Regeneración, rejuvenecimiento de tejidos y optimización de la cicatrización a través de

factores de crecimiento y células madre autólogas

Dr. Edgardo Amílcar Celi (Hematología - Regeneración de tejidos)

La Plata - Argentina
E-mail: ito@netverk.com.ar
Revista SEMAL Nº9

El objetivo del presente trabajo es regenerar (1) y/o

mejorar los tejidos y las cicatrizaciones en cirugías o por
consultorio externo a través de procedimientos autólogos.
Para lograr estos objetivos se usan en forma sistemática
factores de crecimiento plaquetarios (2), células madre (3) Dr. Edgardo Amílcar
y los productos residuales a partir de la producción de los Celi
mismos (4). E-mail:
ito@netverk.com.ar
La función normal de los tejidos requiere que el índice de
la pérdida celular - apoptosis (5,6) - sea correspondido por el índice de su renovación.
El envejecimiento de un individuo se produce por la disminución de la reparación o la
aceleración de la pérdida celular de los tejidos de los órganos (envejecimiento celular).
El conocimiento de este mecanismo de envejecimiento celular nos hizo plantear dos
preguntas:

1. ¿Cuál es el reloj celular que mide el tiempo de la senectud replicativa celular?

2. ¿Cuál es el lazo entre la senectud de la célula y el envejecimiento del organismo?

Dado el agotamiento celular continuo, que sucede en el tiempo, cuando la pérdida

excede la reparación, lo que sobreviene conduce eventualmente a una declinación en la
función y, en última instancia, a la falla del órgano. Cuando está restringido a órganos
específicos, puede dar lugar a una de las muchas enfermedades degenerativas crónicas
tales como cirrosis del hígado.

Actualmente, se sabe que en este envejecimiento está implicada la telomerasa (7)

(disminución de la misma) con pérdida parcial del extremo telomérico que hace que
cada célula tenga una cantidad máxima de mitosis (aproximadamente 50 para los
fibroblastos).

Podemos alterar, al menos en parte, el curso de este envejecimiento con el uso de

células madre autólogas y factores de crecimiento plaquetarios para lograr
mejoramiento de los tejidos e incluso beneficiar la cicatrización de los mismos.

Los factores de crecimiento (Tabla 1) se encuentran englobados en las moléculas de

bajo peso molecular que reciben el nombre genérico de citoquinas (Tabla 2). Estas son
moléculas solubles que trasmiten información entre células. Son secretadas por las
células de origen en respuesta a señales específicas e influyen en la respuesta y función
de las células blanco.

Tabla 1. Principales Factores de Crecimiento

PDGF : Factor de Crecimiento Derivado de Plaquetas
TGF-b : Factor de Crecimiento Transformante beta
EGF : Factor de Crecimiento Epidérmico
VEGF : Factor de Crecimiento Vascular Endotelial
IGF-I : Factor de Crecimiento Insulínico tipo I
bFGF : Factor de Crecimiento Fibroblástico básico

Tabla 2. Clasificación de las citoquinas

Interleuquinas (IL): 1 - 15
Interferones (IF): alfa, beta, gamma
Factor de necrosis tumoral (TNF) alfa y beta
Factores estimulantes de colonias (CSF)
Factores de crecimiento Transformante (TGF)
Otros factores de crecimiento (PDGF)
Una célula madre o stem cell (8) es una célula que tiene la capacidad de dividirse
(auto replicarse) por períodos indefinidos de tiempo a través de la vida del organismo.
Bajo condiciones apropiadas, o dadas las señales correctas, las stem cells pueden
diferenciarse hacia los diversos tipos de células que forman el organismo (9). Según su
potencialidad se clasifican en: totipotente (generan células embrionarias (embriones),
pluripotente (generan todos los tipos celulares del embrión), multipotente (generan
órganos con sus tipos celulares), oligopotente (generan tejidos específicos de un órgano)
y unipotente (generan un solo tipo de célula madura). Debido a la capacidad de remedar
o tomar las funciones del tejido a reparar se dice que tienen plasticidad (10). La
plasticidad es la capacidad de una stem cell adulta de tomar la función del tejido a
reparar. (Las hemopoyéticas se usan a nivel experimental para resolver patologías de
cualquier tipo de tejido). Por ejemplo, tejido vascular (11), adiposo (12), hepático (13),
etc.

Otras de las stem cells usadas para reparación o regeneración de tejidos son las SC
mesenquimáticas (14) (MSC - son una proporción importante de las SC de la médula
ósea). Las MSC representan una opción terapéutica atractiva ya que pueden aislarse con
relativa facilidad. Se está explorando la capacidad de las MSC para regenerar tejidos
que el organismo no puede reparar o lo hace muy lentamente. Las MSC no sólo
iniciarían la regeneración tisular, sino que podrían contribuir a la movilización de otras
SC hacia el sitio de reparación. Se suele realizar una siembra directa en el sitio dañado
para atenuar o corregir desórdenes del tejido.

Uno de los conceptos más modernos de las residencias de las SC es el de "Nicho". Las
stem cells junto con las células del micro entorno que las rodean forman el nicho (15,
16) de las SC. Se puede definir funcionalmente como la "unidad multicelular y
estructural dinámica" que balancee las decisiones de auto-renovación y destino de las
stem cells.
Las stem cells hematopoyéticas (HSCs) residen en los lugares localizados en el hueso
trabecular donde entran en contacto con los osteoblastos. Las digestivas (17) se asocian
para precisar localizaciones dentro de las subestructuras discretas (ej. unidades gástricas
o criptas intestinales). Las epidérmicas (18) con el potencial de llenar de queratinocitos
basales, el pelo y las glándulas sebáceas se encuentran en la ampolla del folículo piloso.

Del estudio de los nichos se desprende que de acuerdo a la capacidad de dividirse y

actuar hay tres tipos de stem cells (19):

1. "Long term SC" - LTSC - (son las células de reservorio por excelencia).
2. "Short term SC" - STSC - (son las que actúan como reparadoras o regeneradoras
de los tejidos -se calcula que se dividen aproximadamente durante dos meses
antes de desaparecer-).
3. "Multi Potent Progenitor" - MPP - (son la última fase de las stem cells, ya con
las características del tejido blanco -alta tasa de mitosis y corta sobrevida).

Una manera de "medir" la cantidad, o sea, la posible funcionalidad de las stem cells de
médula ósea es por el recuento de las mismas en sangre periférica. Se realiza a través
del antígeno CD34. El mismo nos da pautas indirectas de la posibilidad de que las
células hemopoyéticas reactiven los tejidos a tratar. El recuento mínimo funcional es
0.04% de los leucocitos circulantes.

Es importante precisar que la población CD34+ representa el 1% al 6% de la médula,

mientras que el subconjunto de HCS representa el solamente cerca de 0.05%. Así, la
población CD34+ incluye, además de HCS, células no HCS (por ejemplo stem cells
mesenquimáticas).

Obtención de Factores de crecimiento

Las técnicas para la obtención de plasma rico en factores de crecimiento siguen las
pautas del Dr. Anitua con respecto a la obtención de la muestra y los tiempos de
centrifugación (aprox. 10´ a 500 x g. para una centrífuga de mesa). La diferencia es que
no realizamos la activación plaquetaria con Cl2Ca al 10% ya que tratamos a los tejidos
blandos con heridas quirúrgicas y en los cuales la cascada de la coagulación se
encuentra activada.

Obtención de Stem cells

Se obtienen 15 a 20 cc. de médula ósea (en 2 a 3 punciones esternales). No se aspira
más de 7 cc. por cada punción. Se centrifuga 20´ a 250 x g. Se extraen las stem cells de
la zona del Buffy Coat, incluída la zona de neocitos. El resto se descarta. (Fig. 1).
Seguidamente, se lleva a cabo la separación de stem cells y células mononucleares por
gradiente de densidad (Ficoll Hypaque) (Fig. 2). Una vez obtenidas las stem cells se
resuspenden en el plasma rico en factores de crecimiento aplicándose del mismo modo
que los factores de crecimiento solos.
 Figura 1 Figura 2
Los Factores de crecimiento se aplican en piel (cara, escote y cuello, manos, etc.)
(20), zonas de sutura, estrías, cicatrices, cavidades virtuales (lifting) y úlceras
(miembros inferiores). Los Factores de Crecimiento + stem cells se aplican en cuero
cabelludo, lipotransferencias (21), revascularización MI y cardiaca.

En relación a la optimización y sistematización de diferentes técnicas en uso para

rejuvenecimiento, actualmente estamos realizando estudios prospectivos con:

1. Láser solo y combinado con factores de crecimiento y/o células madre,

2. Factores de crecimiento + activación de monolitos,
3. Recuperación de stem cells del tejido adiposo de las lipoaspiraciones.

