Вы находитесь на странице: 1из 173

1

2 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 3

УДК-57ю089:59 Рецензенты:
директор НИИ фармакологии СО РАМН, академик РАМН Дыгай Александр
ББК 45.318:28.6я81
Михайлович
директор НИИ медицинской приматологии РАМН, академик РАМН Лапин Бо-
РУКОВОДСТВО ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ЖИВОТНЫМ рис Аркадьевич
директор Всероссийского НИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии
И АЛЬТЕРНАТИВНЫМ МОДЕЛЯМ В БИОМЕДИЦИНСКИХ РАСХН, академик РАСХН Смирнов Анатолий Михайлович
ТЕХНОЛОГИЯХ
Авторский коллектив:
Асташкин Евгений Иванович (д.б.н., профессор, зав.лабораторией экстремаль-
под редакцией: Н.Н.Каркищенко и С.В.Грачева ных состояний ММА имени И.М.Сеченова МЗСР РФ)
Ачкасов Евгений Евгеньевич (д.м.н., профессор, зав.кафедрой лечебной физкуль-
туры и спортивной медицины ММА имени И.М.Сеченова МЗСР РФ)
Первое российское руководство, содержащее гармонизированные с международными Афонин Константин Владимирович (директор филиала «Андреевка» Научного
стандартами требования к использованию в неклинических исследованиях качественных центра биомедицинских технологий РАМН)
животных и валидированных альтернативных моделей, соответствует принципам надле- Берзин Игорь Александрович (д.м.н., профессор, главный специалист-эксперт
жащей лабораторной практики (GLP). В руководстве сформулированы основы биоэтики, управления организации научных исследований ФМБА России)
Бескова Татьяна Борисовна (научный сотрудник Научного центра биомедицин-
категорирования, контроля качества, генетического и микробиологического мониторинга,
ских технологий РАМН)
технологий содержания лабораторных животных и биобезопасности при работе с ними. Болотских Любовь Александровна (зав.лабораторией гнотобиотов Научного
Приводятся программы обучения персонала. Даны принципы дизайна экспериментов, центра биомедицинских технологий РАМН)
моделирования в экстремальных и хирургических биомедицинских технологиях, форми- Бояринцев Валерий Владимирович (д.м.н., профессор, зам.директора по науке
рование стандартных операционных процедур, построения аллометрических соотношений НПЦ «Фармзащита» ФМБА России)
Васильев Андрей Никифорович (к.б.н., директор Института доклинической и кли-
человека, животных и альтернативных моделей, как основы унификации и экстраполяции
нической экспертизы лекарственных средств НЦ ЭСМП Росздравнадзора РФ)
результатов экспериментов в клинику. Основной целью руководства является экономия Галахова Татьяна Валентиновна (научный сотрудник Научного центра биомеди-
ресурсов и времени, исключения дублирования в достижении сопоставимого уровня каче- цинских технологий РАМН)
ства исследований на уровне ведущих стран по стандартам GLP в России. Грачев Сергей Витальевич (академик РАМН, академик-секретарь Отделения ме-
дико-биологических наук РАМН)
Деньгина Светлана Евгеньевна (научный сотрудник Научного центра биомеди-
The first Russian Manual which contents harmonized with international standards цинских технологий РАМН)
requirements for using in non-clinic trials quality animals and valid alternative models corresponds Жармухамедова Татьяна Юрьевна (к.б.н., старший научный сотрудник ИБХ име-
to principles of Good Laboratory Practice (GLP). There are basis bioethics principles, categories, ни академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН)
quality controls, genetics and microbiology monitoring, laboratory animals husbandry technologies Капанадзе Гия Джемалиевич (к.с.-х.н., зав.лабораторией биомедицины Научного
and biosafety in this Manual. There are also studying programs for personal in this one. Principles of
центра биомедицинских технологий РАМН)
Каркищенко Владислав Николаевич (д.м.н., профессор, зав. отделом фармаколо-
experimental design, modeling in extreme situations and surgery biomedical technologies, samples гии и токсикологии Научного центра биомедицинских технологий РАМН)
of Standard Operation Procedures, allometry correlations between humans, animals and alternative Каркищенко Николай Николаевич (академик РАРАН, член-корреспондент
models as basis of experimental results unification and extrapolation in clinical trials. The aim of РАМН, зав.лабораторией биобезопасности, директор Научного центра биоме-
Manual is economy of resources and time, excluding duplication in achievement comparison quality дицинских технологий РАМН)
researches international level under GLP standards in Russia.
Касинская Наталья Владимировна (зав. лабораторией постгеномных технологий
Научного центра биомедицинских технологий РАМН)
Кукес Владимир Григорьевич (академик РАМН, директор института Клиниче-
ской фармакологии Росздравнадзора РФ)
Матвеенко Елена Леонидовна (к.э.н., доцент, Ученый секретарь Научного центра
биомедицинских технологий РАМН)
Макляков Юрий Степанович (д.м.н., профессор, зав. кафедрой фармакологии и
клинической фармакологии Ростовского государственного медицинского уни-
Москва – 2010 верситета МЗСР РФ)
4 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 5

Мурашов Александр Николаевич (д.б.н., профессор, зав. лабораторией биологи- Предисловие


ческих испытаний ИБХ имени академиков М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинни-
кова РАН)
Муха Александр Владимирович (д.м.н., зав.лабораторией экспериментальной хи-
рургии и мониторинга здоровья Научного центра биомедицинских технологий
РАМН)
Назаров Виктор Борисович (д.м.н., директор НПЦ «Фармзащита» ФМБА России)
Нечипоренко Сергей Петрович (д.м.н., директор Института токсикологии ФМБА
России)
Радилов Андрей Станиславович (д.м.н., профессор, зам.директора НИИ гигиены,
профпатологии и экологии человека ФМБА России)
Ревякин Артем Олегович (к.б.н., зав. лабораторией фармакомоделирования На-
Совершенствование и развитие биомедицинских технологий, воз-
учного центра биомедицинских технологий РАМН)
Рембовский Владимир Романович (д.м.н., профессор, директор НИИ гигиены, растающие требования к контролю качества лекарств, БАДов, нутриен-
профпатологии и экологии человека ФМБА России) тов, ужесточение гигиенических норм для химических, биологических
Решетов Игорь Владимирович (член-корреспондент РАМН, руководитель от- и физических факторов, предъявляют новые требования к качеству и
деления микрохирургии Московского научно-исследовательского онкологиче- разнообразию лабораторных животных. Потребность в исследованиях
ского института имени П.А. Герцена МЗСР РФ) на животных растет по мере разработки и внедрения инновационных
Ржевский Дмитрий Иванович (к.б.н., старший научный сотрудник ИБХ имени средств и материалов на основе клеточных технологий, нанобиотехноло-
академиков М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН) гий и т.д. Новые вызовы времени неизбежно влекут новые предложения.
Самойлов Александр Сергеевич (к.м.н., начальник медико-биологического отде- Все громче звучат призывы замены лабораторных животных альтерна-
ла НПЦ «Фармзащита» ФМБА России) тивными моделями, вплоть до переживающих клеток, одноклеточных
Сахаров Дмитрий Сергеевич (к.б.н., зав.лабораторией нанорегуляторных систем организмов, биохимических, квантово-механических конструкций. Час-
Научного центра биомедицинских технологий РАМН) тичное замещение животных альтернативными моделями или полное
Семенов Хызыр Хыйсаевич (к.б.н., зав.лабораторией генетики Научного центра исключение животных из экспериментов – вот суть жесточайших, но, на
биомедицинских технологий РАМН) наш взгляд, беспредметных дискуссий в околонаучной среде. Любой бла-
Станкова Наталия Владимировна (к.б.н., научный сотрудник Научного центра горазумный исследователь согласится, что не только исключение, но и
биомедицинских технологий РАМН) простое ограничение использования лабораторных животных высокого
Степанова Ольга Ивановна (к.б.н., зав. лабораторией клеточных нанотехнологий качества (SPF, гнотобиоты) и необходимого разнообразия (инбредные,
Научного центра биомедицинских технологий РАМН)
гетерогенные, трансгенные, нокаутные) не просто затормозит, но и поп-
Сычев Дмитрий Алексеевич (д.м.н., профессор кафедры клинической фармако-
росту остановит прогресс в познании живых систем. Это создаст угрозу
логии и пропедевтики внутренних болезней ММА им.И.М. Сеченова, ведущий
для безопасности человечества в условиях агрессии биологических, хи-
научный сотрудник НЦБМТ РАМН)
мических и физических факторов, ограничит возможности человека вли-
Титов Сергей Владиленович (директор филиала «Столбовая» Научного центра
биомедицинских технологий РАМН)
ять на материальный мир.
Хоронько Владимир Владиленович (д.б.н., профессор кафедры фармакологии и Если рассматривать человеческое сознание как некую субстанцию
клинической фармакологии Ростовского государственного медицинского уни- высокоорганизованной энергии, способной влиять на окружающий
верситета МЗСР РФ) мир, то тело предстанет лишь в качестве сосуда для величайшего сокро-
Ших Евгения Валерьевна (д.м.н., профессор, директор филиала «Клиническая вища природы – разума. В историческом аспекте познание тела путем
фармакология» НЦБМТ РАМН) вивисекции оказалось более доступным занятием, чем познание разума.
Шумаков Дмитрий Валерьевич (член-корреспондент РАМН, руководитель отделе- Так веками формировалась новая мораль, согласно которой ценность
ния сердечной хирургии и вспомогательного кровообращения ФНЦ трансплан- научной работы определялась числом вскрытых животных. Более того,
тологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова МЗСР РФ) это легко прикрывалось и обосновывалось чуть ли не необходимостью
6 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 7

жертвоприношения неким высшим силам природы. Но, воистину, чем тых в мировом сообществе
весомее жертва, тем выше обретаемое могущество. Жрецы (и/или) эк- принципах категорирования
спериментаторы начинали с мелких тварей, а со временем жертвы обре- в соответствии с директи-
тали все больший размах, а сам процесс перемещался с околохрамовых вами FELASA. Важнейшей
площадей в лаборатории и университеты. Потребность в животных, при- проблемой взаимодействия
носимых на жертвенный алтарь науки, росла все быстрее, а характер эк- человека с лабораторными
спериментов приобретал форму кровавых жертв по принципу: без крови животными, является био-
жертва не имеет смысла, больше крови – ярче эксперимент. безопасность при работе с
Однако уже более 22 тысячелетий назад Корнелий Цельс в сочине- ними, идентификация опас-
нии «De Medicine» указывал на неприемлемость для правильной оценки ных факторов и оценка рис-
функций живого организма использования вивисекции и болезненных ков, а также ответственность
экспериментальных процедур. Но лишь с 1959 г., после выхода в свет персонала. С марта 2010 г. в
книги У.Рассела и Р. Берча «The Principles of Humane Experimental Tech- России введены в действие
nique» в мир науки вошла концепция гуманного использования живот- Принципы надлежащей ла-
ных в экспериментах, или более кратко «Концепция 3R». бораторной практики (На-
Наряду с принципами качественной экспериментальной практики, циональный стандарт Рос-
указанные авторы предложили новую терминологию альтернативного сийской Федерации ГОСТ
моделирования: Р 53434-2009), предусмат-
частичное замещение – альтернативный метод частично исключает ривающие приведение всех
эксперимент на животных и требует дополнительной альтернатив- доклинических, внеклини-
ной методики без животных; ческих и экспертных иссле-
батарея тестов – серия методов, выполненных в одно и то же время дований в соответствие с
или в тесной связи друг с другом, для получения информации в рам- международными стандарта-
ках дополнительного многофакторного эксперимента; ми GLP. Это в свою очередь
стратегия последовательных тестов – выбор каждого теста опреде- предполагает унификацию
дизайна экспериментов, гар-
ляется достоверными результатами предыдущего уровня исследова-
монизацию получаемых результатов и их интерпретацию в рамках требо-
ний, но построение осуществляется в виде последовательного про-
ваний и стандартов ECVAM, FELASA, OECD, FDA, EPA и др. Это осо-
цесса, состоящего из серии (батарей) тестов.
бенно важно в проведении международной кооперации по исследованию
Эти и уже многие другие научные подходы, активно разрабатывае-
генетического полиморфизма человека и животных. В этих случаях, как и
мые в настоящее время, составляют методологическую и материальную
во многих других ситуациях, универсальным принципом межлаборатор-
основу как бурно развивающегося альтернативного моделирования, так
ной и международной кооперации является использование стандартных
и биоэтической концепции.
операционных процедур (СОП) – документов, подробно описывающих
Биоэтические моменты в настоящем Руководстве проходят крас-
процедуры манипуляций, которые, как правило, подробно не описыва-
ной нитью по всем главам и разделам, начиная с выбора лабораторных
ются в протоколах конкретных исследований.
животных и заканчивая их использованием в различных областях био-
Не упреждая изложения основных разделов Руководства, следует
медицинских технологий. Это тем более существенно, что Руководство подчеркнуть такие направления, как принципы проведения экспериментов
является первым в своем роде изданием в России, содержащим гармо- и специальные биомедицинские исследования, в которых наряду со специ-
низированные с международными стандартами требования, соответству- фическими методическими приемами большое внимание уделяется пре-
ющие принципам надлежащей лабораторной практики (GLP), по ис- дупреждению и исключению боли и страданий животных, квалифициро-
пользованию качественных животных в исследовательских, обучающих ванной анестезии и анальгезии. В таком же подтексте изложены вопросы
и экспертных процедурах. Обучение персонала строится на общеприня-
8 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 9

моделирования состояний организма животных при экстремальных воз- Глава 1


действиях и в процессе применения хирургических биомедицинских тех-
нологий. Основы создания Руководства
Учитывая возрастающую потребность в лабораторных животных для
исследования эффективности и безопасности лекарственных средств,
в Руководстве в соответствии с современными требованиями GLP даны
принципы, порядок и технологии проведения фармакологических и ток-
сикологических испытаний на доклиническом этапе. Специально выделе-
на глава, посвященная оценке противовирусных средств на лабораторных
животных и альтернативных биомоделях. Это предопределено неожидан-
ными вирусными атаками H1N1, H5N и др. возбудителей на человечество
в виде ТОРС, птичьего, свиного гриппа и их комбинаций. На фоне этих
«вирусных взрывов», как вызовов благополучию человечества, вырастают
требования к оценке любых химических, биологических, наноинженер- Эксперимент с использованием лабораторных животных и других
ных конструкций в качестве возможных противовирусных агентов. живых объектов является одним из ведущих методов познания в совре-
В Руководстве уделено большое внимание оценке биомедицинской менной медицине, фармакологии, ветеринарии, биологии. Качество
безопасности, современным подходам к оценке токсичности на основе лабораторных животных во многом определяет результат эксперимента.
стандартизованных моделей, вопросам токсикогеномики, использова- Постоянно возрастают требования к качеству лабораторных животных.
нию альтернативных батарей тестов. Эти подходы достаточно широко Поэтому важнейшей задачей лабораторного животноводства является
пропагандируются за рубежом, но малоизвестны или малоприменимы в организация их производства и содержания, обеспечивающих необходи-
нашей стране. Важным аспектом является повсеместное внедрение но- мое качество и стандартность животных. Проведение экспериментов на
вых стратегий сочетания животных и альтернативных моделей в фарма- живых объектах должно обеспечивать эффективное использование жи-
кологии, токсикологии, гигиене, экологии и в специальных прикладных вотных в научных целях, уменьшение их количества, соблюдение прин-
исследованиях. ципов гуманного обращения. Данное Руководство подготовлено специа-
Сравнительные измерения разных видов живых организмов по ка- листами в области науки о лабораторных животных, имеющих большой
ким-то общим признакам позволяют установить сходства морфофункци- опыт работы как в области разведения и содержания лабораторных жи-
ональных и иных характеристик в целях экстраполяции новых данных в вотных, так и в проведении экспериментальной работы, и рассчитано
отношении человека. Эти измерения укладываются в понятия аллометрии как руководящий рекомендательный документ по проведению контро-
и дают ключ к интеграции результатов, полученных на альтернативных и лируемых исследований и биомоделирования на живых объектах.
животных моделях. Аллометрические уравнения являются выражением Необходимость гармонизации отечественных норм и правил про-
регрессии, которое описывает вариацию одного параметра в зависимости ведения доклинических исследований с международными документами
от другого (масса и поверхность тела, уровни подобия, кинетика процес- требует стандартизации методических подходов и принципов, включая
сов, релевантность и т.д.). В свою очередь это открывает путь к аналитико- использование альтернативных моделей. Принципы надлежащей лабо-
синтетическим процессам в познании живых систем. Основной задачей и раторной практики (GLP) являются важнейшей интегральной системой
целью Руководства является стремление к экономии ресурсов и времени, для сопоставимости результатов оценки качества получаемых в разных
отводимых на эксперимент, исключение дублирования и достижение со- отечественных и зарубежных учреждениях данных. Поскольку в нашей
поставимого качества исследований и взаимоприемлемых экспертных стране такое руководство для исследователей отсутствует, коллектив ав-
оценок на уровне ведущих стран по стандартам GLP в России. торов взял на себя труд подготовить его первую версию, имеющую цель
определенной унификации требований по проведению доклинических
исследований.
10 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 11

Современная нормативная база по проведению доклинических ис- Настоящее Руководство предназначено отнюдь не только научным
следований на лабораторных животных более или менее полно отражена сотрудникам в области биомоделирования, а организации и планирова-
в документах международных организаций, законах и подзаконных актах нию всей работы в целом. В качестве примера на рис. 1 (основные этапы
отдельных зарубежных стран. В Российской Федерации она находится фармакотоксикологических исследований в пространстве биомедици-
на начальном этапе. Поэтому необходимо руководствоваться существу- ны).показан весь процесс организации и планирования научно-исследо-
ющими стандартами и требованиями доклинического тестирования как вательской деятельности и выделены основные этапы фармакотоксико-
национального, так и международного уровня. В настоящее время в Рос- логических исследований в пространстве биомедицины.
сийской Федерации завершается подготовка нового закона о лекарствен- Основные этапы включают поисковые или исследовательские ме-
тоды, которые имеют свои фазы разработки лекарств или программ для
ных средствах. До его принятия можно руководствоваться существу-
контроля за развитием болезней. Этапы разработки можно представить в
ющим «Законом о лекарственных средствах» от 22 июня 1998 г. № 86-ФЗ,
виде следующей триады:
принятым Государственной Думой 5 июня 1998 г. и одобренным Советом
доклиническая стадия для определения безопасности и потенциаль-
Федерации 10 июня 1998 г. (статья 8, пункт 1), и другими отечественными ной эффективности лекарства;
и зарубежными документами: клиническая стадия для установления безопасности и эффективно-
Правилами лабораторной практики, утвержденными Приказом сти лекарства для человека;
Минздрава РФ № 267 от 19.06.2003 г.; постклиническая стадия, когда лекарство мониторируется на его
Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению безопасность и его производство и реализация тщательно контроли-
новых фармакологических веществ, 2005 г.; руются с использованием неклинических исследований.
Документами OECD по гармонизированным принципам Надлежа- Основным отличием системных биомедицинских исследований от
щей лабораторной практики («Principles of Good Laboratory Practice») традиционной схемы разработки лекарств является то, что в них обяза-
с внесенными изменениями от 1997 г., инкорпорированные в Дирек- тельно присутствуют наряду с лабораторными животными и альтерна-
тиву ЕС 2004/10/ЕС. тивные биомодели. Исследования проводятся на клеточных материалах,
Кодексом федеральных регламентов FDA (Code of Federal Regula- тканях, органах и организме в целом.
tions, CFR), 1979 г. ɂɫɫɥɟɞɨɜɚɬɟɥɶ ɩɨɞɨɡɪɟɜɚɟɬ, ɱɬɨ ɨɞɧɚ ɢɡ
ɦɚɤɪɨɦɨɥɟɤɭɥ ɟɝɨ ɫɨɛɫɬɜɟɧɧɨɝɨ ɨɪɝɚɧɢɡɦɚ ɦɨɠɟɬ
ɉɥɚɧɢɪɨɜɚɧɢɟ ɪɚɛɨɬ
А также разделом 21 в работе «Продукты питания и лекарствен- ɩɪɢ ɨɩɪɟɞɟɥɟɧɧɵɯ ɭɫɥɨɜɢɹɯ ɛɵɬɶ ɥɟɤɚɪɫɬɜɨɦ.

ные средства» («Food and Drugs») и главой 58 «Надлежащая лаборатор- ɉɨɩɵɬɤɢ ɭɫɬɚɧɨɜɥɟɧɢɹ ɩɪɚɜɢɥɶɧɨɫɬɢ
ɋɬɚɞɢɢ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ ɭɦɨɡɚɤɥɸɱɟɧɢɹ. Ɏɚɪɦɚɤɨɩɪɨɬɟɨɦɢɤɚ, ɛɢɨɬɟɫɬ
ная практика для доклинических лабораторных исследований» («Good ɫɢɫɬɟɦɵ, ɛɚɬɚɪɟɢ ɬɟɫɬɨɜ

ɩɪɨɰɟɫɫɚ

Ɇɨɧɢɬɨɪɢɪɨɜɚɧɢɟ ɩɪɨɰɟɫɫɨɜ
Ɇɨɞɢɮɢɤɚɰɢɹ ɦɨɥɟɤɭɥ ɩɭɬɟɦ
Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies»). Ɍɪɚɞɢɰɢɨɧɧɨɟ ɢɥɢ ɚɥɶɬɟɪɧɚɬɢɜɧɨɟ ɞɨɩɨɥɧɢɬɟɥɶɧɵɯ ɪɚɞɢɤɚɥɨɜ.
ɛɢɨɦɨɞɟɥɢɪɨɜɚɧɢɟ Ʉɥɟɬɨɱɧɵɟ ɢ ɠɢɜɨɬɧɵɟ-ɦɨɞɟɥɢ

Ɏɚɪɦɚɤɨɤɢɧɟɬɢɤɚ,

Ⱦɨɤɭɦɟɧɬɢɪɨɜɚɧɢɟ
Предпосылки создания Руководства
ɮɚɪɦɚɤɨɝɟɧɟɬɢɤɚ,
Ⱦɨɤɥɢɧɢɱɟɫɤɢɟ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ ɢ ɨɰɟɧɤɚ ɮɚɪɦɚɤɨɞɢɧɚɦɢɤɚ ɧɚ
ɩɨɬɟɧɰɢɚɥɶɧɨɣ ɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɢ ɠɢɜɨɬɧɵɯ-ɦɨɞɟɥɹɯ

Основные биомедицинские исследования отражают использование «ɂɫɤɭɫɫɬɜɨ ɞɚɜɚɬɶ ɩɥɨɯɢɟ ɫɨɜɟɬɵ ɧɚ ɜɨɩɪɨɫɵ,
ɉɪɢɧɹɬɢɟ ɪɟɲɟɧɢɹ
ɤɨɬɨɪɵɟ ɩɪɢ ɞɪɭɝɢɯ ɩɨɞɯɨɞɚɯ ɛɭɞɭɬ ɟɳɟ ɯɭɠɟ»
фундаментальных научных принципов в медицинских и биологических
исследованиях, направленных на развитие средств для определения, пре- Ɉɰɟɧɤɚ ɛɟɡɨɩɚɫɧɨɫɬɢ ɢ ɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɢ Ʉɥɢɧɢɱɟɫɤɢɟ ɫɬɚɞɢɢ
ɥɟɤɚɪɫɬɜ ɞɥɹ ɱɟɥɨɜɟɤɚ - ɮɚɪɦɚɤɨɝɟɧɨɦɢɤɚ (I, II ɢ III ɫɬɚɞɢɢ)
дупреждения или изучения болезней человека. Биомедицинские иссле-
дования являются основой на стадиях разработки и исследования новых Ʌɟɤɚɪɫɬɜɨ ɦɨɧɢɬɨɪɢɪɭɟɬɫɹ ɧɚ ɛɟɡɨɩɚɫɧɨɫɬɶ ɢ
ɉɨɫɬɤɥɢɧɢɱɟɫɤɚɹ ɫɬɚɞɢɹ ɢ
ɟɝɨ ɩɪɨɢɡɜɨɞɫɬɜɨ ɬɳɚɬɟɥɶɧɨ ɤɨɧɬɪɨɥɢɪɭɟɬɫɹ
и производства полученных лекарств. Биомедицинские исследования ɧɟɤɥɢɧɢɱɟɫɤɢɟ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ
должны соответствовать не только национальным или международным
соглашениям и руководствам, но и требованиям надлежащей лаборатор- Ðèñ. 1. Îñíîâíûå ýòàïû ôàðìàêîòîêñèêîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé â ïðîñòðàíñòâå
ной практики (GLP). áèîìåäèöèíû
12 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 13

Результативность биомедицинского эксперимента с использованием циализированные питомники по производству лабораторных животных


лабораторных животных в существенной степени зависит от их качества. при Всесоюзном институте экспериментальной медицины (Москва),
С развитием науки требования к качеству и разнообразию лабораторных Институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (Москва), Инсти-
животных постоянно возрастают. туте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи (Москва). Ряд
Создание настоящего Руководства предопределено всем ходом раз- небольших питомников объединяются в более крупные. Так в 1959 г. в
вития лабораторного животноводства и экспериментального биомодели- рамках АМН СССР на базе четырех хозяйств возник питомник лабора-
рования в нашей стране и за рубежом. В развитых зарубежных странах торных животных «Центральный». Возникают научные лаборатории по
наука о лабораторных животных существует уже несколько десятилетий. селекции и экологии, охране здоровья лабораторных животных. В 1955 г.
Специалисты данной области объединены в различные ассоциации с в Институте экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР
целью обмена полученными знаниями путем их публикаций в специа- (Москва) создается лаборатория генетики и кормления лабораторных
лизированных научных изданиях, проведении научных и научно-прак- животных. Одновременно в Ленинграде в Институте экспериментальной
тических конференций, симпозиумов. В настоящее время, несмотря на медицины АМН СССР начинает работать группа по изучению инфекци-
широкое развитие различных методов моделирования, не найдено адек- онной и инвазионной патологии лабораторных животных.
ватных альтернативных способов замены лабораторных животных, пол- С августа 1927 г. по решению Правительства СССР в Сухуми дей-
ностью соответствующих требованиям экспериментальной работы. ствует питомник обезьян. Впоследствии питомник был преобразован в
Разведение лабораторных животных в России началось в первой по- Субтропический филиал ВИЭМ и с 1944 г. работает как самостоятельное
ловине прошлого столетия. Первые виварии были созданы в Институ- учреждение – медико-биологическая станция в составе создававшейся
тах тропической медицины (Москва), эпидемиологии и микробиологии в то время Академии медицинских наук СССР (МБС АМН СССР). За-
(Москва), экспериментальной медицины (Санкт-Петербург). В начале дачей станции было предоставление возможности ученым из различных
1930-х гг. появились первые промышленные питомники, и, в частности, учреждений Академии и Минздрава работать на приматах – «лаборатор-
при Институте экспериментальной медицины. В то же время определен- ных двойниках» человека. С течением времени она была реорганизована
но выделяется тенденция совершенствования работы с лабораторными в Научно-исследовательский институт Экспериментальной Патологии и
животными, встает вопрос о подготовке специальных кадров. Об этом терапии АМН СССР (НИИ ЭПиТ АМН СССР). В 80-х гг. в Институ-
свидетельствует создание курсов повышения квалификации сотрудни- те было создано 2 производственных питомника и 2 лесных заказника,
ков институтов Наркомздрава по лабораторному животноводству, на ко- где животные находились на свободе. Общее количество обезьян разных
торых предусматривалось обучение специалистов для работы в питомни- видов (павианы 2-х видов, макаки 4-х видов, зеленые мартышки, гелады,
ках и вивариях. Сохранилась программа курсов, которая была составлена мандрилы и др.) достигло 7 тыс. животных.
в 1934 г. профессором П.П. Сахаровым и рецензировалась Институтом Известные русские ученые, их сотрудники и ученики, работавшие в
эпидемиологии и микробиологии Наркомздрава. Содержание програм- Институте в разные периоды времени, оказывали значительное влияние
мы отражало уровень развития лабораторного животноводства тех лет. на направление исследований и задачи Института. С момента основания
Вопросы, рассматривавшиеся на курсах, существенно отличались от питомника (приматологического центра в Сухуми) Институт возглавля-
современных. Много внимания уделялось инфекционным заболеваниям ли видные биологи и медики, а с 1958 г. по настоящее время бессмен-
лабораторных животных, санитарно-гигиеническим мероприятиям. От- ным директором ИЭПиТ АМН СССР, а затем Учреждения Российской
сутствовали понятия стандартизации лабораторных животных, контроли- академии медицинских наук Научно-исследовательский Институт ме-
руемой и специализированной среды содержания, не было упоминания дицинской приматологии (НИИ МП РАМН) является академик РАМН,
об инбредных животных. Однако сам факт существования таких курсов Международной академии астронавтики, доктор медицинских наук,
свидетельствует о понимании учеными того периода важности грамотной профессор Лапин Борис Аркадьевич. В настоящее время Б.А. Лапин воз-
работы с лабораторными животными в лабораториях и питомниках. главляет Научно-исследовательский Институт медицинской приматоло-
В послевоенные годы лабораторное животноводство в основном раз- гии РАМН в г. Адлер.
вивается в системе Министерства здравоохранения СССР и Академии Наряду с этим развивается и другое направление лабораторного жи-
медицинских наук СССР. В 1950-е гг. возникают довольно крупные спе- вотноводства. 12 июня 1929 г. Постановлением ЦИК и СНК СССР был
14 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 15

