Биофизика вопросы к зачету

1 ЛЕКЦИЯ

1. Изобразите схему однолучевого спектрофотометра и опишите принцип его действия. В

чем их недостаток перед двулучевыми?

Свет от источника ( ксеноновые лампы, дающие сплошной спектр излучения в видимой и

УФ областях ) проходит через монохроматор, который выделяет определенный диапазон
длин волн ). Монохроматический пучок света проходит через кювету, и его интенсивность
измеряют детектором света - фотоэлектронный умножитель - ФЭУ. Фототок подаётся на
вход усилителя, затем сигнал преобразуется в специальном электронном блоке и подаётся
на компьютер. В современных однолучевых спектрофотометрометрах вначале записывают
интенсивность света всех длин волн, прошедшего через контрольную кювету, заполненную
растворителем I0=f(l-лямбда-длина света). В преобразователе, где используется
микропроцессор, сигналы I0 запоминаются, а самописец вычеркивает нулевую линию,
показывающую, оптическая плотность образца принимается за 0. Затем ставят кювету с
испытуемым раствором и измеряют интенсивность проходящего света I=f(l-лямбда).
Преобразующее устройство либо пропускание T=I/I0, либо оптическую плотность. Эти
величины при. Различных длинах волн записываются самописцем.

Недостатки: нестабильность светового излучения ламп, чувствительности ФЭУ и

электронной системы усиления фототока, примесь блуждающего света ( излучение с
другими длинами волн, которое попадает на выход монохроматора, минуя дифракционную
решетку, вследствие многократных отражений вошедшего внутрь прибора света на его
внутренних деталях, решение - установка спектрофильтра )

2. Схема двулучевого спектрофотометра и принцип его действия. Его преимущество над

однолучевым.

В двулучевых спектрофотометрометрах монохроматический пучок света расщепляется на

два, например, с помощью вращающегося зеркала с секторными вырезами - обтюраторы.
Эти 2 одинаковых по интенсивности пучка проходят через 2 кюветы растворами, один из
которых служит в качестве контрольного. ФЭУ измеряет сигналы, попеременно
поступающие к нему при выходе из кювет. После усиления эти сигналы преобразуются в
отношение световых потоков - I/I0= дельта T и затем в дельта A=-lg( дельта Т ). Кривая
дельта А=f(лямбда) записывается самописцем.

Преимущества: предназначен для записи разностных спектров, может быть использован

для записи и обычных спектров поглощения ( берут образец кюветы с растворителем ),
более чувствительны => можно использовать для измерения разницы в оптической
плотности образцов до 10 в -4 степени при базовой = 2

3. Вывод закона Бугера-Ламберта-Бера на основе теории мишеней.

Закон: основной закон поглощения света веществом, из которого следует, что Т

( непосредственно измеряемое пропускание ) и 1-Т ( коэффициент поглощения ) зависят от
концентрации растворов (n или с) и длины оптического пути - l экспоненциально.

Применение закона: при количественном анализе можно одновременно определять

концентрацию нескольких веществе, если спектры их поглощения различаются по форме.
Суммарный спектр поглощения А нескольких спектров есть простая сумма спектров
поглощения компонентов, так как при всех длинах волн оптические плотности
компонентов суммируются.

4. Формулировка закона из пункта 3

5. Схемы спектров поглощения некоторых соединений

6. В спектрах поглощения ряда биологически важных соединений положение полосы

поглощения в спектре зависит от размеров системы сопряжённых связей. Как проявляется
эта зависимость + объяснение

Делокализованные электроны находятся как бы в электронном ящике, длина которого тем

больше, чем больше число сопряжённых связей. В нашем потенциальном ящике число
электронов равно 2N, где число сопряжённых двойных связей равно N. Главное квантовое
число верхней заполненной орбиты равно nвзо=N. Главное квантовое число нижней
свободной орбиты равно nнсо=N+1

Энергия электрона в потенциальном ящике

равна

Энергия поглощаемого
фотона равна разнице
энергиях ВЗО и НСО

7. Как проводить количественный анализ многокомпонентных смесей?

Применение закона Бугера-Ламберта-Бера: при количественном анализе можно

одновременно определять концентрацию нескольких веществе, если спектры их
поглощения различаются по форме. Суммарный спектр поглощения А нескольких
спектров есть простая сумма спектров поглощения компонентов, так как при всех длинах
волн оптические плотности компонентов суммируются.

8. Эффект сита при поглощении света биологическими образцами

Поглощение света суспензией окрашенных частиц (например, эритроциты) отличается от

поглощения света раствором окрашенного вещества (например, раствором гемоглобина,
вышедшего из эритроцитов при гемолизе). Данное различие обусловлено эффектом сита,
суть которого состоит в том, при прохождении пучка света интенсивностью I0 через
объект, в котором окрашенное вещество распределено неравномерно, ослабление пучка
будет различным в тех местах, где свет проходит через окрашенные частички, и там, где он
их минует. Эффект сита сказывается тем сильнее, чем больше неравномерного
распределения поглощающего вещества и чем больше оптическая плотность частиц.
Эффект сита приводит к сглаживанию спектров поглощения.

9. Как влияет светорассеяние на измеряемые спектры поглощения? Как уменьшить и

учесть это влияние?

В результате светорассеяния падающий световой пучок отклоняется от первоначального

направления, вследствие чего не весь прошедший свет падает на фотоприёмник. Это
приводит к завышению измеряемой оптической плотности. Для борьбы используют
спектрофотометры, снабжённые светоизмерительным шаром ( интегрирующей сферой
Ульбрихта ). В этом случае практически весь рассеянный образцом свет попадает на
фотоприёмник, и измеряемая оптическая плотность обусловлена только истинным
поглощением. Иногда для борьбы за кюветами используют светорассевающие пластинки,
фотодетектор максимально приближают к кюветам, что нивелируют разницу между
мутными и прозрачными образцами. Дело в том, что большая часть света, рассеянного
частицами в суспензии, направлена вперёд и попадает на пластинку. Фотодетектор
измеряет свет, рассеянный пластинкой, а не образцом. Таким образом, интенсивность
регистрируемого света мало зависит от того, рассеивает образец свет или нет.

Как учесть это влияние: можно считать поглощения и рассеивания света независимыми
процессами, то есть измеряемая оптическая плотность А есть сумма оптической
плотности, обусловленной светорассеиванием Аs, и оптической плотности, обусловленной
истинным поглощением Aa: A=As+Aa

Чтобы найти А нужно знать зависимость А от длины волны. Для суспензии частиц в
отсутсвие поглощения

Фото

1 СЕМИНАР

1. Основные фотобиологические процессы.

фотобиология изучает действие света на живой организм с позиции различных

биологических наук

Растения: фотосинтез, фототропизм, фотопериодизм.

Бактерии: фототаксис, мутагенное действие УФ, бактерицидное действие УФ.

Животные и человек: зрение, загар и образование витамина D, фотоэритема,

фотодинамические эффекты.

2. Что вы знаете о фотомедицине?