BIBLIOGRAFÍA

1. Toward Regenerative Medicine. Eric Lagasse, Judith A. Shizuru, Nobuko

Uchida, Ann Tsukamoto, Irving L. Weissman Immunity, Vol. 14, 425-436,
2001.

2. Mechanism of Action and In Vivo Role of Platelet-Derived Growth Factor. Carl

Henrik Heldin and Bengt Westermark. Physiological Reviews, Vol. 79, No. 4,
1999.

3. Bone Marrow Stromal Stem Cells: Nature, Biology, and Potential Applications.
Paolo Bianco, Mara Riminucci, Stan Gronthos, Pamela Gehron Robey. Stem
Cells, 19:180-192. 2001.

4. Activated macrophages are an adaptive element of the colonic epithelial

progenitor niche necessary for regenerative responses to injury. Sarah L. Pull,
Jason M. Doherty, Jason C. Mills, Jeffrey I. Gordon, and Thaddeus S.
Stappenbeck. PNAS, 102: 99-104. 2005.
5. Apoptosis and Dependence Receptors: A Molecular Basis for Cellular
Addiction. Dale E. Bredesen, Patrick Mehlen,and Shahrooz Rabizadeh. Physiol
Rev 84:411-430, 2004.

6. Caspase activity is required for commitment to Fas-mediated apoptosis. Vanessa

L. Longthorne and Gwyn T.Williams. The EMBO J. 16: 3805-3812, 1997.

7. Do tumor-suppressive mechanisms contribute to organism aging by inducing

stem cell senescence? Pier Giuseppe Pelicci. J. Clin. Invest. 113:4-7. 2004.

8. Prometheus's Vulture and the Stem-Cell Promise. Nadia Rosenthal, N. Engl. J.

Med. 349;3. 2003.

9. Adult mesenchymal stem cells and cell-based tissue engineering. Rocky S Tuan,
Genevieve Boland and Richard Tuli. Arthritis Research and Therapy Vol 5 No
1. 2002.

10. Little Evidence for Developmental Plasticity of Adult Hematopoietic Stem

Cells. Amy J. Wagers, Richard I. Sherwood, Julie L. Christensen, Irving L.
Weissman. Science, 297, 2002.

11. In Vivo Angiogenic Phenotype of Endothelial Cells and Pericytes Induced by

Vascular Endothelial Growth Factor-A Antonella N. Witmer, Bart C. van
Blijswijk, Cornelis J.F. van Noorden, Gijs F.J.M. Vrensen, and Reinier O.
Schlingemann. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 52(1): 39-52, 2004.

12. Tissue Engineering Strategies for Adipose Tissue Repair. C.W. Patrick, JR. The
Anatomical Record 263:361-366, 2001.

13. Potential of Hematopoietic Stem Cell Therapy in Hepatology: A Critical

Review. Steven Masson, David J. Harrison, John N. Plevris, Philip N.
Newsomea. Stem Cells; 22: 897-907. 2004.

14. Marrow stromal stem cells. Paolo Bianco and Pamela Gehron Robey. J. Clin.
Inves. 105, Number 12. 2000.

15. The right place at the right time. Editorial. Nature Immunology, Vol 7, nº 4,
2006.

16. The stem cell niches in bone. Tong Yin, and Linheng Li. The Journal of Clinical
Investigation, Volume 116, Number 5, 2006.

17. The intestinal stem cell niche: There grows the neighborhood. Jason C. Mills
and Jeffrey I. Gordon. PNAS, 98: 12334-12336. 2001.

18. Epithelial Stem Cells and Their Niche: There's No Place Like Home. Adnan Z.
Rizvi,a Melissa H. Wong. Stem Cells; 23:150-165. 2005.

19. Differential Expression of Novel Potential Regulators in Hematopoietic Stem

Cells. E. Camilla Forsberg, Susan S. Prohaska, Sol Katzman, Garrett C. Heffner,
Josh M. Stuart, Irving L. Weissman. PLoS Genetics, Volume 1, 3 e28. 2005.
20. Factores de crecimiento en cirugía plástica (Comunicación preliminar). Dr.
Daniel Fabrizio, Dr. Abel Chajchir, Dr. Gustavo Chajchir, Dr. Edgardo Celi.
Revista Argentina de Cirugía Plástica, Volumen X, Número 3, 2004.

21. Uso de factores de crecimiento y células madre en autoinjerto de grasa. Dr. Abel
Chajchir, Dr. Gustavo Chajchir, Dr. Edgardo Celi y Dr. Marcelo Gómez Barreto.
Revista Argentina de Cirugía Plástica, Volumen XII, Número 2, 2005.