Вы находитесь на странице: 1из 32

Классификация токсических веществ

1 вещества, определяемые
после минерализации вещества, требующие
5 особых методов
изолирования

вещества, изолируемые
2 перегонкой с водяным
паром вещества, изолируемые
6 полярными
растворителями
вещества, определяемые
3 непосредственно
в биоматериале
вещества, изолируемые
из биоматериала
вещества, изолируемые 7 различными
4 настаиванием органическими
исследуемых объектов растворителями
с водой
Классификация
лекарственных и наркотических веществ
Вещества, Вещества,
экстрагируемые экстрагируемые
1 2
из кислой среды из щелочной среды

барбитураты,
органические алкалоиды
сульфаниламидные
кислоты и их
препараты,
производные
каннабиноиды синтетические
биологически активные
вещества
нейтральные фенацетин, сердечные
соединения гликозиды производные
фенотиазина,
пиперидина,
п-аминобензойной
вещества производные ксантина, кислоты,
слабоосновного пиразола, фенилалкиламины
характера 1,4-бензодиазепина
Классификация
лекарственных и наркотических веществ
вещества
кислотного • барбитураты
характера

вещества
• производные пиразола, пурина,
слабоосновного 1,4-бензодиазепина
характера

вещества • алкалоиды
основного • синтетические лекарственные вещества
характера основного характера

• морфин, теобромин, теофиллин,


амфолиты нитразепам
Состояние лекарственных веществ
кислотного характера в растворах

-
HA + H2O A + H3O+
_
+ H+ + OH

молекулярная форма ионная форма

хорошо растворяются
в неполярных и малополярных хорошо растворяются в воде
органических растворителях
Состояние лекарственных веществ
основного характера в растворах

B + H2O BH+ + OH-


_
+ OH + H+

молекулярная форма ионная форма

хорошо растворяются
в неполярных и малополярных хорошо растворяются в воде
органических растворителях
Классификация биологических объектов

моча, промывные
жидкости с небольшим жидкости желудка,
1 содержанием биологического вода, вино, пиво,
материала спирты

кровь, желудочный
жидкости со значительным сок, содержимое
2 содержанием биоматериала кишечника, чай, кофе,
молоко, супы

твердые объекты,
таблетки, капсулы,
3 содержащие простые смеси
сахар, соль и т.д.
веществ

твердые объекты, которые хлеб, жиры, масла,


4 являются сложными биологические образцы
смесями (мышцы, волосы, ногти,
мозг, печень, почки)
Особенности анализа
некоторых биологических объектов
моча
• в суточном объеме конечной мочи (1,5–2,0 л), содержится примерно 60 г
1 сухих веществ

• на анализ отбирается не менее 200 мл мочи


2

• со временем может изменяться значение рН в результате образования


3 аммиака

• для замедления действия бактериальной флоры прибавляют фторид


4 натрия, борную кислоту

• в моче могут присутствовать эндогенные соединения –


низкомолекулярные продукты метаболизма аминокислот и сахаров
5 (мочевина, амины, соли карбоновых кислот и др.), небольшие количества
пептидов и сахаров, стероидов

• рекомендуется хранить образцы мочи при пониженной температуре,


6 при анализе быстро разлагающихся веществ – в замороженном виде
кровь

• рекомендуется хранить кровь в замороженном виде


1

• использование консерванта (5% раствор NaF) и антикоагулянтов


(цитрат натрия, эдетат натрия, оксалат калия) влияет на результаты
2 количественного определения ядов

• к эндогенным соединениям крови относятся жирные кислоты, стероидные


3 гормоны, холестерин

• в стеклянной посуде возможно связывание лекарственных веществ


4 стенками посуды

• в посуде из полипропилена или тефлона имеются мономеры смолы,


5 загрязняющие пробы крови

• содержание лекарственных веществ и их метаболитов в крови живых


объектов и трупов зависит от многих факторов (биохимические
6 изменения, артериальная или венозная кровь, положение тела пациента
при отборе крови и др.)
слюна

• пробы слюны центрифугируют и замораживают с целью замедления


1 активности ферментов

• хранят в склянках из фторопласта, тефлона или полипропилена


2

• токсические вещества, содержащиеся в слюне, связываются


с белковыми соединениями (альбумины, глобулины, липопротеиды,
3 глико- и фосфопротеины)

