
being observed in some explants up to 4.0 shoots which was 46% higher as compared with
the control. Besides the increase in shoot number, it was observed a reduction in shoot
length (2.71 cm), as well as an increase in oxidation of the culture medium. Otherwise, the
use of TDZ was not effective to stimulate the formation of new shoots. The results showed
that 20 μM BAP can be used for in vitro multiplication of streliztia.

The authors are thankful to CNPq, Capes and Fapemig for the financial support.

Keywords: Strelitzia reginae, multiplication, BAP, in vitro.

133
133
Variation of fruits morphometric parameters of date plum (Diospyros
lotus L.) germplasm collection

Olga Grygorieva1, Svitlana Klymenko1, Yulia Vinogradova2, Olena Vergun1, Jan Brindza3
1M.M. Gryshko National Botanical Gardens of Ukraine, National Academy of Sciences,

Timiryazevska Str., 1, 01014, Kyiv, Ukraine; E-mail: olgrygorieva@gmail.com


2N.V. Tsitsin Main Botanical Garden of Russian Academy of Sciences, Botanicheskaya, 4,

Moscow, Russian Federation


3Institute of Biological Conservation and Biosafety, Slovak University of Agriculutre in

Nitra, Tr. Andrea Hlinku 2, Nitra, Slovak Republic

Сollection, identification, classification, and evaluation of genetic resources have great


importance in terms of using different genotypes. The aim of this study was to determine
morphometric differences of fruits and seeds among date plum (Diospyros lotus L.)
genotypes. Studied trees of Diospyros lotus have been growing more than 45 years in
Arboretum Mlynany (Slovakia) from the seeds received in 1970 from Korea, China and
Japan. The differences in weight, shape, size and color of fruits and seeds were noted.
Outer integument may be light yellow, dark yellow or brown in the stage of fruit’s
formation. Mature fruits are blue-black or dark brown with white or a grey wax coating,
which is especially noticeable when the fruit is dried. Fruits can be divided according to the
color of the inner flesh into the forms with light and dark pulp. The morphometric
parameters were following: fruit weight from 0.24 to 7.74 g, fruit length from 9.62 to 22.07
mm, fruit diameter from 9.80 to 23.64 mm, seed weight from 0.09 to 1.71 g, seed length
from 6.89 to 16.18 mm, seed width from 3.40 to 9.94 mm, seed thickness from 1.93 to 5.08
mm and number of seeds in the fruit from 0 to 9. The shape indexes of fruits and seeds
varied from 0.75 to 1.28 and from 1.32 to 2.40, respectively. The analysis of coefficient of
variation showed the difference of variability of morphological signs between Diospyros
lotus samples. Data showed that the most variability of important selection signs are the
number of seeds in fruit – from 16.98 to 82.35 %, seed weight – from 9.11 to 57.61 % and
fruit weight – from 8.59 to 32.17 %. The results indicated very high correlations between
fruit weight and fruit diameter (r = 0.952). High correlations observed between fruit height
and seed height (r = 0.870), seed width and fruit diameter (r = 0.782) and fruit weight (r =
0.764). The presence of three groups of genotypes was revealed. The characteristics
inheriting for each group were described in detail. The results demonstrate the presence of
a broad reaction norm within the introductory population of Diospyros lotus. Two
individuals have the largest fruits (big size and big weight) and may be used in further
breeding work as edible cultivars. Five individuals have the biggest seed number in the
fruit and may be used in further selection work as the rootstock for Diospyros kaki L.

Keywords: Diospyros lotus, fruits, morhometric parameters.

134 134
Influence of a soil drought on photosynthesis and a water regime of
Viburnum tinus L. in the conditions of the Southern Coast of the Crimea

Oleg Ilnitsky, Andrey Pashtetskiy


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation; E-
mail: pashteckiy@gmail.com

The eco-physiological reaction of Viburnum tinus L. on effect of a progressive soil drought


has been studied. The optimum thresholds and zones of a soil moisture, temperature and
luminance, that limit photosynthesis and transpiration of Viburnum tinus during a summer
active vegetation in the Southern Coast of the Crimea, have been defined. The start point of
development in the plant of a water stress and inhibition of photosynthesis is the soil
moisture reduction to 30% of sap flow (SF). The optimum photosynthesis temperature
which is excess leads to inhibition of an enzyme activity and reduces the rate of
photosynthesis is a leaf temperature of 33.5°C. The growth inhibition, the turgor reduction
of young leaves is a soil moisture content reduction to 25-20% of SF and less. The
reduction of a soil moisture to 18% SF and less has the result in a sharp decrease
transpiration rate of 92.3%, a visible photosynthesis rate of 95.1% and a stomatal
conductance of 94.7%. The proportion of the total dark respiration from gross-
photosynthesis under a strong water stress is 56%, in the absence of any stress factors is
25-30%. The beginning of a turgor recovery after watering is 40 min, the full restoration of
the intensity of photosynthetic gas exchange after watering is in 24 hours. Under a strong
water stress, the visual evidences of a noticeable loss of chlorophyll in leaves can be seen:
central vein acquires a yellow-green color in leaf with brownish stains. In the conditions of
a cultivar, it leads to loss of the plant decorative qualities. The disclosure of leaves’
functioning mechanisms, depending on the environmental impact, provides the basis for
the environmental assessment of the physiology of the evergreen species and the
possibilities of agricultural technology choice.

Keywords: Viburnum tinus L., water regime, photosynthesis, drought, environmental


factors.

135
135
Влияние почвенной засухи на фотосинтез и водный режим
Viburnum tinus L. в условиях Южного берега Крыма

О.А. Ильницкий, А.В. Паштецкий


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: pashteckiy@gmail.com

Изучена экофизиологическая реакция Viburnum tinus L. на воздействие


прогрессирующей почвенной засухи, определены зоны оптимума и пороговые
значения влажности почвы, температуры и освещенности, лимитирующие
фотосинтез и транспирацию Viburnum tinus на Южном берегу Крыма. Начало
развития в растении водного дефицита и ингибирования фотосинтеза – снижение
влажности почвы до 30% ПВ. Температурный оптимум фотосинтеза, превышение
которого приводит к ингибированию ферментативной активности и снижению
интенсивности фотосинтеза – температура листа 33,5°С. Ингибирование роста,
снижение тургора верхушечных молодых листьев – снижение влажности почвы до
25-20% ПВ и ниже. Снижение влажности почвы до 18% ПВ и ниже приводит к
резкому уменьшению интенсивности транспирации – на 92,3%, скорости видимого
фотосинтеза на 95,1%, а устьичной проводимости на 94,7%. Доля суммарного
темнового дыхания от гроссфотосинтеза при сильном водном стрессе – 56%, в
отсутствие стресс-факторов – 25-30%. Начало восстановления тургора после полива
– через 40 мин, полное восстановление интенсивности фотосинтетического
газообмена после полива – через 24 часа. При сильном водном стрессе визуально
появляются признаки уменьшения тургора опытных растений, молодые листья
верхнего яруса растения стали изменять цвет с зеленого на бледно-зеленый. В
условиях культуры это приводит к потере декоративных качеств растения.
Раскрытие механизмов функционирования листьев в зависимости от воздействия
окружающей среды обеспечивает основу для экологической оценки физиологии
вечнозеленых видов и возможности выбора агротехники.

Ключевые слова: Viburnum tinus L., интенсивность видимого фотосинтеза,


засухоустойчивость, температурно-световые оптимумы.

136 136
In silico identification of genes of antimicrobial peptides in genome of
Solanum lycopersicum str. Heinz 1706

Ekaterina Istomina1, Alexey Kovtun2, Artem Kasyanov1, Tatyana Korostyleva1, Tatyana


Odintsova1
1Vavilov Institute of General Genetics Russian Academy of Science, Gubkina str. 3, Moscow,

119333, Russian Federation; E-mail: mer06@yandex.ru


2Moscow Institute of Physics and Technology; 9 Institutskiy per., Dolgoprudny, Moscow

Region, 141701, Russian Federation;

Synthesis of antimicrobial peptides is one of the key mechanisms of plants’ immune


response on contamination with various pathogens. The most important ones are the
antimicrobial peptides (AMPs), which suppress the growth and development of the wide
spectrum of pathogens. The AMPs of plants are short peptides (no longer than 100 aa) that
can be characterized by conservative cysteine motives. In current work, in silico methods
were applied for detection of the genes of antimicrobial peptides that belong to the families
of defensins, lipid-transfer proteins (LTP), hevein-like peptides and thionines in the
genome of tomato, Solanum lycopersicum str. Heinz 1706. For the analysis, the latest
version of the genome assembly available in GenBank by accession number
GCA_000188115.2 was used. The algorithm of AMP searching consisted of several steps:
identification of open reading frames with GeneMark, determination of cysteine motives
using the method of regular expressions implemented in the program written in Perl and
identification of signaling peptides using SignalP 4.1. For the implementation of the regular
expressions, the known cysteine motives described for cysteine-rich peptides in plants
were used. As a result of the analysis, 66 AMPs were found: 10 defensins, 35 LTPs, 6
hevein-like peptides and 15 thionins. The alignment with NCBI nr database showed that
most of the found peptides are described as ‘putative uncharacterized protein’.
Thus, the obtained results are a good basis for subsequent experimental confirmation
of the presence and functions of the found peptides.

This work was supported by the Russian Science Foundation (grant No. 16-16-00032).

Keywords: plant peptides, antimicrobial peptides, cysteine-rich peptides, bioinformatics


analysis, genomic analysis.

137
137
In silico идентификация генов антимикробных пептидов в геноме
Solanum lycopersicum str. Heinz 1706

Е.А. Истомина1, А.С. Ковтун2, А.С. Касьянов1, Т.В. Коростылева1, Т.И. Одинцова1
1Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук, ул. Губкина

3, г. Москва, 119333, Российская Федерация; e-mail: mer06@yandex.ru


2Московский физико-технический институт, Институтский пер. 9, г. Долгопрудный,

Московская область, 141701, Российская Федерация

Синтез антимикробных соединений – один из главных механизмов иммунного


ответа растений на заражение различными патогенами. Наиболее важными из них
являются антимикробные пептиды (АМП), подавляющие рост и развитие широкого
спектра патогенов. АМП растений представляют собой короткие (длиной не более
100 ак) полипептиды, отличающиеся консервативной структурой цистеиновых
мотивов. В данной работе при помощи in silico методов в геноме томата, Solanum
lycopersicum str. Heinz 1706, был проведен поиск генов антимикробных пептидов,
относящихся к семействам дефензинов, липид-переносящих белков (ЛПБ),
гевеиноподобных пептидов и тионинов. Для анализа была использована последняя
версия сборки генома, доступная в базе данных GenBank под номером
GCA_000188115.2. Алгоритм поиска АМП состоял из нескольких этапов: определения
открытых рамок считывания при помощи программы GeneMark, идентификации
цистеиновых мотивов методом регулярных выражений при помощи программы,
написанной на языке Perl, и идентификации сигнальных пептидов при помощи
программы SignalP 4.1. Для реализации поиска методом регулярных выражений
были использованы известные цистеиновые мотивы, определенные для
растительных цистеин-богатых пептидов. В результате анализа было найдено 66
АМП: 10 пептидов класса дефензинов, 35 ЛПБ, 6 гевеиноподобных пептидов и 15
пептидов класса тионинов. Сравнение с базой данных NCBI nr показало, что
большинство обнаруженных пептидов описано в ней как ‘putative uncharacterized
protein’.
Таким образом, полученные результаты являются хорошей основой для
последующего экспериментального подтверждения наличия и функций найденных
пептидов.

Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 16-16-00032.

Ключевые слова: растительные пептиды, антимикробные пептиды, цистеин-


богатые пептиды, биоинформатический анализ, геномный анализ.

138 138
Structural and biochemical characteristics of clematis plants in vitro

Natalya Ivanova, Valentina Brailko, Oksana Grebennikova, Anfisa Paliy, Irina Mitrofanova
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: invitro_plant@mail.ru

The world assortment of clematis includes more than 3,000 cultivars. Using biotechnology
methods give possibility to obtain virus-free valuable and promising clematis cultivars for
subsequent in vitro propagation and preservation. The objective of this study was to reveal
the morphological-anatomical and biochemical characteristics of four in vitro improved
clematis cultivars: 'Nikitsky Rozovy', 'Alpinist', 'Crystal Fountain' and 'Madame Julia
Correvon'. Isolated sterile vegetative buds were cultured on MS medium with 0.5-0.7 mg L-
1 BAP and 0.01-0.03 mg L-1 NAA. 3.8±0.7 normally developed microshoots (up to 3.0-3.5 cm

long with 4-5 internodes) per explant in 'Nikitsky Rozovy', 3.7±0.5 – in 'Crystal Fountain'
and 2.5±0.4 – in 'Madame Julia Correvon' were obtained. The shape of the leaf blades
retained varietal characteristics of the initial mother plants. It was determined that the leaf
size was a more cultivar-specific characteristic. Leaves were thin from 83 to 182 µm,
hypostomatic, with a differentiated 4-5-layer mesophyll (palisade index 0.29-0.37).
Vascular bundles were closed collateral, stomatal apparatus were numerous (up to 136
stomata/mm2, stoma pore length 28-51 μm), of anomocyte type, trichomes were simple
one- or two-celled (up to 143 μm long, from 2 to 16 trichomes per 1 mm2). Epidermal cells
were sinuous of irregular amoeboid shape. The assessment of assimilation processes
demonstrated partial photoinhibition. The content of the protective compounds in all
clematis cultivars was quite high: proline concentration varied from 8.63 μg g-1 ('Alpinist')
to 31.00 μg g-1 ('Crystal Fountain'), ascorbic acid – from 30.10 mg/100g ('Nikitsky Rozovy')
to 35.64 mg/100 g ('Crystal Fountain'), phenolic compounds – from 559 mg/100 g
('Nikitsky Rozovy') to 1026 mg/100 g ('Crystal Fountain'). Enzyme activity was low:
catalase - 14.27-18.28 gO2/g·min, superoxide dismutase – 19.52-25.45 units/g, polyphenol
oxidase – 0.078-0.109 units/g·s. The minimum activity of enzymes was noted in the
cultivar 'Crystal Fountain' and the maximum – in 'Nikitsky Rozovy'.

This study was funded by the research grant Nо. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Clematis L., microshoot, leaf blade structure, photosynthetic activity, protector
compounds, enzyme activity.

139
139
Структурные и биохимические характеристики растений клематиса
в культуре in vitro

Н.Н. Иванова, В.А. Браилко, О.А. Гребенникова, А.Е. Палий, И.В. Митрофанова
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: invitro_plant@mail.ru

Мировой сортимент клематиса насчитывает более 3000 сортов. Современные сорта


отличаются разнообразием размеров, форм и окрасок цветка. Применение
биотехнологических методов позволяет оздоровить растения клематиса от вирусов
и получить материал для последующего размножения и сохранения в генобанке in
vitro. Целью нашего исследования было выявление структурных и биохимических
характеристик оздоровленных в условиях in vitro микропобегов 4 сортов клематиса:
Никитский Розовый, Альпинист, Crystal Fountain и Madame Julia Correvon.
Изолированные стерильные вегетативные почки культивировали на питательной
среде МС, дополненной 0,5-0,7 мг/л БАП и 0,01-0,03 мг/л НУК. Получено 3,8 ± 0,7
нормально развитых побегов/эксплант у сорта Никитский Розовый, 3,7 ± 0,5 – у
сорта Crystal Fountain, 2,5 ± 0,4 – у сорта Madame Julia Correvon. Побеги достигали
длины 3.0-3.5 см, имели 4-5 междоузлий. По форме листовые пластинки
регенерантов сохраняют сортовые особенности исходных маточных растений.
Определено, что размер листьев является более сортоспецифичной
характеристикой. Листья тонкие (от 83 до 182 мкм толщиной), гипостоматические, с
дифференцированным 4-5-слойным мезофиллом (коэффициент палисадности 0,29-
0,37). Проводящие пучки закрытые коллатеральные, устьичные аппараты
множественные (до 136 устьиц/мм2, длина устьичной щели 28-51 мкм),
аномоцитного типа, трихомы простые одно-двуклеточные (до 143 мкм длиной, на 1
мм2 сосредоточено от 2 до 16 трихом). Клетки эпидермиса имеют неправильную
амебоидную форму, извилистые очертания. При оценке ассимиляционных
процессов определено частичное фотоингибирование. Содержание протекторных
соединений у всех сортов клематиса было довольно высоким: концентрация
пролина варьировала от 8,63 мкг/г (‘Альпинист’) до 31,00 мкг/г (‘Crystal Fountain’),
аскорбиновой кислоты – от 30,10 мг/100 г (‘Никитский Розовый’) до 35,64 мг/100 г
(‘Crystal Fountain’), фенольных соединений – от 559 мг/100 г (‘Никитский Розовый’)
до 1026 мг/100 г (‘Crystal Fountain’). Активность ферментов была невысокой:
каталазы – 14,27-18,28 гО2/г·мин, супероксиддисмутазы – 19,52-25,45 усл. ед/г,
полифенолоксидазы – 0,078-0,109 усл. ед/г·с. Минимальной активностью ферментов
выделялся сорт Crystal Fountain, а максимальной – Никитский Розовый.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: Clematis L., регенерация микропобегов, структура листовых


пластин, фотосинтетическая активность, протекторные соединения, активность
ферментов.

140 140
Adaptive potential of the walnut gene fund

Sergey Khokhlov, Vladimir Melnikov, Euvgeniya Panyushkina


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: ocean-10@mail.ru

Abiotic stressors cause significant economic damage to horticulture and are one of the
main causes that negatively affect the productivity of crops. Along with social and economic
problems, the efficiency of industrial fruit growing in the Russian Federation depends to a
large extent on the low adaptive potential of cultivated cultivars. Without the creation of
new integrated systems that increase the production of domestic fruit products, it is
difficult to solve the task of replacing fruit imports. In such conditions, the use of the most
effective methods for evaluation the genetic potential of the initial forms and hybrid
material will allow to increase the productivity of the selection process and to obtain the
new generation of highly productive and adaptively resistant cultivars of walnut. In the
course of the research, 27 walnut cultivars from the gene fund collection in the Nikita
Botanical Gardens were compared in 10 main economic characteristics with the developed
ideal model of the cultivar: the period of entry into fruiting (4 years), fruit size (3
points), fruit mass (26 g) , kernel taste (5 points), kernel output (60%), fat and protein
content (70% and 22%, respectively), productivity (50 kg/t), frost resistance (3 points),
drought resistance (32 points), heat resistance (3 points). Cluster analysis of the
experimental data was carried out using the computer program Statistics 10. The
distribution of cultivars in 4 groups was carried out using the calculated integral criteria of
all determined indicators that characterize their degree of similarity with the ideal model: I
– ‘Sladkoyaderny’, ‘Gurzufsky’, ‘Doliny’, ‘Skabery’, ‘Partizansky’, ‘Yuzhnoberezhny’,
‘Pozdnetsvetushchy’, ‘Arkad’ and ‘Bubenchik’; II – ‘Bospor’, ‘Starokrymsky’, ‘Kacha’, ‘Pioner
Kryma’, ‘Originalny, Zhemchuzhny’, ‘Belbeksky Ranny’, ‘Krymsky Skoroplodny’ and
‘Uigursky’; III – ‘Alminsky’, ‘Burlyuk’, ‘Konkursny’ and ‘Pamyaty Pasenkova’; IV –
‘Moldovskaya Bomba’, ‘Podarok Valentiny’, ‘Bomba Chkalovskaya’ and ‘Purpurovy’. The
following cultivars proved to be the closest to the model of the cultivar (18 units): ‘Karlik 3’
(16 units), ‘Purpurovy’ (11 units) and ‘Moldavskay Bomba’ (10 units).

The work was supported by the grant of the Russian Science Foundation No. 14-5-00079.

Keywords: walnut, varieties, gene fund collection, variety model, cluster analysis.

141
141
Адаптивный потенциал генофонда ореха грецкого

С.Ю. Хохлов, В.А. Мельников, Е.С. Панюшкина


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: ocean-10@mail.ru

Абиотические стрессоры наносят ощутимый экономический ущерб садоводству и


являются одной из основных причин, негативно влияющих на продуктивность
сельскохозяйственных культур. Наряду с социально-экономическими проблемами
эффективность промышленного плодоводства Российской Федерации в
значительной степени зависит от низкого адаптивного потенциала возделываемых
сортов. Без создания новых интегрированных систем, позволяющих увеличить
производство отечественной плодовой продукции достаточно сложно решить
задачу по замещению импорта плодов. В таких условиях, использование наиболее
эффективных методов оценки генетического потенциала исходных форм и
гибридного материала, позволит повысить производительность селекционного
процесса и создать новое поколение высокопродуктивных и адаптивно устойчивых
сортов ореха грецкого. В процессе выполнения исследований, 27 сортов ореха
грецкого из генофондовой коллекции Никитского ботанического сада сравнивали
по 10 основным хозяйственно ценным признакам с разработанной идеальной
моделью сорта: срок вступления в плодоношение (4 года), размер плода (3 балла),
масса плода (26 г), вкус ядра (5 баллов), процент выхода ядра (60%), содержание
жиров и белков (70% и 22% соответственно), урожайность (50 кг/дер.),
морозостойкость (3 балла), засухоустойчивость (32 балла), жароустойчивость (3
балла). Кластерный анализ экспериментальных данных был выполнен с
использованием компьютерной программы Статистика 10. Распределение сортов по
4 группам проводили с использованием рассчитанных интегральных критериев всех
определяемых показателей, которые характеризуют их степень сходства с
идеальной моделью: I - Сладкоядерный, Гурзуфский, Долинный, Скабери,
Партизанский, Южнобережный, Поздноцветущий, Аркад, Бубенчик; II - Боспор,
Старокрымский, Кача, Пионер Крыма, Оригинальный, Жемчужный, Бельбекский
Ранний, Крымский Скороплодный, Уйгурский; III - Альминский, Бурлюк,
Конкурсный, Памяти Пасенкова; IV -Молдавская Бомба, Подарок Валентины, Бомба
Чкаловская, Пурпуровый. По комплексу признаков наиболее близкими к модели
сорта (18 ед.) оказались следующие сорта: Карлик 3 (16 ед.), Пурпуровый (11 ед.),
Молдавская Бомба (10 ед.).

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: орех грецкий, сорта, генофондовая коллекция, модель сорта,


кластерный анализ.

142 142
Fluorescence intensity of chlorophyll in Chaenomeles leaves in
connection with drought resistance

Larisa Komar-Tyomnaya, Natalia Mesyats


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: larissadkt@mail.ru

One of the factors influencing the productivity of chaеnomeles is the resistance to the
effects of water stress. Conditions of prolonged soil and air drought negatively affect the
state of plants and the crop quality, as cause irreversible violations to the functional state
of the photosynthetic apparatus. To identify genotypes with high potential drought
resistance, the study was made of the chlorophyll photoactivity parameters under different
conditions of the water regime using a portable fluorometer "Florаtest" in five
сhaеnomeles breeding forms, originated from Chaenomeles japonica, C. speciosa,
C. cathayensis, C. × superba.
The initial level of fluorescence after irradiation (Fo), maximum (Fm) and stationary
(Fst) after the light adaptation were recorded. It was found that for genotypes of all
Chaenomeles species, a rapid loss of water in wilting conditions (from 36 to 93%) and a
significant restoration of the leaf turgor (from 38 to 80%) are typical. Saturation of leaves
with water led to an increase in the fluorescence parameters for all assessments. After
significant dehydration, the maximum level of fluorescence (Fm) and variable fluorescence
(Fv = Fm - Fo) decreased from 17 to 51% in most genotypes. In PX-3-12, on the contrary,
these parameters were elevated, and the level of water loss by leaves was the lowest. The
parameters of photosynthetic activity (FA = (Fm - Fst) / Fm) and viability (Fm / Fst) were
increased in PX-3-12 and XK-2 from 7 to 21%. The same genotypes, as well as РХ-5-19,
were characterized by the least variability of all fluorescence parameters under different
water availability regimes, which indicates their increased adaptive capacity.

This study was funded by the research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Chaenomeles sp., drought resistant, water regime, fluorescence parameters.

143
143
Интенсивность флуоресценции хлорофилла в листьях хеномелеса в
связи с засухоустойчивостью

Л.Д. Комар-Темная, Н.В. Месяц


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: larissadkt@mail.ru

Одним из факторов, влияющих на продуктивность хеномелеса, является


устойчивость к воздействию водного стресса. Условия продолжительной почвенной
и воздушной засухи негативно сказываются на состоянии растений и качестве
урожая, т.к. вызывают необратимые нарушения функционального состояния
фотосинтетического аппарата. Для выявления генотипов с высокой потенциальной
засухоустойчивостью было проведено изучение параметров фотоактивности
хлорофилла в различных условиях водного режима у при помощи портативного
флуориметра «Флоротест» у 5 селекционных форм хеномелеса, происходящих от
Сhaenomeles japonica, C. speciosa, C. cathayensis, C. × superba. Регистрировали
начальный уровень флуоресценции после облучения (Fo), максимальный (Fm) и
стационарный (Fst) после световой адаптации. Было установлено, что для генотипов
всех видов Сhaenomeles характерна стремительная потеря воды в условиях
завядания (от 36 до 93%) и значительное восстановление тургора листьев (от 38 до
80%).
Насыщение листьев водой привело к увеличению параметров флуоресценции у
всех образцов. После значительного обезвоживания максимальный уровень
флуоресценции (Fm) и переменная флуоресценции (Fv = Fm - Fo) снизились от 17 до
51% у большинства генотипов. У РХ-3-12, наоборот, эти параметры были
повышенными, а уровень потери воды листьями был самым низким. Показатели
фотосинтетической активности (ФА = (Fm - Fst) / Fm) и жизнеспособности (Fm / Fst)
были повышенными у РХ-3-12 и ХК-2 от 7 до 21%. Эти же генотипы, а также РХ-5-19
характеризовались наименьшей вариабельностью всех параметров флуоресценции
при разных режимах водообеспеченности, что указывает на их высокую
адаптационную способность.

Исследования выполнены при финансовой поддержке РНФ, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: Chaenomeles sp., устойчивость к водному стрессу, водный режим,


параметры флуоресценции.

