Вы находитесь на странице: 1из 6

Îñîáåííîñòè îáíàðóæåíèÿ ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ

ìåòàáîëèòîâ ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ


ìåòîäîì ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ â ìî÷å
ÇÀÈÊÈÍÀ Î.Ë.1, ÊÈÍÄ À.Â.2, ÃÐÈÍØÒÅÉÍ È.Ë.2, ÃÐÈÃÎÐÜÅÂ À.Ì.3

1 — ÃÊÓÇ Ëåíèíãðàäñêèé îáëàñòíîé íàðêîëîãè÷åñêèé äèñïàíñåð, õèìèêî-òîêñèêîëîãè÷åñêàÿ ëàáîðàòîðèÿ.


188661 Ëåíèíãðàäñêàÿ îáëàñòü, Âñåâîëîæñêèé ðàéîí, ä.Íîâîå Äåâÿòêèíî 19/1
2 — ÎÎÎ «Àíàëèò Ïðîäàêòñ», 199106, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, Â.Î., 26-ÿ ëèíèÿ, 15/2, îôèñ 9.08
3 — ÃÁÓÇ ÌÎ «Áþðî ÑÌÝ», ñóäåáíî-õèìè÷åñêîå îòäåëåíèå. 129110, Ìîñêâà, óë. Ùåïêèíà, äîì 61/2 êîðï. 8

Îáçîðíûé õèìèêî-òîêñèêîëîãè÷åñêèé àíàëèç ìî÷è â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ ïðåäïîëàãàåò ïðîâåäåíèå


òðóäîåìêîé ïðîáîïîäãîòîâêè. Ýòà ïðîöåäóðà ñ÷èòàåòñÿ íåîáõîäèìîé ïðè îïðåäåëåíèè ôàêòîâ óïîòðåá-
ëåíèÿ òåõ ñîåäèíåíèé, ìåòàáîëèçì êîòîðûõ ïðîòåêàåò ïðàêòè÷åñêè íàöåëî è âêëþ÷àåò ñòàäèþ êîíúþ-
ãèðîâàíèÿ. Òàêàÿ îñîáåííîñòü õàðàêòåðíà è äëÿ ãðóïïû ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ: îáíàðóæåíèå
èõ ìåòàáîëèòîâ îáû÷íî ïðåäïîëàãàåò ïðîâåäåíèå ìèíåðàëüíîãî èëè ôåðìåíòàòèâíîãî äåêîíúþãèðîâàíèÿ.
Îïðåäåëåíèå êîíúþãàòîâ ìåòîäîì ÆÕ-ÌÑ ïîçâîëÿåò îòêàçàòüñÿ îò ýòîé ñòàäèè. â ïðåäëàãàåìîé ðà-
áîòå ïðèâåäåíî ñðàâíèòåëüíîå îïèñàíèå ðÿäà ñïîñîáîâ èçâëå÷åíèÿ ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ ìåòàáîëèòîâ
ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ èç ìî÷è. Íàéäåíî, ÷òî íàèáîëåå ïðèåìëåìûìè ñïîñîáàìè ÿâëÿþòñÿ
èçâëå÷åíèå àíàëèòîâ àöåòîíèòðèëîì è òâåðäîôàçíàÿ ýêñòðàêöèÿ, ïðîâîäèìàÿ ñ ïîìîùüþ îáðàùåí-
íî-ôàçîâîãî ñîðáåíòà, ïðè÷åì ïðåèìóùåñòâîì ïåðâîãî ñïîñîáà ÿâëÿåòñÿ ïðîñòîòà âûïîëíåíèÿ, à âòîðîãî
— âîçìîæíîñòü êîíöåíòðèðîâàíèÿ àíàëèòîâ. Ïðè âûáîðå ðåæèìà ÆÕ-ÌÑ àíàëèçà (ýëåêòðîðàñïûëèòå-
ëüíàÿ èîíèçàöèÿ) íàèáîëüøóþ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ïîëó÷àëè â ïîëîæèòåëüíîì ðåæèìå ïðè óñëîâèè ïðè-
ìåíåíèÿ ïîäêèñëåííûõ ýëþåíòîâ. Ïîñêîëüêó ãëþêóðîíèäèðîâàííûå ìåòàáîëèòû â óñëîâèÿõ ýëåêòðîðàñ-
ïûëåíèÿ ïîäâåðæåíû íåêîòîðîé ôðàãìåíòàöèè, òî âûáîð èîíà-ïðåêóðñîðà îïðåäåëÿëñÿ ñòåïåíüþ ýòîãî
ðàçëîæåíèÿ äëÿ îïðåäåëÿåìîãî ñîåäèíåíèÿ è ìàòðè÷íûìè âëèÿíèÿìè.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñèíòåòè÷åñêèå êàííàáèìèìåòèêè, êàííàáèíîèäû, ïðîáîïîäãîòîâêà, ìåòàáîëèòû, ãëþ-
êóðîíèäû, ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ

Ââåäåíèå ìåòàáîëèòîâ äëÿ êàæäîãî íîâîãî ñîåäèíåíèÿ, à òàêæå

Ñ
ðàçðàáàòûâàòü àíàëèòè÷åñêèå ñõåìû äëÿ ñêðèíèíãà óæå
èíòåòè÷åñêèå êàííàáèìèìåòèêè (êàííàáèíîè-
äû) ñîñòàâëÿþò îáøèðíóþ ãðóïïó ñîåäèíåíèé, îáíàðóæåííûõ ñîåäèíåíèé. Ðàíåå, ñòðåìÿñü óïðîñòèòü
îáíàðóæèâàåìûõ íà ðûíêå ïñèõîàêòèâíûõ ïðîöåññ èäåíòèôèêàöèè, èññëåäîâàòåëè îãðàíè÷èâàëèñü
ñðåäñòâ, ïî êðàéíåé ìåðå, ñ 2008 ã. Íà÷èíàÿ ðàññìîòðåíèåì ìåòàáîëèòîâ ôàçû I [4, 5], ÷òî òðåáîâàëî
ñ 2010 ã. ýòà ãðóïïà íåîäíîêðàòíî çàíèìàëà ëèäèðó- îáÿçàòåëüíîãî äåêîíúþãèðîâàíèÿ (ãèäðîëèçà) ìî÷åâûõ
þùèå ïîçèöèè ïî ÷èñëó íîâûõ ñîåäèíåíèé, ðåãèñòðè- îáðàçöîâ. Îäíàêî, âïîñëåäñòâèè áûñòðî ñòàëè ïîÿâëÿòü-
ðóåìûõ ÷åðåç Ñèñòåìó ðàííåãî îïîâåùåíèÿ Åâðîïåé- ñÿ ðàáîòû ïî èññëåäîâàíèþ ìåòàáîëèòîâ ôàçû II [6, 7].
ñêîãî ñîþçà [1]. Íåñìîòðÿ íà ââåäåíèå îãðàíè÷èòåëü- Èõ âûâîäû ïðîäåìîíñòðèðîâàëè ìåòîäè÷åñêèå ïðåèìó-
íûõ ìåð ïðèíèìàåìûõ ïðàâèòåëüñòâàìè ðÿäà ñòðàí ùåñòâà îáíàðóæåíèÿ ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ ìåòàáîëèòîâ
(è, â òîì ÷èñëå, Ðîññèè), ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè ðàñ- íàðÿäó ñ ìåòàáîëèòàìè ôàçû I, â ÷èñëå êîòîðûõ ìîæíî
ïðîñòðàíåíèå ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ ïðè- íàçâàòü íèâåëèðîâàíèå ñòàäèè äåêîíúþãèðîâàíèÿ è ìåíü-
âåëî ê ïîÿâëåíèþ óñòîé÷èâîãî ñïðîñà [2]. Ôàðìàêî- øóþ çàãðÿçíåííîñòü îáðàçöîâ.
ëîãè÷åñêîå äåéñòâèå ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòè- Çíà÷èòåëüíàÿ ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà è ìàëàÿ òåðìî-
êîâ, ñõîäíîå ñ äåéñòâèåì òåòðàãèäðîêàííàáèíîëà, ñòàáèëüíîñòü ãëþêóðîíèäîâ ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáè-
îáû÷íî ñâÿçûâàþò ñ èõ àêòèâíîñòüþ ïî îòíîøåíèþ ìèìåòèêîâ ïðèâîäèò ê êðàéíèì çàòðóäíåíèÿì ïðè ïî-
ê êàííàáèíîèäíûì ðåöåïòîðàì ÷åëîâåêà [3]. ïûòêàõ ýëþèðîâàíèÿ èõ äåðèâàòîâ ãàçîõðîìàòîãðàôè-
Íåñìîòðÿ íà ðàçíîîáðàçèå ñòðóêòóð ñèíòåòè÷åñêèõ ÷åñêèì ìåòîäîì. Îäíàêî, ïðè èñïîëüçîâàíèè æèäêî-
êàííàáèìèìåòèêîâ, ïî÷òè âñå îíè ïîäâåðæåíû èíòåíñèâ- ñòíûõ õðîìàòî-ìàññ-ñïåêòðîìåòðîâ (ÕÌÑ), ïîäîá-
íîìó ìåòàáîëèçìó, ïðîõîäÿùåìó, ïî êðàéíåé ìåðå, äâå íûå çàòðóäíåíèÿ îòñóòñòâóþò, à ïîâûøåíèå äîñòóï-
ôàçû. Ýòî îáúÿñíÿåò îòñóòñòâèå èñõîäíûõ ñîåäèíåíèé íîñòè ñîîòâåòñòâóþùåãî îáîðóäîâàíèÿ ïîçâîëÿåò ïå-
â ìî÷å è áûñòðîå óäàëåíèå èõ èç ñèñòåìíîãî êðîâîòîêà ðåâåñòè îáíàðóæåíèå ãëþêóðîíèäîâ â ïðàêòè÷åñêè
[3]. Äàííàÿ îñîáåííîñòü çàñòàâëÿåò èññëåäîâàòåëåé ïðè- äîñòóïíóþ îáëàñòü. Ñëåäóåò ó÷åñòü, ÷òî ãëþêóðîíè-
íèìàòü ñðî÷íûå ìåðû ïî îáíàðóæåíèþ è èäåíòèôèêàöèè äû, îáðàçîâàííûå ñ ó÷àñòèåì êàðáîêñèëüíûõ ãðóïï,
ISSN 1682—8313 77
ËÀÁÎÐÀÒÎÐÍÀß ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÀ

ïîäâåðæåíû ãèäðîëèçó ïðè õðàíåíèè, ñêîðîñòü êîòî- Ïîäãîòîâêó ïðîá ïðîâîäèëè âîñåìüþ ðàçíûìè ìå-
ðîãî îïðåäåëÿåòñÿ, â îñíîâíîì, òåìïåðàòóðîé è òîäàìè.
pH îáðàçöà [8]. Ðåçóëüòàòîì ãèäðîëèçà ìîæåò áûòü 1. Ìèíèìàëüíàÿ ïðîáîïîäãîòîâêà. Íåîáõîäèìîå
îáðàçîâàíèå ìàëîðàñòâîðèìûõ ñîåäèíåíèé, ÷òî ïðè- êîëè÷åñòâî èñõîäíîé ìî÷è öåíòðèôóãèðîâàëè
âîäèò ê ñíèæåíèþ ñîäåðæàíèÿ àíàëèòîâ ïðè àíàëèçå. (3000 îá/ìèí, 3 ìèí), îòáèðàëè íàäîñàäî÷íóþ æèä-
Õîòÿ èíòåðåñ èññëåäîâàòåëåé ê ñâîéñòâàì ãëþêó- êîñòü è èñïîëüçîâàëè â êà÷åñòâå âíåøíåãî ñòàíäàðò-
ðîíèäîâ è îñîáåííîñòÿì èõ ïîâåäåíèÿ â óñëîâèÿõ íîãî îáðàçöà.
æèäêîñòíîãî õðîìàòî-ìàññ-ñïåêòðîìåòðè÷åñêîãî àíà- 2. Èçâëå÷åíèå àöåòîíèòðèëîì. ê îáðàçöó ìî÷è
ëèçà (ÆÕ-ÌÑ) îòìå÷àåòñÿ ñðàâíèòåëüíî äàâíî (100 ìêë) äîáàâëÿëè àöåòîíèòðèë (400 ìêë), òùà-
[8, 9], ïîÿâëåíèå íîâûõ ñîåäèíåíèé òðåáóåò îïðåäåëå- òåëüíî ïåðåìåøèâàëè è ïîìåùàëè â õîëîäèëüíèê
íèÿ èõ õàðàêòåðèñòèê è ðàçðàáîòêè ñîîòâåòñòâóþùèõ (-20°Ñ, 20 ìèí). Çàòåì äîâîäèëè ñìåñü äî êîìíàò-
ìåòîäîâ ïîäãîòîâêè ïðîá è ïîñëåäóþùåãî àíàëèçà. íîé òåìïåðàòóðû, îòáèðàëè 400 ìêë âîäíî-àöåòîíèò-
Äëÿ ýòèõ öåëåé íàìè áûë îáíàðóæåí è ïðåäïîëîæè- ðèëüíîé ôàçû (âåðõíèé ñëîé) è óïàðèâàëè ïðè òåìïå-
òåëüíî èäåíòèôèöèðîâàí ðÿä ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ ìå- ðàòóðå 45°Ñ â ïîòîêå âîçäóõà. Ñóõîé îñòàòîê ðàñòâî-
òàáîëèòîâ ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ. ðàñïðî- ðÿëè â 100 ìêë æèäêîñòíî-õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ôàçû
ñòðàíÿâøèõñÿ â òå÷åíèå ïîñëåäíèõ òðåõ ëåò. Âñå ýòè ìå- À è ââîäèëè â õðîìàòîãðàô.
òàáîëèòû èìåëè êàðáîêñèëüíóþ ãðóïïó, ïðèîáðåòåííóþ 3. Ìåòîä (2) ïîëíîñòüþ ïîâòîðÿëè ïðè ïîäêèñëå-
â ðåçóëüòàòå ïðîõîæäåíèÿ ôàçû I. â äàííîé ïóáëèêàöèè íèè ìî÷è äîáàâêîé 10 ìêë ìóðàâüèíîé êèñëîòû.
ïðåäëàãàåòñÿ ñðàâíåíèå ìåòîäîâ èçâëå÷åíèÿ ãëþêóðîíè- 4. Æèäêîñòíî-æèäêîñòíàÿ ýêñòðàêöèÿ (ÆÆÝ).
äèðîâàííûõ ìåòàáîëèòîâ èç ìî÷è íà ïðèìåðå äâóõ òåñ- Îáðàçåö ìî÷è (500 ìêë) ïîäêèñëÿëè îðòîôîñôîðíîé
òîâûõ ñîåäèíåíèé, ÿâëÿþùèõñÿ ìåòàáîëèòàìè PB-22F êèñëîòîé äî pH ~1.5-2 è ýêñòðàãèðîâàëè 500 ìêë
[7] (5F-PB-22, ðèñ. 1). Îäíî èç ýòèõ ñîåäèíåíèé âû- õëîðîôîðìà (2 ìèí). Ïîñëå öåíòðèôóãèðîâàíèÿ îò-
áðàíî äëÿ îáîáùåííîé èëëþñòðàöèè îñîáåííîñòåé ïîâå- áèðàëè îðãàíè÷åñêóþ ôàçó è óïàðèâàëè äîñóõà â òåõ
äåíèÿ ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ ìåòàáîëèòîâ â óñëîâèÿõ æå óñëîâèÿõ. Ñóõîé îñòàòîê ðàñòâîðÿëè â 500 ìêë
ýëåêòðîðàñïûëèòåëüíîé èîíèçàöèè (ESI). æèäêîñòíî-õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ôàçû À è ââîäèëè
â õðîìàòîãðàô.
5. Ìåòîä (4) ïîëíîñòüþ ïîâòîðÿëè, ñìåíÿÿ õëîðî-
Ìàòåðèàë è ìåòîäû ôîðì íà ýòèëàöåòàò.
6. Òâåðäîôàçíàÿ ýêñòðàêöèÿ (ÒÔÝ). Îáðàùåí-
1. Ìåòîäû ïîäãîòîâêè ïðîá íî-ôàçîâûé ïàòðîí AccuBond ODS C18 (200 ìã, 3 ìë,
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñòåïåíè ýêñòðàêöèè (èçâëå÷å- Agilent) ïðîìûâàëè àöåòîíèòðèëîì (6 ìë) è êîíäèöèî-
íèÿ) âûáðàëè îáðàçåö ìî÷è, äîñòàâëåííûé â ëàáîðà- íèðîâàëè ðàñòâîðîì àöåòîíèòðèëà â âîäå (6 ìë, 10
òîðèþ ñ öåëüþ ïîèñêà ñîåäèíåíèé, âûçâàâøèõ ñîñòî- îá.%), ïîäêèñëåííîãî äî pH ~1.5-2 îðòîôîñôîðíîé
ÿíèå îäóðìàíèâàíèÿ è ñîäåðæàùèé çíà÷èòåëüíûå êî- êèñëîòîé. ê 2 ìë ìî÷è äîáàâëÿëè 1 ìë âîäû, ïîäêèñëÿëè
ëè÷åñòâà ìåòàáîëèòîâ PB-22F. Äî ïðîâåäåíèÿ ðàáîò îðòîôîñôîðíîé êèñëîòîé è íàíîñèëè íà ïàòðîí. Ñëîé
îáðàçåö õðàíèëè ïðè òåìïåðàòóðå -20°Ñ. ñîðáåíòà ïðîìûâàëè êîíäèöèîíèðóþùèì ðàñòâîðîì

Ðèñ. 1. PB-22F è ïðåäïîëàãàåìûå ñòðóêòóðû åãî íåêîòîðûõ ìåòàáîëèòîâ

78
ÍÀÐÊÎËÎÃÈß. 2015. ¹9

(3 ìë), ñóøèëè ïîòîêîì âîçäóõà (1 ìèí) è ýëþèðîâàëè Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå


êîìïîíåíòû îáðàçöà àöåòîíèòðèëîì (3 ìë). Ïîñëå óïà-
ðèâàíèÿ ñóõîé îñòàòîê ðàñòâîðÿëè â 2 ìë æèäêîñò- 1. Âûáîð ñïîñîáà ïîäãîòîâêè ïðîá
íî-õðîìàòîãðàôè÷åñêîé ôàçû À è ââîäèëè â õðîìàòîã-  êà÷åñòâå òåñòîâûõ ñîåäèíåíèé âûáðàëè äâà ãëþ-
ðàô. Âñå îñòàëüíûå ðàñòâîðû, ïðîøåäøèå ÷åðåç ïàòðîí, êóðîíèäèðîâàííûõ ìåòàáîëèòà (I è II), ïðåäïîëàãàå-
áûëè îáúåêòàìè ïîñëåäóþùåãî àíàëèçà áåç äîïîëíèòå- ìûå ñòðóêòóðû êîòîðûõ ïðèâåäåíû íà ðèñ. 1. Äàííûé
ëüíîé ïðîáîïîäãîòîâêè. Ïîäîáíûé ïîäõîä ïðèìåíÿëè âûáîð îáúÿñíÿåòñÿ âûñîêîé ãèäðîôèëüíîñòüþ ýòèõ
äëÿ âñåõ ðàáîò, âêëþ÷àþùèõ ÒÔÝ. ôîðì (è, â ïåðâóþ î÷åðåäü — ìåòàáîëèòà II). Ìåíü-
7. ÒÔÝ. Àíèîíîîáìåííûé ïàòðîí Sampli Q Silica øàÿ ãèäðîôèëüíîñòü ïîäàâëÿþùåãî áîëüøèíñòâà ìå-
SAX (200 ìã, 3 ìë, Agilent) êîíäèöèîíèðîâàëè ôîñ- òàáîëèòîâ äðóãèõ ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ
ôàòíûì áóôåðîì (6 ìë, 10 ìÌ, pH 8.6). ê 1 ìë ìî÷è ïîçâîëÿåò ñ óâåðåííîñòüþ ïðåäïîëîæèòü òî, ÷òî èõ
äîáàâëÿëè 2 ìë áóôåðà è íàíîñèëè íà ïàòðîí. Ïîñëå ñòåïåíè ýêñòðàêöèè áóäóò áîëüøèìè, íåæåëè ó äâóõ
ïðîìûâêè ñîðáåíòà (2 ìë áóôåðà) è âûñóøèâàíèÿ ïî- âûáðàííûõ òåñòîâûõ ñîåäèíåíèé.
òîêîì âîçäóõà (1 ìèí) êîìïîíåíòû ïðîáû ýëþèðîâà- Âûáîð ìåòîäà âíåøíåãî ñòàíäàðòà äëÿ îöåíêè ñòå-
ëè ðàñòâîðîì îðòîôîñôîðíîé êèñëîòû (3 ìë, ïåíåé ýêñòðàêöèè îáúÿñíÿåòñÿ ðàçíîîáðàçèåì ñïîñî-
0.2 îá.%). Ýëþàò ââîäèëè â õðîìàòîãðàô. áîâ ïðîáîïîäãîòîâêè. Ïîëó÷åííûå ñòåïåíè ýêñòðàê-
8. Ìåòîä (7) ïîâòîðÿëè, ñìåíÿÿ ôîñôàòíûé áóôåð öèè ïðèâåäåíû â òàáëèöå.
íà âîäó. Ìåòîä àíàëèçà, âêëþ÷àþùèé ââåäåíèå â õðîìà-
òîãðàô ìî÷è, ïðîøåäøåé ìèíèìàëüíóþ ïðîáîïîäãî-
2. ÂÝÆÕ-ÌÑ/ÌÑ òîâêó (öåíòðèôóãèðîâàíèå, ôèëüòðîâàíèå, ðàçâåäåíèå
 äàííîé ðàáîòå ïðèìåíÿëè ìîäóëüíûé æèäêîñò- æèäêîñòíî-õðîìàòîãðàôè÷åñêèìè ôàçàìè A èëè B)
íûé õðîìàòîãðàô Nexera XR, ñîåäèíåííûé ñ òàíäåì- òðåáóåò îáÿçàòåëüíîãî íàëè÷èÿ êðàíà, îáåñïå÷èâàþ-
íûì ìàññ-ñïåêòðîìåòðîì òèïà «òðîéíîé êâàäðóïîëü» ùåãî ñáðîñ ÷àñòè ýëþåíòà íà íà÷àëüíîì ó÷àñòêå õðî-
LCMS-8040 (Shimadzu). Ââîäèìûå ñìåñè (5 ìêë) ìàòîãðàììû, âêëþ÷àþùåãî ìåðòâûé îáúåì êîëîíêè.
ðàçäåëÿëè ñ ïîìîùüþ êîëîíêè Shim-pack FC-ODS Ïîñêîëüêó äàííûé ìåòîä ïðèâîäèò ê ñîêðàùåíèþ
