Вы находитесь на странице: 1из 2

КАЧЕСТВО И БЕЗОПАСНОСТЬ

Экспрессанализ сахаров товка образцов для ввода в жидко


стный хроматограф. Наряду с низшими
углеводами в экстракты попадают ра
методом высокоэффективной створимые полисахариды, которые
следует предварительно отделять, так
жидкостной хроматографии как они прочно сорбируются на колон
ке и быстро приводят ее в негодность.
Так, введение пяти плохо отфильтро
ванных проб в хроматограф вызывает
рост давления на входе колонки с 3,5
М.И.Соколов, Н.Д.Верзилина, О.Б.Рудаков, В.И.Толоконников, А.П.Никульшин,
до 7,5 МПа. В нашей практике после
К.К.Полянский
прямого введения примерно ста проб
Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки
Воронежская государственная технологическая академия растворов сахаров давление на входе в
колонку выросло в пять раз и колонка
перестала делить компоненты пробы.
Из приведенных примеров видно,
При проведении опытов по селек тительных экстрактах с помощью ВЭЖХ как важно исследуемый объект осво
ции в растениеводстве и при перера с рефрактометрическим детектирова бодить от твердых частиц, малора
ботке сельхозсырья возникает необхо нием (хроматограф LP250, Чехия) на створимых и растворимых высокомо
димость определения в растениях со колонке 300x4,8 мм, заполненной лекулярных примесей. Оптимально
держания различных сахаров. Один из сорбентом Нуклеосил NH2, зернением достичь этой цели можно путем твер
наиболее эффективных методов реше 10 мкм. В качестве элюента использова дофазной экстракции. Как следует из
ния этой задачи – обращеннофазовая ли деионизированную воду. данных [3], фильтры Шотта не приме
высокоэффективная жидкостная хро Как правило, ВЭЖХ углеводов на нимы для этих целей. С их помощью
матография (ВЭЖХ) [1]. аминопропильной фазе проводят с ис можно отфильтровать только грубые
Нами испытаны возможности эксп пользованием смесей ацетонитрил – взвеси. Бумажные фильтры имеют так
рессного определения углеводов в рас вода. Применение чистой воды имеет же достаточно большой размер пор [4].
свои преимущества и недостатки. Пре Наиболее подходящий метод подго
3 имущества в том, что существенно со товки пробы – твердофазная экстрак
кращается время анализа, подвижная ция. Для проведения твердофазной эк
фаза становится нетоксичной, суще стракции используют шприцы (пат
1
ственно уменьшается стоимость ана роны), дно которых заполнено слоем
лиза. За эти явные преимущества при сорбента. Для удаления полисахари
А ходится расплачиваться некоторым дов пригоден сорбент с такой же при
2
ухудшением селективности разделе витой фазой (тот или иной силикагель
ния. Время удерживания моносахари с привитой фазой NH2). Сорбент в пат
дов становится практически одинако роне для твердофазной экстракции
вым. Вместе с тем сохраняется воз смачивают смесью ацетонитрил – вода
можность разделения моно и дисаха (80:20), затем водой. После чего вво
ридов и олигосахаридов (рис. 1 и 2). дят образец. На 6 мл сорбента – 1 мл
Ниже представлены размеры их моле пробы. Затем патрон промывают во
кул, рассчитанные по программе дой. Важно, чтобы олигосахариды не
12 10 8 мин
ChemOffice 2002 [2]. проскакивали, а оставались на сор
Рис. 1. Хроматограмма 2й фракции экстракта бенте в патроне. При смывании исхо
стевиозида: А – суперпозиция трех пиков, разделенная Размеры молекул сахаров дят из расчета 1 мл воды на 2–4 мл
с применением компьютерных технологий (1 – глюкоза, сорбента. Для ускорения твердофаз
2 – сахароза); 3 – фракция стевиозидов
ной экстракции используют вакуум,
Вещество Dmax, нм
так как сорбент в патроне имеет мел
2 L (+) рабиноза 0,54 кое зернение. Патрон вставляют в кол
L (+) рамноза 0,65 бу Бунзена и подключают к вакуумно
Глюкоза 0,66 му насосу. Можно применять специ
Маннит 0,69 альные приспособления, так называе
Сахароза 0,98 мые «мэнифалды» (от англ. vacuum
Мальтоза 1,00 manifolds), в которые одновременно
Стевиозид 2,10 можно вставлять большое количество
патронов для извлечения проб. Ско
В выбранных условиях ВЭЖХ после рость элюирования – 1–2 мл/мин. По
довательность удерживания углеводов лезно на 1 мин задерживать элюент в
1 определяется молекулярной массой и патроне перед элюированием.
степенью гидроксилирования молеку В настоящее время методы твердо
лы. Чем больше число гидроксильных фазной экстракции для концентриро
групп, тем с большим числом аминог вания и адсорбционной очистки про
рупп на модифицированной поверх бы с целью ее дальнейшего хромато
7 6 5 4 мин
ности сорбента взаимодействует ана графического анализа получили широ
Рис. 2. Хроматограмма водного экстракта из сахарной лизируемый углевод. кое распространение в подготовке
свеклы: 1 – глюкоза; 2 – сахароза Одна из важных проблем анализа проб из биообъектов [5]. На рис. 1 и 2
экстрактов углеводов – пробоподго представлены хроматограммы экст

