13/04/2010

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

SITIO ACTIVO

LICDA. EMMA LEONOR GALDAMEZ DE

ALVARADO

IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS

Aumentan la velocidad de las reacciones en

condiciones adecuadas de pH y To.

Muchas enzimas regulan las reacciones

metabólicas

La determinación de su actividad

en muestras biológicas , importante en el
diagnostico clínico

Establecer la sensibilidad de la drogas

y para establecer la acción de los venenos

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Ingeniería genética

Quimioterapia por enzimas

Las enzimas como sitio de acción de

las drogas en el tratamiento de diver -
sas enfermedades

Como reactivos químicos ej. glucosa

oxidasa

DEFINICION DE ENZIMAS

SON CATALIZADORES BIOLOGICOS

DE NATURALEZA PROTEICA ( A
EXCEPCIÓN DE LAS RIBOSIMAS)

QUE ACELERAN LA VELOCIDAD DE
LAS REACCIONES QUÍMICAS,
DISMINUYENDO LA ENERGÍA DE
ACTIVACIÓN

REGULAN LAS REACCIONES DEL
METABOLISMO

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PROPIEDADES DE LAS
ENZIMAS
1.- EFICIENCIA: Aceleran las reacciones
multiplicando su velocidad por un millón
de veces ó más Ej. Anhidrasa Carbonica

2.-ESPECIFICIDAD: Son altamente

específicas en la reacción que catalizan
como en la selección del sustrato que
transforman.

TIPOS DE ESPECIFICIDAD:

ESPECIFIDAD ALTA o ABSOLUTA : Si la
enzima utiliza un solo sustrato: Glucocinasa.

ESPECIFICAD DE GRUPO
Las hexosas puede ser fosforiladas por
cinasas y ATP

Glucosa G 6 - P

Fructosa + 3 ATP Hexocinasa F 6 – P

Galactosa Ga6- P

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PROPIEDADES DE LOS
CATALIZADORES
1.- INORGANICOS: Pt, Fe, Ni, etc.

Aumentan la velocidad de las
reacciones disminuyendo la energía de
activación

Se utilizan en pequeñas cantidades

Se recuperan al final de la reacción

No modifican la constante de
equilibrio de la reacción

2.- BIOLOGICOS: ENZIMAS

EFICIENCIA

ESPECIFICIDAD

Aumentan la velocidad de las
reacciones disminuyendo la energía de
activación

Se utilizan en pequeñas cantidades

Se recuperan al final de la reacción

No modifican la constante de
equilibrio de la reacción

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BIOLOGICOS: ENZIMAS

Su actividad puede ser regulada

Su actividad es afectada por cambios :
a)pH

b) Te

c) [ E ]

d) [ S ]

e) Cofactores

f) Inhibidores

CLASIFICACIÓN POR SU COMPOSICIÓN

 ENZIMAS SIMPLES: No requiere grupos
adicionales para catalizar la reacción
 ENZIMAS CONJUGADAS: Requiere un componente adicional llamado
cofactor para catalizar la reacción
 HOLOENZIMA: Apoenzima + Cofactor
a.- Iones inorgánicos: +,
 COFACTOR Mn++.Fe++ , Mg++
b.- Complejo metalorgánico:
COENZIMAS
Si se une fuertemente a la enzima = GRUPO PROSTÉTICO

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CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS POR SU

ESTRUCTURA.

1- MONOMERICAS. Ej.: ureasa , ribonucleasa.

2- OLIGOMERICAS. Ej.: LDH, Quimo tripsina,
Glutamato deshidrogenasa

3- SISTEMAS MULTIENZIMATICOS.

 a- SOLUBLES O DISOCIADOS. Ej.: las enzimas de la

vía glucolítica.

 b- COMPLEJO MULTIENZIMATICO. Ej.: Piruvato

deshidrogenasa

 c- SISTEMA ENZIMÁTICO ENLAZADO A MEMBRANA.

Ej.: Enzimas de la cadena respiratoria

FUNCIONES DE LAS COENZIMAS Y GRUPOS

PROSTETICOS

INTERMEDIARIOS Y
TRANSPORTADORES DE:
1.-GRUPOS FUNCIONALES
2.-ATOMOS ESPECIFICOS
3.- ELECTRONES

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FUNCIONES DE LOS IONES METALICOS

1.- ENLAZA EL SUSTRATO DIRECTAMENTE AL SITIO

CATALITICO DE LA ENZIMA: E-M-S

2.- MANTIENE LA ESTRUCTURA DE LA ENZIMA EN LA

CONFORMACION ADECUADA PARA SU UNION CON EL
SUSTRATO: M-E-S.

3.-FORMA COMPLEJOS ION METALICO-SUSTRATO QUE

CONSTITUYE EL VERDADERO SUSTRATO PARA REACCION
ENZIMATICA E-S-M.

4.-SIRVE COMO COMPONENTE ESTRUCTURAL ESENCIAL Y

SUFRE CAMBIOS REVERSIBLES
EN SU ESTADO DE OXIDACION

ALGUNAS COENZIMAS QUE ACTUAN COMO PORTADORES

TRANSITORIOS DE ATOMOS O GRUPOS FUNCIONALES
COENZIMA EJEMPLOS DE GRUPOS PRECURSOR EN LA
QUÍMICOS DIETA PARA LOS
MAMÍFEROS
Biocitina co2 Biotina
CoenzimaA Grupos Acilo Acido Pantoténico y
otras moléculas
B12
B12
5’Desoxiadenosilcobala Atomos de H y grupos Vitamina
mina ( Coenzima alquilos

Flavina Adenina Electrones Riboflabina vitamina B2

Dinucleótido
Lipoato Electrones y Grupos No se requiere en la
Acilo dieta
Nicotinamida Adenina Ion Hidruro ( :H- ) Acido Nicotínico
Dinucleotido (Niacina)
Pirodoxal fosfato Grupos Amino Pirdoxina ( B6 )
Tetrahidrofolato Grupos Monocarbonados Folato
Tiamina Pirofosfato Aldehídos Tiamina ( Vitamina B1 )

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ALGUNOS ELEMENTOS INORGANICOS QUE

ACTUAN COMO COFACTORES POR LAS ENZIMAS
CITOCROMO OXIDASA
Cu2+
CITOCROMO
Fe2+ ó Fe 3+
OXIDASA,CATLASA,PEROXIDASA
PIRUVATO QUINASA
K+
HEXOQUINASA, GLUCOSA 6-
Mg2+ FOSFATASA
2+ ARGINASA, RIBONUCLEOTIDO
Mn REDUCTASA
DINITROGENASA
Mo
UREASA
Ni2+
GLUTATION PEROXIDASA
Se
ANHIDRASA CARBONICA,ALCOHOL
Zn2+ DESHIDROGENASA,CARBOXIPEPTIDAS
A A Y B

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CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE LAS ENZIMAS

SEGÚN LA REACCIÓN QUE CATALIZAN

CLASE PRINCIPAL TIPO DE REACCIÓN

CATALIZADA
1.
1.-- Transferencia de electrones
OXIDOREDUCTASAS
2.- TRANSFERASAS
2.- Reacciones de transferencia de
grupos
3.- HIDROLASAS Rompimiento hidrolítico con
participación de agua
4.- LIASAS Adición de grupos a dobles enlaces o
formación de dobles enlaces por
eliminación de grupos
5.
5.-
- ISOMERASAS Reacciones de interconversión de
isómeros

6.
6.-
- LIGASAS Formación de enlaces C-
C-C, C
C-
-S,C
S,C-
-O,
C-N mediante reacciones de condensación
acopladas a la rotura de ATP

l.-OXIDORREDUCTASAS: DESHIDROGENASAS
REDUCTASAS
OXIDASAS
HIDROXILASAS
PEROXIDASAS

2.-TRANSFERASA : TRANSAMINASAS
TRANSFOSFORILASAS
TRANSMETILASAS

3.-HIDROLASAS: LIPASAS
PEPTIDASAS
FOSFODIESTERASAS
PEPTIDASAS
GLICOSIDASAS

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4.-LIASAS: DESCARBOXILASAS
ALDOLASAS
DESHIDRATASAS
DESAMINASAS

5.-ISOMERASAS : EPIMERASAS
MUTASAS

6.-LIGASAS: SINTETASAS
CARBOXILASAS

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LA CATALISIS ENZIMATICA ES ESENCIAL PARA

LOS SISTEMAS BIOLOGICOS
 LA MAYORÍA DE LAS MOLÉCULAS BIOLÓGICAS SON MUY
ESTABLE A pH neutro,Tª suave y el ambiente acuoso

 Las reacciones necesarias para digerir los alimentos

,enviar señales nerviosa contraer el músculo, etc.
No se podrían dar sin la intervención enzimática .

 Las Enzimas proporcionan un ambiente específico

dentro del cuál las reacciones transcurren a mayor
velocidad .

 El rasgo distintivo de una reacción catalizada

enzimáticamente es que tiene lugar dentro de los
confines de una bolsa de la enzima denominada
SITIO ACTIVO

SITIO ACTIVO
Es la región especifica de la enzima donde se
une el sustrato y cataliza su transformación .
La superficie del sitio activo esta revestida
con residuos de aminoácidos , cuyos grupos
“R” se unen al sustrato

El SITIO ACTIVO también ayudan matemáticamente a

definir el COMPORTAMIENTO CINÉTICO de los
mecanismos enzimáticos.