(2 ìì × 150 ìì, 3 ìêì), òåðìîñòàòèðîâàííîé ïðè ñðîêà ñëóæáû õðîìàòîãðàôè÷åñêèõ êîëîíîê, åãî ïðè-
40°C. Ýëþèðîâàíèå êîìïîíåíòîâ ñìåñåé ïðîâîäèëè ìåíåíèå â ðóòèííîì àíàëèçå íåæåëàòåëüíî, õîòÿ
áèíàðíûì ýëþåíòîì, ñîñòîÿùèì èç ôàç A (0.3 îá. % óäîáíî ïðè ðàçðàáîòêå ñïîñîáîâ ïðîáîïîäãîòîâêè.
ìóðàâüèíîé êèñëîòû â âîäå) è B (àöåòîíèòðèë) ñî- Ìåòîä èçâëå÷åíèÿ àíàëèòîâ àöåòîíèòðèëîì èç âî-
ãëàñíî ñëåäóþùåé ïðîãðàììå: 10% ôàçû B (1 ìèí); äíî-ñîëåâûõ ðàñòâîðîâ (ê êîòîðûì ñëåäóåò îòíåñòè è
ëèíåéíûé ãðàäèåíò äî 90% B (14 ìèí); ñîõðàíåíèå ìî÷ó) áàçèðóåòñÿ íà ìàëîé ðàñòâîðèìîñòè â àöåòî-
ñîñòàâà (10 ìèí). Ñêîðîñòü ïîäâèæíîé ôàçû áûëà íèòðèëå ïîäàâëÿþùåãî ÷èñëà íåîðãàíè÷åñêèõ ñîëåé è
0.3 ìë/ìèí, îáúåì ââîäèìîé ïðîáû 5 ìêë. íàèáîëåå ãèäðîôèëüíûõ îðãàíè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé
Ìàññ-ñïåêòðîìåòð êîíôèãóðèðîâàëè äëÿ ðàáîòû â ðå- (â òîì ÷èñëå, óãëåâîäîâ). Ïðîñòîòà è çíà÷èòåëüíàÿ
æèìå ýëåêòðîðàñïûëèòåëüíîé èîíèçàöèè (ESI) è ýêñïðåññíîñòü äàííîãî ìåòîäà äåëàåò åãî ÷ðåçâû÷àé-
â ñëåäóþùèõ óñëîâèÿõ: ñêîðîñòè ïîòîêîâ ãàçà-ðàñïû- íî óäîáíûì äëÿ ïðèìåíåíèÿ â îáëàñòè ñêðèíèíãîâîãî
ëèòåëÿ è îñóøàþùåãî ãàçà (àçîò) 1.5 è 10 ë/ìèí, ñîîò- àíàëèçà ìî÷è ìåòîäîì ÆÕ-ÌÑ [10], à çíà÷èòåëüíîå
âåòñòâåííî; òåìïåðàòóðû ëèíèè äåñîëüâàòàöèè è íàãðå- óìåíüøåíèå ñîäåðæàíèÿ ñîëåé â ðàñòâîðå, ââîäèìîì
âàòåëüíîãî áëîêà 250 è 300°C, ñîîòâåòñòâåííî; íàïðÿ- â õðîìàòîãðàô, ïîçâîëÿåò ñíèçèòü õèìè÷åñêóþ íà-
æåíèå íà èíòåðôåéñå 4.5 êÂ, äàâëåíèå ãàçà äëÿ ÿ÷åéêè ãðóçêó íà ÕÌÑ ñèñòåìû. ê íåäîñòàòêàì èçâëå÷åíèÿ
ñîóäàðåíèé (àðãîí) 230 êÏà. â êà÷åñòâå àíàëèòè÷åñêî- àöåòîíèòðèëîì ñëåäóåò îòíåñòè åãî ìàëóþ ïðèãîä-
ãî îòêëèêà ïðèìåíÿëè ïëîùàäè ïèêîâ, èçìåðÿåìûå ïðè íîñòü äëÿ êîíöåíòðèðîâàíèÿ àíàëèòîâ, âûçâàííóþ íå-
ðåãèñòðàöèè ñïåêòðîâ èîíîâ-ïðîäóêòîâ ñ ýíåðãèåé ñîó- îáõîäèìîñòüþ ïîääåðæèâàíèÿ çíà÷èòåëüíîãî ïðåâû-
äàðåíèé 22 Â. øåíèÿ îáúåìà äîáàâëÿåìîãî àöåòîíèòðèëà íàä îáúå-
Òàáëèöà
Ñòåïåíè ýêñòðàêöèè (èçâëå÷åíèÿ), %, ìåòàáîëèòîâ I è II
(ì/ï — ìèíèìàëüíàÿ ïðîáîïîäãîòîâêà, CH3CN — èçâëå÷åíèå àöåòîíèòðèëîì)
Ìåòàáîëèò Ìåòîäû ïðîáîïîäãîòîâêè
ì/ï CH3CN ÆÆÝ ÒÔÝ
1 2 3 4 5 6 7 8
I 100 42 69 15 82 99 21 50
II 100 7 59 4 37 96 10 59

