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ESCUELA DE QUIMICA
FACULTAD DE CIENCIAS
INSTRUMENTAL ANALITICO
Caracas 2006
TABLA DE CONTENIDO
1.1 ESTUDIO ELEMENTAL.............................................................................................................................. 2
1.1.1 DETERMINACIÓN DE CR EN ACERO. ............................................................................................ 2
1.1.2 DETERMINACION DE COBRE EN AGUA CON EL MÉTODO DE HIDROXIDO DE AMONIO. 2
1.1.3 DETERMINACIÓN DE HIERRO ........................................................................................................ 3
1.1.4 DETERMINACIÓN DE FOSFATO POR EL MÉTODO AMARILLO DE MOLIBDOVANADATO
(fertilizantes, Abonos y Suelos). ............................................................................................................................ 4
1.1.5 DETERMINACIÓN DE FÓSFORO POR EL MÉTODO DEL AZUL DE HETEROPOLIÁCIDO. ... 5
1.1.6 DETERMINACIÓN DE MANGANESO COMO PERMANGANATO............................................... 6
1.1.7 DETERMINACIÓN DEL NÍQUEL CON DIMETILGLIOXIMA ....................................................... 7
1.1.8 DETERMINACIÓN DE MOLIBDENO CON TIOCIANATO............................................................. 8
1.2 DETERMINACIÓN MEDIANTE TITULACIÓN FOTOMÉTRICA DE MEZCLAS................................. 9
1.2.1 DETERMINACIÓN MEDIANTE TITULACIÓN FOTOMÉTRICA DE LA MEZCLA Ca-Cu ......... 9
1.2.2 DETERMINACIÓN MEDIANTE TITULACIÓN FOTOMÉTRICA DE LA MEZCLA Cr –Mn. ...... 9
1.2.3 DETERMINACIÓN MEDIANTE TITULACIÓN FOTOMÉTRICA DE LA MEZCLA Ca-Mg USO
DE CHLORPHOSPHONAZO III.......................................................................................................................... 9
1.3 DETERMINACIÓN DEL pKa DE UN INDICADOR................................................................................ 10
1.4 BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA.......................................................................................................... 12
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Las técnicas espectrofotométricas nos permiten realizar diversos tipos de análisis cuantitativos,
bien sea la determinación de la concentración de un metal, la cuantificación simultánea de dos
componentes de una muestra, o la estimación del pKa de un indicador.
ESTUDIO ELEMENTAL
DETERMINACIÓN DE CR EN ACERO.
Uno de los procedimientos que pueden ser utilizados para determinar cromo en acero es oxidar el
mismo a dicromato con ácido perclórico, esta especie presenta una coloración más fuerte en el
visible y permite su cuantificación por métodos fotocolorimétricos.
Procedimiento:
Se prepara una solución madre de dicromato de 2000 ppm partiendo de un estándar
primario. Seguidamente y por dilución de la solución madre inicial, se prepara una solución
diluida de dicromato, agregando antes del aforo 10 mL de ácido nítrico diluido 1:1 (nota 1). Se
realiza un barrido de absorbancia en función de longitud de onda en un espectrofotómetro usando
como referencia agua. El máximo de transmisión se encuentra entre 410 y 480 nm. Se toma en
cuenta la absorbancia de la solución a la longitud de onda de trabajo; se establece la constante k y
el rango de concentraciones de trabajo se determina consultando el manual del equipo.
Se pesa 1,000 g. de la muestra de acero (contenido de Cr < 0,1 por ciento) a un vaso de
precipitado de 100 mL y se le disuelve con el ácido apropiado y se lleva a un balón de 100 ml.
Se coloca una alícuota de la muestra en un beaker y se agregan 20 ml aproximadamente de ácido
perclórico para llevar a cabo la oxidación la cual comienza al observar la formación de humos
densos de ácido perclórico. Se hace hervir suavemente durante 5 minutos para completar la
oxidación. Se enfría el vaso y contenido, se disuelven las sales solubles agregando 20 mL de
agua; se transvasa cuantitativamente la solución a un matraz aforado de 50 mL y se lleva a
enrace. Se coloca la cubeta de absorción con esta solución, correspondiente al ion dicromato.