94 ПИЩЕВАЯ ПРОМЫШЛЕННОСТЬ 8/2004

094-095.p65 94 19.08.04, 14:52


Cyan Magenta Yellow Black
QUALITY AND SAFETY

ракта углеводов из стевии и для сопос# партамом или сахарином, необходим 2. Рудаков О.Б., Соколов М.И., Бол#
тавления – из сахарной свеклы. контроль за степенью извлечения сте# дырев С.Ю., Шестаков А.С. Гель#про#
Экстракцию сахаров из стевии осу# виозидов из исходного сырья. Приме# никающая хроматография смесей оли#
ществляли следующим образом: в нение чистой воды в целом повышает го#, ди# и моносахаридов//Известия
центрифужные пробирки помещали технико#эксплуатационные характери# вузов. Пищевая технология. 1999.
измельченную растительную массу в стики метода хроматографического № 5–6. С. 92–94.
количестве 1 г; экстракцию проводили контроля. В настоящее время произво# 3. Воскресенский В.И. Техника лабо#
70%#ным этанолом; первую экстрак# дят колонки, в которых за счет тщатель# раторных работ. – М.: Химия, 1969.
цию проводили 4 ч с периодическим ной прививки модифицирующих групп 4. Мусакин А.П., Рагинский Ф.Ю.,
перемешиванием стеклянной палоч# колонки с аминофазой поверхность Суглобова К.Д. Оборудование хими#
кой содержимого центрифужной про# сорбента лучше смачивается водой, что ческих лабораторий. – Л.: Химия,
бирки, затем центрифугировали 10 позволяет использовать при хроматог# 1978.
мин при 5000 об/мин; вторую – чет# рафировании только воду без потери 5. Сычев К.С., Даванков В.А. Мате#
вертую экстракцию также осуществля# селективности разделения [4]. риалы и методы пробоподготов#
ли 70%#ным этанолом при периоди# Таким образом, нами разработана и ки в хроматографии: твердофазное
ческом перемешивании осадка в ра# испытана на модельных и реальных концентрирование и адсорбционная
створителе с последующим центрифу# пробах упрощенная экспресс#методи# очистка / Сорбционные и хрома#
гированием при тех же условиях. ка контроля моно#, дисахаридов и их тографические процессы. – Воро#
Объединенную насадочную жид# производных в экстрактах из расти# неж: ВорГУ, 2004, т. 4, вып. 1,
кость очищали на колонке, заполнен# тельного сырья. с. 5–28.
ной ионообменными смолами. 6. Ермаков А.И., Арасимович В.В.,
Пробу сахаров из свеклы готовили ЛИТЕРАТУРА Яроси Н.П., Перуанский Ю.В., Луков#
по методике [6]. Хроматограммы ре# никова Г.А., Иконникова М.И. Методы
гистрировали при расходе подвижной 1. Рудаков О.Б., Родионова И.С., биохимического исследования расте#
фазы 0,3 мл/мин, объем пробы 20 мкл Бочарова О.И. Современное состоя# ний. – Л.: Агроиздат, 1987.
(рис. 2). ние количественного контроля угле# 7. Рудаков О.Б., Востров И.А., Федо#
Актуальность разработки таких ме# водов в пищевых продуктах методами ров С.Ф., Филиппов А.А., Селеменев
тодик определяется тем, что дорогие высокоэффективной жидкостной хро# В.Ф., Приданцев А.А. Спутник хрома#
природные подсластители (стевиози# матографии // Хранение и перера# тографиста. Методы жидкостной хро#
ды) фальсифицируются дешевыми ботка сельхозпродукции. 1999. № 2. матографии. – Воронеж: Водолей,
синтетическими подсластителями – ас# С. 52–56. 2004.

ПИЩЕВАЯ ПРОМЫШЛЕННОСТЬ 8/2004 95

094-095.p65 95 19.08.04, 14:53


Cyan Magenta Yellow Black