• ферменты слюны (амилаза, фосфатаза, лизоцим и эстеразы) влияют


4 на метаболизм токсических веществ

• между концентрацией токсического вещества в слюне и крови


существует прямая зависимость, так как неионизированные формы
5 токсиканта из плазмы пассивно диффундируют в слюну
желчь
• желчь содержит воду, эндогенные вещества, желчные кислоты
1 и пигменты

• длительное центрифугирование (желчные кислоты образуют стойкие


эмульсии) и необходимость гидролиза желчи или обработка
2 β-глюкуронидазой перед экстракцией
• рекомендуется центрифугировать пробы при низких скоростях
(удаляется холестерин), а для осаждения белков прибавлять смесь
3 хлороформ – изопропанол (9:2) или хлороформ – метанол (2:1)

фекалии
• при длительном хранении замораживают или лиофилизируют
1 для замедления действия бактериальной флоры

• высушенные образцы дают более воспроизводимые результаты


2
• наличие эндогенных (желчные кислоты, сахара, порфирины, стероиды)
и экзогенных соединений, поступивших с пищей, влияют на результаты
3 анализа
ногти

• анализ ногтей на наличие токсикантов проводится редко


1
• имеются сведения о накоплении наркотических веществ (опиатов)
2 в ногтях

• в ногтях содержится 10,1–13,7% воды, 0,15–0,76% жироподобных веществ


(холестерин и его эфиры), белок кератин и различные минеральные
3 вещества (кальций, цинк, мышьяк, фосфор и др.)

ткани мозга

• ткани мозга содержат значительное количество фосфолипидов, стеринов


1 и др.

• холестерин в мозговой ткани содержится до 2–3 %


2
печень

• при длительной и многократной экстракции остаются в экстракте


1 разнообразные эндогенные соединения

• при остром отравлении концентрация токсиканта в печени значительно


2 выше концентрации в крови

• обнаружение равных концентраций лекарственного вещества в печени


3 и крови свидетельствует о хроническом потреблении высоких доз
волосы
• в настоящее время разработаны методики определения более
1 90 лекарственных и наркотических веществ и их метаболитов

• менее полярные соединения (кокаин, героин, 6-ацетилморфин)


в большей степени накапливаются в волосах, чем более полярные
2 вещества (бензоилэкгонин, морфин, сальбутамол)

• возможность определять вещества малоустойчивые в крови или моче


3

• основным объектом анализа являются волосы головы (затылочная


4 часть)

• пробу (50–500 мг) отбирают не ранее чем через 3 недели с момента


5 поступления в организм и срезают как можно ближе к корню
Химико-токсикологический анализ волос
в мельнице или
растирание в ступке
0,1-5% раствор на воздухе с битым стеклом
додецилсульфата натрия или в токе азота или кварцем

очистка
сушка измельчение
(промывание)

экстракция из раствора,
полученного после
разложения волос извлечение разложение

непосредственная щелочное,
экстракция из волос кислотное,
ферментативное
Отбор пробы
желудок с
алкалоиды (морфин, содержимым, тонкая
атропин, бруцин, стрихнин, и толстая кишка
1 кокаин, никотин, анабазин, с содержимым, печень
кониин, пахикарпин и др.) с желчным пузырем,
почка, моча, мозг,
селезенка

печень с желчным
пузырем, почка, моча,
барбитураты и снотворные желудок с содержимым,
2 небарбитурового ряда тонкая кишка
с содержимым,
мозг, кровь

печень с желчным
пузырем, почка, моча,
3 гликозиды
сердце, тонкий кишечник,
ткани с места инъекции
Сохранение лекарственных веществ в организме

Кокаин

t1/2 = 38–67 минут

Δ9-тетрагидроканнабинол

t1/2 = 20–57 часов


Пробоподготовка

измельчение удаление белков


лиофилизация

• с помощью ножниц
• ультразвуком удаление липидов
• растирание с песком,
стеклом
• с помощью гомогенизаторов

• под вакуумом в эксикаторах, содержащих Na2SO4 или CaSO4


• cублимационное высушивание замороженных образцов в вакууме
с помощью лиофильных сушилок
Необходимость депротеинизации

Хлордиазепоксид
PB, % = 90-97

Хлорпромазин
PB, % = 95-98
Способы удаления белков
• осаждение при обработке этанолом (ацетоном, ацетонитрилом,
метанолом)