Nota 1: debido al equilibrio existente entre el dicromato y el cromato, se debe asegurar que los
patrones al igual que la muestra estén a un pH altamente ácido para asegurar así que la señal
observada solo pertenezca a la especie de dicromato.
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determinación de Cr, sin embargo primero se tiene que determinar la cantidad mínima de amonio
que debe agregarse a las soluciones.
Se toma alícuotas de la solución diluida de 600 ppm (5 mL) y se prepara soluciones que
contengan, 2 y 4 ml de hidróxido de amonio. Preparar una solución adicional enrazando con
hidróxido de amonio concentrado, manteniendo el mismo volumen final (25 mL) y se realiza la
determinación de la absorbancia de cada solución. La cantidad adecuada de la solución ligando,
para la concentración de cobre empleada se debe determinar comparando los barridos obtenidos,
en estos se observaran un crecimiento de la absorbancia con el aumento de la cantidad de ligando
agregada hasta un valor constante, la zona del valor constante es la ideal para el estudio. Se
preparan los patrones a las concentraciones requeridas y se procede a realizar la curva de
calibración.
Una vez disuelta la muestra se toma una alícuota (1 mL) y se agrega el volumen determinado
anteriormente de hidróxido de amonio, se enrasa con agua a un volumen adecuado y se mide la
absorbancia de la muestra. Se realiza diferentes diluciones de la muestra hasta que la absorbancia
de la misma se encuentre en el centro de la curva de calibración.
Nota: Este método no se puede emplear en presencia de metales que precipitan en medio básico.
DETERMINACIÓN DE HIERRO
Un método excelente y muy sensible para la determinación del hierro se basa en la formación de
un complejo rojo-naranja de hierro (II) con o-fenantrolina. La o-fenantrolina es una base débil; en
disolución ácida, la principal especie es el ión fenantrolina PhH +. Así, la reacción de formación
del complejo se describe bien según la ecuación:
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Disolución patrón de hierro de 0.1 mg de Fe/mL. Se disuelven 0.1400 g de FeSO4.(NH4)2.SO4.
6H2O, calidad reactivo para análisis en 50 mL de agua que contenga 1 mL de H2SO4
concentrado. Se pasa un matraz aforado y se diluye 200 mL exactamente.
Preparación de la curva de calibración
Se coloca una alícuota de 2 mL de la disolución patrón de hierro en un vaso de precipitado y se
agrega 2 mL de hidroxilamina. Se ajusta el pH de esta solución a 4 con un pHmetro, agregando
solución buffer de pH 4 y ajustando con la ayuda de HCl o NaOH diluido. Se lleva
cuantitativamente esta solución a un balón de 100 ml y se agrega 3 mL de la disolución de la o-
fenantrolina. Se diluye hasta la marca.
Se limpian las cubetas del instrumento, se lava con la disolución del complejo y a continuación se
llenan. Se lava y se llena la segunda cubeta con una disolución en blanco, que contiene todos los
reactivos menos el hierro. Se secan con cuidado las paredes de la cubeta y se colocan en el
instrumento. Se realiza un barrido de absorbancia en función de la longitud de onda del patrón en
contraste con la prueba del blanco.
Se preparan tres patrones más, como mínimo, dentro del intervalo lineal del equipo y se traza la
curva de calibración del instrumento.
Análisis de la muestra
Se pone en un vaso de precipitado una alícuota de 5 mL de la muestra, se ajusta el pH de esta
solución de la misma manera como se llevó a cabo para preparar los patrones de curva de
calibración. Se lleva cuantitativamente esta solución a un balón de 100 ml y se agrega 3 mL de la
disolución de la o-fenantrolina y se enrasa y mide la absorbancia. Se repite el análisis, de ser
necesario, utilizando cantidades de muestra que den una absorbancia dentro del intervalo de la
curva de calibración.
Se calculan los miligramos de hierro por litro de disolución de la muestra.
Notas:
• La intensidad del color del complejo de hierro es independiente del pH, en rango de 2 a 9.