144 144
The content of phenolic compounds in ornamental peach flowers

Larisa Komar-Tyomnaya, Anfisa Paliy, Olga Startseva, Ivan Paliy


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: larissadkt@mail.ru

The aim of the investigation was to study the qualitative composition and content of
phenolic substances in flowers of ornamental peach genotypes with different taxonomic
origin. The sum of phenolic compounds was determined using Uv-Vis spectrophotometry.
Phenolic acids and flavonoids were identified and quantified by the HPLC/DAD method.
A high total content of phenolic compounds during the budding and mass flowering of
five ornamental peach genotypes originated from Prunus mira, P. davidiana, P. kansuensis,
P. persica (20.3-46.9 mg·g-1 d.w.) was found. The maximum content of phenolic compounds
was determined in the buttons of cultivar 'Malenky Princ' (46.9 mg·g-1 d.w.) and cultivar
'Zhiselle' (46.8 mg·g-1 d.w.) and in the flowers of 'Malenky Prince' (37.3 mg·g-1 d.w.).
Phenolic compounds of peach buttons and flowers are represented by flavonoids and
hydroxycinnamic acids, among which are identified neochlorogenic, chlorogenic, p-
coumaric acids, rutin and kaempferol. The 'Malenky Princ' buttons was characterized by
the highest concentration of neochlorogenic acid (3.6 mg·g-1 d.w.) and flowers of this
cultivar contained the maximum value of the sum of dicofoelchinic acids (1.7 mg·g-1 d.w.).
The highest concentrations of chlorogenic (3.5 mg·g-1 d.w.) and p-coumaric acids (0.6 mg·g-
1 d.w.) were detected in buttons and flowers of 'Zhiselle', respectively. The flowers of

cultivar 'Belosnezhka' were distinguished by the content of routine (1.0 mg·g-1 d.w.) and
kaempferol (0.5 mg·g-1 d.w.).
The results show that buttons and flowers of ornamental peach can be valuable
sources of phenolic antioxidants. Individual selection will be promising in breeding for high
content of phenolic compounds in flowers.

This study was funded by the research grant No 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Prunus sp., cultivar, flavonoids, phenolic acids, flowers, buttons.

145
145
Содержание фенольных соединений в цветках декоративного
персика

Л.Д. Комар-Темная, А.Е. Палий, О.В. Старцева, И.Н. Палий


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: larissadkt@mail.ru

Целью исследования было определение качественного состава и содержания


фенольных веществ в цветках декоративных генотипов персика различного
таксономического происхождения. Сумму фенольных соединений определяли с
помощью Uv-Vis спектрофотометрии. Фенольные кислоты и флавоноиды
идентифицировали и определяли количественно с помощью метода ВЭЖХ с диодно-
матричным детектированием. Установлено высокое суммарное содержание
фенольных соединений в период бутонизации и массового цветения 5 генотипов
декоративного персика, относящихся к Prunus mira, P. davidiana, P. kansuensis, P.
persica (20,3-46,9 мг/г с.в.). Максимальное содержание суммы фенольных
соединений выявлено в бутонах сортов Маленький Принц (49,8 мг/г с.в.) и Жизель
(46,8 мг/г с.в.), а также в цветках сорта Маленький Принц (37,3 мг·г-1 мг/г с.в.).
Фенольные соединения бутонов и цветков персика представлены флавоноидами и
гидроксикоричными кислотами, среди которых идентифицированы
неохлорогеновая, хлорогеновая, п-кумаровая кислоты, рутин и кемпферол. Бутоны
сорта Маленький Принц отличались самой высокой концентрацией
неохлорогеновой кислоты (3,6 мг/г с.в.), цветки этого сорта содержали
максимальное значениие суммы дикофеилхинных кислот (1,7 мг/г с.в.). Наибольшие
концентрации хлорогеновой (3,5 мг/г с.в.) и п-кумаровой кислот (0,6 мг/г с.в.)
выявлены в бутонах и цветках 'Жизель', соответственно. Цветки сорта Белоснежка
выделялись по содержанию рутина (1,0 мг/г с.в.) и кемпферола (0,5 мг/г с.в.).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что бутоны и цветки
декоративных сортов и гибридов персика могут быть ценными источниками
фенольных антиоксидантов. В селекции на высокое содержание фенольных
соединений в цветках будет перспективным индивидуальный отбор.

Исследования выполнены при финансовой поддержке РНФ, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: Prunus sp., сорт, гибрид, флавоноиды, фенольные кислоты, цветки,
бутоны.

146 146
Cold storage of in vitro apple germplasm in Kazakhstan

Irina Kovalchuk1, Balnur Kabylbekova1, Nina Chukanova1, Timur Turdiyev2, Gulnar


Madiyeva2
1Kazakh Institute of Horticulture and Viticulture, Gagarin Str., 238, Almaty, 050060,

Kazakhstan
2Institute of Plant Biology and Biotechnology, Timiryazev Str.,45, Almaty, 050040,

Kazakhstan; E-mail: kovalchuk_i_u@mail.ru

The duration of in vitro cold storage (+3оС and +4оС, 7-15 μmol m-2s-1 light intensity and 10
h photoperiod) in plastic breathable packages of three apple cultivars ‘Voskhod’, ‘Golden
Delicious’ and ‘Maksat’ were studied. The effect of three sources of carbohydrates (3%
sucrose, 2% or 3% mannitol, or 2% sucrose + 2% mannitol) in MS medium with 0.5 mg L -1
BAP and 0.1 mg L-1 IBA or without growth regulators (PGRs), the effect of abscisic acid (AA)
in three concentrations (0.1, 0.5 and 1.0 mg L-1) and three concentrations of nitrogen (N03)
(100%, 50% and 25%) were determined.
Apple shoots remained viable for 18-20 months without repeated multiplication
under conditions of cold storage on a standard (control) MS medium with 3% sucrose
(1962) with and without PGRs. The effect of the cultivar and medium composition on the
duration of cold storage was determined. The increase in storage time was with a decrease
in the nitrogen concentration in the MS medium to 25% or 50%. In these cases, the storage
time was extended to 31 months without PGRs and up to 28 months with PGRs compared
to controls. The shoots depending on the cultivar remained viable (rating ≥ 2) from 23 to
25 months on MS medium and a combination of carbohydrates of 2% sucrose + 2%
mannitol regardless of the hormonal background. The addition of abscisic acid regardless
of the concentration in the medium with 3% sucrose increased storage also up to 25
months. The effect of the cultivar was insignificant. The longest storage time was recorded
for ‘Golden Delicious’ cultivar (31 months), the shortest storage time for ‘Maksat’ cultivar
(28 months).
In vitro germplasm bank contains 27 apple cultivars on an optimal MS medium with
50% N03 and 2% sucrose + 2% mannitol without PGRs.

This study was funded by Ministry of Education and Science of the Republic of Kazakhstan,
project No. AP05132995.

Keywords: apple cultivars, growth regulators, carbohydrates, germplasm bank.

147
147
In vitro establishment of grape explants in active plant growth and
dormancy periods

Tatiana Krasinskaya1,2, Alexandr Zmushko1


1RUE “Institute for Fruit Growing”, 2 Kovalev Str., Samokhvalovichy, Minsk district,
Republic of Belarus; E-mail: krasinskaya@tut.by
2International Sakharov Environmental Institute of Belarusian State University,

Dolgobrodskaya Str., 23/1, Minsk, 220070, Republic of Belarus

The aim of the research was to study and compare morphogenetic capacity of grape
explants (cultivars ‘Regent’, ‘Marquette’, ‘Ventura’, ‘Zilga’, ‘Agat donskoy’ and ‘Aleshenkin’)
during dormancy and active growth periods at the initiation stage of in vitro culture in
conditions of the Republic of Belarus. Previously, the plants have been tested for the main
sap-transmittable viruses of grape: GFLV, GLRaV-1, GLRaV-2, GLRaV-3, GVA and GFkV. The
explants were buds without cover scales from hardwood cuttings in dormancy period; and
buds without cover scales from softwood cuttings in period of active growth. The
sterilization scheme: main sterilizing agent – 30% hydrogen peroxide; in active growth
period, the exposure was 10 min, in dormancy period – 15 min. The initiation medium was
modified Murashige and Skoog medium with 1.1 mg L-1, 6-BA and 0.09 mg L-1 NAA. During
the study of explant morphophysiological capacity of grape cultivars at dormancy period, it
was established that plant genotype with high degree of reliability had determined their
ability to regeneration processes in in vitro culture (p <0.001). Cultivars ‘Agat donskoy’ and
‘Regent’ have maximum capacity in selected conditions (100%). Cultivars ‘Zilga’ and
‘Ventura’ have maximum percent of not developed explant: 69.5% and 65.0%, respectively.
In addition, callus was actively formed at the base of 41.7% of explants of cultivar
‘Marquette’. Highly reliable influence of period of initiation on regeneration processes of
explants of studied cultivars ‘Agat donskoy’, ‘Regent’ and ‘Marquette’ was detected (p
<0.001). Activation of regeneration processes of explants on studied medium was noted
only in dormancy period. In dormancy period, the number of explants which have
developed in plants was 72.2%, which is 1.9 times higher than in period of active growth.
The number of undeveloped explants was not more than 13.9%.

This study was funded by the Belarusian Republican Foundation for Fundamental Research,
grant No. B17-097.

Keywords: grape, sterilization of explants, in vitro culture.

148 148
Введение в культуру in vitro эксплантов рода Vitis L. в период
активного роста растений и в период покоя

Т.А. Красинская1,2, А.А. Змушко1


1РУП «Институт плодоводства», ул. Ковалëва, 2, аг. Самохваловичи, Минский р-он,
Минская обл., 223013, Республика Беларусь; e-mail: krasinskaya@tut.by
2Международный государственный экологический институт им. А.Д. Сахарова БГУ,

ул. Долгобродская, 23/1, 220070, г. Минск, Республика Беларусь

Цель исследований – изучить и сравнить морфогенетический потенциал


эксплантов винограда районированных и перспективных сортов Regent, Marquette,
Ventura, Зилга, Агат донской и Алешенькин в период покоя и в период активного
роста на этапе введения в культуру in vitro в условиях Республики Беларусь.
Растения предварительно тестировали на основные сокопереносимые вирусы
винограда – короткоузлия винограда (GFLV), вирус скручивания листьев винограда
(GLRaV-1, GLRaV-2, GLRaV-3), вирус А винограда (GVA), вирус пятнистости винограда
(GFkV). Экспланты – почки без кроющих чешуй с одревесневших черенков в период
покоя; почки без кроющих чешуй с зеленых черенков в период активного роста.
Схема стерилизации – основной стерилизующий агент – 30% перекись водорода: в
период активного роста экспозиция 10 мин, в период покоя – 15 мин. Среда
инициации – модифицированная среда Мурасиге и Скуга (MS), содержащая 1,1 мг/л
6-БА и 0,09 мг/л НУК. В ходе изучения морфофизиологического потенциала
эксплантов сортов винограда в период покоя отмечено, что генотип растения с
высокой степенью достоверности определял их способность к регенерационным
процессам в культуре in vitro (p<0,001). Максимальным потенциалом в выбранных
условиях обладали сорта Агат донской и Regent (100%). У сортов Зилга и Ventura
доля не развивающихся эксплантов была максимальной 69,5% и 65,0%. Кроме того,
у основания 41,7% эксплантов сорта Marquette активно образовывался каллус. ,
Было отмечено высоко достоверное влияние сроков введения на регенерационные
процессы эксплантов изучаемых сортов, на примере, Агат донской, Regent и
Marquette (р<0,001). Активацию регенерационных процессов эксплантов на
изучаемой среде отмечали только в период ухода растений на покой, когда доля
эксплантов, развившихся в растение составила 72,2%, что в 1,9 раз выше, чем в
период активного роста. Доля неразвившихся эксплантов составила 13,9%.

Работа была выполнена при финансовой поддержке Белорусского республиканского


фонда фундаментальных исследований (проект № Б17-097).

Ключевые слова: виноград, стерилизация эксплантов, культура in vitro.

149
149
Phytochemical analysis of the vegetative organs of hybridogenous
complex Reynoutria Houtt.

Alla Kuklina1, Natalia Tsybulko 2


1Federal State Budgetary Institution of Science Main Botanical Garden named after

N.V. Tsitsin Russian Academy of Sciences, Botanicheskay str. 4, Moscow, 127276, Russian
Federation; E-mail: alla_gbsad@mail.ru
2Federal State Budgetary Scientific Institution “All-Russian Scientific Research Institute of

Medicinal and Aromatic Plants”, Grina str. 7, Moscow, 117216, Russian Federation

A phytochemical study of two taxa from the family Polygonaceae: Reynoutria


sachalinensis (F. Schmidt) Nakai and R. × bohemica Chrtek & Chrtková (= R. japonica Houtt.
× R. sachalinensis) having a high degree of invasiveness, with a widening secondary area in
Europe. Seven geographical populations in the Moscow region (Russia) were examined.
For the first time, the content of a number of biologically active substances was studied:
the sum of flavonoids, vitamin C and organic acids in the build-up cone and leaves in
spring and summer in R. × bohemica.
We have established that the content of biologically active substances in the
vegetative organs of two closely related Reynoutria Houtt. taxa practically has no
difference. It was also established that at the beginning of vegetation the build-up cone
contains the maximum amount of organic acids in R. sachalinensis – 9.8%, in R. ×
bohemica – 9.1-12.4%; flavonoids and ascorbic acid are present: in R. sachalinensis – 1%
and 25.5 mg%, in R. × bohemica – 1.2% and 20.8 mg%, respectively. During the vegetation
period (end of July), the content of vitamin C in leaves will increase significantly in both
taxa – up to 37-46 mg%, to a lesser extent – that of flavonoids up to 2.7%. The content of
organic acids during the relative genesis of Reynoutria taxa, on the contrary, gradually
decreases.
Since it is known, that the young shoots of R. sachalinensis are edible, in a processed
form they taste like asparagus, it can be assumed that shoots of the type R. × bohemica
widespread in Europe can be used in the same manner. When using young leaves and the
build-up cone of R. × bohemica and R. sachalinensis in the spring period, the consumer's
diet will be enriched with useful vitamins P and C, as well as organic acids. The best time
for the collection of plant materials of R. × bohemica and R. sachalinensis in order to obtain
bioflavonoids is July-August, in the vegetative phase of plants.

Keywords: Reynoutria, leaf, build-up cone, flavonoids, ascorbic acid, organic acids.

150 150
Фитохимическое изучение вегетативных органов гибридогенного
комплекса Reynoutria Houtt.

А.Г. Куклина1, Н.С. Цыбулько2


1Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Главный

ботанический сад имени Н.В. Цицина Российской академии наук, ул. Ботаническая,
д.4, г. Москва,127276, Российская Федерация; e-mail: alla_gbsad@mail.ru
2Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Всероссийский

научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений”,


ул. Грина, д. 7, г. Москва, 117216, Российская Федерация

Проведено фитохимическое изучение двух таксонов из семейства Polygonaceae:


Reynoutriasachalinensis (F. Schmidt) Nakai и R. × bohemica Chrtek & Chrtková (R. japonica
Houtt. × R. sachalinensis), обладающего высокой степенью инвазивности, с
расширяющимся в Европе вторичным ареалом. Обследовано 7 географических
популяций в Московском регионе (Россия).Впервые изучено содержание ряда
биологически активных веществ: суммы флавоноидов, витамина С и органических
кислот в конусе нарастания и листьях весной и летом у R.×bohemica. Нами
установлено, что содержание биологически активных веществ в вегетативных
органах двух близкородственных таксонов Reynoutria Houtt. практически не
различается. Также установлено, что в начале вегетации в конусе нарастания
содержится максимальное количество органических кислот у R. sachalinensis – 9,8%,
у R.×bohemica – 9,1-12,4%; присутствуют флавоноиды и аскорбиновая кислота: у
R. sachalinensis – 1 % и 25,5 мг%, у R.×bohemica – 1,2 % и 20,8 мг%, соответственно. В
период вегетации (конец июля) у обоих таксонов в листьях значительно возрастет
содержание витамина С – до 37-46 мг %, в меньшей степени – флавоноидов до 2,7 %.
Содержание органических кислот в ходе отногенеза таксонов Reynoutria,
наоборот,постепенно уменьшается. Поскольку известно, что молодые побеги
R. sachalinensis съедобны, в переработанном виде по вкусу напоминают спаржу,
можно предположить, что такими же качествами наделены и побеги вида
R.×bohemica, широко распространенного в Европе При использовании в пищу
молодых листьев и конуса нарастания R.×bohemica и R. sachalinensis в весенний
период рацион потребителя будет обогащается полезными витаминами Р и С, а
также органическими кислотами. Лучшими сроками для сбора растительного сырья
R.×bohemica и R. sachalinensis с целью получения биофлавоноидов является июль-
август, в фазе вегетации растений.

Ключевые слова: Reynoutria, лист, конус нарастания, флавоноиды, аскорбиновая


кислота, органические кислоты.

151
151
The regulatory and legal framework for creating virus-free planting
material of horticultural crops

Ivan Kulikov, Antonina Borisova, Inna Knyazeva, Tatiana Tumaeva


All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery,
Zagorevskaya Str., 4, Moscow, 115598, Russian Federation;
E-mail: vstisp@vstisp.org; tata0909@list.ru

Currently, a large number of programs and strategies related to biodiversity conservation


exist and are being implemented in Russia. They are both government programs (federal,
regional, sectoral and intersectoral) and projects implemented by non-governmental
organizations (Russian and International foundations, non-governmental organizations).
All activities for the conservation of plant species and cultivars are based on a number of
policy documents, such as the "Convention on Biological Diversity" (1992, 2006),
"International Program Botanic Gardens Conservation" (2000), «Global Strategy Plant
Conservation» (2002) and others.
In 2017, the All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and
Nursery (ARHIBAN) in conjunction with the State Organization "Rosselhoztsentr" of
Russian Ministry of Agriculture has developed the interstate standard "GOST 34231-2017.
Planting materials of fruit and small fruit crops. Terms and definitions», which has been
approved and will contribute to the intensification of horticulture in the countries-
participants of the EAEC (Russia, Armenia, Belarus, Kazakhstan and Kyrgyzstan) in the
next decade (from January 1, 2019 to January 1, 2029). The elaborated document will
allow to unify the scientific terminology taking into account interstate requirements and
support of the elaboration of innovative nursery programs.
In the sphere of production, GOST 34231-2017 will ensure information protection of
bona fide producers of planting materials from unscrupulous, issuing its planting material
for certified according to international standards, as well as eliminating barriers in the
field of activity of structures that ensure the turnover and the sales of this group of
products.
The actual tasks to be solved by ARHIBAN in the field of horticulture, are fully
consistent with all aspects of international activities and the FAO (The Food and
Agriculture Organization of the United Nations), which aim is the development of
agriculture.

Keywords: certification, nursery, scientific terminology, definitions, GOST 34231-2017,


normative documentation, fruit and small fruit crops.

152 152
Нормативно-правовая база создания безвирусного посадочного
материала садовых культур

И.М. Куликов, А.А. Борисова, Т.А. Тумаева, И.В. Князева


Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский
селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства",
ул. Загорьевская, 4, г. Москва, 115598, Российская Федерация;
e-mail: vstisp@vstisp.org; tata0909@list.ru

В настоящее время в России существует и реализуется большое число программ и


стратегий, связанных с сохранением биоразнообразия. Они являются как
государственными программами (федеральные, региональные, отраслевые и
межотраслевые), так и проектами, осуществляемыми неправительственными
организациями (российские и международные фонды, общественные организации).
Вся деятельность по сохранению видов и сортов растений базируется на ряде
программных документов, таких как «Конвенция о биологическом разнообразии»
(1992, 2006), «Международная программа ботанических садов по охране растений»
(2000), «Global Strategy Plant Conservation» (2002) и других.
В 2017 г. Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства
и питомниководства совместно с ФГБУ «Россельхозцентр» Министерства сельского
хозяйства России разработал межгосударственный стандарт «ГОСТ 34231-2017.
Материал посадочный плодовых и ягодных культур. Термины и определения»,
который утвержден и будет способствовать интенсификации садоводства в
странах-участниках ЕАЭС (Россия, Армения, Белоруссия, Казахстан, Киргизия) в
ближайшее десятилетие (с 1 января 2019 г. по 1 января 2029 г.). Разработанный
документ позволит унифицировать научную терминологию с учетом
межгосударственных требований и поддержать разработку инновационных
программ по питомниководству.
В сфере производства ГОСТ 34231-2017 позволит обеспечить
информационную защиту добросовестных производителей посадочного материала
от недобросовестных, выдающих свой посадочный материал за
сертифицированный по международным нормам, а так же устранить барьеры в
сфере деятельности структур, обеспечивающих торговый оборот и реализацию
данной группы продукции;
Актуальные задачи, решаемые ФГБНУ ВСТИСП в области садоводства, вполне
соответствуют всем аспектам международной деятельности и ФАО
(продовольственная и сельскохозяйственная организация ООН), цель которой
состоит в развитии сельского хозяйства.

Ключевые слова: сертификация, питомниководство, научная терминология,


определения, ГОСТ 34231-2017, нормативная документация, плодовые и ягодные
культуры.

153
153
Experimental variability of grapes in Vitaceae family based on the use of
allotetraploidy and in vitro embryo culture

Svetlana Levchenko, Vladimir Volynkin, Valerii Zlenko, Alla Polulyakh, Vladimir


Lihovskoi, Irina Vasylyk
All-Russian National Scientific Research Institute of Viticulture and Winemaking
"Magarach" 298600 Kirov Str., 31, Yalta, Russian Federation;
E-mail: svelevchenko@rambler.ru

Formation of grapes samples occurred in the course of natural evolution and is possible in
the process of experimental evolution under artificial generative hybridization. Crossing
forms of grapes with a different number of chromosomes suggest the need to combine
several methods that take into account the physiological characteristics of the initial forms.
An attempt was made to achieve intergeneric hybrids Vitis  Ampelopsis and
Vitis  Parthenocissus within the Vitaceae family using tetraploid genotypes of the initial
forms. In order to obtain tetraploid seedlings (diploid gametes), buds broken from
dormancy and flower clusters were treated with 0.5%, 1% and 2% colchicine for 5-14
days before meiosis. The intergeneric incompatibility was circumvented by growing
seedlings from in vitro cultured embryos isolated from immature seeds for 40 days after
pollination. An intermediate dissection pattern of the leaf typical of the species of the
genera Vitis and Ampelopsis used in intergeneric hybridization by the allotetraploidy
method was registered in a number of hybrid seedlings. More than that, this is a proof of
the biologically determined possibility that forms from distant crosses may have emerged
in nature in the course of natural evolution. Due to the fact that it was more successful to
obtain plants from the hybridization of Vitis vinifera cultivars of the genus Vitis with the
forms of Ampelopsis genus species, in comparison with the crossing of the Vitis vinifera
cultivars with the forms of the Parthenocissus genus species, can be assume a closer
genetic relationship in the Vitaceae family between the genera Vitis and Ampelopsis, which
are closer in terms of the evolution of the grapes culture as a whole.

Keywords: grapes, diploid gametes, meiosis, colchicines, pollination, seedlings, evolution.

154 154
Экспериментальная изменчивость винограда семейства Vitaceae на
основе использования аллотетраплоидии и культуры эмбриоидов
in vitro

С.В. Левченко, В. Волынкин, В. Зленко, А. Полулях, В. Лиховской, И. Васылык


Всероссийский национальный научно-исследовательский институт виноградарства
и виноделия "Магарач" ул. Кирова, 31, г. Ялта, 298600, Российская Федерация;
e-mail: svelevchenko@rambler.ru

Формирование образцов винограда происходило в процессе естественной эволюции


и возможно в процессе экспериментальной эволюции при искусственной
генеративной гибридизации. Скрещивание форм винограда с различным
количеством хромосом требует необходимости сочетания нескольких методов,
учитывающих физиологические характеристики исходных форм. Была
предпринята попытка получения межродовых гибридов Vitis  Ampelopsis и
Vitis  Parthenocissus в семействе Vitaceae с использованием тетраплоидных
генотипов исходных форм. Чтобы получить тетраплоидные сеянцы (диплоидные
гаметы), почки, вышедшие из покоя и цветущие соцветия, за 5-14 дней до мейоза,
обрабатывались 0,5%, 1% и 2% колхицином. Межродовая несовместимость была
преодолена путем выращивания сеянцев из культивированных эмбриоидов in vitro,
выделенных из незрелых семян через 40 дней после опыления. Промежуточная
степень рассеченности листа, типичная для видов родов Vitis и Ampelopsis,
используемых в межродовой гибридизации методом аллотетраплоидии, была
зарегистрирована у некоторых гибридных сеянцев. Более того, это является
доказательством биологически определенной возможности того, что формы от
отдаленных скрещиваний могут возникнуть в природе в ходе естественной
эволюции. В связи с тем, что было более успешным получать растения от
гибридизации сортов Vitis vinifera рода Vitis с формами рода Ampelopsis, по
сравнению со скрещиванием сортов Vitis vinifera с формами видов рода
Parthenocissusus, можно предполагать более близкое генетическое родство в
семействе Vitaceae между родами Vitis и Ampelopsis, которые ближе в эволюции
культуры винограда в целом.

Ключевые слова: виноград, диплоидные гаметы, мейоз, колхицин, опыление,


сеянцы, эволюция.