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SUSTRATO : molécula
fijada el el sitio activo y
sobre la que actúa la
enzima
S

SITIO ACTIVO :
Centro catalítico de
la enzima

LOS SITIOS ACTIVOS DE TODAS LAS ENZIMAS

TIENEN CARACTERISTICAS COMUNES

ES UNA HENDIDURA :

a.-TRIDIMENSIONAL formadas por grupos que

provienen de la secuencia lineal de aminoácidos y
sus cadenas laterales
b.-CARÁCTER NO POLAR de la cual el agua ha
quedado excluida
c.-El SUSTRATO SE UNE A LA ENZIMA en forma
reversible por numerosas fuerzas débiles:
fuerzas electrostáticas, puentes de hidrógeno,
fuerzas de van – der Waals e interacciones
hidrofòbicas

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CARACTERISTICAS:

TAMAÑO: PEQUEÑO

FORMA: TRIDIMENCIONAL

UNION: ENLACES DEBILES

INTERACCION: COMPACTA

ESPECIFICIDAD: ALTA

Un sustrato es capaz de unirse al centro

catalítico de la enzima que lo reconozca y
transforme en un producto a lo largo de
una serie de pasos denominados
MECANISMO ENZIMÁTICO.
LA TEORÍA CINÉTICA DE LAS
COLISIONES nos dice que en una
reacción las moléculas deben estar en
movimiento para que choquen y que sean
efectivos para que se rompan los enlaces
de las moléculas reaccionantes y formar
los enlaces de los nuevos productos.

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LAS ENZIMAS ALTERAN LA VELOCIDAD DE

REACCION PERO NO ALTERAN LOS EQUILIBRIOS
DE LA REACCION

REACCION ENZIMATICA :
E + S ES EP E + P
E = ENZIMA
S= SUSTRATO
ES, EP = COMPLEJO TRANSITORIO
P= PRODUCTO
LA FUNCION DE UN CATALIZADOR ES :
Aumentar la velocidad de las
reacciones enzimáticas

LAS ENZIMAS ACELERAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES

DISMINUYENDO LA ENERGIA DE ACTIVACIÓN FACILITADO
LA FORMACION DEL ESTADO DE TRANSICION S++

S P
 Descripción de esta reacción
Barrera Energética
Energét
mediante un diagrama de
COORDENADA DE
REACCION, con la
descripción de los cambios
energéticos

Estado Basal  La energía de los sistemas

Es la
contribución a biológicos se describe en
la energía libre función de ENERGIA LIBRE.
del sistema de
una molécula
G
,S ó P)  ENERGÍA DE ACTIVACIÓN DE
GIBBS Es la energía libre entre
Estado Basal el estado de transición
y es sustrato .

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BARRERA ENERGETICA ENTRE S Y P

Representa la energía requerida para el
alineamiento de los grupos reactivos

La formación de cargas inestables transitorias

Los reordenamiento de enlaces y otras

transformaciones que se requieren para que la
reacción tenga lugar en cualquiera de las dos
direcciones

Esto viene representado por la “colina “para que

haya reacción las moléculas han de superar esta
barrera por lo que se debe llevar a un nivel
energético superior

REACCION ENZIMATICA

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LA VELOCIDAD DE LA REACCION SE DETERMINA POR SU ENERGIA

DE ACTIVACION, y ESTAS SON BARRERAS ENERGETICAS
E + S ES La primera etapa de la catálisis enzimática es
la formación del complejo E -S ( Unión del S
al sitio Activo )esta interacción es posible en

E+P El Estado de transición , la molécula química

no tiene estabilidad significativa ,es un
momento molecular fugaz en el puede haber

Ruptura de enlaces

Formación de enlaces

Desarrollo de cargas

CONCLUSIÓN : Las Catálisis Enzimática

,aumentan la velocidad de la reacción,
disminuyendo la energía de Activación
++ Energía de Activación

MODELO LLAVE-CERRADURA POR Emil Fischer 1890

Explica en parte la ESPECIFICIDAD de la

enzima . cada enzima se une a un tipo de
sustrato ya que con el sitio activo el
SUSTRATO posee estructuras complementarias
.La forma global del S y su distribución de
carga permite entrar é interaccionar con el
sitio activo de la Enzima

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MODELO DEL AJUSTE O ENCAJE INDUCIDO POR LA INTERACCION

ENZIMA-SUSTRATO. postulado Daniel Koshland

Estructura de la Proteína Flexible ,el

sustrato no se ajusta con precisión a un sitio
activo rígido ,sino interacciones no covalentes
entre la enzima y el sustrato modifican la
estructura tridimencional .Los Sitios activos
son complementarias al Sustrato solamente
después que el Sustrato se ha unido al sitio
activo

FORMAS DE MEDIR LA ACTIVIDAD ENZIMATICA EN

MUESTRAS BIOLOGICAS
Las diminutas cantidades de enzimas presentes
en las células hacen complicado determinar su
presencia y concentración de la siguiente reacción:
E + S E S P + E

1.Midiendo la disminución en la cantidad de sustrato

transformado

2.Midiendo el aumento en la cantidad de producto

obtenido

3.Midiendo el índice de cambio en la cantidad de

coenzima

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UNIDADES CON QUE SE EXPRESA LA ACTIVIDAD

ENZIMATICA
 UNIDAD INTERNACIONAL ENZIMÁTICA
: Es la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de 1 micro mol de sustrato por
minuto, en condiciones definidas
 ACTIVIDAD ESPECIFICA : Unidades de
enzima por miligramo de proteína

 KATAL:

Actividad Molar :

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