Молекулярно-генетическое исследование плаценты

и тканей плода, полученных в результате медицинского аборта

- случаи из практики

Аннотация: Приведены данные, полученные в результате исследования

биоматериала плаценты и плодных тканей, полученных в результате медицинского
аборта. Показана возможность установления «отцовства» определенного мужчины по
отношению к абортированному плоду и, соответственно, идентификация насильника.
Ключевые слова: молекулярно-генетическое исследование, плацента, плод.

Molecular genetic research of the placenta and fetal tissues,

obtained as a result of medical abortion - cases from practice

Abstract: The data obtained from the study of the biomaterial of the placenta and fetal
tissues obtained as a result of medical abortion are presented. The possibility of establishing the
"paternity" of a certain man in relation to the aborted fetus and, accordingly, the identification of
the rapist is shown.
Keywords: Molecular genetic research, placenta, fetus.

Figura 1. Structura placentei

(sursa: www.medichub.ro/reviste/ginecologia-ro/abordarea-diagnostica-si-terapeutica-a-placentei-invazive-id-245-cmsid-65 )

https://www.nastenatural.ro/rolul-placentei-in-sarcina-si-la-nastere/rolul-placentei-url-copy-copy/
 ВВЕДЕНИЕ
В практику современных экспертных методов исследования,
используемых при расследовании уголовных и гражданских дел, прочно
вошли судебно-медицинские экспертные исследования с применением
молекулярно-генетических методов анализа.
В последние годы участились случаи нахождения (обнаружения)
мертвых новорожденных детей с признаками насильственной смерти, с
наличием пуповины и плаценты. Этот факт вызывает возникновение
закономерного вопроса у следователей о возможности выделения
материнской ДНК из плаценты для последующей (дальнейшей)
идентификации биологической матери данного младенца, т.е. перед
экспертом ставится задача выделения генотипа матери при предоставлении
плаценты на исследование. В данном случае больший интерес представляет
исследование плаценты, т.к. она содержит биологический материал и матери
и плода/новорожденного младенца. Выделение ДНК младенца и плаценты
позволяет проводить последующий анализ и сравнение с целью возможного
установления генотипа матери. Подобные экспертизы проводились и
экспертами-биологами нашего Центра, сделан вывод о том, что
идентификация биологической матери без наличия её образца в таких
случаях невозможна [4]. Кочеткова Е. А. журнал судебная медицина наука |
практика | образование; www.cудебная-медицина.рф; том 2 №1, февраль 2016, с. 45-47.
Довольно редко на исследование поступает биологический материал,
полученный при искусственном прекращении беременности (аборте),
производимом у женщин, забеременевших в результате изнасилования. При
назначении экспертизы в таких случаях перед экспертом ставится вопрос об
идентификации насильника, фактически - вопрос о возможности его
«отцовства» по отношению к плоду, ткани которого получены в результате
аборта. Учитывая редкость подобных экспертиз, мы не имели возможность
представления (рассмотрения) большего количества исследований, однако
наш опыт в данном вопросе позволяет нам сделать определенные выводы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Placenta (lat. placenta) poate fi numită ca un organ musculos și spongios
care se formează în perioada de (sarcină) gestația la majoritatea mamiferelor și
care face legătura între mama și embrion, servind la nutriția și respirația acestuia,
acesta eliminându-se la naștere.
Legătura dintre placentă și făt este asigurată de cordonul ombilical.
La femeie, placenta are o greutate între 500 și 600 de grame, având un
diametru de 15–20 cm. Ea se formează după procesul de nidație (fixare a ovulei
fecundate), din mucoasa uterină și embrion.
Placenta este bogat vascularizată prin difuzie are rolul de respirație și
nutriție a embrionului, dar mai are un rol de barieră, protejând embrionul față de
unii germeni patogeni [6]. https://ro.wikipedia.org/wiki/Placentă
 Între partea fetală și cea maternă a placentei - decidua bazală - există
adâncituri umplute cu sânge matern (figura 1). Această parte a placentei este
împărțită prin septuri deciduale în 15-20 de spații în formă de cupă (cotiledonate),
fiecare cotiledon conține ramura principală, formată din vase de sânge ombilicale
ale fătului, care se ramifică în continuare în setul vilozităților corionice care
formează suprafața cotiledonului. Datorită barierei placentare, fluxul sanguin al
mamei și al fătului nu comunică între ele. Schimbul de materiale are loc prin
difuzie, osmoză sau transport activ [1,4]. Атлас по гистологии, цитологии и
эмбриологии. / Кузнецов С. Л. + Сапин М.Р. Анатомия человека.
Между плодовой и материнской частью плаценты — базальной децидуальной
оболочкой — находятся наполненные материнской кровью углубления (рис.1). Эта часть
плаценты разделена децидуальными септами на 15-20 чашеобразных пространств
(котиледонов), каждый котиледон содержит главную ветвь, состоящую из пупочных
кровеносных сосудов плода, которая разветвляется далее во множестве ворсинок хориона,
образующих поверхность котиледона. Благодаря плацентарному барьеру кровоток матери и
плода не сообщаются между собой. Обмен материалами происходит при помощи диффузии,
осмоса или активного транспорта [1].
Если рассматривать беременность по неделям, ее разделяют на два
этапа: эмбриональный (до 8 недель) и фетальный (с 9 недели до родов). В
первом случае зародыш называют эмбрионом, а во втором – плодом, у
которого идет активное формирование внутренних органов и систем [5].
https://orekhovo.clinic/spravochnik/vidy-abortov/
В отделение Biologie medico-legală a CML был предоставлен
биологический материал, полученный при проведении медицинского аборта
на сроке 12-13 недель у несовершеннолетней пациентки, беременность
которой наступила в результате изнасилования, материал изъят следователем
din secția morfopatologică больницы, в которой был проведен аборт. На
исследование предоставлены 2 контейнера с содержимым в виде аморфных
масс de culoare cafeniu-brună, cu dimensiunile cca 3,5x2,0x1,0cm în containerul
cu inscripția pe etichetă „№1 - placenta”, și dimensiunile cca 4,0x3,0x1,5cm în
containerul cu inscripția pe etichetă „№2 - țesuturi fetale”. Параллельно на
исследование, в качестве сравнительного материала, предоставлены образцы
потерпевшей и подозреваемого в изнасиловании.
Экспертиза проводилась при помощи идентификационного анализа, в
основе которого лежит феномен полиморфизма длин амплифицированных
фрагментов (ПДАФ) ДНК, на сегодняшний день являющимся базовым в
судебно-медицинских генетических исследованиях вещественных
доказательств.
Extracţia ADN din materialul prezentat și probele de referință a fost
efectuată pe particule magnetice cu utilizarea kitului PrepFiler BTA Forensic DNA
Extraction Kit, produs de Applied BiosystemsTM, ThermoFisher Scientific,
conform protocolului către acest kit a producătorului.
ADN-ul extras a fost amplificat în reacţia de polimerizare în lanţ (PCR) care
s-a efectuat cu termociclorul ThermalCycler Veriti® 96-well, ThermoFisher
Scientific, utilizînd kitul de reagenţi pentru amplificare GlobalFiler TMPCR
Amplification Kit, produs de Applied BiosystemsTM, ThermoFisher Scientific,
USA, pe 24 loci specifici ADN-ului uman, reprezentând: 21 markeri STR
autozomali (D3S1358, vWA, D16S539, CSF1PO, TPOX, D8S1179, D21S11, D18S51,
D2S441, D19S433, TH01, FGA, D22S1045, D5S818, D13S317, D7S820, SE33, D10S1248,
D1S1656, D12S391, D2S1338); 1 marker STR DYS391 plasat pe cromozomul Y;
markerul cu polimorfismul de inserţie/deleţie plasat pe cromozomul Y (Yindel) şi
markerul de determinare a sexului Amelogenina, totul într-o singură reacţie PCR.
Reacţia de amplificare s-a efectuat conform protocolului către kit respectând
parametrii recomandaţi de producător.
Produşii amplificării ADN obţinuţi au fost separaţi prin electroforeză
capilară în aparatul 3500 HID Genetic Analyzer, Applied Biosystems TM,
ThermoFisher Scientific, conform protocolului producătorului. În procesul
separării electroforetice a fragmentelor de ADN amplificate datele de fluorescenţă
au fost preluate de softul 3500 Data Collection v. 3.1. În calitate de markeri ai
maselor moleculare s-a folosit GeneScan™ 600 LIZ® Size Standard v2.0, care
conţine un set de fragmente de ADN de o mărime cunoscută.
Identificarea alelelor locilor polimorfi s-a efectuat de Software-ul
GeneMapperR ID-X version 1.5, Applied Biosystems TM în baza lungimii
fragmentelor de ADN amplificat.
Au fost obţinute caracteristici genetice exprimate prin electroforegramе,
valabile pentru identificare, analiză comparativă şi documentare.