155
155
Optimization of potato cultivation process in vitro as influenced by
different spectral composition of LED radiation

Elena Maslova, Vladimir Yatsenko, Yuri Maslakov, Yana Dyachenko, Irina Korsun, Kristina
Degtyareva
Belgorod State University, 85, Pobrdy Str., Belgorod, 308015, Russian Federation;
E-mail: e_maslova@list.ru

Potato is one of the main vegetable crops, for which the most fully technologies of
improvement and clonal micropropagation were developed and an effective culture media
were selected. There are also the number of works on the effect of the light spectral
composition of monochrome lamps on the growth and development of potato plants in
vitro (Kim et al., 2004; Martirosyan et al., 2016; Karimov, 2017). However, the
development of modern optical systems in presently market allows us to produce the
special designs, including polychrome led racks with adjustable spectra both in power and
in composition. All this gives new opportunities to increase the speed and efficiency of
growth and development of potato plants in vitro. The aim of the study was to select
effective methods of potato plants in vitro culture and to assess their growth and
development. As the object of study potato cultivar ‘Udacha’ was selected. The cultivation
of the plants was carried out on modified MS culture medium (Murashige and Skoog,
1962) in separate flat-bottomed tubes. Fluorescent lamps were used as a control. In the
experiment, several variants of the spectral composition of led radiation were tested,
installed for each shelf separately on the phytorack X-bright FitoLed (ELSIS Belgu LLC)
with the help of a programmable controller: 1st variant (the ratio in the spectrum of red,
white and blue) – 57%, 14%, 29%; 2nd variant – 80%, 0%, 20%; 3rd variant – 70%, 0%,
30%; 4th variant – 50%, 18%, 32%. More than 1,000 test tube plants were analyzed. As a
result of 30 days of culture, the following morphometric characteristics of the studied
plants were taken into account: the number of roots formed and their length, length and
thickness of shoots, number of leaves, their width and length, spectrometric
measurements of the chlorophyll pigment concentration by the optical density of the
extract from the cultivated mini-plants were carried out. According to the results of
experiments, it was shown the advantage of growing plants on phytorack and the most
effective modes on the spectral composition of (50%, 18%, 32%) led radiation were
determined.

Keywords: potato, clonal micropropagation, spectral composition of light, morphometric


characteristics.

156 156
Оптимизация процесса выращивания картофеля in vitro под
влиянием различного спектрального состава светодиодного
излучения

Е.В. Маслова, В.М. Яценко, Ю.Н. Маслаков, Я.В. Дяченко, И.С. Корсун, К.А. Дегтярева
Белгородский государственный университет, ул. Победы, 85, г. Белгород, 308015,
Российская Федерация; e-mail: e_maslova@list.ru

Картофель - одна из основных овощных культур, для которой максимально полно


разработана технологии оздоровления и клонального микроразмножения, и
подобраны эффективные питательные среды. Имеется ряд работ по влиянию
спектрального состава света монохромных ламп на рост и развитие минирастений
картофеля в условиях in vitro (Kim et. al., 2004; Мартиросян и др., 2016; Каримов,
2017). Однако, развитие современных оптических систем на сегодняшнем рынке
позволяет изготовить специальные конструкции, включающие в себя полихромные
светодиодные стеллажи с регулируемыми спектрами как по мощности, так и по
составу. Все это дает новые возможности повышения скорости и эффективности
роста и развития растений картофеля в условиях in vitro. Целью исследования было
подобрать эффективные по спектральному составу режимы культивирования
минирастений картофеля в пробирке и дать оценку их роста и их развития. В
качестве объекта исследования было выбран сорт картофеля Удача.
Культивирование растений проводили на модифицированной питательной среде
MS (Murashige, Skoog, 1962) в отдельных плоскодонных пробирках. В качестве
контроля служили люминесцентные лампы. В эксперименте было испытано
несколько вариантов спектрального состава светодиодного излучения,
установленных для каждой полки в отдельности на фитостеллаже X-bright FitoLed
(ООО ЭЛСИС БелГУ) с помощью программируемого контроллера: 1 вариант
(соотношение в спектре красного, белого и синего) – 57%, 14%, 29%; 2 вариант – 80
%, 0%, 20%; 3 вариант – 70%, 0%, 30%; 4 вариант – 50%, 18%, 32%. Было
проанализировано более 1000 пробирочных растений. В результате 30 дневного
культивирования учитывали следующие морфометрические признаки исследуемых
растений: число образовавшихся корней и их длину, длину и толщину побегов,
количество листьев, их ширину и длину, проводили спектрометрические измерения
концентрации пигмента хлорофилла по оптической плотности экстракта из
культивируемых минирастений. По результатам экспериментов было доказано
преимущество выращивания растений на фитостеллажах и определены наиболее
эффективные режимы по спектральному составу (50%, 18%, 32%) светодиодного
излучения.

Ключевые слова: картофель, клональное микроразмножение, спектральный состав


света, морфометрические признаки.

157
157
Special features of photosynthetic processes in tissue and organ culture
of horticultural plants

Irina Mitrofanova, Valentina Brailko, Olga Mitrofanova


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: valentina.brailko@yandex.ru

Photosynthesis is the main link for plant organism successful functioning, growth, biomass
accumulation and development. Of particular interest, there are the studies of assimilation
processes in plants cultured in vitro. This is due to the conditionally heterotrophic type of
their nutrition, since carbohydrates are present in the culture medium in all stages of
micropropagation. At the same time, it has been previously established that plant
chlorophyll under in vitro conditions is also capable of photosynthesis. This property is
partly realized due to the low CO2 concentration in culture vessels.
Considering the high sensitivity of photosystem-2 chlorophyll-protein complexes
activity under varying culture conditions, fluorescence induction parameters to estimate
the relative photosynthetic activity (Fm-Fst)/Fm in vegetative organs of some valuable plant
cultivars under in vitro conditions were used. Such plants as Canna × hybrida hort ex
Backer, Chrysanthemum × hortorum Bailey, Clematis L., Rosa × damascena Mill., Lavandula
angustifolia Mill. and L. × intermedia Emeric ex Loiseleur, Diospyros kaki Thunb. and Ficus
carica L. were included in the study. The plantlets were selected under standard culture
conditions in vitro and upon preservation. The assimilating tissues were developed to
various degree. The photosynthetic activity, depending on the genotype and culture
duration, ranged from 0.48 to 0.72 a.u. Active photoinhibition was noted in clematis,
persimmons and lavender cultivars under the culture for more than six months.
During in vitro storage, the indices of chlorophyll fluorescence induction were lower:
from 0.30 to 0.61 a.u. (at the same time in most cultivars (Fm-Fst)/Fm at the level of 0.38-
0.42 a.u.). Positive correlation between the histological characteristics of palisade index
and relative photosynthetic activity was revealed. The rate of the fluorescence decay was
identified as a functional characteristic.
Thus, for a number of horticultural plants, the parameters of relative photosynthetic
activity that characterize the functional state of the plantlets during a certain period of in
vitro culture and preservation were determined. The obtained results can be used to
monitor plant physiological state during the prolonged culture.

This study was funded by research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: horticultural plants, photosynthetic activity, chlorophyll fluorescence


induction, in vitro.

158 158
Особенности фотосинтетических процессов в культуре органов и
тканей некоторых садовых растений

И.В. Митрофанова, В.А. Браилко, О.В. Митрофанова


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: valentina.brailko@yandex.ru

Фотосинтез является главным звеном для функционирования, роста, накопления


биомассы и развития растительных организмов в целом. Особый интерес к
изучению ассимиляционных процессов представляют растения, культивируемые in
vitro. Это связанно с условно-гетеротрофным типом их питания, так как на всех
этапах клонального микроразмножения в питательной среде присутствуют
углеводы. Вместе с тем, ранее было установлено, что хлорофилл растений in vitro
также обладает способностью к фотосинтезу, это свойство реализуется частично из-
за низкой концентрации СО2 в культуральных сосудах.
Учитывая высокий уровень чувствительности работы хлорофилл-белковых
комплексов фотосистемы-2 при изменяющихся условиях культивирования, нами
были использованы параметры индукции флуоресценции для оценки
относительной фотосинтетической активности (Fm-Fst)/Fm вегетативных органов
некоторых сортов хозяйственно-ценных растений в условиях in vitro. При этом
также изучали морфологические и гистологические особенности ассимилирующих
органов. В исследование были включены растения Canna × hybrida hort. ex Backer,
Chrysanthemum × hortorum Bailey, Сlematis L., Rosa × damascena Mill., Lаvandula
angustifolia Mill. и L. × intermedia Emeric ex Loiseleur, Diospyros kaki Thunb. и Ficus
carica L. Растения отбирали при стандартных условиях культивирования in vitro и
при депонировании. Ассимилирующие ткани были в различной степени развиты.
Фотосинтетическая активность в зависимости от генотипов и длительности
культивирования составляла от 0,48 до 0,72 отн.ед. Активное фотоингибирование
отмечено у сортов клематиса, хурмы и лаванды при культивировании свыше 6
месяцев. При сохранении в условиях in vitro показатели индукции флуоресценции
хлорофилла были ниже: от 0,30 до 0,61 отн.ед. (при этом у большинства сортов (Fm-
Fst)/Fm на уровне 0,38-0,42 отн.ед.). Выявлена положительная корреляция между
гистологической характеристикой коэффициента палисадности и относительной
фотосинтетической активностью. В качестве функциональной характеристики
выделен показатель скорости спада флуоресценции.
Таким образом, для ряда культур определены показатели относительной
фотосинтетической активности, характеризующие функциональное состояние
растеньиц в определенный период культивирования и депонирования in vitro.
Полученные результаты могут быть использованы для мониторинга
физиологического состояния растений при длительном культивировании.

Исследования выполнены при финансовой поддержке РНФ, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: садовые растения, фотосинтетическая активность, индукция


флуоресценции хлорофилла, in vitro.

159
159
Micropropagation and preservation of some Crimean flora rare endemic
species from the genus Lagoseris under in vitro culture

Irina Mitrofanova, Olga Mitrofanova, Alexander Nikiforov, Natalya Ivanova, Nina


Lesnikova-Sedoshenko
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: nnivanova@yandex.ru

Relict endemics of the Mountain Crimea flora are a genetically unique bioecological group.
These include Lagoseris callicephala Juz. and Lagoseris purpurea L. (Asteraceae). Slow
renewal of the studied species, the difficulty of their reproduction, as well as the
intensification of anthropogenic effect resulted in a reduction of their natural areas. In
recent years, for the preservation of plant biodiversity. Biotechnological methods that
ensure both reproduction and conservation of particularly valuable representatives of rare
endemic species, including relict endemics of the Mountain Crimea flora are actively used.
The objective of this work was to develop a micropropagation protocol, to study the
factors affecting morphogenesis in vitro and to introduce Lag. callicephala and Lag.
purpurea explants into the genebank in vitro for further conservation and repatriation to
the natural habitats.
A protocol for in vitro micropropagation has been developed. The effect of plant
growth regulators on the induction of adventitious buds and microrosette development
was revealed. It was found that the combination of BAP (0.1-0.3 mg L-1), IBA (0.1-0.3 mg L-
1) and GA3 (0.1-0.3 mg L-1) was optimal for effective micropropagation of Lag. callicephala

and Lag. purpurea. Rhisogenesis was noted on the hormone-free MS medium and MS
medium supplemented with IBA (0.5-1.0 mg L-1). The optimum physical parameters of in
vitro culture were determined: the light intensity 2,000-2,500 lux and the temperature 22-
23°С. The increase or decrease in light intensity resulted in a decrease of the regeneration
capacity in Lag. callicephala and Lag. purpurea, and it also inhibited plantlet growth. The
greatest number of microrosettes was obtained under the white light. The main factors
affecting the preservation of Lag. callicephala and Lag. purpurea explants in the gene bank
in vitro were determined: the type of optimal explant and its size; mineral composition of
the culture medium; osmotics and retardants concentration; the temperature of deposition
and the time of preservation. Our results demonstrated that growth kinetics changed and
viability of explants was 70-80%.

Keywords: Lagoseris callicephala, Lagoseris purpurea, culture medium, plant growth


regulators, microrosettes regeneration, rhizogenesis, gene bank in vitro, osmotic,
retardant.

160 160
Клональное микроразмножение и сохранение некоторых
представителей редких эндемиков флоры Крыма рода Lagoseris в
культуре in vitro

И.В. Митрофанова, О.В. Митрофанова, А.Р. Никифоров, Н.Н. Иванова, Н.П. Лесникова-
Седошенко
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: nnivanova@yandex.ru

Реликтовые эндемики флоры Горного Крыма представляют собой генетически


оригинальную биоэкологическую группу. К ним относятся Lagoseris callicephala Juz.
и Lagoseris purpurea L. (Asteraceae). Медленное возобновление исследуемых видов,
трудность их размножения, а также усиление антропогенного воздействия
приводят к сокращению ареалов распространения. Для сохранения растительного
биоразнообразия в последние годы активно используются биотехнологические
методы, которые обеспечивают как размножение, так и сохранение особо ценных
представителей редких эндемичных видов, в том числе и реликтовых эндемиков
флоры Горного Крыма. Целью нашего исследования была разработка протокола
клонального микроразмножения, изучение факторов, влияющих на морфогенез в
условиях in vitro и введение в генобанк эксплантов Lag. callicephala и Lag. purpurea
для дальнейшего сохранения этих видов и репатриации в места их произрастания.
Разработан протокол клонального микроразмножения в условиях in vitro. Выявлено
влияние регуляторов роста растений на индукцию развития адвентивных почек и
микророзеток. Установлено, что сочетание БАП (0,1-0,3 мг/л), ИМК (0,1-0,3 мг/л) и
ГК3 (0,1-0,3 мг/л) является оптимальным для эффективного клонального
микроразмножения Lag. callicephala и Lag. purpurea. Ризогенез был отмечен на
безгормональной среде МС и среде МС, дополненной ИМК (0,5-1,0 мг/л).
Определены оптимальные физические параметры культивирования:
интенсивность освещения в пределах 2,0-2,5 клк и температура – 22-23°С.
Увеличение или уменьшение интенсивности освещения приводило к снижению
регенерационного потенциала Lag. callicephala и Lag. Purpurea, а также угнетало
рост растеньиц. Наибольшее количество микророзеток получено при
использовании белого света. Определены основные факторы, влияющие на
сохранение эксплантов Lag. callicephala и Lag. purpurea в генобанке in vitro: тип
оптимального экспланта и его размер, минеральный состав питательной среды,
концентрации осмотиков и ретардантов, температура депонирования,
длительность сохранения. Полученные результаты показывают, что изменяется
кинетика роста и сохраняется жизнеспособность эксплантов на уровне 70-80%.

Ключевые слова: Lagoseris callicephala, Lagoseris purpurea, питательная среда,


регуляторы роста, регенерация микророзеток, ризогенез, генобанк in vitro, осмотик,
ретардант.

161
161
Aconitum lasiostomum Reichenb. ex Bess. is a promising plant for
biotechnology research

Olga Mitrofanova, Anfisa Paliy, Olga Startseva, Marina Rudenko, Nina Lesnikova-
Sedoshenko, Svetlana Chelombit, Irina Mitrofanova
Federal State Funded Institution of Science “The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS”, Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: invitro_plant@mail.ru

Aconitum lasiostomum Reichenb. ex Bess. (genus Aconitum, family Ranunculaceae) is one of


the most rare relict species in Crimea. It is a perennial herb, an endangered species of the
Western Palaearctic region. By its ecological nature, the species is shade tolerant
petrophyte and mesophyte one. In Crimea it grows in the upper part of the northern
macroslope of the Main Ridge of the Crimean Mountains at an attitude 1,000-1,500 m
above sea level. The species has been listed in the Red Data Book of the Russian Federation
and regional Red Books of the European part of Russia and some Eastern European
countries. Despite the fact that all parts of this plant are poisonous, A. lasiostomum is of
great interest and is used in folk medicine. In recent years, its population decreased, mainly
due to uncontrolled collecting of plants or their parts as medicinal raw materials.
Biotechnological researches on A. lasiostomum in vitro propagation and preservation have
been first started in the Nikita Botanical Gardens. The aim of this work was a preliminary
assessment of phenolic substance content in selected in situ samples and the studies of
A. lasiostomum regeneration capacity in vitro.
The objects of the research were native samples (leaves, inflorescences, seeds and
fruits) collected in July-September for biochemical analyses and introduction in vitro. The
total content and component composition of phenolic compounds in A. lasiostomum
inflorescences, leaves and fruits were studied. The total content of phenolic substances in
the aconite inflorescences was 1,742 mg/100g of fresh biomass, in leaves – 2,241 mg/100g,
in fruits – 1,608 mg/100g. Among the phenolic substances in the studied aconite species,
flavonoids (derivatives of kaempferol, luteolin and apigenin) and phenolic acids
(derivatives of chlorogenic and caffeic acids) were identified. In the inflorescences, 18
phenolic compounds were found, in leaves – 13 and in fruits – 9. As a result, it was
established that A. lasiostomum inflorescences, leaves and fruits contain high
concentrations of phenolic substances and are characterized by a great variety of
components. Further studies on A. lasiostomum flavonoids identification are of a great
importance as far as Aconitum species are promising sources of this class of substances.
Optimal conditions for in vitro culture were revealed and A. lasiostomum plantlets and
adventitious microshoots, which can be used for further studies of regeneration capacity,
biochemical analysis for the content of biological active substances, micropropagation and
conservation of this species, were obtained on MS culture medium supplemented with BAP,
IBA and GA3.

Keywords: rare species, regeneration capacity, in vitro, in situ, phenolic substances,


flavonoids.

162 162
Aconitum lasiostomum Reichenb. ex Bess. – перспективный
растительный объект для биотехнологических исследований

Митрофанова О.В., Палий А.Е., Старцева О.В., Руденко М.И., Лесникова-


Седошенко Н.П., Челомбит С.В., Митрофанова И.В.
ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», пгт Никита, г. Ялта, 298648, Российская
Федерация; e-mail: invitro_plant@mail.ru

Aconitum lasiostomum Reichenb. ex Bess. (род Aconitum, семейство Ranunculaceae)


является одним из наиболее редких реликтовых видов Крыма. Травянистый
многолетник, исчезающий вид западнопалеоарктического ареала. По своей
экологической природе относится к сциогелиофитам, петрофитам и мезофитам. В
Крыму произрастает в верхней части северного макросклона Главной гряды
Крымских гор на высоте 1000-1500 м над уровнем моря. Вид занесен в Красную
книгу РФ и региональные Красные книги европейской части России и
Восточноевропейских стран. Несмотря на то, что все части этого растения ядовиты,
A. lasiostomum представляет большой интерес и используется в народной медицине.
В последние годы численность популяций сокращается, в основном из-за
неконтролируемого сбора растительного материала в качестве лекарственного
сырья. В Никитском ботаническом саду впервые начаты биотехнологические
исследования по размножению и сохранению в условиях in vitro A. lasiostomum.
Целью настоящей работы было предварительная оценка содержания фенольных
веществ в отобранных in situ образцах и изучение в условиях in vitro
регенерационного потенциала редкого вида флоры Горного Крыма Aconitum
lasiostomum. В качестве объектов исследований в июле-сентябре были отобраны
нативные образцы (листья, соцветия, семена и плоды) для проведения
биохимических исследований и введения в культуру in vitro. Изучено суммарное
содержание и компонентный состав фенольных соединений в соцветиях, листьях и
плодах A. lasiostomum. Суммарное содержание фенольных веществ в соцветиях
аконита составляет 1742 мг/100 г в пересчете на сухой вес, в листьях – 2241 мг/100
г, плодах – 1608 мг/100 г. Среди фенольных веществ аконита выявлены флавоноиды
(производные кемпферола, лютеолина, апигенина) и фенольные кислоты
(производные хлорогеновой и кофейной кислот). В соцветиях обнаружено 18
фенольных соединений, в листьях – 13, в плодах – 9. В результате проведенных
исследований установлено, что соцветия, листья и плоды A. lasiostomum содержат
высокие концентрации фенольных веществ и характеризуются большим
разнообразием компонентов. Актуально продолжение исследований по
идентификации флавоноидов данного вида, так как представители рода Aconitum
являются перспективными источниками данного класса веществ. Выявлены
оптимальные условия культивирования и получены проростки и адвентивные
микропобеги A. lasiostomum на питательной среде МС, дополненной БАП, ИМК и ГК3,
которые могут быть использованы для дальнейшего изучения регенерационной
способности, биохимического анализа на содержание БАВ, микроразножения и
сохранения данного вида.

Ключевые слова: редкий вид, регенерационный потенциал, in vitro, in vitro,


фенольные соединения, флавоноиды.

163
163
Ectopic expression of Aseraceae MADS-box genes in Chrysanthemum
morifolium cultivar “Egiptyanka”

Tatiana Mitiouchkina1,2, Natalya Smykova1, Olga Shulga1,3, Sergei Dolgov1,2


1Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation; E-mail:
mitiouchkina@rambler.ru
2Branch of Shemyakin and Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry, Pushchino,

Russian Federation
3All-Russia Research Institute of Agriculural Biotechnology, Moscow, Russian Federation

MADS-box genes encode transcription factors playing a key role in floral morphogenesis
control. Different combinations of MADS-proteins are required for floral organ identity and
floral meristem determination. So, modification of its expression patterns results in flower
structure modification and new “unusual” flower shape generation. In this work, we tested
the possibility of chrysanthemum morphology alteration by constitutive expression of
MADS-box genes previously isolated from sunflower and chrysanthemum. The genes
encode two different MADS-activities: CDM37, HAM45 and HAM59 – belong to AGAMOUS
subfamily which specifies stamens and carpel identity, and floral meristem determination;
HAM75 and HAM92 participate in flower induction, determine sepal and petal identity, and
belong to APETALA1 subfamily. Totally 67 independently regenerated plants were
produced by the Agrobacterium-mediated transformation of leaf disks. Transgenes
integration was confirmed by PCR analysis. Constitutive expression of transferred genes
was shown by RT-PCR. Flowering of transgenic chrysanthemum plants was monitored
under controlled greenhouse condition and compared to control non-transgenic plants.
The transgenic plants were analyzed under LD and SD photoperiod. Three types of plant
development alterations were observed: flowering time variation, differences in the stem
height and leaves number, and some inflorescence modifications. Results of the
comparative analysis of transgenic and control plants will be presented.

This study was funded by research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: chrysanthemum, MADS-box genes, transcription factor.

164 164
Эктопическая экспрессия генов MADS-бокса сложноцветных в
хризантеме сорта «Египтянка»

Митюшкина Т.Ю. 1,2, Смыкова Н.В. 1, Шульга О.А. 1,3, Долгов С.В. 1,2
1 ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: mitiouchkina@rambler.ru
2Филиал Института биоорганической химии им. Акад. Шемякина М.М, и

Овчинникова Ю.А. РАН, г. Пущино, Московская обл., Российская Федерация


3Всроссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной

биотехнологии РАН, г. Москва, Российская Федерация

Гены MADS-box кодируют факторы транскрипции и играют ключевую роль в


развитии цветка. Различные комбинации MADS белков необходимы для
определения идентичности органов цветка и меристемы. таким образом,
модификация эктопической экспрессии в растениях могла бы привести к
формированию новой “необычной” формы цветка. В нашей работе мы тестировали
возможность морфологических изменений хризантемы через конституитивную
экспрессию генов MADS-бокса, ранее клонированных из подсолнуха и хризантемы.
Эти гены определяют две различных активности: CDM37, HAM45 и HAM59 –
относятся к подсемейству AGAMOUS, функцию которого можно определить как
детерминация меристемы цветка и определение идентичности органов андроцея и
гинецея и вторая группа - это гены HAM75 и HAM92 принимают участие в индукции
цветения и определяют идентичность лепестков и чашелистиков, относятся к
подсемейству APETALA1. Было получено 67 независимых трансгенных линий в
результате агробактериальной трансформации листовых дисков. Вставка генов
подтверждена ПЦР анализом ДНК растений. Конституитвная экспрессия была
показана ОТ-ПЦР-анализом. Цветение трансгенных хризантем мы наблюдали в
контролируемых условиях зимней теплицы в сравнении с растениями дикого типа.
Трансгенные линии хризантем анализировали в условиях короткого и длинного
светового дня. Мы выделили три группы растений, различающихся по времени
цветения, высоте растения и количеству листьев, а также отметили изменения
формы соцветий. Результаты сравнительного анализа трансгенных линий и дикого
типа будут представлены.

Исследования выполнены при финансовой поддержке РНФ, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: хризантема, гены MADS-box, фактор транскрипции.

165
165
Regulation of rhizogenic process at clonal micropropagation of
horticultural crops

Svetlana Muratova, Roman Papihin, Nataliya Subbotina, Mikhail Romanov


Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Michurinsk State
Agrarian University", Internationalnaya str., 10, Michurinsk, Tambov region, 1393760,
Russian Federation; E-mail: smuratova@yandex.ru

The relation of the process of root formation to the genotype, medium composition,
substances of phenolic nature, intensity and light spectrum, consequences of the
proliferation stage, ultrasonic and laser exposure and other factors has been established.
According to our data to promote rooting of different actinidia cultivars, it is sufficient to
add 0.25 mg L-1 IBA. In most blackberry cultivars, the best results were obtained on the
culture media supplemented with 0.25-0.5 mg L-1 IBA. The application of IBA in
honeysuckle and arboreal fruit crops rooting was successful only in concentrations of 0.8-
1.0 mg L-1. The application of NAA in horticultural crops, rooting was successful only in
concentrations of 0.1-0.2 mg L-1. For the genotypes with low rhizogenesis capacity in vitro,
such as remote hybrids of intergeneric rowan-pear hybrid, the positive effect was obtained
due to soaking of microcutting bases in the auxin solution with their subsequent planting
in non-hormonal media. For some crops the best rhizogenesis effectiveness is obtained
with the complete carbohydrate concentration in the medium, as well as using alternative
sources of carbohydrate. The concentration of carbohydrate in the medium with 0.1 mol L-
1 per 10-15% increases the rhizogenesis frequency of raspberry microcuttings. The

maximum number of roots of the honeysuckle cultivat ‘Volkhova’ was obtained in the
medium with 0.1 mol L-1 of maltose. Better developed honeysuckle microshoots with the
big diameter of lamina tissue were formed in the sucrose, glucose and fructose
concentrations in the medium with 0.1 mol L-1. No positive effect was marked from the
decrease of carbohydrate concentration in the medium on the process of the rhizogenesis
in the lilac microcuttings. The studies of the rhizogenesis dynamics on the clematis cultivar
‘Zoin Inspiration’ have shown that the maximal speed of rooting in microcuttings occurs
on the media with glucose and fructose. Our attempts to increase the rhizogenesis
effectiveness of microcuttings in vitro by treating them with supersonic and laser
irradiation were successful. In three weeks of cultivation, the rhizogenesis frequency of the
lilac microcuttings of ‘Nikitskaya’ cultivar in control was from 15 to 35%, with laser
stimulation from 50 to 65%. The effect of the rhizogenesis stimulation was the most
obvious in lighting of 1,400-1,800 lux. In this case, more roots per rooted microcutting
were formed. The selection of the optimal mode and methods of supersonic irradiation
enabled the 1.5-2 increase of rooting effectiveness of the cultivars possessing lower
rooting capacity in vitro and acceleration of rhizogenesis in all studied forms.

Keywords: horticultural crops, microcuttings, rhizogenesis, auxins, carbohydrates,


biophysical factors.

166 166
Регулирование процесса ризогенеза при клональном
микроразмножении садовых культур

Светлана Муратова, Роман Папихин, Наталия Субботина, Михаил Романов


Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
образования «Мичуринский государственный аграрный университет»,
ул. Интернациональная 101, г. Мичуринск, Тамбовская обл., 393760, Российская
Федерация; e-mail: smuratova@yandex.ru

Установлена зависимость процесса корнеобразования от генотипа, состава среды,


веществ фенольной природы, интенсивности и спектрального состава света,
последействия условий этапа пролиферации, влияния ультразвукового и лазерного
облучения и других факторов. По нашим данным для укоренения разных видов
актинидии достаточно добавления в среду ИМК в концентрации 0,25 мг/л, для
большинства сортов ежевики лучшие результаты получены на средах с 0,25-0,5
мг/л ИМК. Для древесных культур и жимолости требуются более высокие
концентрации ИМК – 0,8-1,0 мг/л. Применение НУК при укоренении садовых
культур было удачным только при концентрации в среде 0,1-0,2 мг/л. Для
генотипов с низкой способностью к ризогенезу in vitro, таких как отдаленные
гибриды семечковых культур, положительный эффект дало замачивание оснований
микрочеренков в растворе ауксина с последующей высадкой их на
безгормональные среды. Для ряда культур лучшая эффективность ризогенеза
достигается на средах с полной концентрацией углевода в среде и при
использовании альтернативных источников углевода. Концентрация углевода в
среде 0,1 моль/л на 10-15% повышает частоту ризогенеза микрочеренков малины.
Максимальное число корней у жимолости сорта Волхова получено на среде с 0,1
моль/л мальтозы. Более развитые побеги жимолости с большим диаметром
листовых пластинок сформировались при концентрации сахарозы, глюкозы или
фруктозы в среде 0,1 моль/л. Не отмечено положительного эффекта от снижения
концентрации углевода в среде на процесс ризогенеза микрочеренков сирени.
Изучение динамики ризогенеза на примере клематиса сорта Zoin Inspiration
показало, что максимальная скорость укоренения микрочеренков этой культуры
имеет место на средах с фруктозой и глюкозой. Удалось повысить эффективность
ризогенеза микрочеренков в условиях in vitro путем обработки их ультразвуковым
и лазерным облучением. Через три недели культивирования частота ризогенеза
микрочеренков сирени сорта Никитская в контроле составила от 15 до 35%, при
лазерной стимуляции от 50 до 65%. Эффект стимуляции ризогенеза был наиболее
выражен при уровне освещенности 1400-1800 лк. В этом случае образовалось и
больше корней на укорененный микрочеренок. Подбор оптимальных режимов и
способов ультразвукого облучения позволил в 1,5-2 раза повысить эффективность
укоренения микрочеренков культур, обладающих пониженной способностью к
образованию корней в условиях in vitro и ускорить процесс ризогенеза у всех
изучаемых форм.

Ключевые слова: садовые культуры, микрочеренки, ризогенез, ауксины, углеводы,


биофизические факторы.

167
167
A study of the ontogenesis of early-maturing walnut cultivars in
Voronezh

Anatolii Odintsov1, Valentina Shipilova1, Valentina Dorofeeva2, Olga Komarova1.


1 All-Russian Research Institute of Forest Genetics, Breeding and Biotechnology,

Lomonosova Str., 105, Voronezh, 394087, Russian Federation;


E-mail: lesopark.vrn@yandex.ru;
2 Voronezh State University of Forestry and Technologies named after G.F. Morozov,

Timiryazeva Str. 8, Voronezh, 394087, Russian Federation

Recently, much attention has been paid to early-maturing or neotenic forms of walnut
(Juglans regia L.), which start to bear nuts at the age of 2-3 years, while for ordinary forms
it takes 8-12 years. The seed reproduction of walnut has a number of advantages, since
plants adapt to the given conditions from the beginning and later they are more stable,
tolerant and drought-resistant. The research deals with ontogenesis of early-maturing
walnut and is based on ‘Ideal’ cultivar (the breeder — E.V. Evangelista). In the research, we
studied fruit characteristics: the average size of the nut was 38.6 mm × 34.0 mm, the fruit
body had a slightly ridged surface, the shell was 0.9 mm thick. 100 nuts weighed 1.0-1.2 kg.
After snow stratification, 200 nuts were sown on the trial plot in the forest nursery of All-
Russian Research Institute of Forest Genetics, Breeding and Biotechnology, Voronezh.
When monitoring the seedlings, we identified the following ontogenetic stages of walnut:
latent period (seeds); pre-generative period (seed germination and seedling growth) and
generative (fruiting phase). Shoots appeared after 10-12 days. Radicles of the embryo
formed tapering main roots. Vegetative growth ended in the middle of June with the
formation of buds. Fruiting shoots had two growth cycles: the spring one ended in June
and the summer one – in August. The generative phase of ontogenesis began in May next
year, when the average height of the plant was 14-16 cm and 40% of them formed flowers.
In September that year, the first nuts were produced. This indicates that the
acclimatization process described was successful and the cultivar can be recommended for
the establishment of early-maturing walnut plantations in the Central Black Earth Region.

Keywords: Juglans regia, neoteny, ontogenetic phases, flowering, fruiting.

168 168
Изучение онтогенеза скороплодных форм ореха грецкого в
условиях Воронежа

А.Н. Одинцов1, В.Ф. Шипилова1, В.Д. Дорофеева2, О.В. Комарова1


1 Всероссийский научно-исследовательский институт лесной генетики, селекции и

биотехнологии, ул. Ломоносова, 105, г. Воронеж, 394087, Российская Федерация;


e-mail: lesopark.vrn@yandex.ru;
2 Воронежский государственный лесотехнический университет им. Г.Ф. Морозова,

ул. Тимирязева, 8, г. Воронеж, 394087, Российская Федерация

В последнее время большое внимание уделяется скороплодным, или неотенийным,


формам ореха грецкого (Juglans regia L.), которые вступают в пору плодоношения на
2-3-й годы жизни, тогда как обыкновенные формы — на 8-12-й год. При этом
семенное размножение грецкого ореха имеет ряд преимуществ, т.к. растения с
первых дней своего существования приспосабливаются к условиям среды обитания.
Во взрослом состоянии они более устойчивы, выносливы и засухоустойчивы. Цель
данной работы – изучение онтогенетического развития сеянцев скороплодных
форм ореха грецкого. В качестве материала исследования был взят орех грецкий
селекции Э.В. Еванжелиста сорта «Идеал». В ходе исследования были проведены
измерения плодов – их средняя длина составила 38,6 мм, ширина – 34,0 мм.
Поверхность плода слабо морщинистая, скорлупа тонкая, 0,9 мм толщиной. Масса
ста орехов составляет от 1,0 до 1,2 кг. Опытный участок был заложен в питомнике
ВНИИЛГИСбиотех. После стратификации под снегом орехи были высеяны в
количестве 200 шт. При наблюдении за состоянием всходов нами выделены
следующие периоды онтогенеза: латентный период – пребывание семян в
состоянии покоя, прегенеративный – период прорастания семян и роста сеянцев и
генеративный – вступление в пору плодоношения. Всходы появились на 10-12
сутки. Зародышевый корешок стержневой, неветвящийся. Рост вегетативных
побегов закончился во второй декаде июня закладкой почек. Плодоносные побеги
имели два цикла роста в течение вегетационного периода, весенний закончился в
июне, летний – в августе. В мае следующего года средняя высота растения
составляла 14-16 см, у 40% было отмечено цветение, т.е. они вступили в
генеративную фазу онтогенетического развития. В сентябре на втором году жизни
растений был собран первый урожай орехов. Это указывает на хорошую
акклиматизацию скороплодных форм ореха грецкого и возможность создания
плодовых насаждений из скороплодных форм ореха грецкого в Центральном
Черноземье.

Ключевые слова: Juglans regia, неотения, фазы онтогенеза, цветение,


плодоношение.

169
169
Dynamics of phenolic compounds in representatives of genus
Lavandula L. during the growing season

Anfisa Paliy, Valeriy Rabotyagov, Ivan Paliy, Yurii Khokhlov, Olga Startseva
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: runastep@mail.ru

The change in the content of phenolic acids and flavonoids in the leaves of Lavandula
angustifolia Mill., L. latifolia Medic. and their allotriploids L. × intermedia Emeric ex Loisel.
during the spring-summer vegetation has been studied. Total phenolics were determined
using Uv-Vis spectrophotometry. Phenolic acids and flavonoids were identified and
quantified by the HPLC method with diode-matrix detection. The content of phenolic
compounds in the leaves of L. latifolia (29.3-90.2 mg·g-1 d.w.) was found to be higher than
in L. angustifolia (27.2-56.3 mg·g-1 d.w.) and L. × intermedia (33.2-49.2 mg·g-1 d.w.).
Maximum content of total phenolics has been found during the period of mass flowering,
and minimum has been found during the period of complete regrowth of shoots. Three
phenolic acids have been identified in the leaves: neochlorogenic, trans-caffeic and
rosmarinic acid. The extracts also contain apigenin-7-O-glucoside, luteolin-7-O-glucoside
and coumarin. The maximum content of rosmarinic acid (4.6 mg·g-1 d.w.) and luteolin-7-O-
glucoside (0.1 mg·g-1 d.w.) was found in the leaves of L. latifolia at the end of the growing
season. The maximum content of neochlorogenic acid (0.3 mg·g-1 d.w.) and apigenin-7-O-
glucoside (1.7 mg·g-1 d.w.) in leaves of L. angustifolia was found at the beginning of the
growing season. In L. angustifolia and L. × intermedia trans-caffeic acid was not found. In
the leaves of L. latifolia, its content reached a maximum (1.7 mg·g-1 d.w.) at the end of the
growing season. Thus, the allotriploid L. × intermedia, in terms of the content of the sum of
phenolic compounds and individual components, mediates the original parental forms.
Obtained results show that the leaves of L. angustifolia, L. latifolia and their hybrids are
valuable sources of phenolic acids and flavonoids.

This study was funded by the research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: lavender, lavandin, flavonoids, phenolic acids, leaves.

170 170
Динамика фенольных соединений у представителей рода
Lavandula L. в течение вегетации

Палий А.Е., Работягов В.Д., Падий И.Н., Хохлов Ю.С., Старцева О.В.
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Ордена Трудового
Красного Знамени Никитский ботанический сад – Национальный научный центр
РАН»,пгт Никита, г. Ялта, 298648, Российская Федерация; e-mail: runastep@mail.ru

Изучено изменение содержания фенольных кислот и флавоноидов в листьях


Lavandula angustifolia Mill., L. latifolia Medic. и их аллотриплоида L. × intermedia Emeric
ex Loisel. в течение весенне-летней вегетации. Сумму фенольных соединений
определяли с помощью Uv-Vis спектрофотометрии. Фенольные кислоты и
флавоноиды идентифицировали и определяли количественно с помощью метода
ВЭЖХ с диодно-матричным детектированием. Содержание суммы фенольных
соединений в листьях L. latifolia (29,3-90,2·мг·г-1 с.в.) было выше, чем у L. angustifolia
(27,2-56,3 мг·г-1 с.в.) и L. × intermedia (33,2-49,2 мг·г-1 с.в.). Максимальное содержание
суммы фенольных соединений выявлено в период массового цветения,
минимальное – в период полного отрастания побегов. В листьях определены три
фенольные кислоты: неохлорогеновая, транс-кофейная и розмариновая. В
экстрактах также содержатся апигенин-7-О-глюкозид, лютеолин-7-О-глюкозид и
кумарин. Максимальное содержание розмариновой кислоты (4,6 мг·г-1 с.в.) и
лютеолин-7-О-глюкозида (0,1 мг·г-1 с.в.) выявлено в листьях L. latifolia в период
окончания вегетации. Максимальное содержание неохлорогеновой кислоты (0,3
мг·г-1 с.в.) и апигенин-7-О-глюкозида (1,7 мг·г-1 с.в.) в листьях L. angustifolia – в
период начала вегетации. У L. angustifolia и L. × intermedia транс-кофейная кислота
не обнаружена. В листьях L. latifolia ее содержание достигало максимума (1,7 мг·г-1
с.в.) в период окончания вегетации. Таким образом, аллотриплоид L. × intermedia по
содержанию суммы фенольных соединений и отдельных компонентов занимает
промежуточное положение между исходными родительскими формами. Полученные
результаты свидетельствуют о том, что листья L. angustifolia, L. latifolia и их гибрида
являются ценным источником фенольных кислот и флавоноидов.

Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 14-50-00079.

Ключевые слова: лаванда, лавандин, флавоноиды, фенольные кислоты, листья.

171
171
Realization of grape morphogenetic capacity using seeds cultured in
vitro

Irina Pavlova, Svetlana Goryslavets


Federal State Budget Scientific Institution «All-Russian National Research Institute of
Viticulture and Winemaking «Magarach» of RAS», 31 Kirovа Str., Yalta, 298600, Russian
Fedeartion; E-mail: pavlovairina1965@gmail.com

In vitro methods, particularly seed culture, allow to overcome post-zygotic abortiveness in


grape and to obtain viable progeny in tackling various tasks of breeding. A technology of
embryo culture without isolation of the embryo from the seed was developed. In vitro seed
culture gave rise to a number of common features of seed germination, plant growth and
development, such as an extended period of germination, a considerable proportion of
anomalous seedlings in the progeny and a high lethality rate of plants in early stages of
formation. The pathway of realization of morphogenetic capacity of the embryo was
dependedon the morphology of a seedling. Direct morphogenesis was seen in seedings
with a pronounced hypocotyl and cotyledonary leaves. The proportion of such seedlings in
the progeny was not high, and their growth processes did not need to be stimulated by
hormones. Seedlings with anomalous constitution of axial organs are susceptible to BAP
(6-benzylaminopurine) content in culture medium. The process of a plant’s formation can
be regulated by adjusting BAP levels. Direct morphogenesis where one or numerous
shoots were formed was seen on media with 0.25 mg L-1 BAP. Indirect morphogenesis
where shoots were regenerated from callus via organogenesis (gemmification) or via
embryoidogenesis where clusters of secondary embryoids were formed occurred
following several subcultures on media with 0.5, 0.4 and 0.2 mg L-1 BAP. Shoot formation
was induced on individual structures of a cluster by extended subcultures on media with
0.4 mg L-1 BAP.
Thus, realization of grape morphogenetic capacity using seeds cultured in vitro can be
through different pathways depending on the morphology of a seedling and hormonal
stimulation of growth and development processes.

Keywords: Vitis vinifera, embryo, BAP, embrygenesis, organogenesis, gemmification.

172 172
Реализация морфогенетического потенциала винограда в культуре
семян in vitro

И.А. Павлова, С.М. Гориславец


Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Всероссийский
национальный научно-исследовательский институт виноградарства и виноделия
«Магарач» РАН», ул. Кирова, 31, г. Ялта, 298600, Российская Федерация;
e-mail: pavlovairina1965@gmail.com

Применение методов в in vitro, в частности культуры семян позволяет преодолевать


постзиготическую абортивность, получать жизнеспособное потомство у винограда
при решении различных селекционных задач. Разработана технология
культивирования зародыша без вычленения из семени. Выявлено ряд общих
особенностей прорастания семян, роста и развития растений: продолжительный
период прорастания, большая доля аномальных проростков в потомстве; высокая
степень летальности растений на ранних стадиях формирования. Путь реализации
морфогенетического потенциала зависел от морфологии проростка. Прямой
морфогенез наблюдался у проростков, имеющих выраженное подсемядольное
колено и семядольные листья. Доля таких проростков в потомстве небольшая и они
не нуждаются в гормональном стимулировании ростовых процессов. Проростки,
имеющие аномальное строение осевых органов, отличаются чувствительностью к
содержанию 6-бензиламинопурина (БАП) в среде культивирования.
Манипулирование концентрациями БАП позволяло регулировать процесс
формирования растения. Прямой морфогенез с образованием одного или
множества побегов был отмечен на средах, содержащих БАП в концентрации 0,25
мг/л. Непрямой морфогенез с регенерацией из каллуса посредством органогенеза
(геммогенез) или эмбриогенеза с образованием кластеров вторичных эмбриоидов
наблюдали после серии субкультивирований на средах с 0,5; 0,4; 0,2, мг/л БАП.
Путем длительных субкультивирований на средах с БАП в концентрации 0,4 мг/л
удалось индуцировать побегообразование на отдельных структурах кластера.
Таким образом, реализация морфогенетического потенциала в культуре семян
винограда in vitro могла осуществляться разными путями в зависимости от
морфологии проростка и гормонального стимулирования процессов роста и
развития.

Ключевые слова: Vitis vinifera, зародыш, БАП, эмбриогенез, органогенез,


геммогенез.

173
173
Component composition of essential oil of Thuja plicata Don ex. D. Don
on the Southern Coast of the Crimea and the Black Sea Coast of the
Caucasus

Yurii Plugatar1, Oksana Shevchuk1, Vitali Leiba2, Lev Dmitriev3, Sergei Feskov1,
Vladimir Gerasimchuk1, Valeria Dmitrieva
1 Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita

Botanical Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian
Federation; E-mail: oksana_shevchuk1970@mail.ru
2Abkhazian Research Forest Experimental Station, Ochamchira, The Republic of Abkhazia
3Russian Timiryazev State University, Timiryazevskaya Str., 49, Moscow, 127550, Russian

Federation

Giant arborvitae (Thuja plicata Donn ex D. Don) is a representative of tertiary dendroflora,


growing on the area covering the north-west region of North America. As an ornamental
plant in the Southern Coast of the Crimea (SCC) this species has been under cultivation
since 1859, on the Black Sea Coast of the Caucasus (the BSCC) - since 1953. At home Th.
plicata is one of the most visible trees of the upper tier, reaching 75 m in height and 2.4 m
in diameter. Plants growing under the conditions of dry subtropics of the Mediterranean
type (the SCC) reach a height of only 10-12 m, the diameter of the trunk - up to 20 cm,
often have a bushy shape. In a humid subtropical climate (the BSCC) plants at the age of
40-50 years reach a height of 20-25 m and a trunk diameter of up to 30 cm. Essential oil of
Th. plicata has a high antifungal and antibacterial activity, due to the high content of
ketones (α - and β - thujone). It was found that in humid and dry subtropical climate plants
accumulate more essential oil compared to natural habitats and when grown in temperate
latitudes: in the SCC the oil content can reach 1.1%, in the BSCC - 1.3% (in some cases - up
to 1.7%). The variability of the component composition of the essential oil Th. plicata is
manifested in the change of the ratio of α - and β - thujone with almost the same total
content (88-90%). Under the humid subtropical conditions, the proportion of β -tuyon is
higher, which improves the quality of essential oil. Sabinene content ranges from 1.31% to
4%, terpene-4-ol - from 1.21% to 3.15%.

This study was funded by research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science Foundation.

Keywords: Thuja plicata Donn ex D.Don, essential oil, α - and β - thujone, Southern Coast
of the Crimea, Black Sea Coast of the Caucasus

174 174
Компонентный состав эфирного масла Thuja plicata Donn ex D.Don
на Южном берегу Крыма и Черноморском побережье Кавказа

Ю.В. Плугатарь1, О.М. Шевчук1, В.Д. Лейба2, Л.Б. Дмитриев3, С.А. Феськов1,
В.Н. Герасимчук1, В.Л. Дмитриева
1ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: oksana_shevchuk1970@mail.ru;
2Абхазская научно-исследовательская лесная опытная станция, г. Очамчыра,

Республика Абхазия;
3РГАУ - МСХА им. К.А. Тимирязева, ул. Тимирязевская, 49, г. Москва, 127550,

Российская Федерация

Туя складчатая, или гигантская (Thuja plicata Donn ex D.Don) - представитель


третичной дендрофлоры, вечнозеленое хвойное дерево с ареалом, охватывающем
северо-запад Северной Америки. Как декоративное растение в Европе данный вид
находится в культуре с 1853 г., в Никитском ботаническом саду (Южный берег
Крыма (ЮБК) - с 1859 г., на Черноморском побережье Кавказа (ЧПК) - с 1953 г.
На родине Тh. plicata - одно из самых заметных деревьев верхнего яруса, достигает
75 м высоты и 2,4 м в диаметре. Проведенное сравнительное изучение
морфометрических параметров показало, что растения, произрастающие в условиях
сухих субтропиков средиземноморского типа (ЮБК) достигают высоты всего лишь
10-12 м, диаметра ствола - до 20 см, часто имеют кустообразную форму. Во влажном
субтропическом климате (ЧПК) растения в возрасте 40-50 лет достигают высоты
20-25 м (могут достигать высоты 60 м с диаметром ствола до 30 см, формируют
густую конусовидную крону, образованную длинными горизонтальными ветвями с
плоскими веточками, покрытыми блестящей, светло-зеленой хвоей со
специфическим запахом, вызванным наличием эфирного масла. Эфирное масло Тh.
plicata обладает высокой противогрибковой и антибактериальной активностью,
обусловленной высоким содержанием кетонов α - и β - туйон). Установлено, что во
влажном и сухом субтропическом климате растения накапливают больше эфирного
масла по сравнению с природными местообитаниями и при выращивании в
умеренных широтах. На ЮБК содержание масла может достигать 1,1%, на ЧПК -
1,3% (в некоторых случаях - до 1,7%). Изменчивость компонентного состава
эфирного масла Th. plicata проявляется в соотношения α - и β - туйонов при
практически их одинаковом суммарном содержании (88-90%). Так, в условиях
влажных субтропиков доля β - туйона выше, что улучшает качество эфирного масла.
Содержание сабинена колеблется в пределах 1,31 - 4%, терпен-4-ола - 1,21-3,15%.
Высокая массовая доля эфирного масла и основных компонентов позволяет
говорить о перспективности промышленного использования Th. plicata в условиях
ЮБК и ЧПК как источника ценного эфирного масла для фармакологической
промышленности.

Исследования выполнены при финансовой поддержке РНФ, грант № 14-50-00079.

Ключевые слова: Thuja plicata, эфирное масло, α - и β - туйон, Южный берег Крыма,
Черноморское побережье Каваказа.

175
175
Preliminary study on pomological characteristics of different mulberry
accessions in Istria, Croatia: towards their conservation

Zeljko Prgomet1, Iva Prgomet2, Manuel Petrovic1, Dario Donno3


1Collegium Fluminense Polytechnic of Rijeka, Trpimirova 2V, 51000 Rijeka, Croatia;

E-mail: skink@pu.t-com.hr;
2Skink Ltd, Valata bb, 52210 Rovinj, Croatia; E-mail: iva.prgomet@gmail.com;
3University of Turin, Dep. Agricultural, Forest and Food Sciences, Largo Braccini 2, 10095

Grugliasco, Turin, Italy

Mulberry is a forgotten and underutilized fruit species which fruits are of very high
nutritional value. In Croatia, the ones that dominate are white (Morus alba) and black
(Morus nigra) mulberries. There are no planted orchards, but thousands of individual trees
are growing in private gardens or tree alleys. The aim of this preliminary study was to
register the best quality mulberry accessions in the Istria County based on their
pomological characteristics. The focus was on size and color of the fruit and resistance to
diseases and pests. Additionally, the phenophase development of selected trees was
observed. Five white (BD1, BD2, BD3, BD4 and BD5) and seven black (CD1, CD2, CD3, CD4,
CD5, CD6 and CD7) accessions were selected. Based on the measurements performed, it
was found that the average fruit weight varied from 1.35 g for CD3 to 3.76 g for CD7 within
black accessions, and from 1.42 g for BD2 to 2.05 g for BD5 within white accessions. The
shortest pedicel was observed for accessions CD2 and BD3 (5.00 mm and 4.72 mm,
respectively) and the longest ones for CD4 and BD5 (12.98 mm and 10.72 mm,
respectively). The earliest accessions to ripe were CD5, CD6, CD7 and BD4, while all the
others were fully ripened around 7 days later. Further studies, mainly genetic and
nutritional analyses, should be performed towards to conservation of mulberry accessions
biodiversity in Croatia.

Keywords: Morus spp., phenophase, fruit characteristics.

176 176
Biochemical analysis of Passiflora ligularis zygotic embryo germination
after cryopreservation

Débora Prudente1, Renato Paiva1, Débora Domiciano1, Lucas Souza1, Fernanda Nery2 and
Patrícia Paiva3
1Universidade Federal de Lavras UFLA, Departamento de Biologia, 37200-000 Lavras-

Minas Gerais, Brazil; E-mail: renpaiva@dbi.ufla.br


2Universidade Federal de São João Del Rei, Departamento de Engenharia de Biossistemas,

36300-000 São João Del Rei-Minas Gerais, Brazil


3Universidade Federal de Lavras UFLA, Departamento de Agricultura, 37200-000 Lavras-

Minas Gerais, Brazil

Cryopreservation is a process where live biological structures are preserved by cooling to


very low temperatures (−196°C using liquid nitrogen). Among cryopreservation
techniques, vitrification with the use of Plant Vitrification Solution 2 (PVS2) for long
periods can interfere in cellular homeostasis. Therefore, this study aimed to evaluate the
influence of exposure time to the cryoprotectant PVS2 on the mobilization of reserves and
on antioxidant metabolism during the germination of cryopreserved Passiflora ligularis
zygotic embryos. The centesimal composition was analytically determined for P. ligularis
seeds. Cryopreservation procedures consisted on to test different exposure times to PVS2
for zygotic embryos, after 30 days of in vitro culture. Percentage of germination and
germination speed index (GSI) were also evaluated. Proline content, hydrogen peroxide,
activity of isocitrate lyase (ICL), malate synthase (MSy), lipidic peroxidation and
antioxidant enzyme activity (SOD, CAT, APX) were evaluated on zygotic embryos at
different periods after cryopreservation. P. ligularis seeds presented a large percentage of
lipids (31%) in their reserves, characterizing as oil seeds. The germination from
cryopreserved zygotic embryos increased significantly and reached the maximum (85%)
with GSI (0.6) after 60 min of PVS2 exposure. The highest values for the activity of the
exclusive enzymes of the glyoxylate cycle, ICL and MSy were recorded after 60 min of
exposure to PVS2 solution, accelerating the reserve mobilization and consequently the
germination process. The increase of proline content, as well as the activity of antioxidant
enzymes (SOD, CAT, APX) and a decrease of lipidic peroxidation was also verified, which
was able to optimize the long-term conservation of this species. P. ligularis seedlings were
completely regenerated 60 days after cryopreservation. In conclusion, the application of
the cryopreservation technique, in addition to being a tool for conservation, may be
applied to accelerate and standardize germination and also may have long-term practical
importance for oilseed plants.