организован питомник лабораторных животных (станция Столбовая Мос- разработка, получение и внедрение в эксперименты гнотобиотов
ковской области) как экспериментальная база Института вирусологии Нар- (безмикробных животных);
комздрава для разведения животных генетически чистых линий с целью информирование экспериментаторов об источниках генетически
изучения ультравирусов. С 1957 г. на этой базе функционировал питом- контролируемых линий лабораторных животных, имеющихся в
ник по разведению новых линий инбредных животных. В 1959 г. создан СССР и за рубежом;
Центральный питомник лабораторных животных АМН СССР. международные связи с зарубежными центрами аналогичного про-
В 1961 г. Постановлением Президиума АМН СССР № 114 от филя и международными организациями по лабораторному живот-
30 августа хозяйство зкспериментально-сывороточного производства новодству (Международным комитетом по лабораторным животным
«Светлые горы», производственного отдела Института эпидемиологии и при ЮНЕСКО).
микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР передается питомнику ла- В этом и некоторых других научных центрах ведется работа по изуче-
бораторных животных «Центральный». В питомнике разместили Лабо- нию инбредных животных. Так, с 1947 г. в Московском государственном
раторию экспериментальных животных Института экспериментальной и университете им. М.В. Ломоносова создается отечественная линия крыс
клинической онкологии АМН СССР и группу по изучению инфекцион- с высокой судорожной активностью – крысы Крушинского-Молодки-
ной и инвазионной патологии лабораторных животных Института экс- ной. В Институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи от-
периментальной медицины АМН СССР. В дальнейшем эти лаборатории крывается лаборатория инбредных животных. В питомнике АМН СССР
были присоединены к Институту нормальной и патологической физио- «Столбовая» начинается промышленное разведение инбредных мышей.
логии АМН СССР. Руководителем Лаборатории был назначен В.А. Душ-
Постановлением Совета Министров СССР в г. Электрогорске Москов-
кин, возглавлявший ее на протяжении более 20 лет.
ской области создается специализированный питомник лабораторных
Вновь созданная Лаборатория экспериментальных животных сосре-
животных.
дотачивается на выполнении научной работы по изучению лабораторных
Таким образом, в СССР появились специализированные учреж-
животных как объектов эксперимента и по организации их разведения. В
дения, которые концентрировали исследовательскую и методическую
это время увеличивается количество институтов, использующих лабора-
работу по лабораторному животноводству. Уже с 1969 г. утверждается
торных животных, выращенных в питомниках АМН СССР.
общесоюзное направление исследований «Биология и патология лабо-
Практические задачи методического руководства питомниками и
раторных животных» в рамках Научного совета АМН СССР по общей
вивариями институтов требовали все более интенсивной работы Лабо-
ратории экспериментальных животных. В 1967 г. Лаборатория экспери- патологии.
ментальных животных получила статус самостоятельного учреждения Активно разрабатываются методы генетического контроля и
(Постановление Президиума АМН СССР № 176 от 19.07.1967 г.) и была обеспечивается генетическая стандартность животных питомников АМН
переименована в Научно-исследовательскую лабораторию эксперимен- СССР. Оказывается методическая помощь по этим вопросам заинтересо-
тально-биологических моделей АМН СССР (НИЛЭБМ АМН СССР). ванным учреждениям. Питомники и институты получают необходимые
Перед Лабораторией были поставлены следующие основные задачи: племенные ядра мышей инбредных линий. В 1970-е гг. в НИЛЭБМ АМН
генетический контроль лабораторных животных, ведение и контроль СССР создается ферма мини-свиней, одновременно начинается работа
коллекционного фонда инбредных линий, получение и внедрение в по выведению линий кур, высокочувствительных и устойчивых к виру-
эксперименты новых инбредных и мутантных линий животных и их сам лейкоза. Разрабатывается система мониторинга здоровья лаборатор-
гибридов; ных животных в питомниках, отрабатываются методы микробиологи-
контроль здоровья лабораторных животных, разработка методов ческого, вирусологического, паразитологического контроля. Создаются
диагностики и средств профилактики инфекционных и инвазион- рецептуры и промышленное производство брикетированных кормов для
ных заболеваний экспериментальных животных; лабораторных животных. В НИЛЭБМ АМН СССР – одном из первых
разработка полнорационных и экономически выгодных норм кор- специализированных учреждений СССР, занимающимся лабораторным
мления, а также гигиенических норм обслуживания лабораторных животноводством, – начались работы по гнотобиологии, освоены мето-
животных; ды получения безмикробных животных для экспериментальной работы.
16 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 17

НИЛЭБМ и питомники лабораторных животных были реоргани- сам лабораторного животноводства, с 2006 г. проводится ежегодная на-
зованы в 2002 г. в Научный центр биомедицинских технологий РАМН учно-практическая конференция «Биомедицина и биомоделирование»,
(Центр), который возглавил академик РАРАН и Международной акаде- в 2008 г. в Центре был открыт филиал кафедры зоологии РГАУ-МСХА
мии астронавтики, член-корреспондент РАМН, лауреат Государствен- имени К.А. Тимирязева.
ных премий СССР и премий Правительства РФ, доктор медицинских По инициативе НЦБМТ РАМН сформирован Научный совет по
наук, профессор Каркищенко Николай Николаевич. Научные задачи биомедицинской безопасности РФ для комплексной координации ис-
Центра значительно расширились, больше внимания стало уделяться следований, проводимых учреждениями РАМН, Минздравсоцразвития
научно-исследовательской работе. Центр осуществляет свою деятель- и других ведомств, занимающихся проблемами нанотехнологий, стволо-
ность в соответствии с утвержденными Президентом РФ критическими вых клеток, изучением безопасности лекарственных средств в Россий-
технологиями: «Биомедицинские и ветеринарные технологии жизне- ской Федерации. Головной организацией, координирующей исследова-
обеспечения и защиты человека и животных», «Клеточные технологии», ния в указанных направлениях, является Научный центр биомедицинских
«Нанотехнологии и наноматериалы» и приоритетными направлениями технологий, а председателем Совета – директор НЦБМТ РАМН, акаде-
развития науки, технологий и техники РФ: «Безопасность и противо- мик РАРАН, член-корреспондент РАМН Н.Н.Каркищенко. Он также
действие терроризму», «Живые системы». возглавляет Специальную фармакологическую комиссию Росздравнад-
Центр работает по приоритетным направлениям, утвержденным зора РФ. Важная роль во внедрении принципов GLP в практику экспе-
Бюро ОМБН РАМН (Протокол № 7 от 27.10.2009 г.), включая «Медико- риментальной работы принадлежит Российской Ассоциации организа-
биологические аспекты биобезопасности». ций по контролю за проведением исследований на лабораторных
Основными направлениями научных исследований НЦБМТ РАМН животных.
являются: создание научно-методологических основ и биологических
моделей для обеспечения фундаментальных медико-биологических ис-
следований, сертификации, контроля качества и оценки безопасности Базовые элементы, цели и задачи Руководства
препаратов для человека, сохранения генетических ресурсов лаборатор-
ных животных, репродукции тканей и биопротезирования; научно-ис- За последнее время наблюдается существенный рост эксперимен-
следовательские разработки по биомедицинским технологиям, нано- тальных процедур, проводимых на животных. Наиболее часто использу-
биотехнологиям для обеспечения биобезопасности и противодействия ются в экспериментальной практике мыши (66%), рыбы (17%), крысы
терроризму; разработка фундаментальных аспектов биомедицинских (10%) и птицы (3%), также экспериментаторы работают на кроликах, со-
технологий клеточно-тканевой и молекулярной медицины с использо- баках, птицах, рептилиях и земноводных. Что особенно характерно для
ванием стволовых и прогениторных клеток; разработка новых медицин- последнего десятилетия – это рост использования приматов после весь-
ских технологий, методов фармакогеномики и биоэквивалентности для ма существенного снижения в предыдущие годы. Количество процедур
повышения эффективности и безопасности фармакотерапии, осуще- с использованием макак возросло почти на 25%. Этот рост связан с тем,
ствление высокотехнологичной медицинской деятельности. что эти обезьяны широко используются для тестирования безопасности
Одной из основных задач деятельности Центра является создание и эффективности новых фармацевтических средств. Ученые и предста-
условий обязательного соблюдения требований нормативных актов в вители промышленности предсказывают в обозримом будущем дальней-
отношении обеспечения безопасности здоровья людей при применении ший рост использования макак ввиду роста биологических испытаний
биомедицинских технологий в медицинской практике. различных фармакологических средств. Они аргументируют это тем, что
Однако вопросы сохранения коллекционного фонда, выведения но- специфика человеческого организма требует использования именно этих
вых линий лабораторных животных постоянно находятся в фокусе вни- обезьян как наиболее близких человеку, хотя имеются данные, которые
мания. доказывают и обратный эффект. Развитие альтернативных систем моде-
В Центре постоянно, начиная с первых дней существования лирования, основанных на использовании клеток человека, компьютер-
НИЛЭБМ АМН СССР, проводится учебно-методическая работа. Начи- ное моделирование, улучшение дизайна клинических испытаний может
ная с 1970 г. проводятся семинары по научным и практическим вопро- помочь в решении данной проблемы. Фонд замены животных в меди-
18 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 19

цинских экспериментах (Fund for Replacement of Animals in Medical Ex- ной биологической модели для проведения эксперимента. Успехи гене-
periments – FRAME) призывает исследователей сконцентрироваться на тики позволяют получать новые линии лабораторных животных, пол-
дизайне и валидации таких альтернатив, чтобы избежать использования ностью отвечающих требованиям конкретного исследования. Однако
приматов в качестве моделей. остаются вопросы биоэтики, которые необходимо юридически урегули-
Генетически модифицированные и измененные (имеющие вредные ровать и неукоснительно соблюдать.
генетические дефекты) животные также были включены в большое коли- Во многих странах существуют как законы, так и подзаконные акты,
чество экспериментов. Наиболее часто генетически изменяют мышей, но регулирующие биомедицинские исследования, проводимые в научно-
и другие виды лабораторных животных подвержены таким процедурам. исследовательских учреждениях. В США и Европе законодательная база
В фундаментальных исследованиях наблюдается тенденция к снижению в области лабораторного животноводства развивается с 1960-х гг. Суще-
использования генетически измененных крупных животных. Однако, ствуют многочисленные национальные и международные организации,
если сохранится рост в использовании рыб и продолжатся крупномасш- регламентирующие экспериментальную работу с использованием лабо-
табные программы по созданию фондов линий генетически измененных раторных животных и развивающих альтернативные методы биомодели-
крыс, то эта тенденция может измениться на возрастание. рования.
Количество использованных в экспериментах рыб в 2008 г. увели- В Российской Федерации в настоящее время нет закона, определяю-
чилось в 5 раз по сравнению с уровнем 10-летней давности. Основные щего порядок проведения экспериментальной работы в учебных и науч-
процедуры (40%) – это фундаментальные исследования в таких областях ных целях с использованием лабораторных животных. Попытки принять
как физиология, анатомия и фармацевтические эксперименты. Уровень Федеральный закон о защите животных от жестокого обращения не увен-
прикладных экспериментов вырос в 3 раза. Рыбы используются в различ- чались успехом. Закон был внесен на рассмотрение в Государственную
ных процедурах по определению токсичности, тестах по определению Думу в июне 1998 г., прошел три чтения, получил огромное количество
безопасности и эффективности фармакологических средств, изучению замечаний и поправок, а в итоге был отклонен Президентом РФ. После
токсичности и загрязнения окружающей среды. этого в феврале 2000 г. была создана согласительная комиссия, которая
Роль рыб в научных экспериментах возрастает экспоненциально, до настоящего времени не пришла к окончательному решению по данно-
аналогично использованию генетически измененных мышей. Открытие му законодательному акту.
новых способов использования этих животных приводит к увеличению В рамках Российской академии медицинских наук и Министерства
тренда. Были получены данные, что в тестах на канцерогенез форель яв- здравоохранения РФ в апреле 2003 г. было разработано и принято По-
ляется более чувствительной моделью, чем грызуны. В научных экспе- ложение о контроле качества лабораторных животных, питомников и
риментах кроме форели используют и другие виды рыб, такие как зебра- экспериментально-биологических клиник (вивариев). В соответствии с
фиш и лосось. этим Положением были определены правила использования лаборатор-
Ежегодно по предварительным оценкам в ЕС от нежелательных по- ных животных контролируемого качества для биомедицинских исследо-
следствий при приеме лекарств умирают 197 тыс. чел., потери составляют ваний с целью проведения доклинических исследований лекарственных
79 млрд евро. В свете множества ошибок в оценке безопасности лекарств, средств и получения научно обоснованных оценок безопасности лекар-
тесты по проверке безопасности лекарств на животных являются лучшим ственных средств, пищевых продуктов, косметических средств.
способом оценки новых препаратов. Принятый Билль безопасности ле- В соответствии с этим Положением был определен порядок добро-
карств (The Safety of Medicines Evaluation Bill, 2009) требует прямого срав- вольной сертификации лабораторных животных для использования их
нения безопасности лекарств в тестах на животных с батареями тестов, в экспериментах. Сертификат выдает Научный центр биомедицинских
основанных на биологических основах человека. В настоящее время не технологий РАМН на основе анализа результатов регулярных обследова-
существует технологий, способных заменить тесты на животных. ний животных контрольно-диагностическими лабораториями питомни-
Перечисленные данные диктуют необходимость правового регули- ков, ЭБК (вивариев), выборочных исследований, осуществляемых непо-
рования вопросов, касающихся использования животных в различных средственно в Центре. Для реализации данного Положения коллективом
научных и учебных целях. Успехи биологии, медицины, фармакологии, сотрудников Центра было разработано и опубликовано Руководство по
биомедицины во многом определяются возможностью выбора адекват- содержанию и разведению лабораторных животных в питомниках и экс-
20 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 21

периментально-биологических клиниках (вивариях) и их использованию спериментально-биологических клиниках (вивариях), включая со-


в научных, учебных и производственных целях. ответствия этих условий требованиям надлежащей лабораторной
Вопросы, касающиеся проведения ветеринарного надзора, регла- практики (Good Laboratory Practice – GLP);
ментируются в ФЗ РФ «О ветеринарии» № 4979-1 от 14.05.1993 г. унификации требований к профессиональной подготовке кадров
Существуют правила безопасности, производственной санитарии, специалистов по работе с лабораторными животными;
охранно-карантинного и ветеринарно-санитарного режимов на пред- унификации требований к ведению необходимой документации по
приятиях биологической промышленности, утвержденные руководите- содержанию лабораторных животных при их воспроизводстве и ис-
лем департамента ветеринарии Минсельхозпрода России, Главным Го- пользованию в экспериментальных исследованиях и других видах
сударственным ветеринарным инспектором 7 июня 1999 г. деятельности;
Приказом Минздрава РФ № 267 от 19.06.2003 года «Об утверждении безопасности работы с лабораторными животными;
правил лабораторной практики» даны определение и методология при- уменьшения количества лабораторных животных, используемых в
менения Стандартных операционных процедур (СОП). В то же время экспериментах;
российские GLP не гармонизированы с соответствующими международ- соблюдения принципа гуманного отношения к лабораторным жи-
ными принципами, разработанными Организацией экономического со- вотным;
трудничества и развития (ОЭСР или OECD), т.е. существующие на дан- охраны окружающей среды;
ный момент российские СОПы должны быть приведены в соответвсвие основы для введения государственного контроля за содержанием
с международными стандартами. С марта 2010 г. в силу вступил нацио- лабораторных животных при их воспроизводстве и использовании в
нальный стандарт РФ ГОСТ Р 53434-2009 «Принципы надлежащей лабо- экспериментальных исследованиях и других видах деятельности.
раторной практики», полностью аутентичный принципам GLP/OECD. Важным элементом создания полноценной базы для проведения до-
Следует отметить, что в результате многолетнего опыта работы НЦБМТ клинических исследований, включая традиционные и наноинженерные
РАМН и ряда учреждений РАН уже наработаны основные пакеты СОПов вещества и материалы, их токсикологическую экспертизу и оценку без-
и существует база для подготовки новых. Тем не менее, СОПы и иные опасности, является международная аккредитация российских учрежде-
нормативные документы, используемые в Российской Федерации, долж- ний и лабораторий со стороны Ассоциации оценки и аккредитации лабо-
ны соответствовать стандартам, предлагаемым OECD, Международным раторных исследований на животных (AAALAC).
инженерным консорциумом (IEC), Международной организацией по
стандартизации (ISO), Комитетом по контролю качества пищевых про-
дуктов и лекарственных средств США (FDA), для того, чтобы результаты Нанобиотехнологии и новые инициативы
этих исследований адекватно воспринимались международными органи- биомоделирования
зациями.
В соответствии с вышеизложенными позициями данное Руковод- Наночастицы с размерностью 1–100 нм имеют уникальные физико-
ство направлено на обеспечение: химические параметры, механизмы и точки биомедицинского прило-
проведения контролируемых исследований на лабораторных живот- жения. Это связано с нахождением большинства атомов на межфазной,
ных и альтернативных моделях; внешней поверхности частиц, что в свою очередь обуславливает новые для
получения достоверных и воспроизводимых экспериментальных медиков и биологов квантово-механические закономерности их действия.
данных в опытах с использованием лабораторных животных; Иные электромагнитные, спектральные, физико-химические, биологи-
нормального физиологического развития лабораторных животных и ческие механизмы проявляются в уникальности мембранопроницаемо-
состояния их здоровья; сти, антимикробного действия, влияния на регуляторный аппарат живых
стандартности лабораторных животных по генетическим парамет- клеток, в том числе генный, в наличии особой механической прочности
рам и условиям содержания; наноструктур и т.д. Развитие нанотехнологий и создание новых нанома-
стандартных условий содержания лабораторных животных при их териалов, обеспечивая научно-технический прогресс будущего, в то же
воспроизводстве в питомниках и проведении экспериментов в эк- время создает зону риска для человека и окружающей его среды.
22 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 23

Безопасность наноматериалов и нанотехнологий является важней- ти ингаляций, оральной и кожной токсичности таких наноматериалов,
шим фактором, регламентирующим промышленное производство и внед- как углеродные частицы, двуокись кремния, фуллерены, оксид магния,
рение в здравоохранение нанопродуктов. Для абсолютного большинства оксид цинка и диоксид титана. Диоксид титана используется в 70% миро-
наноматериалов не известны механизмы поступления в организм, био- вого производства красителей и косметики. В то же время он классифи-
совместимости, биотрансформации, транслокации в органах и тканях, цирован Международным Агентством по изучению рака как возможный
элиминации и, что особенно важно, их токсичности. В России, США, канцероген человека.
странах Евросоюза, Канаде, Японии, Китае и других странах ведутся об- Необходимо развитие и поиск альтернативных моделей на основе
ширные исследования по оценке безопасности и потенциальных рисков, методов оценки физико-химических, протеиновых и иммунных процес-
связанных с производимыми наноматериалами. В России разработаны и сов. Новые биомедицинские инициативы позволяют найти оптимальные
в 2007 г. утверждены Постановлением Госсанэпиднадзора «Концепция подходы к оценке эффективности и безопасности наноматериалов.
токсикологических исследований, методологии оценки риска, методов Один из таких подходов включает короткие по продолжительности
идентификации и количественного определения наноматериалов» и При- тесты с использованием нескольких биомаркеров для выявления опре-
казом Роспотребнадзора – методические рекомендации «Оценка безопас- деленного вида нанотоксичности. Эти эксперименты имеют высокую
ности наноматериалов» [http://stroy.dbases.ru/Data1/52/52003/index.htm]. норму сигнал/шум и хорошую повторяемость. Если механизм наноток-
В тестах для наночастиц необходимо особое внимание уделить харак- сичности понятен, то его легко повторить в тестах in vitro.
теристике состоящих из них наноматериалов. При оценке нанобезопас- При правильном подходе опыты in vitro позволяют получить ин-
ности полученных инженерными способами наноматериалов, таких как формацию об уровне токсичности и ее клеточных и молекулярных ме-
фуллерены, одно- и многослойные углеродные трубки, оксиды металлов ханизмах. Токсикокинетические данные in vitro позволяют оценить по-
наноразмеров, такие как TiO2, частицы с диаметром в нанометр низкой тенциальные дозы и характер действия наночастиц для последующего
растворимости, считающихся наноматериалами, должны быть найдены исследования на лабораторных животных. Но только токсикологические
принципиально новые процедуры изучения токсичности и точек окон- эксперименты на животных дают достоверную информацию относитель-
чания эксперимента при ингаляционном, пероральном и трансдермальном но опасности наноматериалов для человека. Поэтому единственным ре-
путях проникновения наночастиц. шением остается использование классического подхода в исследовании
Учитывая особенности поступления наночастиц в организм челове- наноматериалов, где ключевыми объектами исследования остаются раз-
ка и животных, основными органами-мишенями являются ткани дыха- ные виды животных.
тельной, интестициальной, иммунной, кожной систем, а критичными по Современное состояние науки по использованию альтернативных
последствиям действия наноматериалов являются головной мозг, костный подходов in vitro не позволяет ответить на вопрос о системном действии
мозг, репродуктивные и выделительные органы. Отсутствие единой шкалы наночастиц на организм человека. Главными недостатками эксперимен-
приоритетов для оценки безопасности всего многообразия наноматери- тов in vitro являются недостаточная валидация полученных результатов
алов и низкая информативность, а зачастую неприменимость традици- в сравнении с экспериментами на животных и невозможность модели-
онных токсико-гигиенических характеристик к наноразмерным структу- рования сложных биологических процессов, например полного воспали-
рам, делает необходимым поиск и использование новых биомедицинских тельного ответа.
подходов к их оценке. Анализ литературы и собственные исследования в НЦБМТ показа-
Можно полагать, что мишенями для наночастиц, в том числе угле- ли, что при оценке наночастиц и наноматериалов оправданно исполь-
родных, являются биологические макромолекулы (ДНК, РНК, белки), зование нового теста на 28-дневную токсичность, который включает 4
биологические мембраны, в том числе гистогематические (ГГБ), гемато- уровня доз, на крысах обоего пола в количестве 10 аутбредных голов в
энцефалические (ГЭБ) барьеры, системы окисления – восстановления, в каждой группе, всего – 80 голов, например WAG или Wistar. Для мини-
том числе перекисного. мизации использования животных в эксперимент включают 3–5 линий
Естественно, что в тестах на оценку токсичности наноматериалов крыс (например, линии WAG/GY, F344/Y, BK/Y, AUG/LacY, LEW/Y, со-
применительно к человеку и окружающей среде пока использовали лишь зданные или поддерживаемые в нашем Центре) по 3 головы от каждой
общие подходы. Необходимы новые оценки потенциальной токсичнос- линии вместо 10 голов WAG. Этот эксперимент будет включать: 4 уровня
24 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 25

доз, животных двух полов, линии и 3 крысы в каждой группе, всего – 72 Глава 2
крысы.
Эксперимент, поставленный на нескольких линиях, часто пока- Биоэтика, животные-модели,
зывает различную восприимчивость линий. Оценка нанобезопасности
должна основываться на самой чувствительной линии, но в ряде случа- модели животных и альтернативное
ев необходимо найти ген такой восприимчивости. Это поможет уяснить моделирование
механизм нанотоксичности и получить данные для инновационных ле-
карств в будущем. К сожалению, токсикологи никогда не делали попы-
ток использовать такой дизайн.
Если вместо крыс использовать мышей, то понадобятся более ра-
дикальные изменения. По зарубежным данным, именно мыши (91,4%)
были наиболее часто используемым видом для генных модификаций, а
лишь затем – крысы (3,6%), зебрафиши (2,3%), свиньи (1,4%) и другие
виды, включая цыплят, овец и коров (1,3%). Наиболее часто использо-
вались для генных модификаций мыши линий C57BL/6 (48,1%), 129Sv
(11,1%), Balb/c (4,3%), CD1 (2,5%) и FVB (0,3%). Преимущество в ис- Гуманное обращение с лабораторными животными является обя-
пользовании мышей заключается в широкой доступности различных зательным этическим долгом каждого человека, работающего с ними. В
линий и обширной базы данных по генетике мыши, соответствие генов мировой практике гуманное обращение с лабораторными животными
мыши/человека, и относительная простота генетических манипуляций с закреплено законодательными актами.
мышью. Генетические модификации могут включать «вставку» необхо- Биоэтика – это философски-прикладная область знания, охватыва-
димого гена, дающего отклик на нановещества. ющая моральные, юридические и социальные проблемы, такие как от-
ношение человека к диким и домашним животным, а также проблемы,
возникшие в связи с бурным развитием биотехнологии и биомедицинс-
ких исследований.
Впервые термин «биоэтика» в 1971 г. ввел Р.В. Поттер. Некоторые
национальные и европейские законодательства, регулирующие проведе-
ние экспериментов на животных, требуют замены животных альтерна-
тивными методами всегда, когда это только возможно.
В 1865 г. было создано Российское общество покровительства жи-
вотным, деятельностью которого прежде всего является борьба с люд-
скими жестокостями над животными. Идея защиты животных и природы
на законодательном уровне появилась в Великобритании, где в 1926 г.
было основано Общество по охране животных Лондонского универси-
тета (с 1938 г. – Университетская федерация защиты животных, UFAW).
Эта организация сыграла и играет важнейшую роль в развитии этических
концепций экспериментирования на животных и в становлении практи-
ческих направлений, улучшающих эксперименты на животных. Группа
исследователей во главе с М. Хьюмом, созданная в рамках актива UFAW,
предприняла попытку разработать принципы гуманной эксперименталь-
ной техники.
26 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 27

В 1982 г. Генеральной Ассамблеей ООН принята Всемирная хартия При публикации результатов исследований экспериментатор дол-
природы, а в 2000 г. принята Декларация земли – первый международ- жен обязательно указать, что проведение данного эксперимента было
ный документ, на основании которых всем формам жизни обеспечива- санкционировано решением Комиссии по биологической этике (КБЭ).
ется существование. Получение разрешения ответственным исполнителем на проведение
эксперимента на лабораторных животных возможно только после того,
когда исполнитель представит в комиссию по биоэтике «Заявку на про-
Биоэтические нормы и принципы трех R ведение биоэтической экспертизы», «Программу экспериментального
исследования на животных» и «Обоснование необходимости использо-
Практически единственным методом контроля и экспертизы ле- вания животных в данном исследовании» по установленной форме.
карств, а также изучения биологических реакций на воздействие экстре- Исследователь должен обязательно представить письменное описа-
мальных факторов являются экспериментальные исследования только ние эксперимента, в котором имеется формулировка цели исследования,
на животных. Наиболее общие принципы, которыми необходимо руко- описание всех экспериментальных процедур и методических приемов,
водствоваться при проведении контролируемых исследований на живых характер и степень дискомфорта и риск возможных осложнений. Описа-
объектах, следующие: ние должно включать физическую активность, диету, прием препаратов,
убедительные основания в необходимости планируемых экспери- проведение нагрузочных и функциональных проб и др. При планирова-
ментальных исследований и невозможности замены животного ка- нии эксперимента на животных исследователь обязан руководствовать-
кой-либо моделью или альтернативным объектом исследования; ся принципами «трех R» (replacement – замена болезненных для живот-
минимизация количества привлекаемых к исследованию животных ных экспериментов опытами, не причиняющими страданий; reduction
за счет стандартизации условий эксперимента, повышения инфор- – уменьшение числа опытов с животными; refinement – улучшение ме-
мативности методических приемов, исключения факторов, увеличи- тодики с целью облегчения страданий подопытных животных). Во всех
вающих разброс экспериментальных данных; случаях следует рассмотреть возможность использования альтернатив-
принятие необходимых мер, исключающих страдания животных; ных методов.
обязательное обеспечение надлежащего ухода за животными с уче- Альтернативный метод – это метод, применяемый для уменьшения
том особенностей их этологии; количества животных, улучшения условий содержания или замены ис-
гуманное отношение к животным (студенческая лабораторная ра- пользования экспериментов на животных в биомедицинских исследо-
бота, учебно-научный эксперимент, тестирование лекарственного ваниях и проведения тестов с квалификационной или образовательной
препарата и др.). целью.
Право на использование животных в экспериментах имеют высшие В 1959 г. У. Рассел и Р. Берч издали книгу «Принципы гуманной экс-
учебные, научно-исследовательские и лечебные учреждения, у которых периментальной техники» (Russell W.M.S., Burch R.L. The Principles of Hu-
есть специальные лаборатории. mane Experimental Technique), в которой обоснована концепция гуман-
Экспериментальную работу с животными могут проводить только ного использования животных в экспериментах, получившая название
те специалисты, у которых есть разрешение руководства госучреждения, «Концепция трех R».
имеющего лицензию на проведение исследовательских работ с использо-
ванием животных. Кроме того, эти специалисты несут ответственность за
соблюдение правил содержания и использования животных. Исследова- Replacement: выбор и замена
тели, проводящие эксперименты, и вспомогательный персонал должны
иметь достаточный опыт. Сотрудники экспериментальной лаборатории, Replacement – замена в опыте, когда это возможно, высокоорганизо-
имеющие среднее медицинское, ветеринарное или зоотехническое обра- ванных животных менее развитыми живыми объектами, альтернативны-
зование, аспиранты и студенты должны быть ознакомлены с «Правила- ми методами: экспериментами на культуре клеток и тканей, изолирован-
ми проведения работ с использованием экспериментальных животных за ными органами, физико-химическими и биохимическими системами,
№ 755 от 12.08.1977 г.» экспериментами на микроорганизмах и растительных объектах, компью-
28 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 29

терными и математическими моделями. Возможно использование куль- конгенные и конгенно-резистентные линии, мутантные линии и стоки,
тур клеток тканей (методы in vitro) при определении общей токсичности сложные гибриды (тетрагибриды), рандомбредные линии. Выбор живот-
химических соединений для человека и животных, оценки иммуноток- ных той или иной категории определяется целью и характером самого
сичности, нефротоксичности, гепатотоксичности, нейротоксичности, исследования.
фототоксичности, экотоксичности, канцерогенности. Получены биопо-
лимеры, эквивалентные человеческой коже.
Информация о существующих альтернативных методах регулярно Reduction: адекватность и стандартизация
публикуется во многих международных журналах, наиболее популярным
из которых признан ATLA (Alternatives To Laboratory Animals). Reduction – это достижение воспроизводимых результатов с исполь-
Для медико-биологических экспериментов, в которых лаборатор-
зованием минимального количества животных; адекватный выбор лабо-
ные животные служат инструментом измерения активности каких-либо
раторных животных; использование стандартных по микробиологичес-
веществ, препаратов, например вакцин, сывороток или гормональных
средств, генотип несущественен, вопросы экстраполяции необязатель- ким, генетическим и экологическим параметрам животных; оптимальное
ны, поэтому для «биопробы» можно использовать гибриды как линейных планирование и, что крайне важно, использование статистических мето-
животных, так и аутбредных. дов не только при обработке полученных данных, но и на стадии плани-
Эксперименты, в которых предполагается моделирование патологи- рования. Одним из наиболее надежных путей снижения количества жи-
ческих состояний (онкологические исследования, изучение процессов вотных, используемых в экспериментах, является дальнейшее развитие
воспаления, иммунитета, мутаций), проводятся только на определенных и осуществление стандартизации лабораторных животных по генотипу,
линиях, так как важна роль генетических факторов в развитии изучаемого
микрофлоре и экологическим параметрам.
состояния. Для выполнения исследований влияния различных веществ и
факторов внешней среды можно ограничиться выбором одной линии или Благодаря уменьшению количества переменных факторов стан-
гибридной комбинации. дартизация может помочь в получении более надежных результатов на
Если есть информация, входящая в характеристику линии, то выбор меньшем количестве животных. Состояние живых объектов зависит от
существенно облегчается. Например, наиболее чувствительны к химиче- воздействия многочисленных как экзогенных, так и эндогенных факто-
ским мутагенам следующие линии мышей, рекомендованные для цито- ров, влияние которых далеко не всегда бывает явным и легко регистри-
генетического тестирования: TPS/Y, 101/HY, C57BL/6Y, WR/Y. Относи- руемым. Среди них прежде всего следует отметить факторы инфекцион-
тельно резистентной «нормальной» линией считается линия CBA/LacY.
ной и инвазионной природы. Различные, в том числе даже патогенные
Существуют линейные различия у животных по степени иммунного
представители вирусной и бактериальной флоры, не всегда вызывают
ответа. Часто низкочувствительные линии к патогенному действию ан-
тигена отвечают на него высоким титром антител. Например, линия мы- клинически явную картину заболевания. Часто они протекают в латент-
шей BALB/c малочувствительна к стафилококковой инфекции, но дает ной форме или же в виде носительства. В настоящее время актуальность
высокий иммунный ответ на вакцину пневмококков группы А, а у мышей приобретает так называемая оппортунистическая эндогенная инфекция,
линии C57BL/6 отмечена обратная зависимость. В то же время имеются активизирующаяся при иммунодефицитных состояниях.
отчетливые параллели, как, например, в случае усиления чувствительно- Полноценность корма, сбалансированность всех его компонентов
сти к аудиогенным припадкам инбредные линии мышей располагаются является важнейшим условием, обеспечивающим здоровье животного,
в такой последовательности: G57BL/6, BALB/c, SM, CBA, SJL, AKR. FP,
поддержания неспецифической резистентности его организма на высо-
129, LP, DBA/2.
Отбор той или иной линии основывается прежде всего на генети- ком уровне. Велико также воздействие экологических факторов на статус
ческих и биологических особенностях каждой линии. Возможно исполь- животного – условий его содержания и микроклимата. Все эти моменты,
зование других категорий генетически контролируемых животных: гиб- не учитываемые при проведении эксперимента, искажают и даже извра-
риды первого поколения (F1) от скрещивания двух инбредных линий, щают его результаты.
30 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 31