В результате, в препаратах ДНК, полученных из фрагментов плаценты

(контейнер №1) в ПДАФ профилях по ряду молекулярно-генетических
тестов выявляется более двух аллелей (электрофорез), т. е. смешанный
генотип, что однозначно свидетельствует о смешанной природе данных
препаратов ДНК. Таким образом препараты ДНК из фрагментов плаценты
являются смесью как минимум двух индивидуальных ДНК.
Профиль ПДАФ двух индивидуумов, чья ДНК присутствует в ДНК из
фрагмента плаценты, формально соответствует суммарному профилю ПДАФ
хромосомной ДНК потерпевшей (образцы которой исследованы параллельно
с абортивным материалом) и плода, что может быть обусловлено
особенностью строения плаценты, а именно наличием генетического
материла матери и плода на ограниченном участке биоматериала.
При анализе экспертных данных в препаратах ДНК из фрагментов
тканей плода (контейнер №2) получены аналогичные данные, т.е. в ПДАФ
профилях по ряду молекулярно-генетических тестов выявляется более двух
аллелей (электрофорез) (cel mult trei variante alelice pe 9 STR-loci polimorfi
autozomali), ce de asemenea demonstrează provenirea materialului biologic
examinat de la două persoane, ce poate fi explicată prin originea abortivă a
materialului examinat, adică profilul obținut mixt provine din contul embrionului
și din contul sângelui/țesuturilor pătimitei, care este „mamă” biologică a acestui.

La compararea genotipurilor obţinute din materialul biologic prezentat în

ambele containere cu genotipul pătimitei, au fost stabilite alele coincidente cu cele
din profilul genetic minorei, ce confirmă provenirea acestui material de la ultima.
Celelalte alele, care nu coincid cu alele din profilul genetic minorei, coincid cu cele
din profilul genetic ale persoanei bănuite în viol, probele de referință a căruia au
fost examinate în secție.
În profilurile obținute din materialul biologic examinat (placenta și țesuturi
fetale) nu conțin markerii, care lipsesc la minora și la învinuitul în viol.
În profilul stabilit mixt (placenta, țesuturi fetale) pe toți locii recuperați se
determină alele coincidente cu cele din profilul învinuitului, ce este caracteristic
rudelor biologice cu gradul de rudenie I, adică tată-fecior.
В случае получения данных о мужской половой принадлежности плода
(Cuantificarea ADN), возможно также проведение исследования -
examinarea locilor STR pe cromozomul Y, care este prezent doar la persoane de
sex masculin și se transmite pe linia paternă de la tatăl la fecior. Это позволяет
установить родство по отцовской линии. В случаях плодов женского
генетического пола такое исследование невозможно.
Таким образом, экспертами доказано происхождение биологического
материала, предоставленного на исследование, от потерпевшей, что является
немаловажным в сомнительных случаях, например при спонтанном или
криминальном аборте, и возможное «отцовство» подозреваемого (образец
которого предоставлен в отделение) по отношению к абортированному
плоду.

ВЫВОДЫ
Из представленных на исследование фрагментов плаценты и тканей
плода, полученных в результате аборта, были получены препараты
суммарной клеточной ДНК и проведено их экспертное идентификационное
исследование с применением методов молекулярно-генетической
индивидуализации. На основании проведенных исследований, с учетом
имеющихся в распоряжении экспертов обстоятельств дела, приходим к
следующим выводам: эти препараты ДНК представляют собой смесь двух
индивидуальных ДНК.
Таким образом, проведение молекулярно-генетического
генотипирования плаценты и плодных тканей, полученных в результате
аборта на ранних сроках беременности. позволяет высказаться о возможном
«отцовстве» определенного мужчины, образцы которого также
предоставляют на исследование, по отношению к абортированному плоду.
Соответственно, при предоставлении на исследование образцов
проходящих по делу лиц (потерпевшей «матери» и подозреваемого «отца»)
возможна идентификация подозреваемого в изнасиловании.

ЛИТЕРАТУРА
1. Атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии. / Кузнецов С. Л.— Учебное
пособие / Москва, 2002.
2. Иванов П. Л., Клевно В. А. Судебно-биологическая экспертиза — реалии и
перспективы. // Журнал Судебно-медицинская экспертиза. 2008. Т. 51. № 1. С. 19-
24.
3. Кочеткова Е. А. Журнал судебная медицина наука | практика | образование;
www.cудебная-медицина.рф; том 2 №1, февраль 2016, с. 45-47.
4. Сапин М.Р. Анатомия человека. В 3 томах. Том 3 [Электронный ресурс]: учебник /
Сапин М.Р., Билич Г.Л. - 3-е изд., испр. и доп. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 352 с.
5. https://orekhovo.clinic/spravochnik/vidy-abortov/
6. https://ro.wikipedia.org/wiki/Placentă