фотомедицина-раздел медицины, в котором оптическое излучение применяю/т для

диагностики и лечение

УФ-облучение: кожи, УФО крови - облучение крови больных УФ лучами с целью улучшения
общего состояния больных сердечно-сосудистыми и некоторыми другими заболеваниями.

Лазер: хирургия, фотодинамическая лазерная терапия - ускорение заживления ран,

улучшение микроциркуляции или общего кровообращения при облучении светом лазера
раны или крови больного без использования экзогенных сенсибилизаторов.

ПУФО-терапия - облучение поверхности кожи ближним ультрафиолетом после приема

больными фурокумаринов (таких как псорален) с целью лечения псориаса и некоторых
других кожных болезней.

Биолюминесценция – свечение организмов, обуславливаемое химическими реакциями.

3. Основные стадии фотобиологического процесса.

! Поглощение фотона хромофором

! Перераспределение энергии в фотохимическом центре

! Первичный фотохимический акт (чаще всего с образованием свободных

радикалов)

! Темновые реакции с образованием стабильных продуктов (с последующей их

реакцией, ведущей к ответу клеток)

! Физиологический ответ клеток

! Реакция организма

Первые три – область биофизики.

Хромофор – частица, электрон которой способен поглощать свет.

Самая примитивная химическая реакция – переход электрона с одного атома на другой.

4. Перечислите основные характеристики электромагнитного излучения и напишите

формулу, связывающую эти величины

Основные характеристики электромагнитного излучения, это частота колебаний в одну

секунду, ν, (измеряется в герцах) и длина волны, λ, т.е. расстояние между двумя точками

в одинаковых фазах (измеряется в нанометрах), (волновое число, т.е. отношение 2π

радиан к длине волны, k = ω/c = 2π/λ0.)

Уравнение, связывающее эти величины: ν(ню) λ = с, где с – скорость света.

5. Сравните свойства фотона и электрона. Скорости, массы, энергии и импульсы.

Фотон как частица обладает скоростью с и нулевой массой покоя (в покое не существует),
но в полёте обладает массой, проявляющейся в притяжении фотона другими телами.
Массу можно найти из уравнения Эйнштейна: E = mc^2.

Т.е. m = 0, v = c, E = mc^2

Фотон как волна обладает частотой ν и длиной λ.

ν λ = с. E = h ν => E = hc/ λ. (h – постоянная Планка, равная 6,62 x 10^-34 Дж×с.

mc^2 = hc/ λ.

Импульс фотона р = mc.

P = mc = h/ λ

Электрон имеет массу m = 9×10^-31 кг, движется со скоростью V меньше скорости света,
его энергия приближённо равна mc^2

Электрон, как и фотон, является и волной, и частицей. Получается, импульс электрона –

это и импульс волны.

P = mv.

6. Выведите уравнение де Бройля для электрона.

Согласно теории де Бройля, электрон, как и другие малые материальные тела, является
волной и частицей одновременно.

P = mv = h/ λ => λ = h/mv – это и есть уравнение де Бройля, из которого следует, что

тяжёлые и быстрые частицы имеют малую длину волны, а лёгкие и медленные – большую.
Длина волны неподвижного тела бесконечно большая.

7. Образование стоячей волны электронами.

Электроны локализованы у ядер атомов и молекул => соответствующие им волны

интерферируют сами с собой. Обычно при этом образуется новая волна, амплитуда
которой увеличивается, если интерферирующие волны в одной фазе, и уменьшается, если
в разных. Однако, если длина волны колебаний и размеры орбитали подобраны так, что в
орбиталь укладывается целое число полуволн, система приходит в устойчивое состояние и
образуется стоячая волна (не перемещается, её узлы и пучности всё время на одном и том
же месте, но каждая её часть колеблется с нулевой амплитудой в узлах и максимальной –
в пучностях). Стационарные волны в механических моделях достигаются при изменении
вследствие изменения скорости при одной частоте или изменения частоты при одной
скорости. Электроны могут изменять скорость вращения и размеры орбиталей, но
устойчивыми будут лишь положения, в которых образуются стоячие волны, то есть
электроны могут бесконечно находиться на орбиталях, в которых укладывается целое
число полуволн.

8. Уравнение Шрёдингера. Физический смысл уравнения в стационарных условиях.

Ур-е Шрёдингера количественно описывает свойства стоячих электронных волн в

потенциальном ящике:

-ħ^2/2𝑚∆𝛹 + 𝑈(𝑥, 𝑦, 𝑧, 𝑡)𝛹 = 𝑖ħ𝑑𝛹2 𝑑𝑡 – уравнение Шредингера в общем виде (тут пока всё

не особо понятно). ħ = h/2π, где h – это постоянная Планка, равная 6,62 x 10^-34 Дж×с, m –
масса частицы, Ψ – волновая функция (пси-функция, описывающая электромагнитное
возмущение эфира), U(x,y,z,t) – потенциальная энергия частицы (как видно, она изменяется
во времени и в пространстве).

∆𝜓 = 𝑑𝜓 /𝑑𝑦^2 + 𝑑𝜓 /𝑑𝑥^2+ 𝑑𝜓 /𝑑𝑧^2 – а это оператор Лапласа для волновой функции –

сумма частных вторых производных смещения по осям координат.

∆𝛹 = 𝜓𝑒^−𝑖(𝐸/h)𝑡 – это уравнение волновой функции частицы в стационарном квантовом

состоянии. Это абсолютно то же самое, что и первое уравнение этого вопроса, просто тут
мы видим, что изменение волновой функции от расстояния (ψ) и от времени (e^-i(e/h)t)
разложены на разные множители и ещё там первое – это дифференциальное уравнение, а
вот здесь уже решённое дифференциальное.

-ħ^2/2𝑚∆𝜓 + ∆𝑈 = 𝐸𝜓 - а это, короче часть общего уравнения Шредингера, которая

описывает лишь изменение волновой функции от времени (как видно, вся эта лабуда, вот
это вот i – этого здесь нет). Самое первое уравнение, которое для общего вида,
преобразуется в это, когда при интерференции и образовании стоячих волновая функция
не меняется во времени, а лишь в пространстве. Тогда правая часть уравнения имеет
физический смысл полной энергии системы, Е, а U – потенциальная энергия системы. Если
ещё вспомнить, что ħ = 2πh, получаем:

∆𝜓 + 8𝜋^2𝑚/h^2 (𝐸 − 𝑈)𝜓 = 0 – тоже ур-е Шредингера для стационарных состояний.

9. Энергия электрона в потенциальном ящике. Энергетические уровни.

Решение уравнение Шредингера даёт нам: а – распределение электронной плотности

вокруг ядра (квадрат амплитуды волновой функции в каждой точке пространства) и б –
энергия электрона в атоме.

