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Quintanar Escorza, Martha Angélica; Calderón Salinas, José Víctor

LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL. BASES Y APLICACIONES


Revista de Educación Bioquímica, vol. 28, núm. 3, septiembre, 2009, pp. 89-101
Universidad Nacional Autónoma de México
Distrito Federal, México

Disponible en: http://redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=49016098004

Revista de Educación Bioquímica


ISSN (Versión impresa): 1665-1995
reb@bq.unam.mx
Universidad Nacional Autónoma de México
México

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www.redalyc.org
Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
89 REB 28(3): 89-101, 2009

LA C APACIDAD A NTIOXIDANTE TOTAL.


BASES Y A PLICACIONES*
Martha Angélica Quintanar Escorza 1 y José Víctor Calderón Salinas 2

RESUMEN ABSTRACT
Los organismos han desarrollado sistemas de defensa Organisms have developed systems antioxidant defense
antioxidante para hacer frente a la atmósfera oxidativa systems to deal with the planet oxidative atmosphere and
del planeta y al metabolismo oxidativo que permitió la with the oxidative metabolism. These systems allowed
evolución de la vida. Lo que permitió alcanzar eficientes evolution of life in this antioxidant defense to confront to
sistemas amortiguadores antioxidantes que mantienen la the atmosphere oxidative of the planet and to the oxidative
capacidad de reducir a los radicales libres, las especies metabolism that allowed evolution of life in that
reactivas y los oxidantes endógenos y exógenos. Estos atmosphere, reaching efficient buffer antioxidant systems
sistemas amortiguadores antioxidantes desembocan, se that conserve capacity to reduce free radicals, reactive
regeneran y se cargan de hidrógenos y electrones a través species and endogenous and exogenous oxidants. These
del sistema de glutatión-NADPH y de la reducción de buffer antioxidant systems lead into the system of
NADP+ a partir del metabolismo. De tal forma las enzimas glutatión-NADPH and with NADP+ reduction from the
antioxidantes, los cosustratos antioxidantes y los metabolism, where regenerate and load hydrogens and
antioxidantes endógenos y exógenos generan barreras para electrons. Of such a form antioxidant enzymes, antioxidant
conducir la reducción de los oxidantes y disminuir así su cosustrates and antioxidant endogenous and exogenous
potencia oxidativa, con lo que se hace frente a la variedad generate barriers to take the reduction of the oxidants and
de diversas especies y formas oxidativas capaces de to diminish this way their oxidative power, with what there
agredir al organismo. Los sistemas antioxidantes se are confront the varieties of diverse species and oxidative
pueden medir de diferentes formas específicas y el sistema forms capable of attacking to the organism. The
amortiguador antioxidante global se puede evaluar con antioxidant systems can measure up of different specific
las pruebas de capacidad antioxidante total. La mejora forms and the global buffer antioxidant system can
tecnológica e interpretativa de estos métodos ha permitido measure up to the tests of total antioxidant capacity; the
profundizar en el conocimiento básico de las formas de technical and interpretive improvement of these
defensa de la célula, ha multiplicado los estudios de technologies allowed to profounder into the basic
capacidad antioxidante desde sustancias puras hasta knowledge of the forms of defense of the cell, it has
organismos complejos, sirviendo incluso para métodos multiplied the studies of antioxidant capacity from pure
diagnósticos y de evaluación de la efectividad de los substances up to complex organisms, serving even for
tratamientos. diagnostic methods and evaluation of the efficiency of
treatments.
PALABRAS CLAVE: Radical libre, daño oxidativo,
antioxidantes, oxidación, redox, estrés oxidativo. KEY WORDS: Free radical, oxidative damage,
antioxidants, oxidation, redox, oxidative stress.

La oxidación y los agentes oxidantes de hidrógenos o la ganancia de oxíge- trario; es decir, la ganancia de elec-
Químicamente la oxidación de un no en una molécula. La reducción de trones, de hidrógenos o la perdida de
compuesto es la pérdida de electrones, un compuesto es exactamente lo con- oxígeno. En tal sentido, un agente