ISSN 1682—8313 79
ËÀÁÎÐÀÒÎÐÍÀß ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÀ

ìîì èñõîäíîãî îáðàçöà ìî÷è. Äëÿ ðàññìàòðèâàåìûõ â êà÷åñòâå ýêñòðàãåíòà ñëåäóåò ïðèçíàòü íåæåëàòåëü-
ñîåäèíåíèé ïðèåìëåìûå ñòåïåíè èçâëå÷åíèÿ äîñòèãà- íûì.
þòñÿ ïðè ïîäêèñëåíèè âîäíîé ôàçû (ìåòîä 3). Òåì Òâåðäîôàçíàÿ ýêñòðàêöèÿ ñ ïðèìåíåíèåì ãèäðî-
íå ìåíåå, â ñëó÷àå ïðèìåíåíèÿ ìåòîäà 3 äëÿ îáùåãî ôîáíîãî ìåõàíèçìà óäåðæèâàíèÿ (ìåòîä 6) ïîçâîëÿåò
ñêðèíèíãîâîãî àíàëèçà ñëåäóåò ó÷åñòü, ÷òî ñòåïåíü ïîëó÷àòü êîëè÷åñòâåííûå ðåçóëüòàòû äàæå äëÿ íàè-
èçâëå÷åíèÿ ãèäðîôèëüíûõ àíàëèòîâ êàòèîííîãî õà- áîëåå ãèäðîôèëüíîãî ìåòàáîëèòà II. Ìåòàáîëèòû I è
ðàêòåðà ìîæåò áûòü ñíèæåííîé, è ïîýòîìó ìåòîä 2 II íå áûëè íàéäåíû íè â îäíîì èç ðàñòâîðîâ, ïðîøåä-
(îòêàç îò ïîäêèñëåíèÿ) ñëåäóåò ñ÷èòàòü äîïóñòèìûì øèõ ÷åðåç ïàòðîí (êðîìå ýëþèðóþùåãî). Òàêæå ñëå-
êîìïðîìèññîì. äóåò îòìåòèòü, ÷òî äàííûé ìåòîä ïîçâîëÿåò êîíöåíò-
Êëàññè÷åñêàÿ æèäêîñòíî-æèäêîñòíàÿ ýêñòðàêöèÿ ðèðîâàòü êîìïîíåíòû îáðàçöà, äîáèâàÿñü ñíèæåíèÿ
(ìåòîäû 4 è 5) âïîëíå ïðèãîäíà äëÿ îïðåäåëåíèÿ ïðåäåëîâ îáíàðóæåíèÿ. Äîïîëíèòåëüíûì ïðåèìóùå-
ãëþêóðîíèäîâ ïðè óñëîâèè ïðèìåíåíèÿ ýòèëàöåòàòà è ñòâîì îáðàùåííî-ôàçîâîé ÒÔÝ ÿâëÿåòñÿ ñîõðàíåíèå
âûïîëíåíèÿ ïîñëåäîâàòåëüíûõ ýêñòðàêöèîííûõ ïðî- ñðîêà ñëóæáû ðàçäåëèòåëüíîé êîëîíêè áëàãîäàðÿ
öåäóð ïðè íåîáõîäèìîñòè ïîëó÷åíèÿ êîëè÷åñòâåííûõ èçúÿòèþ ïàòðîíîì íåîáðàòèìî ñîðáèðóþùèõñÿ ñîå-
ðåçóëüòàòîâ äëÿ íàèáîëåå ãèäðîôèëüíûõ àíàëèòîâ, äèíåíèé èç àíàëèçèðóåìûõ îáðàçöîâ.
ïîäîáíûõ II. Ó÷èòûâàÿ ìàëóþ âåðîÿòíîñòü ïîÿâëåíèÿ Ïðèìåíåíèå èîíîîáìåííûõ ìåõàíèçìîâ óäåðæè-
ïîäîáíûõ çàäà÷, ìåòîä ÆÆÝ ñëåäóåò ñ÷èòàòü ïðè- âàíèÿ îáû÷íî ïîçâîëÿåò ïîëó÷àòü âåñüìà ÷èñòûå ýê-
ãîäíûì, ïî êðàéíåé ìåðå, äëÿ ïðèìåíåíèÿ â ñêðèíèí- ñòðàêòû çà ñ÷åò îòäåëåíèÿ àíàëèòîâ îò áîëüøåé ÷àñòè
ãîâîì àíàëèçå è, â îñîáåííîñòè, ïðè íåîáõîäèìîñòè íåèîíîãåííûõ ìàòðè÷íûõ ñîåäèíåíèé. ê ñîæàëåíèþ,
êîíöåíòðèðîâàíèÿ êîìïîíåíòîâ îáðàçöà. Ïðèìåíåíèå â íàøåì ñëó÷àå ïîïûòêó èñïîëüçîâàíèÿ àíèîíîîáìåí-
õëîðîôîðìà (è, ïî-âèäèìîìó, ñìåñåé íà åãî îñíîâå) íûõ ïàòðîíîâ äëÿ êîíöåíòðèðîâàíèÿ ìåòàáîëèòîâ I è
II (ìåòîäû 7 è 8) ñëåäóåò ïðèçíàòü íåóäà÷íîé èç-çà
ìàëîé îáìåííîé åìêîñòè ñîðáåíòà. Ïðèñóòñòâèå çíà-
÷èòåëüíûõ ñîäåðæàíèé îáîèõ ìåòàáîëèòîâ îáíàðóæè-
ëè âî âñåõ ðàñòâîðàõ, ïðîøåäøèõ ÷åðåç ïàòðîí. Ïî-
âûøåíèÿ ñòåïåíè ýêñòðàêöèè óäàâàëîñü äîáèòüñÿ
ëèøü ïðåäåëüíî âîçìîæíûì ñíèæåíèåì èîííîé ñèëû
çàãðóæàåìîãî ðàñòâîðà (ìåòîä 8), ÷òî ëèøàåò àíàëè-
òèêà âîçìîæíîñòè ïîääåðæèâàíèÿ ïîñòîÿíñòâà óñëî-
âèé ïðè ÒÔÝ è, ñëåäîâàòåëüíî, íå ïîçâîëÿåò ðàçðà-
áàòûâàòü ïðàêòè÷åñêè çíà÷èìûå ìåòîäèêè.
2. Îñîáåííîñòè ïîâåäåíèÿ
ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ ìåòàáîëèòîâ
â óñëîâèÿõ ýëåêòðîðàñïûëèòåëüíîé èîíèçàöèè
Íàìè áûëî ðàññìîòðåíî ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ ïîâåäå-
íèå çíà÷èòåëüíîãî ÷èñëà ìåòàáîëèòîâ ñèíòåòè÷åñêèõ
êàííàáèìèìåòèêîâ, ðàñïðîñòðàíÿâøèõñÿ â òå÷åíèå
ïîñëåäíèõ òðåõ ëåò è ÿâëÿþùèõñÿ ñëîæíûìè ýôèðàìè
ãëþêóðîíîâîé êèñëîòû (GA). â ÷àñòè èõ èîíèçàöèè
ïðè óñëîâèÿõ ESI (íåñìîòðÿ íà íåêîòîðûå èñêëþ÷å-
íèÿ) èõ ïîâåäåíèå ïîäîáíî è ìîæåò áûòü ðàññìîòðå-
íî íà ïðèìåðå ìåòàáîëèòà I.
Ïîäîáíî äðóãèì ñëîæíûì ýôèðàì [10], ýôèðû
ãëþêóðîíîâîé êèñëîòû ïîäâåðæåíû ôðàãìåíòàöèè
â ESI èñòî÷íèêå (ðèñ. 2À), ïðè÷åì ýòîò ïðîöåññ,
ïî-âèäèìîìó, èìååò ãèäðîëèòè÷åñêóþ ïðèðîäó. Ñòå-
ïåíü äåñòðóêöèè îïðåäåëÿåòñÿ ñòðóêòóðîé ìåòàáîëèòà
è óñëîâèÿìè ESI.
Êàê ïðàâèëî, â ðåæèìå ÌÑ èíòåíñèâíîñòü ïèêîâ
ïîëîæèòåëüíûõ èîíîâ (ïðîòîíèðîâàííûõ ìîëåêóë)
Ðèñ. 2. Ôðàãìåíòû èîí-õðîìàòîãðàìì (ÌÑ) îáðàçöà ìî÷è ñ ìåòàáî-
ëèòàìè PB-22F. Ñðàâíåíèå èíòåíñèâíîñòè ïèêà ìåòàáîëèòà I, ïîëî-
îêàçûâàåòñÿ çíà÷èòåëüíî áîëüøå, íåæåëè èíòåíñèâ-
æèòåëüíûé è îòðèöàòåëüíûé ðåæèì, è ïðîäóêòà åãî ôðàãìåíòàöèè íîñòü ïèêîâ îòðèöàòåëüíûõ èîíîâ (äåïðîòîíèðîâàí-
â èñòî÷íèêå, ïîëîæèòåëüíûé ðåæèì (À). Ñðàâíåíèå èíòåíñèâíîñòè íûõ ìîëåêóë). Ñîãëàñíî ðèñ. 2À, ñóììà èíòåíñèâíî-
ïèêà ïðîòîíèðîâàííîé ìîëåêóëû è Na-àääóêòà ìåòàáîëèòà I (Á). ñòåé ïèêîâ èîíîâ, m/z 250 è 426, áîëüøå, ÷åì
80
ÍÀÐÊÎËÎÃÈß. 2015. ¹9