В учебнике приводится решение уравнения для потенциального ящика:

! Электронная волна распространяется лиши вдоль оси х;

! Энергия электрона ни на что не растрачивается;

! Электрического поля нет => потенциальная энергия электрона = 0;

! Система в стационарном режиме => значения меняются вдоль оси х, но не во

Последнее положение говорит, что мы можем сделать допущение, что в ящике образуются
стоячие волны, хотя такого допущения мы не делаем. Если же мы делаем такое
допущение, то уравнение приобретает вид:

𝑑^2𝜓/dx^2+ 8𝜋^2𝑚/h^2 E𝜓=0

Пусть

8𝜋^2𝑚/h^2 E= ω^2 .

Тогда уравнение становится:

𝑑^2𝜓/𝑑𝑥^2 + 𝜔^2 𝜓 = 0

Оно аналогично дифференциальному уравнению гармонических колебаний. Его решение

имеет вид:

𝜓 = 𝜓0cos(𝜔𝑥 + 𝜑0) , где ψ0 – амплитуда волновой функции, а φ0 – её начальная фаза. На

границах ящика (x = 0 и x = l) ψ = 0. Там уравнение выглядит, как:

0= 𝜓0cos(0+𝜑0)=𝜓0cos(𝜑0)

0 = 𝜓0cos(𝜔𝑙 + 𝜑0)

Решение уравнений даёт нам, что

cos𝜑0 =0 => 𝜑0 =2 . Тогда 𝜓0cos(𝜔𝑙+2)=0 => 𝜔𝑙+𝜋/2 =(2𝑛+1)𝜋/2. После небольших

преобразований (которые авторы оставили где-то там) получаем 𝜔 = 𝑛 𝜋/𝑙 ,

где n – целое число от 1 до бесконечности.

Подставив в уравнение 8𝜋^2𝑚/h^2 𝐸 = ω^2 значение ω получаем: 𝑛^2 𝜋^2/𝑙^2= 8𝜋^2𝑚/h^2 𝐸

, откуда 𝐸 = h^2 n^2/8m𝑙^2– выражение для энергии системы. А n – главное квантовое
число, которое характеризует энергию и размер орбитали (и количество электронных
уровней за одно).

Дальше: 𝜑0 =𝜋/2 и 𝜔=𝑛𝜋/𝑙 => 𝜓= 𝜓0cos(𝜔𝑥+𝜑0)=𝜓0cos(𝑛𝜋/𝑙 𝑥+𝜋/2)=

𝜓0 cos 𝜋 (𝑛 1/𝑙 𝑥 + 1/2). ψ^2 – вероятность нахождения электрона в данной точке.

Так вот: расчёт всего этого для атомов, а не для ящиков ещё сложнее и
задоподжигательнее.

10. Энергетические уровни и электронные переходы в молекулах.

Энергетические уровни – значение энергии квантовой системы, значение электрона,

находящегося на определённом расстоянии от ядра атома(главное квантовое число).

В молекулах органических веществ в переходах участвуют электроны трёх типов:

! S-электроны (нужна большая энергия, УФ-излучение)

! N-электроны, не участвующие в образовании связей

! P-электроны, образующие кратные связи

Электронные переходы: молекулярные орбитали есть линейная комбинация атомных

орбиталей. Орбитали связывающие (𝜓 = 𝜓1+𝜓2) и разрыхляющие (𝜓∗ = 𝜓1 − 𝜓2). В учебнике
были электронные диаграммы: самая низкая энергия у электрона в связывающей сигма-
орбитали, потом связывающая пи-орбиталь и т.д. Самая высокая – у разрыхляющей сигма-
орбитали.

Самыечастыпереходы – n->π * и π->π * .Переходы с сигма-связывающей или на сигма-

разрыхляющую требуют очень много энергии.

2 ЛЕКЦИЯ

1. Электронные переходы при поглощении света и переносе электрона между

молекулами. Роль верхних заполненных и нижних свободных молекулярных орбиталей.

В основном состоянии электроны молекул находятся на низшем электронном уровне и

расположены на орбиталях попарно, причём их спины антипараллельны - сигнлетное
невозбужденное состояние S0. При поглощении света происходит переход одного из
электронов на вышележащую орбиталь, но его спин не меняется - такое состояние
молекулы и ее энергетический уровень называют S1 или S2, в зависимости от того, на
какой уровень перешел электрон. Это синглетное возбужденное состояние иногда
обозначают как S*. Через 10^-8 - 10^-9 сможет произойти испускание основной
поглощенной энергии в виде кванта света с большей длиной волны ( с меньшей энергией ) -
S1->S0 ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ. При определённых условиях может произойти обращение
спина электрона, находящегося на верхней орбитали возбужденной молекулы, при этом
часть его энергии теряется - параллельные спины, триплетное состояние и триплетный
уровень. Как этот уровень, так и молекула в триплетный состоянии обозначается Т1.
Прямой переход электрона с триплетного уровня Т1 на основной уровень S0 невозможен,
так как этом случае на одной и той же орбитали оказались бы два электрона с
параллельными спинами, что противоречит принципу Паули. Процесс перехода в основное
состояние с одновременным обращением спина занимает много времени (надо дождаться
подходящей конфигурации молекулы). При таком нескором переходе тоже может
высветиться фотон с меньшей энергией и, следовательно, большей длиной волны чем в
случае Флуоресценции - ФОСФОРЕСЦЕНЦИЯ. Время жизни молекулы в триплетном
возбужденном состоянии много выше, чем в синглетном. Флуоресценция и
фосфоресценция - фотолюминисценция/люминисценция. После поглощения света
возможен ряд безызлучательных переходов с более высоких электронных уровней и
колебательных подуровней на нижележащий уровни и подуровни. Если между двумя или
несколькими молекулами в системе имеется взаимодействие, то возможен
безылучательный перенос энергии электронного возбуждения - миграция. Если спин НЕ
меняется - внутренняя конверсия, меняется - интеркомбинационная конверсия.

2. Схема энергетических уровней молекулы и схема формирования флуоресценции и

фосфоресценции

3. Как построить схему электронных энергетических уровней в молекуле на основании

анализа спектров поглощения, флуоресценции и фосфоресценции

Аналогчино 1/2

На основе формул:

Фото

4. Изобразите принципиальную схему спектрофлуориметра и назовите основные принципы

работы прибора?

Необходимы для регистрации спектров люминесценции или спектров возбуждения

люминесценции. В идеале состоит из 2 монохроматоров: 1-для определения
монохроматического возбуждающего света, 2-для измерение спектра люминесценции.
Кюветы чаще всего кварцевые или пластиковые, 1 см толщиной, угол между
направлениями возбуждения и люминесценции - 90. Такое расположение направления
возбуждающего пучка и измеряемого света люминесценции позволяет собрать
значительную часть света люминесценции и исключить люминсценцию самой кюветы, так
как флуоресценция стенок не попадает на фотоприёмник. Данная конструкция
предполагает исследование образцов с малой оптической плотностью, которые не
слишком сильно рассеивают свет. Если взят образец высокой оптической плотностью, то
светится только тонкий слой раствора, примыкающий к передней стенке кюветы -
измеряется лишь малая часть люминесценции. Решение - тонкие стенки кюветы,
измерение только той области, на которую падает возбуждающее излучение.

5. Аналогично 4 вопросу

6. Закон Стокса.

