ESTRUCTURA DE AMINOÁ CIDOS Y PRECIPITACIÓ N DE CASEÍNA.

TATIANA MORIMITSU

COD. 510032

LINA MARIA PASCUMAL

COD. 510033

MARCELO HURTADO CHAVARRO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA, SEDE PALMIRA.

FACULTAD DE INGENIERÍA Y ADMINISTRACIÓ N

INGENIERÍA AMBIENTAL.

09/03/11 SANTIAGO DE CALI

Objetivo General

Al finalizar la prá ctica el estudiante estará en la capacidad de manejar el concepto de

punto isoeléctrico de una proteína y su relació n con el pH del medio en el que se
encuentra.

Objetivo Específico

Discutir las características estructurales de los aminoá cidos, el concepto de pH o punto

isoeléctrico, mediante la precipitació n de la caseína.

Materiales

 Vaso de precipitados.
 Estufa
 Tohallas de papel

Reactivos

 50ml de leche
 Á cido acético 2 M
 20ml de mezcla 1:1 etanol y éter etílico.

Procedimiento

En un vaso de precipitados, caliente 50ml de leche hasta una temperatura de 40ºC

aproximadamente y proceda a la adició n, gota a gota, con aagitació n y
calentamiento constante, de ácido acético 2 M, hasta cuando el pH sea 4.7. Enfríe la
suspensió n a tempeaura ambiente, déjela reposar y filtre.
Lave el precipitado con 20ml de una mexcla 1:1 de etanol y éter etílico y luego
séquelo con tohallas de papel. El precipitado corresponde a la preoteína Caseína.

Marco Teó rico.

Los aminoá cidos son moléculas orgá nicas pequeñ as con un grupo amino (NH2) y un grupo
carboxilo (COOH). La gran cantidad de proteínas que se conocen está n formadas
ú nicamente por 20 aminoá cidos diferentes. Se conocen otros 150 que no forman parte de
las proteínas. 

Las proteínas son las sustancias que componen las estructuras celulares y las
herramientas que hacen posible las reacciones químicas del metabolismo celular.

La presencia de grupos acido (-COOH) y bá sico (-NH2) otorga a los aminoá cidos
unas propiedades ácido base características.

En medios á cidos fuertes, tanto el grupo amino como el grupo á cido se encuentran
protonados y el aminoá cido tiene la siguiente forma:
Al subir el pH se desprotona el grupo má s ácido, H de menor pKa, formá ndose una especie
neutra llamada Zwitterió n.

Cuando el aminoá cido se encuentra en medios bá sicos pierde el protó n del grupo amino,
dando lugar a la especie desprotonada.

Se llama pH isoeléctrico o punto isoelectrico al pH en el que la concentració n de Zwitterió n

es má xima (el aminoá cido no presenta carga neta). 
Otra definició n de punto isoelectrico es: pH al que la concentració n de especies
protonadas y desprotonadas se iguala.

El pH isoelectrico se calcula como media de pKa,1 y pKa,2, es decir, la media de los pKas de
las etapas que forman y descomponen el Zwitterió n.

1. Que sucede cuando se adiciona el reactivo de biuret a la proteína? Explique los

resultados
2. Que sucede cuando se adiciona el reactivo de biuret al suero sin filtrar? Explique
resultados.

3. Que sucede al agregar oxalato de amonio al suero filtrado? Explique los resultados

4. Como pueden clasificarse los aminoá cidos examine las características comunes de
cada grupo? compare los diferentes radicales de cada aminoá cido y familiarícese
con su estructura.

5. Que se entiende por PH o punto isoeléctrico de un aminoá cido o una proteína?

¿Por qué en dicho punto las especies se precipitan? ¿Qué es lo que permite que los
aminoá cidos actú en como reguladores de PH de los fluidos bioló gicos?

6. Experimentalmente ¿có mo diferenciaría usted entre un aminoá cido aromá tico y

otro que no lo es? Indague al respecto y diseñ e un breve protocolo de laboratorio
para la respectiva experimentació n.