*Recibido: 22 de enero de 2009 Aceptado: 11 de agosto de 2009


1
Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad Juárez del Estado de Durango, Av. Universidad y Fanny
Anitua S/N, Durango, Dgo. Mex. C.P. 34000. 2Departamento de Bioquímica, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados.
Av. IPN 2508, Zacatenco, Delegación Gustavo A. Madero, AP 14-740 México 07000 D.F. Tel (01-55) 5747-3955. Correo E:
aquintanar69@hotmail.com, jcalder@cinvestav.mx
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oxidante es una molécula que se re- ción de productos oxidantes del meta- orbitales externos y es capaz de tener
duce al reaccionar con la molécula a bolismo, especies reactivas de oxíge- una existencia independiente; sin em-
la cual oxida. Este par oxido-reductor no y en muchas ocasiones radicales bargo, es muy reactivo ya que tiende
es necesario químicamente y esencial libres. Numerosas reacciones en las a reducirse, es decir, sustrae un elec-
para entender la biología de las óxi- células implican oxidaciones, en prin- trón de átomos o moléculas estables,
do-reducciones en el organismo. cipio todas las degradaciones para ob- a las cuales oxida, con el fin de alcan-
Las macromoléculas de importan- tener energía y muchas reacciones del zar su propia estabilidad. Una vez que
cia biológica (proteínas, ácidos metabolismo intermedio (3). el radical libre ha conseguido el elec-
nucleicos, carbohidratos y lípidos) son De igual forma, múltiples xeno- trón que necesita para aparear a su
moléculas nucleofílicas que tienen bióticos ejercen sus efectos, general- electrón libre, la molécula estable que
electrones susceptibles de compartir, mente tóxicos, sobre la célula por pro- pierde el electrón se oxida y deja a
es decir, tienen electrones en orbitales cesos oxidativos inducidos por la pro- otro electrón desapareado, lo que la
superficiales que pueden ser captura- pia molécula xenobiótica o por el me- convierte a su vez en un radical libre,
dos (oxidación) o compartidos en una tabolismo para su biotransformación. iniciándose y después propagándose
reacción nucleofílica para formar Este tipo de ambiente hace necesa- de la misma manera, generando así
compuestos o aductos. rio que las células mantengan sistemas una reacción en cadena (5).
Los oxidantes son compuestos de amortiguamiento reductor, para
electrofílicos especies que tienen avi- poder aprovechar los beneficios del Tipos de radicales libres
dez por los electrones y que tienen metabolismo oxidativo y a su vez li- Los radicales libres de importan-
afinidad para reaccionar con mitar al máximo los daños severos (4). cia biológica pueden clasificarse
macromoléculas nucleofílicas, mu- como:
chas de ellas de la mayor importancia Los radicales libres 1.- Especies reactivas de oxígeno
biológica (1). La mayor parte de los compuestos quí- (ERO). Las principales son el oxíge-
Las especies reactivas de oxígeno micos de importancia biológica están no molecular (O2), el ozono (O3) y el
(ERO) y nitrógeno (ERN), son un formados por átomos unidos por enla- oxígeno en singulete (O21), así como
subgrupo de moléculas oxidantes, que ces covalentes, en estos enlaces dos las especies de oxígeno que están par-
como su nombre lo indica son alta- átomos comparten un par de electro- cialmente reducidas; esto es, el anión
mente reactivas. Otro subgrupo son los nes en un orbital molecular y cada superóxido (O2 ) el peróxido de hidró-
radicales libres que no solo tienen alta electrón muestra una rotación o giro geno (H2O2), hidroperoxilo (HO2 ) y
reactividad y capacidad oxidativa, opuesto a su par. En las células se lle- el radical hidroxilo ( OH). Estas es-
sino que adicionalmente pueden ge- van a cabo reacciones químicas que pecies son producto de la ruptura o
nerar reacciones oxidativas en cade- rompen estos enlaces de manera de la excitación del O2 y son más
na. Los radicales libres en particular heterolítica, haciendo que una de las reactivos que el O2 en su estado basal.
y las especies reactivas en general, partes conserve dos electrones y la otra El peróxido de hidrógeno, no es un
participan en algunas funciones bio- tenga deficiencia de dos electrones, lo radical libre pero está estrechamente
lógicas (proliferación celular, diferen- cual genera compuestos estables relacionado con la producción de ra-
ciación celular, fagocitosis, metabolis- nucleofílicos o electrofílicos, respec- dicales porque es el principal precur-
mo, reacciones inflamatorias) y se tivamente, que son los conocidos sor del radical hidroxilo. Estas ERO
encuentran involucradas en diversas aniones y cationes. son moléculas altamente reactivas que
patologías (2). Sin embargo, algunas reacciones atacan constantemente al organismo
químicas, las radiaciones electromag- mediante reacciones bioquímicas de
El ambiente oxidativo néticas y otros factores, pueden rom- oxido-reducción, que ocurren como
La mayoría de las células y organis- per estos enlaces de la forma llamada parte normal del metabolismo celular
mos de nuestro planeta se enfrentan a homolítica, proceso después del cual o por factores patológicos.
ambientes con agresores oxidativos. cada parte conserva un solo electrón 2.- Metales de transición. Los elemen-
Todo inicia con el empleo del oxíge- que estará desapareado, generándose tos del primer periodo de la serie "d"
no como la molécula oxidante final del así las especies químicas llamadas ra- de la tabla periódica (Fe, Mn, Co, Ni
metabolismo aeróbico y oxidativo, el dicales libres. y Cu) pertenecen a los llamados me-
cual realizan la mayoría de los orga- En forma general, un radical libre tales de transición, tienen la caracte-
nismos del planeta. Ello hace que las es un átomo o molécula que tiene uno rística de llegar a ser estables por si
células mantengan una alta concentra- o más electrones desapareados en sus mismos sin necesidad de reaccionar
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con otro elemento, esto es, cuando a mitir que algunas moléculas puedan fican las bases nitrogenadas, lo que
su último nivel de energía le faltan difundir y actuar en orgánulos o célu- induce mutaciones y carcinogénesis, ya
electrones para estar completo los uti- las vecinas, tal es el caso del H2O2 y sea por la pérdida de expresión o por
liza de los niveles o subniveles inter- del NO . la síntesis de una proteína alterada.
nos, con lo cual logra su estabilidad,
la falta de electrones en el nivel de Daño inducido por radicales libres b) Daño a las proteínas. Las ERO pue-
donde los transfirió se compensa con Los radicales libres producidos en den inducir en el extremo la fragmen-
otros electrones de otro nivel o cantidades moderadas en los organis- tación de proteínas, pero además exis-
subnivel, y así sucesivamente: a este mos pueden ser neutralizados por el ten una serie de alteraciones que pue-
fenómeno se le llama transición elec- propio sistema. Ante un determinado den modificar notablemente su fun-
trónica. La mayoría de los metales de insulto oxidativo, los organismos sue- ción, modificando con ello el metabo-
transición tienen electrones len adaptarse rápidamente. En gene- lismo, la estructura, el transporte, los
desapareados y precisamente gracias ral, una agresión oxidante de baja in- receptores, las proteínas reguladoras y
a esta transición pueden existir en for- tensidad hace que una célula pueda los inmunorreguladores, entre otros.
ma de radical libre. resistir posteriormente condiciones Los radicales libres de oxígeno, pueden
3.- Otros radicales libres. Entre los que más oxidantes. reaccionar directamente con el ligando
se encuentran los radicales libres de Sin embargo, las ERO que se pro- metálico de muchas metaloproteínas.
nitrógeno; tales como, el óxido nítri- ducen y escapan a los sistemas de de- Debido a la reactividad de las ERO con
co (NO ) y el dióxido nítrico (NO2 ). fensa, producen continuamente irre- las moléculas insaturadas o residuos
El NO es un radical muy reactivo y mediables daños a los carbohidratos, de proteínas que contienen azufre,
de importancia fisiológica puede oxi- al ADN, a las proteínas y a los lípidos además de aminoácidos tales como,
dar y dañar, pero es esencial en fun- que alcanzan. Las consecuencias de triptofano, tirosina, fenilalanina,
ciones biológicas complejas como son las reacciones de los radicales libres histidina, metionina sufren oxidacio-
la neurotransmisión y neurorregu- con los diferentes compuestos celula- nes que provocan entrecruzamientos
lación del sistema nervioso, así como res pueden ser muy variadas, pero y fenómenos de agregación; en el caso
en procesos de agregación plaquetaria siempre de importancia biológica y de los residuos de cisteína estos fenó-
y coagulación sanguínea, con el O2 ge- con consecuencias irremediables a menos se ven favorecidos por la for-
nera NO 2 y con el O 2 forma corto, mediano o largo plazo. mación de puentes disulfuro intra e
peroxinitrito (ONOO-). Este tipo de intermoleculares. Mientras que en los
ERN son capaces de generar daño a) Daño al ADN. Los radicales libres aminoácidos prolina, arginina y lisina,
oxidativo y muerte celular. Existen pueden causar entrecruzamiento de las especies reactivas de oxígeno pue-
otros radicales libres que tienen dife- proteínas-ADN, intercambio de den generar derivados de tipo
rente naturaleza como el ión cromátidas hermanas, daño a la estruc- carbonilo. El OH convierte a la
hipoclorito (ClO ) y el radical tura de la desoxirribosa-fosfato, oxi- fenilalanina en o-tirosina y el NO .
triclorometilo ( CCl3) este último pro- dación de las bases nitrogenadas, con- transforma la tirosina en nitrotirosina.
ducido durante el metabolismo del versión de bases (la desaminación de El H 2 O 2 modifica los grupos
CCl4 por el citocromo P450. la citosina en uracilo y de la 5- sulfhidrilos de algunas cisteínas, de
La reactividad química de los di- metilcitosina en timidina), aperturas manera que se pueden formar ácidos
ferentes tipos de radicales libres es va- de anillos, liberación de bases, rom- sulfénicos, sulfínicos y sulfónicos.
riable pero siempre elevada y de baja pimiento de cadenas (una o dos he-
especificidad. La vida media biológi- bras). El OH puede atacar tanto las c) Daño a los lípidos. La oxidación de
ca del radical libre es de no más de purinas como las pirimidinas; el O21 los lípidos membranales provoca pér-
microsegundos, ya que puede reaccio- es más selectivo y generalmente pro- dida de la permeabilidad, la fluidez y
nar rápidamente con todo lo que esté duce sólo aductos de guanina, sobre la integridad de las membranas (la
a su alrededor, pudiendo provocar un todo 8-hidroxiguanina (7). Debido al plasmática y de los orgánulos celula-
gran daño a macromoléculas y a es- mayor ambiente oxidativo de la res). Los ácidos grasos polinsaturados
tructuras supramoleculares como las mitocondria, el ADN mitocondrial de las membranas celulares y las
membranas (6). Diferentes radicales generalmente presenta un mayor nú- lipoproteínas son particularmente sus-
y especies reactivas tienen diferentes mero de modificaciones que el ADN ceptibles al ataque del radical
vidas medias, siempre muy bajas, pero nuclear. Los radicales libres y en ge- hidroxilo OH, del oxígeno singulete
algunas de ellas suficientes para per- neral las agresiones oxidativas modi- (O21) y del hidroperoxilo (HO2 ). Con
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esta reacción se forma un radical Mecanismos de defensa antioxidante ejemplo; el glutatión y el NADPH. El
lipídico que después de un rearreglo Para evitar que se desborde el insulto glutatión es un tripéptido (-glutamil-
molecular (dieno conjugado), puede oxidativo, las células y los organismos cisteinil-glicina) con gran facilidad
reaccionar con el oxígeno para origi- aeróbicos requieren generar y mante- para ceder electrones (muy
nar el radical peroxilo (R-OO ). Este ner defensas antioxidantes de manera nucleofílico) debido a su grupo
a su vez puede reaccionar con otros óptima e incrementarlas acorde al ta- sulfhidrilo (-SH) y su potencial redox;
ácidos grasos de la membrana, forman- maño de la agresión. una vez que queda oxidado se puede
do otros radicales lipídicos, transfor- Los mecanismos homeostáticos regenerar gracias a la enzima glutatión
mándose el mismo en hidroperóxido antioxidantes con los que el organis- reductasa (GR) que lo reduce con la
(R-OOH). El hidroperóxido, en presen- mo enfrenta el daño oxidativo son es- oxidación de NADPH. El NADPH tie-
cia de varios complejos metálicos, se pecíficos, afines, numerosos y diver- ne un potencial redox muy negativo y
puede descomponer en más radicales, sos; reflejando la necesidad de hacer por ende es un importante donador de
incluyendo entre ellos al OH, lo que frente a la multiplicidad de formas de electrones e hidrógenos, con lo que
provoca un fenómeno de expansión radicales libres y especies reactivas; puede pasar a NADP+ que en su for-
del daño y propagación de la también son numerosos los comparti- ma oxidada diversas enzimas lo em-
peroxidación. mientos donde actúan en el organis- plean como cosustrato (9).
En ausencia de iones metálicos mo y en las células.
los hidroperóxidos se pueden acu- Los mecanismos antioxidantes se d) Enzimas que regeneran sustratos o
mular en la membrana y con esto pueden clasificar de diversas formas, cosustratos antioxidantes. Por ejem-
alterar su función. También se pue- la siguiente se basa en las líneas de plo, las enzimas que regeneran al
den transformar en hidrocarburos defensa en el organismo: glutatión reducido, la vitamina E y el
volátiles, alcoholes o aldehídos NADPH. El glutatión se mantiene casi
(malondialdehído, entre otros), los a) Macromoléculas que acomplejan todo en forma reducida principalmen-
cuales pueden difundir lejos del lu- especies reactivas y evitan su acción. te a través de glutatión reductasa (GR),
gar donde se originaron, ocasionan- Por ejemplo, proteínas que acumulan una flavoenzima que gracias a la oxi-
do daños a otras macromoléculas. A o transportan metales de transición, dación del NADPH cataliza la reduc-
este fenómeno se le llama como la transferrina y la ción del glutatión oxidado (GSSG) a
lipoperoxidación y, en ausencia de ceruloplasmina o como el oxígeno, la glutatión reducido (GSH). La vitami-
algún proceso que la inhiba, puede hemoglobina y la mioglobina. na E al actuar como antioxidante se
provocar la rápida destrucción de la oxida a tocoferilquinona, para conti-
estructura lipídica de las membra- b) Enzimas antioxidantes con gran nuar su trabajo antioxidante se requie-
nas. Dentro del proceso de la afinidad para catalizar con altas velo- re que se reduzca nuevamente a vita-
lipoperoxidación, los radicales que cidades la reacción de reducción par- mina E, tal reducción la pueden llevar
se forman pueden causar también cial de una especie reactiva. Por ejem- a cabo el ascorbato (vitamina C) o el
daños a las proteínas membranales, plo: la superóxido dismutasa (SOD) glutatión con la catálisis de las
inactivando receptores o enzimas cataliza la dismutación del O2 a H2O2; enzimas tocoferilquinona reductasa o
unidas a las membranas. la glutatión peroxidasa (GPx) que es una GPx, respectivamente. El
una enzima dependiente de selenio y ascorbato se oxida a deshidroascorbato
d) Daño a los carbohidratos. Los cataliza la reducción del peróxido de y se puede reducir a ascorbato con
carbohidratos son dañados por los ra- hidrógeno (H 2O2) o lipoperóxidos NADPH o con GSH por enzimas ta-
dicales libres en menor proporción que (L-OOH); la glutatión sulfhidril les como las deshidroascorbato
otras moléculas. Azúcares tales como transferasa (GST) que cataliza el ata- reductasa (DAR) o por la glutatión
glucosa, manitol o ciertos desoxiazú- que nucleofílico del cosustrato GSH peroxidasa (GPx). El NADPH se re-
cares pueden reaccionar con el radi- sobre el centro electrófilo de un gran genera principalmente a través de la
cal hidroxilo para producir sustancias número de oxidantes y la catalasa vía de las pentosas a partir del NADP+
reactivas. Así mismo, los polisacáridos (CAT) que reduce el H2O2 a H2O (8). por acción de la deshidrogenasa de la
pueden sufrir el ataque de los radica- glucosa-6-P y la deshidrogenasa de
les libres, en este caso, fragmentán- c) Cosustratos antioxidantes, son em- gluconato-6-P; sin embargo, en algu-
dose en unidades más sencillas como pleados por las enzimas para poder nas células la enzima málica/NADP+
en el caso de la despolimerización del reducir parcialmente a los radicales (MDP) que oxida malato a piruvato
ácido hialurónico (1, 5). libres y las especies reactivas. Por puede contribuir a la formación de
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NADPH o bien obtenerse a partir de degradan un tramo de nucleótidos en a moléculas oxidantes para evitar su
la isocitrato deshidrogenasa citosólica una hebra alrededor de la región alte- acción en los sitios incorrectos o con
(IDPc) dependiente de NADP+ que rada, posteriormente una polimerasa altas concentraciones y que solo ejer-
cataliza la reacción de isocitrato a - de ADN y una ligasa de ADN reparan zan su acción oxidante en el sitio y
cetoglutarato. el tramo. reacción necesaria. El sistema de
Los enlaces tiol (sulfhidrilo) de las enzimas antioxidantes, se encuentra en
e) Antioxidantes endógenos. Los proteínas pueden ser nuevamente re- los sitios donde se producen los
antioxidantes son moléculas ducidos por la enzima tiorreductasa oxidantes (orgánulos o estructuras
nucleofílicas con gran afinidad y que (TR) empleando glutatión como do- supramoleculares), con la finalidad de
se comportan como compuestos muy nador de electrones y regulando siste- reducirlos parcialmente y con ello dis-
susceptibles para que los oxiden las mas efectores y de balances minuir o anular la capacidad
especies reactivas (electrofílicas); es oxidorreductores como señales electrofílica de los oxidantes. Para
decir, ofrecen electrones a las espe- intracelulares y como moléculas poder realizar la reducción de los
cies reactivas para evitar que estas ata- efectoras. La enzima metionina oxidantes se requiere tener un par re-
quen a las macromoléculas sulfóxido reductasa, reduce los ductor que se oxide, estos son los
nucleofílicas necesarias para la fun- sulfóxidos de metionina de las proteí- cosustratos antioxidantes, tales como
ción y estructura celular (proteínas, nas dañadas, en una reacción depen- el glutatión y el NADPH. Otro juego
lípidos, carbohidratos y ácidos diente del NADPH. de enzimas se encarga de la regenera-
nucleicos). Una vez que los radicales Los daños producidos por radica- ción los cosustratos de las enzimas
libres reaccionan con los antioxidantes les libres en términos generales mar- antioxidantes y de algunos antioxi-
se reducen parcialmente o se unen en can las proteínas para su degradación. dantes, lo que permite mantener la ca-
forma de aductos, reduciendo su El reconocimiento de los sitios oxida- pacidad de acción de las enzimas y el
reactividad y oxidando al dos o halogenados o bien la exposi- poder reductor antioxidante de la célu-
antioxidante. Ejemplos de estos ción de regiones hidrofóbicas deter- la. La otra línea de defensa son los
antioxidantes en los organismos son: minan la ubiquitinación de las proteí- antioxidantes endógenos y los
el glutatión, el NADPH, la albúmina, nas y su degradación en el proteosoma. exógenos, los cuales ofrecen electro-
el ácido úrico, la coenzima Q, la En el caso de los lipoperóxidos se pue- nes con gran afinidad para los
bilirrubina y la melatonina (9). den reducir mediante GPx de oxidantes y que estos reaccionen con
fosfolípidos o son eliminados a través el antioxidante en lugar de que reac-
f) Antioxidantes exógenos. Son de las fosfolipasas como la fosfolipasa cionen y oxiden a las macromoléculas.
antioxidantes que provienen de la die- A2, que aumenta su actividad durante Finalmente, cuando los anteriores sis-
ta, tales como la vitamina E (- la agresión oxidativa. temas no fueron suficientes y hay daño
tocoferol), la vitamina C (ácido El uso extensivo de sistemas de re- a macromoléculas se inicia un com-
ascórbico), el -caroteno (provitamina paración o el intenso daño al ADN plejo sistema de reparación, que pue-
A), el cobre, el selenio, el zinc, el puede inducir el proceso de apoptosis, de limitar y eventualmente reparar
manganeso, los polifenoles, los que visto de esta manera sería la muer- parcialmente el daño o enviar la
licopenos, los ácidos egálicos, los te por suicidio cuando la reparación macromolécula a destrucción y de ser
flavonoides, la quercitina, la es imposible o el daño fue extensivo, muy abundante el daño, someter la
hespiridina, las catequinas y los protegiendo al órgano y al organismo célula a apoptosis; tratando de evitar
taninos (10, 11). de daños locales y sistémicos, inclu- la carcinogénesis y un mayor daño al
yendo el desarrollo de células cance- órgano o al organismo (12, 13). To-
g) Sistemas de reparación. Son siste- rosas (12). dos estos mecanismos y respuestas
mas que tratan de recuperar la función condicionan el estrés oxidativo indu-
de las macromoléculas dañadas, repa- Sistema conjunto de protección cido por el insulto oxidativo y la cali-
rar el daño establecido o destruir la antioxidante dad y cantidad de ambos determina el
macromolécula que pudiera causar En la figura 1 se presenta, con fines daño oxidativo resultante (Fig. 1).
daño a la economía celular. Hay me- didácticos, una propuesta de acción
canismos de reparación específicos conjunta de la función de los sistemas Sistema amortiguador antioxidante
que sustituyen las bases mal antioxidantes antes enumerados. En Todos los sistemas antioxidantes se
apareadas, oxidadas, desaminadas o general, el diseño celular antioxidante encuentran enlazados en un sistema
que añaden la base faltante y otros que coloca a las moléculas que secuestran amortiguador celular, donde se suman
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COMPLEJOS CON la gluconato-6-P deshidrogenasa y las