Спектром люминесценции называют зависимость

Согласно закону Стокса , спектр флуоресценции

лежит в более длинноволновой области по
сравнению со спектром поглощения того же
соединения. Это означает, что средняя энергия квантов флуоресценции меньше средней
энергии поглощённых квантов. Причина - это превращение части энергии поглощенного
фотона в тепловую энергию окружающих молекул. (Для возбуждения люминесценции
используют излучение с длинами волн, меньшими коротковолновой границы спектра
флуоресценции. Рассеянный объектом возбуждающий свет может быть полностью убран
при помощи светофильтров или монохроматора и не мешает регистрации люминесценции)

7. Правило Каши.

Относится к форме спектра флуоресценции при возбуждении объекта светом разных длин
волн. Испускание квантов флуоресценции всегда происходит с нижнего возбужденного
уровня молекулы (тк дольше живет на нижнем возбужденном подуровне) независимо от
того, на какой уровень был заброшен перед этим электрон в результате поглощения
фотона. Это означает, что какой бы длиной волны ни была возбужденнная молекула,
излучение будет происходить из одного и того же состояния молекулы, и спектр
флуоресценции во всех случаях будет одинаковым. Следовательно, спектр флуоресценции
и фосфоресценции не зависит от длины волны возбуждающего излучения. (Если раствор
одного вещества люминисцирует, то на форме спектра люминесценции длина волны
возбуждения не сказывается - качественный и количественный спектр)

8. Правило Левшина.

Закон зеркальной симметрии - спектры по флуоресценции по форме зеркально

симметричны длинноволновой полосе спектра поглощения, если они построены в шкале
частот-энергии. Объяснение - свойства молекулы , в частности расстояние между
колебательными подуровнями и вероятности переходов на них, близки у молекул в
основном и электронно-возбужденном состояниях. Это говорит о том, что геометрия
молекул в электронно-возбужденнном состоянии мало изменяется по сравнению с
основным состоянием.

9. Закон Вавилова.

Закон: Квантовый выход

флуоресценции не
зависит от длины волны
возбуждения
люминесценции.

(Причина: молекула
дольше живет на
нижнем возбужденном
подуровне и
излучательный переход
происходит из этого состояния.)

Квантовый выход - вероятность излучательного перехода с нижнего подуровня

возбужденного состояния, который сопровождается высвечиванием кванта
люминесценции.

Следствие:

Спектр возбуждения имеет форму спектра поглощения.

2 СЕМИНАР

1. Примеры применения флуоресценции:

флуоресцентный анализ природных соединений - качественный и количественный

( триптофан, тирозин - способность к флуоресценции ); флуоресцентный красители,
введённые в кровь животных ( например, исследование действия радиации на гемато-
энцефалический барьер ); флуоресцентный микроскоп; имуннофлуоресцентный анализ;
зонды флуоресцентные; FRET - метод; метки;

2. Свойства фосфоресценции и ее применение в биологии

Фосфоресценция – длительное свечение в результате перехода с возбужденного

триплетного на основной синглетный уровень. Она чувствительна к воздействию
тушителей. К примеру, молекулярного кислорода, молекула которого многократно
сталкивается с фосфоресцирующей молекулой. Используют для ее измерения
фосфороскоп. Применение: изучение опухолей – есть ли кислород – больше I, ведь
опухоль обычно в гипоксии (кислород забирает электрон, тушит фосфоресценцию,
переводя энергию в тепло).

3. Что такое поляризация флуоресценции? Как изучают вязкость среды по измерению

поляризации люминесценции?

 Используется явление
поляризации света. При
помощи поляризаторов

можно выделить одну

плоскость колебания
вектора эл. поля и
получить
плоскополяризованный
свет.

Вращательная подвижность изучается благодаря поляризации флуоресценции.

Возбуждение плоскополяризованным светом максимально эффективно для молекул,

вектор эл. переходов в которых находится в плоскости поляризации возбуждающего
света. Флуоресценция таких молекул будет сильно поляризована.

Можно определить вязкость липидного слоя мембран, в котором растворен ФЗ. Принцип
метода: измеряем Р достаточно гидрофобного ФЗ в нашем объекте, потом проводим
серию измерений поляризации ФЗ, растворенного в смесях глицерина с водой различной
известной вязкости. Для водного раствора Р=0. Строим зависимость Р от вязкости. В
результате устанавливаем микровязкость мембраны в окружении зонда, зная его Р в
мембране.

4. Флуоресцентные метки и зонды, требования к этим веществам. Приведите примеры

зондов (1-2 примера, без химических формул) и их применения.

Флуоресцентные зонды – флуоресцирующая молекула, которая связывается с белками,

биологическими мембранами или другими компонентами клетками нековалентными
связями.

Флуоресцентная метка – флуоресцентные соединения, которые ковалентно связывают с

компонентами клетки.

Зонды – параметры люминесценции резко меняются в зависимости от свойств среды.

Примеры ФЗ:

1-анилинонафтален-8-сульфонат (АНС) –заряженная, чувствителен к эл. полю,

функционирует только в неполярной среде, светит только в мембране, можно изучить
содержание жирных кислот в мембране и наличие заряда мембран

3-метоксибензантрон (МБА) – незаряженный, есть дипольный момент, меняется при

поглощении, сольватация полярным растворителем приводит к сдвигу;

диметиламинохалкон (ДМХ) – с увеличением полярности растет длина флуоресценции– оба

чувствительны к полярности окружения, т.е. определяем полярность растворителя.

5. Поясните, каким образом изучают микровязкость, текучесть, среды, используя явления

эксимеризации пирена.

Пирен способен образовывать эксимеры – неустойчивые комплексы молекул, одна из

которых находится в электронно-возбужденном состоянии:

Р* = Р + фотон (370-390 нм)

Р+Р*=(РР)*=Р+Р+фотон (470 нм)

Процесс образование эксимера зависит от вязкости среды, чем больше вязкость, тем
меньше скорость движения молекул и меньше вероятность столкновения молекул и
образования комплекса за время жизни возбужденного состояния. Т.е. ФС эксимера
наблюдается в среде с низкой вязкостью, а в явкой среде основная ФС принадлежат
монометаллизма пирена. Определяя интенсивность ФС при соотвествующий длинах волн,
можно определят микровязкость среды. Пример: определение вязкости липопротеинов
крови.

6. Изложите суть явления сенсибилизированной люминесценции (перенос энергии).

Приведите примеры использования этого явления в научных исследованиях.

В определенных условиях может происходить перенос энергии эл. возбуждения от

молекулы, которая поглотила (донора), на другую молекулу того же самого или другого
вещества, которая при этом переходит в электронно-возбужденное состояние (акцептор).

D + hvDa = D* возбуждение донора

D*=D+hvDf флуоресценция донора

D*+A=D+A* перенос энергии

A*=A+hvAf флуоресценция акцептора

Метод изучения данного процесса – измерение флуоресценции донора и акцептора.

Примеры: определение подвижности пептидной цепи.

7. Поясните, как определяют подвижность пептидной цепи, используя явление переноса

энергии.