• добавление электролитов

сульфат  ацетат  хлорид  нитрат  бромид  иодид  тиоцианат

Li+  Na+  K+  Rb+  Cs+

• при очистке веществ кислотного характера: добавление


хлороводородной, хлорной, вольфрамовой кислот

• при очистке веществ основного характера: добавление


трихлоруксусной кислоты

• ферментативное депротеинизирование с использованием пепсина,


трипсина, энтерокиназы
Способы удаления липидов
• реэкстракция вещества в раствор кислоты или щелочи
и повторная экстракция

• экстракция тетрахлорметаном, петролейным эфиром и другими


органическими растворителями

• метод двумерной хроматографии

• вымораживание

• сепарационные методы
Основные этапы изолирования

1 извлечение веществ полярным растворителем


(спирт, ацетон, вода)

жидкость-жидкостная экстракция веществ


2
кислотного характера из кислой среды

жидкость-жидкостная экстракция веществ


3 основного характера из щелочной среды
Основные этапы изолирования

1 твёрдо-жидкостная экстракция

2 концентрирование

жидкость-жидкостная экстракция сорбция

хроматографические методы
Факторы, влияющие
на твердо-жидкостную экстракцию
природа объекта,
анализируемого вещества,
экстрагента
показатель ионизации
вещества
качественные
липофильность вещества

добавление электролита

навеска органа

pH
количественные
время экстракции

объем экстрагента
Извлекатели должны:
Выбор извлекателя
растворять исследуемые вещества

незначительно извлекать эндогенные вещества этанол


легко диффундировать в клетки тканей

быть малотоксичными  хорошо извлекает ионизированные


и неионизированные формы веществ
 в меньшей степени извлекает белки
 большие объемы экстрактов можно
концентрировать упариванием
вода
 методики извлечения экзогенных веществ
спиртом длительны
 при осаждении белков происходят потери
 хорошо извлекает соединения, определяемых веществ
ионизированные при  при нагревании разрушаются термо-
определенных значениях рН лабильные соединения
Соотношение навески органа и извлекателя
1:2

Масса навески биоматериала


100 г 10-20 г

Оптимальное время извлечения


вода спирт

0,5-2 часа около 24 часов

метод Васильевой метод Стаса-Отто


Токсикокинетические параметры веществ,
изолируемых полярными растворителями
pKa pKBH+
Соединение lgP t1/2, час Vd, л/кг PB, %
1 2 1 2
антипирин - - 1,5 - 0,4 7-15 0,6 10

теобромин 10 - 0,8 - 0,8 5-11 0,5-1 -

теофиллин 8,6 - 0,8 - 0 3-13 0,5 40

кофеин - - 0,6 - 0 2-10 0,5 35

барбитал 8,0 11 - - 1,7 40 0,8 26

атропин - - 9,9 - 1,8 2-3 2-3 50

скополамин - - 7,6 - 1,2 - - -

кокаин - - 8,6 - - 0,7-1,5 1-3 -


Уравнение Гендерсона-Хассельбаха

𝑛кислота
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 − 𝑙𝑔
𝑛основание

pHопт = pKa ± 2
pH
H2A + H2O HA- + H3O+

HA- + H2O A2- + H3O+



OH 1% 99 %

𝑛(𝐻𝐴− ) 0,01
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎2 − 𝑙𝑔 2−
= 11,0 − 𝑙𝑔 = 𝑝𝐾𝑎 + 2 = 13,0
𝑛(𝐴 ) 0,99

Барбитал

𝑝𝐾𝑎1 = 8,0
𝑝𝐾𝑎2 = 11,0
pH

B + H2O BH+ + OH-


+
H 1% 99 %

𝑛 𝐵𝐻 + 0,99
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝐵𝐻 + − 𝑙𝑔 = 6,0 − 𝑙𝑔 = 𝑝𝐾𝐵𝐻 + − 2 = 4,0
𝑛 𝐵 0,01

Папаверин

𝑝𝐾𝐵𝐻 + = 6,0
!
извлечение водой барбитуратов при рН 1–3 можно объяснить действием
эндогенных ПАВ (жирные кислоты, фосфолипиды), находящихся в тканях
и способствующих солюбилизации молекул веществ кислотного характера

!
значения рН 5–7 соответствуют области максимального взаимодействия
веществ основного характера с белками, извлечение веществ основного
характера проводят при рН 2–3

изолирование
подкисленным спиртом
ОБЩИЕ МЕТОДЫ
ИЗОЛИРОВАНИЯ
изолирование
подкисленной водой
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ !