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13/04/2010

UNIVERSIDADUNIVERSIDADUNIVERSIDADUNIVERSIDAD DEDEDEDE ELELELEL SALVADORSALVADORSALVADORSALVADOR FACULTADFACULTADFACULTADFACULTAD DEDEDEDE MEDICINAMEDICINAMEDICINAMEDICINA DEPARTAMENTODEPARTAMENTODEPARTAMENTODEPARTAMENTO DEDEDEDE BIOQUIMICABIOQUIMICABIOQUIMICABIOQUIMICA BIOQUIMICABIOQUIMICABIOQUIMICABIOQUIMICA IIII CICLOCICLOCICLOCICLO I/2010I/2010I/2010I/2010

IIII CICLOCICLOCICLOCICLO I/2010I/2010I/2010I/2010 LICDA.LICDA.LICDA.LICDA. EMMAEMMAEMMAEMMA DEDEDEDE

LICDA.LICDA.LICDA.LICDA. EMMAEMMAEMMAEMMA DEDEDEDE ALVARADOALVARADOALVARADOALVARADO

LA CINETICA ENZIMATICA

ESTUDIA LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES QUIMICAS QUE SON CATALIZADAS POR ENZIMAS

EL ESTUDIO DE LA CINÉTICA DE UNA ENZIMA PERMITE:

Explicar los detalles de su mecanismo catalítico

Describir como es regulada su actividad en la

célula Como puede ser inhibida su actividad por fármacos

Conocer su papel en el metabolismo

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CONOCER DE LOS FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMATICAS

TAMBIEN REPRESENTA EL MODO PRINCIPAL PARA

IDENTIFICAR POSIBLES AGENTES TERAPEUTICOS

QUE DE MANERA SELECTIVA INCREMENTAN O

INHIBEN LAS VELOCIDADES DE LOS PROCESOS CATALIZADOS POR ENZIMAS

LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN VIENE DADA POR LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO QUE SE TRANSFORMA EN LA UNIDAD DE TIEMPO.

La reacción catalizada por una enzima utiliza la misma cantidad de SUSTRATO y genera la misma cantidad de producto que una reacción no catalizada.

Al igual que ocurre en otros tipos de catálisis, las enzimas no alteran en absoluto LA CONSTANTE DE EQUILIBRIO de la reacción entre sustrato y producto

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SE ESTABLECE QUE CADA REACCIÓN TIENE UN ORDEN:

Primer orden se debe a un solo reactante

Segundo orden se debe a dos reactantes

Orden cero cuando no depende de ningún reactante

a un solo reactante Segundo orden se debe a dos reactantes Orden cero cuando no depende

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LA TEORIA DE LA CINETICA ,CONOCIDA COMO TEORIA DE LAS COLISIONES ESTABLECE QUE :

PARA QUE DOS MOLECULAS REACCIONES DEBEN DE :

1. Aproximarse entre sí a la distancia de formación del enlace ó bien , “chocar “

2. Deben poseer suficiente energía cinética para superar la barrera de energía y alcanzar el estado de transición.

POR LO TANTO SE DEDUCE QUE : CUALQUIER COSA QUE INCREMENTE LA FRECUENCIA Ó ENERGIA DE COLISIÓN ENTRE LOS SUSTRATOS AUMENTA LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN EN LA QUE PARTICIPAN

FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS

Cambios en el pH

Cambios en la temperatura

Concentración de cofactores

Concentración enzimática

Concentración de sustratos

Presencia de inhibidores

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TEMPERATURA

BarreraBarreraBarreraBarrera EnergéticaEnergéticaEnergéticaEnergética EnergíaEnergíaEnergíaEnergía
BarreraBarreraBarreraBarrera
EnergéticaEnergéticaEnergéticaEnergética
EnergíaEnergíaEnergíaEnergía
cinéticacinéticacinéticacinética

El número total de moléculas cuya energía cinética excede LA BARRERA DE ENERGÍA para la formación de productos se incrementa desde la TEMPERATURA BAJA A pasando por la TEMPERATURA INTERMEDIA B A LA ALTA C