Acknowledgments: CNPq, CAPES and FAPEMIG.

Keywords: sweet granadilla, long-term storage, in vitro conservation, glyoxylate cycle,


antioxidant metabolism.

177
177
Effects of selenium nanoparticles on increasing the salt tolerance of
some annual flower crops

Anna Repetskaya, Irina Yurkova, Alexander Omelchenko, Denis Panov, Irina Kazakova
V.I. Vernadsky Crimean Federal University, 4 Vernadsky Prospekt, Simferopol, 295007,
Russian Federation; E-mail: anna.repetskaya@gmail.com

One of the important indicators of the viability of plants is resistance to salt stress. Soil
salinity not only lowers crop yields, but also negatively affects ornamental plants.
Increasing the resistance of plants to salinity has both fundamental and practical
significance. An important role in enhancing the adaptive potential of plants belongs to
selenium. Selenium has antioxidant properties and is part of the structure of one of the
main antioxidant enzymes, glutathione peroxidase. Unlike ionic forms of selenium,
nanoparticles are less toxic, biologically available and have a prolonged action. However,
the effect of selenium nanoparticles on plant resistance to salt stress has been poorly
studied. The aim of this work was to study the effect of selenium nanoparticles on the salt
tolerance of annual flower crops. Selenium nanoparticles were obtained by original
technology by the reduction of sodium selenite by cysteine and the stabilization of
nanoparticles by sodium alginate. The morphology of the surface of a thin nanocomposite
selenium film was studied by scanning atomic force microscopy (AFM). It is shown that the
surface of a film is a cluster of nanoclusters consisting of nanograins. The average size of
the nanograin is about 34 nm. The research subjects were the French marigold (Tagetes
patula L.) and elegant zinnia (Zinnia elegans Jacq.). Seeds were soaked for four hours in
water solutions of nanoselenium at a concentration of 5.0; 10.0; 20.0 and 30.0 mg L-1.
Treated seeds of T. patula were germinated in Petri dishes in saline solutions (100 mM
NaCl) for 7 days at 24°C. Z. elegans seeds were grown on a saline substrate (2.0 g kg-1
NaCl) in the vegetation vessels for 30 days at 24°C. Control served as: 1 – seeds soaked in
distilled water; 2 – seeds soaked in distilled water, grown under conditions of salt stress.
The protective effect of selenium nanoparticles on seed germination, the morphometric
indices of plants (linear dimensions of roots and the aerial part, the mass of wet and dry
matter), as well as the content of proline in the conditions of simulated chloride salinity
are investigated. It is shown that the treatment of T. patula and Z. elegans seeds with
nanoselenium increases seed germination, morphometric indices of plants and proline
content in comparison with the control samples (without nanoselenium, NaCl). The
maximum effect was obtained at the concentration of nanoselenium 10.0–20.0 mg L-1, and
at 30.0 mg L-1, all the morphometric indices were suppressed. Thus, the nanocomposite of
selenium stabilized by sodium alginate at certain concentrations can activate the
protective mechanisms of flower cultures under conditions of salt stress.

Keywords: Tagetes patula L., Zinnia elegans Jacq., nanoselenium, AFM, salt stress.

178 178
Влияние наночастиц селена на повышение солеустойчивости
некоторых однолетних цветочных культур

А.И. Репецкая, И.Н. Юркова, А.В. Омельченко, Д.А. Панов, И.С. Казакова
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»,
г. Симферополь, Российская Федерация; e-mail: anna.repetskaya@gmail.com

Одним из важных показателей жизнеспособности растений является устойчивость


к солевому стрессу. Засоление почв не только понижает урожайность
сельскохозяйственных культур, но и негативно влияет на декоративные растения.
Повышение устойчивости растений к засолению имеет как фундаментальное, так и
практическое значение. Важная роль в усилении адаптивного потенциала растений
принадлежит селену. Селен обладает антиоксидантными свойствами и входит в
структуру одного из главных ферментов-антиоксидантов – глутатионпероксидазы.
В отличие от ионных форм селена наночастицы менее токсичны, биологически
доступны и обладают пролонгированным действием. Однако влияние наночастиц
селена на устойчивость растений к солевому стрессу слабо изучено. Целью
настоящей работы было исследование влияния наночастиц селена на
солеустойчивость однолетних цветочных культур. Наночастицы селена получали по
оригинальной технологии восстановлением селенистокислого натрия цистеином и
стабилизацией наночастиц альгинатом натрия. Морфология поверхности тонкой
нанокомпозитной пленки селена исследована методом сканирующей атомно-
силовой микроскопии (АСМ). Показано, что поверхность пленки представляет собой
скопления нанокластеров, состоящих из нанозерен. Средний размер нанозерен
составляет около 34 нм. Объектами исследований были бархатцы отклоненные
(Tagetes patula L.) и цинния изящная (Zinnia elegans Jacq.). Семена замачивали в
течение 4 часов в водных растворах наноселена в концентрации 5,0; 10,0; 20,0 и 30,0
мг/л. Обработанные семена T. patula проращивали в чашках Петри в солевых
растворах (100 мМ NaCl) в течение 7 суток при 24°С. Семена Z. elegans проращивали
на засоленном субстрате (2,0 г/кг NaCl) в вегетационных сосудах в течение 30 суток
при 24°С. Контролем служили: 1 – семена, замоченные в дистиллированной воде; 2 -
семена, замоченные в дистиллированной воде, выращенные в условиях солевого
стресса. Исследовано протекторное действие наночастиц селена на всхожесть
семян, морфометрические показатели растений (линейные размеры корней и
надземной части, массу сырого и сухого вещества), а также содержание пролина в
условиях моделируемого хлоридного засоления. Показано, что обработка семян T.
patula и Z. elegans наноселеном увеличивает всхожесть семян, морфометрические
показатели растений и содержание пролина по сравнению с контрольным
вариантом (без наноселена, NaCl). При этом максимальный эффект был получен при
концентрации наноселена 10,0-20,0 мг/л, а при 30,0 мг/л наблюдали снижение
значений всех морфометрических показателей. Таким образом, нанокомпозиция
селена, стабилизированного альгинатом натрия, в определенных концентрациях
может активировать защитные механизмы цветочных культур в условиях солевого
стресса.

Ключевые слова: Tagetes patula L., Zinnia elegans Jacq., наноселен, АСМ, солевой
стресс.

179
179
Adaptogenic effect of Epin-extra drug on seed germination and
growth of seedlings in Cucumis sativus L. under cadmium stress

G.V. Reshetnik, S.I. Chmelеva, A.I. Sidyakin, S.F. Kotov, N.A. Sobchuk
V.I. Vernadsky Crimean Federal University, 4 Vernadsky Prospekt, Simferopol, 295007,
Russian Federation; E-mail: reshetnikgv@gmail.com

The purpose of our research was to study influence of Epin-extra drug on catalase activity
of germinating seeds and growth of seedlings in Сucumis sativus L. cultivar ‘Fenix plus’
under the effect of cadmium acetate various concentrations. It was necessary to determine
the optimal concentration of Epin-extra drug, to specify the pre-sowing seed treatment
exposure, to ascertain the catalase activity of germinating seeds and the morphometric
indicators of the seedlings. The solutions with different concentrations of cadmium acetate
(10-2 – 10-4 М, 100 µM and 250 µM) were used. 0.05% Epin-extra drug as an optimal
concentration was determed. The exposure of pre-sowing seed treatment was 4 h. Positive
antistress influence of Epin-extra drug on the germination of С. sativus. seeds under the
effect of cadmium acetate was determined. Seed germination in solutions of cadmium
acetate of various concentrations was inhibited from the first days of the experiment. At a
salt concentration of 10-2 М, the germination of the seeds was completely inhibited. At 10-
3 М, the germination rate was increased to 65%, at 10-4М – 73%. Pre-sowing seed

treatment with Epin-extra drug increased this rate on 20%. The catalase enzyme activity
was decreased due to increase of metal concentration in the medium. Pre-sowing seed
treatment in 0.05% solution of Epin-extra drug stimulated activity of the catalase enzyme
at maximum values of Cd(CH3COO)2 by an average on 10%. Under the effect of the metal
during the vegetation, the indicators of growth of the aerial part and the root system of the
cucumber seedlings were below the test ones by an average on 40%. The exogenous
epibrassinolide was increase of the aerial part on 15%, the wet weight on 17% and the dry
weight on 29%.
As a result, the studies have shown that the pre-sowing treatment of С. sativus seeds
with the growth regulator Epin-extra induces the resistance to sublethal concentrations of
cadmium, contributing to decrease of the inhibitory effects of the growth processes.

Keywords: cucumber seeds, Epin-extra drug, cadmium, catalase, morphometric indicator.

180 180
Адаптогенное действие препарата Эпин - экстра на прорастание
семян и рост проростков Cucumis sativus L. при кадмиевом стрессе

Г.В. Решетник, С.И. Чмелёва, А.И. Сидякин, С.Ф Котов, Н.А Собчук
Крымский федеральный университет имени В.И.Вернадского
проспект Вернадского, 4, г. Симферополь, 295007, Российская Федерация;
e-mail: reshetnikgv@gmail.com

Целью нашего исследования было изучение влияния препарата Эпин экстра на


активность каталазы прорастающих семян и рост проростков Сucumis sativus L. сорта
Феникс плюс на фоне действия ацетата кадмия. Для достижения поставленной цели
необходимо было установить оптимальную концентрацию препарата Эпин экстра,
экспозицию предпосевной обработки семян, определить активность каталазы
прорастающих семян и морфометрические показатели проростков. Были
использованы растворы с различной концентрацией ацетата кадмия (10-2 – 10-4 М,
100 мкМ и 250 мкМ). Установлена оптимальная концентрация препарата Эпин-
экстра (0,05%). Экспозиция предпосевной обработки семян составляла 4 часа. Было
установлено положительное антистрессовое влияние препарата Эпин экстра на
прорастание семян С. sativus на фоне действия уксуснокислого кадмия. Прорастание
семян в растворах ацетата кадмия различной концентрации угнеталось с первых
суток опыта. При концентрации соли 10-2 М прорастание семян полностью
ингибировалось. Всхожесть при концентрации 10-3 М составила 65%, при 10-4М –
73%. Предпосевная обработка семян препаратом Эпин экстра повысила данный
показатель на 20%. С повышением концентрации металла снижалась активность
фермента каталазы. Предпосевная обработка семян в 0,05% растворе препарата
Эпин-экстра стимулировала активность фермента каталазы при максимальных
значениях Cd(CH3COO)2 на 10%. Под действием металла за время вегетации
показатели роста надземной части и корневой системы проростков огурца были
ниже контрольных в среднем на 40%., Экзогенный эпибрассинолид способствовал
увеличению надземной части в среднем на 15%, массы сырого вещества – 17%, а
массы сухого вещества – на 29%.
Таким образом, исследования показали, что предпосевная обработка семян
С. sativus регулятором роста Эпин экстра индуцирует устойчивость к воздействию
сублетальных концентраций кадмия, способствуя уменьшению ингибирующих
эффектов ростовых процессов.

Ключевые слова: семена огурца, препарат Эпин-экстра, кадмий, каталаза,


морфометрические показатели.

181
181
Some features of Pinus sabiniana Douglas male generative matter
development in the conditions of the Southern Coast of Crimea

Tatiana Sakhno
Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Nikita, Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: sahno_tanya@mail.ru

Digger pine (Pinus sabiniana Douglas) is an endemic species of Californian flora. It has been
under cultivation in Crimea since 1832. Digger pine occurs in the park groves of the bottom
chord of the Southern Coast of Crimea (SCC). The development characteristics of
introduced plant reproduction processes are classified as the most informative attributes
of their successful acclimatization. The development phenology and arborescent pollen
quality for genus Pinus L. representatives are the most important characteristics of plants’
state, their biological potential and response level for environmental factors’ dynamics.
Using of standard reproductive biological and biotechnological means allowed to gather
the information about the state of P. sabiniana male generative matters while introduction
in the SCC. It has been determined that in 2017-2018 P. sabiniana pollination timescales
had essential differences, going through unit phenological phases was observed in time-
shifting of 15 days and the variation in the sum of effective temperatures above 5 °C –
48.5°C. Pollen dispersion duration varies from 16 to 19 days and depends on a temperature
regime, wind speed and depth of rainfall during the period of pollination. The pollen seeds’
morphological analysis has shown that in 2018, the quantity of development anomalies
was 3.1 times larger than in 2017. Pollen vitality in 2018 has also been decreased by
21.5%. A head start of vegetation in the conditions of the SCC adversely effects on
P. sabiniana male generative matters. Huge daily average temperature swings with the
difference over 8°C while micro-sporogenesis occure expansion in the number of abnormal
pollen seeds and altogether reduce the quality of a produced pollen.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Pinus sabiniana, introduction, pollen, vitality, anomalies, the Southern Coast of
Crimea.

182 182
Некоторые особенности развития мужской генеративной сферы
Pinus sabiniana Douglas в условиях Южного берега Крыма

Т.М. Сахно
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Ордена Трудового
Красного Знамени Никитский ботанический сад − Национальный научный центр
РАН», г. Ялта, Республика Крым, 298648, Российская Федерация;
e-mail: sahno_tanya@mail.ru

Сосна Сабина (Pinus sabiniana Douglas) – эндемичный вид флоры Калифорнии, в


Крыму культивируется с 1832 года. Сосна Сабина встречается в парковых
насаждениях нижнего пояса Южного берега Крыма (ЮБК). Характеристики развития
процессов репродукции интродуцированных растений относят к наиболее
информативным признакам успешной их акклиматизации. Фенология развития и
качество пыльцы для представителей рода Pinus L. являются важнейшими
показателями состояния растений, их биологического потенциала и уровня реакции
на динамику факторов внешней среды. Использование стандартных инструментов
репродуктивной биологии и биотехнологии позволило получить информацию о
состоянии мужской генеративной сферы P. sabiniana при интродукции на ЮБК.
Установлено, что в 2017-2018 гг. сроки полинации P. sabiniana имели существенные
различия, прохождение отдельных фенофаз наблюдалось со сдвигом 15 суток и
разницей суммы эффективных температур выше 5°С – 48.5°С. Продолжительность
пыления варьирует от 16 до 19 суток и зависит от температурного режима, скорости
ветра и количества осадков в период полинации. Морфологический анализ
пыльцевых зерен показал, что в 2018 г. количество аномалий развития было больше
в 3,1 раза, по сравнению с 2017 г. Жизнеспособность пыльцы в 2018 г. также
снизилась на 21,5%. Раннее начало вегетации в условиях ЮБК оказывает негативное
воздействие на мужскую репродуктивную сферу P. sabiniana. Резкие перепады
среднесуточных температур воздуха с разницей более 8°С в период
микроспорогенеза вызывают увеличение количества аномальных пыльцевых зерен
и в целом снижают качество продуцируемой пыльцы.

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта Российского научного фонда №


14-50-00079.

Ключевые слова: Pinus sabiniana, интродукция, пыльца, жизнеспособность,


аномалии, Южный берег Крыма.

183
183
Challenges of differentiated assessment in situ and ex situ dynamics of
vital functions of woody plants of forest ecosystems

Tatiana Sakhno, Vladimir Koba, Aleksandr Khromov


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: sahno_tanya@mail.ru

Forest communities occupy almost a third of the world's land surface. Many scientific
studies on the problems of assessment of the negative impact of anthropogenesis on the
environment are associated with the study of woody plants as an important component of
forest biocenoses. Traditional objects of research are forest plantations growing in the
zone of exposure to atmospheric emissions of industrial facilities. The formation of the
ecological profile and the allocation of the priority directions of distribution along the
wind rose allows to characterize the dispersion gradient from a specific source of
atmospheric pollutants. It is not always possible to accurately estimate the intensity and
exposure of the pollutants in situ. This problem is to some extent solved by ex situ
observations in the laboratory. The ratio and analysis of quantitative and qualitative
results of laboratory observations allows to model and predict the state and development
of forest communities in connection with the special aspects of the dynamics of
technogenic pollution. However, the disadvantage of such studies is that the experimental
observations ex situ cannot completely take into account the full range of factors acting in
situ, as well as the fact that different biochemical active substances can have a cumulative
character of influence on organisms for a long time, manifested not only in the violation of
plant life functions during the observation period, but also in the prolonged change in the
genotypic structure of natural populations. Therefore, one of the urgent challenge is the
expansion of scientific research in the field of system assessment of the state and
prospects of forest ecosystems development on the basis of integrated use of methods of
analysis in situ and ex situ dynamics of vital functions of woody plants in connection with
man-made pollution of the natural environment.

Keywords: forest ecosystems, woody plants, pollutants, vital functions, dynamics, in situ,
ex situ.

184 184
Проблемы дифференцированной оценки in situ и ex situ динамики
жизненных функций древесных растений лесных экосистем

Т.М. Сахно, В.П. Коба, А.Ф. Хромов


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: sahno_tanya@mail.ru

Лесные сообщества занимают почти треть мировой поверхности суши. Многие


научные исследования по проблемам оценки негативного воздействия
антропогенеза на состояние окружающей среды, связаны с изучением древесных
растений как важнейшего компонента лесных биоценозов. Традиционными
объектами исследований являются лесные насаждения, произрастающие в зоне
воздействия атмосферных выбросов промышленных объектов. Формирование
экологического профиля и выделение по розе ветров приоритетных направлений
распространения позволяет характеризовать градиент рассеивания от конкретного
источника атмосферных поллютантов. При этом in situ не всегда возможно точно
оценить интенсивность и экспозицию воздействия поллютантов на изучаемые
растения. Эта проблема в той или иной степени решается при проведении
наблюдений ex situ в лабораторных условиях. Соотношение и анализ
количественных и качественных результатов лабораторных наблюдений позволяет
моделировать и прогнозировать состояние и развитие лесных сообществ в связи с
особенностями динамики техногенного загрязнения. Однако, недостатком таких
исследований является то, что при проведении экспериментальных наблюдений ex
situ нельзя полностью учесть весь комплекс факторов, действующих in situ, а также
и то, что воздействие на организмы в течение длительного времени различных
биохимически активных веществ может иметь кумулятивный характер,
проявляющийся не только в нарушении жизненных функций растений в период
проведения наблюдений, но и в пролонгирующем изменении генотипической
структуры природных популяций. Поэтому одной из актуальных проблем является
расширение научных изысканий в области системной оценки состояния и
перспектив развития лесных экосистем на основе комплексного использования
методов анализа in situ и ex situ динамики жизненных функций древесных растений
в связи техногенным загрязнением природной среды.

Ключевые слова: лесные экосистемы, древесные растения, поллютанты,


жизненные функции, динамика, in situ, ex situ.

185
185
Conservation methods of the unique Czech gene pool of whitebeams (the
genus Sorbus)

Jana Šedivá, Roman Businský, Markéta Pospíšková, Jiří Velebil, Hana Drahošová,
Vladimír Zíka
Silva Tarouca Research Institute for Landscape and Ornamental Gardening (VÚKOZ),
Květnové nám. 391, Průhonice, Czech Republic; E-mail: sediva@vukoz.cz

The whitebeam (Sorbus sp.) is the only representative of endemic trees occurring in the
Czech Republic. At present, 14 endemic species of Sorbus are described in the Czech
Republic. Most of them are located on sites representing residual fragments of natural
habitats in the cultural landscape. A study was focused on four apomict species: Sorbus
gemella, S. omissa, S. abscondita, S. kitaibeliana, discovered recently. The aim of the project
is to develop a set of procedures for the protection of selected endemic whitebeams in their
unique natural habitats in the Czech Republic. The subject of the study is: a) assessment of
the current status of existing localities (number of individuals, habitat and vegetation
conditions, degree of disturbance and threats); b) evaluation of intrapopulation and
interpopulation genetic variability and estimation of the parentage using molecular
markers; c) determination of conditions of the in vitro propagation (composition of the
medium, conditions of cultivation and acclimatization) and generative propagation (seed
treatment, composition of substrates and germination conditions); d) extending the
existing Sorbus collection in the Dendrological Garden of VÚKOZ. The project is the first
year of the solution.

This work was supported by the Technology Agency of the Czech Republic (no. TH03030037).

Keywords: Sorbus; endemics; nature conservation; taxonomy; micropropagation;


propagation by seed.

186 186
Some biological features of lavender and lavandin in relation with virus
infection

Svetlana Shevchenko, Irina Mitrofanova


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: shevchenko_nbs@mail.ru

Lavandula angustifolia L. is one of the valuable essential oil and ornamental plants. This is
an evergreen shrub in the height of 60-80 cm with highly branched lower vegetative
shoots and numerous young flowering shoots. In the Crimea lavender blossoms in June-
August, flowers are full, bisexual, zygomorphic, collected in false whorls, forming spicate
inflorescences. Corolla is not clearly bilabiate, up to 1 cm long, with large lobes, bluish-
violet, pubescent. Calyx is tubular, 0.4-0.7 cm long, with prongs, densely pubescent, not
falling. Pollen in lavender is 3-celled, 3-furrowed. In the total mass of pollen, L. angustifolia,
lavandin ('Rabat' and 'Snezhny Bars') and studied cultivars of lavender ('Stepnaja',
'Belyanka' and 'Rannyaya'), the pollen grains can be of various sizes, full and sterile. When
the ploidy of plants changes, the size of the pollen grains and the number of pores change.
The content of morphologically normal pollen grains in the studied taxa ranges from 30 to
90%. The highest proportion of them, exceeding 90%, was noted in L. angustifolia and
lavender of the 'Rannyaya' cultivar. The affection of the plants of lavender and lavandin by
the virus Tobacco mosaic virus (TMV) led to the appearance of yellow spots on the leaves
and their deformation, as well as to violations of internal processes of development of
male generative structures. With the determining dependence of the formation of
morphologically normal pollen grains from the genotype, the virus infection of individuals
was particularly expressed in the anomalies and deficiency of the pollen grains.

The authors are grateful to the chief scientist of the FSFIS "NBG-NSC", professor, Doctor of
Biological Sciences, V.D. Rabotyagov for the provided breeding material for research.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Lavandula angustifolia, morphology, virus infection, generative sphere.

187
187
Некоторые биологические особенности лаванды и лавандина в
связи с их инфицированностью вирусами

С.В. Шевченко, И.В. Митрофанова


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: shevchenko_nbs@mail.ru

Lavandula angustifolia L. является одним из наиболее ценных эфиромасличных и


декоративных растений. Это вечнозеленый полукустарник высотой 60-80 см с
сильно разветвленными нижними вегетативными побегами и многочисленными
молодыми цветоносными побегами. Цветет лаванда в Крыму в июне-августе,
цветки полные, обоеполые, зигоморфные, собраны в ложные мутовки, образующие
колосовидные соцветия. Венчик неясно двугубый, до 1 см длиной, с крупными
лопастями, голубовато-фиолетовый, опушенный. Чашечка трубчатая, 0,4-0,7 см
длиной, с зубцами, густо опушенная, неопадающая. Пыльца у лаванды 3-клеточная,
3-борозднопоровая. В общей массе пыльцы L. angustifolia, лавандина (сорта Рабат и
Снежный Барс) и изучаемых сортов лаванды (Степная, Белянка и Ранняя)
пыльцевые зерна могут быть разных размеров, полноценные и стерильные. При
изменении плоидности растений у них меняются размеры пыльцевых зерен и число
пор. Содержание морфологически нормальных пыльцевых зерен у изучаемых
таксонов колеблется от 30 до 90%. Наиболее высокая их доля, превышающая 90%,
отмечена у L. angustifolia и лаванды сорта Ранняя. Поражение растений лаванды и
лавандина вирусом Tobacco mosaic virus (TMV) приводило к появлению желтых
пятен на листьях и их деформации, а также к нарушениям внутренних процессов
развития мужских генеративных структур. При определяющей зависимости
формирования морфологически нормальных пыльцевых зерен от генотипа
инфицированность особей особенно ярко выражалась в аномалиях и
дефективности пыльцевых зерен.

Авторы приносят благодарность главному научному сотруднику ФГБУН «НБС-ННЦ»,


профессору, доктору биологических наук В.Д. Работягову за предоставленный для
исследований материал.

Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант № 14-50-


00079).

Ключевые слова: Lavandula angustifolia, морфология, вирусная инфекция,


генеративная сфера.

