Методика выделения химических фракций органического вещества

По Бельчиковой и Кононовой с гравиметрическим окончанием

Гравиметрический (весовой) метод
Первый этап – подготовка образца к анализу, подготовка необходимого
оборудования. Исследуемые образцы вручную отделяют от крупных растительных
остатков корней и иной растительной массы (для торфа), затем растирают и переносят на
сито диаметром 0,25 мм.
Навеска необходимая для проведения анализа – 5 г, для жидких образцов –
аликвота раствора для выделения фракций гуминовых кислот 25-50 мл в емкость для
осаждения
Растворы необходимые для проведения анализа;
Щелочной раствор пирофосфата натрия (44.6 г Na4P2O7 + 4 г NaOH/1000 мл)
Раствор 1 Н серной кислоты 28 мл H2SO4 p-1.86/1000 мл
Раствор 0,1Н серной кислоты 2,8 мл H2SO4 p-1.86/1000 мл
Второй этап (для образцов торфа/твердых удобрений) экстракция гуминовых
вещества приготовленным раствором пирофосфата натрия (44.6 г Na4P2O7 + 4 г
NaOH/1000 мл) соотношение навеска/раствор 1:20; или 5г к 100 мл раствора, время
экспозиции 16-24 ч, навеска должна быть полностью смочена, не размазана по стенкам
колбы. На следующий день – фильтрация складчатым фильтром, заранее взвешенным с
точностью до 0.01 г (синяя лента/красная лента). Далее осадок переносят в сливную
ёмкость и центрифугируют, приносят в фарфоровую чашу и высушивают в термостате
при Т=80°. Массу осадка взвешивают с точностью до 0.01 г
Третий этап – выделение фракций гуминовых кислот;
25 мл фильтрата пирофосфатной вытяжки переносят в емкость для осаждения – рН
вытяжки доводят до значения 1 ед рН добавляя в раствор 25-30 мл (1Н) H2SO4 емкость
переносят на 30-60 мин (в зависимости от интенсивности выделения и количества осадка)
в сушильный шкаф T°=60-80°. По истечении заданного времени осадок необходимо
отделить от кислого раствора, для этого используют бумажные фильтры синяя/красная
лента, предварительно смоченные раствором 0,1 Н H2SO4 и завешанные на весах с
точностью до 0.01 г либо используют центрифугирование. Осадок необходимо перенести
на фильтр и промывать раствором 0.1Н H2SO4 (2.8 мл/1000мл) до тех пор, пока фильтрат,
капающий в емкость для приема кислого раствора, не станет прозрачным. На технических
весах с точностью до 0.01 завешивают емкость для сушки (фарфоровая или стеклянная
чашка), далее фильтр сушат и завешивают на весах с точностью до 0.01.
Для насыпных образцов массу Гк выражают в % от массы исходной навески
Для жидких образцов массу Гк выражают в г/л исходного раствора
Массу Фульвокислот находят разностным методом по формуле:
Мфк=Н −( Мгк + Мгум)
Где: Н – масса навески (г); Мфк – масса фульвокислот (г) Мгк – масса гуминовых кислот
(г); Мгум – масса негидролизуемого осадка (г)
Допускаемые относительные отклонения от аттестованного значения стандартного
образца для двусторонней доверительной вероятности 0,95 составляют;
При массовой доле органических веществ до 3 % - ± 20%
При массовой доле органических веществ до 3 -5 % - ± 15%
При массовой доле органических веществ 15 и более % - ± 10 %