PROTEÍNAS DE
enzimas malato e isocitrato deshidro-
TRANSPORTE O
ACUMULACIÓN genasas citosólicas dependientes de
AGENTES OXIDANTES
NADP+.
ESPECIES REACTIVAS La vitamina E se integra al siste-
RADICALES LIBRES ma amortiguador al regenerarse con
electrones del ascorbato y de GSH y
ENZÍMAS
ANTIOXIDANTES (1) MOLÉCULA ANTIOXIDANTE NADPH por medio de las enzimas
ANTIOXIDANTES OXIDADO GST o de la DAR.
ENZÍMAS
ANTIOXIDANTES (3)
Otros agresores oxidativos pueden
desembocar en radicales O2 o OH,
RADICALES,
ESPECIES Y OXIDANTES los primeros serán convertidos en
MENOS POTENTES MOLÉCULA H2O2 por la SOD y los segundos en
BLANCO agua por la GPx empleando GSH que
ENZÍMAS se oxida a GSSG y que será nueva-
ANTIOXIDANTES (2) mente reducido con la glutatión
ESTRES
MOLÉCULA OXIDATIVO reductasa gracias a los electrones del
OXIDADA NADPH. Por su parte el H2O2 se trans-
COMPUESTOS DAÑADA formará en H2O gracias a la acción de
NO-OXIDANTES la CAT o de una peroxidasa.
ENZÍMAS
REPARADORAS El estado redox de las proteínas,
DAÑO es decir su estado de oxido reducción,
REPARACIÓN DE LA MOLÉCULA
OXIDATIVO
O DE LA FUNCIÓN es un indicador del estado redox de la
célula y se emplea como un sistema
APOPTOSIS
de transducción, señalización y efector
Figura 1. Sistemas antioxidantes en el estrés oxidativo. El esquema muestra los complejos de de respuestas intracelulares; este es-
transporte o acumulación de oxidantes, la interacción con moléculas antioxidantes y los 3 tado redox de las proteínas es modu-
tipos de enzimas antioxidantes. Las tipo 1 reducen parcialmente a los agentes oxidantes, gene- lado directamente con glutatión redu-
rando oxidantes menos potentes (por ejemplo: superóxido dismutasa). Las tipo 2 reducen a los
oxidantes a compuestos no oxidantes (por ejemplo: catalasa). Las tipo 3 son las enzimas en-
cido e indirectamente con NADPH
cargadas de reducir nuevamente (regenerar) a los antioxidantes que fueron oxidados para (13).
reducir a los oxidantes (por ejemplo: glutatión reductasa). A pesar de las defensas las
macromoléculas pueden verse afectadas por la oxidación, esto produce daño oxidativo y re- El estrés oxidativo
quiere de ser reparado por las enzimas correspondientes (por ejemplo: polimerasas). Si la En las células y en los organismos en
reparación falla o el daño es muy extenso se puede generar apoptosis.
condiciones normales se mantiene un
balance entre la producción de radica-
y colaboran entre sí, para hacer frente oxidación de GSH y NADPH, este úl- les libres y especies reactivas con los
a cualquier agresión oxidativa en la timo esencial para reducir nuevamen- sistemas antioxidantes; de manera tal
célula y el organismo. Un esquema de te al glutatión oxidado, por lo que los que la toxicidad por oxidación es limi-
la interacción de estos sistemas se sistemas que reducen al NADP+ (re- tada, aún este limitado daño es parcial-
presenta en la figura 2. Los sistemas generan al NADPH) resultan de vital mente responsable del envejecimiento
antioxidantes integrados en un sistema importancia para mantener el flujo de natural de las células y los organismos.
amortiguador garantizan hacer frente a electrones e hidrógenos en todo el sis- Sin embargo, se considera que la
cualquier agresor oxidativo y no ago- tema amortiguador y de esta forma agresión oxidativa alcanza niveles pa-
tar un solo sistema antioxidante, sino estar preparado para mantener el pro- tológicos cuando se rompe el balance
compartir y combinar los efectos; así, ceso antioxidante preparado para el entre ella y la eficiencia de los siste-
los cambios de un antioxidante se com- siguiente insulto oxidativo. mas amortiguadores antioxidantes; lo
pensa con los de otros. Dado que los En esta figura se puede observar cual se puede producir por un déficit
antioxidantes actúan básicamente redu- que en el centro del sistema amorti- de antioxidantes o por un incremento
ciendo las especies reactivas y a los guador antioxidante se encuentra la re- en la producción de las especies
oxidantes en general, todos los siste- ducción del NADP+ a partir de las reactivas. De igual manera cuando se
mas antioxidantes desembocan en la enzimas glucosa-6-P deshidrogenasa, reduce la agresión oxidativa, se redu-
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-Tocoferol Oxidantes
cada agresor oxidativo en cada siste-
TQR . endógenos
ma.
La evaluación depende del fluido,
RL o exógenos
Tocoferil- tejido o célula que se pretenda estu-
quinona diar, ya que cada uno de los ambien-
RH
tes tiene diferentes sistemas
antioxidantes y una conjunción o in-
Pr-ox Pr-red tegración diferente. Así mismo, el tipo
Dehidro- TR de sistema antioxidante predominan-
ascorbato te es heterogéneo y se debe de consi-
derar para saber efectivamente que se
GSH GR GSSG está evaluando.
Radiaciones
Metales Las técnicas desarrolladas para
Ascorbato DAR
GST Metabolismo medir la capacidad antioxidante total
G6PD / Gluc6PD de las muestras biológicas valoran la
NADP+ NADPH+H+
MDP / IDPc habilidad de los compuestos
antioxidantes (donantes de un hidró-
GR geno o un electrón) presentes en el
GSSG GSH
fluido o célula, para reducir las espe-
. cies oxidantes introducidas (iniciador)
RH RL
GPx O2. en el sistema de ensayo, por lo que son,
H2O H2O2 en general, clasificados como méto-
SOD
CAT dos de inhibición directos o indirec-
O2 O2 tos del poder oxidante de una molé-
cula estándar determinada que es el
Figura 2. Sistema amortiguador global de antioxidantes. Radicales libres (RL.), radical redu- iniciador.
cido (RH), glutatión reducido (GSH), glutatión oxidado (GSSG), proteínas oxidadas (Pr-Ox), En el plasma, la capacidad
proteínas reducidas (Pr-red), radical superóxido O2., protón (H+), fosfato de nicotinamida-
adenina dinucleotido reducido (NADPH), fosfato de nicotinamida-adenina dinucleotido oxi-
plasmática antioxidante total depen-
dado (NADP+). Las enzimas: glutatión peroxidasa (GPx), tocoferilquinona reductasa (TQR), de preferentemente de la capacidad y
deshidroascorbato reductasa (DAR), tiolreductasa (TR), glutatión transferasa (GST), catalasa cantidad de albúmina y de ácido úrico.
(CAT), glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD); gluconato 6 fosfato deshidrogenasa Cuando se realiza en sangre total, la
(Gluc6PD), glutatión reductasa (GR), superóxido dismutasa (SOD), isocitrato deshidrogenasa capacidad sanguínea antioxidante to-
citosólica dependiente de NADP+ (IDPc) y malato deshidrogenasa dependiente de NADP+
(MDP).
tal, evalúa adicionalmente enzimas
antioxidantes, glutatión y NADPH.
La capacidad antioxidante total del
ce la eficiencia total del sistema amor- El estrés oxidativo al que se some- eritrocito evalúa los sistemas
tiguador antioxidante, evitando así te una célula o el organismo puede ser eritrocitarios y no los plasmáticos.
gastos energéticos excesivos y una eficiente y limitar el daño o ser En las células se evalúa predomi-
condición reductora muy elevada en ineficiente y no poder evitar el incre- nantemente los mecanismos anti-
la célula que comprometa las accio- mento del daño, lo cual puede depen- oxidantes enzimáticos, glutatión,
nes oxidantes de importancia para el der de la intensidad del insulto o de la NADPH y moléculas antioxidantes
funcionamiento celular. falta de elementos de respuesta en los endógenas y exógenas; pero depen-
La respuesta de la célula o el orga- sistemas antioxidantes (1). diendo de la célula y los orgánulos
nismo a la agresión oxidativa implica predominantes se podrá tener una par-
no sólo cambios cinéticos y La capacidad antioxidante total ticipación mayoritaria de cierta acti-
moleculares de enzimas, cosustratos, El sistema amortiguador antioxidante vidad enzimática o de antioxidantes
cofactores y moléculas antioxidantes, puede ser evaluado indirectamente intracelulares.
sino también el encendido de genes y como una capacidad antioxidante to- En orina, la capacidad urinaria
los cambios de la expresión de proteí- tal. Este parámetro puede ofrecer una antioxidante total se evalúa midiendo
nas, todo este fenómeno se conoce idea de cómo se encuentra el conjun- la distribución y excreción de antioxi-
como estrés oxidativo. to de la respuesta antioxidante ante dantes hidrosolubles endógenos y
96 Quintanar Escorza MA y Calderón Salinas JV

exógenos y pueden dar un reflejo del estáticas, por lo que indica un estado pio similar al descrito y mostrado en
consumo o exceso de tales antioxi- en una ventana de tiempo particular y la figura 3.
dantes. no da una imagen de la respuesta ce- La actividad de la SOD se puede
Es posible medir la capacidad lular, el estrés oxidativo o una condi- estudiar generando el radical O2 por
antioxidante total en cualquier célula ción dinámica del proceso de daño o el sistema xantina-xantina oxidasa en
o fluido (líquido cefalorraquídeo, ar- defensa de la célula o el organismo. presencia de oxígeno, el radical indu-
ticular, saliva, etc.) y cada vez hay más Los antioxidantes. Los sistemas ce la oxidación del azul de
datos comparativos para entender sus antioxidantes se pueden valorar inde- nitrotetrazolio y da origen a un com-
significados y los elementos que re- pendientemente a través de medir la puesto colorido que se detecta a una
flejan estos resultados. actividad, la expresión y la concentra- longitud de onda de 560 nm. La acti-
Con las consideraciones descritas ción de las enzimas antioxidantes, vidad de SOD presente en la muestra
se puede indicar que la evaluación de también se pueden medir las concen- reduce al radical O2 obteniéndose con
la capacidad antioxidante total es un traciones de antioxidantes endógenos ello una reacción colorida, por lo que
parámetro que puede ser útil desde el y por supuesto de cosustratos la actividad de SOD es proporcional
punto de vista diagnóstico. Sin embar- antioxidantes. Es posible evaluar la a la menor cantidad de color en uni-
go, otras consideraciones deben de capacidad de los sistemas de reparación dad de tiempo.
realizarse para poder aclarar su posi- y eventualmente se pueden medir las Para evaluar la actividad de la CAT
ble valor en este sentido. concentraciones de antioxidantes se sigue la reacción de descomposi-
exógenos. Las evaluaciones pueden ser ción del H2O2, por la pérdida de la ab-
Evaluación de los procesos de oxi- directas por diferentes métodos por sorción a 240 nm o se mide la libera-
dación y de los sistemas antioxi- ejemplo, la concentración de una pro- ción de O2 utilizando un electrodo es-
dantes teína de transporte, la enzima pecífico.
El daño oxidativo. La oxidación de antioxidante o de reparación, la activi- La acción de la GPx puede ser va-
ácidos nucleicos se puede evaluar con dad de una enzima antioxidante, la con- lorada indirectamente por la reacción
ensayos cometa (electroforesis centración neta de un antioxidante o de acoplada con la GR. El GSSG produ-
unicelular alcalina) para ver el daño a un cosustrato antioxidante, necesario cido por la reacción con los
ADN, el daño a las cadenas y la rup- para la actividad de enzimas hidroperóxidos catalizada por la GPx
tura con técnicas de dicroismo circu- antioxidantes. es reciclado a su estado reducido por
lar y electroforesis. El daño oxidativo Las evaluaciones antioxidantes fre- la GR usando como coenzima el
a las proteínas se puede medir con la cuentemente son indirectas y por inhi- NADPH. La oxidación de NADPH a
presencia de aductos de agentes bición, donde un agente oxidante lla- NADP+ se acompaña de la disminu-
oxidantes por métodos de HPLC e mado inductor generalmente un radi- ción de su absorbancia a 340 nm, la
inmunohistoquímica; la carbonilación cal libre, oxida a una molécula moni- tasa de disminución de la absorbancia
oxidativa de residuos de proteínas y tor (sonda) que sufre un cambio de co- a 340 nm es directamente proporcio-
la generación de enlaces sulfhidrilo lor, emite luz (quimioluminiscencia), nal a la actividad GPx de la muestra.
anómalos, además de la ruptura del fluorescencia o electricidad o se pue- La actividad de la enzima GST puede
enlace peptídico por electroforesis, de detectar por sus productos ser determinada utilizando como
calorimetría, dicroismo circular y (inmunoquímica o espectro de masas); sustratos al 1-cloro-2,4-dinitrobenceno
espectrofotometría. La oxidación de la capacidad antioxidante se mide (CDNB) y glutatión reducido
lípidos puede determinarse midiendo cuando al colocar la muestra a eva- (GSH), en donde la GST cataliza la
las especies reactivas al ácido luar, la oxidación de la molécula son- conjugación del grupo tiol del
tiobarbitúrico y dienos conjugados por da se oxida y con ello el parámetro glutatión al CDNB. La absorbancia
métodos espectofotométricos y modificado. Una vez comparada la del producto GS-DNB a 340 nm, es
HPLC. El daño a carbohidratos se intensidad de la inhibición de la mo- directamente proporcional a la acti-
puede estudiar con la determinación dificación en las mismas condiciones vidad de la GST.
con inmunohistoquímica o con reac- con un antioxidante de potencia co- La GR se puede evaluar espectro-
ciones específicas de oxidación de nocida por ejemplo, trolox, se pueden fotométricamente por la pérdida de
grupos particulares. obtener los equivalentes de la capaci- absorbancia a 340 nm generada por
La evaluación de la oxidación se dad antioxidante. Con discretas va- la oxidación de NADPH o por el in-
basa en el daño a macromoléculas en riantes todas las mediciones cremento en la absorbancia a 412 nm
condiciones estacionarias, estables y antioxidantes se basan en un princi- generado por la reducción del ácido
REB 28(3): 89-101, 2009 La capacidad antioxidante total 97

