COLORACIONES COMPUESTAS O

DIFERENCIALES Y METODOS DE SIEMBRA

19 de marzo de 2011

ASOCIACION PRIVADA UNIVERSIDAD SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE ENFERMERIA

Nombre: Vanessa Otero Yparraguirre

Curso: Microbiología y Parasitología

Tema: Coloraciones compuestas o
diferenciales y métodos de siembra.
Docente: Esther Valencia.
Aula: 29
Año: 2011

1. Tinción de Gram:

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La tinción de Gram es una técnica de coloración de contraste o diferencial,

que se desarrolló en 1844 y se utiliza en microbiología para la observación
de bacterias, las cuales, con base en la reacción que tengan las paredes de
los microorganismos a los colorantes usados con esta técnica, se les
califica en gran positivos y gran negativos; considerándose bacterias Gram
positivas a las bacterias que se aprecian en color violeta y en color rosa
bacterias a las Gram negativas, otra ventaja es que se puede efectuar una
percepción primordial a las diferencias entre bacterias, por su morfología
(Cocos Bacilos y Espirilos).

Los elementos que interviene son:

• Violeta de Genciana: Colorante primario.

• Bicarbonato de sodio.

• Lugol

• Decolorante

• Fucsina Básica

La violeta de genciana actúa como colorante primario y se une a la pared

celular primaria luego del tratamiento del Lugol (mordiente) después de la
acción de la acetona ( decolorante).

Las bacterias que retienen la violeta de genciana y se denominaran Gram +

de color purpura o morado, Otras bacterias por tener mayor cantidad de lípidos
en su pared celular pierden la violeta de genciana cuando se tratan con el
decolorante y se teñirán con la Fuccina básica que es un colorante secundario
dando un color rojo como observación.

Material:

• Cultivos bacterianos

• Portaobjetos

• Asa de platino

• Mechero

• Microscopio

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• Aceite de inmersión

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Reactivos:

• Colorante primario: Violeta de genciana

• Lugol ( mordiente)

• Acetona (decolorado)

• Fucsina básica ( colorante de contraste)

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PROCEDIMIENTO:

• Extension del cultivo, desecación, fijación.

• Cubrir con violeta de genciana durante 1 a 2 minutos.

• Sin lavar reemplazar el colorante por el Lugol por 1 minuto.

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• Lavar con agua.

• Decolorar con alcohol por 30 segundos.

• Teñir con Fucsina básica diluida durante 3 minutos, lavar, secar.

2. Coloracion de Ziehl Neelsen

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Este tipo de coloración nos permite identificar bacterias acido-

resistentes las cuales no colorean bien con la tinción Gram ya que
presentan alto contenido de lípidos y acido micotico en la pared celular,
en este grupo encontramos el Mycobacterium tuberculosis.

Material:

• Laminas con frotices de esputo con BAAR.

NOTA: En este caso no se utilizo una muestra de esputo, solo se hizo

un raspado en la mano de un voluntario para poder verificar si tenía
o no microorganismos.

Reactivos:

• Colorante primario: Fucsina básica fenicada.

• Decolorador o diferenciador: Alcohol acido.

• Colorante de contraste: Azul de metileno.

• Mechero de alcohol, varillas portalaminas.

PROCEDIMIENTO:

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• Cubrir el frotis con fucsina fenicana, calentando hasta la

emisión de vapores, 3 emisiones.

• Lavar con agua.

• Decolorar con alcohol etílico.

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• Otra vez lavar con agua.

• Colorear con azul de metileno.

• Lavar con agua, secar y observar.

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