188 188
New cherry-adapted strain of Plum pox virus - PPV-CV (Cherry Volga)

Anna Sheveleva1, Petr Ivanov1, G. Osipov2, Sergei Chirkov1


1Lomonosov Moscow State University, Moscow 119234, Russian Fedearation;

E-mail: s-chirkov1@yandex.ru
2Tatar Research Institute of Agriculture, Kazan, Republic of Tatarstan, 420059, Russian

Federation

Plum pox virus (PPV, genus Potyvirus, family Potyviridae) is considered the most
detrimental viral pathogen of stone fruit crops. Nine PPV strains (D, M, EA, C, Rec, W, T, An
and CR) recognized so far. They differ in genome sequences, antigenic and epidemiological
properties, geographical distribution, pathogenicity and host range. It was thought that
only the strains C and CR were capable of infecting sour cherry (Prunus cerasus). In 2016,
atypical PPV isolates Tat-2 and Tat-4 were detected on wild sour cherry trees and root
offshoots, displaying symptoms of Sharka disease in Tatarstan (Russia). ELISA with strain-
specific monoclonal antibodies demonstrated that both isolates reacted only with the
antibody AC to strain C. According to RT-PCR, the Tat-2 and Tat-4 were recognized only
with the primers P1/PD to the strain D. The sequences of full-length genomes of Tat-2 and
Tat-4 consisting of 9792 nucleotides were determined using the Illumina high-throughput
sequencing. They were 99.4 and 99.7% identical to each other at the nucleotide and amino
acid levels, respectively. Sequence similarities with other PPV strains were 82.6 to 83.3%
for genomic RNA and 92.6 to 93.8% for polyprotein. Phylogenetic analysis showed that
Tat-2 and Tat-4 grouped with isolates of the strains C and CR, forming a separate clade
within this cluster with 100% bootstrap support. Thus, Tat-2 and Tat-4 represent a new
PPV strain for which the name CV (Cherry Volga) was proposed. Using the strain-specific
primers targeting P1 and coat protein genes, three additional strain CV isolates (Tat-36,
Tat-39, Tat-49) were found in abandoned cherry collections and own-rooted trees of the
cultivar ‘Morel Rannyaya’. The discovery of the third cherry-adapted strain of the virus
may contribute to a better understanding of the origin, genetic diversity and evolution of
PPV as well as identification of host specificity determinants.

This work was funded by the Russian Science Foundation, grant No. 14-24-00007.

Кeywords: stone fruit crops, cherry, plum pox virus, strain CV.

189
189
Новый адаптированный к вишне штамм вируса оспы сливы - PPV-
CV (Cherry Volga)

А.А. Шевелева1, П.А. Иванов1, Г.Е. Осипов2, С.Н. Чирков1


1Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, г. Москва

119234, Российская Федерация; e-mail: s-chirkov1@yandex.ru


2Татарский НИИ сельского хозяйства, г. Казань, Республика Татарстан 420059,

Российская Федерация

Вирус оспы (шарки) сливы (Plum pox virus, PPV, род Potyvirus, семейство Potyviridae)
является самым вредоносным для косточковых культур. Было идентифицировано 9
штаммов вируса (D, M, EA, C, Rec, W, T, An и CR), которые различаются по
последовательности генома, антигенным и эпидемиологическим свойствам,
географическому распространению, патогенности и кругу хозяев. Считалось, что
только штаммы С и CR способны заражать вишню (Prunus cerasus). В 2016 году в
Татарстане (Россия) на дикорастущих деревьях и корневой поросли вишни с
симптомами шарки обнаружены атипичные изоляты PPV, названные Tat-2 и Tat-4,
соответственно. В иммуноферментном анализе со штаммоспецифичными
моноклональными антителами оба изолята реагировали только с антителами АС к
штамму С. При определении штамма методом полимеразной цепной реакции с
обратной транскрипцией Tat-2 и Tat-4 распознавались только праймерами P1/PD к
штамму D. Полногеномные последовательности этих изолятов длиной 9792
нуклеотида были определены методом высокопроизводительного секвенирования
на платформе Illumina. На нуклеотидном и аминокислотном уровнях Tat-2 и Tat-4
идентичны между собой на 99,4 и 99,7%, соответственно. Сходство с другими
штаммами PPV составило 82,6 - 83,3% для геномной РНК и 92,6 - 93,8% для
полипротеина. При филогенетическом анализе Tat-2 и Tat-4 группировались с
изолятами штаммов C и CR, образуя при этом c вероятностью 100% отдельную
кладу в кластере изолятов, адаптированных к вишне. На основании анализа
полногеномных последовательностей можно утверждать, что изоляты Tat-2 и Tat-4
представляют собой новый штамм вируса, для которого предложено название CV
(Cherry Volga). С помощью штаммоспецифичных праймеров, таргетирующих гены
P1 и белка оболочки, в заброшенных коллекциях и на корнесобственных деревьях
вишни сорта Морель Ранняя были обнаружены 3 дополнительных изолята штамма
CV (Tat-36, Tat-39, Tat-49). Открытие третьего штамма вируса, адаптированного к
вишне, может способствовать более полному пониманию происхождения,
генетического разнообразия и эволюции PPV, а также выявлению генетических
детерминант, определяющих круг хозяев вируса.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда, грант


№ 14-24-00007.

Ключевые слова: косточковые культуры, вишня, вирус оспы сливы, штамм CV.

190 190
Variability of microsatellite loci in ‘Antonovka’ apple landraces from
VIR collection

Anna Shlyavas1, Aya Trifonova2, Liliya Dedova2, Ksenia Boris2


1FRC The N. I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic Resources (VIR), Bol’shaya

Morskaya Str., 42- 44, St. Petersburg, 190000, Russian Federation,


E-mail: ann2668@yandex.ru
2Vavilov Institute of General Genetics of the Russian Academy of Sciences, Gubkina Str., 3,

Moscow, 119333, Russian Federation

VIR collection of apple is the largest in Russia and includes more than 3,000 accessions.
Among apple landraces from the collection, group of ‘Antonovka’ landraces, known for its
winter hardiness and disease resistance, is of special interest. To study genetic diversity of
15 ‘Antonovka’ accessions from VIR collection, eight SSR markers were used (CH02c02b,
CH02g04, CH03d01, CH03d11, CH03d08, CH04e03, CH01f03b and CH03a04). Analysis was
performed on ABI Prism 3130xl (Applied Biosystems). As a result, 56 alleles were detected
in eight studied loci of 15 ‘Antonovka’ accessions. The number of alleles per locus varied
from five (CH02c02b, CH03d01, CH03d11 and CH04e03) to ten (CH03d08 and CH03a04),
and averaged seven. The polymorphism information content (PIC) was rather high (0.639
(CH02c02b)-0.821 (CH03d08)) with an average values of 0.706. The average expected
heterozygosity (H) was 0.740. Dice genetic similarity coefficient averaged 0.402. The
maximum similarity (not lower than 0.867) was revealed for three ‘Antonovka
obyknovennaya’ (Common Antonovka) accessions (K74, K711 and K21190), having
identical alleles in five SSR loci. A high similarity rate (0.621-0.690) was also noted
between this group of samples and ‘Antonovka Ploskaya’ (K31977). ‘Antonovka
obyknovennaya’ (K74) and ‘Antonovka Monastyrskaya’ (K68) had the same set of alleles at
all loci, and can be duplicates. The lowest level of similarity (0.069 and 0.074) was
detected between ‘Antonovka Krasnaya’ (K21652), ‘Antonovka obyknovennaya’ (K74) and
‘Antonovka Privalovskaya Zimnyaya’ (K21641). For both ‘Antonovka Pozdnyaya
Uspenskaya’ (K21645) and ‘Antonovka Zimnyaya’ (K13400), specific (for 15 studied
accessions) alleles were identified in six of the eight SSR loci studied.
Thus, the SSR loci polymorphism of 15 ‘Antonovka’ accessions was unexpectedly
high and for all studied samples, except for ‘Antonovka obyknovennaya’ (K74) and
‘Antonovka Monastyrskaya’ (K68), specific combinations of alleles were revealed. The
obtained results are part of a large-scale study of genetic diversity and certification of the
VIR apple collection.

Keywords: apple, landraces, genetic resources, genetic diversity, microsatellites.

191
191
Вариабельность микросателлитных локусов сортообразцов
Антоновки народной селекции в коллекции яблони ВИР

А.В. Шлявас1, А.А. Трифонова2, Л.В. Дедова2, К.В. Борис2


1Всероссийский институт генетических ресурсов растений имени Н.И. Вавилова,

г. Санкт-Петербург, 190000, Россия; e-mail: a.shlyavas@vir.nw.ru;


2Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук,

ул. Губкина 3, г. Москва, 119333, Российская Федерация

Генетическая коллекция яблони ВИР является крупнейшей в РФ и включает более


3000 образцов. Отдельный интерес представляют сорта народной селекции, в том
числе Антоновки, обладающие рядом ценных хозяйственных признаков, таких как
устойчивость к болезням, вредителям и низким температурам, что активно
используется в отечественных и зарубежных селекционных программах. Для
оценки генетического разнообразия и паспортизации 15 сортообразцов Антоновки
из коллекции ВИР были выбраны 8 SSR-маркеров (CH02c02b, CH02g04, CH03d01,
CH03d11, CH03d08, CH04e03, CH01f03b, CH03a04). Фрагментный анализ проводили на
автоматическом генетическом анализаторе ABI Prism 3130xl (Applied Biosystems). В
результате у 15 образцов Антоновки выявлено 56 аллельных вариантов по 8 SSR-
локусам. Количество аллелей на локус варьировало от 5 (CH02c02b, CH03d01,
CH03d11, CH04e03) до 10 (CH03d08, CH03a04), и в среднем составило 7. Значение
показателя информативности (PIC) было достаточно высоким (0,639 (CH02c02b)-
0,821 (CH03d08)) при среднем значении 0,706. Средняя ожидаемая гетерозиготность
(H) составила 0,740. Значение коэффициента генетического сходства Дайса в
среднем составило 0,402. Максимальное сходство (не ниже 0,867) было выявлено
для образцов Антоновки обыкновенной (к-74, к-711, к-21190), имевших одинаковые
аллели в пяти SSR-локусах. Высокий коэффициент сходства (0,621-0,690) отмечался
также между данной группой образцов и Антоновкой Плоской (к-31977). При этом
Антоновка обыкновенная (к-74) и Антоновка Монастырская (к-68) имели
одинаковый набор аллелей по всем локусам, и, могут быть дублями. Наименьший
уровень сходства (0,069 и 0,074) отмечен между Антоновкой красной (к-21652) и
образцами Антоновка обыкновенная (к-74) и Антоновка Приваловская Зимняя (к-
21641). А для Антоновки Поздней Успенской (к-21645) и Антоновки Зимней (к-
13400) в шести из восьми изученных SSR-локусах были выявлены специфичные
аллели, не встречающиеся у других образцов данной выборки.
Таким образом, уровень полиморфизма SSR-локусов у 15 образцов Антоновки
оказался неожиданно высоким и для всех изученных образцов, кроме Антоновки
обыкновенной (к-74) и Антоновки Монастырской (к-68), были выявлены
уникальные сочетания аллелей. Полученные результаты являются частью
масштабной работы по исследованию генетического разнообразия и паспортизации
коллекции яблони ВИР.

Ключевые слова: яблоня, сорта народной селекции, генетические ресурсы,


генетическое разнообразие, микросателлиты.

192 192
Strategy for engineering PPV resistant cis-genic stone fruit trees by
silencing of the eIF4 host initiation translation factors

Tatiana Sidorova1,2 , Alina Frolova3, Vadim Timerbaev1,2, Alexander Pushin1,2, Tatiana


Mitiouchkina1,2, Sergey Dolgov1,2
1 FSFIS "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical Gardens – National Scientific Center

of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation


3The Branch of M.M. Shemyakin and Yu.A. Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry

of the RAS, 6 Prospect Nauki, Puschino, Moscow region, 142290, Russian Federation;
2Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russian Federation

E-mail: mitiouchkina@rambler.ru

Plum pox or sharka disease is the most serious viral disease affecting plum, apricot and
peach. Last decade, genetic transformation has been used as an efficient method in
engineering viral resistance for many crops, including stone fruit trees. In this study, RNA
silencing approach was used to develop Plum pox virus (PPV) resistance in plants by
manipulating the expression of eIF4 host initiation translation factors involved in the
potyvirus infectious cycle in plant species. Two DNA constructs containing self-
complementary hairpin structure of peach eIF(iso)4G and eIF(iso)4E genes under RBCS
peach promoters/terminators have been developed. To produce marker-free cis-genic
events, all vectors also included the sequence of the chemical-inducible RecLBD-CodA
system for precise removal of undesirable antibiotic resistance genes used for transgenic
tissue selection. Since the production of transgenic stone fruit plants is a difficult long time-
consuming process, a series of transgenic Nicotiana tabacum plants were firstly produced
to evaluate the efficiency of T-DNA transfer for achieving the host gene knockdown when
various host factors were used. Despite the fact that transgenic plants with both constructs
were generated, a complete sequence of eIF(iso)4E self-complementary hairpin structure
was introduced more effectively (94%), than the similar hairpin sequences of the
eIF(iso)4G gene (59%). The expression of incorporated hairpin constructs was confirmed.
The effect of silencing of eIF4 host initiation translation factors on the virus resistance will
be discussed.

Acknowledgment. This study was funded by the research grant No. 14-50-00079 of the
Russian Science Foundation.

Keywords: sharka disease; genetic transformation; RNA interference; initiation translation


factor.

193
193
Стратегия создания устойчивых к PPV цисгенных косточковых
культур путем замалчивания генов кодирующих факторы
инициации трансляции eIF4

Сидорова Т.Н 1,2, Фролова А.3, Тимербаев В.Р.,2, Митюшкина Т.Ю.1,2, Пушин А.С.1,2,
Долгов С.В.1,2
1 ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», г. Ялта, 298648, Российская Федерация;


2 ФГБУН Филиал института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина

и Ю.А. Овчинникова РАН, проспект Науки, 6, г. Пущино, Московская обл., 142290,


Российская Федерация;
3 Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, г. Москва,

Российская Федерация;
e-mail: mitiouchkina@rambler.ru

Болезнь Шарки (PPV, Plum Pox Virus) представляет собой одно из наиболее
вредоносных вирусных заболеваний, которое поражает деревья сливы, абрикоса и
персика. В последнее десятилетие для достижения устойчивости к вирусным
заболеваниям различных видов растений, включая косточковые культуры, активно
используют методы генетической трансформации. В данном исследовании
изучается стратегия создания вирусоустойчивых цисгенных растений, в которых с
помощью метода РНК интерференции ингибируется экспрессия генов кодирующих
факторы инициации трансляции растений eIF4, использующихся вирусами
семейства Potyviridae для завершения своего инфекционного цикла. Нами созданы
векторные конструкции, которые содержат самокомплементарные шпилечные
последовательности генов, кодирующих факторы eIF(iso)4G и eIF(iso)4E персика,
под промотером и терминатором RBCS персика. Для получения цисгенных растений,
свободных от ненужных трансгенных последовательностей, векторы также
содержат последовательность химически-индуцируемой системы RecLBD-CodA,
позволяющей удалить гены устойчивости к антибиотику, используемые для отбора
растений после генетической трансформации. Поскольку получение трансгенных
растений плодовых культур является сложным и долговременным процессом, для
оценки эффективности переноса Т-ДНК и нокдауна целевых генов при
использовании созданных конструкций, нами сначала получен ряд трансгенных
растений Nicotiana tabacum. Несмотря на то, что использование обеих конструкций
позволило успешно получить трансгенные растения, перенос полноценных
шпилечных последовательностей фактора eIF(iso)4E проходил эффективнее (94%),
чем последовательности фактора eIF(iso)4G (59%). Подтверждена успешная
экспрессия шпилечных конструкций перенесенных в геном растений. Проведена
оценка РНК-интерференционного ингибирования генов факторов инициации
трансляции eIF4 растения-хозяина для изучения устойчивости к вирусу.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: болезнь шарки, генетичекая трансформация, РНК интерференция,


фактор инициации трансляции.

194 194
Content of biologically active substances in fruits of hybrid peach plants
from breeding pool of the Nikita Botanical Gardens

Anatoliy Smykov, Vladimir Melnikov, Oxana Grebennikova, Nadezhda Marchuk


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: w.a.melnikoff@ya.ru

For several decades, Nikita Botanical Gardens has been working on breeding new
promising peach cultivars. New cultivars must exhibit better characteristics than the
existing ones. Modern hortculture needs peach cultivars with such properties as good
commercial qualities of fruits, early bearing age, resistance to diseases, high and stable
yields. High-quality fruits must have an attractive appearance, excellent taste properties,
ensure ease of transport and have a high content of biologically active substances. The
solution of these problems makes possible the obtaining of economically high efficient
cultivars for implementation into industrial horticulture. The breeding process included
several researches on detecting biologically active substances in mesocarp of peach plants
studied, which were obtained through purposeful hybridization. The analysis showed that
the solids content in fruits of researched hybrid plants varied between 13.30% (in the
seedling 7/43) to 19.70% (7/43). The fruit flesh showed a low content of ascorbic acid
(6.60 to 13.20 mg/100 g). Its maximum content emerged in fruits of the hybrid form 2/18.
The total number of organic acids in fruits varied from 0.43 % (7/73) to 0.57% (7/43).
The total concentration of phenolic compounds in fruits varied from 150 mg/100 g (4/43)
to 465 mg/100 g (7/43). Maximum concentration of leucoanthocyanins in fruits showed
the peach seedling 7/43 (456 mg/100 g) and of flavons – the seedling 4/43 (144 mg/100
g). The seedling 7/43 proved to be promising for its further investigation and involving in
the breeding, thanks to maximum complex content of biologically active substances in
fruits.

This study was funded by the research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: peach, hybrids, biologically active substances.

195
195
Содержание биологически активных веществ в плодах гибридных
растений персика селекционного фонда Никитского ботанического
сада

А.В. Смыков, В.А. Мельников, О.А. Гребенникова, Н.Ю. Марчук


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: w.a.melnikoff@ya.ru

В Никитском ботаническом саду на протяжении нескольких десятилетий ведётся


селекционная работа, направленная на выведение новых перспективных сортов
персика. Новые сорта данной культуры должны отличаться лучшими качествами, в
сравнении с уже существующими. Для современного садоводства необходимы сорта
персика, обладающие такими признаками, как высокие товарные качества плодов,
скороплодность, устойчивость к болезням, стабильность плодоношения и высокая
урожайность. Высококачественные плоды должны обладать красивым внешним
видом, высокими вкусовыми качествами, быть транспортабельными, а так же
содержать в себе высокое количество биологически активных веществ. Решение
этих задач в итоге позволяет выделить сорт, который после внедрения в
промышленное садоводство обеспечит существенный экономический эффект. В
процессе селекционной работы 2016-2017 гг. был проведен ряд исследований,
направленных на определение наличия биологически активных веществ в составе
мезокарпия исследуемых растений персика, полученных в результате
направленной гибридизации. Анализ показал, что в плодах изучаемых гибридных
растений персика содержание сухих веществ варьировало от 13,30% (у сеянца 4/43)
до 19,70% (у сеянца 7/43). В мякоти плодов выявлено невысокое содержание
аскорбиновой кислоты (6,60-13,20 мг/100г). Максимальное количество
аскорбиновой кислоты накапливали плоды гибридной формы 2/18. Общее
количество органических кислот в плодах варьировало в пределах от 0,43 % (7/73)
до 0,57% (7/43). Суммарная концентрация фенольных соединений в плодах
изменялась от 150 мг/100 г (4/43) до 465 мг/100 г (7/43). Максимальной
концентрацией лейкоантоцианов отличались плоды сеянца персика 7/43 (456
мг/100 г), а флавонолов – сеянца 4/43(144 мг/100 г). Перспективным для
дальнейшего изучения и использования в селекционном процессе является сеянец
персика 7/43, отличающийся максимальным комплексным содержанием
биологически активных веществ.

Работа выполнена при поддержке гранта № 14-50-00079 Российского научного


фонда.

Ключевые слова: персик, гибриды, биологически активные вещества.

196 196
Biotechnological methods of maintaining collections of the genus
Ribes L.

Vladimir Sorokopudov, Olga Sorokopudova, Inna Knyazeva, Julia Burmenko


All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery,
4 Zagorevskaya Str., Moscow, 115598, Russian Federation;
E-mail: sorokopud2301@mail.ru

The development of effective methods for plant clonal micropropagation is a basic and
necessary condition for creation of genebanks in vitro. Currently, the gene pool collection
of samples of cultivated plants in vivo (Federal State Budgetary Scientific Institution All-
Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery) genus Ribes L.
has 295 cultivars: 137 – black currants, 45 – red currants, 82 – gooseberries, 31 – golden
currants. Genetic collection in vitro of black currant includes the following cultivars:
‘Barmalej’, ‘Bryanskij’, ‘Agat’, ‘Gamayun’, ‘Kudesnik’, ‘Mif’, ‘Podarok’ ‘Veteranam’, ‘Strelec’,
‘Uslada’, ‘Charodej’ and ‘Yadrenaya’; golden currant – ‘Businka’. The conservation of in
vitro gene pool collection is cost-effective for the maintenance of biological diversity, but
requires periodic testing for the genetic identity of the cultivar.
The deposition is carried out in the conditions of the cooling chamber (6±2°C), at 6-8
h photoperiod and illuminance of 500-1,000 lux. In vitro collection of currant is annually
updating on 2-3 cultivars, free from malicious viruses: Arabis mosaic virus (ArMV),
Raspberry ringspot virus (RpRSV), Tomato black ringspot virus (TBRV), Strawberry latent
ringspot virus(SLRSV) and Raspberry bushy dwarf virus (RBDV).
At the stage of explants, introduction MS culture medium was used with growth
regulators, such as 6-benzylaminopurine (6-BAP), kinetin and zeatin in diferent
concentrations (from 0.5 to 2.0 mg L-1) by step 0.5. The optimal variant was a medium with
6-BAP in a concentration of 0.5 mg L-1 for black currant and 1.0 mg L-1 for golden currant.
The survival rate of black currant explants varied within 71.3-89.7%, golden currant –
37%. The multiplication rate among the black currant cultivars ranged from 1:2
(‘Gamayun’) to 1:4 (‘Bryanskij’, ‘Agat’), golden currant – 1:6. 6-BAP concentration increase
to 2.0 mg L-1 in culture medium increased the multiplication rate of golden currant to 1:8,
but led to the appearance 35% hyperhydrated microshoots.

Keywords: currant, cultivar, in vitro collection, genetic resources.

197
197
Биотехнологические приемы поддержания коллекций рода Ribes L.

В.Н. Сорокопудов, О.А. Сорокопудова, И.В. Князьева, Ю.В. Бурменко


Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский
селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства",
ул. Загорьевская, 4, г. Москва, 115598, Российская Федерация;
e-mail: sorokopud2301@mail.ru

Разработка эффективных методов клонального микроразмножения растений


является основным и необходимым условием в работах по созданию генетических
банков in vitro. В настоящее время генетическая коллекция образцов культурных
растений in vivo ФГБНУ ВСТИСП рода Ribes L. насчитывает 295 сортов из них: 137
смородины черной, 45 смородины красной, 82 крыжовника, 31 смородины
золотистой. Генетическая коллекция in vitro смородины черной включает сорта
Бармалей, Брянский Агат, Гамаюн, Кудесник, Миф, Подарок Ветеранам, Стрелец,
Услада, Чародей и Ядреная, смородины золотистой – сорт Бусинка. Сохранения in
vitro объектов генетической коллекции экономически эффективно для
поддержания сортового разнообразия, но требует периодического тестирования на
генетическую идентичность сорта.
Депонирование осуществляется в условиях холодильной камеры (6 ± 2°С), при
6-8 часовом фотопериоде и освещённости 0,5-1,0 клк. Коллекция in vitro смородины
ежегодно пополняется и обновляется 2-3 сортами свободными от вредоносных
вирусов, прошедшими предварительное тестирование на вирусы: мозаики резухи
(ArMV), кольцевой пятнистости малины (RpRSV), черной кольцевой пятнистости
томата (TBRV), латентной кольцевой пятнистости земляники (SLRSV), кустистой
карликовости малины (RBDV).
На этапе введения эксплантов в культуру использовали питательную среду MС,
дополненную регуляторами роста 6-бензиламинопурин (6-БАП), кинетин и зеатин в
вариантах концентраций от 0,5 до 2,0 мг/л с шагом опыта 0,5. Оптимальной
являлась среда с 6-БАП в концентрации 0,5 мг/л для смородины черной и 1,0 мг/л –
для смородины золотистой.
Приживаемость эксплантов смородины черной варьировала в пределах 71,3-
89,7%, смородины золотистой – 37%. Коэффициент размножения среди сортов
смородины черной составил от 1:2 (‘Гамаюн’) до 1:4 (‘Брянский Агат’), смородины
золотистой – 1:6. Увеличение концентрации 6-БАП до 2,0 мг/л в среде повышало
коэффициент размножения смородины золотистой до 1:8, но приводило к
появлению 35% оводненных микропобегов.

Ключевые слова: смородина, сорт, коллекция in vitro, генетические ресурсы.

198 198
Creation of marker-free transgenic tomato plants expressed the
supersweet protein thaumatun II

Vadim Timerbaev 1,2,3, Anna Okuneva3, Alexander Pushin 1,2,3, Sergey Dolgov 1,2,3
1Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical

Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation
2The Branch of M.M. Shemyakin and Yu.A. Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry

of the RAS, Prospect Nauki, 6, Puschino, Moscow region, 142290, Russian Federation
3All-Russia Research Institute of Agriculture Biotechnology, Timirayzevskaya Str., 42,

Moscow, 127550, Russian Federation; E-mail: timerbaev@gmail.com

Production of cisgenic and intragenic marker-free plants with new traits is a modern
approach that dictates the realities of the 21st century that answer the biosafety
requirements. In our work we used the pMF1 vector containing the recombinase R and a
CodA-nptII bifunctional selectable gene for produce tomato plants carrying the supersweet
thaumatinII gene from tropical plant under the control of tomato fruit-specific ELIP or E8
gene promoter and tomato RuBisCo terminator. After agrobacterium transformation, two
strategies were followed for the selection of marker-free transgenic tomato plants. In the
early negative selection approach, from a total of 116 plants and 83 shoots was non-
transgenic escapes, 32 contained nptII gene fragment and only one marker-free plant with
excised DNA appeared. In the alternative delayed strategy, we have obtained 170
transgenic tomato lines. Then, we chose 35 transgenic tomato lines containing full T-DNA
and recombinase activity induced in explants. About half of them did not produce
regenerants on medium with 5-FC. One hundred twenty one resistant sublines were
obtained from 18 original lines. Most of them lost resistance to kanamycin in spite of the
sequence of nptII gene detected by PCR in 120 plants. Only one fully marker-free
transgenic line was obtained. We supposed that an incomplete excision and chromosomal
rearrangements due to the presence of multiple or partial T-DNA insertions occurred in
other cases. With the Southern blot analysis, we confirmed that a total of completely
marker-free transgenic tomato plants were obtained by two different selection strategies.
The thaumatin II gene expression has been detected by RT-PCR, Western blotting and
organoleptic analyses.

This study was funded by the research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: marker-free plants, tomato, Solanum lycopersicum, thaumatin II.

199
199
Создание безмаркерных трансгенных растений томата,
экспрессирующих суперсладкий белок тауматин II

В.Р. Тимербаев1,2,3, А.С. Окунева3, А.С. Пушин1,2,3, С.В. Долгов1,2,3


1ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –

Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация
2Филиал института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и

Ю.А. Овчинникова, проспект Науки, 6, г. Пущино, Московский обл, 142290,


Российская Федерация;
3Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной

биотехнологии, ул. Тимирязевская, 42, г. Москва, 127422, Российская Федерация;


e-mail: timerbaev@gmail.com

Получение цис- и интрагенных безмаркерных растений с новыми свойствами –


современный подход, отвечающий требованиям биобезопасности. В нашей работе
нами использован вектор pMF1, содержащий рекомбиназу R слитую с лиганд-
связывающим доменом глюкокортикоидного рецептора, а также
бифункциональный селективный ген CodA-nptII, позволяющий проводить отбор
растений после удаления из генома нежелательной области ДНК за счет негативной
селекции на 5-флюороцитозине. В качестве смыслового выступает ген
суперсладкого белка тауматина II из тропического растения Thaumatococcus daniellii
под контролем плодоспецифического промотора из гена ELIP или E8 помидора и
терминатора из гена RuBisCo помидора. После агробактериальной трансформации
для селекции безмаркерных растений помидора нами применены две сратегии,
ранняя и отсроченная. В результате экспериментов удалось получить две
полностью безмаркерные линии помидора, что было подтверждено методом
Саузерн блотинга. Оценку экспрессии целевого гена белка тауматина II
осуществили с помощью ОТ-ПЦР, Вестерн блотинга и органолептического анализа.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-


00079.

Ключевые слова: безмаркерный растения, помидор, Solanum lycopersicum,


тауматин II.

200 200
Comparative evaluation of introduced nectarine cultivars with a model
cultivar

Sergei Tsiupka, Evgeny Shoferistov, Iuliia Ivashchenko


Federal State Funded Institution of Science "The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS", Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: tsupkanbg@mail.ru

The study had been carried out in 14 consecutive years (2004-2017) at the Nikita
Botanical Gardens. As a control cultivar for comparison, model one was used. The
objectives were phenological, pomological, morphological and physiological
characteristics of 25 cultivars. The researches included parameters of introduced cultivars
in comparison with similar parameters of the model one according to 15 characteristics: a
number of days starting from the agreed date (March, 1) till the beginning of blooming,
degree of blooming, duration of blooming, winter resistance, drought resistance, tolerance
to leaf-curl mosaic and mildew, the year of the first fruiting, crop capacity, fruit weight,
flesh consistency, percentage of integumentary color and fruit attraction, flesh taste and its
ability to separate from the stone. The cluster analysis was carried out to compare 25
introduced nectarine cultivars. This method made it possible to reveal similarity between
all these cultivars and model of a cultivar based on Euclidean distance. All objects were
united into classification tree that is reproduced in dendrogram. According to similarity of
characteristics and their values the following cultivars, combined into clusters (groups),
are rather close: 1. ‘Sorok let Uzbekistana’, ‘Early Rivers’, ‘Sladkoyadernyiy’, ‘Grande’,
‘Natalie’, 2. ‘Nectared C-3’, ‘Kzil Shalili’, ‘Big Top’, ‘Crimson Gold’, ‘Nectacrest’, ‘Nectared
306’, ‘Skif’, ‘May Red’, ‘Silvery’, ‘June Red’, ‘Fantasia’, ‘Stark Sanglo’, ‘Geokchayskiy 229’, ‘Le
Grande’, ‘May Grand’, ‘Super Crimson Gold’, ‘Stark Sunglo’, ‘Nectalate’; 3. ‘Kando’ and ‘Fire’.
According to complex of characteristics, 4 cultivars were marked out having the largest
similarity with the model of cultivar: ‘Geokchayskiy 229’, ‘Le Grande’, ‘Natalie’ and
‘Nectared C-3’. At the same time interrelations of economically valuable characteristics
were identified having used paired correlation coefficients. The highest correlation
coefficient was recorded between winter and drought-resistance (r=0.7), beginning of
blooming and its degree (r=0.71), fruit weight and taste (r=0.64) and etc.

This study was funded by a research grant No. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: nectarine, model cultivar, dendrogram, pomology, phenology.

201
201
Сравнительная оценка интродуцированных сортов нектарина с
моделью сорта

С.Ю. Цюпка, Е.П. Шоферистов, Ю.А. Иващенко


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», Никитский спуск 52, пгт Никита, г. Ялта,
298648, Российская Федерация; e-mail: tsupkanbg@mail.ru

Исследования проведены в течение 14 лет (2004-2017 гг.) в Никитском


ботаническом саду. В качестве контроля для сравнения использован модельный
сорт. Объектом исследования были фенологические, морфологические,
помологические и физиологические характеристики 25 интродуцированных сортов
нектарина. В своих исследованиях сравнивали показатели интродуцированных
сортов с аналогичными показателями модельного сорта по 15 признакам:
количество дней от условной даты (1 марта) до начала цветения, степень цветения,
продолжительность цветения, зимостойкость, засухоустойчивость, устойчивость к
курчавости листьев и мучнистой росе, год вступления в плодоношение,
урожайность, масса плода, плотность мякоти, процент покровной окраски и
внешний вид плода, вкус мякоти и отделяемость косточки. Для того, чтобы
сравнить 25 интродуцированных сортов нектарина был проведен кластерный
анализ. Этим методом выявлена степень сходства между этими сортами и моделью
сорта на основе эвклидова расстояния. Все объекты объединены в дерево
классификации, которое отражено в дендрограмме. По схожести признаков и их
величине близкими являются сорта, объединенные в кластеры (группы): 1. Сорок
лет Узбекистана, Early Rivers; Sladkoyadernyiy, Grande, Natalie; 2. Nectared C-3, Kzil
Shalili, Big Top, Crimson Gold, Nectacrest, Nectared 306, Skif; May Red, Silvery, June Red,
Fantasia, Stark Sanglo, Geokchayskiy 229, Le Grande; May Grand, Super Crimson Gold,
Stark Sunglo, Nectalate; 3. Kando, Fire. По комплексу признаков наиболее близкими к
модели сорта были отмечены 4 сорта: Geokchayskiy 229, Le Grande, Natalie и Nectared
C-3. Кроме того, установлены взаимосвязи хозяйственно ценных признаков между
собой с использованием парных коэффициентов корреляции. Отмечено, что
наибольший коэффициент корреляции наблюдается между следующими
признаками: зимостойкость и засухоустойчивость (r= -0,7), сроком начала цветения
и степенью цветения (r=0,71), массой и вкусом плода (r=0,64) и т.д.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-


00079.

Ключевые слова: нектарин, модельный сорт, дендрограмма, помология, фенология

202 202
The antioxidant activity of leaves in Prunus avium at the growing clonal
stocks

G.Yu. Upadysheva, S.M. Motyleva, M.E. Mertvishcheva, M.T. Upadyshev


All-Russian Horticultural Institute for Breeding, Agrotechnology and Nursery,
Zagorievskaya Str., 4, Moscow, 115598, Russian Federation; E-mail: upad8@mail.ru

The stock determines the peculiarities of the top system provision with water and
nutritional chemicals causing changes in the plants growing intensity and photosynthesis,
in the metabolic process activity. The timeliness of stock influence on the grafted plants
biochemical status increases because of the necessity of hybrid stocks and cultivars
compatibility early detection. The purpose of the research was to study the total
antioxidant activity (TAA) at new sweet cherry breeds while grafting on clonal stocks. The
research objects are three sweet cherry cultivars (‘Fatezh’, ‘Tyutchevka’ and
‘Chermashnaya’), grafted on eight clonal stocks (‘Kolt’, ‘Moskoviya’, ‘Izmaylovskiy’, ‘Stepnoy
rodnik’, ‘AVCH-2’, ‘VSL-2’, ‘VTS-13’, ‘V-5-88’). The total antioxidant activity of methanol and
liquid extracts was determined on the spectrophotometer Helios Y via DPPH method as the
extinction correlation at reaction behavior within ten min. Antioxidant activity depended
on the cultivar, stock and extracted substance. While grafting on ‘Moskoviya’ and
‘Izmaylovskiy’ stocks all studied cultivars had maximum values of antioxidant activity. The
strong positive correlation was determined between TAA values of ‘Izmaylovskiy’ stock
and grafted on it sweet cherry plants (r=0.95). Consistently high values of TAA are
examined at scion-stock combinations of ‘Fatezh’ cultivar (at average 74.,9%) and the most
winter resistant ‘Moskoviya’, ‘Izmaylovskiy’, ‘VTS-13’, ‘AVCH-2’ and ‘Stepnoy rodnik’ stocks
(78-88%). Consistently low values of TAA were at sweet cherry plants grafted on ‘V-5-88’,
‘Kolt’ and ‘VSL-2’ stocks (55-65%) It may be connected with more low adaptability of
stocks and grafted on them plants. On ‘AVCH-2’ and ‘Stepnoy rodnik’ stocks the radical
decrease of TAA at ‘Tyutchevka’ and ‘Chermashnaya’ cultivars and TAA high value at
‘Fatezh’ cultivar were marked, that showed the different compatibility of stocks with
cultivars. Antioxidant activity in sweet cherry leaves varied greatly depending on the
cultivars and stocks.

Keywords: sweet cherry, antioxidants, cultivar, stock, compatibility.

203
203
Антиоксидантная активность листьев Prunus avium при
выращивании на клоновых подвоях

Г.Ю. Упадышева, С.М. Мотылёва, М.Е. Мертвищева, М.Т. Упадышев


Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский
селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства», ул.
Загорьевская, 4, г. Москва, 115598, Российская Федерация; e-mail: upad8@mail.ru

Подвой определяет особенности обеспечения надземной системы водой и


питательными веществами, вызывая изменения в интенсивности роста и
фотосинтеза растений, активности процессов метаболизма. Актуальность изучения
влияния подвоя на биохимический статус привитых растений возрастает в связи с
необходимостью ранней диагностики совместимости гибридных подвоев с сортами.
Целью исследований являлось изучение суммарной антиоксидантной активности
(АОА) у новых сортов черешни при прививке на клоновых подвоях. Объекты
исследований – 3 сорта черешни (Фатеж, Тютчевка и Чермашная), привитые на 8-ми
клоновых подвоях (ВСЛ-2, В-5-88, Измайловский, Московия, АВЧ-2, ВЦ-13, Степной
родник, Колт). Суммарную антиоксидантную активность метанольных и водных
экстрактов листьев определяли на спектрофотометре Helios Y методом DPPH как
соотношение экстинкции при протекании реакции в течение 10 мин.
Антиоксидантная активность зависела от сорта, подвоя и экстрагирующего
вещества. При прививке на подвоях Измайловский и Московия все изученные сорта
черешни имели максимальные показатели антиоксидантной активности.
Установлена сильная положительная корреляция между показателями АОА подвоя
Измайловский и привитых на них растений черешни (r=0,95). Стабильно высокие
значения АОА отмечены у привойно-подвойных комбинаций с участием сорта
Фатеж (в среднем 74,9 %) и самых зимостойких подвоев Московия, Измайловский,
ВЦ-13, АВЧ-2, Степной родник (78-88%). Стабильно низкие показатели АОА были у
растений черешни, привитых на подвоях В-5-88, Колт, ВСЛ-2 (55-65%), что может
быть связано с более низкой адаптивностью подвоев и привитых на них растений.
На подвоях АВЧ-2 и Степной родник отмечено резкое снижение АОА у сортов
Тютчевка и Чермашная и высокое значение у сорта Фатеж, что свидетельствует о
разной совместимости подвоев с сортами. Антиоксидантная активность в листьях
черешни сильно варьировала в зависимости от сорта и подвоя.

Ключевые слова: черешня, антиоксиданты, сорт, подвой, совместимость.

204 204
Efficiency of introduced sweet cherry cultivars used in breeding

D.R. Useynov, L.A. Lukicheva


Federal State Funded Institution of Science “The Labor Red Banner Order Nikita Botanical
Gardens – National Scientific Center of the RAS”, Yalta, 298648, Russian Federation;
E-mail: dilik.um@bk.ru

The genofund collection of sweet cherries (Prunus avium L.)in the Nikita Botanical Gardens
includes about 400 samples from 19 countries. According to their ecological and
geographical origin, the cherry cultivars belong to different groups: West European
(14.8%), American (8.5%), Caucasian (1.8%), Moldavian (1.8%), Crimean (27.4% %),
Central Ukrainian (25.6%), northern (17.5%) and Central Asian (0.4%). Cultivars vary
greatly in morphological, biological and economically valuable characteristics. A significant
range of variations in these features was determined. Genotypes - sources of economically
valuable features were involved in breeding in order to create new valuable cultivars. A
hybrid fund of more than 500 samples from 12 hybrid families was studied during 1999-
2017. The aim of our investigations was to determine the effectiveness of the introduced
cultivars use in sweet cherries breeding and selection. Twenty-nine promising hybrid
forms were selected for improving the sweet cherry assortment. Cultivars of early and very
early ripening terms were obtained using the method of embryo culture in vitro: ‘Uslada’,
‘Vesnyany Naspyvy’, ‘Prizerka’, etc. The greatest numbers of promising forms were
obtained with the participation of introduced cultivars, such as ‘Bigarreau Starking’,
‘Bigarro from Vinoli 2’ and ‘Drogana Zheltaya’. These cultivars were the best to transmit
the features of high yield, large size and good taste of fruits. The most effectiveness was a
family which the ‘Bigarreau Starking’ cultivar was used as the maternal form, and the
cultivar ‘Krupnoplodnaya’ was used as the paternal form. They produced the greatest
number of promising forms with large high-quality fruits with various terms of ripening
and high yield. Among these forms we selected the cultivars ‘Karadag’ and ‘Vytivnytsa’ that
have already been included in the Register of Plants which were suitable for distribution.
The promising cultivars, ‘Dolgozhdannaya’ and ‘Triumf’ have been transferred to the
Commission for Selection Achievements Test.

This study was funded by the research grant Nо. 14-50-00079 of the Russian Science
Foundation.

Keywords: Prunus avium L., genofund collection, introduced cultivars, breeding, hybrid,
promising form, cultivar.

205
205
Эффективность использования в селекции интродуцированных
сортов черешни

Усейнов Д.Р., Лукичева Л.А.


ФГБУН «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад –
Национальный научный центр РАН», г. Ялта, 298648, Российская Федерация;
e-mail: dilik.um@bk.ru

В генофондовой коллекции черешни (Prunus avium L.) Никитского ботанического


сада собрано около 400 образцов из 19 стран мира. По эколого-географическому
происхождению коллекционные сорта черешни принадлежат к различным группам:
западноевропейской (14,8%), американской (8,5%), кавказской (1,8%), молдавской
(1,8%), крымской (27,4%), среднеукраинской (25,6%), северной (17,5%) и
среднеазиатской (0,4%). Сорта очень разнообразны по морфологическим,
биологическим и хозяйственно-ценным признакам. Установлен значительный
размах варьирования этих признаков. В селекцию были вовлечены генотипы -
источники полезных признаков для успешной селекционной работы по созданию
новых ценных сортов. Изучали гибридный фонд более 500 образцов из 12
гибридных семей в течении 1999-2017 гг.
Целью работы является определение эффективности использования
интродуцированных сортов в селекции черешни. Отобрано 29 форм, перспективных
для совершенствования сортимента черешни. С использованием метода
эбриокультуры in vitro получены сорта ранних и очень ранних сроков созревания:
Услада, Весняны Наспивы, Призерка и др. Наибольшее количество перспективных
форм получено с участием интродуцированных сортов Bigarreau Starking, Бигарро из
Виноли 2, Дрогана Желтая. Эти сорта, наилучшим образом передают по наследству
свойства высокой урожайности, крупного размера и хорошего вкуса плодов.
Наиболее эффективной является семья, где в качестве материнской формы
использовали сорт Bigarreau Starking, а в качестве отцовской – сорт Крупноплодная.
Они дали наибольшее количество перспективных форм с крупными
высококачественными плодами различных сроков созревания и высокой
урожайностью. Среди них выделены сорта Карадаг и Витивница, которые уже
входят в Реестр растений пригодных для распространения. Перспективные сорта
Долгожданная и Триумф переданы в госсортоиспытание.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 14-50-00079.

Ключевые слова: Prunus avium L., генофондовая коллекция, интродуцированные


сорта, селекция, гибрид, перспективная форма, сорт.

206 206
Investigation of antimicrobial activity of pea (P. sativum L.) NCR
peptides towards plant endophytic bacteria Bacillus sp. and Rahnella sp.

Ekaterina Vasileva, Marina Kliukova, Alexey Afonin, Gulnar Akhtemova, Vladimir Zhukov,
Igor Tikhonovich
Federal State Budget Scientific Institution All-Russia Research Institute for Agricultural
Microbiology (ARRIAM), Podbelsky ch., 3, Pushkin, Saint Petersburg, 196608, Russian
Federation; E-mail: evasilieva@arriam.ru

Legumes are capable of forming arbuscular mycorrhiza with Glomeromycota fungi and
nitrogen-fixing symbiosis with nodule bacteria (rhizobia). Endophytes were found in other
internal tissues of legumes, causing asymptomatic infection or having a positive effect on
growth and development of a host-plant. This types of interactions are controlled by plant
antimicrobial proteins – defensins. In some legumes defensin-like nodule-specific cysteine-
rich peptides (NCRs) were found. NCRs differently affects bacteria that penetrate into the
nodule: under the action of NCR-peptides "compatible" nodule bacteria irreversibly
differentiate into symbiotic forms – bacteroids, and "incompatible" bacteria get eliminated.
In the genome of the model legume Medicago truncatula about 700 NCR-peptides were
found, while only 8 were described in garden pea (Pisum sativum L.). Through the analysis
of metatranscriptomic data of P. sativum, we identified 715 sequences related to NCR-
peptides. Such variety of NCRs can exhibit antimicrobial properties towards bacteria
potentially capable of penetration into the nodule (endophytic bacteria). The aim of this
study is to search for and test NCR-peptides of P. sativum, demonstrating antimicrobial
activity against endophytic bacteria Rahnella sp. and Bacillus sp. To select NCR-peptides
having antimicrobial activity, various physicochemical parameters were analyzed: charge,
hydrophobicity, the Boman index and the expression level of NCR-peptide genes in the
wild-type pea line SGE. Using the algorithms of the CAMP resource (Collection of
antimicrobial peptides), the probability of antimicrobial activity was predicted. Based on
this data, candidates for chemical synthesis were selected. To confirm the predicted
antimicrobial activity, members of the endospheric community were selected (Rahnella sp.
and Bacillus sp.), which demonstrated the growth-promoting ability in a test on watercress
salad (Lepidium sativum L.).
The results of microbiological experiments to determine the elimination, minimum
inhibitory and minimum bactericidal concentration of synthesized NCR-peptides have
been shown.

This work was supported by RFBR, research project No. 18-34-00187.

Keywords: Pisum sativum L., NCR, endophytes, endophytic bacteria.

207
207
Исследование антимикробной активности NCR-пептидов гороха
посевного (P. sativum L.) против растительных эндофитных
бактерий р. Bacillus и Rahnella

Е.Н. Васильева, М.С. Клюкова, А.М. Афонин, Г.А. Ахтемова, В.А. Жуков,
И.А Тихонович
ФГБНУ ВНИИ Сельскохозяйственной Микробиологии, шоссе Подбельского, 3,
196608, Пушкин, г. Санкт-Петербург, Российская Федерация;
e-mail: evasilieva@arriam.ru

Растения семейства Бобовые способны к формированию арбускулярной микоризы с


грибами филы Glomeromycota и азотфиксирующего симбиоза с клубеньковыми
бактериями (ризобиями). Помимо этого, во внутренних тканях бобовых растений
обнаруживаются эндофитные микроорганизмы, которые могут присутствовать в
эндосфере бессимптомно или оказывать положительное влияние на рост и развитие
растения-хозяина. Контроль за столь различными видами взаимодействий
осуществляется в том числе за счет антимикробных белков – дефензинов. У
некоторых бобовых растений найдены дефензин-подобные клубенек –
специфичные цистеин-богатые пептиды (NCRs, от англ. Nodule-specific Cysteine-Rich
peptides). Действие NCR-пептидов различно в отношении «совместимых» и
«несовместимых» бактерий, способных проникнуть в клубеньки: «совместимые»
клубеньковые бактерии под действием NCR-пептидов необратимо
дифференцируются в симбиотические формы – бактероиды, а «несовместимые»
бактерии погибают. В секвенированном геноме модельного бобового растения
Medicago truncatula насчитывается порядка 700 NCR-пептидов, тогда как у гороха
посевного (Pisum sativum L.) описано всего восемь. При проведении анализа
метатранскриптомных данных P. sativum нами было идентифицировано 715
последовательностей, относящихся к NCR-пептидам. Очевидно, столь
многообразные NCR-пептиды могут проявлять более или менее выраженные
антимикробные свойства по отношению к бактериям, потенциально способным к
проникновению в клубеньки (т.е. к эндофитным бактериям). Целью данной работы
является поиск и проверка NCR-пептидов P. sativum, способных проявлять
антимикробную активность против эндофитных бактерий р. Rahnella и Bacillus.
Для отбора NCR-пептидов, обладающих антимикробной активностью, были
проанализированы различные физико-химические показатели, такие как заряд,
гидрофобность, индекс Бомана, а также уровень экспрессии генов NCR-пептидов у
линии гороха дикого типа SGE. Далее при помощи различных алгоритмов ресурса
CAMP (Collection of antimicrobial peptides) была предсказана вероятность проявления
антимикробной активности. На основании полученных данных были отобраны
кандидаты для химического синтеза. Для подтверждения предсказанной
антимикробной активности были выбраны представители эндосферного
сообщества, р. Rahnella и Bacillus, которые продемонстрировали способность к
стимуляции роста при постановке теста на кресс салате (Lepidium sativum L.).
Представлены результаты серии микробиологических опытов для
определения элиминирующей, минимальной ингибирующей и минимальной
бактерицидной концентрации синтезированных NCR-пептидов.

Исследование поддержано грантом РФФИ № 18-34-00187.

Ключевые слова: Pisum sativum L., NCR, эндофиты, эндофитные бактерии.

208 208
Differences in peroxidase isozyme spectrums of diverse rose garden
group regenerants

Olga Zemlianukhina, Galina Sokolenko, Vladislav Veprintsev


Federal State-Funded Educational Institution of Higher Education ‘Voronezh State
Agrarian University’ ‘VSAU’ named after Emperor Peter the Great’, Michurina st. 1,
Voronezh 394087, Russian Federation; E-mail: oz54@mail.ru

The genetic similarity between regenerants and their original plants from which primary
explants were obtained is crucial due to the possible occurrence of somaclonal variation
influenced by in vitro conditions. Genetic similarity is also important as a result of unclear
membership of rose diversity in a specific garden group. Analysis of some rose groups was
conducted based on peroxidase (PO) isozyme spectra. PO is an enzyme which can be used
to identify differences between one plant species from the other, as well as the stage of
plant regeneration and their ontogenetic age. Explants of Rosa canina L., climbing cultivar
‘Aloha' and somacloned cultivar ‘Gloria Dei’ with lost ability to bloom were used as a
control. These two PO activity zones are characteristic of that part of gel with R f 0.36-0.40
which are observed in all analyzed groups: tea-hybrid forms (8 cultivar), grandiflora (2
cultivar), floribunda (2 cultivar). The dogrose PO spectra differ significantly (upward)
from the spectra of tea-hybrid and grandiflora group regenerants. Differences in isozyme
spectra depend on the regenerants' leaf location. Thus, in the ‘Komsomolskij Ogonjek’ the
upper leaf spectrum consists of 4 bands and the lower leaf reveals 5 bands. Differences are
also observed within the same group: the cultivars ‘Dame de Coeur’ and ‘Nicole’ reveal 2
zones of activity unlike cultivar ‘Folklore’ (5 zones) of the same garden group. Callus
tissues of different roses reveal an expanded activity spectrum (8-10 zones) decreasing
along side with tissue differentiation. This phenomenon is determined by the changes in
protein and hormone cell content. Adapted to non-sterile conditions, regenerants either
completely lose their isozyme spectrum (cultivar ‘Nicole’) or detect significantly reduced
spectrum in the region (cultivar ‘Folklore’). Domestic roses have wider spectra compared
to introduced roses. The differences in spectra are probably due to the evolutionary origin
of roses. Updated roses reveal a reduced spectrum.

Keywords: garden rose group, in vitro, peroxidase, isozymes.