Refinement: уменьшение дистресса, точности – в малой степени соответствует им. Соотношения между ва-
боли и страданий лидностью и проблемой оценки животных-моделей можно классифици-
ровать следующим образом.
Refinement – это улучшение условий содержания лабораторных жи- 1. Животное-модель никогда не является полностью валидированной
вотных и использования их в экспериментах, уменьшение дистресса жи- моделью. В окончательном анализе гипотезы должны быть пере-
вотных во время экспериментов и применение обезболивающих средств, смотрены относительно человека. Потенциальная эффективность
но не в ущерб цели эксперимента. модели заключается в ее функционировании, а не в подтверждении
С точки зрения внешних проявлений и физиологии, животные реа- или оценке. Нельзя использовать животных для подтверждения ги-
гируют на непереносимые боль и дискомфорт так же, как и люди. Кон- потезы о недомоганиях у человека. Но можно и нужно изучать на мо-
цепция исследования боли на животных включает в себя представления о дели гипотезы, касающиеся определенных нарушений здоровья.
том, что животное не должно подвергаться боли в большей степени, чем 2. Животные-модели, подтвержденные в качестве валидированных
может выдержать человек. моделей не всегда эффективны для экспериментальной работы. Ва-
лидность в данном случае является лишь отправной точкой для до-
стижения цели. Можно достичь высокой точности модели, которая в
Альтернативное моделирование и животные-модели результате не даст ничего нового в понимании тех или иных процес-
сов.
В настоящее время ведутся работы по разработке методов иссле- 3. Большинство животных-моделей в биомедицинских и психологиче-
дований, заменяющих животных в эксперименте. В связи с этим встает ских исследованиях не являются валидными.
вопрос: до какой степени данные модели отражают моделируемый объ- Взаимодействие между моделью и моделируемым объектом можно
ект и можем ли мы использовать полученные результаты в полной мере?
проиллюстрировать следующими примерами.
Критичным является тот факт, исследуем ли мы фундаментальный или
Понятно, что валидность не является критичной точкой в оценке жи-
прикладной аспект науки. Наш мозг является тем компьютером, кото-
вотных-моделей. Многие виды исследований, например изучение пище-
рый устанавливает сходства и различия объектов. Исследователь должен
варения, только подтверждают уже описанные в литературе процессы, яв-
доказать подобие для того, чтобы его исследование стало значимым. Мо-
ляясь в лучшем случае их углублением. Такая модель в целом является
дель и изучаемый объект не могут быть абсолютно идентичны, однако не
невалидной. При составлении дизайна опыта исследователь предполагает,
должно существовать существенных дисаналогий между моделью и мо-
что модель даст те же результаты, что и моделируемый объект. Например,
делируемым объектом. На основе теорий эволюции, систем и хаоса мож-
при заражении животных инфекционными болезнями. С помощью ген-
но доказать, что модель и целевой объект не могут быть изоморфны.
ной инженерии можно получить модель человеческих генов и они будут
Сильная сторона моделирования (с использованием животных или
абсолютно идентичны генам человека, на полученных тканях можно мо-
без них) заключается в расширении возможностей, определении суще-
делировать многие взаимодействия. Однако течение болезни изучить на
ственности, выявлении набора гипотез, которые будут включены в мо-
такой модели нельзя, результаты не будут идентичны течению болезни в
дель. С другой стороны, модель ограничена общими функциями и тем,
организме человека. Такие модели должны быть дополнены альтернатив-
что нет необходимости устанавливать взаимосвязь между степенью точ-
ности и продуктивности, включая этические нормы, которые требуют ными моделями (человеческие ткани или культуры органов), непосред-
использования моделей без животных. ственным наблюдением за процессом на основе высоких технологий.
В силу выше сказанного можно сделать вывод, что животное-модель
может и должно служить для исследователя генератором гипотез. Наука
Валидность моделей может использовать в этих целях и другие виды моделирования. Напри-
мер, компьютерное, математическое моделирование. В любом случае,
Валидность модели означает, что модель и моделируемый объект по- модель должна пройти процедуру валидации.
добны или модель правильно отражает действительность. Модель высо- Валидация (validation) – это крупномасштабное внутрилабораторное
кой точности отражает существенные моделируемые механизмы, низкой исследование, подготовленное в условиях независимости и организованное
32 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 33

для получения более определенной оценки релевантности и надежности оп- измерялось и что должно было быть измерено. В терминологии модели-
тимизированного метода для практических целей. рования надежность не является следствием подобия или точности соот-
В последние годы под эгидой Европейского Совета в Северной Ита- ветствия модели объекту, а соответствием измерения соответствующих
лии был создан Европейский Центр по утверждению (валидации) альтер- переменных модели.
нативных методов (ECVAM). Центр способствует разработке альтерна- Так, за замену животных во всех случаях на альтернативные модели
тивных (заменяющих эксперименты на животных) методов, проверяет и в обучении людей ратует Международная Сеть (Inter NICHE). Этой Се-
утверждает адекватность новых или уже имеющихся методов. тью предлагается включать в процессы исследований и обучения следу-
Валидация альтернативного метода – это процесс, при котором умес- ющие альтернативные методы:
тность применения и его надежность устанавливаются для конкретной мультимедийное компьютерное моделирование (виртуальная реаль-
практической цели. ность, широко распространенная и использующая компьютерный
Новые методы тестирования должны проходить предварительный потенциал и программное обеспечение);
процесс превалидации, и только после признания того, что этот процесс фильмы и видео (цифровое видео легко встраивается в мультиме-
прошел успешно, они проходят процесс официальной валидации. дийные программы);
Протокол и имитационная модель метода тестирования на первой модели, манекены и симуляторы (классические анатомические сред-
стадии изменяются в пользу использования альтернативных методов (re- ства, манекены для выработки навыков взятия крови, интубации,
fine) в обычной лаборатории (с приоритетным экспериментом по исполь- основных хирургических навыков);
зованию теста). Сделанная оценка на второй стадии вносится в протокол, этические источники трупов животных и тканей (для выработки ве-
передаваемый в следующую лабораторию с внесением любых необходи- теринарных навыков берут трупы животных, умерших своей смер-
мых изменений по использованию альтернативных методов в протокол тью или в результате несчастного случая);
и имитационную модель. В третьей стадии оцениваются ревалентность и клинические работы с животными и волонтерами (работа студентов
надежность тестов в условиях независимости в трех или большем количе- в реальных клиниках и помощь при работе с реальными пациента-
стве лабораторий (две первые также включены в это число). ми);
Превалидация (prevalidation) – внутрилабораторное исследование, проведение экспериментов студентами (на мышах, крысах, собаках,
имеющее незначительный масштаб, проводимое в три этапа для гарантии кошках и других млекопитающих можно проводить такие экспери-
того, что протокол и имеющаяся модель метода тестирования достаточно менты, как снятие ЭЭГ, ЭКГ и др.);
оптимизированы и стандартизированы для включения в официальное изуче- лаборатории in vitro (в исследованиях in vitro применяют ткани и
ние валидности. клетки, которые нужны при изучении дыхания, клетки и электрон-
Результатом превалидационных изучений является внесение в оп- ного транспорта, а также некоторые навыки можно получить при
тимизационный протокол вносится того, что может быть использовано использовании растений (картофель или свекла вместо печени жи-
в официальном валидационном исследовании. В превалидации и вали- вотных).
дации могут принимать участие на этой стадии исследования различные Кроме того, имеется книга «От морской свинки к компьютерной
национальные и международные институты с достаточным количеством мыши» с СD, DVD, базой данных и web-версией, переведенная на 12
знаний и опыта. В стадии превалидированных продуктов (prevalidation) языков, в которой авторы из разных стран представили свои материалы в
описываются методы, которые следуют за превалидацией, и дается пред- разнообразной форме: видеофильмы, библиотека мультимедийных ком-
ставление о критериях для повторимости и прогнозирования результа- пакт-дисков, web-сайт.
тов. Стадия, предшествующая валидации (undergoing validation), включает
статус метода, предшествующего официальной валидации.
Валидность модели означает, что модель и моделируемый объект по- Создание моделей животных
добны или модель правильно отражает действительность.
Валидность является следствием надежности: содержание пробле- В биомедицине и особенно в инновационной фармакологии мы
мы, повторности и точности измерений формируют степень того, что скоро перейдем от выбора животных для эксперимента к созданию спе-
34 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 35

циализированных линий под задачи исследования. Тогда планирование Т абл ица 1


БИОЭТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЖИВОТНЫХ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ КАК
эксперимента начнется с постановки задачи для специалиста-фармако- «МОДЕЛИ ЖИВОТНЫХ»
генетика по получению нокаутных или трансгенных животных под буду-
щее лекарство. Принцип Зооцентрический Антропоцентрический
Теория Классическая Новая С позиций общества
Вместо скальпеля и химических субстанций в центре ядра клетки
Боль, страдания,
появляются генетические конструкции, позволяющие выявить влияния Очистка + 4 фазы Оценка общего плана
стресс
на биохимическом уровне. Последовательность наших научных мани- Цели Научные цели Успех манипуляций Польза для общества
пуляций уже не является такой очевидной, как в ситуации «манипуля- Экстра-кросс разведение
ция сама по себе», так как они включают в себя сложные молекулярные Рост числа животных
Статистика инбред- Квалифицированные
Снижение Тревога от патентова-
технологии, такие как наблюдение за моноклональными антителами и ных линий генные инженеры
ния «жизни»
ПЦР-маркерами для проверки изменений в белках и ДНК. Продажа линий
Стимулирование генети- Получение жизни in
В системе «новых экспериментов» следует выделить четыре фазы: по- Стимулирование кле-
Замещение чески модифицирован- vitro может быть риско-
лучение овоцитов из суперовулированных самок мышей (фаза 1), отбор точных культур
ных клеточных культур ванным для общества
и трансплантация удачных эмбрионов в суррогатных матерей (фаза 2);
маркировка новорожденных детенышей и генетический анализ тканей
(фаза 3); программы кросс-бридинга, включающие получение, создание предыдущие четыре фазы являются также фазами эксперимента. Таким
запаса животных, дополнительный генетический анализ (фаза 4). образом, животные, участвующие на первых четырех фазах, не учитыва-
Основные же условия использования животных в эксперименте: на- ются в отчетах официальной статистики, и их этическая оценка не осу-
учная методология, возможность применения принципа «трех R», оцен- ществляется.
ка баланса между страданиями животных и важностью целей исследова- С теоретической и этической позиций существуют два угла зрения
ния. Хотя этические нормы в большинстве своем подразумеваемы, редко и учета первых четырех фаз опыта. В одном случае, необходимо оценить
бывают научными. Однако четыре из них несомненны: научные – в виде перспективу для животного – это зооцентрическая перспектива, когда
составления плана на основе подходящей методологии; экономичные для максимальный уровень дискомфорта для животного не должен превы-
уменьшения количества животных; эмпатичные – в форме использова- шать «среднего» уровня. В другом – мы должны оценивать критическое
ния методов, уменьшающих страдания/дискомфорт; скромные, т.е. ис- отношение в обществе – антропоцентрическая перспектива. Следователь-
пользование клеточных культур вместо животных. Пятое, как баланс и но, планируя эксперимент, мы должны принимать во внимание оценку
основа логики, – этический принцип пропорциональности. всех его стадий, на которых может возникнуть дискомфорт. Таким обра-
Если на каждой из фаз уровень дискомфорта оценивается как сред- зом, эксперимент разбивается на множество шагов, которые могут вклю-
ний, то мы можем оценить и эксперимент в целом, как имеющий уровень чать средний дискомфорт, после чего оценивается вся совокупность. В
среднего дискомфорта. В современных генетических исследованиях на противовес «простой» традиционной схеме (пятифазной) эксперимента,
животных один «эксперимент» включает различные действия или фазы этот современный подход может оказаться весьма проблематичным, так
с различными животными: животные-доноры, животные–суррогатные как наличие нескольких фаз со средним дискомфортом может сделать
матери, покалеченные животные, линии животных. Все эти действия оценку всего эксперимента выше среднего уровня (Таблица 1).
необходимы для ответа в отношении одной-единственной цели экспе- Стремительное развитие молекулярной медицины, генной инжене-
римента, и это основное отличие от традиционной концепции «экспери- рии породило огромное древо новых биомедицинских технологий. Если
мента на животном». условиться с терминологией, подразумевая, что транскриптом – это все
Последовательность шагов понятна, однако большинство иссле- транскрибируемые РНК-последовательности, протеом – это все белки,
дователей пока не рассматривают все стадии, а продолжают оценивать кодируемые геномом, а метаболом – это межбелковые взаимодействия
эксперимент на животном только на основе конечной фазы, а именно в процессах обмена веществ и жизнедеятельности организма, то можно
использования экспериментальных животных в провокационных экспери- выстроить структуру партитуры «Оды жизни» не только животных, но и че-
ментах для тестирования удачности модификации. Они не считают, что ловека будущего: геном→транскриптом→протеом→метаболом→биотран-
36 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 37

сформ. В данном случае биотрансформ – это не только трансформация в Для проведения успешного криогенного сохранения эмбрионов
организме, но и биотрансформация самого организма. Моделирование мышей необходимо недорогое, но качественное оборудование, реактивы
этих процессов – процесс не быстрый. Возможно, весь ХХI век уйдет на высокой степени очистки, но главное – специалисты в области преимп-
познание фенотипических полиморфизмов от клеточного до организмен- лантационной эмбриологии, имеющие успешный опыт криогенного со-
ного уровня человека как прототипа всех возможных биомоделей. хранения эмбрионов. Оборудование, необходимое для криогенной замо-
Если ген является элементарной структурой наследственности, то розки, включает в себя частично опорожненные колбы, приспособления
клетка – элементарная единица жизни, поскольку любые молекулы от для обращения с жидким азотом, CO2-инкубаторы, термопары, регист-
самой малой до РНК и ДНК работают только в клетке. рирующий прибор и микроскопы с цифровой камерой и компьютером.
Подобные современные тенденции биологии, цитологии, геноми- Донорами эмбрионов обычно являются препубертатные мыши в
ки, транскриптомики, протеомики, биоинформатики, бионики объеди- возрасте около 21 дня. С помощью сыворотки беременной кобылы и че-
няются, а сумма знаний интегрируется в новом научном направлении – ловеческого хорионического гонадотропина у самок вызывают гиперо-
целломике (от cell – клетка). вуляцию и затем их спаривают с племенными самцами. Доказательством
Выбор метода для замены животных изначально был мотивирован успешного спаривания является наличие вагинальной пробки, со дня ее
нами снижением количества живых животных в опыте. Но в методах in обнаружения начинается отсчет дней. На третий день мышь убивают и
vitro уже очевидны альтернативы, которые в большей степени перекрыва- извлекают матку и фаллопиевы трубы. Из фаллопиевых труб с помощью
ют риски страданий, нежели в вивисекционных экспериментах. Однако в соответствующего инструмента вымываются эмбрионы, которые на этот
эру новой биомедицины и биотехнологий жизнь может быть, как мы уже момент должны находиться на стадии 8-клеточного развития. Далее из
убедились, в отдельных клетках вне животного. Можем ли мы считать общей массы эмбрионов выбраковываются поврежденные или недораз-
данные созданные существа альтернативами? На данном этапе развития вившиеся. Оставшиеся эмбрионы в среде с соответствующим криопро-
науки на этот вопрос следует ответить утвердительно, рассматривая его тектором (диметилсульфоксид) помещают в пробирки или трубочки,
как концептуальное пространство создания новых «моделей животных», подготовленные для заморозки. Далее они охлаждаются до почти полной
что существенно изменит наши взгляды на пути поиска новых лекарств и заморозки, и колбы закупориваются кристаллом льда для предотвраще-
предопределит новые основы инновационного фармакомоделирования. ния переохлаждения. После этого эмбрионы замораживают. Обычно
скорость охлаждения низкая (около 0,4 градуса в минуту). С момента до-
стижения эмбрионами температуры –80°С скорость охлаждения можно
Криотехнологии увеличить, пока степень заморозки не будет соответствовать температуре
жидкого азота (–196°С). При этой температуре эмбрионы могут сохра-
Из эмбрионов мышей, замороженных в жидком азоте 12-15 лет на- няться неограниченное количество времени.
зад, были успешно получены молодые особи животных. Предстоит глуб- Когда возникает необходимость в эмбрионах, их размораживают,
же изучить этот метод прежде, чем использовать на постоянной основе используя принятый в лаборатории метод. Обычно это происходит при
в отношении различных видов живых существ, особенно человека. Ос- комнатной температуре или в ванне с температурой воды 37°С. Непов-
новной целью криогенной заморозки эмбрионов мышей является дости- режденные эмбрионы отбирают, омывают и выращивают 24 часа в под-
жение гарантии того, что вся линия или популяция не будут потеряны ходящей среде в СО2-инкубаторе. Если эмбрионы жизнеспособны, они
в результате болезни или несчастного случая. Более того, это наиболее развиваются в бластоцисту, подходящую для имплантации.
экономичный метод поддержания значительного количества будущих За 2 дня до размораживания эмбрионов нескольких псевдоберемен-
особей, необходимости в которых в данный момент нет, но может вскоре ных мышей, будущих суррогатных матерей, подготавливают к приему
возникнуть.Криотехнологии могут использоваться для транспортировки эмбрионов путем спаривания со стерильным самцом (стерилизованным
коллекционных линий для предотвращения генных изменений в инбред- с помощью вазектомии или генетически стерильным). Будущая сурро-
ных линиях, для экспериментов в преимплантационной эмбриологии, а гатная мать получает анестезию, ей делают один кожный надрез и далее
также создания популяций для получения высококачественных и досто- по надрезу в верхней брюшине по обеим сторонам от позвоночника с
верных экспериментальных данных. тем, чтобы обнажить боковые стороны матки. С обеих сторон матки де-
38 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 39

лается по маленькому надрезу, через которые помещается 4–6 эмбриона. нимание пищи. При формировании групп животных необходимо обра-
Кожный надрез закрывается с помощью зажима. Если операция прошла щать внимание на минимальное проявление агрессии животных.
успешно, через 18–19 дней должны родиться мышата. Квалифицирован- Животные должны проявлять минимум беспокойства при различ-
ный специалист может получить 30–40% жизнеспособных молодых осо- ных манипуляциях исследователя.
бей из общего количества замороженных эмбрионов. Приматы формируют коалиции, в которых выражают свои домини-
рующие способности, выбирают сексуальных партнеров и партнеров по
кормлению. Животных которых надо ввести в уже существующую груп-
Использование и ограничения в использовании пу, должны содержаться отдельно как можно более короткое время.
приматов В замкнутом пространстве животным необходимо обеспечить воз-
можность деятельности, например сбора пищи, у животных должны
Принципы «трех R» существенно ограничивают применение высо- быть загородки, укрытия, качели, можно использовать искусственные
коорганизованных животных в экспериментах. Там, где это возможно, приспособления (радио, видео, телевидение). Можно показывать видео-
необходимо использование более низко организованных животных и не- фильмы о жизни обезьян.
млекопитающих. Однако в ряде биологических, вирусологических и/или Большинство приматов проявляют реакции вертикальных полетов.
поведенческих процедурах адекватные результаты можно получить толь- Это необходимо учитывать при организации жилища. Животные, особен-
ко на крупных животных и человекообразных обезьянах. но macaca nemestrina, должны видеть друг друга. Если возможен физичес-
По поведению и выражению эмоций приматы наиболее близки к кий контакт, то надо быть уверенным в том, что животные совместимы.
человеку, чем какие-либо другие животные. Исследователи, проводящие Взаимодействие между приматами исследователями и обслуживаю-
эксперименты на приматах, небезосновательно считают, что полученные щим персоналом поощряется, но должно иметь меру. Приматов нельзя
результаты будут наиболее близки к ожидаемым результатам для людей. брать на руки дольше, чем этого требует эксперимент. Также надо учи-
тывать, что и приматы могут заразить человека различными болезнями.
Шимпанзе обычно используют в исследованиях гепатита, мартышки – в
Они могут являться носителями различных вирусов, например, Cercopi-
исследованиях ВИЧ, проверки вакцин и лекарств, изучении познаватель-
thecine herpesvirus I (форма Herpesvirus simiae), вирус геморрагической ли-
ной способности, патологий и болезней человека, злоупотреблении ле-
хорадки и др.
карствами, ксенотрансплантологии и других областях. Однако при этом
Большинство приматов обладают большой силой и могут поранить
нельзя забывать, что приматы имеют сложную организацию, схожую с
обслуживающий персонал. Люди также могут заразить приматов, напри-
человеком. Поэтому при их содержании необходимо уделять внимание мер корью, туберкулезом. Все работающие с приматами должны надевать
их поведению и социальному окружению. Исследователи должны иметь защитные перчатки, защиту на руки, маски и защиту для лица. Необходи-
представление о характеристиках поведения, уметь выявлять ненормаль- мо постоянно проводить контроль на носительство туберкулеза, а также
ное поведение и устранять его причины. Также исследователи должны иметь возможность всегда оказать помощь при укусах и царапинах.
быть знакомы с литературой по поведению животных, чтобы обеспечить Использование приматов в экспериментальной работе возможно
должный уход и содержание. В случае поведенческого стресса результаты только в тех случаях, когда заместить их другими животными невозмож-
эксперимента могут быть искажены. но. Проведение исследований на приматах возможно исключительно по
Изоляция животных приводит к социальной депривации, наруше- решению и под контролем соответствующей этической комиссии или
ниям в социальной, сексуальной или исследовательской активности. По- комитета и строго документировано.
этому весьма важно обеспечить возможность общения с другими особями
того же или другого вида, если это невозможно, то необходимо увеличить
общение с людьми.
Однако приматы, которых содержат парами или группами, могут на-
нести друг другу раны, заразить болезнями, также в группах возможно
проявление иерархического доминирования, социального дистресса, от-
40 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 41

Глава 3 руководств и СОПов, и серию соответствующих обязанностям исследо-


вателя практических занятий под руководством опытного сотрудника.
Обучение работе с лабораторными
животными Информирование и обучение сотрудников
Все сотрудники информируются:
– о возможных воздействиях вредных производственных факторов
(физических, химических и других);
– о способах определения присутствия паров химических веществ в
рабочей зоне;
– о назначении знаков возможной опасности;
и обучаются:
– мерам безопасности: соответствующим приемам работы, примене-
нию средств индивидуальной и коллективной защиты, последова-
Работа с лабораторными животными, включая уход за ними и прове- тельности действий в случае чрезвычайных ситуаций;
дение экспериментальной работы, требует специальной подготовки. Ма- – способам оказания первой помощи пострадавшим.
териалы данной главы раскрывают основные требования к персоналу и Информирование сотрудников проводится до начала работы устно
программы подготовки сотрудников различных уровней. на семинарах и с использованием материалов: инструкций и СОП.

Подготовка и переподготовка сотрудников Обучение персонала


Работа с лабораторными животными и производство биологических 1) Описание специальной подготовки и обучения для работы с приме-
образцов для опытов требуют специализированной подготовки. Особое нением опасных агентов на животных
значение имеет квалификация сотрудников питомников. Все сотрудники, приступающие к работе, проходят обязательный
Персонал, не имеющий специального образования, должен пройти вводный инструктаж по охране труда у инженера службы охраны труда и
специальное обучение технологии содержания лабораторных грызунов, техники безопасности. Вводный инструктаж включает в себя рассмотре-
уходу и манипуляциям, а также регулярно проходить текущее обучение ние общих вопросов по безопасной работе (пожаробезопасность, элект-
на семинарах и практических занятиях в соответствии с Программой робезопасность, работа с вредными химическими веществами).
обучения, принятой в Лаборатории, и стандартным операционным про- За проведение инструктажа на рабочем месте отвечает руководитель
цедурам (СОП). Лаборант допускается к самостоятельному выполнению лаборатории. Инструктаж включает в себя ознакомление нового сотруд-
какой-либо манипуляции на животном после ее освоения под руковод- ника с основными правилами работы в лаборатории с учетом специфики
ством исследователя и сдачи экзамена комиссии, в состав которой входят обязанностей. После инструктажа вновь принятый персонал проходит
руководитель исследования, представитель службы контроля качества и стажировку на рабочем месте. Допуск к самостоятельной работе проис-
ветеринарный врач. ходит после специального обучения, которое включает в себя семинары,
Исследовательский персонал, выполняющий работы на животных, изучение СОПов, а также практический тренинг под руководством со-
должен иметь соответствующую квалификацию и обладать достаточным трудника, имеющего опыт выполнения той или иной операции.
практическим опытом в этой области. Научные сотрудники, вновь пос- Уже работающий персонал проходит текущее обучение в случае из-
тупившие на работу, и студенты допускаются к самостоятельной работе менения технологии либо использования новых реактивов и оборудова-
с животными только после прохождения образовательного курса, вклю- ния, новым СОПам, а также в случае нарушения кем-либо из сотрудни-
чающего в себя инструктаж с использованием специальной литературы, ков правил техники безопасности.
42 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 43

Перед началом исследования проводятся семинары для информи- симости от страны. Четыре учебных плана представляют перечень не-
рования сотрудников о специфике процедур в исследовании, правилах обходимых для изучения тем и объем подготовки. Для категорий А и D
безопасной работы, опасности применяемых веществ и способах защи- предусмотрено детальное профессиональное образование, в то время как
ты. Обучение проводится устно, а также согласно СОПам по технике без- для категории В и С предлагаются относительно короткие курсы.
опасности и руководствам на вещества, используемые в исследовании. Рекомендации не касаются вопросов глубины изучения предметов
2) Описание образовательных программ или квалификации преподавателей. Это будет представлено другими ра-
Программа обучения персонала, осуществляемая в лаборатории, бочими группам FELASA по аккредитации образования и обучения по
включает темы по профессиональной безопасности, в том числе по про- всем категориям.
филактике зоонозов и возникновения аллергий на лабораторных живот- Практические, теоретические и этические аспекты формируют об-
ных, безопасности работы с животными и персональной гигиене. Перед щую и фундаментальную основу образования и обучения в рамках всех
началом исследования и при необходимости с персоналом проводятся категорий. Руководящими принципами являются: совершенствование
специальные семинары по правилам работы с конкретным видом лабо- методических приемов, сокращение количества используемых животных
раторных животных, используемыми в исследовании химическими ве- и их замена, где это возможно, методами без привлечения существ, обла-
ществами и материалами. дающих сознанием и разумом.
В категории А степень компетентности персонала может быть отне-
сена к четырем уровням, достижение каждого из которых вместе с со-
Программы обучения персонала ответствующим опытом, где это уместно, может служить требованием к
переходу на следующий уровень:
В мире существует сложившаяся практика подготовки и переподго- * 1-й уровень – основной уход за лабораторными животными;
товки персонала, работающего с лабораторными животными. В частно- * 2-й уровень – 1-й уровень плюс не менее чем 2-летняя практика;
сти, FELASA (Federation of European Laboratory Animals Science Associa- * 3-й уровень – 2-й уровень плюс не менее чем 3-летняя практика;
tions – Федерация европейских научных ассоциаций по лабораторным * 4-й уровень – более высокая руководящая должность или специа-
животным), в которую входят Франция, Италия, Балтийские государ- лизация.
ства, Бельгия, Чешская Республика, Германия, Австрия, Греция, Соеди- Обязанности и обязательства персонала на всех четырех уровнях и
ненное Королевство Великобритании и Северной Ирландии, Ирландия, программа обучения для 1–3-го уровней изложены ниже. Своеобразие
Нидерланды, Скандинавские государства, Испания, Швейцария, разра- функций персонала 4-го уровня делает стандартную программу непод-
ботали программы подготовки специалистов различных уровней. ходящей, присвоение этого уровня, как правило, основано на признании
В процессе детальной разработки данных требований FELASA вы- личного опыта и способности к руководящей работе.
делила четыре категории лиц, имеющих отношение к экспериментам на Программы содержат темы, необходимые для образования и обу-
животных (которые не являются взаимоисключающими), впоследствии чения персонала, занятого уходом за животными, на каждом уровне, и
одобренные Европейским Союзом [EU 1992] и Правлением Совета Ев- представляют собой совокупность программы FELASA для категории С,
ропы по многосторонним консультациям [СЕ 1993]: изучаемой в соответствующих деталях, и соображений по управлению
категория А – лица, осуществляющие уход за животными; объектом и его планированию, относящихся к 3-му уровню. Темы, пре-
категория В – лица, проводящие эксперименты на животных; дусмотренные для одного уровня, могут изучаться более глубоко на дру-
категория С – лица, ответственные за руководство экспериментами гом уровне, например законодательные и этические аспекты.
на животных; Количество часов формального обучения на 1–3-м уровнях и соот-
категория D – специалисты в области науки о лабораторных живот- ветствующий опыт работы (выраженный количеством лет), необходи-
ных. мый для получения квалификации, дающей возможность приступить
В основе рекомендаций FELASA лежат общие для каждой категории к этому обучению, отличаются в странах, где уже имеются курсы. Это в
лиц задачи, обязанности и ответственность. Такой подход предпочти- значительной мере зависит от подхода к временному балансу между тео-
тельней номенклатуры, которая может значительно различаться в зави- ретическими и практическими занятиями и обязательности требований
44 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 45