• La o-fenantrolina en solución se descompone fácilmente, se recomienda su preparación el
mismo día para asegurar la formación del complejo.
• El hierro debe estar en estado de oxidación 2, el agente reductor se debe adicionar antes
de desarrollar el color. Se puede utilizar Hidroxilamina, en forma de cloruro:
• Se deben esperar 10 minutos para que se desarrolle la máxima intensidad de color antes
de realizar la medición de la absorbancia.
• Debido a la interferencia del Cu no se puede determinar hierro en bronce o latón
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Solución de metavanadato de amonio (se disuelven 1.25 g de metavanadato de amonio en unos
200 mL de agua caliente, se espera hasta que la sal se ha disuelto totalmente, entonces se agrega
10 mL de ácido nítrico concentrado y se diluye a 250 mL con agua).
Molibdato de amonio, 5 g en 100 mL de agua.
Ácido nítrico 6M.
Una solución patrón que contenga 200 ppm de fósforo (se disuelven 0.2200 g de
dihidrogenofosfato de potasio KH2PO4, de peso fórmula 136.1, en agua y se completa hasta
250 mL).
Ácido perclórico (60% o 72%), necesario para preparar las muestras.
Curva de Calibración.
Se toman porciones de 2.0, 4.0, 6.0, y 8.0 mL del patrón de 200 ppm; se diluye cada una con
agua y se adicionan en el orden que se indica: 10 mL de ácido nítrico 6M, 10 mL de
metavanadato de amonio y 10 mL de molibdato de amonio. Se pasan las soluciones a matraces de
100 mL y se completa hasta el enrase; se mezcla bien.
Se prepara otra solución sin añadir fosfatos, pero con los mismos reactivos, para servir de ensayo
en blanco.
Después de transcurridos 20 min, se mide la absorbancia a 400 nm y a 460 nm.
Se representa en una gráfica la absorbancia leída, en función de la concentración, a las dos
longitudes de onda. El ensayo en blanco da una lectura de absorbancia menor a 460 nm y la
gráfica se aproxima más a una recta a esta longitud de onda.
La muestra problema se trata de la manera siguiente:
La mayoría de los fertilizantes fosfatados contienen aproximadamente un 10% de fosfato,
expresado como P2O5. Para colocar en el espectrofotómetro se requiere una solución que
contenga aproximadamente 1mg de fósforo en 100 mililitros. Un mg de P = 2.3 mg de P2O5 =
aproximadamente 25 mg de fertilizante. Por lo tanto hay que proceder como sigue:
Se pesan exactamente unos 250 mg de fertilizante y se disuelve según sea el tipo de fertilizante.
Se filtra, recogiendo el filtrado en un matraz aforado de 100 mL, lavándose bien el papel de filtro
y se diluye hasta el enrase (solo si hay residuo).
Se toman pipetas de 10.0 mL de esta solución y se pasan a un segundo matraz aforado de 100
mL, se agregan los reactivos tal como se hizo con los patrones y se diluye hasta el enrase.
Se efectúa la lectura de absorbancia a 400nm, o a 460nm, dependiendo de la curva de calibrado.
Recordar que para la máxima exactitud fotométrica el % de transmitancia debería quedar
comprendida entre 20 y 80 % más o menos (para equipos con escala de lectura analógica).
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(c) Solución patrón con 50 o 100 ppm de fósforo, preparada a partir de dihidrogenofosfato de
potasio del modo descrito en el experimento anterior.
La longitud de onda de trabajo se encuentra alrededor de los 660 nm.
Para construir la curva de calibración, se toman porciones de 0,50, 1,00, 1,50 y 2,00 mL del
patrón de 100 ppm; o el doble de estos volúmenes si el patrón es de 50 ppm. Se pasan a matraces
aforados de 100 mL, se diluyen con agua (ojo la dilución en este paso es sumamente
importante), se adicionan 10 mL de molibdato de amonio y 1 mL de cloruro estannoso diluido.
