FLUORESCENCIA

MOLECULAR
Mayor sensibilidad: Los límites de detección son 10 – 1000
veces menores que en la espectroscopía de absorción
 Excitación electrónica

molécula + hn molécula*

molécula* molécula + calor

Estado excitado

Estado basal o fundamental

Espín del electrón y de los estados excitados

El principio de exclusión de Pauli establece que en un átomo no puede haber dos electrones con los cuatro
números cuánticos iguales. Esta restriccción requiere que no haya más de dos electrones en un orbital y
además, los dos deben tener los estados de espín opuestos. Cuando esto ocurre se dice que los espines
están apareados. Debido al apareamiento de los espines, la mayoría de las moléculas no presentan un
campo magnético neto y se dice por tanto que son diamagnéticas, es decir, no son atraídas ni repelidas por
campos magnéticos permanentes. Por el contrario, los radicales libres, que contienen electrones
desapareados, tienen un momento magnético, y consecuentemente, son atraídos cuando se encuentran en
un campo magnético, por ello se dice que los radicales libres son paramagnéticos.
 Un estado electrónico molecular en el cual todos los espines de los electrones están apareados se llama estado
singulete y cuando la molécula se expone a un campo magnético no se produce un desdoblamiento de niveles
de energía. Por otro lado, el estado fundamental para un radical libre, es un estado doblete porque el electrón
impar puede tomar dos orientaciones en un campo magnético, lo que comunica ligeras diferencias de energía al
sistema.

Cuando uno de los electrones de una molécula se excita a un nivel de energía superior, se forma un estado
singulete o triplete. En el estado singulete excitado, el espín del electrón promocionado todavía esta apareado
con el electrón del estado fundamental; sin embargo en el estado triplete, los espines de los electrones se han
desapareado y por tanto están paralelos. El estado triplete excitado es menos energético que el estado singulete
excitado.

fotón

Estado singulete fundamental Estado singulete excitado Estado singulete excitado, de Estado triplete excitado
mayor energía
 Espín del electrón y de los estados excitados

Las propiedades de una molécula en el estado triplete excitado difieren significativamente de

las del estado singulete excitado. Por ejemplo, una molécula es paramagnética en el estado
triplete y diamagnética en el estado singulete. Más importante es el hecho de que una
transición singulete/triplete o viceversa, que también supone un cambio en el estado
electrónico, es un suceso menos probable que la correspondiente transición
singulete/singulete.

Como consecuencia, el tiempo de vida media de un estado triplete excitado puede variar
desde 10-4 hasta varios segundos, mientras que el tiempo de vida media para un estado
singulete excitado es de 10-8 a 10-5 segundos. Además, la probabilidad de que tenga lugar la
excitación inducida por radiación de una molécula en el estado fundamental a un estado
triplete excitado es muy baja, y los picos de absorción debidos a este proceso son varios
órdenes de magnitud menos intensos que los correspondientes a las transiciones análogas
singulete/singulete
 T1
Estado singulete excitado

Estado triplete
excitado

(10-9 s) (10-4 s - 10)

Estado singulete excitado (10-15 s)

Estado singulete fundamental So S2 So S1

No radiantes

Diagrama de niveles de energía parcial para un sistema fotoluminiscente

(diagrama de energía de Jablonski)
 (10-12 s)

(I, Br)

T1
Estado singulete excitado

Estado triplete
excitado

(10-9 s) (10-4 - 10 s)
Estado singulete excitado (10-15 s)

(10-12 s)

Estado singulete fundamental So S2 So S1 No radiantes

DESACTIVACIÓN DEL ESTADO EXCITADO: El camino más propicio hacia el estado fundamental es
aquel que minimiza el tiempo de vida del estado excitado.
Espectro de excitación y de emisión de fluorescencia
de la quinina en ácido sulfúrico 0.5 M
 Variables que afectan a la fluorescencia

Rendimiento cuántico o eficiencia cuántica (): Es la relación

entre el número de moléculas que emiten luminiscencia respecto
al número total de moléculas. El rendimiento cuántico de
fluorescencia para un compuesto se puede calcular a partir de las
constantes de velocidad relativas por los que el estado singulete
excitado se desactiva (fluorescencia, cruce entre sistemas,
conversión externa, conversión interna, predisociación y
disociación).