m/z 424. Äëÿ íåêîòîðûõ èç ðàññìîòðåííûõ ãëþêóðî- íîì äåêîíúþãèðîâàíèè. Ýòî çàòðóäíåíèå ìîæåò áûòü
íèäîâ, ñòåïåíü äåñòðóêöèè êîòîðûõ ìåíüøå, ÷åì äëÿ óïðîùåíî âûáîðîì áîëåå äîðîãîãî (è áîëåå äëèòåëü-
ìåòàáîëèòà I, èíòåíñèâíîñòè [M+H]+ > [M-H]-. íîãî) ôåðìåíòàòèâíîãî äåêîíúþãèðîâàíèÿ, âûïîëíÿå-
Ýòîò ðåçóëüòàò, â ÷àñòíîñòè, îáúÿñíÿåòñÿ ïðèìåíåíè- ìîãî â ïðèñóòñòâèè ðàçíîîáðàçíûõ b-ãëþêóðîíèäàç.
åì êèñëîãî ýëþåíòà (pH ôàçû A îêîëî 2). Ôðàãìåí- Îäíàêî — ó÷èòûâàÿ âîçìîæíîñòè ìåòîäà
òàöèþ ãëþêóðîíèäîâ â èñòî÷íèêå ïðè îòðèöàòåëüíîé ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ — ïðÿìîå îïðåäåëåíèå ãëþêóðîíèäîâ
ESI íå îòìå÷àëè. ïîçâîëÿåò óïðîñòèòü àíàëèç, ñâîäÿ åãî ê óïðîùåííîé
Îòíîñèòåëüíàÿ èíòåíñèâíîñòü ïèêîâ èîíîâ-àääóê- ïðîáîïîäãîòîâêå è ðåãèñòðàöèè òîëüêî îäíîé õðîìà-
òîâ, îáðàçîâàííûõ ìîëåêóëàìè ãëþêóðîíèäîâ è èîíà- òîãðàììû, ôðàãìåíòû êîòîðîé ïðèâåäåíû íà ðèñ. 2.
ìè íàòðèÿ âàðüèðóåòñÿ â øèðîêèõ ïðåäåëàõ è ìàëî çà- Ñëåäóåò òàêæå îòìåòèòü, ÷òî îáíàðóæåíèå ìåòàáîëè-
âèñèò îò äîáàâîê ôîðìèàòà àììîíèÿ (2 ìÌ). Äëÿ ìå- òîâ ôàçû I íàðÿäó ñ èõ ãëþêóðîíèäèðîâàííûìè ôîð-
òàáîëèòà I èíòåíñèâíîñòè ïèêîâ Na-àääóêòà è ïðîòî- ìàìè ïîâûøàåò äîñòîâåðíîñòü àíàëèòè÷åñêèõ çàêëþ-
íèðîâàííîé ìîëåêóëû ñîïîñòàâèìû (ðèñ. 2Á). ÷åíèé.
Èòîãîâûé âûáîð ïîëÿðíîñòè èîíèçàöèè è ïðîèñ- ÌÑ/ÌÑ ñïåêòðû ìåòàáîëèòà I ïîëó÷åííûå äëÿ
õîæäåíèÿ èîíà-ïðåäøåñòâåííèêà (ìîëåêóëû ãëþêó- èîíîâ-ïðåäøåñòâåííèêîâ, m/z 426 ([M+H]+),
ðîíèäà èëè ïðîäóêòà åå äåñòðóêöèè) ÿâëÿåòñÿ êîìï-
ðîìèññîì ìåæäó äîñòèæåíèåì ìàêñèìàëüíîé ÷óâñò- è m/z, 250 ([M+H+H2O-GA]+), ïðèâåäåíû
âèòåëüíîñòè è ìèíèìèçàöèè ìàòðè÷íûõ âëèÿíèé. íà ðèñ. 3. Ôðàãìåíòàöèÿ I ïðîòåêàåò ñ ñîõðàíåíèåì
çàðÿäà íà èíäîëüíîì îñòàòêå è ñâîäèòñÿ, â îñíîâ-
Ïðè àíàëèçå áèîîáðàçöîâ, ñîáðàííûõ ó ïåðñîí, íîì, ê ðàçðûâó ñâÿçåé ñëîæíîýôèðíîé ãðóïïû (èí-
ïðèíèìàâøèõ ñîåäèíåíèÿ, ïîäîáíûõ PB-22F (ò.å.
èìåþùèõ äâà äîñòàòî÷íî òÿæåëûõ îñòàòêà, ðàçäåëåí- òåíñèâíûå ïèêè èîíîâ, m/z 250 è 232); ñëåäóåò îò-
íûõ ñëîæíîýôèðíîé ãðóïïîé, ëåãêî îìûëÿåìîé ìåòèòü, ÷òî ýòè íàïðàâëåíèÿ ôðàãìåíòàöèè òèïè÷íû
â óñëîâèÿõ ÷åëîâå÷åñêîãî îðãàíèçìà) ñóùåñòâóåò èç- äëÿ îáñóæäàåìûõ ñîåäèíåíèé. Äëÿ ÌÑ/ÌÑ ñïåêò-
âåñòíîå çàòðóäíåíèå. Îíî âûðàæàþòñÿ â íåîáõîäè- ðà èîíà-ïðîäóêòà ôðàãìåíòàöèè ìåòàáîëèòà I â èñ-
ìîñòè âûÿñíåíèÿ ñòðóêòóð îáîèõ îñòàòêîâ è îñëîæíå- òî÷íèêå (ÿâëÿþùåãîñÿ òàêæå ïðîòîíèðîâàííîé ìî-
íî òåì, ÷òî îáå ìîëåêóëû, îáðàçóþùèåñÿ ïðè îìûëå- ëåêóëîé ñîîòâåòñòâóþùåãî ìåòàáîëèòà ôàçû I) õà-
íèè, ïðèîáðåòàþò ðàçíûå ôóíêöèîíàëüíûå ãðóïïû. ðàêòåðíî íàëè÷èå èîíîâ, îáðàçóþùèõñÿ â ðåçóëüòàòå
Ñëåäñòâèåì ýòîãî ÿâëÿåòñÿ ðàçíûé õèìè÷åñêèé õà- ïîñëåäîâàòåëüíîãî ýëèìèíèðîâàíèÿ áîêîâîé öåïè,
ðàêòåð ñâÿçåé, îáðàçóþùèõñÿ ïðè êîíúþãèðîâàíèè à òàêæå ðàçðóøåíèÿ ñâÿçåé êàðáîêñèëüíîé ãðóïïû;
ýòèõ ìîëåêóë ãëþêóðîíîâîé êèñëîòîé (ðèñ. 1), ÷òî ïðè÷åì èíòåíñèâíûé èîí, m/z 118, ñîîòâåòñòâóåò
òðåáóåò ïðèìåíåíèÿ ðàçíûõ ìåòîäîâ ïðè ìèíåðàëü- ïðîòîíèðîâàííîìó èíäîëó.

Ðèñ. 3. ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ ñïåêòðû (ESI+) ìåòàáîëèòà I (À) è ïðîäóêòà åãî ôðàãìåíòàöèè â èñòî÷íèêå (Á)

ISSN 1682—8313 81
ËÀÁÎÐÀÒÎÐÍÀß ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÀ

Çàêëþ÷åíèå http://www.emcdda.europa.eu/
attachements.cfm/att_239505_EN_TDAT15001ENN.pdf (ac-
Îïðåäåëåíèå ãëþêóðîíèäèðîâàííûõ ìåòàáîëèòîâ cessed 9.06.2015).
ñèíòåòè÷åñêèõ êàííàáèìèìåòèêîâ ìåòîäîì 2. Cottencin O., Rolland B., Karila L. New designer drugs
(synthetic cannabinoids and synthetic cathinones): review of literature
ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ ïîçâîëÿåò óïðîñòèòü ïðîöåññ ïîäãî- // Curr. Pharm. Des. — 2014. — Vol. 19. — P. 1-6.
òîâêè ïðîá, ïðè îòêàçå îò ïðîâåäåíèÿ äåêîíúþãèðî- 3. Zawilska J.B., Wojcieszak J. Spice/K2 drugs-more than in-
âàíèÿ. Íåäîñòàòêîì ïîäîáíîãî âàðèàíòà àíàëèçà ñëå- nocent substitutes for marijuana // Int. J. Neuropsychopharmacol.
äóåò ñ÷èòàòü íåêîòîðîå ñíèæåíèå ÷óâñòâèòåëüíîñòè, — 2014. — Vol. 17. — P. 509-525.
4. Zhang Q., Ma P., Cole R.B., Wang G. Identification of in
îáóñëîâëåííîå ñóùåñòâîâàíèåì àíàëèòà â äâóõ ôîð- vitro metabolites of JWH-015, an aminoalkylindole agonist for the
ìàõ — êîíúþãèðîâàííîé è äåêîíúþãèðîâàííîé. Ýòî peripheral cannabinoid receptor (CB2) by HPLC-MS/MS //
ñíèæåíèå âïîëíå ìîæåò áûòü êîìïåíñèðîâàíî ïåðå- Anal. Bioanal. Chem. — 2006. — Vol. 386. — P. 1345-1355.
5. Grigoryev A., Melnik A., Savchuk S., Simonov A.,
õîäîì ê ðåãèñòðàöèè ìíîæåñòâåííûõ ðåàêöèé Rozhanets V. Gas and liquid chromatography-mass spectrometry
(MRM). Ïðè ïðîâåäåíèè ñêðèíèíãîâîãî àíàëèçà studies on the metabolism of synthetic phenylacetylindole
íàèáîëåå ïðèãîäíûì âàðèàíòîì ïðîáîïîäãîòîâêè ÿâ- cannabimimetic JWH-250, psychoactive components of smoking
ëÿåòñÿ èçâëå÷åíèå àöåòîíèòðèëîì áåç êîððåêöèè êèñ- mixtures // J. Chromatogr. B. — 2011. — Vol. 879. —
P. 2519-2526.
ëîòíîñòè îáðàáàòûâàåìîãî îáðàçöà; ïðè íåîáõîäèìî- 6. Chimalakonda K.C., Bratton S.M., Vi-Huyen Le, Kan Hui
ñòè êîíöåíòðèðîâàíèÿ ãëþêóðîíèäîâ ñëåäóåò âîñïî- Yiew, Dineva A., Moran C.L., James L.P., Moran J.H.,
ëüçîâàòüñÿ æèäêîñòíî-æèäêîñòíîé ýêñòðàêöèåé ýòè- Radominska-Pandya A. Conjugation of Synthetic Cannabinoids
ëàöåòàòîì èëè òâåðäîôàçíîé ýêñòðàêöèåé ñ ïðèìåíå- JWH-018 and JWH-073, Metabolites by Human
UDP-Glucuronosyltransferases // Drug Metab. Dispos. — 2011.
íèåì îáðàùåííî-ôàçîâûõ ïàòðîíîâ. — Vol. 39. — P. 1967-1976.
Ïðè îïðåäåëåíèè ãëþêóðîíèäîâ ìåòîäîì 7. Wohlfarth A., Gandhi A.S., Pang S., Zhu M., Scheidweiler
ÆÕ-ÌÑ/ÌÑ è èîíèçàöèåé â ýëåêòðîñïðåå íàèëó÷- K.B., Huestis M.A. Metabolism of synthetic cannabinoids PB-22
and its 5-fluoro analog, 5F-PB-22, by human hepatocyte incubation
øóþ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü ðåæèì ðå- and high-resolution mass spectrometry // Anal. Bioanal. Chem. —
ãèñòðàöèè ïîëîæèòåëüíûõ èîíîâ ïðè óñëîâèè èñïîëü- 2014. — Vol. 406. P. 1763-1780.
çîâàíèÿ êèñëûõ (pH<3) ýëþåíòîâ, õîòÿ âûáîð ñïî- 8. Shipkova M., Armstrong V.W., Oellerich M., Wieland E.
ñîáà ðåãèñòðàöèè (ïðîèñõîæäåíèå èîíà-ïðåäøåñòâåí- Acyl Glucuronide Drug Metabolites: Toxicological and Analytical
Implications // Ther. Drug. Monit. — 2003. — Vol. 25. —
íèêà è åãî ïîëÿðíîñòü) äîëæåí îïðåäåëÿòüñÿ õàðàêòå- P. 1-16.
ðèñòèêàìè îáðàçöà. 9. Bolze S., Lacombe O., Durand G., Chaimbault P.,
Massiere F., Gay-Feutry C., Bromet N., Hulot T. Standardization
of a LC/MS/MS Method for the Determination of Acyl
Glucuronides and Their Isomers // Curr. Sep. — 2002. —
Vol. 20. — P. 55-59.
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû 10. Maurer H., Wissenbach D.K., Weber A.A. LC-MCn Li-
1. European Monitoring Centre for Drug and Drug Addiction. brary of Drugs, Poisons, and Their Metabolites. Wiley-VCH
European Drug Report 2015. Trends and Developments. Website: KgGA. 2014.

FEATURES OF GLUCURONIDATED METABOLITES OF THE SYNTHETIC CANNABIMIMETICS


DETECTION IN URINE BY LC-MC
ZAIKINA O.L.1, KIND A.V.2, GRINSHTEJN I.L.2, GRIGORYEV A.M.3
1
— Narcological hospital of Leningrad region. 188661 Leningrad region, Vsevolozhskiy area, Novoe devyatkino village 19/1
2
— Analit Products Ltd. 199106 St. Peterburg, V.O., line 26, 15/2, office 9.08
3
— Bureau of Forensic-Medical Expertise’s, Forensic-Chemical Division. 129110 Moscow, Shchepkina str, 61/2, corp. 8

In most cases, the screening of drugs in urine assumes carrying out time-consuming sample preparation. This procedure is considered necessary when
establishing the intake of drugs undergoing extensive metabolism including conjugation. This feature is typical for synthetic cannabimimetic family: for
detection of their metabolites the mineral or enzyme de-conjugation is usually assumed. The LC-MS detection of conjugates allows to skip this step. This
article contains the comparison of several methods for extraction of glucuronidated metabolites of synthetic cannabimimetics. It is found that extraction
of metabolites with acetonitrile or by reversed phase cartridges was most reliable, and advantage of the first method is simplicity of performance,
and of the second — possibility to concentrate analytes. At LC-MS method development, the highest sensitivity was achieved with applying of positive mo-
de electrospray ionization with elution of analytes by acid mobile phases. As glucuronidated metabolites undergo partial fragmentation in electrospray,
the choice of ion-precursors was determined by degree of analytes decomposition and matrix effects.
Key words: synthetic cannabimimetics, cannabinoids, sample preparation, metabolites, glucuronides, LC-MS/MS

82