Se completa con agua hasta el enrase y pasados 5 minutos después de mezclar, pero no más tarde
de 20 minutos, se realiza la lectura de la absorbancia. Si el gráfico que se obtiene no cumple la
ley de Beer, la causa más probable es que el cloruro estannoso esté oxidado o que se haya
agregado en cantidad insuficiente.
Se pueden estudiar las mismas muestras problema que en el Experimento anterior, que se tratan
de la misma forma. Sin embargo, la solución final puede contener hasta 100 ppm de sílice (en
forma de silicato soluble ) sin introducir interferencia, pues el ácido molibdosilícico se reduce
mucho más lentamente que el molibdofosfórico en la solución fuertemente ácida que aquí se
emplea. El hierro (III) interfiere gravemente, debido a que reacciona con el cloruro estannoso. Se
elimina del modo descrito en el experimento anterior, o bien se reduce a Fe(II) haciendo pasar la
solución de la muestra por una pequeña columna de granalla de zinc amalgamado. En la solución
final se pueden tolerar quince ppm de Fe(III), como máximo.
Por este método se puede analizar el contenido en fósforo de muestras de tipo biológico, como el
trigo o la harina, pero hay que destruir previamente la materia orgánica, para lo cual se evapora la
muestra con una mezcla de ácido nítrico y de ácido perclórico. Primero se calienta con unos
mililitros de ácido nítrico concentrado; luego, cuando parte de la materia orgánica se ha
destruido, se adiciona una mezcla 1:1 de ácido nítrico y de ácido perclórico concentrados y se
evapora casi a sequedad. Es necesario realizar un experimento previo para determinar el mejor
tamaño de la muestra.
Es buena costumbre, realizar la determinación de uno o dos patrones simultáneamente con la de
la muestra problema, a causa de la inestabilidad del producto azul y como comprobación del
reactivo de cloruro estannoso.
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ácido nítrico, y repetir esta operación una vez más. Una vez que la muestra ha sido disuelta se
enfría y se agrega lentamente alrededor de 1 g de peroxidisulfato de amonio [(NH4)2S2O8] en el
caso de contener compuestos de carbono. Se hierve suavemente durante 10 min, se enfria y
luego se afora en un balon de 100 o 50 mL
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dimetilglioxima al 0.1 % en agua. Al formar el complejo no debe existir precipitados, si esto
ocurre se debe preparar una nueva muestra con una cantidad mayor de agua de bromo.
Se lleva a volumen, se homogeneiza y se efectúa la determinación
Notas importantes
• Como el compuesto es inestable, las mediciones deben realizarse dentro de los 20 minutos
de haber agregado la solución de dimetilglioxima; la intensidad del color aumenta
lentamente con el tiempo y finalmente decrece, as´que debe establecer un tiempo similar
para cada medida.
• Se le agrega a la solución de níquel bromo y dimetilglioxima, debido a que cuando se
agrega un oxidante a una solución alcalina de níquel (como el bromo), y luego
dimetilglioxima, se produce una coloración roja. Ésta es una reacción muy sensible. El
complejo soluble rojo tiene el níquel en el estado tetravalente y se le denomina
dimetilglioxima niquélica (IV)
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DETERMINACIÓN MEDIANTE TITULACIÓN FOTOMÉTRICA DE MEZCLAS
DETERMINACIÓN MEDIANTE TITULACIÓN FOTOMÉTRICA DE LA MEZCLA Ca-Cu
Para la determinación de la cantidad de cobre y calcio en una muestra, suele utilizarse el hecho de
que la constante de formación de ambos complejos con el EDTA son distintos. Para iniciar el
trabajo experimental debemos escoger la longitud de onda del trabajo (suele emplearse la del
complejo azul tetraamino de cobre). Para la verificación de dicha longitud de onda (639 nm), se
realizan varios barridos de una cierta cantidad de muestra, acomplejada con diferentes volúmenes
de hidróxido de amonio concentrado y enrasados a un volumen final fijo.
Se realiza una titulación preliminar con el fin de determinar la concentración de EDTA a utilizar.
Para ello se coloca en una fiola cierto volumen de muestra al que se le añade la cantidad
necesaria de acomplejante y posteriormente se le agrega 1 mL de EDTA de concentración
conocida. Se cura la celda espectrofotométrica con la mínima cantidad de solución, se llena con
la misma y se mide la absorbancia a 639 nm.