Аналогично 6. Есть пептид и известные его концевые аминокислоты. Если по результатам

измерения получается, что они оба флуоресцируют, то значит пептид подвижен, может
«сворачиваться в кольцо» для переноса энергии.

8. Можно ли изучать изменения полярности окружающей среды при каком- либо процессе,
используя метод флуоресцентных зондов? Обоснуйте Ваш ответ.

Флуоресцентные зонды - МБА и диметиламинохалкон. Они обладают значительным

дипольным моментом, в результате чего вокруг них ориентируются молекулы воды. В
момент поглощения фотона дипольный момент растет, а ориентация растворителя
сохраняется. Далее идет сольватация, которая тратит часть энергии. При излучении кванта
флуоресценции дипольный момент падает. Потом энергия уменьшается за счет новой
перестройки. Сольватация молекулы в возбужденном состоянии приводит к увеличению
длины волны флуоресценции, чем без нее. По сдвигу максимума флуоресценции можно
изучать полярность среды.

9. Флуоресцентная микроскопия. Изобразите схему флуоресцентного микроскопа. Что Вы

знаете о конфокальной микроскопии? В каких областях медицины флуоресцентная
микроскопия находит применение?

Использование лазеров (источник

когерентного излучения) и компьютерной
обработки изображений позволило
создать конфокальный микроскоп, в
котором осуществляется как бы
послойный срез живой клетки. (+3D
модель из слоев)

Применение: физиология клетки.

3 ЛЕКЦИЯ

1. Что такое хемилюминесценция? Квантовый выход ХЛ. Квантовый выход возбуждения и

квантовый выход эмиссии.

Хемилюминесценция-это световое излучение, возникающее в результате хим. реакции.

Квант свет испускается одним или несколькими продуктами хемилюминесцентной

реакции, образующимися в электронно-возбужденном состоянии. Последующий переход
электронов в основное состояние сопровождается эмиссией фотонов - люменисценция.

1)Образование продукта в возбужденном состоянии (хемилюминесцентная реакция)

А+Б Р*

2) Испускание кванта света (люминесценця) Р* Р+фотон

Квантовый выход ХЛ (из закона Вавилова) не зависит от длины волны возбуждения.

Квантовым выходом люминесценции называют отношение числа квантов, высвеченных в
виде люминесценции, к числу поглощенных квантов.

Квантовый выход возбуждения– параметр, который соответствует излучению,

возбуждающему хемилюминесценцию.

Квантовый выход эмиссии – параметр, соответсвующий излучению, которое соответствует

уже выделенному в ходе реакции

(Квантовый выход хемилюминесценции является произведением квантового выхода

возбуждения и эмиссии, причём последний равен квантовому выходу фотолюминесценции)

2. Виды хемилюминесценции в живых системах

Биолюминесценция, связана с ферментативными реакциями (свечение некоторых

насекомых, морских организмов)

Митогенетические лучи, слабое УФ излучение клеток, которое индуцирует деление

окружающих клеток (Гурвич)

Сверхслабое свечение (собственная хемилюминесценция клеток и тканей), практически

всегда сопровождает процессы жизнедеятельности, кране низкая интенсивность
излучения

Есть в-ва - активаторы хемилюминесценции, усиливают во 1000 раз - активированная

хемилюминесценция

Индуцированная хемилюминесценция: при образовании свободных радикалов - радио- при

облучении ионизирующей радиации; фото- после облучения УФ или видимым светом;
электро- при пропускании эл тока; соно- при действии ультразвука; трибо- при
воздействии сил трения (разрушается кристаллическая решетка); термо-

3. Что даёт изучение хемилюминесценции медицине?

1) Изучение механизма реакций, сопровождающихся свечением (ХЛ - реакции)

- Изучение первичных стадий фотобиологичсеких процессов

- Изучение цепного окисления липидов

- Изучение «активных форм кислорода»

- Изучение механизма действия антиоксидантов

2) Применение ХЛ в лабораторной клинической диагностике

- Оценка уровня свободных радикалов

- Определение активности фагоцитов

- Определение окисляемости липопротеинов

- Определение антиоксидантов

4. Понятие биолюминесценции. Люциферин и люцифераза. Приведите примеры

люминесцирующих живых организмов.

Биолюминесценция – это видимое глазом (интенсивное) свечение некоторых организмов,

связанное со специфическими ферментативными реакциями.

Люцифераза – специфический фермент, а ее субстрат – люциферин.

Примеры живности: светлячки, удильщик, медузы, светящийся планктон.

5. Применение биолюминесценции в медико-биологических исследованиях.

Биочипы: На пластинке из плексигласа располагаются лунки, содержащие какие-то в-

маркеры, которые при взаимодействии с в-вами, присутствующими в человеческом
организме, начинали светиться. По тому, какие из этих лунок на пластинке светятся,
можно было судить о том, сколько и какие в-ва присутствуют в образце, который помещен
на эту пластинку. Метод экспресс диагностики.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Используется для анализа структуры ДНК. Тоже
экспресс метод. В тестовой смеси присутствуют определенные затравки – короткие
последовательности кода, которые, соединяясь к одной из цепей в образце, начинали
увеличиваться в кол-ве. Т.к. к этим затравкам были прикреплены маркеры, то чем больше
они присоединялись, тем интенсивнее будет свечение. Об интенсивности можно было
судить по наличию последовательности аминокислот.

6. Происхождение биолюминесценции.

Большинство люциферинов представляет собой измененные или совсем не измененные

коферменты, участвующие в окислительно-восстановительном метаболизме. Произошло
это под действием того, что реакция свечения более предпочтительней

реакции окисления. Иногда люциферин и люцифераза ( а также такой кофактор,как

кислород) могут образовывать комплекс – фотопротеин. К этой молекуле подходят ионы
Са ,провоцирующий реакцию с выделением света.

7. Собственное свечение тканей и клеток. Митогенетические лучи. Опыты Гурвича.

Митогенетические лучи – очень слабое ультрафиолетовое излучение клеток, которое

индуцирует деление окружающих клеток – впервые были обнаружены А.Г. Гурвичем.

Сверхслабое свечение (собственная хемилюминесценция клеток и тканей) практически

всегда сопровождает процессы жизнедеятельности. Этот вид хемилюминесценции в
большинстве случаев отличается крайне низкой интенсивностью, однако некоторые
вещества, которые в отечественной литературе принято называть активаторами
хемилюминесценции (в англоязычной литературе используется термин enhancer), обладают
способностью усиливать хемилюминесценцию, иногда во много тысяч раз. Такая
хемилюминесценция называется активированной.

Слабое свечение возникает при образовании свободных радикалов при действии ряда
физических факторов на объект: при облучении ионизирующей радиацией
(радиохемилюминесценция), после облучения ультрафиолетом или видимым светом
(фотохемилюминесценция), при пропускании электрического тока
(электролюминесценция), при действии ультразвука (сонолюминесценция), при
воздействии сил трения (триболюминесценция).

8. История изучения слабого свечения тканей и клеток животных и человека

Борис Тарусов, 1961 год. Он поместили поместил живую мышь перед фотоумножителем и
измерили люминесценцию с поверхности мышиной печени. Было обнаружено, что после
облучения животного гамма-лучами люминесценция увеличивалась в несколько раз.
Экстракт липидов печени также обнаруживал хемилюминесценцию, при этом
интенсивность хемилюминесценции резко увеличивалась после облучения
ионизирующими лучами.

Период с 1958 по 1972 годы можно назвать “русским периодом” - сообщения о

ферментативной и неферментативной хемилюминесценции в микросомах печени.

В период между 1977 и 1983 годами серия научных работ Б. Чанса (США).

9. Опишите основные элементы аппаратуры для измерения хемилюминесценции.

Раствор или суспензия клеток помещаются в кювету, в которой поддерживается

определенная температура и осуществляется перемешивание для лучшего снабжения
кислородом. В кювету по ходу опыта вводят различные добавки и отбирают пробы для
химического анализа. Свет ХЛ измеряют с помощью чувствительного прибора -
фотоумножителя (ФЭУ), электрический сигнал от которого усиливается, а затем
обрабатывается и записывается. В настоящее время для обработки и записи сигналов
используют персональные компьютеры.

Слабое свечение можно изучать не только в растворах или суспензиях клеток, но и на

целых органах в составе организма. Наиболее важные части комплекса - это совершенно
непроницаемый для света ящик, в который помещают лабораторное животное, например
крысу, и высокочувствительный приемник света - фотоумножитель, соединенный через
усилитель и другие промежуточные устройства с самопишущим потенциометром или
персональным компьютером. Аналогичную конструкцию используют для изучения
свечения изолированных органов, например перфузируемого легкого или сердца.
Добавляя в перфузионную жидкость ингибиторы или активаторы определенных реакций,
можно судить о природе химических реакций, сопровождающихся свечением.

10. Опыты Б.Н. Тарусова и сотрудников по изучению сверхслабого свечения органов

животных.

Борис Тарусов, 1961 год. Он поместили поместил живую мышь перед фотоумножителем и
измерили люминесценцию с поверхности мышиной печени. Было обнаружено, что после
облучения животного гамма-лучами люминесценция увеличивалась в несколько раз.
Экстракт липидов печени также обнаруживал хемилюминесценцию, при этом
интенсивность хемилюминесценции резко увеличивалась после облучения
ионизирующими лучами.

11. Перечислите химические реакции, ответственные за сверхслабое свечение животных

тканей.

Реакции активных форм кислорода: НOOH - пероксид водорода, •ОО- - супероксид-

радикал, •ОН - радикал гидроксила, O2 - сигнлетный кислород

Свободнорадикальное (=цепное, перикисное) окисление липидов ( = липопероксидация,

ПОЛ, ЛПО ) : LOOH - гидропероксид, LOO• - диоксил-радикал, LO• - алкоксил радикал
=активные формы липидов

12. Что такое свободный радикал? Что такое катион-радикал, анион-радикал, нейтральный
радикал? Примеры

Свободный радикал - химически активная частица, на внешней электронной оболочке

которой имеется один неспаренный электрон ( стремится вернуть недостающий электрон,
отбирая его у других молекул, с которыми он сталкивается)

Радикал, то есть частица с неспаренным электроном на внешней орбитали, может быть

электронейтральным ( радикал фенилаланина, липипдные радикалы) , положительно
(катион-радикал: радикал тирозина в кислой среде, радикал триптофана) или
отрицательно (анион-радикал: супероксид-радикал, гипохлорит, радикал гидропероксида)
заряженным

13. Классификация свободных радикалов

14. Основные методы изучения радикалов

Методы биохимические (диеновая конъюгация, биомаркерный и ингибиторный анализ) и

биофизические (электронный парамагнитный резонанс и хемилюминесценция)

Диеновая конъюгация: в мембранах и липопротеинах крови содержится много

полиненасыщенных жирных кислот, которые имеют двойные связи, разделённые
метильным мостиком.

1 стадия - атака молекулы кислоты радикалом ( •OH или липидный радикал ). Атакуется
углерод в альфа-положении, с ним водороды связаны слабее (согласно кванто-
механическим законам)

2 стадия - протон от этого атома переходит к радикалу, вследствие чего на атоме углерода
кислоты остаётся неспаренный пи-электрон

3 стадия - молекулярный кислород атакует радикал кислоты. Термодинамически выгодно,

чтобы в результате реакции образовалась система сопряжённых двойных связей, что и
происходит при атаке крайнего углеродного атома в системе. Появляется новый радикал
•СОО, причём неспраенный электрон принадлежит кислороду. Оставшиеся 4 пи-электрона
образуют сопряженную систему - диеновая конъюгация ( поглощают в коротковолновом
УФ при 234нм, а просто двойные связи при нее 200 нм )

Плюс данного метода в том, что 100% будет образован свободный радикал

Биомаркерный анализ

Биомаркер - хим вещество (достаточно устойчивое, так как состоит из молекул, а не из

радикалов), которое появляется в биологической жидкости (кровь, моча, слюна) больного
в результате развития патологии

Биомаркеры образуются в результате атаки свободными радикалами биологически

важных соединений: белков, нуклеиновых кислот, липидов.

Ингибиторный анализ

В систему вводят вещество - ингибитор, которое перехватывает радикал и смотрят на

последствия (супероксиддисмутаза ингибирует действия супероксида)

СЕМИНАР

1. Схема разветвлённой цепной реакции перекисного окисления липидов

2. Какие реакции обрыва цепей вам известны?

3. Стадии хемилюминесценции в липидосодержащих суспензиях, инициированной ионами

Fe 2+

1. Быстрая вспышка хемилюминесценции

2. Латентный период - когда мы не видим свечение

3. Медленная вспышка хемилюминесценции

4. Стационарная хемилюминесценция

4. Основные уравнения реакций цепного окисления липидов. Скорость образования

липогидропероксида

7. Основные принципы упрощения схемы реакций цепного для расчета кинетики сложных
процессов. Примеры

1 правило: скорость нескольких последовательных реакций равна скорости самой

медленной из них

2 правило: скорость нескольких параллельных реакций в наибольшей мере определяется

самой быстрой из них. Скоростями остальных реакций иногда можно пренебречь.

Примеры:

2) O2 + L• -> LOO•; 3) LH + LOO• -> L• + LOOH;

O2 + L• (+ LH) -> LOOH + L•

4) Fe2+ + LOOH -> Fe3+ + LO• + OH-; 5) LO• + LH -> LOH + L•;

Fe2+ + LOOH (+ LH) -> Fe3+ + L•

8. Упрощение схемы реакций цепного окисления липидов до системы из 5 реакций.

На кинетику процесса не влияют продукты, концентрации которых постоянны или которые

не участвуют в дальнейших реакциях. Поэтому их концентрации не фигурируют в
дальнейших уравнениях - выделены зелёным.

9. Алгоритм расчета кривых кинетики реакции на ЭВМ

1 этап. Составляем минимальную систему уравнений химических реакций (зеленые

вещества можно игнорировать)

2 этап. Находим начальные скорости частных реакций.

3 этап. Находим начальные скорости изменения концентраций реагентов. (Концентрации и

скорости хим реакций относятся к нулевому времени)

4 этап. Находим изменение концентрации за время дельта-t

Для малых приращений считаем дельта-t=dt и

насчитываем приращение концентраций за время
дельта-t как произведение скоростей реакций за
дельта-t.

5 этап. Находим концентрацию в момент времени.

6 этап. Многократно повторяем этапы 2-5.

3 СЕМИНАР

1. Аналитическое решение уравнений кинетики ПОЛ. Дальнейшее упрощение системы

реакций от 5 до 3.

Скорость нескольких параллельных реакций в основном определяется самой быстрой из

них.

Упрощение 1: Скорость образования радикалов L• определяется двумя параллельно

идущими реакциями:

Но при наличии LOOH скорость последней реакции гораздо выше, чем первой ( так как
выход p радикалов LO• обычно бывает очень низким ). Поэтому основная масса радикалов
образуется в реакции разветвления цепей:

Упрощение 2: Скорость реакции обрыва цепей определяется 2 параллельно идущими

реакциями:

При наличии Fe 2+скорость первой реакции гораздо выше, чем второй. Поэтому пока есть
Fe, основная реакция обрыва цепи - это реакция:

Схема из 3 реакций:

2. Дифференциальное уравнение в кинетики в системе 3 реакций. Стационарное

приближение Боденштейна - Семёнова (условия его применения)

3. Зависимость скорости реакции пероксидации от концентрации железа. Понятие

критической концентрации железа.

4. Триггерная функция железа. Железо как про- и анти- оксидант.

Лекция

1. Клеточная хемилюминесценция. Какие клетки используются, как проводятся

измерения? Основные узлы прибора. Форма кривых и от чего зависит.

Клеточная хемилюминесценция - хемилюминесцентное свечение, связанное с

образованием свободных радикалов отдельными типами клеток и обусловленное
специфическим ответом этих клеток на определенный раздражитель или стимул.

Применяется в основном для оценки функционального состояния фагоцитирующих клеток

крови (Примеры применения: активность фагоцитов, действие токсических веществ,
действие света (лазера), лекарственная несовместимость) и заключается в том, что
специфическим ответом этих клеток на стимул или раздражитель является увеличение
продукции свободных радикалов и активных форм кислорода (АФК) – кислородный взрыв.(
Принцип метода: Реакции при стимуляции клеток, активаторы свечения).

В качестве клеточных стимулов и раздражителей используются:

А) Физико-химические стимулы – латекс, сульфат бария, электропорация

Б) Химические стимулы - Ca2+ ионофоры, иммунные комплексы, fMLP, FMA, поверхность

апоптотических клеток.

2. Активаторы хемилюминесценции, используемые при изучении клеток крови. Принцип их

действия и специфичность.

Химические активаторы - соединения, вступающие в химические реакции с активными

формами кислорода или органическими свободными радикалами, в ходе которых
образуются молекулы продуктов в возбужденном электронном состоянии. Наблюдаемое
при этом свечение связано с переходом молекул в основное состояние, что приводит к
высвечиванию фотонов. Хорошо известными представителями таких активаторов могут
служить люминол и люцигенин.

Под действием окислителя (радикала гидроксила, ClO−) происходит образование радикала

люминола, который затем вступает в реакцию с супероксидным радикалом, образуя
внутреннюю перекись (диоксид). Ее разложение приводит к образованию возбужденной
молекулы 3-аминофталата. Переход этой молекулы в основное состояние сопровождается
испусканием кванта света.

Свечение при этом имеет высокую интенсивность. Большей избирательностью отличается

люцигенин, свечение которого происходит при восстановлении красителя супероксидными
радикалами. Это соединение часто используют для изучения образования супероксидных
радикалов различными клетками и биохимических реакциях в пробирке.

Физические активаторы не вступают в химические реакции и не влияют на ход реакций,

сопровождающихся свечением, но тем не менее многократно усиливают интенсивность
хемилюминесценции за счет физического процесса переноса энергии на молекулу
активатора, которая обладает высоким квантовым выходом люминесценции. В основе их
действия лежит физический процесс переноса (миграции) энергии с молекулы продукта
хемилюминесцентной реакции на активатор.

Интенсивность свечения при реакциях хемилюминесценции зависит от трех параметров:

скорости химической реакции, которая сопровождается свечением,вероятности
образования молекулы продукта в электронно-возбужденном состоянии (квантовым
выходом возбуждения) и вероятности высвечивания фотона при переходе возбужденной
молекулы продукта в основное состояние (квантовый выход люминесценции).

Они увеличивают величину квантового выхода испускания фотона возбужденной

молекулой продукта. В обычных реакциях свободных радикалов эта величина довольно
мала, отчего и сама неактивированная хемилюминесценция имеет очень низкую
интенсивность, и ее часто называют сверхслабым свечением.

К физическим активаторам можно отнести: производные кумарина - С-525, С-314

3. Хемилюминесценция нейтрофилов крови различных групп больных.

Гранулоциты и моноциты в крови и тканевые макрофаги в целях борьбы с чужеродными

клетками выделяют так называемые активные формы кислорода, к которым относятся
супероксидный радикал пероксид водорода (H2O2), радикал гидроксила (●OH). При этом
наблюдается очень слабая хемилюминесценция, которая усиливается в тысячи раз в
присутствии люминола (или люцигенина).

Такие же хемилюминесцентные ответы можно получить, если добавить к лейкоцитам крови

суспензию бактерий, изолированные оболочки дрожжевых клеток, кристаллы кварца или
сульфата бария, а также определенные химические соединения. Все эти агенты получили
собирательное название стимулов.

Стимулированная ХЛ клеток в присутствии люминола - ценный показатель

функционального состояния фагоцитов крови и тканей, их способности производить при
необходимости активные формы кислорода, то есть выполнять свою защитную функцию.
Эта способность обычно усиливается при возникновении в организме очагов воспаления.
То бишь при гипоксии, связанной с общим ослаблением организма, активность фагоцитов
и ХЛ-ответы снижается, а с увеличением очага воспаления растет интенсивность
хемилюминесценции.

4. Метод измерения хемилюминесценции клеток, осаждаемых на адсорбенте.

Адсорбент можно осадить и затем определить в осадке (после дополнительных обработок)

количество меченого антигена. Количество ХЛ осажденных лейкоцитов также укажет на
наличие гипоксии или воспаления и их степень.

5. Электропорация клеток крови. Принцип метода и его применение.

Подготавливались четыре образца суспепзии эритроцитов в 0,9 % растворе хлористого

натрия. Первый образец служил контролем; второй подвергали воздействию импульсного
электрического поля, которое вызывало гемолиз эритроцитов. Третий образец подвергали
воздействию гамма излучения и последующему действию импульсного электрического
поля; четвертый же только облучали. Затем сравнивали кинетику гемолиза эритроцитов во
всех случаях. Гамма излучение, действуя на мембраны эритроцитов и разбавленную
плазму крови, вызывало скрытые повреждения мембран. Импульсное электрическое поле,
воздействуя на мембраны после облучения. проявляло их скрытые повреждения, изменяя
кинетику гемолиза эритроцитов.