La magnitud de kf, kpd y kd dependen de la estructura química del

compuesto. El resto de las constantes depende del entorno y en
menor medida de la estructura química.
 Tipos de transiciones en fluorescencia

s*

La  es mayor para las transiciones

p* p* p porque tienen un tiempo

de vida más corto que las otras
transiciones y es menos probable
que ocurran los procesos de
Energía
n desactivación que compiten con la

* fluorescencia.

p
*
s > 250 nm
fotón
 Fluorescencia y estructura

1) Los compuestos que contienen grupos funcionales

aromáticos con transiciones p* p de baja energía son los
que presentan florescencia más intensa.

2) Los compuestos que contienen grupos carbonilo en

estructuras alifáticas y alicíclicas o estructuras con dobles
enlaces altamente conjugados, también pueden presentar
fluorescencia, pero el número de estos compuestos es
pequeño comparado con los aromáticos.

3) La mayoría de los hidrocarburos aromáticos no sustituidos

son fluorescentes en solución. La eficacia cuántica aumenta
con el número de anillos y su grado de condensación.
 NO FLUORESCENTES

H
N O S N

Piridina Furano Tiofeno Pirrol

FLUORESCENTES
H
N N
N

Quinolina Isoquinolina Indol

Efecto de los sustituyentes en la fluorescencia del benceno
COMPUESTO FÓRMULA Longitud de onda de Intensidad de
fluorescencia (nm) fluorescencia relativa
Benceno C 6 H6 270 – 310 10

Tolueno C6H5CH3 270 – 320 17

Propilbenceno C 6 H5 C3 H7 270 – 320 17

Fluorobenceno C 6 H5 F 270 – 320 10

Clorobenceno C6H5Cl 275 – 345 7

Bromobenceno C6H5Br 290 – 280 5

Yodobenceno C 6 H5 I ------ 0

Fenol C6H5OH 285 – 365 18

Ión fenolato C6H5O- 310 – 400 10

Anisol C6H5OCH3 285 – 345 20

Anilina C6H5NH2 310 – 405 20

Ión anilinio C6H5NH3+ ------ 0

Acido benzoico C6H5COOH 310 – 390 3

Benzonitrilo C6H5CN 280 – 360 20

Nitrobenceno C6H5NO2 ------- 0

 Otras variables que afectan a la fluorescencia

1) Rigidez estructural
2) Temperatura: Aumenta la probabilidad de
desactivación por conversión externa.
3) Disminución de la viscosidad: Aumenta la probabilidad
de desactivación por conversión externa.
4) Disolvente: Disminuye la fluorescencia por disolventes
que tienen átomos pesados como tetrabromuro de
carbono, yoduro de etilo.
5) pH: La fluorescencia de un compuesto aromático con
sustituyentes ácidos o básicos, depende del pH.
6) Oxígeno disuelto: Disminuye la fluorescencia porque
favorece el cruce entre sistemas y la conversión de las
moléculas excitadas al estado triplete.
7) Concentración
 Rigidez estructural

Fluoreno Bifenilo

Eficiencia cuántica: 1.0 Eficiencia cuántica: 0.2

 Efecto del pH

H
H H H + H H H H H
+
N: N N N+
-

-
Formas resonantes de la anilina ión anilinio
 Efecto de la concentración en la fluorescencia

La potencia de la emisión fluorescente F es proporcional a la potencia

radiante del haz de excitación absorbido por el sistema:
F = K’ (Po - P)
c muy elevada; A  0.05

Cuando Po es constante
F=Kc
Concentraciones elevadas provocan la autoabsorción y el apagamiento
que son factores responsables de las desviaciones negativas de la
linealidad.
Espectros de emisión y excitación

Desplazamiento de Stokes