Al aumentar la temperatura aumenta la energía cinética de las reacciones químicas

TEMPERATURA

T E M P E R A T U R A Las reacciones enzimáticas son sensibles

Las reacciones enzimáticas son sensibles a los cambios de temperatura debido a la naturaleza proteíca de las enzimas y puede causar :

LA DESNATURALIZACIÓN

TÉRMICA de éstas con una rápida pérdida de la actividad catalítica por interrumpir las interacciones covalentes que mantienen la estructura tridimensional de la Enzima, luego la cadena polipeptídica comienza a desdoblarse y así se DESNATURALIZARSE

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El intervalo de Temperatura en el que una enzima mantiene una conformación estable depende de la temperatura normal de las células en que se encuentra

Las enzimas del hombre son estables por

lo general a T 0 de hasta 45 – 55 0 C

Los microorganismos termófilos 100 0 C ó arriba de este valor

Temperatura óptima : es a la cual la enzima ejerce su máxima acción catalítica

CONCENTRACIÓN DEL ION H O PH

CONCENTRACIÓN DEL ION H O PH P H ÓPTIMO : Es aquel donde se transforma mayor

P H ÓPTIMO: Es aquel donde se transforma mayor número de moléculas por segundo

La mayor parte de las enzimas

intracelulares muestra actividad optima a valores de pH entre 5 y 9

Las

tienen grupos ionizables que se pueden cargar dependiendo del pH en que se encuentran.

que

enzimas

son

proteínas

El grupo carboxilo de las proteínas a pH alcalino puede ceder su protón quedando con carga –

El grupo amino de las proteínas a pH ácido puede ganar un protón quedando con carga +

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LA GANANCIA Ó PERDIDA DE GRUPOS IMPORTANTES CON CARGA AFECTA DE MANERA ADVERSA LA UNIÓN DEL SUSTRATO Y POR CONSIGUIENTE RETARDA O ANULA LA CATALISIS

P H ÓPTIMO: Es aquel donde se transforma mayor número de moléculas por segundo

CONCENTRACIÓN ENZIMÁTICA

CONCENTRACIÓN ENZIMÁTICA LA VELOCIDAD DE LA REACCION ENZIMA ES DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACION DE ENZIMAS

LA VELOCIDAD DE LA REACCION ENZIMA ES DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACION DE ENZIMAS

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EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA REACCION ENZIMATICA Desarrollaron
EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA
REACCION ENZIMATICA
Desarrollaron esta teoría y
y
propusieron una ecuación de velocidad
que explica el comportamiento cinético de
los enzimas.
Para explicar la relación observada entre
la velocidad inicial (v 0 ) y la concentración
inicial de sustrato ([S] 0 propusieron que las
reacciones catalizadas enzimáticamente
ocurren en dos etapas:
En la primera etapa se forma el complejo
enzima-sustrato
segunda, el complejo enzima-sustrato da
lugar a la formación del producto,
liberando la enzima libre
Maud Menten

ECUACIÓN DE MICHAELIS MENTEN

Es la expresión matemática que define la reacción cuantitativa entre la velocidad inicial V 0 de una reacción enzimática y la [ S ]

V = Vmax. [ S ] Km + [ S ]

V = Velocidad inicial de la reacción Vmax = Velocidad máxima al punto de saturación

[ S ] = Concentración de sustrato

Km = Constante de Michaelis – Menten. Se expresa en Moles/Litro

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EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA REACCION ENZIMATICA

DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA REACCION ENZIMATICA Si varía la concentración de SUSTRATO

Si varía la concentración de SUSTRATO y se mantiene fija la concentración de

enzima se grafica así :eje X la concentración de sustrato Y en la y la velocidad de la reacción se obtiene un gráfico de HIPERBOLA RECTANGULAR

CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO A LA CUAL LA

V i

VELOCIDAD MAXIMA

ES LA MITAD DE LA

LA K

M

ES LA

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA REACCION ENZIMATICA

A B C
A
B
C

La importancia de una reacción enzimática es el tiempo que tarda en saturarse con un sustrato en particular y la máxima velocidad de reacción que pueda alcanzar