SOLUCIÓ N

1. Cuando se adiciona el reactivo de biuret a la proteína este toma una tonalidad

violeta.

El reactivo de Biuret está formado por una disolució n alcalina de sulfato de

cobre en presencia de hidró xido de potasio. Este ú ltimo actú a como regulador
del pH, evitando la precipitació n del hidró xido de cobre. La caseína reacciona
con el cu2+ en un medio alcalino.

El color lila se produce debido a que 4 grupos amino del polipéptico forman un
complejo con el ion Cu2+, por enlace dador-aceptor, gracias al par de
electrones no ocupados del nitró geno.

2. Cuando se adiciona el reactivo de biuret al suero éste toma una tonalidad

violeta.

El reactivo de Biuret está formado por una disolució n alcalina de sulfato de

cobre en presencia de hidró xido de potasio. Este ú ltimo actú a como regulador
del pH, evitando la precipitació n del hidró xido de cobre. Las proteínas
reaccionan con el cu2+ en une medio alcalino.
 El color lila se produce debido a que 4 grupos amino del polipéptico forman un
complejo con el ion Cu2+, por enlace dador-aceptor, gracias al par de
electrones no ocupados del nitró geno.

3. Al agregar oxalato de amonio al suelo éste precipita el calcio que se encuentra

disuelto en el suero en forma de iones

4. Los aminoá cidos se clasifican de acuerdo con su capacidad para interaccionar

con el agua. Utilizando este criterio, hay cuatro clases de aminoá cidos:
apolares neutros, polares neutros, ácidos, bá sicos

Los aminoá cidos que contienen cadenas laterales (Grupo R) con grupos
carboxilo se clasifican como aminoá cidos ácidos.

Los aminoá cidos que contienen cadenas laterales (Grupo R) con grupos amino
se clasifican como aminoá cidos bá sicos.

El resto de los aminoá cidos se clasifican como aminoácidos neutros.

5. Las proteínas se encuentran como mezclas complejas, sin embargo es posible

separar unas de otras al variar el PH de la solució n. Cuando alguna de ellas
alcanza el denominado punto isoeléctrico, es decir, cuando su carga neta cero,
precipita y puede separarse.

Se precipitan para disminuir el PH hasta el punto isoeléctrico de la proteína

que se quiera separar.

Las proteínas al igual que los aminoácidos son anfóteras, es decir se pueden
comportar como ácidos y como bases dependiendo del pH del medio, esto es
debido a la presencia de aminoácidos con grupos ionizables, que pueden captar y
ceder H+, como consecuencia pueden amortiguar las variaciones de pH.
 Las proteínas contribuyen a mantener el equilibrio del medio interno y debido a
su carácter anfó tero actú an como sistemas amortiguadores de pH.

6. Reacció n de Xantoprotéico

Rotule 6 tubos de ensayo identificados cada uno como: blanco, tirosina, fenil-
alanina, problema, albú mina de huevo y proteína de trigo. Agregue a cada tubo
2 mL. de la solució n correspondiente y 2 mL. de á cido nítrico concentrado.
Caliente en bañ o de agua a ebullició n, la aparició n de una coloració n amarilla
es una prueba positiva para aminoá cidos aromá ticos. Deje enfriar y agregue a
cada tubo de ensayo 1.5 mL. de NaOH 40%, el cambio de color a anaranjado
confirma la prueba.
BIBLIOGRAFIA

 SAENZ Peñ a, Chaco. Hipertextos del á rea de la biología, Proteínas: cadenas de

aminoá cidos, Repú blica Argentina, Abril del 2003
http://www.biologia.edu.ar/macromoleculas/aminoaci.htm

 FERNÁ NDEZ, Germá n, Academia Minas, Aminoácidos - Punto Isoeléctrico, Españ a,

2010
http://www.quimicaorganica.org/aminoacidos-peptidos-proteinas/punto-
isoelectrico.html