5,5´-ditiobis 2-nitrobenzoico (DTNB). lor se mide a 565 nm y es proporcio- mar en cuenta que el estado oxidativo
La actividad de la enzima TQR nal a la concentración de NADPH de integra el efecto de la exposición a
(tocoferilquinonarreductasa) y la DAR la muestra; mientras que el NADP+ de oxidantes acoplado con los mecanis-
se pueden evaluar determinando la la muestra se transforma a NADPH mos protectores antioxidantes de una
transformación de tocoferilquinona a empleando a la glucosa-6-P deshidro- manera dinámica y no como una cons-
tocoferol o de deshidroascorbato a genasa. tante estática independiente.
ascorbato, respectivamente, con res- El ensayo del cometa y el ensayo
pecto al tiempo y cuantificando por de inhibición de la poliADP-ribosa Evaluaciones globales
HPLC la concentración de tocoferol polimerasa (PARP) son las técnicas Dentro del dinamismo del balance
o de ascorbato, empleando un detec- empleadas para la evaluación de la oxidativo, se pueden observar siste-
tor de absorción ultravioleta-visible, reparación del ADN, los metabolitos mas que al analizarlos presenten ni-
a 295 nm o 254 nm, respectivamente. 8-oxoguanosina (8-oxodG) y glicol veles elevados de oxidación,
La actividad de la glucosa 6-fosfato timina (GT) pueden ser utilizados lipoperoxidación y ADN, asociados
deshidrogenasa se puede evaluar ini- como marcadores de ataque al ADN y con una respuesta antioxidante apa-
ciando la reacción con glucosa-6- las pruebas de inhibición, indican los rentemente eficiente, indicando que el
fosfato y detectando la reducción del mecanismos de defensa y su eficien- insulto es superior a la respuesta; Por
NADP+ a 340 nm. cia. otro lado, se pueden tener sistemas que
La actividad de la TR, puede de- La reparación de las bases al analizarlos se presenten con alto
terminarse por la formación de pro- escindidas es ejecutada por un siste- nivel de daño y deficiente respuesta
teínas reducidas con respecto al tiem- ma denominado (BER, por sus siglas antioxidante, indicando que aun con
po determinando los grupos tiol de- en inglés) y las vías de reparación de un insulto menor se puede tener mu-
tectando su absorbancia a 415 nm al la escisión de nucleótidos (NER, por cho daño al no tener una respuesta efi-
hacerlos reaccionar con el reactivo sus siglas en inglés). Para el análisis ciente; por lo que la evaluación única
DTNB que interacciona con el grupo de los sistemas de reparación BER y e independiente del insulto pro-
tiol para dar ácido tionitrobenzoico en NER se puede emplear un ADN cir- oxidante o del fenómeno antioxidante,
una reacción equimolar para cada re- cular con 8-oxoG como sustrato en puede propiciar errores de interpreta-
siduo de cisteína. células de mamíferos, donde al expo- ción y limitaciones para su aplicación
Las vitaminas C y E pueden cuan- ner al sistema a estudiar se determina clínica.
tificarse por HPLC empleando un de- la cantidad de bases reparadas. Con respecto a los antioxidantes
tector de absorción ultravioleta-visi- También se pueden estudiar la can- extracelulares y endógenos, los prin-
ble, permitiendo un análisis rápido y tidad de aductos o la inhibición de pro- cipales antioxidantes del plasma hu-
específico de los picos a una longitud ducción de aductos en pruebas in vivo mano son la albúmina y el ácido úrico,
de onda de 254 y 295 nm, respectiva- o in vitro. Para determinar la repara- los cuales conforman más del 50% de
mente. ción de proteínas se pueden determi- la actividad antioxidante total.
En el caso del glutatión en sus dos nar entrecruzamiento y biotinilización En términos generales se puede se-
formas oxidado y reducido se pueden en pruebas de inhibición. Otras prue- ñalar que la mayoría de los estudios
medir por HPLC; también se puede bas que pueden emplearse son sobre el estado oxidativo miden par-
estudiar con el cambio de color desa- espectrometría de masas, calorimetría, cialmente los marcadores biológicos
rrollado por la reducción del DTNB a dicroismo circular, resonancia magné- involucrados en el proceso y estable-
412 nm reducido por GSH; el empleo tica nuclear, entre otras pruebas aco- cen aseveraciones generalizadas res-
de la enzima GR, transforma el GSSG pladas con ensayos de inhibición, para pecto la etiología, la fisiopatología y
en GSH por lo que se obtiene el determinar indirectamente los siste- el pronóstico de muchos de los pade-
glutatión total, la diferencia permite mas de reparación. cimientos crónico-degenerativos, lo
obtener el GSSG y con un sencillo Todas estas determinaciones espe- cual genera confusión, resultados in-
calculo la relación GSH/GSSG. cificas son utilizadas como consistentes y contradictorios con res-
El NADPH se puede medir apro- biomarcadores aislados y de manera pecto a la evaluación de la agresión
vechando la reducción del colorante estática, interpretando el estado oxidativa y la respuesta antioxidante
azul de tetrazolio (MTT) inducido oxidativo como el incremento de las del sistema. Por tal motivo, es indis-
por el NADPH y en presencia de biomoléculas oxidadas o la disminu- pensable establecer propuestas que
metasulfato de fenazina (PMS), la ción de los componentes antioxidantes incluyan todos los parámetros existen-
disminución en la intensidad del co- intracelulares o extracelulares, sin to- tes para medir un mecanismo
98 Quintanar Escorza MA y Calderón Salinas JV

bioquímico tan complejo como es el atrapamiento de radicales (TOSC, antioxidante es efectivo para el radi-
estado oxidativo y así evitar contra- ORAC y TRAP, por sus siglas en cal hidroxilo, la prueba mostrará como
dicciones y confusión. inglés, respectivamente) (Tabla I). si no existiera o fuera muy pobre la
Sin embargo, estas pruebas suelen actividad antioxidante, lo cual es muy
Técnicas para determinar la capa- ser más complicadas y de difícil frecuente que ocurra cuando se prueba
cidad antioxidante total estandarización. capacidad antioxidante de sustancias
Los métodos de determinación de la La selección de la técnica a usar puras o de muestras poco complejas y
actividad antioxidante total se basan debe de tener en cuenta que los ini- con pocos grupos antioxidantes.
en comprobar cómo un agente ciadores pueden ser oxidantes que Este problema es menor cuando se
oxidante induce daño oxidativo a un capturan electrones o hidrógenos, lo quiere conocer la capacidad
sustrato oxidable, daño que es inhibi- cual esta valorando al antioxidante que antioxidante de muestras complejas,
do o reducido en presencia de un existe en la muestra y con ello puede células o tejidos, ya que en este caso
antioxidante. Esta inhibición es pro- afectar y ser más o menos eficiente; el sistema amortiguador de la mues-
porcional a la actividad antioxidante por ejemplo, si es un prooxidante que tra compensa e integra cualquier
del compuesto o de la muestra. Por genera al radical superóxido y el oxidante iniciador de la prueba y se
otra parte, hay ensayos que se basan
en la cuantificación de los productos
formados tras el proceso oxidativo. Sistema Iniciador
Los distintos métodos difieren en el productor de
agente oxidante, en el sustrato emplea- oxidantes Oxidante-(e- ó H)
do, en el tiempo de evaluación, en la Oxidante reducido
técnica instrumental utilizada, la sen-
sibilidad y en las interacciones de la Sonda
muestra con el medio de reacción (Ta- (e- ó H) Luz
Sonda Color
bla I y Fig. 3). La mayoría de los mé-
Oxidada Fluorescencia
todos de medida de la actividad
antioxidante no emplean especies ra- Absorbancia
dicales de significado biológico, sino Conductividad
Sonda Voltaje
radicales que son oxidantes iniciado-
Oxidada Masas
res ajenos al organismo; por ejemplo, Inmunoreactividad
el 2',2'-azobis-2-methylpropiona- Sonda
mida (AAPH.) o el 2,2-difenil-1- (e- ó H)
picrilhidrazilo (DPPH·).
Algunos ensayos usan sistemas Oxidante
complejos para poder generar radica- Oxidante-(e- ó H)
Sistema Iniciador reducido
les libres y medir la capacidad productor de
antioxidante (Fig. 3), tal es el caso del oxidantes
ensayo llamado habilidad del plasma
para reducir las sales férricas (FRAP, Sistema antioxidante
por sus siglas en ingles) donde el Fe2+ Sistema antioxidante oxidado
y el H2O2 en la reacción redox produ- (e- ó H)
ce el radical OH. El empleo de los
radicales peroxilo o hidroxilo en los Figura 3. Esquema que muestra el mecanismo general para la evaluación de los sistemas
ensayos les añade un mayor signifi- antioxidantes. Un agente iniciador productor de oxidantes inicia el proceso, el oxidante produ-
cado biológico, ya que estas especies cido oxida a la sonda. La sonda oxidada (negritas) tiene cambios susceptibles de cuantificarse
reactivas son las más importantes a por alguna propiedad que confiere la oxidación (paréntesis rectangular). En la parte inferior
del esquema se muestra la competencia que se establece entre el antioxidante al que se enfrenta
nivel fisiológico tales pruebas son por
el oxidante en el proceso de evaluación y que compite con la sonda por el oxidante que generó
ejemplo las llamadas capacidad total el iniciador, lo que lleva a que la oxidación de la sonda sea menor (negritas y flecha) y con ello
de retiro de oxirradicales, capacidad un menor cambio cuantificable (paréntesis rectangular). La menor oxidación de la sonda de-
de absorción de radicales de oxígeno penderá de la concentración y de la capacidad antioxidante del sistema correspondiente (como
y potencial total antioxidante de se indica con las flechas punteadas).
REB 28(3): 89-101, 2009 La capacidad antioxidante total 99