к владению формальными навыками, чтобы приступить к обучению на 5. Участие в процедурах общего микробиологического мониторинга,
1-м уровне. Практические навыки работы в течение 4–5 лет и внедрение например в сборе образцов воды и воздуха, обеспечении эффектив-
системы обучения персонала, занятого уходом за лабораторными живот- ного функционирования стерилизующего оборудования.
ными, обычно достаточны для получения 1-го и 2-го уровней и дает воз-
можность перейти на 3-й. УХОД И РАЗВЕДЕНИЕ ЖИВОТНЫХ
Переход с одного уровня на следующий не является автоматическим. 1. Чистка, кормление и поение экспериментальных, разводимых и дру-
Это связано с тем, что не все успешно работающие на одном уровне хотят гих животных.
или способны перейти на следующий. Этот факт может создать пробле- 2. Компетентность в обращении с традиционными видами лаборатор-
му для тех, кто остановился на 1-м уровне, где основным существенным ных животных.
компонентом выполняемых работ является уход за животными. Неза- 3. Ежедневные наблюдения и осмотр животных в соответствии с усло-
висимо от основных знаний необходимо продемонстрировать опреде- виями содержания (включая отметку принятия пищи/воды). Сооб-
ленный уровень практической компетентности. Для соответствия этому щение инспектору о любых изменениях.
критерию существующие схемы обычно требуют около года практиче- 4. Выполнение некоторых методов эвтаназии в соответствии с детально
ской работы под непосредственным руководством специалистов; любое описанными процедурами, например ингаляции углекислого газа.
теоретическое обучение является либо приложением к этому, либо вклю- 5. Общее содержание помещения(й) для животных, очистка, пополне-
чается в практическое обучение, либо требуется и то, и другое. ние запасов предметов потребления.
6. Регистрация показателей среды в помещениях для животных (тем-
Категория A FELASA – 1-й уровень пература, влажность и т.д.) и процедур, проводимых в помещениях
(ежедневных действий). Доклад о любых отклонениях от указанных
Все обязанности выполняются под непосредственным руководством параметров.
опытного специалиста по уходу за животными.
Квалификация: точное выполнение установленного рабочего порядка БЕЗОПАСНОСТЬ
и процедур, следование устным или письменным инструкциям, умение об- Соблюдение стандартных процедур, регулирующих безопасную работу
щаться устно, вести документацию. в подразделении, грамотное обращение с веществами, защита от аллер-
На этом уровне обычно нет необходимости в получении академиче- генов животного происхождения, соблюдение личной гигиены, выполне-
ского или соответствующего профессионального образования, за исклю- ние программы вакцинации и т.д. Осведомленность о личной и коллектив-
чением Нидерландов, где курс инструктажа является обязательным. ной ответственности за безопасность работы.
Опыт работы не является столь существенным фактором (за исключением
Нидерландов), как общий интерес к работе с животными и правильное ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО ПО БИОЭТИКЕ
выполнение рутинных процедур, связанных с правильным содержанием Осведомленность в вопросах контроля, определяемого национальным
животных и уходом за ними. законодательством, и этики использования животных.
Получить статус персонала этого уровня могут лица разных возрастных
групп с различной рабочей квалификацией и академическими знаниями. Категория A FELASA – 2-й уровень
Возможные направления деятельности Обязанности, перечисленные ниже, отражают развитие и расшире-
ОБЩИЕ ОБЯЗАННОСТИ И ЭКСПЛУАТАЦИЯ ОБОРУДОВАНИЯ ние опыта и практических навыков, освоенных на 1-м уровне. Основным
1. Эксплуатация и ежедневное обслуживание оборудования, например требованием является применение углубленных знаний при работе в
моющих машин для клеток/бутылок, оборудования для чистки и различных специализированных учреждениях для животных, а также с
стерилизации. возрастающим количеством видов животных, включая требующих спе-
2. Общая уборка и гигиена обслуживаемых площадок, коридоров и т.д. цифических навыков разведения.
3. Ликвидация отходов. К этому уровню также относят способность работать более длитель-
4. Сбор, разгрузка и складирование материалов. ное время без прямого руководства, нести ответственность за ежедневные
46 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 47

рутинные процедуры в выделенном(ых) помещении(ях) для животных и 4. ОБУЧЕНИЕ


выполнять другие специфические обязанности в соответствии с утверж- Работа в непосредственном контакте, руководство и помощь новым
денным стандартом. сотрудникам, обучающимся уходу за животными, в освоении рутинных
В общем, для перехода на этот уровень необходимы как минимум процедур в соответствии с предполагаемым стандартом.
2-летний предварительный стаж работы и наличие первой профессиональ-
ной квалификации. Также должно приниматься во внимание требование 5. Исполнение ДРУГИХ ОБЯЗАННОСТЕЙ
Нидерландов – посещение национально признанных курсов инструктажа. Способность брать на себя выполнение специфических задач в соот-
ветствии с указаниями в отсутствие прямого руководителя.
Возможные направления деятельности и обязанности
УХОД И РАЗВЕДЕНИЕ ЖИВОТНЫХ
Категория A FELASA – 3-й уровень
1. Ответственность за рутинный уход за животными и поддержание
режима в прикрепленных помещениях для экспериментальных, Дальнейшее углубление знаний и опыта, а также освоение навыков
разводимых и других животных в конвенциональной, свободной от руководства и управления формируют основу обязанностей специалиста
определенных патогенных организмов (SPF) и барьерной зонах, изо- этого уровня.
ляторах из эластичной пленки, карантинных отделах и других систе- Персонал, переходящий на этот уровень, должен иметь 3-летний
мах содержания/изоляции. стаж работы на предыдущих уровнях (т.е. всего 5 лет) и получить допол-
2. Компетентное обращение, фиксация и определение пола (включая нительную профессиональную квалификацию.
определение возраста на основании физических характеристик) у ла-
бораторных животных традиционных и редко используемых видов. Возможные направления деятельности и обязанности
3. Ежедневное содержание колоний разводки неинбредных и генетиче- 1. Организация рутинной работы по уходу за животными и их разведе-
ски определенных животных, включая: формирование под непосред- нию и руководство ею.
ственным руководством групп/линий разводки, отъем молодняка, 2. Планирование ежедневных рутинных процедур и составление гра-
ведение протоколов (компьютерных или письменных) разведения и фика работы персонала.
подготовка данных по ходу разведения животных. 3. Координация ресурсов для обеспечения потребностей.
4. Квалифицированное выполнение разнообразных методов эвтаназии 4. Участие в управлении бюджетом подразделения.
животных различных видов в соответствии с установленными про- 5. Заказ животных, оборудования и других материалов.
цедурами и/или требованиями закона. 6. Управление колониями разводки животных, включая программы их
воспроизводства.
ОТВЕТСТВЕННОСТЬ ЗА ВЫПОЛНЯЕМУЮ РАБОТУ 7. Организация отправки, транспортировки, получения животных.
1. Получение и выдача животных Знание национальных и международных требований к благососто-
Получение, контроль и размещение поступающих животных (выра- янию животных.
щенных на месте и полученных из коммерческих источников), выдача
8. Рекомендации исследователям по обеспечению животными и разме-
животных, ведение определенной документации и системы записей.
щению средств в соответствии с научными требованиями. Помощь
2. Содействие при выполнении экспериментальных процедур
в исследовательских проектах. Контроль за соответствием законода-
Послеоперационный уход за экспериментальными животными;
тельству.
помощь исследователям в обращении с животными и их фиксации; со-
9. Руководство процедурами мониторинга среды и микробиологиче-
держание животных по специфическим экспериментальным проектам,
ского мониторинга, включая программы наблюдения за здоровьем
включая запись наблюдений, например за массой животного.
животных.
3. АУТОПСИЯ 10. Содействие в обучении и профессиональном росте персонала.
Участие в проведении аутопсии, например для экспериментальных 11. Ответственность за дополнительные обязанности в соответствии с
целей, осуществления программ наблюдения за здоровьем животных. указаниями в отсутствие прямого руководителя.
48 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 49

12. Вклад в благосостояние животных (т.е. усовершенствование техно- ных животных, и умение выбирать подходящий метод, основыва-
логий). ясь на физических показателях, поведенческих и индивидуальных
13. Подготовка отчетов и т.д., требующих некоторых знаний статистики. признаках животных соответствующих видов.
Демонстрация на лабораторных животных наиболее распростанен-
Категория A FELASA – 4-й уровень ных видов (крыса, мышь, морская свинка, хомяк, кролик):
Персонал этого уровня – старшие руководители с определенными умение брать и держать животное, используя наиболее безопасный и
навыками в управлении и руководстве виварием. Этот высокий уровень приемлемый способ как для животного, так и для сотрудника;
вместе с теоретическими и практическими знаниями в области науки о умение квалифицированно извлекать животное из клеток различного
лабораторных животных, требующимися для выполнения таких функ- типа и помещать его обратно.
ций, может распространяться на категорию D FELASA, дающую опреде- Уход и разведение
ление специалиста по лабораторным животным. Требуемые знания:
Персонал может повышать свою квалификацию в области науки о необходимость рутинных процедур при уходе за животными в соот-
лабораторных животных по общим или специальным направлениям. ветствии с их биологическими и поведенческими потребностями;
соответствующие программы содержания лабораторных животных
Возможные направления деятельности и обязанности
наиболее распространенных видов, таких как крыса, мышь, морская
1. Координация ресурсов для обеспечения нужд подразделения, в том
свинка, хомяк, кролик;
числе организационных.
специальные требования к уходу, например, за разводимыми, экспе-
2. Введение, установление и реализация правил и процедур, применяе-
риментальными животными;
мых в подразделении, а также теми, кто пользуется услугами подраз- основные питательные компоненты диет для животных и их подача,
деления. в частности, необходимость специальной диеты для животных неко-
3. Осуществление финансового контроля за бюджетом подразделения. торых видов или разводимых животных;
4. Руководство персоналом всех уровней по уходу за животными. соответствующие режимы питания, способы обеспечения пищей;
5. Организация программ обучения и профессионального роста для потребность в постоянном источнике воды, соответствующие спо-
персонала, ухаживающего за животными. собы ее подачи;
6. Прием персонала на работу. цель размещения животных в клетках, признаки хорошего дизайна
7. Сотрудничество с научным персоналом с целью обеспечения ресур- клеток в соответствии с видом животного и целью, с которой оно со-
сами исследовательских программ. держится;
8. Участие в разработке и проведении экспериментов. необходимость обеспечения животных подходящим подстилочным
9. Осуществление в случае необходимости связи с вышестоящим руко- и гнездовым материалом, а также умение выбрать соответствующий
водством. материал;
10. Планирование новых вивариев либо усовершенствование существу- понятие обогащения среды обитания в свете благосостояния живот-
ющих зданий или площадей. ных, решающие факторы режима ухода за животными и их содержа-
ния.
Программа обучения для категории А, 1-й уровень
Рутинные процедуры в виварии
ПРЕДПОЛАГАЕМЫЕ ОСНОВНЫЕ ТЕМЫ Требуемые знания:
Обращение с животными необходимость регулярной уборки помещений для животных и вспо-
Требуемые знания: могательных площадей, а также соблюдение определенного режима
причины и важность правильного обращения с животными; уборки в учреждении;
многообразие методов, используемых для безопасного и компетен- правила использования и безопасного обращения с оборудованием
тного обращения с наиболее распространенными видами лаборатор- для мойки и стерилизации;
50 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 51

необходимость контроля микробиологических и других условий выбор соответствующих способов фиксации, связанных как с ухо-
окружающей среды и их регистрация; дом за животными, так и с научными процедурами на животных.
необходимость личной гигиены и соблюдение определенных правил
Разведение
в работе и процедур для защиты персонала и животных.
Требуемые знания:
Контроль за здоровьем животных биология репродуктивной системы лабораторных животных широко
Требуемые знания: используемых видов;
необходимость и важность контроля за здоровьем, признаки (как об- системы разведения общего пользования, практические соображе-
щие, так и специфические для соответствующих видов животных), ния по внедрению и поддержанию таких программ;
которые могут указывать на отклонения от нормы, и действия, кото- мониторинг разведения, ведение записей, критерии отбора племен-
рые необходимо предпринять. ных стоков;
применение генетических принципов в получении генетически
Эвтаназия
определенных линий, определение генетических линий, соответ-
Требуемые знания:
ствующие программы разведения.
причины для проведения эвтаназии и ее дефиниция;
наиболее широко используемые методы, в частности, ингаляция уг- Эвтаназия
лекислого газа; Требуемые знания:
факторы, учитываемые при выборе подходящего метода. методы эвтаназии лабораторных животных определенных видов;
законодательные ограничения или рекомендации по использованию
Законодательство и биоэтика
данных методов; факторы, влияющие на выбор метода; констатация
Осведомленность о национальных и европейских законах, конт-
смерти.
ролирующих использование животных в научных целях, и связанных с
этим этических аспектах. Питание
Требуемые знания:
Программа обучения для категории А, 2-й уровень возможности удовлетворения требований к питанию лабораторных
животных, типы и состав диет;
ПРЕДПОЛАГАЕМЫЕ ОСНОВНЫЕ ТЕМЫ
факторы, влияющие на выбор диет, и практика кормления; эффект
Содержание и уход
специальной обработки питательного состава, например облучения.
Требуемые знания:
биологические потребности лабораторных животных в отношении Мониторинг, ведение записей и отчет о состоянии здоровья
практики ухода и содержания; Требуемые знания:
стандарты по уходу и содержанию лабораторных животных с учетом общие проблемы заболеваний лабораторных животных определен-
их согласованности с национальными и европейскими правилами и ных видов, выявление признаков заболевания, зоонозы;
практическими руководствами; важность профилактики заболеваний и контроля, роль микробио-
концепция барьерной системы; рабочая практика поддержания це- логического тестирования, реализация программ поддержания здо-
лостности барьера при работе с животными с определенным микро- ровья.
биологическим статусом, неизвестным статусом здоровья и с живот-
Безопасность
ными, экспериментально инфицированным потенциально опасным
Требуемые знания:
материалом; содержание животных в изоляторах.
необходимость безопасной рабочей практики, применение местных
Обращение протоколов и национального законодательства для контроля здо-
Демонстрация знаний и компетентности: ровья и безопасности на рабочем месте;
обращение с лабораторными животными разнообразных видов; меры против биологических, химических и других факторов риска;
определение их возраста и пола различными методами; техника безопасности при эксплуатации оборудования и использо-
52 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 53

вании других материалов; соблюдение личной гигиены; аллергия на Разведение


лабораторных животных. Требуемые знания:
Законодательство управление колониями разводки животных, получение и поддержа-
Демонстрация: ние генетически определенных линий и аутбредных стоков, проце-
детальные практические знания национального и европейского за- дуры генетического мониторинга.
конодательства, контролирующего использование животных в науч-
ных целях; знание других соответствующих законодательств, нацио- Питание
нальных и международных практических руководств. Требуемые знания:
Требуемые знания: разработка практических и теоретических аспектов требований к
применение этических принципов при использовании животных в питанию лабораторных животных; составление и обеспечение спе-
научных целях; циальными диетами; варьирование состава диет; обеспечение тести-
использование альтернативных методов. рования качества; факторы, влияющие на хранение и использование
Экспериментальные процедуры кормов.
Требуемые знания:
Уход / содержание животных
общие пути введения веществ экспериментальным животным; фак-
торы, влияющие на выбор способа введения; подготовка дозирован- Требуемые знания:
ного материала; дозы и частота введения; содержание, уход и разведение лабораторных животных наиболее
методы удаления и сбора жидкостей из организма; факторы, влия- редких видов, например рептилий, амфибий.
ющие на выбор метода; объемы и частота сбора образцов;
до- и послеоперационный уход; роль и ответственность персонала, Мониторинг среды
занятого этим; соответствующие линии коммуникаций; Требуемые знания:
принципы анестезии и анальгезии; признаки боли, дискомфорта и управление микро- и макросредой, контролирующее и регистриру-
дистресса у животных соответствующих видов. ющее оборудование, интерпретация результатов, обеспечение резер-
вных систем.
Программа обучения для категории А, 3-й уровень
Профилактика болезней и контроль
ПРЕДПОЛАГАЕМЫЕ ОСНОВНЫЕ ТЕМЫ
Управление виварием Требуемые знания:
Требуемые знания: поведенческие и клинические признаки заболеваний;
управление учреждением, эффективное использование ресурсов, патология распространенных заболеваний лабораторных животных;
управление бюджетом, производственные отношения в отделе и вне профилактика заболеваний, контроль и лечение; влияние заболева-
его, реализация процедур и правил для эффективной и безопасной ния и медикаментов на интерпретацию результатов экспериментов,
работы вивария, подготовка отчетов, использование компьютерных процесс разведения животных и т.д.; эффекты субклинических за-
программ управления; болеваний;
принципы управления персоналом; контроль за работой персонала, микробиологические процедуры, связанные с программами скри-
дисциплина, мотивация, развитие и назначение; прием на работу и нинга; интерпретация результатов; факторы, влияющие на приня-
интервьюирование; обучение и образование; постановка производ- тые действия; схемы мониторинга здоровья.
ственных задач.
Планирование вивария Законодательство
Требуемые знания: Практические знания:
роль дизайна, планирование и дизайн вивария в соответствии с оп- национальные и международные акты, распоряжения, директивы,
ределенными целями, соответствие законодательным требованиям, программы и кодексы, непосредственно относящиеся к управлению
обеспечение сервиса, финансовый контроль. виварием.
54 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 55

Транспортировка по образованию и обучению лиц категории В, которые отвечают за про-


Практические знания: ведение экспериментальных и других научных процедур на живых жи-
национальные и международные требования и документация; ис- вотных.
пользование официально признанных агентов, вопросы благососто- Обязанности специалиста категории В
яния животных. Специалист категории В должен:
Анестезия и анальгезия 1) знать европейские и национальные законы, касающиеся проведения
Требуемые знания: экспериментальных и других научных процедур на животных;
принципы проведения анестезии, выбор и введение анестетиков, 2) знать и соблюдать принятые в обществе этические нормы, касающи-
видовая специфичность, оборудование для анестезии и контроля за еся исследований на животных;
ее ходом; 3) понимать и учитывать общие правила, действующие в виварии, где
премедикация, мониторинг и поддержание анестезии, осложнения, проводятся процедуры;
уход после анестезии. 4) понимать теоретическую основу поставленных задач с тем, чтобы
Хирургия сохранить здоровье животного и гарантировать актуальность полу-
Требуемые знания: ченных научных данных;
принципы хирургии, асептическая техника, хирургические инстру- 5) быть компетентным в обращении с животными и владеть другими
менты и уход за ними, материалы и техника для наложения швов, техниками, которые предполагается использовать;
заживление ран; 6) уметь распознавать боль и признаки дискомфорта и оценивать со-
до- и послеоперационный уход, осложнения и восстанавливающие стояние здоровья подопытного животного;
действия, распознавание инфекций и боли и контроль за ними; 7) знать, какие следует предпринять шаги для эффективного устране-
принципы работы диагностического и контролирующего оборудо- ния неблагоприятных последствий, возникающих в ходе или после
вания, например радиографического, эндоскопического, для снятия проведения процедуры;
электрокардиограмм и электроэнцефалограмм. 8) быть хорошо информированным об использовании лабораторных
Планирование экспериментов животных и уметь принимать соответствующие меры по сведению
Требуемые знания: до минимума факторов, влияющих на проведение процедуры.
общие принципы планирования и проведения экспериментов, веде- Компетентность
ние протоколов экспериментов, статистический контроль экспери- В данном документе компетентность определяется не продолжитель-
ментов, ведение записей. ностью какого-либо особого периода обучения и образования, а скорее
Здоровье животных как способность специалиста выполнять свои обязанности. По мнению
Требуемые знания: рабочей группы, для выявления уровня достигнутой компетентности не-
практические аспекты нормального и ненормального поведения обходима ее оценка в конце периода обучения.
животных; состояния комфорта, боли и дистресса; физиологичес- На практике было выявлено, что для получения новым кандидатом
кие, иммунологические, биохимические и поведенческие аспекты основного уровня компетентности будет достаточно курса продолжи-
стресса; типы стрессоров; тельностью около 40 часов, половину которого составляют практические
роль внешней среды в поддержании здоровья животных. занятия под непосредственным наблюдением соответствующего компе-
тентного специалиста. В процесс обучения должны быть включены толь-
Рекомендации FELASA по образованнию и обучению лиц, ко те процедуры, которые по требованию лица, проходящего обучение,
проводящих эксперименты на животных (категория В) абсолютно необходимы. Содержание программ может быть изменено в
Лица, проводящие эксперименты или принимающие в них участие, соответствии с непосредственными задачами, при этом некоторые дета-
включая обязанности по надзору, должны иметь соответствующее обра- ли могут быть изъяты или добавлены. Таким образом, достижение компе-
зование и пройти надлежащее обучение. Ниже приведены рекомендации тентности может быть ограничено одним видом животных или группой
56 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 57

видов, или группой процедур. Впоследствии уровень компетентности классификация животных в соответствии с их микробиологическим
может быть повышен в процессе дополнительного обучения. статусом;
осознание важности надлежащей гигиены в вивариях лабораторных
Учебный план животных в свете предупреждения и контроля заболеваний, а также
А. Законодательство, этика и принципы 3R ее значения для экспериментальных результатов и благосостояния
Знание и понимание: животных;
1) европейских и национальных законов, касающихся использования представление о взаимосвязи между микробным заражением и здо-
животных в научных целях; ровьем животных и их влиянии на результаты экспериментов;
2) важности ответственного отношения к использованию лаборатор- информированность о требованиях к питанию животных и установ-
ных животных; ленном порядке кормления;
3) принципов 3R – снижение (Reduction), уменьшение дистресса оценка пригодности различных рецептур, типов специальных диет и
(Refinement), замена (Replacement); разных режимов питания;
4) пригодности и применяемости альтернативных и дополнительных представление о воздействии характера питания на результаты экс-
методов. периментов, включая изменения в составе диет, а также последстви-
Б. Основы биологии и содержание лабораторных видов животных ях чрезмерного и недостаточного кормления;
1. Основы биологии понятие о факторах, влияющих на выбор специальных диет и режи-
знание строения и функций основных органов и систем в объеме, мов питания;
достаточном для проведения процедуры; осознание необходимости постоянной подачи питьевой воды и раз-
знание физиологии и биохимии в объеме, достаточном для проведе- личные способы обеспечения этого процесса;
ния процедуры; осведомленность о пригодности и применяемости различных типов
знание границ физиологических параметров в норме, представление подстила и используемых для этого материалов.
о биологической вариабельности;
В. Обеспечение физиологических потребностей и уровня здоровья жи-
знание поведенческих и физиологических характеристик, относя-
вотных без ущерба научной достоверности исследования или проце-
щихся к проведению процедур;
компетентность в области разведения животных и использования дуры
соответствующих генетических методов (например, трансгенного и 1. Физиологические потребности
нокаутного методов), касающихся проведения процедур; понимание, какие факторы следует учитывать при оценке здоровья
знание о существовании циркадных ритмов и их практическом зна- животных;
чении. информированность о поведенческих и относящихся к окружающей
2. Содержание среде потребностях животных в свете их здоровья;
знание требований к параметрам окружающей среды, касающихся наблюдение и толкование особенностей поведения соответству-
систем содержания животных, а также европейских и национальных ющих видов животных;
постановлений, руководств и(или) сводов законов, регулирующих представление о путях максимального повышения здоровья соответ-
практическую деятельность; ствующих видов лабораторных животных в процессе их содержания.
представление о взаимодействии животного с окружающей средой; 2. Здоровье животных
осведомленность о путях обогащения окружающей среды, способ- оценка уровня стресса, дистресса или испытываемого животным
ствующих удовлетворению поведенческих и социальных нужд жи- страдания;
вотного; осознание важности регулярных контактов с человеком во избежа-
освоение норм и установленного порядка по уходу за животными; ние ненужного дистресса у лабораторных животных;
58 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 59

понимание необходимости максимальной стандартизации живот- демонстрация правильного забора образцов крови, фекалий и мочи;
ных как обязательного условия сокращения их количества и знание осведомленность о причинах ограничения частоты сбора образцов и
путей достижения этого в свете их здоровья; их объема;
распознавание признаков ухудшения здоровья у животных соответ- обсуждение преимуществ и недостатков этих методов;
ствующих видов. демонстрация правильных способов хранения биологических об-
3. Научная достоверность разцов.
информированность о потенциальном влиянии социального пове- 4. Эвтаназия
дения животных на научную достоверность исследования; определение эвтаназии и перечень причин для ее проведения;
понимание важности адаптации лабораторных животных к устано- характеристика наиболее часто используемых методов эвтаназии;
вившемуся режиму содержания до начала эксперимента; отбор соответствующего (их) метода(ов) в соответствии с целью и
осведомленность о важности мер, предпринимаемых в целях сведе- условиями эксперимента;
ния до минимума стресса при размещении соответствующих лабора- представление о неприемлемых методах эвтаназии;
торных видов; проведение эвтаназии и подтверждение смерти животного химиче-
информированность о влиянии комплекса факторов окружающей ским или физическим методом.
среды на биологическую вариабельность, а также отдельных живот- 5. Сбор данных
ных; составление протокола эксперимента с использованием животных;
осознание важности состояния здоровья животного с учетом науч- сбор и хранение данных в соответствии с принципами добротной ла-
ной достоверности исследования; бораторной практики [Good Laboratory Practice (GLP)].
знание преимуществ животных, адаптированных к определенным
условиям до начала экспериментальных исследований; Д. Выявление недостатков в сфере благосостояния животных и других
представление о преимуществах использования обученных экспери- усложняющих факторов
ментальных животных и путях достижения этого. 1. Оценка здоровья
наблюдение за состоянием здоровья и его оценка у используемых
Г. Обращение с животными, использование основных техник и эвтаназия видов животных;
1. Обращение и поведение представление о биологической вариабельности, присущей нор-
понимание принципов и важности корректного обращения и нор- мальным здоровым животным;
мального поведения в свете их предполагаемого применения; ознакомление с литературными источниками, содержащими физио-
выбор подходящего способа фиксации; логические данные по используемым видам животных.
отбор и использование соответствующих методов идентификации 2. Распознавание боли, страдания и дистресса
(маркировки). распознавание признаков боли, страдания и дистресса, представле-
2. Введение веществ ние о концепции гуманного умерщвления и необходимости их опре-
знание путей распределения и вывода из организма наиболее широ- деления перед процедурами;
ко используемых соединений при различных способах их введения; знание главных стресс-факторов для используемых видов живот-
введение соединений и выбор способа введения в зависимости от ных;
условий и целей эксперимента; оценка степени и понимание границы «жестокости» процедуры.
владение правильной техникой (а также распознавание известных 3. Распознавание заболевания
побочных эффектов) перорального, подкожного, внутримышечно- распознавание признаков заболевания у используемых видов живот-
го, внутрибрюшинного и внутривенного введения соединений. ных и предпринимаемые в данном случае действия;
3. Способы забора образцов мониторинг здоровья и профилактика заболеваний в зависимости от
знание методов, используемых для забора образцов крови, жидких используемых видов животных и процедуры;
сред организма, фекалий и мочи; осознание важности заболеваний, протекающих в скрытой форме.
60 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 61

Е. Анестезия, анальгезия и основные принципы хирургии Ж. Гигиена труда и безопасность


1. Методы анестезии 1. Зоонозы и опасные патогенные факторы
определение анестезии; представление о состоянии здоровья исследуемых животных, основ-
знание показаний к проведению общей и местной анестезии; ных патогенных факторах, оказывающих на них влияние, и связан-
представление об основных методах проведения общей анестезии; ном с этим риском для человека.
осведомленность о препаратах, наиболее часто используемых для 2. Опасные химические соединения
проведения анестезии, специфических показаниях и противопока- осведомленность об основных факторах риска, связанных с обраще-
заниях к их применению. нием с наиболее широко используемыми категориями газов, раство-
2. Дооперационный уход рителей, кислот, щелочей и солей, применяемыми в биомедицинс-
осознание важности дооперационного физического осмотра и зна- ких исследованиях и тестировании;
чения ограничения приема пищи; знание основных факторов риска, связанных с обращением с лекарст-
понимание важности премедикации как средства, обеспечивающего венными препаратами и другими фармакологически активными тест-
благополучие животного и более плавное введение в состояние нар- субстанциями;
коза; правильное толкование символов и предостерегающих надписей на
представление о наиболее часто используемых транквилизаторах, этикетках фармакологически активных субстанций;
антихолинергических средствах и их правильном введении; осознание потенциальной опасности неправильного смешивания
подготовка животного к хирургическому вмешательству. различных химических соединений.
3. Наркоз 3. Биологическая опасность
оценка глубины наркоза у используемых видов животных; представление о факторах риска, связанных с работой с вирусами и
осознание важности контроля за ходом анестезии, поддержание и генетически измененными организмами;
регистрация соответствующих показателей; знание факторов риска, связанных с материалами, инфицированны-
представление об осложнениях, обычно возникающих при анесте- ми микроорганизмами;
зии, и умение на них быстро реагировать; представление о факторах риска, присущих биологическим матери-
использование аппаратов для проведения анестезии; алам человеческого происхождения.
знание об основных препаратах, вводимых для выведения из наркоза. 4. Аллергии
4. Послеоперационный уход, анальгезия представление о причинах возникновения аллергии;
внимательное наблюдение за животным в послеоперационный пе- распознавание ранних признаков, указывающих на развитие аллергии.
риод, контроль дыхания, пульса, температуры, области, где было 5. Меры предосторожности и защита персонала
проведено хирургическое вмешательство, и общего состояния; знание соответствующего европейского и национального законода-
распознавание и быстрое устранение осложнений, возникающих тельства, а также местных мероприятий по гигиене труда и обеспече-
после применения анестезии; нию безопасности персонала;
представление о положительном влиянии анальгезии и введения осведомленность о программах по охране здоровья персонала, под-
анальгетиков; вергающегося химической и биологической опасности;
знание характеристик и осведомленность о продолжительности дей- знание основных принципов гигиены и асептики;
ствия наиболее широко используемых анальгетиков. правильное обращение с защитными средствами и оборудованием
5. Основные принципы асептической хирургии (вытяжными шкафами, масками и т.д.);
понимание важности поддержания стерильности в операционной и принятие необходимых мер предосторожности для максимального
проведения асептических процедур; снижения потенциального риска.
подготовка и правильное проведение стерилизации хирургических 6. Первая помощь
инструментов и тампонов, шовного и перевязочного материала. знание местных мероприятий, проводимых при несчастном случае;
62 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 63