209
209
Различия в изоферментных спектрах пероксидазы в регенерантах
садовых групп роз

О.А. Землянухина, Г.Г. Соколенко, В.Н. Вепринцев


Федеральное государственное образовательное учреждение «Воронежский
государственный аграрный университет имени императора Петра I», ул. Мичурина,
д.1, г. Воронеж 394087, Российская Федерация; e-mail: oz54@mail.ru

При клональном микроразмножении роз большое значение имеет соответствие


регенерантов исходным растениям. Это связано с возможным возникновением
сомаклональной изменчивости, возникающей под влиянием условий in vitro, а
также в связи с нечетким отнесением многих сортов роз к той или иной садовой
группе. Для анализа некоторых групп роз были использованы изоферментные
спектры пероксидазы (ПО) ‒ фермента, с помощью которого можно выявить
отличия одного вида растений от другого, стадию регенерации растений, их
онтогенетический возраст. Выявление изоферментного спектра было проведено в
реакции окисления бензидина в нашей модификации (рН 7.0). Контролем в
исследовании служили регенеранты Rosa canina L., плетистой розы сорта Aloha, а
также утративший способность к цветению сомаклон сорта Gloria Dei. Показано, что
изоформы с Rf 0.36-0.40 наблюдаются для регенерантов всех групп роз: чайно-
гибридные (8 сортов), флорибунда (2 сорта), грандифлора (2 сорта). Спектры
изопероксидаз шиповника значительно отличаются (в сторону увеличения) от
спектров чайно-гибридных форм и грандифлора, регенеранты которых выявляют
активность фермента в катодной части геля (Rf от 0.082 до 0.279) в количестве 2-4
зон. Отличия в спектрах зависят и от места расположения листа регенеранта: 4
изоформы у верхнего листа и 5 ‒ у нижнего (сорт Комсомольский Огонек). Растения
сорта Dame de Coeur и Nicole в отличие от розы сорта Folklore (5 зон активности)
этой же группы выявляют лишь 2 зоны с Rf 0.082 и 0.131. Каллусные ткани
обнаруживают расширенный спектр активности ПО (8-10 зон), уменьшающийся по
мере дифференциации тканей, что связано как с изменениями белкового, так и
гормонального состава клеток. Регенеранты, адаптированные к нестерильным
условиям, или полностью теряют изоферментные спектры (сорт Gloria Dei), или
обнаруживают значительно редуцированные спектры (сорт Folklore).
Вероятно, различия в изоформентрых спектрах объясняются эволюционным
происхождением роз. Cовременные сорта роз отличаются уменьшенным спектром
ПО по сравнению со старыми сортами и шиповником.

Ключевые слова: садовые группы роз, in vitro, пероксидаза, изозимы.

210 210
Anti-stress properties of strongly diluted solution of 2-carboxy-2-
(N-acetylamino)-3-(3,5'-di-tert-4-hydroxephenyl)-potassium
propionate

Irina Zhigacheva, Aleksander Volodkin


Emanuel Institute of Biochemical Physics, Russian Academy of Sciences
Kosygin st., 4, Moscow, 119334, Russian Federation; E-mail: zhigacheva@mail.ru

The main sources of reactive oxygen species (ROS) under stress conditions are
mitochondria and chloroplasts. It has been found that the damaging effect of ROS on
respiratory activity is associated with the peroxidation of membrane lipids and, first of all,
cardiolipin and the oxidation of thiol groups of proteins, which leads to swelling of the
mitochondria, the release of cytochrome C, and possibly to the induction of apoptosis. It
could be assumed, that the preparations having adaptogenic properties should primarily
influence the generation of ROS. Antioxidants are primarily claimed to this role. The aim of our
work was to study the effect of various concentrations of potassium anphen (2-carboxy-2-(N-
acetylamino)-3-(3',5’-di-tert-butyl-4'-hydroxyphenyl), potassium propionate) on the
functional state of the mitochondria of 5-day etiolated pea seedlings (Pisum sativum L., cultivar
‘Alpha’) and computer modeling of the structure and properties of the molecular ensembles of
potassium anphen with the participation of water molecules. To study the anti-stress
properties of the preparation, the mitochondria were incubated in a hypotonic environment,
which led to a 3-4 fold increase of the fluorescence intensity of lipid peroxidation (LPO)
products in mitochondrial membranes. The drug in concentrations 10-6-10-8, 10-13 and 10-15 M
decreased the fluorescence intensity of LPO products to the control level. At the same time, it
increased the maximum oxidation rates of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD)-
dependent substrates by 35% (10-6 M) and 44% (10-13 M). Since the mitochondria of
germinating seeds are characterized by a low rate of oxidation of NAD-dependent
substrates, the increase of the activity of NAD-dependent dehydrogenases helps to
maintain a high level of energy metabolism in the cell, which may provide the plant
resistance to stress factors. The dose dependence of the biological activity of the
preparation can apparently be explained by the possibility of the existence of kinetically
independent hydrates containing agglomerates (structures) in an aqueous medium. The
reactivity of such agglomerates is associated with the change in entropy and free energy,
depending on the structure of the solvation shell of the ligand.

Keywords: 3-hydroxypyridines, antiradical activity, mitochondria.

211
211
Антистрессовые свойства сильно разбавленных растворов 2-
карбокси-2-(n-ацетиламино)-3-(3’,5’-ди-трет-бутил-4’-
гидроксифенил)-пропионата калия

И.В. Жигачева, А.А. Володькин


ФГБУН Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии
наук, ул. Косыгина, 4, г. Москва, 119334, Российская Федерация;
e-mail: zhigacheva@mail.ru

Основным источником активных форм кислорода (АФК) в стрессовых условиях


являются митохондрии и хлоропласты. Установлено, что повреждающее действие
АФК на дыхательную активность связано с пероксидацией липидов мембран и,
прежде всего кардиолипина, и окислением тиоловых групп белков, что приводит к
набуханию митохондрий, выходу цитохрома С и, возможно, к индукции апоптоза.
Можно было предположить, что препараты, обладающие адаптогенными
свойствами должны влиять на генерацию АФК. На эту роль в первую очередь
претендуют антиоксиданты, обладающие дозовой зависимостью в проявлении
своей активности. Поэтому для антиоксидантов необходим подбор наиболее
эффективных концентраций, обеспечивающих повышение устойчивости растений к
стрессовым воздействиям. В качестве объекта исследования был выбран препарат
«анфен-калий» (2-карбокси-2-(N-ацетиламино)-3-(3’,5’-ди-трет-бутил-4’-
гидроксифенил)-пропанат калия. Целью нашей работы было изучение влияния
различных концентраций анфена калия на функциональное состояние
митохондрий 5 дневных этиолированных проростков гороха (Pisum sativum L.), сорт
Альфа и компьютерное моделирование строения и свойств молекулярных
ансамблей анфена калия с участием молекул воды, т.е с учетом разведения. Для
исследования антистрессовых свойств препарата митохондрии инкубировали в
гипотонической среде, что приводило к 3-4 кратному увеличению интенсивности
флуоресценции продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в мембранах
митохондрий. Анфен калия в концентрациях 10-6-10-8, 10-13 и 10-15 М уменьшал
интенсивность флуоресценции продуктов ПОЛ до контрольного уровня, что,
вероятно, указывало на антистрессовую активность препарата. При этом он на 35%
(10-6 М) и 44% (10-13 М) увеличил максимальные скорости окисления
никотинамидадениндинуклеотид (АД)-зависимых субстратов . Поскольку
митохондрии прорастающих семян характеризуются низкой скоростью окисления
НАД-зависимых субстратов, то увеличение активности НАД-зависимых
дегидрогеназ способствует поддержанию высокого уровня энергетического
метаболизма в клетке, что, возможно, обеспечивает устойчивость растений к
действию стрессовых факторов. Дозовую зависимость биологической активности
препарата, по-видимому, можно объяснить при помощи результатов квантово-
химических расчетов ассоциатов анфена калия (лиганда), предполагающих
возможность существования кинетически независимых гидрат содержащих
агломератов (структур) в водной среде. Реакционная способность таких
агломератов связана с изменением энтропии и свободной энергии в зависимости от
структуры сольватной оболочки лиганда.

Ключевые слова: 3-гидроксипиридины, антирадикальная активность,


митохондрии.

212 212
Identification of sequences coding NCR peptides in de novo assembled
nodule "metatranscriptome" of Pisum sativum L.

Evgeny Zorin, Marina Kliukova, Alexey Afonin, Vladimir Zhukov, Igor Tikhonovich
Federal State Budget Scientific Institution All-Russia Research Institute for Agricultural
Microbiology, Podbelsky ch., 3, Pushkin, Pushkin, Saint Petersburg, 196608, Russian
Federation; E-mail: kjokkjok8@gmail.com

Legumes establish symbiotic relationships with nitrogen-fixing bacteria from the


Rhizobium group. In exchange for nutrients, bacteria provide fixed nitrogen needed to
support plant growth. The penetration of rhizobia into the root of the plant leads to the
formation of a specialized organ - the nodule, in which the symbiont is differentiated into a
nitrogen-fixing bacteroid. In plants belonging to the IRLC (Inverted Repeat-lacking clade),
the terminal (irreversible) differentiation of nodule bacteria into the symbiotic form is
regulated by antimicrobial nodule-specific cysteine-rich peptides (NCRs). The Medicago
truncatula genome contains about 700 genes encoding NCR peptides. The previous work
on the analysis of transcriptome data of Pisum sativum nodules allowed to identify 554
genes encoding members of this family. A potential method for a more complete
description of genes encoding NCR peptides in the absence of genomic data is the analysis
of “metatranscriptome” assembly, performed from data obtained in experiments of RNA
sequencing of nodules of different pea lines (Cameor, Kaspa, Parafield and SGE) by
different research groups and available in the NCBI (SRA) database. Thus, the goal of this
study is to identify new genes encoding NCR peptides in the “metatranscriptome”
assembly of pea nodules and identify those differentially expressed in different mutants
SGEfix-2 SGEfix-6 SGEfix-3, as well as in the wild type SGE line.
Assembling the “metatranscriptome” was carried out using Trinity program. Search
and identification of new NCR-peptides was performed using SPADA utility. The search was
conducted by constructing hidden Markov models based on previously identified
sequences of NCR-peptides P. sativum. At the moment, 61 new peptides with four cysteine
and 100 peptides with six cysteine were discovered. In silico validation of the belonging of
the detected peptides to the NCR-peptide family was performed with the multiple
alignment method named mafft with the subsequent analysis of obtained results.
Differential expression analysis of mutants with the symbiosis establishment blocking
at different stages of symbiont differentiation (SGEfix-2, SGEfix-6 and SGEfix-3) with
respect to the wild-type SGE line using R package DESeq2 is planned.

This work was supported by RFBR, research project No. 18-34-00187.

Keywords: pea, NCR peptides, symbiosis, transcriptomics, bioinformatics.

213
213
Идентификация последовательностей NCR пептидов в собранном
de novo “метатранскриптоме” клубеньков Pisum sativum L.

Е.А. Зорин, М.С. Клюкова, А.М. Афонин, В.А. Жуков, И.А. Тихонович
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение “Всероссийский
научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии”, шоссе
Подбельского, д. 3, Пушкин, г. Санкт-Петербург, 196608, Российская Федерация;
e-mail: kjokkjok8@gmail.com

Бобовые растения способны вступать в симбиотические отношения с


азотфиксирующими бактериями из группы ризобий (Rhizobia). В обмен на
питательные вещества бактерии поставляют фиксированный азот, необходимый
для поддержания роста растения. Проникновение ризобий в корень растения
приводит к формированию специализированного органа - клубенька, в клетках
которого бактерии дифференцируются в азотфиксирующие формы - бактероиды. У
растений, принадлежащих к кладе IRLC (Inverted Repeat-lacking clade),
терминальную (необратимую) дифференцировку клубеньковых бактерий в
симбиотическую форму регулирует группа антимикробных клубенёк-специфичных
цистеин-богатых пептидов (NCRs, от англ. Nodule-specific Cysteine-Rich peptides). В
геноме Medicago truncatula закодировано около 700 генов, кодирующих NCR-
пептиды. Проделанная ранее работа по анализу транскриптомных данных
клубеньков Pisum sativum позволила выявить 554 гена, кодирующих пептиды
данного семейства. Потенциальным методом более полного описания генов,
кодирующих NCR-пептиды, в отсутствие геномных данных, является анализ
“метатранскриптомной” сборки, выполненной из данных, полученных в
экспериментах РНК-секвенирования клубеньков различных линий гороха (Cameor,
Kaspa, Parafield, SGE) разными исследовательскими группами и доступными в базе
NCBI (SRA). Таким образом, целью настоящего исследования является
идентификация новых генов, кодирующих NCR-пептиды, по данным
“метатранскриптомной” сборки клубеньков гороха посевного и выявление среди
них дифференциально экспрессирующихся у различных мутантов SGEFix-2, SGEFix-3
и SGEFix-6, а также у линии дикого типа SGE. Сборку “метатранскриптома”
осуществляли с помощью программы Trinity. Поиск и идентификацию новых NCR-
пептидов выполняли с применением утилиты SPADA. Поиск проводили при помощи
построения скрытых марковских моделей, основанных на ранее
идентифицированных последовательностях NCR-пептидов P. sativum. В ходе работы
был обнаружен 61 новый пептид с 4 цистеинами и 100 пептидов с 6 цистеинами.
Провести in silico валидацию принадлежности обнаруженных пептидов к семейству
NCR-пептидов позволил метод множественного выравнивания mafft с последующим
анализом выравниваний.
Далее планируется проведение анализа дифференциальной экспрессии генов
NCR-пептидов у мутантов с блокировкой развития симбиоза на различных стадиях
дифференцировки симбионта (SGEFix-2, SGEFix-3 и SGEFix-6), по отношению к
линии дикого типа SGE с помощью пакета DESeq2 в среде программирования R.

Исследование поддержано грантом РФФИ (№ 18-34-00187).

Ключевые слова: горох посевной, NCR пептиды, симбиоз, транскриптомика,


биоинформатика.

214 214
АЛФАВИТНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ АВТОРОВ

AUTHORS ALPHABET LIST


216
Abdalla Naema 23
Afonin Alexey 207, 208, 213, 214
Ahmadi Nima 82
Akhiyarova G. 94
Akhtemova Gulnar 207, 208
Alexandrova Ludmila 113, 114
Ambros Elena 101, 102
Anatov Dzhalaludin 24, 25, 118, 119
Arias Andres Gatica 100
Asadova Sadagat 117
Asadulaev Zagirbeg 24, 25, 118, 119
Ashori Reyhaneh 106
Azimi Mohammad Hossein 120
Bakova Ekaterina 121, 122
Bakova Nadezhda 121, 122
Baranova Tatiana 90, 91
Batukaev Abdulmalik 123, 124
Bekhterev Viktor 125, 126
Belous Oksana 26, 27, 125, 126
Bome A. 127, 128
Bome Nina 127, 128
Boris Ksenia 86, 87, 191, 192
Borisova Antonina 28, 29, 152, 153
Brailko Valentina 66, 67, 68, 69, 104, 105, 139, 140, 158, 159
Brindza Jan 103, 134
Budahn Holger 49
Burmenko Julia 90, 91, 197, 198
Businský Roman 186
Buwadi Monxer 40, 41
Chelombit Svetlana 66, 67, 162, 163
Chernobay Irina 30, 31
Chernobrovkina Maria 45, 46
Chirkov Sergei 109, 110, 189, 190
Chmeleva Svetlata 180, 181
Chukanova N. 147
Corrêa da Silva Diogo Pedrosa 133
Dedova Liliya 86, 87, 191, 192
Degtyareva Kristina 156, 157
Díaz Elmer García 100
Dmitriev Lev 174, 175
Dmitrieva Valeria 174, 175
Dolgov Sergei 45, 46, 64, 65, 164, 165, 193, 194, 199, 200
Domiciano Débora 177
Donetskich Vladislav 96, 97
Donno Dario 176
Dorofeeva Valentina 32, 33, 168, 169
Drahošová Hana 186
Dyachenko Yana 156, 157
Ebrahimi Asghar 120
Ebrahimi Mohammad Ali 106
Egorova Darya 70, 71
217
217
El-Miniawy Salah El-Deen 23
Ermakov Nikolay 129, 130
Fedorov Vladislav 88, 89
Fedorova Olga 88, 89, 92, 93, 131, 132
Feskov Sergei 62, 63, 174, 175
Figueiredo Junia R Mendonça 133
Fisenko Andrey 98, 99
Frolov Sergey 95
Frolova Alina 193, 194
Gaziev Makhach 118, 119
Gerasimchuk Vladimir 34, 35, 174, 175
Germanà Maria Antonietta 13
Gholaminejad Ameneh 106
Gluhova Lubov 98, 99
Golubkina Nadezhda 84, 85
Gorbunov Yuri 70, 71
Gorina Valentina 36, 37
Goryslavets Svetlana 38, 39, 172, 173
Gradskov Sergey 98, 99
Grebennikova Oksana 139, 140, 195, 196
Grygorieva Olga 103, 134
Gubanova Tatyana 74, 75
Hani Nizar 40, 41
Hussein Rawya Bu 40, 41
Ilnitsky Oleg 76, 77, 135, 136
Isamil Mazen 42
Istomina Ekaterina 43, 44, 137, 138
Ivanov Petr 189, 190
Ivanova Lubov 98, 99
Ivanova Natalya 66, 67, 68, 69, 139, 140, 160, 161
Ivashchenko Iuliia 88, 89, 92, 93, 131, 132, 201, 202
Ivashchenko Yuriy 131,132
Jain Shri Mohan 14
Kabylbekova B. 147
Kalaev Vladislav 107, 108
Karpechenko Nikita 107, 108
Kashin Alexander 54, 55
Kasyanov Artem 137, 138
Kazakova Irina 178, 179
Khaddazh Mishal 40, 41
Khokhlov Sergey 47, 48, 141, 142
Khokhlov Yurii 170, 171
Khromov A. 184, 185
Khvatkov Pavel 45, 46
Klaocheed Sutha 83
Klimenko Zinaida 80, 81, 113, 114
Kliukova Marina 207, 208, 213, 214
Klocke Evelyn 49
Klymenko Svitlana 134
Knyazeva Inna 28, 29, 90, 91, 152, 153, 197, 198
Koba Vladimir 34, 35, 50, 51, 184, 185
218 218
Kolosova Аdelina 38, 39
Komarova Olga 32, 33, 168, 169
Komar-Tyomnaya Larisa 143, 144, 145, 146
Konovalov Dmitri 121, 122
Kornatskiy Sergey 52, 53
Korolev K. 127, 128
Korostyleva Tatyana 43, 44, 137, 138
Korsun Irina 156, 157
Korzhenevskiy Vladislav 78, 79, 129, 130
Korzin Vadim 36, 37
Kotov S.F. 180, 181
Kovalchuk Irina 95,147
Kovtun Alexey 137, 138
Krasinskaya Tatiana 148, 149
Kravchenko Irina 113, 114
Kritskaya Tatyana 54, 55
Kudoyarova G. 94
Kudryavtsev Alexander 56, 57, 86, 87
Kuklina Alla 150, 151
Kulikov Ivan 28, 29, 96, 97, 152, 153
Kuzmenko Danil 80, 81
Kuzmina Nina 98, 99
Kuzmina Tatyana 68, 69
Lambardi Maurizio 15
Leiba Vitalii 174, 175
Lesnikova-Sedoshenko Nina 68, 69, 160, 161, 162, 163
Levchenko Svetlana 58, 59, 154, 155
Lihovskoi Vladimir 58, 59, 154, 155
Logvinenko Lydia 62, 63, 84, 85
Loshakova Pavla 98, 99
Lukicheva L.A. 205, 206
Madiyeva G. 147
Majidian Parastoo 106
Malaeva Elena 60, 61
Malyarovskaya Valentina 125, 126
Marchuk Nadezhda 195, 196
Marko Natalya 62, 63
Martinez-Gomez Pedro 106
Maslakov Yuri 156, 157
Maslova Elena 156, 157
Melekhov Igor 72, 73
Melnikov Vladimir 47, 48, 141, 142, 195, 196
Mertvishcheva M.E. 203, 204
Mesyats Natalia 36, 37, 143, 144
Metlitskaya Klavdia 96, 97
Miroshnichenko Dmitry 64, 65
Mitiouchkina Tatiana 164, 165, 193, 194
Mitrofanova Irina 16, 17, 66, 67, 68, 69 104, 105, 109, 110, 139, 140, 158, 159,
160, 161, 162, 163, 187, 188
Mitrofanova Olga 66, 67, 68, 69, 109, 110, 158, 159, 160, 161, 162, 163
Molchanova Anna 84, 85
219
219
Molkanova Olga 60, 61, 70, 71
Monfared Sajad Rashidi 82
Motyleva S.M. 203, 204
Mukhitdinova Zinat 95
Muratova Svetlana 72, 73, 166, 167
Nery Fernanda 177
Nikiforov Alexander 160, 161
Nogaibayev Akzhol 95
Novikova Tatyana 101, 102
Odintsov Anatolii 32, 33, 168, 169
Odintsova Tatyana 43, 44, 137, 138
Okuneva Anna 199, 200
Omelchenko Alexander 178, 179
Osipov G. 189, 190
Pagliani Marco 40, 41
Paiva Patrícia Duarte de Oliveira 133, 177
Paiva Renato 133, 177
Paliy Anfisa 74, 75, 121, 122, 139, 140, 145, 146, 162, 163, 170, 171
Paliy Ivan 74, 75, 145, 146, 170, 171
Panov Denis 178, 179
Panyushkina Euvgeniya 47, 48, 141, 142
Papelbu Vladimir 34, 35
Papihin Roman 72, 73, 166, 167
Park M. 94
Pashtetskiy Andrey 76, 77, 135, 136
Pavlova Irina 172, 173
Petrova Anna 96, 97
Petrovic Manuel 176
Pigolev A. 64, 65
Pilkevich Ruslana 36, 37
Platonova Natalia 26, 27
Plugatar Svetlana 80, 81, 113, 114
Plugatar Yurii 34, 35, 50, 51, 78, 79, 84, 85, 129, 130, 174, 175
Plyushchikov Vadim 40, 41
Polulyakh Alla 58, 59, 154, 155
Pospíšková Markéta 186
Prgomet Iva 176
Prgomet Zeljko 176
Prudente Débora 177
Pushin Alexander 64, 65, 193,194, 199, 200
Rabotyagov Valeriy 170, 171
Ragab Mohamad 23
Rasouli Omid 82
Regato Pedro 40, 41
Repetskaya Anna 178, 179
Reshetnik G.V. 180, 181
Ribeiro de Souza Rafaela 133
Risovannaya Valentina 38, 39
Rittirat Suphat 83
Romanov Mikhail 166, 167
Rudenko Marina 162, 163
220 220
Rusina Irina 111, 112
Ruta Claudia 15
Safwat Gehan 42
Sakhno Tatiana 50, 51, 182, 183, 184, 185
Sarkis Lina 40, 41
Savchenko Tatyana 64, 65
Šedivá Jana 186
Sefidkon Fatemeh 82
Shalaby Ahmed 42
Shelenkov Andrey 43, 44
Shevchenko Svetlana 187, 188
Shevchuk Oksana 62, 63, 84, 85, 174, 17592, 170
Sheveleva Anna 189, 190
Shipilova Valentina 32, 33, 168, 169
Shishkina Elena 30, 31
Shlyavas Anna 86, 87, 191, 192
Shoferistov Evgeny 201, 202
Shulga Olga 164, 165
Sidorova Tatiana 193, 194
Sidyakin A.I. 180, 181
Slavokhotova Anna 43, 44
Smykov Anatoliy 88, 89, 92, 93, 131, 132, 195, 196
Smykova Natalya 109, 110, 113, 114, 164, 165
Sobchuk N.A. 180, 181
Sobralieva Eliza 123. 124
Sokolenko Galina 209, 210
Sorokopudov Vladimir 90, 91, 197, 198
Sorokopudova Olga 90, 91, 197, 198
Souza Lucas 177
Startseva Olga 145, 146, 162, 163, 170, 171
Stavtzeva Irina 104, 105
Stepanov Iliya 92, 93
Stranishevskaya Еlena 38, 39
Subbotina Nataliya 72, 73, 166, 167
Suprun Ivan 92, 93
Taha Hussein 23
Taranov Vasiliy 45, 46
Thammasiri Kanchit 18, 83
Tikhonovich Igor 207, 208, 213, 214
Timerbaev Vadim 193, 194, 199, 200
Tokmakov Sergey 92, 93
Tretyakova Iraida 94
Trifonova Aya 56, 57, 86, 87, 191, 192
Tsiupka Sergei 201, 202
Tsybulko Natalia 150, 151
Tumaeva Tatiana 28, 29, 152, 153
Turdiev Timur 95, 147
Ulanovskaya Irina 113, 114
Upadyshev Mikhail 96, 97, 203, 204
Upadysheva Galina 96, 97, 203, 204
Upelniek Vladimir 98, 99
221
221
Useynov D.R. 205, 206
Vainstein Alexander 19
Valdez Marta Fermina 100
Valquíria dos Reis Michele 133
Vasilchenko Elena 107, 108
Vasileva Ekaterina 207, 208
Vasilyeva Olga 101, 102
Vasylyk Irina 58, 59, 154, 155
Velebil Jiří 186
Veprintsev Vladislav 209, 210
Vergun Olena 103, 134
Vernyuk Yuri 40, 41
Villegas Pablo Bolaños 100
Vinogradova Yulia 103, 134
Volkov Yakov 38, 39
Volodin Vitalii 38, 39
Volodkin Aleksander 211, 212
Volynkin Vladimir 58, 59, 154, 155
Weng-Huang Nien 100
Yatsenko Vladimir 156, 157
Yegorova Natalia 104, 105
Youssef Sahar 42
Yurkova Irina 178, 179
Zakubanskiy Аleksandr 109, 110
Zavgorodny Sergey 98, 99
Zeinalabedini Mehrshad 106
Zemlyanukhina Olga 107, 108, 209, 210
Zhdanova Irina 68, 69
Zhigacheva Irina 111, 112, 211, 212
Zhukov Vladimir 207, 208, 213, 214
Zíka Vladimír 186
Zlenko Valerii 58, 59, 154, 155
Zmushko Alexandr 148, 149
Zorin Evgeny 213, 214
Zubkova Natalia 113, 114
Zykova Vera 80, 81, 113, 114

222 222
Для заметок
Научное издание

Материалы
VIII Международной научно-практической конференции
«Биотехнология как инструмент сохранения
биоразнообразия растительного мира
(физиолого-биохимические, эмбриологические,
генетические и правовые аспекты)»

г. Ялта, Республика Крым, Россия


01 - 05 октября 2018 г.

В авторской редакции

Формат 60х84/8. Усл. печ. л. 26,04. Тираж 300 экз.

ИЗДАТЕЛЬСТВО ТИПОГРАФИЯ «АРИАЛ».


295015, Республика Крым, г. Симферополь, ул. Севастопольская, 31-а/2,
тел.: +7 978 71 72 901, e-mail: it.arial@yandex.ru, www.arial.3652.ru

Отпечатано с оригинал-макета в типографии ИП Бражникова Д.А.


295053, Республика Крым, г. Симферополь, ул. Оленчука, 63,
тел. +7 978 71 72 902, e-mail: braznikov@mail.ru