Tinción de Ziehl Neelsen

a) Filtre la fucsina fenicada antes de usarla.

b) Cubra la superficie del extendido con fucsina.

c) Pase la llama del mechero (o torunda empapada en alcohol) por debajo de la

lámina, hasta que se produzca la emisión de vapores blanquecinos. Deje de
calentar y repita el procedimiento dos veces más. La emisión de los vapores
blanquecinos debe lograrse tres veces en 5 minutos, que es el tiempo adecuado
de contacto entre el extendido y el colorante. La fucsina no debe hervir sobre la
lámina, si disminuye por evaporación o derrame, hay que reponerla.

d) Elimine la fucsina con agua del tubo a baja presión, de manera que la película
no se desprenda.

e) Gire la lámina para lavar su cara inferior y así eliminar la fucsina ahí
depositada.

f) Cubra la superficie del extendido con alcohol-ácido al 3% efectuando un

movimiento de vaivén y espere 2 minutos de modo que el alcohol-ácido lo
decolore y arrastre suavemente la fucsina. Esta operación puede repetirse hasta
que sobre el extendido se observe un color rosado.

g) Lave la lámina con agua según se describe en el punto d.

h) Cubra el extendido durante 1 minuto con solución de azul de metileno.

i) Lave ambas caras de la lámina con agua.

j) Seque las láminas a temperatura ambiente, en posición vertical, con el

extendido hacia el frente.

k) Revise la identificación de los frotis y rotúlelos de nuevo si se borraron durante

la tinción.
 Observación microscópica
• La observación microscópica debe determinar la presencia de BAAR
(concordancia cualitativa) y establecer su número aproximado por campo
microscópico (concordancia cuantitativa).
• Considere campo microscópico útil aquel en el cual se observan elementos
celulares de origen bronquial (leucocitos, fibras mucosas y células
ciliadas). Los campos en que no aparezcan dichos elementos no deben
contabilizarse en la lectura.
• Observe cada campo microscópico, en superficie y profundidad, con
objetivo de inmersión
• Establezca una pauta uniforme de observación
• El número de campos que se debe observar variará según la cantidad de
bacilos que contenga la muestra. Si no se encuentran BAAR o se observa
menos de 1 bacilo por campo en promedio, deben examinarse por lo
menos 100 campos. Si se encuentran de 1 a 10 BAAR por campo en
promedio, es suficiente observar 50 campos. Si se encuentran más de 10
BAAR por campo en promedio, basta con observar 20 campos.
• Cuando aparecen grumos de bacilos se debe contar como uno. Si el
número de grumos que aparece es significativo, se debe hacer la
observación en el reporte: “hay BAAR en grumos”, para indicar que el
número verdadero de BAAR puede ser mayor que el que se reporta.
• Cuando el frotis es de otro tipo de muestra, que no sea esputo o del
sedimento de un esputo, solamente se reporta cualitativamente.

Reporte de resultados
Negativo (-): ° No se encuentran BAAR en 100 campos observados (c.o.). o
si se encuentran menos de 3 BAAR en 300 campos ópticos observados.

Número exacto: de 1-9 BAAR en 100 campos observados.

Positivo (+): Promedio de menos de 1 BAAR por campo, en 100 campos

observados. Lo que es lo mismo, de 10 a 99 BAAR en 100 campos

Positivo (++): Promedio de entre 1 a 10 BAAR por campo, en 50 campos

observados.

Positivo (+++): Promedio de más de 10 BAAR por campo, en 20 campos

observados.

Ejemplos:
Si observa 24 BAAR en 100 campos ópticos: 24/100=0,24 Lo que implica menos de
1 y corresponde reportar: BAAR positivo (+).
Si observa 5 BAAR en 100 campos ópticos: Lo que implica de 1-9 en 100 campos
observados y corresponde reportar: Positivo (5) BAAR en 100 campos.