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LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN VA AUMENTANDO A MEDIDA QUE AUMENTA LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO HASTA QUE LA ENZIMA SE SATURA

La importancia de una reacción enzimática es el tiempo que tarda en saturarse con un sustrato en particular y la máxima velocidad de reacción que pueda alcanzar

C A B
C
A
B

[ S ]

PUNTO A

V = Vmax. [ S ] Km

V = Km

[ S ]

V = Vmax. [ S ] Km + [ S ] V = Vmax =
V = Vmax. [ S ]
Km + [ S ]
V = Vmax
= K
Km

PUNTO A : Cuando la es mucho menor que Km éste se elimina.

PUNTO A : Cuando la es mucho menor que Km éste se elimina. La Vmax. y

La Vmax. y la Km son constantes por lo tanto la Velocidad de la reacción es directamente proporcional a la [ S ] con lo cual la reacción es un proceso cinético de PRIMER ORDEN.

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PUNTO C

PUNTO C V = Vmax. [ S ] Km + [ S ] V = Vmax.

V = Vmax. [ S ] Km + [ S ]

V = Vmax. [ S ] [ S ]

V = Vmax

Vmax. [ S ] Km + [ S ] V = Vmax. [ S ] [

PUNTO C :

mucho mayor que Km el término Km +

Cuando la [ S ] es

la [ S ]

= la

[ S ]

y la ecuación se

reduce

Al sustituir Km + [ S ]

por [ S ] la

ecuación se reduce a :

V = Vmax

LA REACCION ES UN PROCESO CINETICO DE ORDEN CERO.

La velocidad máxima de la reacción se alcanza cuando toda la enzima

se encuentra unida al sustrato

PUNTO B

V = Vmax. [ S ] Km + [ S ]

V = Vmax

2

PUNTO B V = Vmax. [ S ] Km + [ S ] V = Vmax

Cuando [ S ] = Km

Vi = 1/2 Vmax

EL SUSTRATO NATURAL DE UNA ENZIMA ES EL QUE TIENE MENOR

K M

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EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA REACCION ENZIMATICA

DE SUSTRATO EN LA V 0 DE UNA REACCION ENZIMATICA Una Km alta indica una baja

Una Km alta indica una baja afinidad entre la enzima y el sustrato y Viceversa .

La Vmax. indica el número de recambio de una enzima.

Número de recambio: Es la cantidad de sustrato que se transforma por minuto y por centro catalítico

CONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONES IMPORTANTESIMPORTANTESIMPORTANTESIMPORTANTES SOBRESOBRESOBRESOBRE
CONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONES IMPORTANTESIMPORTANTESIMPORTANTESIMPORTANTES SOBRESOBRESOBRESOBRE LALALALA
CINETICACINETICACINETICACINETICA DEDEDEDE MICHAELISMICHAELIS-MICHAELISMICHAELIS--MENTEN-MENTENMENTENMENTEN
CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS DEDEDEDE KmKmKmKm
Es característica de una
enzima y su sustrato en
particular, y refleja la
AFINIDAD DE LA ENZIMA
POR SU SUSTRATO.
Km es numéricamente
igual a la concentración de
sustrato con la que la
velocidad inicial de la
reacción es igual a ½ de la
Vmax
K m no varía con la
concentración de enzima

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FORMAS DE MEDIR LA ACTIVIDAD ENZIMATICA EN MUESTRAS BIOLOGICAS

LAS DIMINUTAS CANTIDADES DE ENZIMAS PRESENTES EN LAS CELULAS HACEN COMPLICADO DETERMINAR SU PRESENCIA Y CONCENTRACION DE LA SIGUIENTE REACCION:

E +

S

E S

Y CONCENTRACION DE LA SIGUIENTE REACCION: E + S E S P + E 1.Midiendo la
Y CONCENTRACION DE LA SIGUIENTE REACCION: E + S E S P + E 1.Midiendo la

P + E

1.Midiendo la disminución en la cantidad de sustrato transformado

2.Midiendo el aumento

producto obtenido 3.Midiendo el índice de cambio en la cantidad de coenzima

de

en la cantidad