La solución se trasvasa a la fiola de trabajo, se añade 1 mL mas de EDTA y se determina la
absorbancia de la muestra siguiendo el procedimiento descrito.
Se realiza la grafica de absorbancia vs volumen de EDTA añadido. Se establece el volumen de
muestra a emplear, al igual que el volumen final. Se preparan las soluciones en forma
cuantitativa. Se mide la absorbancia de dichas soluciones. Se realiza la grafica de absorbancia vs
volumen de EDTA añadido. Se determinan los volúmenes equivalentes de EDTA empleados para
acomplejar cada metal y se calculan las concentraciones de los mismos en la muestra.
NOTA:
A fin de obtener resultados confiables, se deben escoger dos longitudes de onda en las que el
coeficiente de absortividad molar sea alto y significativamente distinto de cero para ambas
especies a ambas longitudes de onda.
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A pH 7. Como solución buffer se hacen reaccionar 10 g de ioduro de tetra-n-butilamonio y 6.3 g
de óxido de plata en polvo en 400 mL de agua. Agítese por una hora, filtre y diluya a 500 mL.
Mezcle 100 mL de esta solución con 20 g de ácido bórico y diluya a 1 L. Añada ácido bórico
adicional hasta obtener alícuotas de 5/mL y al diluirlas a 25ml tengan un pH de 7.
Ajuste una muestra que contenga de 1-10 µg de calcio y/o magnesio a pH 7 con ácido diluido o
hidróxido de tetrabutilamonio. Añada 5 mL de una solución de 165.8 mg de chlorophosphonazo
III por litro y 5 mL del buffer de pH 7. Diluya a 25 mL y lea a 669 nm contra un reactivo patrón
(el blanco). Para 0.1-1µg de calcio o magnesio diluya el reactivo hasta una décima parte de su
concentración y lea en una celda.
A pH 2.2. Tome una muestra que contenga 5-30 µg de calcio y añada 5 mL de la solución
expresada anteriormente de chlorophosphonazo III. Ajuste a pH 2.2 con ácido clorhídrico diluido.
Diluya a 25 mL y lea el calcio a 667.5 nm contra un reactivo patrón (el blanco). Para el magnesio
sustraiga del valor de pH 7.
Esto está en la ordenada al origen de una ecuación para una línea recta.
y = mx + b
En donde y es log (In )/(HIn), m = 1 y b = -pKa. Por lo tanto, si el término log se grafica
contra pH, la pendiente es 1, la ordenada en el origen es –pKa y la línea debe atravesar el eje del
pH en donde pH = pKa (puede ser consultada la figura en bibliografía 3). En el último punto
(In-) = (HIn) y, por tanto, el log de la razón de estos términos es cero y pH = pKa,
La razón (In-) / (HIn) se puede determinar por medio de espectrofotometría. Primero, se prepara
una solución de azul de bromotimol en solución ácida (pH bajo) en la cual el indicador se
encuentra en la forma HIn. Entonces se determina el espectro de absorción. Después se prepara el
indicador en solución alcalina (pH elevado) en donde se encuentra en la forma In. Luego se
determina el espectro de absorción de In-. Para las mediciones posteriores se seleccionan las
longitudes de onda de los espectros de absorción para la absorbancia máxima de Hin e In”.
Después se preparan soluciones amortiguadoras con valores de pH alrededor del pKa del azul de
bromotimol y se miden las absorbancias a las longitudes de onda seleccionadas. Estas soluciones
contienen la misma concentración total del indicador, ((HIn) + (In-)), pero las proporciones
varían con el pH. La figura 22.3 muestra una gráfica típica de absorbancia contra pH a la longitud
de onda de absorbancia máxima para la especie In-”. Los términos que se utilizan en la figura son
los siguientes:
Aa = absorbancia de HIn
Ab = absorbancia de In
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A = absorbancia de la mezcla
De la gráfica, es evidente que
(In )/(HIn) = (A - Aa)/(Ab – A)
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BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA
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