ГОУ ВПО Кировская ГМА

Кафедра микробиологии с вирусологией и иммунологией

Лекция
«Энтеровирусы.
Возбудители
вирусных
гепатитов»

Лектор: к.м.н. Е.И. КОРОТКОВА

 План лекции

1. Общая характеристика пикорнавирусов.

2. Вирус полиомиелита.
3. Вирус гепатита А.
4. Вирус гепатита В.
5. Вирусы гепатитов E, F, D, C, G, TTV и SEN.
 Общая характеристика пикорнавирусов

Таксономия
Семейство: Picornaviridae (от итал. piccolo –
маленький, от англ. rna – РНК)
Род: Enterovirus
Hepatovirus
Rinovirus
Cardiovirus
Aphtovirus
Общая характеристика пикорнавирусов

• Мелкие размеры – 20-30 нм;

• Простое строение («голые») –
отсутствие суперкапсида;
• Геном – несегментированная односпиральная (+) РНК,
связанная с внутренним белком VPg;
• Тип симметрии нуклеокапсида – кубический
(икосаэдрический);
• Синтез, сборка новых вирионов – в цитоплазме;
• Внутриклеточно – кристаллоподобные включения;
• Резистентны к кислотам, эфиру, детергентам.
 Роль в патологии

Энтеровирусы:
• вирус полиомиелита – полиомиелит;
• вирусы Коксаки А и В (1948 г. Г. Долдорф, Г. Сикл в г. Коксаки, США –
из кишечника детей с полиомиелитопо-добными заболеваниями),
ЕСНО (Enteric Cytopatogenic Human Orphans – «кишечные
цитопатогенетические вирусы-сиротки человека», 1951-1953 гг. Дж.
Мельник), типов 68-71 – полиомиелитоподобные заболевания,
острые кишечные и респираторные инфекции, поражение
сердечно-сосудистой системы.
Гепатовирусы – вирусный гепатит А.
Риновирусы – ОРВИ.
Кардиовирусы – миокардиты.
Афтовирусы – ящур у животных,
у человека – миокардит с
везикулярным поражением кожи
и слизистых.
Полиомиелит (от греч. polios – серый, myelos –
спинной мозг) – острое инфекционное вирусное
заболевание, характеризующееся поражением
нейронов продолговатого и передних рогов
спинного мозга, сопровождающееся развитием
вялых парезов и параличей преимущественно
нижних конечностей и туловища.
 Историческая справка

• 1909 г.: К. Ландштайнер и Г. Поппер – выделили вирус

из спинного мозга умершего от полиомиелита ребенка
путем заражения обезьян.
 Таксономия

Семейство – Picornaviridae
Род – Enterovirus
Тип – Poliovirus (вирус полиомиелита) I, II и III типов
Геном
• несегментированная односпиральная (+) РНК.
• Тип симметрии нуклеокапсида – икосаэдрический (60
белковых субъединиц – капсомеров).

Морфология
• Форма – «ягода малина»;
• Размеры – 22-30 нм;
• Простая организация:
 РНК, связанная с внутренним
белком VPg;
 4 капсидных белка –
VP-1, VP-2, VP-3 и VP-4
(VP-1 поверхностно расположен,
а VP-4 связан с РНК).
 Антигенная структура

• Общий комплементсвязывающий антиген (в РСК);

• Типоспецифический капсидный антиген (в РН).

Особенности репродукции вируса

1. Адсорбция на
липопротеиновых
рецепторах
чувствительных клеток.
2. Проникновение в клетку
путем виропексиса
(впячивание ЦПМ внутрь и образование вакуоли с вирусом).
3. Депротеинизация – освобождение РНК.
4. Эклипс-фаза – репликация РНК и синтез вирусных белков в
цитоплазме на рибосомах (сначала синтезируется
макрополипептид, который ферментами разрезается на
капсомерные и внутренний белки, протеазу, РНК-
транскриптазу).
5. Сборка вирионов.
6. Выход вирионов с лизисом клетки.
 Культивирование

• В культуре клеток – перевиваемых (Vero, Hela, Hep-2,

KB) и первичных (фибробласты эмбриона человека,
почек обезьян);
• В организме обезьян;
• В куриных эмбрионах не культивируются.
 Резистентность

Устойчивы во внешней среде:

• в сточных водах при 00С – 30 дней, при -200С – несколько
лет:
• к детергентам;
• эфиру;
• низким рН.
Чувствительны:
• к повышенной температуре (500С – 30 минут, кипячение –
мгновенно);
• УФЛ;
• высушиванию;
• хлорсодержащим дезинфектантам.
 Эпидемиология

Источник инфекции – больные и вирусоносители.

Механизмы передачи инфекции:
• Фекально-оральный (пути – водный, алиментарный,
контактно-бытовой);
• Аэрогенный (путь – воздушно-капельный).
Наиболее восприимчивы дети.
Инкубационный период – 7-12 дней.
Патогенез и клинические особенности

• Первичная репродукция в входных воротах:

эпителиальных клетках полости рта, носоглотки,
кишечника, в лифматических тканях (глоточном
кольце Пирогова, пейеровых бляшках).
• Первичная вирусемия.
• Диссеминация в органы, кроме ЦНС (при наличии
антител – абортивная инфекция).
• Вторичная вирусемия.
• Иммунные комплексы повышают проницаемость
ГЭБ вирус проникает в двигательные нейроны
передних рогов спинного мозга и головной мозг
необратимые изменения (в цитоплазме нейронов –
кристаллоподобные включения).
 Клинические формы полиомиелита:

• Иннапарантная – бессимптомно.
• Абортивная – катаральная и желудочно-кишечная.
• Паралитическая – повышение
температуры до 400С,
вялые парезы и
параличи преимущест-
венно нижних
конечностей и туловища.
 Иммунитет

• Приобретенный пассивный (плацентарный)

иммунитет – 4-5 недель жизни ребенка.
• Постинфекционный иммунитет – стойкий
пожизненный.
 Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – рото-глоточные смывы (первые 3

дня), фекалии (1-2-я недели), СМЖ, кровь, при летальном
исходе – секционный материал (кусочки спинного,
головного мозга, миокарда, стенки тонкого кишечника).
1. Вирусологический метод – заражение перевиваемых
(Vero, Hela, Hep-2, КВ) или первичных (фибробласты
эмбриона человека, почек обезьян) культур клеток;
индикация в пробирочных культурах – по ЦПД, на
матрасах – по бляшкообразованию, идентификация в РН.
2. Серологический метод – РСК, РН, ИФА.
3. Молекулярно-биологический метод – ПЦР.
Специфическая профилактика
Плановая вакцинация – живая пероральная полиомиелитная
вакцина из аттенуированных штаммов вируса полиомиелита I,
II и III типов, предложенных А. Сэбином в 1956 г. (выращены на
первичной культуре клеток почек зеленых мартышек).
• Вакцинация: 3 – 4,5 – 6 мес.;
• Ревакцинация: 18, 20 мес. и 14 лет
однократно.
+ формируется общий
гуморальный и местный
иммунитет кишечника.

Спецефическое лечение –
донорский иммуноглобулин.
Вирусные гепатиты – группа
полиэтиологичных антропонозных вирусных
поражений печени с различными механизмами
и путями передачи возбудителей,
характеризующихся преимущественно
диффузным воспалительным процессом в
печеночной ткани с развитием
интоксикационного, астеновегетативного и
желтушного синдромов.
 Вирусы – возбудители гепатитов человека
РНК-содержащие вирусы ДНК-содержащие вирусы

Семей- Семей- Семей- Семейство Дельта Семей- Семей- ?

ство ство ство Flaviviridae -агент ство ство
Picorna Calici Paramyxo Hеpodn Parvo
viridae viridae viridae ? oviridae viridae

Вирус Вирус Вирус Вирус Вирус Вирус Вирус Вирус Вирус

гепатита гепатита гепатита F гепатита гепати гепати гепатита гепатита гепати
А (HAV) Е (HEV) (HFV) C (HCV) та G та D B (HBV) TTV та SEN
(HGV) (HDV) (transfusion
transmitted
virus)
Фекально-оральный Парентеральный механизм заражения
механизм заражения
Антигенная структура для идентификации
HA-Ag HE-Ag Не HC-Ag Не HD-Ag HBs-Ag Не Не
установ установ HBs-Ag HBc-Ag установ уста
лены лены HBe-Ag лены новле
HBx-Ag ны
Гепатит А (синонимы: инфекционный, эпидемический
гепатит, болезнь Боткина) – острое инфекционное
заболевание с фекально-оральным механизмом
передачи, характеризующееся поражением печени.

Историческая справка
• 1888 г.: А. Боткин описал заболевание.
• 1973 г.: С. Фейстоун – выделил вирус в фекалиях больных
с помощью иммунной электронной микроскопии (ИЭМ).
 Таксономия

Семейство – Picornaviridae
Род – Hepatovirus (Enterovirus)
Тип – HAV = Hepatitis A virus (тип 72)
Геном
• Линейная несегментированная однонитевая
(+) РНК.
• Тип симметрии нуклеокапсида – кубический (32
капсомера).

Морфология
• Форма – икосаэдрическая;
• Размер – 27-32 нм;
• Простоорганизованный: РНК, белки VP1-4, протеазы и
полимераза вируса.

Антигенная структура
• HA-Ag – видоспецифический,
связан с капсидными белками.
 Культивирование

• В организме обезьяны шимпанзе, мармозеты;

• В культуре клеток – перевиваемых (Hela, Hep-2) и
первичных (фибробласты эмбриона человека, почек
африканской зеленой мартышки);
• В куриных эмбрионах не культивируются.
 Резистентность

Устойчив во внешней среде:

• При низкой температуре (-200С) – годами, при
комнатной температуре (210С) – несколько недель, 600С
– 12 часов, 1000С – 5 минут;
• К кислотам, щелочам, эфиру;
• В растворе формалина – 3 дня, хлорамина – 30 минут;
• В воде – 3-10 месяцев;
• В экскрементах – 30 суток.
Чувствителен к УФО и высушиванию.
 Эпидемиология

Источник инфекции – больной человек.

Механизм передачи – фекально-оральный (пути –
водный, алиментарный, контактно-бытовой).
Осенне-зимняя сезонность.
Чаще болеют дети от 3 до 10 лет.
 Патогенез и клинические особенности

1. Внедрение через ЖКТ с первичной репродукцией в

энтероцитах тонкого кишечника и регионарных
лимфотических узлах (инкубационный период ≈ 30 дней).
2. Вирусемия и первичная генерализация инфекции
(продромальный период ≈ 5-7 дней – два варианта:
гриппоподобный и диспепсический).
 Патогенез и клинические особенности
3. Вторичная репродукция в гепатоцитах: оказывает
прямое цитопатическое действие на гепатоциты с их
некрозом, нарушением всех видов обмена, особенно
билирубинового (стадия разгара ≈ 2-3 недели – потеря
аппетита, тошнота, рвота, боль в области правого
подреберья, холурия (потемнение мочи), ахолия
(светлый кал), желтушное окрашивание кожи и
слизистых).
 Патогенез и клинические особенности

4. Вторичная вирусемия и генерализация инфекции.

5. Иммуногенез и высвобождение организма от
возбудителя с полным выздоровлением.

Иммунитет
Постинфекционный иммунитет – гуморальный, стойкий,
пожизненный.
 Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – фекалии, кровь.

1. Серологический метод (основной) – ИФА, РИА, ИЭМ:
• HAV-Ag в фекалиях и в сыворотке крови в конце
инкубационного и преджелтушном периоде (маркер острой
инфекции);
• анти-HAV-IgM в сыворотке крови с конца инкубационного
периода и 4-6 месяцев после выздоровления (маркер острой
инфекции);
• анти-HAV-IgG в сыворотке крови со 2-3 недели болезни и
пожизненно (перенесенный гепатит).
2. Молекулярно-биологический метод – ПЦР:
• HAV-РНК в сыворотки крови (маркер острой инфекции).
 Специфическая профилактика
По эпидпоказаниям:
• Пассивная при контакте с
больным – донорский γ-глобулин;

• Активная – вакцина против гепатита А культуральная

концентрированная очищенная инактивированная
адсорбированная жидкая (ГЕП-А-ин-ВАК):
инактивированные формалином вирусы, выращенные в
культуре перевиваемых клеток и адсорбированные на
гидроокиси алюминия.

Специфическое лечение не существует.

Гепатит В – инфекционное вирусное заболевание с
парентеральным механизмом передачи,
характеризующееся поражением печени с развитием
симптомокомплекса острого и хронического гепатита.

Историческая справка
• 1965 г.: Б. Блюмберг – из крови австралийского аборигена
выделил HBs-Ag
(«австралийский антиген»).
• 1970 г.: Д. Дейн – вирус гепатита В.
 Таксономия

Семейство – Hepadnoviridae (от лат. hepa – печень,

от англ. dna – ДНК)
Род – Orthohepadnovirus
Тип – HBV (Hepatitis B virus)
 Геном

• Двухнитевая кольцевая молекула ДНК («плюс-цепь» на

30% короче «минус-цепи»);
• Тип симметрии нуклеокапсида – кубический.
Морфология

Частица Дейна
• Форма – сферическая;
• Диаметр – 42-45 нм;
• Организация – сложная:
Сердцевина (нуклеокапсид) –
ДНК, капсидные белки,
ДНК-полимераза;
Снаружи – суперкапсид.
Мелкие сферические частицы
диаметром 22 нм, тубулярные
формы размером 22×50-230 нм –
частицы свободной оболочки (HBs-
антигена), лишенные ДНК, не
проявляющие инфекционные
свойства.
 Антигенная структура

1. HBs-Ag (superficiales – поверхностный) – белок внешней оболочки,

включает 2 фрагмента: preS1 – иммуногенный, preS2 –
рецепторный. Различают 4 субтипа: adw, adr, ayw, ayr. Появляется в
крови через 1,5 месяца после инфицирования.
(При хроническом гепатите высокое содержание HBs-Ag в крови –
внедрения генома вируса в генотип гепатоцита с преобладанием
синтеза оболочки над компонентами сердцевины).
2. HBcor-Ag (cor – сердцевина) – сердцевинный, белковой природы, в
крови в свободном виде не определяется, только в ядрах или
цитоплазме гепатоцитов (маркер репликации вируса в клетках
печени).
3. HBe-Ag (антиген инфекциозности) – секретируемая растворимая
часть HBcor-Ag, индикация HBe-Ag в крови подтверждает наличие
HBcor-Ag в гепатоцитах (показатель активной инфекции).
4. HBx-Ag – белковый сердцевинный антиген, малоизучен,
опосредует злокачественную трансформацию гепатоцитов.
 Особенности репродукции вируса
• Репродукция в гепатоцитах.
• Сначала короткая цепь ДНК достраивается по
длинной с помощью ДНК-полимеразы.

Культивирование

• Не культивируется в лабораторных условиях.

• Восприимчивые животные – шимпанзе.
 Резистентность

Устойчив к низким и высоким температурам,

химическим и физическим воздействиям:
• Комнатная температура – 3 месяца,
в холодильнике – 6 месяцев, в замороженном виде (-
200С) – 15-20 лет, при кипячении – 30 минут,
автоклавировании (1200С) – 5 минут,
в сухожировом шкафу (1600С) – 2 часа;
• 2% раствор хлорамина – 2 часа, 1,5% растворе
формалина – 7 дней.
• В высушенной плазме – 25 лет.
 Эпидемиология

Источник инфекции – больные и вирусоносители.

Механизм передачи:
• Парентеральный (пути – трансфузионный,
артифициальный, половой, контактно-бытовой);
• Вертикальный (путь – трансплацентарный).
Низкая инфицирующая доза.
Группы риска: гематологические больные, наркоманы,
гомосексуалисты,
медицинские работники.
 Патогенез и клинические особенности

1. Внедрение возбудителя: входные ворота – кровеносные

сосуды.
2. Фиксация на гепатоцитах, проникновение внутрь клетки. Не
обладает прямым цитопатическим действием, поражение
печени иммунообусловленно.
3. Размножение вируса, сборка вирионов, представление на
мембране гепатоцитов HBcor-Ag и HBe-Ag.
4. Распознавание ИКК, дифференцировка и сенсибилизация: Т-
киллеры, макрофаги действуют на гепатоциты, пораженные
вирусом, разрушая их.
5. Формирование иммунитета и выздоровление (при
интеграция HBV в геном гепатоцитов «ускользают» от
иммунной системы – хронический процесс или
носительство).
 Клинические периоды
1. Инкубационный период – 3-6 месяцев.
2. Преджелтушный период – 7-12 дней: недомогание,
слабость, снижение аппетита, головные боли,
артралгии.
3. Желтушный период – 21 день: потеря аппетита,
тошнота, рвота, боли в области правого подреберья,
холурия, ахолия, желтушное окрашивание кожи и
слизистых.
4. Восстановительный период – 1,5-3 месяца.
5. Исходы – выздоровление, носительство, развитие
хронического гепатита, цирроза печени.

Иммунитет
Постинфекционный иммунитет – клеточный,
слабонапряженный, непродолжительный.
 Микробиологическая диагностика

Исследуемый материал – сыворотка крови.

1. Серологический метод (основной) – обнаружение
антигенов вируса и антител ИФА и РИА.
2. Молекулярно-биологический метод – ПЦР для
обнаружение ДНК, ДНК-pol.

Маркеры острого гепатита В:

• ДНК вируса, ДНК-pol;
• Анти-HBcor-IgM;
• HBe-Ag;
• HBs-Ag.
 Специфическая профилактика
Пассивная для экстренной профилактики – HВ-
иммуноглобулин;
Активная – для плановой профилактики –
рекомбинантная дрожжевая вакцина (генно-инженерная
вакцина, производимая путем встраивания гена,
кодирующего HВsAg, в дрожжевые клетки; сорбирован на
адъюванте) для в/м введения.
Вакцинация – новорожденным в
первые 12 часов жизни, в 1 и 6 мес.
В 13 лет (невакцинированные) и
взрослые групп риска:
2 первые инъекции с интервалом
в 1 месяц, 3-я – через 6 месяцев,
ревакцинация – через 7 лет.
Специфическое лечение не разработано.

Этиотропная терапия – рекомбинантные

интерфероны (Виферон, Реаферон, Роферон А).