Страница 1 из 5
 5.1 Определение массовой доли гуминовых кислот
Проводят согласно гравиметрическому (весовому) методу по М.М. Кононовой и
Н.П. Бельчиковой в модификации.
Сущность метода:
С помощью метода определяют три основные группы гумусовых веществ:
гуминовые кислоты, фульвокислоты и нерастворимый остаток гумусовых веществ.
Извлекают гумусовые вещества смесью раствора пирофосфата натрия и щелочи.
Применение пирофосфата натрия для выделения гумусовых веществ из почв
основано на способности растворов этих солей к образованию нерастворимых осадков
или растворимых комплексов с кальцием, железом, алюминием и некоторыми другими
поливалентными катионами, с которыми связаны в почве гумусовые вещества.
Необходимые реактивы:
1) Свежеприготовленный щелочной раствор пирофосфата натрия (44,6 г
Na4P2O7×10 Н2О + 4,0 г NaOH / 1000 мл). Концентрация пирофосфата натрия - 0,1 М,
концентрация NaOH - 0,1 Н, рН смеси - 13,0.
2) Раствор 1,0 Н серной кислоты (28,0 мл H2SO4 плотность 1,86 / 1000 мл).
3) Раствор 0,1 Н серной кислоты (2,8 мл H2SO4 плотность 1,86 / 1000 мл).
Извлечение гумусовых веществ из образца:
Подготовленный образец весом 5,0 г переносят в коническую колбу на 250 мл и
заливают 100,0 мл свежеприготовленным щелочным раствором пирофосфата натрия
(соотношение навеска образца : раствор 1:20). Навеска образца должна быть полностью
смочена щелочным раствором пирофосфата натрия.
Колбу плотно закрывают резиновой пробкой для изоляции от углекислого газа
воздуха, содержимое ее тщательно перемешивают, избегая размазывания образца по
стенкам, и оставляют на 24 часа.
Затем раствор вместе с образцом тщательно перемешивают в колбе и переносят в
воронку с простым бумажным складчатым фильтром диаметром 15-17 см, вставленным в
конус из плотного фильтра (синяя лента или красная лента) диаметром 7-9 см. Фильтр
должен быть сухим и заранее взвешенным с точностью до 0,01 г.
Если раствор при фильтровании получается мутным, его снова переносят на
фильтр. Когда начинает фильтроваться прозрачный раствор, его собирают в сухую
приемную колбу.
Далее осадок переносят в фарфоровую чашу и высушивают в термостате при
температуре 80 °С до постоянной массы.
Страница 2 из 5
 Массу осадка взвешивают с точностью до 0,01 г.
Выделение фракций гуминовых кислот:
25,0 мл фильтрата пирофосфатной вытяжки переносят в емкость для осаждения
(химический стакан).
рН вытяжки доводят до значения 1,0, добавляя в раствор, по каплям, при
перемешивании стеклянной палочкой, 25 мл (1 Н.) H2SO4 (28,0 мл H2SO4 плотность 1,86 /
1000 мл). до появления осадка в растворе (происходит кислотная коагуляция геля
гуминовых кислот). Следует избегать избытка H2SO4.
Затем емкость закрывают часовым стеклом и переносят на 30-60 минут (в
зависимости от интенсивности выделения и количества осадка) в сушильный шкаф при
температуре 60-80 °С.
После чего емкость вынимают из сушильного шкафа и оставляют до полного
осаждения на 1-2 часа.
По истечении заданного времени осадок необходимо отделить от кислого раствора,
для этого используют бумажные фильтры (синяя или красная лента), предварительно
смоченные раствором 0,1 Н. H2SO4 и завешанные на весах с точностью до 0,01 г. Из
стакана на фильтр переносят кислый раствор, а затем осадок (гель) гуминовой кислоты.
Осадок переносят на фильтр и промывают холодным раствором 0,1 Н H2SO4 до тех
пор, пока фильтрат, капающий в емкость для приема кислого раствора, не станет
прозрачным.
На технических весах с точностью до 0,01 г взвешивают емкость для сушки
(фарфоровая или стеклянная чашка), далее фильтр с осадком сушат до постоянной массы
при 80 °С и завешивают на весах с точностью до 0,01 г.
Обработка результатов:
Массовую долю гуминовых кислот в образце рассчитывают по формуле:
m1
D гк= ⋅100 % , где
m2

Страница 3 из 5
 m1 – Масса осадка на фильтре (г.)
m2 – Навеска вещества взятая для проведения анализа (г.)

Допускаемые относительные отклонения от аттестованного значения стандартного

образца для двусторонней доверительной вероятности 0,95 составляют:
1) при массовой доле органических веществ до 3,0 % составляют ± 2,00%;
2) при массовой доле органических веществ до 3,0-5,0 % составляют ± 15,0 %;
3) при массовой доле органических веществ 15,0 и более % составляют ± 10,0 %.

5.2 Определение массовой доли фульвокислот

Проводят согласно гравиметрическому (весовому) методу по М.М. Кононовой и
Н.П. Бельчиковой в модификации.
Обработка результатов:
Массовую долю фульфокислот в образце рассчитывают по формуле:
D фк=100−(D гк + D гум), где
Dгк – доля гуминовых кислот (%);
Dгум – доля негидролизуемого осадка (%).
Допускаемые относительные отклонения от аттестованного значения стандартного
образца для двусторонней доверительной вероятности 0,95 составляют:
1) при массовой доле органических веществ до 3,0 % составляют ± 20,0%;
2) при массовой доле органических веществ до 3,0-5,0 % составляют ± 15,0 %;
3) при массовой доле органических веществ 15,0 и более % составляют ± 10,0 %.

Страница 4 из 5
ЖИДКИЙ ОБРАЗЕЦ!

Обработка результатов:
Для жидких образцов массу гуминовых кислот выражают в г/л исходного раствора.
Массовую долю гуминовых кислот в образце рассчитывают по формуле:
m1
D гк= , где
V2
m1 – масса осадка на фильтре (г);
V2 – объём навески, взятой для проведения анализа (л).
Допускаемые относительные отклонения от аттестованного значения стандартного
образца для двусторонней доверительной вероятности 0,95 составляют:
1) при массовой доле органических веществ до 3,0 % составляют ± 2,00%;
2) при массовой доле органических веществ до 3,0-5,0 % составляют ± 15,0 %;
3) при массовой доле органических веществ 15,0 и более % составляют ± 10,0 %.

5.1 Определение массовой доли фульвокислот

Проводят согласно гравиметрическому (весовому) методу по М.М. Кононовой и
Н.П. Бельчиковой в модификации.
Обработка результатов:
Массовую долю фульфокислот в образце рассчитывают по формуле:
D фк=100−(D гк + D гум), где
Dгк – доля гуминовых кислот (г/л);
Dгум – доля негидролизуемого осадка (г/л).
Допускаемые относительные отклонения от аттестованного значения стандартного
образца для двусторонней доверительной вероятности 0,95 составляют:
1) при массовой доле органических веществ до 3,0 % составляют ± 20,0%;
2) при массовой доле органических веществ до 3,0-5,0 % составляют ± 15,0 %;
3) при массовой доле органических веществ 15,0 и более % составляют ± 10,0 %.

Страница 5 из 5