TABLA 1
Características generales de algunas pruebas para la evaluación de la capacidad antioxidante total

Prueba DCFH-DA Crocina DPPH ABTS FRAP ORAC Luminol TRAP VC TOSC

Técnica Espectro- Espectro- Espectro- Espectro- Espectro- Fluorometría Quimio Consumo de Voltametría Cromatografía
fotometría fotometría fotometría fotometría fotometría luminiscencia oxigeno ciclica de gas

Iniciador APPH ABAP DPPH Hidroxilo Hidroxilo APPH APPH APPH Corriente ABAP
(oxidante) electrones

Monitor DCFH-DA Crocina DPPH ABTS TPTZ-Fe Ficoeritrina Luminol Oxigeno Voltaje a-ceto-m
(sonda) butírico

Condición de 504 nm 433 nm 515 nm 414 nm 595 nm Exc 504 nm 490 nm Unidades mV Integración
cuantificación Em 565 nm arbitrarias

Forma de Equivalentes Equivalentes I-50 Equivalente uM Fe/l Equivalentes Equivalentes Equivalentes Potencial Equivalentes
expresión de de trolox de trolox s de trolox de trolox de trolox de trolox redox trolox
resultados

2´,2´,7´-diclorofluoresceína diacetato (DCFH-DA), 2,2-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH·), 2,2´-azinobis-(ácido -3 etilbenzotiazolino-6-sulfónico)


(ABTS), 2',2'-azobis-2-metilpropionamida (APPH.), 2,4,6-tri(2-piridil)-s-triazina (TPTZ), 2,2'-azobis(2-amidinopropano) (ABAP), potencia
antioxidante reductora férrica (FRAP), capacidad de absorción de radicales libres de oxigeno (ORAC), potencial total de atrapamiento de
radicales peróxido (TRAP), capacidad total de atrapamiento de oxi-radicales (TOSC), voltametría cíclica (VC).

integran los diferentes antioxidantes da y de ambos con respecto a la con- El valor diagnóstico
para compensan las especies iniciado- centración esperada de antioxidante en Los procesos celulares y las enferme-
ras y las que se forman por efectos de la muestra, lo que permite manejar las dades asociadas directa o indirecta-
las oxido reducciones de los concentraciones de la muestra para mente con daño oxidativo y con estrés
antioxidantes involucrados. diseñar curvas de inhibición con un oxidativo se han incrementado verti-
Los monitores de la oxidación mínimo de interferencia, en tiempos ginosamente con cascadas de informa-
(sondas) son las moléculas oxidadas muy cortos y con alta intensidad de ción. Sin embargo, para que se califi-
que reportan la intensidad del daño respuesta. que la participación de procesos
que produce el iniciador (oxidante); En caso de muestras pequeñas o oxidativos en una enfermedad es ne-
al inicio se empleó el daño oxidativo con bajas concentraciones de cesario que se cumplan algunos crite-
avanzado a una molécula (ácidos antioxidantes, las técnicas pueden rios tales como: Daños compatibles
grasos, carotenos, proteínas, ADN), adaptarse para hacer evaluaciones en con oxidación; identificación del
las pruebas eran poco sensibles, muy función de tiempo e integrar las áreas agente oxidante en el sitio de lesión;
inespecíficas y sin poder tener evalua- bajo la curva lo que permite aumentar reproducción del daño con otro agen-
ciones dinámicas. Posteriormente, se la sensibilidad, aún cuando se debe de te oxidante; que el daño se retire al
han desarrollado diversos métodos tener en cuenta el aumento de interfe- retirar el agente oxidante y que la en-
que usan sondas desarrolladas rencia y la posibilidad de oxidación fermedad responda al tratamiento
específicamente para estas pruebas espontánea de las propias sondas, antioxidante.
(Tabla I), las cuales permiten evaluar afectando la evaluación global y ge- La mayor parte de las veces se aso-
pasos iniciales de oxidación en tiem- nerando falsos negativos. cia la enfermedad con la oxidación solo
pos muy cortos, en ventanas de tiem- La mayoría de los métodos para por un criterio, sin importar si se cum-
po inicial, con mayor sensibilidad y medir la capacidad antioxidante están plen o no con los otros criterios. Lo
especificidad; el 2,2´-azinobis-(ácido diseñados para evaluar muestras anterior genera solo una pequeña pro-
-3 etilbenzotiazolino-6-sulfononico) hidrosolubles; sin embargo, es posi- porción de enfermedades que se puede
diamonio (ABTS+.) y el 2´,2´,7´- ble emplearlos con detergentes, sol- tener la certeza de estar asociadas con
diclorofluoresceína diacetato (DCFH- ventes e incluso con fracciones oxidación, aunque la investigación clí-
DA) son moléculas sonda mas fre- particuladas, una vez que se hacen las nica cada vez con más herramientas
cuentemente empleadas (Tabla I). matrices, los controles y los blancos diagnosticas incrementa cada vez más
Para evitar las interferencias se em- correspondientes y asegurarse que no las posibilidades de estudiar esta aso-
plea una alta relación molar entre la hay precipitación de la muestra en los ciación y con ello la cantidad de enfer-
sonda y el iniciador a favor de la son- tiempos de evaluación (13, 14, 15). medades que tienen a la oxidación
100 Quintanar Escorza MA y Calderón Salinas JV

como etiología, patogénia o compli- nado a que integran de manera global nivel de campo y de consultorio re-
cación de las mismas. la evaluación de los sistemas amorti- sultarán en muy corto plazo en valo-
Muchos esfuerzos se han realiza- guadores antioxidantes y su estatus res límite más confiables y en inter-
do para que las enfermedades asocia- temporal, las hace muy adecuadas pretaciones más concretas y adecua-
das con las oxidaciones puedan ser como guía diagnóstica. das.
diagnosticadas y tratadas con Ante una evidencia clínica o de la-
antioxidantes, nuevamente se ha reba- boratorio de daño, un incremento de Conclusiones
sado el diagnóstico y la evaluación la capacidad antioxidante total puede El conocimiento cada vez más profun-
correcta de resultados con una serie indicar un estrés oxidativo y una res- do de los procesos oxidativos y las
de pruebas parciales que muestran re- puesta antioxidante del organismo, lo defensas antioxidantes, permite poco
sultados favorables con el tratamien- que implica un sobregasto de a poco y de mejor manera su integra-
to antioxidante, pero que no permiten antioxidantes y la necesidad de una ción a la etiología o fisiopatología y
establecer bases sólidas para la ade- intervención terapéutica. Una reduc- con ello a elementos diagnósticos en
cuada evaluación de la participación ción de la capacidad antioxidante to- la clínica de múltiples enfermedades
oxidante y antioxidante en el curso de tal ante evidencia de daño puede indi- asociadas a la oxidación. El desarro-
las enfermedades. car una falta de respuesta, disminución llo del conocimiento de los sistemas
Enfermedades como la diabetes, la de antioxidantes o un insulto oxidativo amortiguadores antioxidantes, su for-
artritis, los infartos, las infecciones, las que supera la capacidad antioxidante ma de funcionar y la posibilidad téc-
intoxicaciones, el empleo de algunos y con ello la indicación de una inter- nica de medirlos eficientemente, abre
fármacos, entre muchas otras, cursan vención terapéutica antioxidante. una carretera de conocimientos que
con fases oxidativas que son suscep- La capacidad antioxidante total permiten entender la respuesta
tibles de ser tratadas con antioxidantes también puede ser empleada para va- antioxidante en la génesis, protección
y mejorar la evolución y evitar algu- lorar, individualizar y dar seguimien- y forma de evolución de las enferme-
nas complicaciones (16). to a la efectividad de un tratamiento dades. En tal contexto, la capacidad
Para poder realizar el diagnóstico antioxidante y no sobremedicar o dar antioxidante total se ofrece como una
y la intervención correcta es necesa- tratamientos insuficientes al paciente. gran alternativa para estudiar sustan-
rio aplicar pruebas más rápidas y es- El gran reto de estas pruebas es es- cias puras, fluidos células, tejidos, no
pecíficas e interpretarlas correctamen- tandarizar los valores normales para sólo para entender la biología de los
te. En tal sentido, la evaluación de la poblaciones específicas ya que al mo- fenómenos, sino incluso para tener un
oxidación de los antioxidantes y la ca- mento los resultados solo pueden ser lugar en las pruebas diagnósticas; su
pacidad antioxidante adquieren un pa- comparativos y relativos y aunque desarrollo técnico y su interpretación
pel sobresaliente, adicional al emplea- muy útiles, aún no pueden ofrecer va- dará una plataforma para entender
do en el estudio básico y el estudio lores normales poblacionales. Sin mejor la respuesta oxidativa de los
clínico de las enfermedades nuevas (2, embargo, la evaluación masiva, su in- organismos que han aprendido a de-
4, 12). troducción cada vez más frecuente en fenderse de la oxidación en una atmós-
Dada la facilidad y rapidez de las pruebas diagnósticas, los métodos co- fera oxidante y con un metabolismo
pruebas de capacitad antioxidante, au- merciales que facilitan la aplicación a oxidativo.

REFERENCIAS

1. Halliwell B, Gutteridge JMC (2007) Free Radicals in 4. Calderón JV, Maldonado M (2008) Contaminación e
Biology and Medicine. Clarendon Press, Oxford, UK, p intoxicación por plomo. Ed. Trillas, p 194.
704.
5. Hansberg W (2002) Biología de las especies de oxígeno
reactivas. Mensaje bioquímico 26: 19-54.
2. Konigsberg M (2008) Radicales libres y estrés oxidativo,
Aplicaciones Médicas. Ed. Manual Moderno, p 368. 6. Rendón A (2005) El daño oxidativo y la respuesta
antioxidante durante la intoxicación con plomo en una
3. Winterbourn CC (2008) Reconciling the chemistry and población expuesta y los efectos del tratamiento con
biology of reactive oxygen species. Nat Chem Biol 4: antioxidantes. Tesis de doctorado. Departamento de
278-86. Bioquímica CINVESTAV.
REB 28(3): 89-101, 2009 La capacidad antioxidante total 101

7. Cervantes MP, Calderón JV, Albores A, Muñoz JL (2005) 12. Monaghan P, Metcalfe NB, Torres R (2009) Oxidative
Copper increases the damage to DNA and proteins stress as a mediator of life history trade-offs: mechanisms,
caused by reactive oxygen species. Biol Trace Elem measurements and interpretation. Ecol Lett 12: 75-92.
Res.103: 229-248.
13. Limón-Pacheco J, Gonsebatt ME. Limón J, Gonsebatt
ME (2009) The role of antioxidants and antioxidant-
8. Blokhina O, Virolainen E, Fagerstedt KV (2003) Anti- related enzymes in protective responses to environ-
oxidants, oxidative damage and oxygen deprivation mentally induced oxidative stress. Mutat Res 674(1-
stress: a review. Ann Bot (Lond) 91: 179-194. 2): 137-147.

9. Forman HJ, Zhang H, Rinna A (2009) Glutathione: 14. Lim KS, Jenner A and Halliwell B (2006) Quantita-
Overview of its protective roles, measurement, and tive gas chromatography mass spectrometric analysis
biosynthesis glutation. Mol Aspects Med 30(1-2): of 2`-deoxyinosine in tissue DNA. Nature Protocols
1-12. 1: 1995-2002.

15. Magalhães LM, Segundo MA, Reis S, Lima JL (2008)


10. Rendón A, Cerbón J, Maldonado M, Quintanar MA, Methodological aspects about in vitro evaluation of
Calderón Salinas JV (2007) Vitamin-E reduces the oxi- antioxidant properties. Anal Chim Acta 613: 1-19.
dative damage on delta-aminolevulinic dehydratase in-
duced by lead intoxication in rat erythrocytes. Toxicol 16. Srivatsan R, Das S, Gadde R, Manoj-Kumar K, Taduri
In Vitro 21: 1121-1126. S, Rao N, Ramesh B, Baharani A, Shah K, Kamireddy
SC, Priyatham G, Balakumaran TA, Balakumaran SS,
11. Dragsted LO (2008) Biomarkers of exposure to vita- Kamath A, Rao A (2009) Antioxidants and Lipid
mins A, C, and E and their relation to lipid and protein Peroxidation Status in Diabetic Patients with and with-
out Complications. Arch Iran Med. 12: 121-7.
oxidation markers. Eur J Nutr 47: 3-18.