Приготовленные образцы суспензии крови человека подвергались воздействию у-

излучения в широком диапазоне доз. Дозу облучения устанавливали путём варьирования
времени облучения. После чего суспензию термостатировали при температуре 20°С,.
Затем суспензию выдерживали некоторое время. для тою чтобы возникшие повреждения
мембран могли развиться, также для того чтобы проследить эволюцию их повреждений во
времени. После чего облученные образцы, получившие различные дозы, подвергали
воздействию импульсного электрического поля для выявления скрытых повреждений
мембран.

Лекция

1. Электронные переходы в молекулах ароматических аминокислот ( на примере

триптофана) при поглощении света, флуоресценции, фосфоресценции, фотоионизации,
термолюминесценции

После поглощение кванта света триптофаном наблюдается флуоресценция (максимум при

330 нм) и фосфоресценция (максимум при 435 нм). Но электрон может перейти с верхней
орбитали возбужденной молекулы в окружающую среду, где будет захвачен молекулами
растворителя ( сольватированный электрон, es). Сольватированный электрон устойчив
лишь при низких температурах (ниже 77К). При нагревании даже до 100К он возвращается
на триплетный уровень возбужденной молекулы (Т1) и наблюдается свечение, по спектру
близкое к фосфоресценции - термолюминесценция.

2. Почему при термолюминесценции триптофана свечение происходит с триплетного, а не

с синглетного возбужденного уровня?

Фото

3. Что такое фотоиндуцированная хемилюминесценция? Различие спектров

термолюминесценции и фотоиндуцированной люменисценции УФ-облученных
ароматических аминокислот.

Фотоиндуцированная хемилюминесценция: при освещении красным светом (>600 нм)

сольватированный электрон переходит на синглетный уровень возбужденной молекулы
(S1) и наблюдается свечение, по спектру близкое к флуоресценции.

Спектр термолюминесценции близок к спектру фосфоресценции и не имеет полосы

флуоресценции.

Спектр фотоиндуцированной люменисценции совпадает со спектром флуоресценции.

4. Правило Одюбера и его объяснение.

Энергия фотонов представляет собой сумму энергии активации хемилюминесценции (Ea) и

энтальпию химической реакции (дельта Н).

5. Первичные фотофизические и фотохимические процессы при действие УФ-излучения на

белки. Электронные переходы в ароматических аминокислотах.

1 вопрос - электронные переходы.

6. Фотоиндуцированная люменисценция.

Фотоиндуцированная хемилюминесценция: при освещении красным светом (>600 нм)

сольватированный электрон переходит на синглетный уровень возбужденной молекулы
(S1) и наблюдается свечение, по спектру близкое к флуоресценции.

7. Первичные фотопродукты триптофана.

8. Нейтральные радикалы, образующиеся при фотоионизации фенилаланина и

триптофана.

3. Закон Бугера-Ламберта-Бера

Согласно теории мишеней, каждая молекула характеризуется эффективными сечением S -

поперечным сечением поглощения , при попадании в которое происходит поглощение
фотона

Закон: основной закон поглощения света веществом, из которого следует, что Т

( непосредственно измеряемое пропускание ) и 1-Т ( коэффициент поглощения ) зависят от
концентрации растворов (n или с) и длины оптического пути - l (эль) экспоненциально.

Применение закона: при количественном анализе можно одновременно определять

концентрацию нескольких веществе, если спектры их поглощения различаются по форме.
Суммарный спектр поглощения А нескольких спектров есть простая сумма спектров
поглощения компонентов, так как при всех длинах волн оптические плотности
компонентов суммируются.

1. Что такое активные формы кислорода?

Активные формы кислорода - молекулы с высокой реакционной способностью благодаря

наличию неспаренного электрона на внешнем энергетическом уровне, т.е. являющиеся
радикалами.

2. Образование супероксидного радикала клетками-фагоцитами

Фагоциты (а именно гранулоциты, моноциты и тканевые макрофаги), встретив чужеродную

частицу (например, бактерию), прикрепляются к ней и начинают выделять активные формы
кислорода, первая из которых - супероксидный радикал. Супероксидный радикал
образуется в результате переноса электрона от НАДФН-оксидазного комплекса,
встроенного в мембраны фагоцита, на растворённый молекулярный кислород. При этом
каждая молекула НАДФН, окисляясь, отдаёт 2 электрона в цепь переноса электронов, а
каждый из электронов присоединяется к молекуле кислорода, в результате чего и
образуется супероксидный радикал, который затем превращается в пероксид водорода
(фермент СОД) и гипохлорит (фермент миелопероксидаза), которые разрушают
бактериальную стенку и убивают бактерию.

3. Место и условия образования суперкосидного радикала в дыхательной цепи

митохондрий.

При патологии митохондрии тратят до 30% от всего потребляемого кислорода для

образования супероксидного радикала. ( в норме митохондрии тратят 98-99% кислорода
на окисление органических веществ)

Точный механизм образования супероксидного радикала в митохондриях недостаточно

выяснен. По-видимому, он может образовываться не в одном, а в нескольких местах
дыхательной цепи в результате прямого переноса электрона на молекулярный кислород с
одного из переносчиков в цепи. Предполагалось, что донором электрона может служить
радикал коэнзима Q - убисемихинон. Он образуется во внутренней мембране
митохондрий. Коэнзим Q восстанавливается по одноэлектронному механизму, образуя
полувостановленную форму - убесимихинон-радикал. Второй электрон переводит этот
радикал в полностью восстановленный гидрохинон. При увеличении концентрации
убесимихинона (при введении антимицина А, который тормозит восстановление в убихинон
QH2) увеличивается выделение супероксида митохондриями. Уменьшение образования
радикалов убихинона путём торможения миксотиазолом оттока электронов на FeS,
приводит к снижению продукции супероксида.

В модельных опытах супероксид более активно образуется в дыхательной цепи в реакции

с радикалом Флавина в составе ФАД, который появляется при одноэлектронном
восстановлении окисленного флавина. При нарушении структуры белков-переносчиков
электронов в следствие генетических мутаций, содержащих ФАД (например,
сукцинатдегидрогеназа комплекса 2) , на молекуле ФАД накапливаются электроны, то есть
увеличивается концентрация флавиновых радикалов и образование супероксидов.

4. Основные реакции метаболизма суперкосида в норме

5. Основные реакции метаболизма супероксида в патологии.

6. Мишени повреждающего действия гидроксил-радикала.

Радикалы гидроксила оказывают повреждающее, мутагенное или летальное действие на

живые клетки из-за своей исключительно высокой реакционной способности

• Вызывают разрывы нитей ДНК и окисляют нуклеотиды.

•Денатурируют белки и инактивируют ферменты.

•Инициируют цепное окисление липидов в биологических мембранах и липопротеинах

крови.