представление о том, что может быть и что должно быть сделано до 1. Прохождение полного курса университетского образования с полу-
прибытия помощи. чением степени бакалавра или магистра (в зависимости от принятых
7. Захоронение отходов и законодательство, направленное на охрану национальных норм) или получение соответствующего образования
здоровья по одной из биомедицинских дисциплин, таких как биология жи-
знание национального законодательства, связанного с окружающей вотных, медицина или ветеринария.
средой и ее охраной; 2. Прохождение основного курса по науке о лабораторных животных
представление о местных мероприятиях по захоронению отходов;
(не менее 80 часов) целиком или по частям, либо получение равно-
классификация различных видов отходов;
ценного образования другим путем.
правильная обработка материалов до их захоронения;
знание местных мероприятий по правильному захоронению трупов Базовое образование направлено на создание основы ответственно-
животных. го отношения к использованию животных и достижение высоких науч-
Альтернативные пути достижения уровня компетентности категории В ных стандартов. Оно должно быть завершено до того, как ученый будет
Один из таких способов – прохождение отдельных курсов. В этом считаться компетентным для выполнения исследований на животных
случае сложнее структурировать представленные материалы, а обучение под свою ответственность. Дополнительные специальные знания по хи-
практическим основам должно иметь индивидуальный подход. Такие рургии, отдельным методам и различным видам животных должны быть
курсы позволяют более эффективно использовать квалифицированных получены в тесном сотрудничестве с опытными исследователями и техни-
преподавателей. ками по уходу за лабораторными животными или при посещении специ-
Другая возможность – краткосрочные курсы повышения квалифи- ализированных курсов. Лица, намеренные совершенствоваться в навыках
кации; в этом случае изучение теории сочетается с приобретением прак- и компетентном использовании с целью стать специалистами в области
тических навыков непосредственно на рабочем месте.
науки о лабораторных животных – категория D, являются объектом даль-
Повышение уровня компетентности посредством непрерывного обучения
Любые знания, полученные в процессе обучения, если только они нейших рекомендаций. Лица, имеющие категорию D, очевидно, должны
постоянно не используются и не совершенствуются, со временем уста- пройти дополнительное специальное обучение, о котором упоминалось
ревают. Должен существовать механизм, обеспечивающий поддержание выше.
компетентности на современном уровне в процессе дальнейшего соот- Лицо, претендующее на получение категории С, должно обладать
ветствующего обучения. Государственные властные структуры, отвеча- знаниями и практическим опытом в соответствии с темами, перечислен-
ющие за компетентность специалистов, должны поощрять выполнение ными в разделе «Уход и разведение животных» рекомендаций для 1-го
этой задачи. уровня категории А:
Оценка уровня компетентности 1. Чистка, кормление и поение экспериментальных, разводимых и дру-
Присуждение признанного уровня компетентности недопустимо без гих животных.
тщательной оценки кандидата. В случае категории В необходима провер- 2. Компетентность в обращении с традиционными видами лаборатор-
ка не только теоретических знаний, но, даже в большей степени, получен-
ных животных.
ных практических навыков. Дальнейшее обучение в соответствии с дан-
3. Ежедневное наблюдение и осмотр животных в соответствии с общими
ными рекомендациями FELASA и результат, оцененный как успешный,
должны подтверждаться дипломом, в котором будут подробно описаны условиями содержания (включая отметку о принятии пищи/воды).
теоретическая и практическая составляющие достигнутого уровня ком- 4. Выполнение некоторых методов эвтаназии в соответствии с деталь-
петентности и который будет пользоваться европейским признанием. но разработанными процедурами.
5. Общее содержание помещений для животных.
Категория С – лица, ответственные за руководство 6. Регистрация показателей среды в помещениях для животных и про-
экспериментами на животных цедур, проводимых в этих помещениях.
Ученые, ответственные за планирование или проведение экспери- Краткое изложение рекомендаций для категории С
ментов на животных, могут считаться компетентными специалистами Минимальное требование к персоналу категории С – образование
при соблюдении двух требований: по биомедицинской дисциплине на уровне бакалавра или магистра,
64 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 65

а также прохождение основного курса объемом не менее 80 часов 2. Биология лабораторных животных (сравнительная анатомия, фи-
или равноценного в области науки о лабораторных животных. зиология), воспроизводство и выращивание, уход и содержание, го-
В базовое обучение должно быть включено 8 основных тем (подроб- меостаз и стресс, благосостояние животных.
ное описание в приложенной программе): 3. Этология (поведение) и обогащение среды.
а) биология и содержание лабораторных животных; 4. Обращение с лабораторными животными и их транспортировка.
б) микробиология и болезни; 5. Питание, требования к питанию, состав диет, практика кормления,
в) факторы риска для здоровья и безопасность работы в виварии; вариации состава диет и их влияние на состояние здоровья и резуль-
г) планирование и проведение экспериментов на животных; таты экспериментов, влияние добавок на прием пищи, преимуще-
д) анестезия, анальгезия и экспериментальные процедуры; ства и недостатки питания ad libitum.
е) альтернативы использованию животных; 6. Генетическая стандартизация; взаимодействия генотип–среда;
ж) этические аспекты и законодательство; инбредные линии; коизогенные, конгенные линии; трансгенные
з) анализ научной литературы. линии; рекомбинантные инбредные линии; гибриды F1, рандомб-
Лица, прошедшие курс обучения, по его окончании должны быть редные линии и аутбредные стоки; генетическая характеристика;
проверены в равноценных условиях, разработанных для других ви- контроль генетического качества; криоконсервация.
дов обучения. 7. Распознавание, оценка и контроль боли, страданий и дистресса.
Соответствующим ведомствам Европейского Союза и Совета Евро-
Б. Микробиология и болезни
пы рекомендуется разработать директивы в согласии с настоящими
1. Мониторинг здоровья и защита от болезней, карантин, гигиена, де-
рекомендациями, обсудить вопрос о формировании комиссии экс-
зинфекция.
пертов для контроля над курсами в странах-участницах и обеспече-
2. Гнотобиология; животные, свободные от определенных патогенных
ния аккредитации данных курсов в случае необходимости. FELASA
организмов (SPF); безмикробные животные; барьерное содержание;
предлагает свою помощь в этой работе, что должно стать вкладом в
изоляторы; системы ламинарных потоков.
гармонизацию, обучение и признание понятия «компетентное лицо»
3. Болезни лабораторных животных, взаимосвязь заболеваний с экспе-
в соответствии с формулировкой Директивы Европейского Союза и
риментами, последствия употребления лекарств.
Европейской конвенции.
4. Безопасность в работе с инфицированными животными.
FELASA планирует привлечение и обучение квалифицированных
инструкторов в области науки о лабораторных животных, составле- В. Факторы риска здоровья и безопасность работы в виварии
ние реестра экспертов, и может обращаться за поддержкой в данной 1. Аллергия, зоонозы, патогенные организмы, карциногены, радиоак-
работе в ЕС и СЕ. тивные материалы, физические факторы риска и т.д.
Так как существует необходимость в учебном материале, FELASA
хотела бы стимулировать и руководить подготовкой учебников, баз Г. Планирование и проведение экспериментов на животных
данных, видеофильмов и других визуальных материалов, а также со- 1. Подготовка протокола эксперимента на животных; поиск литерату-
бирать информацию по существующим курсам. ры; выбор экспериментального животного (вид, линия, генетичес-
кий статус, микробиологический статус); обеспечение животными и
влияние транспортировки.
Программа обучения для категории С
2. Модели на животных (спонтанные, индуцированные); возможности
ПРЕДЛАГАЕМЫЕ ОСНОВНЫЕ ТЕМЫ и ограничения экспериментов на лабораторных животных; экстра-
А. Биология и содержание лабораторных животных поляция на людей результатов экспериментов, проведенных на жи-
1. Введение в науку о лабораторных животных, использование живот- вотных.
ных в различных областях исследований, история экспериментов на 3. Планирование эксперимента (например, на основе факториально-
животных. го анализа по схеме латинского квадрата), power-анализ для вычис-
66 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 67

ления количества животных в контрольной и экспериментальной Директивы FELASA по образованию специалистов в области
группах, статистический анализ и интерпретация результатов. науки о лабораторных животных (категория D)
4. Надежная лабораторная практика (GLP). FELASA определяет категорию D как руководство лабораторией и
специализацию более высокого уровня, как лица, чья квалификация и
Д. Анестезия, анальгезия и экспериментальные процедуры
опыт позволяют выполнять по крайней мере следующие обязанности:
1. Ознакомление с методами анестезии, анестетики и анальгетики,
1) управлять всеми животными, человеческими и физическими ресур-
местные анальгетики и общие анестетики.
сами учреждения, где содержатся лабораторные животные;
2. Выбор анестетика в зависимости от вида животного и характера экс-
2) создавать условия для здоровья и благосостояния животных;
перимента, видоспецифичные вариации при введении анестетиков, 3) оказывать в случае необходимости помощь и содействие исследова-
влияние анестетиков на результаты экспериментов. телям, работающим с лабораторными животными, а также обеспечи-
3. Осложнения и уход за животными после эксперимента, безопас- вать практическую поддержку научно-исследовательских программ;
ность и предосторожности. 4) обеспечивать соответствие деятельности всем законам, правилам и
4. Экспериментальные процедуры – демонстрация и практика; нехи- директивам, касающимся разведения, содержания и использования
рургические процедуры, такие как инъекции, оральное введение, лабораторных животных, а также управления виварием;
забор крови, мочи или кала; принципы хирургии, хирургический 5) нести ответственность за разработку и представление образователь-
инструментарий, асептические методы, демонстрация некоторых ных программ для внутреннего и внешнего пользования по гуманно-
хирургических процедур. му содержанию и использованию лабораторных животных, продол-
жающих развитие концепции 3R [Russel & Burch, 1959];
Е. Альтернативы использованию животных 6) содействовать дальнейшему развитию нововведенных концепций
1. Определение альтернатив; усовершенствование, замена или сокра- гуманного содержания и использования лабораторных животных,
щение использования животных; обзор альтернатив; возможности и включая проводимые исследования в области науки о лабораторных
ограничения альтернатив; альтернативы в обучении и исследованиях. животных.
Уровень обучения
Ж. Этические аспекты и законодательство Образование и обучение специалистов в области науки о лаборатор-
1. Отношение к животным, взаимоотношения человек–животное, ис- ных животных должно предлагаться в виде последипломного обучения.
тинная и инструментальная ценность животных, аргументы «за» и Специфические требования
«против» использования животных в научных целях, дискуссия по Основным требованием для получения дальнейшего образования в
этическим аспектам использования животных, комиссии по этике. области науки о лабораторных животных должно быть наличие степени
2. Законодательные аспекты; обзор национального и европейского за- по биомедицинским или ветеринарным наукам или другой сертифици-
конодательства, касающегося использования животных в научных це- рованной эквивалентной квалификации. Предполагается, что кандидат
лях; лицензирование; компетентные лица; инспекция; регистрация. еще до начала курса обучения будет иметь соответствующий опыт в об-
ласти науки о лабораторных животных.
3. Анализ научной литературы Свидетельство об успешном окончании курса может быть получено
1. Анализ опубликованных работ; тщательная проверка выбора вида только после сдачи экзамена или подтверждения квалификации в дру-
или линии животного, количества и спецификации используемых гом виде. Заключительная оценка или экзамен будут свидетельствовать о
животных; планирование эксперимента, хирургических или других способности кандидата проводить научно-исследовательскую работу.
экспериментальных процедур; обсуждение целесообразности пред- Примером такой оценки может быть:
ставляемой работы. 1) публикация научной статьи в качестве главного автора на основе
Курс завершается экзаменом или подтверждением квалификации в дру- именно оригинального научного исследования (не истории болезни)
гой форме. в одном из рецензируемых журналов;
68 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 69

2) подготовленный определенным образом отчет в виде описания не- ставка лабораторных животных и источники их получения; положе-
скольких историй болезни; ния, регулирующие практическую деятельность
3) разработка небольшого научно-исследовательского проекта и де- руководство учреждением в рамках юридических норм;
монстрация использования научного метода (выполнение данного д) надзор со стороны органов управления и комиссии по этике
проекта в учреждении, имеющем непосредственное отношение к осуществление юридического и этического надзора за вивариями и экс-
науке по лабораторным животным, не является обязательным усло- периментами на животных;
вием). е) альтернативы экспериментам на животных, выбор вида животных и
их количества в группе (юридические аспекты)
Учебный план наличие у специалистов хороших практических знаний и понимание воз-
можностей и ограничений применения альтернативных методов
Последипломное образование в области науки о лабораторных жи- проведение научной экспертизы аспектов, касающихся планирования
вотных длится от одного года до четырех лет (см. таблицу). Данная рабо- исследований на животных.
чая группа рекомендует двухгодичное последипломное образование при 2. Благосостояние
обучении, занимающем полный рабочий день, или эквивалентное с час- а) филогенетические, генетические и онтогенетические аспекты пове-
тичной занятостью, предусматривающее рассмотрение всех тем и требо- дения
ваний категории D. Оно должно включать шесть месяцев на подготовку понимание фундаментальных процессов, лежащих в основе поведения;
научно-исследовательского проекта. Каждый из разделов от А до 3 дол- б) изучение, коммуникация, социальная организация и взаимодей-
жен преподаваться в аккредитованных учреждениях и контролироваться ствие с окружающей средой
назначенным экспертом. В зависимости от имеющейся подтвержденной получение знаний, необходимых для оценки встречающегося неадапти-
квалификации, образования или опыта может быть получено освобожде- рованного поведения и возможных его причин;
ние от части курса. в) этологические параметры как индикаторы основных требований к
окружающей среде, обогащение окружающей среды и контроль экс-
Подробный учебный план периментальных переменных
А. Законодательство, благосостояние и этические аспекты развитие профессионализма и знаний, позволяющих принимать соот-
1. Законодательство ветствующие корректирующие меры;
а) обзор международного законодательства и норм, касающихся ис- Т абл ица 2
пользования животных ОБУЧЕНИЕ В ОБЛАСТИ НАУКИ О ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (LABORATORY ANIMAL
SCIENCE – LAS) В ЕВРОПЕЙСКИХ СТРАНАХ, ВКЛЮЧАЮЩЕЕ ТРЕБОВАНИЯ ДЛЯ КАТЕГОРИИ D
общее представление о данном предмете, поддержка важных действу-
ющих практик, например Конвенции по международной торговле исче- Продолжи-
Учреждения, имеющие Основное образо- Степень/специаль-
зающими видами растений и животных (CITES), надлежащей лабора- программы обучения вание
тельность
ность в LAS
торной практики (GLP), обеспечение исторической перспективы; обучения
б) европейские законы (Европейская конвенция по защите позвоноч- A. Diploma in Scienza
А. Ветерина- e medicina dell’animale
ных животных, используемых в экспериментальных и других науч- А. Ветеринарное
рия/3 года da faboratorio (диплом
ных целях от 1986 г. и Директива Совета Европы 86/609) Факультет ветеринарной по LAS и медицине)
медицины, Миланский
содействие проведению дискуссий и консультаций по данному вопросу с университет, Италия Б. Другое биомеди-
Б. Diploma in Scienza
учеными из других стран; Б. Биомеди- dell’animale da
цинское (исследова-
цина/2 года laboratorio (диплом
в) национальное законодательство тель)
по LAS)
обеспечение соблюдения учеными законов; А. Ветеринарное Medicine Veterinaire
г) процедуры регистрации и выдачи лицензий; компетентные лица; Факультет ветеринарной Б. Другое Experimentale (экспе-
2 года
должностные лица, занимающиеся вопросами благосостояния жи- медицины Льежа, Бельгия биомедицинское (ис- риментальная вете-
следователь) ринарная медицина)
вотных; виварии; минимальная площадь пола в клетках и т.п.; по-
70 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 71

A. Fachtierarzt für приобретение навыков по установлению и диагностике нормального и


А. Ветеринарное А. 3 года
Versuchs-tierkunde измененного поведения;
(специалист-ветери- д) гомеостаз, способность к адаптации и ее ограничения, стресс и дис-
Несколько институтов/уни- нар в области LAS)
верситетов, имеющих со- тресс
A. Fachtierarzt für
ответствующие отделения/ понимание процессов, лежащих в основе стресса, его устранения и дис-
Tierschutz (специа-
виварии для проведения Б. Ветеринарное Б. 2 года
исследований в области
лист-ветеринар по тресса;
охране животных) е) патология поведения, здоровье
науки о лабораторных жи-
вотных, Германия Б. Ветеринарное, B. Fachwissenschafler осознание того, что здоровье - это нечто большее, чем просто отсут-
зоологическое и био- für Versuchstierkunde
медицинское (иссле-
В. 4 года
(научный специалист ствие болезни, боли и дистресса; проблемы при оценке состояния здо-
дователь) в области LAS) ровья;
А. Королевский колледж А. Ветеринарное,
A. Certificate in LAS
ж) распознавание и оценка стресса и дистресса
ветеринарной хирургии, 2 года работы в об- А. 1 год получение знаний, позволяющих производить оценку случаев возникно-
(сертификат по LAS)
Соединенное Королевство ласти LAS
вения стресса и дистресса;
Б. Королевский колледж Б. Ветеринарное,
ветеринарной хирургии. 5 лет работы в обла- 1 год
B. Diploma in LAS з) контроль стресса и дистресса
(диплом по LAS) развитие профессионализма и знаний, позволяющих принимать соот-
Соединенное Королевство сти LAS
Laboratory Animal ветствующие меры
Specialist Recognized 3. Этические аспекты проведения экспериментов на животных
А. Ветеринарное
Факультет ветеринарной by the government
медицины
Б. Другое биомеди-
1 год (специалист по лабо-
а) взаимоотношения между человеком и животными, исторические
цинское (исследова- корни и религиозные аспекты, служащие примером развития биб-
Утрехт, Нидерланды раторным животным,
тель)
сертифицированный лейских и греческих традиций; современные концепции – специсизм
правительством) (безразличие к страданиям животных), эгалитаризм, права животных;
А. Департамент сравни- антропо- и биоцентрический подходы
А. Общее биомеди- A. MSc (Medicine)
тельной медицины, Универ- А. 2 года
цинское (магистр медицины) понимание различных основных этических позиций и их исторических
ситет Уппсалы, Швеция
Б. Виварий лабораторных корней
животных, Норвежский
Б. Ветеринарное Б. 3 года В.. MSc (магистр)
закладка основы для вдумчивого исследования моральных ценностей, не-
колледж ветеринарной взирая на личные моральные принципы
медицины, Норвегия
поощрение чувства ответственности;
А. Ветеринарное и
другое биомедицин- б) внутренние ценности и моральные аспекты использования живот-
Национальная ветеринар- ных
ское с опытом иссле- 1 год
ная школа, Франция
довательской работы формирование личной этической позиции;
в области LAS
в) этический диалог и этическая аргументация, ловушки в аргументации,
Ветеринарные факультеты
в Берне и Цюрихе, а также
Spezialtierarzt für этика общения
Labortierkunde (дип- развитие навыков моральной аргументации и правильного отношения к
сертифицированные ком-
Ветеринарное 4 года лом по LAS Швейцар-
мерческие научно-иссле-
ской ветеринарной
использованию животных;
довательские институты, г) различия в философских и научных взглядах на происхождение жиз-
ассоциации)
Швейцария
ни (библейская версия сотворения мира в сравнении с концепцией
эволюции) и проблема взаимопонимания философов и ученых; кон-
фликт между этическими принципами благоговения перед жизнью и
г) поведенческие характеристики интактных и экспериментальных
использования человеком животных в целях самосохранения
животных (экспериментальный стресс, спонтанные и индуцирован- эффективное влияние на политические решения и регулирующие дея-
ные мутации) тельность законы
72 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 73

создание основы для проведения дискуссий в этических комиссиях; выполнение данных положений и оценка результатов политики и дея-
д) модели этической аргументации и этического оправдания научно-ис- тельности учреждения.
следовательских проектов; этические принципы и руководства, каса- 5. Компьютеризированные системы управления
ющиеся проведения научных экспериментов на животных а) содержание животных и информационная система
убедительное отстаивание своей позиции при контактах с обществен- содействие при заказе животных, проведение инвентаризации, хране-
ностью и средствами массовой информации. ние записей о состоянии здоровья животных и их истории, контроль
Б. Управление виварием и его ресурсами качества и программы разведения;
1. Направление рабочих программ б) инвентаризация
а) развитие программ и практических руководств обеспечение эффективного снабжения и использования оборудования и
соответствие требованиям высокого качества содержания лабора- материалов;
торных животных, их биологическим и другим потребностям; в) производственная бухгалтерия
б) развитие структуры персонала учет окупаемости использования животных, сооружений и оборудова-
создание условий для выполнения всех административных, управленче- ния; развитие основ сдерживания роста издержек;
ских и технических функций; г) контроль факторов окружающей среды
в) осуществление проверки обеспечение их соответствия директивам, правилам и требованиям,
создание условий для регулярной оценки деятельности и ее проверки по касающимся благосостояния животных;
мере необходимости. д) системы, обеспечивающие соответствие использования животных
2. Прием персонала требованиям законодательства
а) стандарты, касающиеся квалификации и опыта контроль за легальным использованием животных и сбор статистиче-
определение различных категорий труда; ских данных по их использованию.
б) развитие трудовой иерархии 6. Создание условий для обучения персонала
организация работы персонала и его взаимодействие, описание трудо- а) разработка и реализация программ
вых обязанностей и целей управления, а также обеспечение программ поддержка эффективной работы администрации, руководящего и тех-
профессионального роста; нического персонала
в) критерии и рассмотрение эффективности труда персонала 7. Связи
обратная связь с персоналом и внедрение программ повышения произво- а) внутренние связи
дительности. обеспечение на должном уровне сервиса, руководство учреждением, хо-
3. Финансовый контроль рошая осведомленность и понимание внутренних проблем;
а) обеспечение бюджета б) внешние связи
обеспечение достаточного распределения по отдельным статьям, орга- обеспечение хорошего понимания обществом потребностей учрежде-
низация процесса своевременной фиксации индивидуальных расходов; ния, например формирование в обществе положительного восприятия
б) политика закупок организации; совершенствование внутренней деятельности на основе
процедуры по проведению переговоров с поставщиками с целью заключе- новой научной и коммерческой информации;
ния договора о наиболее выгодных ценах; в) связи с общественностью
в) оценка стоимости животных овладение навыками общения с широкой общественностью по таким
включение закупочной цены, расходов на содержание и персонал, наклад- вопросам, как цели, методы и положительные результаты научных ис-
ных расходов как необходимых для полного или частичного отчета. следований.
4. Стратегическое руководство 8. Сотрудничество с научным персоналом
а) стратегия планирования а) обеспечение ресурсами
определение будущих потребностей и направления деятельности; поддержка научных исследований и проведения экспериментальной ра-
б) влияние на политику и директивы учреждения боты, организация правильного ухода за животными, экспертизы, со-
74 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 75

здание условий для оказания помощи в ходе эксперимента и обучения В. Биология лабораторных животных
манипуляциям с животными; 1. Анатомия млекопитающих и других видов животных
б) проведение научных исследований а) общая анатомия
в сотрудничестве с другими учеными описание строения и функций основных органов и систем наиболее час-
индивидуальная работа в какой-либо области науки о лабораторных то используемых видов животных;
животных и их благосостояния (см. также «Специфические требова- б) сравнительная анатомия
ния» и «Учебный план»). выбор наиболее подходящей модели на животных с точки зрения меж-
9. Эксплуатация вивария видовой экстраполяции данных.
а) надлежащая гигиена в виварии 2. Физиология млекопитающих и других видов животных
включение всех процедур, поддерживающих те функции, которые каса- а) общая физиология
ются удовлетворения биологических и других нужд животных, а так- знание механизмов и физических / химических принципов, лежащих в
же процедур, отвечающих требованиям персонала, осуществляющего основе жизненно важных процессов;
уход за животными, исследователей и руководства; б) сравнительная физиология
б) хранение материалов и оборудования выбор наиболее подходящей модели на животных.
обеспечение целесообразного и регулярного снабжения и распределения; 3. Иммунология
в) контроль и захоронение отходов а) общие принципы
осуществление в соответствии с инструкциями; знание клеточных и биохимических компонентов иммунного ответа;
г) мониторинг и хранение записей б) животные с иммунодефицитом
обеспечение эффективного проведения всех операций. характеристика наиболее используемых линий и видов.
10. Проектирование вивария 4. Сравнительная клиническая патология
а) состав и деятельность конструкторской группы а) преданалитические факторы
работа с архитекторами, инженерами, топографами и геодезиста- влияние забора образцов, обращения и хранения на результаты анализа;
ми, консультантами по эксплуатации, представителями финансовых б) аналитическое оборудование и инструменты
структур, администрацией и заказчиком; выбор и подготовка наиболее подходящего лабораторного оборудования;
б) рассмотрение вопроса о местоположении и размещении вивария в) наиболее важные гематологические параметры; показатели коагуля-
учет характеристик окружающей среды, влияния внешних факторов и ции, агрегации, химический состав крови и анализ мочи
взаимодействия с другими участками внутри данной структуры; выбор наиболее подходящих для контроля анализов;
в) соображения, касающиеся животных г) границы нормы: определение показателей нормы для различных видов
учет таких аспектов, как виды и количество животных, их разведение животных и их колебания в зависимости от возраста, пола и линии
и(или) закупка, содержание животных и(или) проведение эксперимен- интерпретация аналитических данных и выбор наиболее подходящей
тов, микробиологический статус животных и методы их содержания; модели на животных;
г) соображения, касающиеся сооружения д) программы контроля качества
основной принцип и тип конструкции; стоимость; детальное планиро- обеспечение качества аналитических процедур и результатов.
вание и спецификация помещений вивария, вспомогательных структур 5. Посмертное обследование
и их функций; взаимосвязь между виварием и вспомогательными струк- а) вскрытие трупа
турами; транспортное обеспечение; обслуживание; окружающая среда владение наиболее подходящими методами проведения аутопсии;
и ее контроль; программы содержания животных. б) макроскопическая патология
11. Здоровье и безопасность распознавание наиболее важных макроскопических изменений в органах
а) законы, инструкции и правила и тканях;
обеспечение безопасности проводимых в виварии операций и их легаль- в) изъятие и фиксация органов
ного разрешения, охрана здоровья персонала. надлежащее обращение с образцами до их дальнейшего изучения;
76 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 77

г) гистопатология и гистохимия основания для вариаций и связанные с этим проблемы;


знание наиболее важных этапов и методов, используемых в гистопато- д) специальные диеты
логии и гистохимии. потребности в различные периоды жизни (отъемыши, молодые и ста-
6. Различные аспекты сравнения с человеком рые животные) и для достижения определенных научно-исследователь-
а) адсорбция, распределение, метаболизм, экскреция (adsorption, ских целей;
distribution, metabolism, excretion – ADME) и биологическая доступ- е) влияние копро- и цекофагии
ность экзогенных соединений понимание биологического влияния и связанных с этим проблем;
выбор модели на животных, наиболее подходящей для испытания опре- ж) влияние диеты на результаты эксперимента
деленных классов соединений; влияние избыточного и недостаточного кормления, состава диеты, а
б) моделирование на животных патологических состояний человека также социальной депривации;
знание наиболее важных спонтанных и индуцированных моделей заболе- з) контаминанты и их контроль
ваний человека;
обнаружение и контроль химического загрязнения и заражения микро-
в) экстраполяция на человека данных, полученных на животных
организмами и паразитами;
понимание значимости экспериментальных результатов для здоровья
и) влияние методов стерилизации
человека.
сравнение преимуществ и недостатков термической, химической обра-
Г. Содержание, разведение и генетика ботки, облучения и использования этиленоксида;
1. Содержание к) храение и контроль качества
а) системы размещения животных регулирование и регистрация температуры, влажности и вентиляции
обеспечение оптимальных условий и оборудования для содержания жи- при хранении кормов; важность химического анализа.
вотных; 4. Подача воды
б) обогащение окружающей среды а) бутылки и устройства для автоматической подачи воды
ее соответствие поведенческим и социальным потребностям. определение преимуществ и недостатков использования различных сис-
2. Микро- и макросреда
тем;
а) температура, относительная влажность, вентиляция, относительное
б) рН, жесткость, микробиологические и химические примеси
давление воздуха и его фильтрация, освещение, шум и другие конт-
определение влияния на здоровье и результаты научных исследований;
ролируемые факторы окружающей среды
понимание и практическое знание данных параметров и их контроль, в) обработка и стерилизация
поддержание факторов окружающей среды в режиме максимального определение эффективности и стоимости;
соответствия потребностям животных и персонала, а также приня- г) лишение воды
тым нормам. осведомленность об этологии, необходимости обеспечения водой, объ-
3. Питание и кормление еме потребления и влиянии на здоровье.
а) составление диет 5. Подстил
влияние различных параметров корма и аспектов кормления на живот- а) типы подстила
ных и научное исследование; знание оптимальных требований, преимуществ и недостатков различ-
б) источники энергии, волокна, витамины, минеральные вещества и др. ных типов;
определение потребностей организма в данных составляющих и соот- б) загрязнители
ветствие им; осведомленность о влиянии на здоровье и результатах экспериментов;
в) режимы кормления в) обработка, стерилизация и хранение
оценка различий между кормлением без ограничения, с ограничениями и определение требований в зависимости от типа содержания;
кормлением, предполагающим определение потребления корма живот- г) использование клеток со сплошным и сетчатым/щелевым полом
ным в ходе эксперимента; определение условий, при которых использование подстила нецелесо-
г) вариации в составе диет образно.
78 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 79

6. Гигиена ознакомление с теорией генетики;


а) вирусы, бактерии, грибки и простейшие б) аутбредная колония: определение, преимущества и ограничения, ве-
понимание влияние гигиены на микробиологическое окружение живот- дение аутбредных колоний, стандартизация, дрейф генов
ных; правильное поддержание и разведение аутбредного стока;
б) химические примеси в) инбредная колония, гибриды F1; определение, преимущества и огра-
оценка источников химического загрязнения среды обитания животных; ничения
в) чистка, дезинфекция и стерилизация содержание и разведение инбредных, рекомбинантных линий и гибридов
определение оптимальных условий обработки вивария, оборудования и F1;
вспомогательных средств при различных типах содержания животных; г) генетические модели заболеваний на животных: полигенные моде-
г) микробиологический, паразитарный и химический контроль ли, полученные селекцией; спонтанные мутации; трансгенные и но-
организация и осуществление программ мониторинга, необходимых для каутные животные (определение, чрезмерная экспрессия гена, гомо-
высококачественного содержания животных; логичная рекомбинация, экспрессия и трансмиссия гена, валидация
д) захоронение отходов модели); влияние генетического фона
определение и использование соответствующих методов, соблюдение
знание различных методов создания генетических моделей на животных;
регулирующих данную деятельность требований.
г) контроль генетической стандартности: фенотип, пересадка кожных
7. Разведение
трансплантатов, биохимические маркеры, иммунологические мар-
а) размножение позвоночных: циклы изменения репродуктивной сис-
керы, маркеры ДНК
темы, окружающая среда и стимулы; видовые, линейные и субли-
создание программ генетического мониторинга и обработка полученных
нейные различия
понимание теоретических и практических аспектов размножения; данных,
б) методы разведения; продуктивность; групп постоянного и времен- Г. Микробиология и заболевания
ного скрещивания; отбора стока разведения; программы скрещи- 1. Микробиология
вания, предъявляющие различные требования к животным (коли-
а) специальный обзор бактериологии, паразитологии и вирусологии
чество, возраст, пол и т.д.); генетические характеристики и схемы
лабораторных животных; понятия, включающие классификацию
разведения (бэккросс, интеркросс, рандомбридинг, контроль чис-
(таксономию), физические аспекты, характеристики, строение и ре-
тоты инбредных линий, генетический контроль, влияние условий
зистентность к внешним условиям (физическим, химическим, био-
содержания и окружающей среды
логическим); условия размножения и выживания; методы определе-
получение теоретических и практических знаний, необходимых для вы-
ния, включая микроскопические, культуральные, серологические и
бора в различных ситуациях оптимального метода размножения
в) статус здоровья животных в свете их разведения; влияние на про- анализ ДНК
дуктивность; методы оборудование, используемые для деконтами- понимание этиологии и отличий от инфекционных заболеваний; эле-
нации; содержание животных с определенным статусом здоровья; ментарное представление о возможных методах лечения, применяемых
мониторинг здоровья штатными ветеринарами;
понимание важности состояния здоровья животных и знание методов, б) микробиологический статус различных категорий животных: гнотоби-
используемых для его поддержания и пригодных для уничтожения опре- отические, безмикробные, свободные от определенных патогенных
деленных патогенных организмов; организмов и конвенциональные животные; модифицированные
г) организация и управление, анализ затрат животные (облученные, трансгенные или др.); микробиологические
характеристика образовательных программ по организации вивария и процедуры; программы скрининга
эффективному и экономичному руководству. знание гигиенического и санитарного статуса некоторых определен-
8. Генетика ных категорий лабораторных животных и осознание взаимодействий
а) введение, менделирующая наследственность, полигенные признаки между животными и внешними факторами.
80 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 81

2. Заболевания умение вести поиск в общих базах данных по биомедицине и ветерина-


а) неинфекционные заболевания, обнаруживаемые у лабораторных рии (например, в MEDLINE, CAB-I, CSA, AGRICOLA) и специализиро-
животных: физические, химические, радиационные и другие пов- ванных базах данных (например, в PREX, T-BASE, TOXUNE)
реждения; естественные физиологические нарушения (проблемы, хранение литературы и организация поисковой системы;
возникающие при беременности, рождении, в результате драк меж- б) анализ необходимой информации и выдвижение гипотезы
ду животными, возрастные проблемы); врожденные заболевания; отбор необходимой информации и определение цели и задач исследова-
иммунологические заболевания; онкогенез; расстройства алимен- ния на животных с учетом ограничений, обусловленных бюджетом,
тарного происхождения (перекармливание, голодание, дефициты и временем, оборудованием, оснащением и т.п.
т.д.); экспериментальная или непредвиденная интоксикация; ано- составление плана по проведению эксперимента на животных.
мальное поведение: тик, членовредительство, поведение, связанное 2. Выбор модели на животных
со стрессом; хирургическая патология
а) разработка критериев
знание основ их этиологиии и отличий от инфекционных заболеваний,
получение ясного представления о требованиях, предъявляемых к модели
возможное лечение;
на животных, и учет аргументов за и против использования альтерна-
б) инфекционные заболевания: болезни лабораторных животных; зоо-
тив;
нозы, эпидемиология и специальные меры безопасности; общие и
специфические симптомы отдельных заболеваний; диагностика; б) специфические характеристики видов и линий
профилактика, лечение и его эффективность; особое внимание к поощрение поиска максимального соответствия между моделью на
индуцированным инфекционным заболеваниям животных и требованиями эксперимента;
общее представление о стратегии выявления проблем, связанных со здо- в) требования к микробиологической стандартизации, животные с
ровьем, а также о методах диагностики основных заболеваний, опре- определенным микробиологическим статусом
деления возбудителей и соответствующих мерах, предпринимаемых представление о влиянии микробиологического статуса животного на
штатным ветеринаром. результаты экспериментов;
3. Симптоматика клинических заболеваний г) требования к генетической стандартизации, модели с определенной
а) общие проявления: внешний вид, слабость, масса тела, температу- генетической характеристикой (см. также разд. Г8)
ра, нарушения кожного покрова и т.д.; специфичные проявления знание различных классов животных с определенной генетической ха-
со стороны различных систем организма: нервная система: боль, рактеристикой преимуществ и недостатков использования инбредных,
обмороки, парез, паралич; опорно-двигательный аппарат; сердеч- коизогенных, конгенных, трансгенных линий, гибридов F1, аутбредных
но-сосудистая и дыхательная системы; пищеварительная система; стоков и популяций гибридов;
мочеполовая система; эндокринная система; показатели анализов, д) генетические модели в сравнении с индуцированными
выходящие за пределы нормы, и соответствующие симптомы общее представление о различных категориях моделей на животных;
общее понимание этиологии, симптоматики и влияния данных заболе- е) приобретение (закупка, транспортировка, видовые особенности, обус-
ваний на экспериментальные результаты; ловленная окружающими условиями продолжительность адаптации,
б) диагностика, принципы дифференциальной диагностики карантин)
понимание основ работы штатного ветеринара по контролю и ведению
знание практических и организационных аспектов приобретения жи-
отчетности о статусе здоровья лабораторных животных, а также диа-
вотных для научных исследований;
гностике по клиническим проявлениям изменений состояния здоровья.
ж) видовые особенности требований к условиям окружающей среды
Д. Планирование и реализация научно-исследовательских программ и ознакомление с требованиями и потенциальными проблемами, возника-
экспериментов на животных ющими при содержании в виварии животных различных видов
1. Определение цели исследования представление о взаимосвязи между условиями содержания и благосо-
а) обзор литературы стоянием животных.
82 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 83

3. Планирование эксперимента получение информации, необходимой для эффективного проведения ис-


а) определение необходимого количества животных для эксперимен- следования, включая разделение функций между различными лицами,
тальных и контрольных групп: power-анализ вовлеченными в эксперимент.
понимание важности консультации со статистиком перед началом 6. Отчет о результатах эксперимента
эксперимента, например для оценки валидности выборки и достовер- а) устное представление исследования
ности результатов, а также для принятия решения, одобрить данную представление научного доклада;
гипотезу или отказаться от нее; б) подготовка манускрипта в соответствии с требованиями международ-
б) выборка ного журнала соответствующего профиля
выработка стратегии получения типичной выборки данной популяции; публикация результатов исследования.
в) рандомизация; планы опытов по схемам рандомизированных бло- Е. Анестезия, анальгезия и эвтаназия
ков, кроссовера (перекрещивания), латинского квадрата (решетка- 1. Физиология ноцицептивной чувствительности
квадрат) и сплитплота (расщепленных участков) а) периферическое восприятие боли
ознакомление с различными подходами к планированию эксперимента в представление о современной концепции боли, видовых и индивидуаль-
зависимости от поставленных задач; ных различиях восприятия и ответа на острые и хронические болевые
г) статистический подход ощущения
знание основ статистического анализа в экспериментах на животных знание локализации болевых рецепторов в коже и тканях животных и
и возможностей статистики в сокращении необходимого количества химической медиации ноцицептивной активности;
животных; б) передача импульсов
д) экспериментальные переменные знание видовых особенностей восходящих путей передачи болевых ощу-
их определение, описание, влияние на научные исследования и контроль щений;
статистическими методами. в) периферические и центральные механизмы распознавания боли
4. Воздействие на опытные и контрольные группы представление о разнообразии нервных и эндокринных механизмов воспри-
а) экспериментальные процедуры (см. также разд. Ж) ятия острой и хронической боли, путях модуляции входящих сигналов;
оценка уровня дискомфорта и степени его влияния на благосостояние г) болевой ответ
животных и результаты экспериментов; представление о нисходящих путях, местной и общей реакции на каче-
б) возможности усовершенствования ственно и количественно различающиеся раздражители;
стимуляция поиска совершенствующих альтернатив; д) реакция животных различных видов на боль
в) использование плацебо/симуляции знание видовых и индивидуальных различий восприятия боли.
выбор соответствующей контрольной группы; 2. Фармакология и фармакокинетика соединений, используемых для
д) анестезия/аналгезия/хирургия анестезии, анальгезии и эвтаназии
подтверждение отличия ответа на воздействие от эффекта исполь- а) соединения, антагонисты, миорелаксанты
зуемых анестетиков/анальгетиков или проводимой хирургической про- ознакомление с наиболее распространенными соединениями, их эффек-
цедуры. тивностью и фармакокинетикой;
5. Организационные и административные аспекты проведения экспери- б) видовые различия
ментов на животных иллюстрация широкого диапазона ответов на введение соединений;
а) представление протокола на рассмотрение в) экзо- и эндогенные факторы, влияющие на фармакокинетику
знание основных принципов, принимаемых во внимание при подаче про- учет влияния окружающей среды (например, циркадных ритмов, тем-
токола на рассмотрение комиссии по этике или другой контролирую- пературы) и субъективных факторов (например, вида, пола, состояния
щей организации; здоровья, пищевого статуса, возраста);
б) описание материально-технического обеспечения, компетентность г) влияние на системы органов
персонала, сбор и обработка данных обращение особого внимания гомеостазу и патологическому влиянию;
84 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 85

д) влияние на эксперимент рассмотрение моральных аспектов эвтаназии, причин умерщвления


идентификация факторов, оказывающих влияние на результаты экс- животных и наиболее гуманных методов проведения эвтаназии;
перимента; в) страх и дистресс у животных
е) безопасность персонала учет и минимизация реакций отвращения у животных;
оказание особого внимания безопасности в отношении тератогенного г) эмоциональное состояние лица, проводящего эксперимент
и индуцированного ферментами воздействия, предупреждение приема учет эмоционального состояния человека с рассмотрением в первую оче-
препаратов персоналом (наркомании). редь зооцентрической точки зрения, обсуждение эстетических аспек-
тов в сравнении с этическими;
3. Анестезия
д) оборудование
а) оборудование
ознакомление с его разновидностями, эксплуатацией, безопасностью и
применение оборудования, обслуживание и безопасность; обслуживанием;
б) до- и посленаркозные процедуры е) метод
осуществление на практике и видовые особенности ухода; представление о видовых особенностях, легкости выполнения, надеж-
в) общий и балансированный наркоз ности и эффективности, быстроты и необратимости, влиянии на сис-
представление о теории и практике ингаляционного наркоза; анесте- тему органов и экономичности.
зии, вызываемой инъецируемыми препаратами; принципах искусствен-
Ж. Хирургия и экспериментальные процедуры
ной вентиляции легких;
1. Хирургия
г) местная и региональная анестезия а) определение
понимание когда, где и как их следует проводить; понимание принципов и требований асептической техники, хирургии,
д) проведение и контроль предполагающей выживание организма или являющейся конечной про-
оценка глубины наркоза и различных жизненно важных функций, под- цедурой, обширных и незначительных операционных процедур;
держание показателей на уровне гомеостатического порога, предуп- б) подготовка к операции
реждение осложнений; действия в критических ситуациях. оценка и проведение всех необходимых процедур по подготовке живот-
4. Анальгезия ного, места хирургического вмешательства, инструментов и оборудо-
а) оценка боли вания, а также оперирующего хирурга, специализирующегося на прове-
распознавание и оценка этологических и жизненно важных показате- дении различных операций;
лей острой и хронической боли; в) анестезия
б) благосостояние животных см. разд. Е;
см., разд. А2; г) операционные осложнения
в) цель эксперимента приобретение и использование необходимого регистрирующего обору-
дования для обнаружения и коррекции во время операции возможных
идентификация факторов, оказывающих влияние на результаты экс-
осложнений (гипотермии, обезвоживания, кровотечения, изменений
перимента;
кислотно-щелочного равновесия);
г) последствия д) оперативные приемы
представление о влиянии веществ на гомеостаз, заживление ран, пове- оптимальные линии надреза, обращение с тканями, гемостаз и закры-
дение и т.п.; схемы введения препаратов; тие раны у соответствующих видов животных.
д) привыкание и толерантность 2. Уход за животными, нуждающимися в хирургическом вмешательстве
специальный учет наркотических веществ и схем введения препаратов. а) предоперационная подготовка
5. Эвтаназия оценка соответствия животного предполагаемой процедуре, проведе-
а) законодательство ние надлежащей адаптации, акцентирование внимания на адекватной
знание правовых аспектов и европейских рекомендаций; гидратации и воздержании от пищи в соответствии с требованиями;
б) этика, цели и благосостояние б) уход во время проведения операции
86 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 87

обеспечение и мониторинг правильного дыхания, адекватной деятель- знание количественных и качественных характеристик;
ности сердечно-сосудистой системы, внутренней температуры тела, в) методы забора жидких сред организма
гидратации и других основных функций, когда это необходимо; забор крови, мочи и экскрементов, содержимого желудочно-кишечного
в) послеоперационный уход и ослабление боли тракта, семенной жидкости, спинномозговой жидкости, молока, пе-
контроль за полным соответствием предварительно намеченных и ос- ритонеальной жидкости и клеток, экзокринных жидкостей, бронхо-
нованных на клинической оценке элементов требованиям по сведению до альвеолярный лаваж.
минимума заболеваемости и смертности 6. Разные техники
проведение в случае показаний мероприятий по ослаблению боли. а) методы регистрации и физиологические данные
3. Специфические хирургические приемы надежная регистрация показателей основных систем организма (на-
выполнение различных хирургических процедур, как ниже перечислен-
пример, сердечно-сосудистой, дыхательной, нервной) как для наблюде-
ных, так и не вошедших в данный раздел;
ния за пациентом, так и в научно-исследовательских целях;
а) техники трансплантации, пересадка новообразований
б) образование антител
представление об основах трансплантационного иммунитета: гисто-
совместимость, отторжение трансплантата и области, наиболее ознакомление с методами получения антител, связанными и не связан-
подходящие для трансплантации; ными с использованием животных;
б) искусственные имплантаты в) методы перфузии
оценка и пересадка наиболее часто используемых имплантатов (сердеч- представление о перфузии in vivo (например, почек, кишечника) и с це-
но-сосудистых, стереотаксических, мочевых, желудочно-кишечных), лью фиксации различных органов;
знание основных принципов внешних соединений и телеметрических г) фиксация
техник, основ ухода за трансплантатом; представление о требованиях к использованиию, методах и необходи-
в) эндокриноэктомии мом уходе.
знание основ и овладение навыками по их проведению на соответству-
ющих видах животных, включая специальные соображения и последу-
ющий уход.
4. Введение соединений
а) обращение с животными и их фиксация
выполнение процедур с минимальным стрессом для животного и иссле-
дователя
требования, методы и уход;
б) общие аспекты
знание необходимых характеристик вводимых субстанций;
в) пути введения
представление об энтеральном и всех парентеральных путях введения
для соответствующих видов животных;
г) техники введения
введение препаратов различными способами и оценка путей введения,
вводимые объемы, видовые особенности.
5. Забор образцов
а) места для забора
описание и оценка различных мест для забора образцов у разных видов
животных;
б) общие аспекты
88 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 89

Глава 4 Т абл ица 3


КЛАССИФИКАЦИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПО КАТЕГОРИЯМ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
В БИОМЕДИЦИНСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Категорирование животных

Кате- Характери- Метод получе-


Барьер Контроль Использование
гория стика ния

Отсутствует В целях обу-


Конвенцио- Стандарт 1
1 Случайный (открытая чения (острые
нальные (CV) категории
система) опыты)
Улучшенные
От животных Регулярный Рутинные иссле-
конвенцио- Неполная
более высокой по стандар- дования в крат-
Получение надежных и воспроизводимых результатов медико-био- 2 нальные(MD барьерная
категории каче- ту 2 катего- ковременных
или Minimal система
логического эксперимента можно достигнуть лишь при соблюдении Deseases)
ства рии экспериментах
стандартности всех его слагаемых и условий проведения. В этом смысле Изготовление
лабораторное животное является наиболее уязвимым звеном в системе стандартных
От животных,
медико-биологического эксперимента. Его состояние как живого объекта препаратов,
содержащихся в
SPF (СПФ или Регулярный испытание на
зависит от воздействия многочисленных как экзогенных, так и эндоген- свободные от
изоляторах и ас-
Барьерная по стандар- токсичность
ных факторов, влияние которых далеко не всегда бывает явным и легко 3 социированных
патогенной система ту 3 катего- препаратов
с определенны-
регистрируемым. Среди них, прежде всего, следует отметить факторы флоры)
ми микроорга-
рии Хронические
инфекционной и инвазионной природы. Причем различные, в том чис- эксперименты
низмами
длительностью
ле даже патогенные представители вирусной и бактериальной флоры, не 6 мес.
всегда вызывают клинически явную картину заболевания. Часто они про- От гнотоби-
текают в латентной форме или же в виде носительства. В настоящее время отных или Регуляр-
SPF или СПФ Барьерная Получение
актуальность приобретает так называемая оппортунистическая, эндоген- безмикробных ный по
Максимально система культур клеток
животных, ассо- стандарту 3
ная инфекция, активизирующаяся при иммунодефицитных состояниях. 4 свободные от
циированных с
высокой при производ-
категории, с
условно-пато- степени на- стве вакцин,
определенными использова-
генной флоры дежности поддержание
микроорганиз- нием ПЦР
Классификация животных-моделей мами штаммов бакте-
рий и вирусов
Гистерэктомия Регулярный
перевиваемых
Достижение современного уровня медико-биологического исследо- Свободный от на наличие
опухолей, ис-
Безмикробные любой или из- ассоции-
вания возможно лишь при унификации всех факторов, воздействующих 5a
(аксенные GF) вестной формы
Изолятор
рованных
пытание новых
на организм лабораторных животных путем строгой стандартизации как фармакологи-
жизни микроор- микроорга-
ческих средств,
условий содержания, так и самих животных. Введение в мировую прак- ганизмов низмов
проведение фун-
тику требований системы GLP (Good Laboratory Practice) для проведения Используются Регулярный, даментальных
для описания с исполь- исследований
доклинических испытаний лекарственных веществ предъявило еще бо- Изолятор со
Гнотобиотные животных и зованием иммунитета,
лее жесткие требования к проблеме стандартизации животных, состоя- специаль-
5b (категории систем, все ПЦР и др. воспаления и
ным контро-
нию их здоровья. GFX) формы жизни
лем
специаль- т.д.
Основой этих критериев является принцип недопустимости носи- в которых из- ных методов
вестны контроля
тельства ряда патогенных и условно-патогенных агентов инфекционной
90 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 91

и инвазионной природы: вирусов, бактерий, паразитов. Во многих стра- животных-гнотобиотов практически невозможно ввиду их чрезвычайной
нах разработаны стандарты различных категорий качества животных по дороговизны, объяснимой необходимостью его содержания в изоляторе.
состоянию здоровья. Они включают перечень возбудителей, носитель- Противоположностью этому являются SPF-животные, которые, с
ство которых исключается. Чем выше категория качества животного, тем одной стороны, являются носителями целого ряда неизвестных видов
больше перечень недопустимых агентов. Однако стандарты различных микроорганизмов, но, с другой, – свободными от одного или нескольких
стран не идентичны. Единой международной классификации лабораторных специфических патогенных микроорганизмов.
животных по категориям качества и соответствующих стандартов не суще- SPF-животные, микробиологический статус которых подтвержден,
ствует. В связи с этим животные, именуемые как SPF (Specific pathogen являются более экономичной альтернативой гнотобиотам. Однако гно-
free), не имеют четкой характеристики качества, и, полученные из разных тобиотные технологии представляют наилучший способ развития базо-
источников, могут значительно различаться по своему статусу. В послед- вой линии SPF-животных.
ние годы отмечается явная тенденция к унификации критериев качества Производство SPF-животных выглядит следующим образом. Пер-
животных и созданию единых стандартов. Примером могут служить разра- воначально безмикробных животных с неразвитой системой иммунной
ботки группы исследователей европейских стран: GV-SOLAS, FELASA. защиты ассоциируют с «коктейлем» аэробных и анаэробных микробов-
Специалисты нашей страны совместно с зарубежными коллегами на симбионтов. Эта непатогенная микрофлора способствует развитию сис-
основе мирового опыта также предприняли попытку создания требований темы иммунной защиты, которая в свою очередь позволяет животным
к качеству лабораторных грызунов различных категорий, которые были выжить вне изолятора в условиях обычного содержания. Ожидается, что
приняты в 1989 г. на совместном совещании в Софии. Однако опыт рабо- животное получит из окружающей среды дополнительно некоторые непа-
ты по контролю состояния здоровья животных позволил видоизменить эти тогенные организмы, что завершит или стабилизирует кишечную флору.
нормативы (Таблица 3). Здоровью колоний лабораторных животных постоянно угрожают
Классификация основана на методе получения исходных для раз- инфекции. Невозможно ограждать колонии животных от вторжения не-
ведения животных, наличии и надежности барьера и глубине или уровне желательных организмов вечно. Для того чтобы как можно дольше или,
контроля статуса животного по соответствующему стандарту (требова- по крайней мере, до окончания эксперимента поддерживать здоровую
нию). Предлагается различать 5 категорий качества животных: конвенци- популяцию животных, необходимы квалифицированные научные со-
ональные, содержащиеся в открытой системе (категория 1); улучшенные трудники и подготовленный персонал.
конвенциональные, находящиеся в барьерной системе неполного типа. При надлежащем оборудовании и уходе можно поддерживать удов-
Исходными животными этой категории могут быть только животные более летворительное состояние здоровья колоний SPF-животных на протяже-
высокого класса качества (SPF). Эта категория качества животных соответ- нии нескольких лет. Но даже в оптимальных условиях статус здоровья
ствует категории, именуемой во многих странах MD (Minimal Deseases), колонии будет постепенно снижаться и приведет к необходимости вновь
или (категория 2); а также категории SPF-животные, содержащиеся в стро- создать популяцию животных из свежего биоматериала. Перед тем как
гой барьерной системе (категория 3); гнотобиоты и безмикробные или ак- приступить к воссозданию колонии, необходимо предварительно тща-
сенные животные, содержащиеся в изоляторах (категории 4, 5a и 5b). тельно вычистить и продезинфицировать отсек, в котором содержались
животные. Хорошо оснащенная и действенная шлюзовая система и на-
выки персонала являются основной гарантией снижения риска проник-
SPF-животные-биомодели новения инфекции в отсеки размножения животных и содержания осо-
бей, предназначенных для эксперимента.
Конвенциональные животные являются животными-носителями Как уже упоминалось ранее, для создания здоровой группы животных
различных неизвестных микроорганизмов. Такие животные могут содер- с подтвержденным микробиологическим статусом для получения племен-
жаться как в стерильных, так и в обычных условиях и являются потенци- ного потомства требуются квалифицированные специалисты, оборудова-
альными носителями патогенов. ние и гнотобиотная технология. При проведении работ по возобновле-
Обычные лабораторные животные, используемые в биомедицинских нию популяции лабораторных SPF-животных необходимо также наличие
исследованиях, – просто здоровые особи. Использовать в исследованиях лаборатории, осуществляющей генетический контроль. Поскольку внут-
92 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 93

реннее пространство изолятора ограничено (и в него можно поместить – к внутреннему пространству изолятора и его содержимому должен
лишь определенное количество пар для получения потомства), для воссо- быть обеспечен зрительный доступ;
здания колонии необходимо отбирать животных с учетом генетического – необходимо наличие специальных приспособлений для манипуля-
профиля имеющихся лабораторных линий и будущей колонии. ций внутри изолятора, а также для помещения в него гнотобиотного
содержимого извне без риска нарушения гнотобиотных условий;
– должны быть оборудованы шлюзы для перемещения безмикробных
Гнотобиотные животные-биомодели животных и материалов в и из пространства без нарушения внутрен-
них гнотобиотных условий;
Гнотобиология (от греческих слов gnotos— известный и bios — – во избежание нарушения безмикробных условий должна быть обо-
жизнь) – раздел экспериментальной биологии, занимающийся полу- рудована вентиляционная система, позволяющая проветривать про-
чением и выращиванием стерильных животных (гнотобиотов), а также странство помещения и создающая внутри него положительное дав-
животных, микрофлора которых представлена одним или несколькими ление.
видами микроорганизмов. Гнотобиоты используются в ветеринарии для Производство безмикробных млекопитающих возможно благодаря
изучения болезней, сельскохозяйственных животных с невыясненной тому, что эмбрион в чреве здоровой матери является микробиологичес-
этиологией, а также для выяснения роли микробов в патогенезе мно- ки стерильным. Незадолго до окончания беременности плод может быть
гих болезней. На основе использования гнотобиологической техники асептично извлечен посредством гистерэктомии или кесарева сечения и
проводятся работы по предупреждению инфекционных болезней сель- помещен в стерильный изолятор. Молодняк может быть вскормлен в изо-
скохозяйственных животных: создаются стада животных типа СПФ (без ляторе безмикробной приемной матерью или искусственным молоком по
специфических патогенных факторов). Хозяйства, включающие СПФ- составу приближенным к натуральному. Данная процедура на сегодняш-
стада, должны работать по типу закрытых предприятий со строгими вете- ний день редко используется в лабораториях для получения гнотобиотных
ринарно-санитарными правилами режима хозяйства. мышей и крыс, поскольку они есть в продаже. Популяции гнотобиотов
Безмикробные и гнотобиотические модели не являются альтернати- должны включать в себя достаточное количество особей репродуктивного
вой экспериментам с использованием обычных животных, это объекты, возраста для поддержания генетического однообразия потомства.
пригодные для специфических исследований. Производственные масштабы, необходимые для поддержания
Гнотобиология – это производство в научных целях биологических стабильного приплода безмикробных крыс или мышей, выходит за рам-
организмов – животных, растений и людей, наличие в которых полезных ки бюджета большинства исследовательских лабораторий.
или нетипичных микроорганизмов полностью известно в пределах со- Безмикробные животные иных видов, нежели мыши или крысы,
временной диагностики. Гнотобиотные животные могут быть: должны выращиваться самим потребителем. Не представляет особой
безмикробными – то есть свободными ото всех видов микроорганиз- сложности получение безмикробных морских свинок, поскольку их де-
мов (вирусов, бактерий, грибков и паразитов), которые можно обнару- теныши достаточно развиты на момент появления на свет и не требуют
жить современными методами диагностики; длительного, а иногда даже и вовсе искусственного вскармливания. Низ-
кие показатели выживания у кроликов. Кошек, собак и некоторые виды
моно-, ди- и полиассоциированными – в организме которых присут-
сельскохозяйственных животных можно вырастить безмикробными, но
ствуют 1, 2 или несколько видов известных микроорганизмов ( изначаль-
из-за их значительного размера они представляют трудности для дли-
но безмикробное животное, заселенное одним или более видом извест-
тельного содержания в изоляторах.
ных микроорганизмов).
Животные-гнотобиоты должны выращиваться в изоляторах. Изоля-
тор должен обладать некоторыми обязательными признаками: Гнотобиоты-млекопитающие
– внутренняя поверхность и содержимое безмикробного пространства,
клетки или помещения должны быть выполнены из безмикробных Существуют оперативные и консервативные способы получения
материалов и в нем должна поддерживаться безмикробная среда; гнотобиотических животных первой генерации. Возможно, основу этим
94 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 95

работам составили наблюдения над особенностями развития новорож- ным сходствам целого ряда систем (кровообращения, пищеварительного
денных младенцев у человека и щенят, котят, мышат у животных. тракта, кожи, сердечно-сосудистой и др.) с аналогичными системами и
Технологически для получения гнотобиотов применяются различ- органами у человека этот вид животных находит все большее примене-
ные модификации гистерэктомии (сухой и влажной) и гистеротомии. ние в моделировании заболеваний человека. В экспериментах особую
В первом случае извлечение матки с эмбрионами производится в асеп- ценность представляют миниатюрные породы свиней. Первые методи-
тической среде, вне изолятора, с последующей ее перевязкой в области ческие приемы получения безмикробных поросят методом гистеротомии
шейки, ампутацией и переносом через бактерицидный гидрошлюз в сте- в России были отработаны в середине 70-х гг. в лаборатории биомодели-
рильное пространство камеры изолятора. В камере плоды извлекаются и рования НЦБМТ РАМН.
освобождаются от плодных оболочек. Морские свинки были первыми животными, полученными в безмик-
Во втором случае операция осуществляется с использованием опе- робном состоянии еще в 1895 г. Способность к активному образу жизни
рационного блока хирургического изолятора. Операция производится и самостоятельному питанию сразу после рождения дали возможность
изнутри изолятора через пленку операционного блока и склеенные с ней получения и выращивания животных этого вида. Однако выращивание
кожные покровы живота беременной самки, с последующим извлече- безмикробных морских свинок до половозрелого возраста представляет
нием плодов из беременной матки непосредственно в стерильное про- серьезную технологическую проблему, связанную с подбором адекватных
странство камеры хирургического изолятора. Гнотобиоты необходимых диет и устранением чрезмерного растяжения слепой кишки. Последний
инбредных линий могут быть получены путем одной из модификаций феномен, отмечаемый у безмикробных грызунов, в значительной степе-
кесарева сечения с использованием лактирующей гнотобиотической ни проявлялся у этого вида гнотобиотов. Поэтому размножение морских
самки для выкармливания новорожденных животных в изоляторе. свинок в безмикробных условиях удалось получить значительно позднее,
Из консервативных способов в литературе описаны методы получе- чем безмикробных крыс и мышей. В России первые эксперименты с без-
ния гнотобиотов из взрослых особей путем обработки антибиотиками и микробными животными также были начаты с получения первой генера-
антимикробными препаратами. Однако в настоящее время такой метод ции безмикробных морских свинок в Центре.
распространения не получил. В связи с коммерческой доступностью гно- Как показали дальнейшие наблюдения, получение первой генера-
тобиотических животных различных видов и категорий получение пле- ции безмикробных морских свинок целесообразнее непосредственно для
мядер из коммерческих источников остается наиболее распространен- экспериментальных исследований, чем осуществлять их воспроизведе-
ным путем получения и последующего разведения гнотобиотов. ние в производственных масштабах. Получение гнотобиотических мор-
Методы получения поросят-гнотобиотов включают гистерэктомию ских свинок осуществляется оперативными методами. Попытки получе-
и основаны на факте непроницаемости здоровой интактной плаценты ния гнотобиотических морских свинок путем деконтаминации к успеху
для большинства микроорганизмов. В Центре разработаны методы по- не привели. Для оперативного получения безмикробных морских свинок
лучения и выращивания новой категории гнотобиотов – безантиген- используют хирургические гнотобиологические изоляторы или изоля-
ных животных, контролируемых по антигенам микробного и животно- торы, снабженные бактерицидным гидрошлюзом (для гистеротомии).
го происхождения. Животные-гнотобиоты применяются для изучения Продолжительность беременности у морских свинок варьирует от 61 до
некоторых аспектов респираторных болезней человека, приготовления 68 дней. При отборе беременных самок для операции ориентируются на
тканевых культур, стандартных моноспецифических сывороток, изуче- объективные признаки: размягчение лонного сочленения, расхождение
ния эффектов изменения стандартной микрофлоры, а также целого ряда лонных костей на 20–22 мм.
иммунологических проблем. Первые эксперименты по получению безмикробных кроликов были
С использованием хирургических изоляторов у свиней применялся начаты в 40-х гг. XX века. В России модель безмикробных кроликов была
также метод гистеротомии для получения безмикробных поросят. Без- впервые получена и применена в изучении патогенеза холерной ин-
микробные поросята и свиньи представляют особую ценность для иссле- фекции и механизмов интоксикации в конце 70-х гг. в НЦБМТ РАМН.
дований в области иммунобиологии и патологии, учитывая отсутствие Принципиально методика оперативного получения первой генерации
у них трансплацентарной передачи иммуноглобулинов и антител мате- безмикробных кроликов мало отличается от таковой для морских сви-
ринского происхождения. Кроме того, благодаря морфофункциональ- нок. Учитывая, что беременность у крольчих длится ровно 30 дней, отбор
96 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 97

беременных самок для операции трудностей не представляет. Обычно последующее выращивание с использованием для искусственного вскар-
животных оперируют в последний день беременности. Для операции мливания коммерческой диеты SMA, обогащенной железом, разведенной
используются две модификации кесарева сечения: гистеротомия и гис- водой в соотношении 1:1,1. Через 1–2 дня обезьяны приучались к самостоя-
терэктомия, но учитывая преимущество местной анестезии для выжива- тельному питанию. В возрасте 2 мес. гнотобиотические обезьяны переводи-
ния крольчат, предпочтителен метод гистерэктомии. лись на брикетированный корм, смешанный с молоком. Опыт выращива-
Работы по получению безмикробных хомяков были начаты в 1960 г. ния безмикробных обезьян в течение 10 мес. показал хорошие результаты.
Безмикробных хомяков получают с помощью как оперативных мето-
дов, так и методами деконтаминации. Методика кесарева сечения у бе-
ременных самок хомячков подробно описана в литературе. Возможно Птицы-гнотобиоты
перекрестное вскармливание новорожденных хомячков лактирующими
самками других видов грызунов. Методики получения гнотобиотов были также разработаны и адап-
Методом селективной деконтаминации у сирийских хомячков мож- тированы и в отношении других сельскохозяйственных животных и птиц.
но освободить желудочно-кишечный тракт этих животных от кишечных Описаны методы получения гнотобиотических ягнят, козлят, телят, сви-
жгутиковых и Pasteurella pneumotropica. Процедура включала введение с ней, а также гнотобиотических птиц (цыплят, перепелок, индеек, уток).
питьевой водой сульфата дигидростерптомицина (2 г/л), а также димет- Получение этих животных основано на тех же принципах, описанных и
ридазола (800 мг/л). Для устранения P. pneumotropica в защечные мешки для лабораторных животных.
животных вводили 0,5 мг пасты, состоящей из неомицина (27 мг/г) и ди- Получить безмикробных птиц относительно легко, но у них выше,
гидрострептомицина (27 мг/г). Подобная процедура продолжается 4 нед., чем у млекопитающих, риск случайного заражения. Процедура их по-
после чего животных содержат в стерильных камерах с ламинарными по- лучения детально описана. Яйца нужно брать от здоровых родителей во
токами стерильного воздуха. Методика позволяет устранить аэробные, избежание риска инфицирования эмбриона на этой стадии. Наиболее
грамотрицательные бактерии, а также кишечные жгутиковые. Для более частым источником заражения являются микроорганизмы, находящиеся
полной деконтаминации используют купание хомячков в бактерицидной под скорлупой и на ее поверхности, поэтому брать можно только яйца с
ванне с последующим переносом в стерильный гнотобиологический изо- абсолютно чистой скорлупой. Они помещаются в обычный инкубатор,
лятор. Смесь антибиотиков для деконтаминации включает (мг/100 мл): но извлекаются оттуда за несколько дней до предполагаемого вылупле-
амфотерицин – 10, ампициллин – 50, бацитрацин – 500, хлорамфеникол ния птенцов. Во время инкубационного периода яйца необходимо под-
– 100, колистинсульфат – 500, фузидин – 50, канамицин – 400, налидик- держивать в идеальной чистоте. Обращаться с яйцами можно только в
син – 500, неомицинсульфат – 500, пенициллин G – 100, полимиксин В перчатках, но мыть или скрести их нельзя, так как это может повредить
– 25, стрептомицин сульфат – 250, тетрациклин – 50, триметоприм-суль- их защитный слой. Инкубатор также должен быть тщательно вымыт и
фаметоксазол – 15, тилозинтартрат – 50. Методика позволяет выращи- помещен в зону, очищенную от пыли.
вать деконтаминированных хомячков в течение ряда генераций. За 2 дня до вылупления птенцов яйца помещают в изолятор, предва-
Получение плотоядных лабораторных животных, к которым отно- рительно деконтаминировав их. На этой стадии яйца еще раз проверяют
сятся собаки и кошки, в безмикробных условиях представляет особый и выбраковывают те, на которых обнаружили пятнышки, трещинки или
интерес для экспериментальной медицины, и в частности таких ее раз- грязь. Их просвечивают и в изолятор помещают только оплодотворен-
делов, как нормальная и патологическая физиология, инфекционная и ные яйца. Обычно яйца помещают в шлюз, опрыскивают их 2% раство-
неинфекционная патология, аллергология, токсикология, эксперимен- ром перуксусной кислоты и оставляют на 30 минут. Лишь после этого
тальная хирургия и др. они могут быть помещены в изолятор. Температура в изоляторе должна
С середины XX века начаты работы по получению и применению в быть 37–38°С, при относительной влажности воздуха 70–80%. Увеличить
медико-биологических экспериментах безмикробных обезьян. Для получе- влажность можно с помощью емкостей с водой или смоченных хлопко-
ния их в безмикробном состоянии пользовались операцией гистеротомии вых ватных тампонов. Для контроля условий внутри изолятора туда по-
у беременных самок павианов с использованием хирургического пленоч- мещают влажный и сухой термометры. В период вылупления необходимо
ного изолятора типа Трекслера. В подобных изоляторах осуществляли и их поддерживать достаточный доступ воздуха в изолятор.
98 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 99

После вылупления изолятор очищают от скорлупы и дают птенцам Исключение антигенной стимуляции проявлятся у безмикробных
пищу и воду. Они быстро учатся самостоятельно есть и пить. Тогда тем- животных в недостаточном развитии лимфоидной ткани, клеточных и
пературу в изоляторе снижают до 35°С и в течение двух недель постепен- гуморальных факторов иммунитета. Лимфоидная ткань у них находится
но доводят до комнатной. От перьев птиц и раскрошенной еды появля- в том исходном состоянии, которое отмечается у новорожденных живот-
ется большое количество пыли. Жидкие выделения и разлитая питьевая ных и на основе которого происходит ее дальнейшее развитие после пер-
вода могут существенно повысить уровень влажности. Для поддержания вого контакта с микробными и другими антигенами при рождении жи-
влажности на комфортном уровне необходимо обеспечить хорошее про- вотных. Эти различия выражены в лимфоидной ткани и лимфатических
ветривание изолятора. Выходные фильтры могут забиваться пылью и узлах, дренирующих органы и ткани, испытывающие наибольшее воз-
конденсированной влагой, в этом случае рекомендуется установить еще действие микроорганизмов, в частности кишечник. Так, если вес мезен-
одну ступень механической очистки и влагопоглотитель. Вместо выход- териальных лимфоузлов у обычных мышей составляет около 134 мг/100 г
ных фильтров можно использовать альтернативные приспособления. веса тела, то у безмикробных такого же возраста этот показатель является
Выращивать и поддерживать популяцию гнотобиотов и безмикроб- в 3 раза ниже.
ных животных дорогостоящее занятие. Гнотобиотехнология требует вы- В корковом веществе тимуса безмикробных крыс отмечается пони-
сокой и узкопрофильной специализации, наличие квалифицированного женное содержание лимфоцитов и отсутствие плазматических клеток.
персонала и многообразия специального оборудования. Гистологическими исследованиями лимфоидной ткани показано намно-
го меньшее количество зародышевых центров у безмикробных животных
по сравнению с обычными. При цитологических исследованиях вторич-
Иммунные ответы у гнотобиотов ных лимфатических органов у безмикробных поросят наличие плазма-
тических клеток выявить не удавалось. Понижены у безмикробных жи-
Гнотобиологические модели важны в изучении истинно первичного вотных и уровни сывороточных глобулинов, что объясняется сниженной
иммунного ответа. Учитывая множественность антигенов, представле- антигенной стимуляцией по сравнению с обычными животными.
ние о первичном иммунном ответе, изучаемом в экспериментах на обыч- Для гнотобиотов характерно недоразвитие лимфоидной ткани в лим-
ных (природно контаминированных) животных, справедливо подверга- фоидных органах, дренирующих слизистые оболочки, контактирующие
ется сомнению, так как в большинстве случаев мы имеем дело с ранним с микробной средой. Это проявляется в гипоплазии перибронхиальной
вторичным иммунным ответом. Действительно, изучение ранней фазы лимфоидной ткани и пониженной ее лимфоцитарной инфильтрации.
онтогенеза иммунного ответа в присутствии уже имеющихся фоновых У безмикробных животных отмечается также пониженная масса подче-
естественных антител у обычных, так называемых нормальных животных люстных лимфатических узлов. Соответственно установлены и отличия
представляется методологически неверным. Одним из наиболее интерес- в содержании клеточных элементов в лимфоидной ткани безмикробных
ных объектов для таких исследований являются безмикробные поросята, животных. Отношение их абсолютного числа у обычных и безмикроб-
в особенности лишенные антигенного воздействия. Систематические ных мышей составляет: для плазмобластов – 12,3; больших лимфоцитов
исследования онтогенеза иммунного ответа на безмикробных и безанти- – 12,3; незрелых плазматических клеток – 14,4; зрелых плазматических
генных поросятах позволили понять пути развития и дифференциации клеток – 8,3; средних лимфоцитов – 3,7 и малых лимфоцитов – 3,0. Раз-
иммунной системы в зависимости от антигенного воздействия. Но не- личия в лимфоидной ткани у обычных и безмикробных животных прояв-
обходимо выделить антигензависимую стадию созревания мультипотен- ляются и в содержании иммунокомпетентных клеток. В лимфоузлах без-
тных некоммитированных Т- и В-клеток и антигензависимую стадию их микробных животных особенно снижено количество больших и средних
дифференциации и пролиферации. В антигеннезависимой стадии индук- лимфоцитов, больших пиронинофильных и плазматических клеток.
тивная роль в стимуляции развития стволовых клеток в Т-клетки (в ти- Пониженные уровни иммуноглобулинов у безмикробных животных
мусе) и В-клеток (в бурсо-эквивалентных условиях) отводится микрохи- не означают снижения иммунокомпетентности лимфоидной системы и
мической среде этих органов. В то же время поликлональные активаторы ее способности к иммунному ответу. Образование антител у безмикроб-
В-клеток не обладают стимулирующим эффектом на иммунологически ных животных наблюдается уже через 48 ч после антигенной стимуляции.
«девственные» В-клетки, полученные от безмикробных поросят. После ассоциации гнотобиотических мышей с гексафлорой у последних
100 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 101

отмечалось повышение концентрации сывороточных IgGl, IgG2a и IgA, АОК в лимфоузлах и селезенке (в сравнении с контролем Р<0,01), тогда
причем уровни IgA и IgGl даже превышали соответствующие значения у как у гнотобиотов их число уменьшалось.
обычных животных. В лимфоузлах развивалась пролиферация клеток плазматического
У безмикробных поросят в возрасте 1,5 мес. установлены резко сни- ряда, а в крови выявлялись гемагглютинины. Однако их различие у гно-
женные уровни иммуноглобулинов классов М и G, в то время как уровни
тобиотов и контрольных крыс было несущественным. Кроме того, у гно-
IgA были одинаково низкими в сыворотке крови как у безмикробных,
тобиотов по сравнению с контролем на 7-й день после иммунизации под
так и обычных поросят. Эти показатели у гнотобиотов повышались более
чем в 2 раза после моноассоциации с непатогенной кишечной палочкой влиянием инсулина происходит отчетливое угасание иммунного ответа,
Escherichia coli 083. Особенно высокие уровни IgG, не отмечавшиеся у тогда как у крыс Wistar стимулирующий эффект на гуморальное звено со-
безмикробных животных, выявлялись у гнотобиотических поросят, мо- храняется отчетливым (Р<0,01). Полученные результаты свидетельству-
ноассоциированных с непатогенными микроорганизмами Bifidobacterium ют о том, что инсулин тормозит клеточное звено иммунитета и стиму-
bifidum. Показатели сывороточных фракций глобулинов и агглютининов лирует гуморальное, хотя механизм такого эффекта инсулина до конца
у безмикробных животных в 1,5–3 раза ниже, чем у обычных животных. не выяснен, тем не менее, можно констатировать, что по интенсивности
В лимфоидных элементах слизистой оболочки кишечника синтеза имму- формирования иммунного ответа крысы-гнотобиоты значительно усту-
ноглобулинов не выявлено, в то время как у обычных животных, а также
пают таковому у интактных животных.
у гнотобиотических мышей после конвенционализации отмечается сек-
реция в просвет кишечника иммуноглобулинов, в основном IgA-класса.
В НЦБМТ РАМН исследовалось влияние инсулина (1 ед/100 гр. веса
в день, в течение недели) на формирование иммунного ответа на эритро-
циты овец (ЭБ; 50% взвесь по 0,1 мл под подошвенный апоневроз обеих
лапок) у крыс линии Wistar и крыс-гнотобиотов. В качестве контроля ис-
пользованы крысы обеих групп (без инсулина).
На 3-й и 7-й день после иммунизации ЭБ в лимфоузлах и селезен-
ке исследовали число РОК и АОК на 103 ядерных клеток, коэффициент
плазматизации лимфоузлов и уровень гемагглютининов в крови. Резуль-
таты показали, что фоновая активность Т- и В-систем у интактных гно-
тобиотов несколько ниже, чем у Wistar (по числу РОК и АОК). У конт-
рольных гнотобиотов на 3-й день после иммунизации ЭБ число РОК в
лимфоузлах и селезенке было достоверно меньше (27,8+2,9 и 37,0+1,1),
чем у Wistar (соответственно 45,0±1,8 и 50,1+2,1; Р<0,01). На 7-й день
эти величины несколько выравнивались. У крыс, получавших инсулин,
во все сроки наблюдения (в обеих группах) в лимфоузлах и селезенке их
число резко (вплоть до полного исчезновения) уменьшалось.
Число АОК на 103 ядерных клеток у гнотобиотов также было мень-
шим на 3-й день (в лимфоузле – 44,3+2,2, в селезенке – 52,3+2,2), чем
у Wistar (58,0+2,6 и 67,8+2,1; Р<0,01). Введение инсулина значительно
увеличивало число АОК в лимфоузлах и селезенке крыс обеих групп: на
3-день у крыс Wistar их число в селезенке было равно 96,1+7,1, в лим-
фоузлах – 178,0+10,9 (Р<0,01); у гнотобиотов соответственно 80,0+ 8,2
и 71,7+6,0 (Р<0,01 в сравнении с контрольными данными). На 7-й день
опыта у крыс Wistar, получавших инсулин, сохранялось увеличение числа
102 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 103

Глава 5 щения, питания, физического обращения, ухода и контроля состояния


здоровья. Должны учитываться следующие факторы: размер клеточного
Мониторинг здоровья лабораторных оборудования, количество животных в одной клетке, методы их удержи-
вания и перемещения, а также используемая система разведения. Другой
животных важной переменной для качества животных является кормление. Основ-
ные показатели кормления должны быть проанализированы и зафикси-
рованы для каждого эксперимента. Дополнительно следует проверять
корм на наличие химического загрязнения.
Микробиологический статус животного также является определя-
ющим для результатов эксперимента. Агенты, в обычных условиях не
вызывающие заболеваний, могут вызвать проблемы в ходе проведения
эксперимента из-за стресса, испытываемого животными. Другие аген-
ты, как, например, лактатдегидрогеназа вируса мышей может не вызвать
заболевания в процессе эксперимента, но исказить его результаты. Учи-
тывая это, желательно использовать как можно более «чистых» лабора-
Оценка качества лабораторных животных в процессе содержания и
торных животных, с известным микробиологическим статусом.
эксперимента должна включать в себя микробиологический и генетиче-
Генетический профиль лабораторных животных может быть крайне
ский контроль, контроль внешней среды, заключающийся в мониторин-
важным для успеха эксперимента. Учреждения, занимающиеся лабора-
ге температуры, влажности, освещения, шума и т.д. и контроле питания.
торным животноводством, должны уделять особое внимание генетиче-
Использование животных низкого качества может привести к необ-
ской чистоте животных. В рамках этих учреждений должны действовать
ходимости увеличения количества животных для проведения экспери-
программы по предотвращению генетического загрязнения линий по
мента и даже полностью исказить результаты опыта.
вине человека или в результате случайного спаривания, и раннему вы-
В Руководстве приведены некоторые важные для эксперимента-
явлению мутаций. Каждая линия имеет особый генетический профиль,
торов данные, касающиеся здоровья лабораторных животных. Более
определить который можно с помощью биохимических, иммунологиче-
полную информацию по этому вопросу можно найти в монографии
ских и морфологических маркеров. Желательно проводить предвари-
Н.Н.Каркищенко «Основы биомоделирования».
тельный генетический контроль до начала эксперимента.
Важно вести письменный учет процедур, проводимых с животными;
Контроль качества животных и учет обычно для этих целей заводится специальный журнал. В журнал долж-
ны заноситься записи о ежедневных наблюдениях, проводимых процеду-
В соответствии с Европейской конвенцией по защите позвоночных рах и другая текущая информация. Следующие рекомендации, содержа-
животных, используемых в экспериментальных и других научных целях щиеся в Правилах лабораторной практики, желательно использовать для
(Совет Европы. Страсбург, 2004 г.), следует придерживаться нормативов обеспечения контроля качества животных и ведения журнала.
содержания лабораторных животных. В организации должны быть приняты стандартные правила обраще-
В особых случаях для молодых или голых особей может требовать- ния с животными, включая содержание, питание, удерживание и пере-
ся содержание при более высоких температурах. Все ввозимые в страну мещение и уход:
животные должны пройти карантин согласно национальному законода- все новые животные, полученные из внешних источников, должны
тельству. Сроки карантина в условиях лаборатории обычно определяют- быть изолированы и пройти процедуру карантина согласно ветери-
ся соответствующим лицом исходя из обстоятельств, этим лицом обычно нарным требованиям;
является назначенный учреждением ветеринар. на начало проведения доклинических испытаний все животные
Контроль качества должен проводиться на основе использования должны быть здоровыми и не являться носителями агентов, спо-
стандартных процедур обращения с животными, касающихся разме- собных повлиять на результаты исследования. Если в ходе экспери-
104 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 105

мента животное заболело или стало носителем какого-либо агента, Т абл ица 4
его необходимо изолировать. Данные животные могут получать ле- ПЕРЕЧЕНЬ ВИРУСОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ И КРЫС
чение, если оно не повлияет на результаты исследования. Результа- Категория Мыши Крысы
ты диагностики, назначенное лечение и его описание, а также даты
Ectromelia virus
проведения лечения должны быть документированы и сохранены; I Lymphocyttc choriomeningitis virus (LCM)
Pox virus LCM
теплокровные животные, за исключением грызунов, еще питаю- Hantaan virus
Hantaan virus
щихся молоком матери, используемые в лабораторной практике, II Аналогично категории I Аналогично категории I
которых требуется вынимать из клетки, должны быть соответству-
Sendai virus
ющим образом идентифицированы (татуировкой, цветным кодом,
Ротавирус мышей (EDIM)
сережкой, кольцом на ноге и т.д.); Sendai virus PVM
Вирус гепатита мышей (MHV)
corona virus у крыс(RCV)
вся информация, необходимая для идентификации особи, разме- III Вирус пневмонии мышей (PVM)
Sialodacryoadenitis (SDA)
щенной вместе с другими животными, должна быть доступна в мес- Реовирус тип 3
Реовирус тип 3
Аденовирус мышей
тах содержания этих животных; вирус Theiler (GD VII)
при необходимости животных различных видов содержат в разных
Minute virus of mice (MVM)
помещениях. Животные одного вида, но участвующие в различных Вирус полиомы мышей вирус Theiler
экспериментах, обычно также содержатся в разных помещениях во IV Lactic dehydrogenase virus (LDV) вирус Kilham у крыс (KRV)
избежание искажения результатов эксперимента. Если же их сме- К virus мышей вирус Toolan (H-l)
cytomegalovirus мышей (MCMV)
шение необходимо, должны быть приняты меры для их адекватной
дифференциации;
Т абл ица 5
клетки, стеллажи и дополнительное оборудование должны очищать- ПЕРЕЧЕНЬ БАКТЕРИЙ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ И КРЫС
ся и стерилизоваться с достаточной периодичностью;
Категория Мыши Крысы
вода и корм для животных должны периодически проверяться для
того, чтобы удостовериться, что уровень их естественного загрязне- Salmonella spp.
Listeria monocyto-genes
ния не превышает показателей, определенных в протоколе, выше I
Streptobacillus moniliformis
Аналогично
которых загрязнение может повлиять на результаты эксперимента. Leptospira spp.
О результатах проверки должны проводиться записи; II Аналогично категории 1 Аналогично
подстилки, находящиеся в клетках и загонах, не должны влиять на
Bordetella bronchiseptica
результаты исследования. Менять их нужно по мере необходимости Pasteurella spp.
для обеспечения животному сухости и чистоты; Corynebacterium murium (Kutscheri)
если используются какие-либо препараты против паразитов, об этом Mycoplasma pulmonis, neurolyticum arthritidis
III Bacillus piliformis Аналогично
необходимо делать запись в журнал. Препараты, способные повли-
Streptococcus pneumoniae
ять на результаты исследования, не используются. Streptococcus gr. A,B,C,D,S,Y
В Таблицах 4–6 приводится перечень вирусов, бактерий и парази- Chlamidia
тов для индикации у лабораторных мышей и крыс, носительство которых Helicobacter pylori

исключается в соответствии с категорией. Причем каждая более высокая Pseudomonas aeruginosa


категория включает также весь перечень агентов, указанных для ниже- Staphylococcus aureus
Citrobacter freundii
стоящей. IV Klebsiella pneumoniae Аналогично
В Таблицах 7–10 приводится перечень вирусов, бактерий и парази- Proteus spp.
тов, не допустимых для носительства у морских свинок, хомяков и сви- Escherichia coli
Clostridium perfringens
ней 1 и 2 категорий.
106 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 107

Как видно из таблиц, у животных 1-й и 2-й категорий исключается признаков болезней выборка определяется эпизоотической ситуацией.
носительство возбудителей, общих с человеком (антропозоонозы), у 3-й При этом обязательно патогистологическое исследование.
и 4-й – представителей патогенной и условно-патогенной флоры. Мониторинг проводится специалистами контрольно-диагности-
Стандартность животных определяется мониторингом их статуса в ческой лаборатории с использованием быстрых и надежных современ-
соответствии с категорией. Регулярный мониторинг осуществляется с ми- ных методов индикации инфекционных агентов. По результатам мони-
нимальной частотой: для животных 1–2 категорий – 1 раз в 6 месяцев; для торинга определяется категорийность животных.
3-4 категорий – 1 раз в 2–3 месяца; для 5 категорий – 1 раз в 6 месяцев. Т абл ица 7
Для контрольного обследования животные отбираются отдельно из ПЕРЕЧЕНЬ БАКТЕРИЙ, ВИРУСОВ И ПАРАЗИТОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У МОРСКИХ СВИНОК
каждой зоны обитания (корпуса). Минимальная выборка должна состав- Категории Бактерии Вирусы Паразиты
лять не менее 10 животных, из которых 5 – в возрасте 10–12 недель, Salmonella sp.
5 – в возрасте старше 6 месяцев. При наличии у животных клинических Leptospira sp.
Mycobacterium tuberculosis
Та бли ца 6 Sarcoptes scabiei
ПЕРЕЧЕНЬ ПАРАЗИТОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ И КРЫС bovis, avium
I LCM Pathogene Dermatophytae
Yersinia pseudotuberculosis
Категория Мыши Крысы Toxoplasma gondii
Listeria monocytogenes
Sarcoptes sp. Sarcoptes sp. Streptobacillus moniliformis
I Pathogene dermatophytae Pathogene dermatophytae Erysipelothrix rhusiopathiae
Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii Облигатно паразитирующие
ARTHROPODS артроподы (arthropods):
ARTHROPODS
Myobia musculi PVM Gliricolla porcelli
Notoedres muris
Myocoptes musculinus Reo Type 3 Gyropus ovalis
Radfordia sp. Аналогично
II Nosopsyllus fasciatus II Sendai Theiler Все стадии цестод (cestodes)
Nosopsyllus fasciatus категории I
Leptopsylla segnis virus (GDVII) Echinococcus hydatidosus Тре-
Leptopsylla segnis
Polyplax sp. Simian virus 5 матоды (Trematodes):
Polyplax sp.
Radfordia sp. Psorergates simplex Fasciola hepatica
HELMINTHS Dicrocoelium lanceolatum
HELMINTHS
Cestodes Hymenolepis sp.
Cestodes Hymenolepis sp.
Hydatigera taeniaeformis larva
Hydatigera taeniaeformis larva
(Strobilocercus fasciolaris)
(Strobilocercus fasciolaris) Т абл ица 8
Multiceps serialis larva (Coenurus serialis) ПЕРЕЧЕНЬ БАКТЕРИЙ, ВИРУСОВ И ПАРАЗИТОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У ЗОЛОТИСТЫХ
Nematodes Nematodes ХОМЯЧКОВ
Aspiculuris tetraptera Aspiculuris tetraptera
Категории Бактерии Вирусы Паразиты
Syphacia obvelata Syphacia obvelata
Syphacia muris Syphacia muris Salmonella sp.
Strongiloides ratti Strongiloides ratti Leptospira sp.
Sarcoptes scabiei
Capillaria hepatica Capillaria hepatica Mycobacterium tuberculosis,
Pathogene
Trichuris muris Trichuris muris I bovis, avium LCM
Dermatophytae
Trichosomoides crassicauda Yersinia pseudotuberculosis
Toxoplasma gondii
Listeria monocytogenes
III PROTOZOA
Erysipelothrix rhusiopathiae
Trichomonas muris PROTOZOA
Hexamita muris Trichomonas muris Облигатно паразити-
Giardia muris Hexamita muris рующие артроподы
Chilomastix bettencourti Giardia muris PVM (arthropods):
Coccidiae Chilomastix bettencourti Reo Type 3 Demodex sp. virus
II Аналогично категории I
Eimeria sp. Coccidiae Eimeria sp. Theiler (GD VII) Notoedres sp.
Criptosporidium muris Hepatozoon muris SV-5-Simian virus 5 Все стадии цестод
Hepatozoon muris (cestodes):
Hymenolepis sp.
IV Encephalitozoon cuniculi Encephalitozoon cuniculi
108 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 109

Та бли ца 9 Унификация критериев оценки состояния здоровья лабораторных


ПЕРЕЧЕНЬ ВИРУСОВ, БАКТЕРИЙ И ПАРАЗИТОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У ЗОЛОТИСТЫХ
ХОМЯЧКОВ СПФ-КАТЕГОРИИ животных и стандартизация их при постоянном мониторинге статуса
дает возможность получения надежных и сравнимых результатов меди-
Вирусы Бактерии Паразиты
Viruses Bacterias Parasites
ко-биологических экспериментальных исследований.
В Таблицах 11–13 приведены инфекции цыплят, потенциально
Lymphocytic
choriomenineitis virus (LCM)
Bacillus piliformis Грибы – Fungi опасные для животных и человека и искажающие результаты экспери-
ментальной работы.
corynebactenuni Т абл ица 11
Thener’s virus (GD VII) munum (Kutschen. cryptococcus neo formans ПЕРЕЧЕНЬ НАИБОЛЕЕ ОПАСНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ПТИЦЫ,
Pseudotubercuiosis murium) ПОТЕНЦИАЛЬНО ОПАСНЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ
И ИСКАЖАЮЩИХ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Reo virus туре 3 Pasteureila multocida спирохеты splrochaetea
Биориск за- Контагиозность, сим-
sendai virus или parainfluenza Пути
Простейшие -protozoa ражения для птоматика и исход.
1 virus Возбудитель Заболевания зараже-
человека и Влияние на результа-
ния
Pasteureila pneumo-tropica животных ты экспериментов
Cytomegalo virus (herpesvirus) Toxopiasma gondii
(nomen dubium) Цыплята, ин-
Marek’s disease Воздуш- Антитела в желтке,
Mouse adenovirus salmonella sp. гельминты Helminths дейки, фазаны
herpesvirus Болезнь Марека но-ка- высококонтагиозное
и др. виды
Leukaeroia virus complex: (MD-V) пельный заболевание и смерть
животных
a. Hamster virus-с
Infectious
b. Bernhard virus Воздуш- Антитела в дейтериоп-
Pseudomonas aerueinosa syphacia SP laryngotracheitis Инфекционный Цыплята, фа-
с. Moloney virus но-ка- лазме, высококонтаги-
virus (ILT, ларинготрахеит заны
Mouse sarcoma virus msv пельный озное заболевание
herpesvirus)
(Moloney) (M)
Egg drop
Klebsieila pneumonae Trichosomodis nasasli Снижение яйце- Ораль- Возможны антитела и
syndrome virus Цыплята
носкости ный вирусы в яйцах
Polyoma virus Streptococcus sp. Hymenolepis sp. (EDS, adenovirus)
Pneumonia virus у мышей Возможны вирусы в
Staphylococcus aureus членистоногие -Arthropods Infectious Воздуш-
(PVM) Инфекционный яйцах или антитела в
bronchitis virus Цыплята но-ка-
бронхит желтке, высококонтаги-
Polyoma virus campylobacter sp. Demodex sp. (IB) пельный
озное заболевание
sv-5 (paramyxovirus) Proteus sp. Notoedres sp. Вирусы – в яйце, анти-
Avian encepha- Через
Цыплята, фа- тела – в желтке, высо-
Mycoplasmas litis virus (AE, Энцефаломиелит яйца,
H-l virus (Toolan virus) Sarcoptes scabiel заны коконтагиозное забо-
Leptospira sp. picornavirus) оральный
левание, смерть цыплят
Антитела – в желтке,
Та бли ца 10 Newcastle Цыплята, фа- Воздуш-
возможны вирусы в
ПЕРЕЧЕНЬ ВИРУСОВ, БАКТЕРИЙ И ПАРАЗИТОВ ДЛЯ ИНДИКАЦИИ У СВИНЕЙ Disease Болезнь Нью- заны, многие но-ка-
КОНВЕНЦИОНАЛЬНОЙ КАТЕГОРИИ
яйцах, высококонта-
virus (NDV, кастла виды птиц, пельный,
гиозное заболевание,
paramyxovirus) человек оральный
Вирусы Бактерии Паразиты смерть
Viruses Bacterias Parasites Infectious bursitis Антитела – в желтке,
virus (non- Инфекционный Ораль- вирусы – в желтке, вы-
Aphthae virus Цыплята
classified RNA бурсит ный сококонтагиозное забо-
Picornovirus O, A, С, SAT-1, Erysipelothrix insidiosa Toxoplasma gondii virus) левание, смерть цыплят
SAT-2,SAT-3,Asia-l)
Комплекс лейко-
Вирус гриппа африканских свиней зов: лимфоидный Цыплята, фа- Вирусы – в яйце, анти-
Воздуш-
(iridovirus) Balantidinum coil Avian leucosis лейкоз, миелоблас- заны, в редких тела – в яйце, высоко-
Leptospira SP. но-ка-
Вирус гриппа свиней (Thogatoviras) Malstrem virus (ALV) тоз, эритроблас- случаях другие контагиозное заболева-
пельный
Visicular exanthema virus тоз, саркоматоз, виды птиц ние, смерть
остеопетроз
110 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 111

1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
Fowl-pox Контагиоз-
Haemophilus Воздушно-ка- Высококонтагиоз-
virus (pigeon-, ный куриный Цыплята, индейки
Цыплята (дру- paragallinarum пельный ное заболевание
canary-, chicken-, Наличие антител и ринит
гие виды птиц
pheasant-, quail- вирус в яйце точно не Высококонтагио-
Оспа птиц в зависимости Кожный
или Agapornidae- доказано, высококонта- зное заболевание,
от штамма Chlostridium Некротичес- Различные виды
pox в зависи- гиозное заболевание Оральный в большинстве
вируса) perfringens кий энтерит животных, человек
мости от вида случаев латентное
поражения) течение, смерть
Антитела – в желтке, Высококонтагио-
Цыплята, гуси, Воздуш-
Avian influenza возможно наличие зное заболевание,
Не определенные индейки, фаза- но-ка-
A virus вирусов в яйце, высо- Колибацил- Различные виды особенно в случае
заболевания ны и др. виды пельный, Escherichia coli Оральный
(orthomyxovirus) коконтагиозное забо- лез животных, человек стресса, важно как
птиц оральный
левание вторичное проник-
Цыплята, ин- новение
Синдром пониженного
Paramyxovirus дейки, различ- Воздуш- Низкая распростра-
Не определенные всасывания, артрит, Listeria Различные виды
Parainfluenza ные виды птиц но-ка- Листериоз Оральный ненность заболе-
заболевания тендосиновиит, мио- monocytogenes животных, человек
virus 2 и 3 и млекопитаю- пельный вания
кардит у гусят
щих, человек Оральный, при Возможно наличие
Цыплята, различ-
определенных возбудителя в яйце,
Mycobacterium Птичий ту- ные виды птиц и
обстоятель- высококонтагиоз-
Та бли ца 12 avium беркулез млекопитающих,
ствах воздуш- ное заболевание и
ПЕРЕЧЕНЬ НАИБОЛЕЕ ОПАСНЫХ МИКОПЛАЗМЕННЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ человек
ЛАБОРАТОРНОЙ ПТИЦЫ, ПОТЕНЦИАЛЬНО ОПАСНЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ
но-капельный смерть
И ИСКАЖАЮЩИХ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Кожный, воз- Изменения кожи,
Staphylococcus Стафилокок- Цыплята, индейки,
душно-капель- артриты, иногда
Контагиозность, aureus коз другие виды птиц
ный септицемия
Биориск заражения симптоматика и
Возбудитель Заболевания для человека и жи- Пути заражения исход. Влияние на Через укусы
Индейки, крысы,
вотных результаты экспери- Птичий крыс (содоку
Streptobacillus мыши, морские Искажение резуль-
ментов стрептоба- или хей-
moniliformis свинки, кролики, татов эксперимента
циллез верхиллская
Наличие возбуди- человек
лихорадка)
Mycoplasma Микоплаз- Цыплята, индейки, Воздушно-ка- теля в яйце, высо-
gallisepticum моз фазаны, перепела пельный коконтагиозное
заболевание Т абл ица 13
ПЕРЕЧЕНЬ НАИБОЛЕЕ ОПАСНЫХ ИНВАЗИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛАБОРАТОРНОЙ
Mycoplasma Инфекцион-
Цыплята, индейки, Высококонтагиоз- ПТИЦЫ, ПОТЕНЦИАЛЬНО ОПАСНЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ И ИСКАЖАЮЩИХ
synoviae ные синови- Оральный РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
фазаны, голуби ное заболевание
M. meleagridis иты
Не опреде- Контагиозность, симпто-
Mycoplasma Цыплята, индейки, Воздушно-ка- Возможно наличие Биориск зараже-
ленные забо- Пути зара- матика и исход. Влияние
gallinarium фазаны, голуби пельный возбудителя в яйце Возбудитель Заболевания ния для человека
левания жения на результаты экспери-
и животных
ментов
Высококонтагио-
Pasteurella Птичья хо- зное заболевание Высококонтагиозное
Цыплята, индейки Оральный Цыплята, индей-
multocida лера и смерть только в Eimeria spp. Кокцидоз Оральный заболевание, слабость,
ки, голуби, гуси
случае стресса смерть
Возможно наличие Энтерит, гепатит. Иска-
Histomonas Цыплята, ин-
возбудителя в яйце, Гистомониаз Оральный жение результатов экспе-
Белая ба- Цыплята, почти все meleagridis дейки
Salmonella высококонтагиоз- римента
циллярная птицы, млекопита- Оральный Цыплята и другие Высококонтагиозное
gallinarium ное заболевание и Ascaridia sp. Аскаридоз Оральный
диарея ющие птицы заболевание, слабость
смерть, особенно у
цыплят
112 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 113

1 2 3 4 5 выяснения микробиологического статуса животных. Таким образом, эти


Оральный, исследования могут проводиться с целью обнаружения как патогенов,
Цыплята, индей- через яйцо так и непатогенов, то есть микробов, являющихся частью нормальной
Капилляри- Высококонтагиозное
Capillaria sp. ки, фазаны и дру- или проме-
доз
гие виды птиц жуточного
заболевание, слабость флоры. В микробиологический контроль необходимо также включать
хозяина обследование на наличие паразитов.
Heterakis Цыплята и другие Высококонтагиозное Количество животных, у которых необходимо взять пробы для мик-
Гетеракиоз Оральный
gallinae виды птиц заболевание, слабость робиологического контроля, зависит от уровня инфицирования популя-
Диспноэ, апатия. Иска- ции. Например, в случае, если показатель инфицирования превышает
Syngamus Цыплята и другие
Сингамоз Оральный жение результатов экспе-
trachea виды птиц 50%, для обнаружения возбудителя достаточно взять анализы у несколь-
римента
Оральный
ких животных, но если уровень инфицирования ниже 20%, возбудителя
Солитерная Цыплята, индей- (проме- Высококонтагиозное можно найти, только обследовав, как минимум, 20 особей. В случае, если
Davainea sp.
инвазия ки, голуби жуточный заболевание, слабость искомые патогены обладают средними и высокими показателями инфи-
хозяин) цирования 20–50%, способными повлиять на результаты исследования,
Оральный достаточно обследовать 10 особей.
Hymenolepis Глистная Цыплята, индей- (проме- Высококонтагиозное
sp. инвазия ки, голуби жуточный заболевание, слабость С другой стороны, контроль колоний животных рекомендуется прово-
хозяин) дить каждые 2–3 месяца, поскольку высокий уровень антител в организме
Глистная
Цыплята, индей- Зуд, анемия, раздражение животного сохраняется в течение нескольких месяцев после инфициро-
Raillietina sp. ки, различные Оральный кожи, высококонтагиоз- вания. Таким образом, исследование присутствующих антител является
инвазия
виды животных ное заболевание
важной процедурой диагностики в микробиологическом контроле.
Микробиологическое обследование и контроль, а также диагнос-
Микробиологический мониторинг тика заболеваний представляют ряд трудностей ввиду ограниченного
доступа к необходимому оснащению лабораторий и реагентам, включая
Микробиологический статус животного также является определя- качественные питательные среды и антигены для серологических тес-
ющим для результатов эксперимента. Микробиологический контроль тов, а также по причине недостаточного количества квалифицированных
лабораторных животных посредством ПЦР-реакций, посева флоры на специалистов. Создание диагностических лабораторий во всех местах
питательных средах, серологических и микроскопических исследований, содержания лабораторных животных представляется нецелесообразным.
преследует обычно 2 цели: диагностику заболеваний и контроль микро- Вместо этого целесообразно использовать те центры, которые проводи-
биологического статуса. ли бы микробиологические обследования, консультировали по вопросам
Основой диагностики заболевания является микробиологическое осуществления контроля качества животных и осуществляли подготовку
обследование, но в ходе ее также учитывается и другая информация, ка- сотрудников для центров лабораторного животноводства. Обследование
сающаяся клинической картины, репродуктивных функций и патоло- на присутствие паразитов может проводиться на месте, поскольку его
гий. Образцы микробов и пробы, которые необходимо взять у животных, осуществление проще и более экономично, чем тесты, основанные на
определяются соответственно клиническими и патологическими откло- посевах и серологических исследованиях, хотя возможно использование
нениями. Время проведения контроля не фиксировано и зависит от про- простых наборов для серологических тестов.
явления заболеваний. Для проведения микробиологического контроля могут применяться
Микробиологический мониторинг представляет собой процесс, различные методики. В общем виде методы проверки могут быть сведены
призванный периодически подтверждать неизменность микробиологи- к некоторым обязательным моментам.
ческого статуса животного или группы животных по сравнению с ожида- Использование животных-«индикаторов» с известным микробиоло-
емыми показателями. гическим статусом. Животных помещают в ту же окружающую среду, в
В этих целях у случайно выбранных животных из общей популяции которой находится проверяемая популяция, и периодически их умерщ-
берутся пробы для выявления определенных видов микробов с целью вляют и обследуют. Голые (атимичные) мыши являются прекрасными
114 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 115

индикаторами, поскольку у них присутствует иммунодефицит и они осо- Т абл ица 14


СРАВНИТЕЛЬНЫЕ МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
бенно подвержены воздействию патогенов. Но данные мыши не подхо-
дят для обнаружения изменений в серологическом титре, который мо- Метод Преимущества Недостатки
жет указывать на наличие вирусов, поскольку антигенный ответ у голых
Трудоемкость, длительность.
мышей отсутствует. Для определения серологического титра необходимо Простота. Прямое выявление
Низкая чувствительность. Невоз-
использовать животных с соответствующим иммунным статусом. патогенных микроорганизмов.
Микроскопическое можность различения сходных
Возможность различения мик-
Выборка животных из популяции колонии для проведения лабораторных исследование
роорганизмов по морфологи-
микроорганизмов. Необходимость
исследований. Это – общее посмертное, микробиологическое и гистоло- высокой квалификации персонала
ческим признакам
для интерпретации результатов
гическое обследование, выявление паразитов и т.д. Степень и детальность
проводимой проверки зависит от величины расходов вида и качества Обнаружение только жизне- Длительность анализа, высокая
оборудования. Частота проведения проверок и количество животных, ис- Культивирование способных микроорганизмов. стоимость. Разные линии животных
in vitro для имму- Возможность определения дают разные ответы. Потеря жизне-
пользуемых в ходе нее, зависят от многих факторов; шансы обнаружить низации мышей вирулентности и инфекцион- способности в организме животно-
инфекцию зависят от количества проверенных животных по отношению ности. го. Использование животных
к общему количеству особей в колонии (в процентном выражении), а
Простота, непродолжитель-
также от степени распространения инфекции среди животных. ность анализа. Возможность Не всегда специфичен. Невозмож-
Плановая проверка животных, которые умерли или были умерщвлены, Иммунохимичес-
автоматизации. Возможность ность разграничения острой и ла-
кие методы
включая особей, использовавшихся для экспериментов. Такая проверка по- тестирования большого числа тентной форм инфекции
зволит обнаружить инфекции или повреждения, угрожающие здоровью образцов.
колонии и качеству проводимых экспериментов. Простота, быстрота, высокие
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это эффективный способ чувствительность и специфич-
получения in vitro большого числа копий специфических участков моле- ность. Прямое обнаружение
ДНК-возбудителя. Возмож- Невозможность различить живые и
кулы ДНК. Их амплификация – иногда в миллионы раз – осуществля- Полимеразная цеп- ность различения разных ви- мертвые микроорганизмы. Возмож-
ется в ходе трехэтапного циклического процесса. Для ПЦР необходимы: ная реакция – ПЦР дов патогенов. Независимость ность получения ложноположи-
1) два синтетических олигонуклеотидных праймера, комплементарные результатов от предыдущих тельных результатов
инфекций. Не требует жизне-
соответствующим участкам ДНК-мишени; 2) ДНК-мишень длиной от
способности патогенов. Воз-
100 до ∼35 000 пар нуклеотидов; 3) термостабильный фермент ДНК-по- можность автоматизации
лимераза, который осуществляет синтез новой цепи ДНК; 4) четыре де-
зоксирибонуклеотида. При диагностике различных заболеваний метод ПЦР все чаще ис-
Типичная ПЦР-амплификация состоит в многократном повторении пользуется наряду с такими традиционными методами, как бактериоло-
из следующих трех реакций. Денатурация. Образец ДНК выдерживают гический и иммунохимический, особенно в таких областях клинической
при температуре 95оС в течение по крайней мере 1мин. Помимо ДНК, в диагностики, как: ранняя диагностика вирусных и бактериальных ин-
реакционной смеси содержатся в избытке два праймера, термостабильная фекций (в т.ч. хламидиоза, лептоспироза, листериоза, бруцеллеза, лейко-
ДНК-полимераза и четыре дезоксирибонуклеотида. Отжиг. Температу- за); диагностика труднокультивируемых, некультивируемых и персисти-
ру смеси медленно понижают до ∼55оС, при этом праймеры спаривают- рующих форм патогенных микроорганизмов; диагностика хронических
ся с комплементарными последовательностями ДНК-мишени. Синтез. и латентных инфекций; идентификация возбудителей с высокой анти-
генной изменчивостью; идентификация внутриклеточных паразитов (в
Температуру повышают до ∼72оС – величины, оптимальной для работы
т.ч. возбудителя токсоплазмоза).
ДНК-полимеразы. Начинается синтез новой комплементарной цепи
В последние годы ПЦР активно вытесняется современными про-
ДНК, инициируемый праймерами. Все реакции проводят в пробирках,
теомными, геномными и нанотехнологическими подходами и метода-
погруженных в термостат (амплификатор). Смена температурного ре-
ми. Они, несомненно, дают меньше ложноположительных откликов, но
жима и его поддержание осуществляются автоматически. Каждый цикл
ограничиваются высокой стоимостью оборудования и реактивов.
длится 3–5 мин.
116 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 117

Бактериологические исследования случайные скрещивания (генетическая контаминация). И если мутации


приводят к образованию новых линий или сублинейной дивергенции,
Бактериологические исследования проводятся культуральными ме- то случайное скрещивание ведет к необратимой потере гомозиготности,
тодами с использованием дифференциальных и обогащенных питатель- то есть к потере инбредного статуса и соответствующих фенотипических
ных сред с последующей биохимической идентификацией бактерий и качеств каждого отдельно взятого животного. Опасность генетической
серологическим типированием. контаминации особенно велика, когда в одном помещении содержатся
Среди паразитарных болезней можно выделить болезни, вызывае- несколько линий с одинаковой окраской шерсти.
мые клещами, гельминтами, простейшими и грибами. Данные заболева- Эффективным инструментом контроля генетической однороднос-
ния относятся к антропозоонозам. Методы обнаружения эктопаразитов ти животных инбредных линий являются ДНК-маркеры, основанные
включают макроскопический осмотр, прямой стереомикроскопический на методе полимеразной цепной реакции. Основными преимуществами
осмотр, микроскопия соскобов кожи, идентификация обнаруженных па- таких маркеров является их высокая степень диспергированности по ге-
разитов. Методы исследования на наличие эндопаразитов включают пол- ному, независимость от возраста и физиологического состояния живот-
ное вскрытие животного, макроскопический осмотр вскрытых органов и ного, а также простота, надежность и воспроизводимость лабораторных
их содержимого, микроскопию нативных препаратов, метод декантиро- манипуляций, необходимых для выявления таких маркеров. При ампли-
вания, флотации, метод приготовления постоянно окрашенных препа- фикации геномной ДНК мышей разных линий с определенными прай-
ратов и их микроскопию, идентификацию паразитов. С появлением по- мерами образуется уникальный для каждой линии электрофоретический
лимеразной цепной реакции (ПЦР) отпала необходимость в выделении спектр продуктов амплификации, характеризующий геномную консти-
возбудителя и очистке его ДНК – для анализа можно использовать очень туцию. Эти данные можно использовать для мониторинга генетической
небольшое количество неочищенного биологического материала хозяи- стандартизации инбредных линий. Микробиологический статус лабора-
на. Преимущества и недостатки основных методов диагностики, исполь- торных животных необходимо строго контролировать. В настоящее вре-
зуемых в современной клинической практике, приведены в Таблица 14. мя растет количество инфекционных агентов, которые можно диагнос-
тировать с помощью ПЦР, в том числе вирусы, бактерии, простейшие
микроорганизмы.
Генетический мониторинг Последовательность генома мыши была опубликована в декабре
2002 г. Это имеет большое значение, так как геном мыши составляет та-
Лабораторных животных используют для проведения исследований кое же число генов, как и геном человека, причем 99% этих генов, по-ви-
в области онкологии, токсикологии, вирусологии, иммунологии, транс- димому, идентичны, а 96% расположены в том же порядке. Это значит,
плантологии, физиологии, сравнительной генетики и многих других что гены болезней, идентифицированные у мыши, могут быть перенесе-
областях биологии и экспериментальной медицины. Очевидно, что для ны на генную карту человека. Можно провести экспериментальные скре-
решения таких разнохарактерных задач необходимо иметь животных с щивания между мышами с различными признаками, а затем очень быст-
определенными биологическими особенностями – для каждой задачи ро начать изучение полученного потомства. Можно получить мутантных
своими. Выведение инбредных линий позволило получить таких живот- мышей с определенными генными дефектами, фенотип которых можно
ных. Основным достоинством инбредной линии является то, что все жи- потом изучать.
вотные внутри этой линии гомозиготны и однородны по генотипу. Ис- За последние годы было получено большое количество мышей – му-
пользование инбредных животных в эксперименте позволяет получать тантов, у которых мутации, вызывающие потерю или приобретение ка-
воспроизводимые результаты и повышает эффективность и надежность кой-либо функции, находились в специфических генах, представляющих
биологических исследований. интерес с точки зрения медицины. Эти так называемые «нокаут» – или
Генетическая однородность животных в пределах одной инбредной «нокин»-мутанты были сконструированы методами генной инженерии.
линии поддерживается путем применения специальной методики разве- В результате мутации инактивируется один-единственный ген. Так были
дения таких линий. Но даже при тщательном соблюдении всех правил, созданы многие полезные модели моногенных болезней, включая синд-
при разведении инбредных животных существует опасность нарушения ром Леш–Нихана, кистозный фиброз, β-талассемию и синдром слабой
гомозиготности. Причиной этого могут быть спонтанные мутации или Х-хромосомы.
118 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 119

В других случаях с использованием антисмысловой РНК и аналогич- сокращенное обозначение места выведения линии и масти (NZB- и
ных подходов был достигнут эффект утраты функции генов. Модель диабе- NZW-новозеландские черные и белые) или назначения линии (YT – юр-
та была получена путем специфичной экспрессии рибозима, направленно- ловская тестерная). В большинстве же случаев перевод обозначений ли-
го против мРНК глюкокиназы в β-клетках поджелудочной железы мыши. ний на русский язык не имеет смысла.
Болезнями, вызываемыми доминантными мутациями, приводящи- Линии, происходящие от общих предков, но разделенные при передаче
ми к приобретению функции, могут быть моделированы просто перено- животных в другую лабораторию на 8–19 поколении братско-сестринского
сом гена с эквивалентной мутацией в геном мыши с помощью обычных инбридинга (т.е. пока мыши еще сохраняют некоторую гетерозиготность)
технологий переноса генов. Например, мышиные модели болезни Альц- и поддерживаемые раздельно в течение последующих поколений, приня-
геймера были получены суперэкспрессией гена белка – предшественни- то считать сублиниями. Сублинии, кроме того, образуются при передаче
ка амилоида, а модель синдрома Вернера (преждевременного старения) – племенного материала готовой инбредной линии в другие лаборатории. В
путем экспрессии доминантно-негативного мутанта гена WRN. Одним этом случае в результате мутаций при длительном раздельном размноже-
из первых примеров моделирования болезни, связанной с приобретени- нии групп животных одной линии накапливаются генетические различия
ем функции, – экспрессия в мышах мутантной формы прионного белка, между ветвями исходной линии, приводящие к биологическим отличиям.
моделирующая нейрогенеративный синдром Герштмана – Штрессле- Так, существующие в мировой коллекции четыре сублинии линии СЗН
ра – Шейнкера (GSS). отличаются друг от друга по онкологической характеристике, пять субли-
ний мышей C57BL отличаются друг от друга и от исходной целым рядом
биологических особенностей и гистологически несовместимы. Поэтому
Стандартизация линий лабораторных мышей
не менее важно соблюдение правил написания сублиний. Сублинию обо-
Широкое распространение инбредных линий мышей по лаборато- значают также латинскими буквами через косую черту после написания
риям мира, а также создание новых линий потребовали разработки еди- основной линии. Символы сублиний чаще образуются из сокращения
ных правил для их обозначения. В связи с этим был создан Международ- фамилии исследователя или названия лаборатории, где сублиния поддер-
ный комитет по стандартизации генетической номенклатуры мышей, живается. Первая буква этого обозначения – прописная, последующие –
куда вошли ученые разных стран. В 1952 г. Комитет впервые опубликовал строчные. Так, символ СВА/Са обозначает сублинию Картера (Carter) ли-
правила стандартного обозначения линий мышей. Начиная с 1960 г. эти нии СВА. Линии: CC57BR/Mv, CC57W/Mv – выведены Н.Н.Медведевым
правила и списки инбредных линий мышей через каждые 4 года публи- (Mv). Если новая сублиния образовалась путем передачи какой-либо суб-
куются в журнале «Cancer research». линии из одной лаборатории в другую, то старый символ сохраняется и
В соответствии с рекомендацией Комитета по стандартизации ин- к нему добавляется новый. Например, CBA/CaLac обозначает сублинию
бредная линия может быть зарегистрирована как стандартная, если жи- Kaртера, поддерживаемую в английском Центре лабораторных животных
вотных этой линии размножали братско-сестринским инбридингом не (Lac). Число или строчная буква также могут быть использованы как сим-
менее 20 поколений; допускается скрещивание матерей с сыновьями или волы сублиний. Их положение относительно других символов отражает
отцов с дочерьми. историческую последовательность разделения сублиний. Строчные бук-
Обозначения инбредных линий рекомендуется писать заглавными вы, следующие непосредственно за косой чертой, означают, что сублинии
латинскими буквами, без снижений или повышений. При выборе сим- разделены до достижения полной гомозиготности. Например, обозначе-
вола для новой линии желательны более короткие обозначения, которые ние сублиний C57BR/a и C57BR/cd показывает, что они разделены после
необходимо сверять с опубликованными списками линий во избежание девяти поколений инбридинга. Обычно число или строчные буквы не ис-
повторений. пользуются для обозначения сублиний, разделенных после 20 поколений
В названии давно существующих линий мышей нет общих правил. инбридинга. Исключение составляют давно применяемые символы, вве-
Часто оно появлялось в ходе работы по выведению линии, складывалось денные до выработки правил, например DBA/1 и DBA/2.
из символов мутантных генов окраски (DBA–dba), обозначения масти Совершенно необходимо в публикациях употреблять хотя бы один
животного и индивидуального номера (C57BL). Название некоторых но- раз полное название линии со всеми сублинейными символами. Мно-
вых линий представляет собой символы мутантных генов (HRS, GLF), гие сублинии имеют хорошо установленные различия. Например, мыши
120 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 121

сублинии CBA/J несут ген дегенерации ретины, в то время как линии пературе в жидком азоте. Эти бластоцисты могут затем в любое время быть
СВА/Са такого гена не имеют. Эти же сублинии различаются по радио- имплантированы самкам после расконсервирования для восстановления
чувствительности, гистологически несовместимы между собой и отли- линии. Эта методика начинает осваиваться центрами, поддерживающи-
чаются по крайней мере по пяти полиморфным локусам. Обозначение ми большие коллекции линий. Учитывая перспективность данного мето-
инбредной линии, несущей мутантный ген, состоит из символа исходной да сохранения коллекции линий и возможное широкое распространение
линии, символа сублиний, следующего за ним дефиса и символа гена, в будущем, Комитет по стандартизации генетической номенклатуры уже
набираемого курсивом. Например, BALB/cY-wal означает, что сублиния опубликовал правила обозначения линии, подвергнувшейся этой опера-
имеет рецессивную мутацию (waved alopecia). Иногда мутантный ген под- ции. В соответствии с этими правилами сохранение линии в заморожен-
держивается в гетерозиготном состоянии, это показывают включением ном состоянии будет обозначаться добавлением буквы «Р» (от английского
«preservation»). Если после расконсервирования эмбрион имплантирован
знака (+): C57BL/6Y-+/Wy; 129/Re-+/dy. Иногда в обозначении линии
самке матери той же линии, что и эмбрион, то других дополнений в обоз-
есть ряд символов, отражающих различные манипуляции, которым жи-
начении не требуется. Если же мать другой линии, то эта линия может
вотные данной линии подвергались. Так, одним из эффективных спосо-
быть указана так же, как и в случае пересадки яйцеклеток. Таким образом,
бов избавления линий от носительств болезнетворных микроорганизмов символы C57BL/6реСВА/Н обозначают, что эмбрионов мышей линии
является вскармливание мышат, полученних кесаревым сечением, под C57BL/6 хранили в законсервированном состоянии и затем вырастили в
самками, свободными от патогенной микрофлоры, в гнотобиотическом самках линии СВА/Н. Лаборатория или исследователь, хранившие линию
изоляторе. Того же эффекта можно добиться пересадкой оплодотворен- в виде законсервированных бластоцист, могут быть указаны обычным до-
ных яйцеклеток. В некоторых случаях применяется пересадка яичников. бавлением сублинейного символа C57BL/6peCBA/HBy, означающего, что
Сублинии, выделенные при помощи вскармливания кормилицами, обо- манипуляции с линией произведены Бейли (Bailey).
значаются добавлением буквы «f» (от английского «fostered»). Линия, в При обозначении инбредного возраста линий в круглых скобках
которой была произведена пересадка яйцеклеток или яичников, анало- вместе с буквой «Р» указываются годы заморозки и расконсервирования.
гично обозначается добавлением букв «e» (от английского «egg») или «о» Например, F37+(P1975-1977)+F16 означает, что линия была законсер-
(от ova). Например, символ АеВ означает, что яйцеклетки мышей ли- вирована на 37-м поколении в 1975 г., хранилась до 1977 г., затем была
нии А были пересажены самкам мышей линии C57BL. расконсервирована и прошла еще 16 поколений инбридинга.
Иногда используются составные сложные обозначения линий, под- Можно видеть, что полные обозначения линий несут много инфор-
вергшихся каким-либо манипуляциям или введению гена. Порядок эле- мации. Знание правил обозначения дает научному работнику, читающе-
ментов в таком обозначении соответствует истории линии. DBA/2eB – в му статью, дополнительную информацию без нежелательного в совре-
этом положении символ линии «2» означает, что были пересажены сам- менных статьях многословного описания и характеристик используемых
кам C57BL яйцеклетки именно DBA/2. Если же символ сублинии сто- объектов. Вместе с тем иногда возникает необходимость сокращения
ит вслед за символом ее получения или введенного гена, то он означает длинных обозначений. Особенно это нужно, когда речь идет о конгенных
исследователя или лабораторию, где была произведена соответствующая линиях, полученных скрещиванием, или о гибридах. Для стандартных
манипуляция. DBA/2eB/De означает, что Деринджер получил эту субли- широко распространенных линий мышей рекомендуются следующие со-
нию путем пересадки яйцеклеток мышей линии DBA/2 самкам C57BL. кращения (Таблица 15).
Т абл ица 15
Инбредный возраст линии определяется количеством поколений ОБОЗНАЧЕНИЯ НЕКОТОРЫХ РАСПРОСТРАНЕННЫХ ЛИНИЙ МЫШЕЙ
братско-сестринского инбридинга, обозначают его буквой «F» и пишут
Полное название ли- Полное название
в круглых скобках – A(F87). Если нет точных данных о количестве по- Сокращение Сокращение
нии линии
колений инбридинга и известна только часть истории линии (например, AKR AK C57BR BR
только число поколений инбридинга в лаборатории, в которой эта линия BALB/c C C57L L
поддерживается последнее время), то неизвестную часть истории линии С3Н C3 DBA/1 D1
означают знаком вопроса – 101/Н (F?+22). C57BL B DBA/2 D2
В последние годы разработана методика сохранения линий животных C57BL/6 B6 HRS/J HR
путем замораживания бластоцист мышей и хранения их при низкой тем- C57BL/10 B10 RIII R3
122 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 123

В соответствии с этим правилом гибриды F1AKR/J × DВА/2J будут Глава 6


записаны как AKD2F1. Следует обратить внимание на то, что во всех
записях скрещиваний или обозначениях гибридов символ линии самки
пишут на первом месте. Международным Комитетом по стандартизации
Технология содержания лабораторных
номенклатуры инбредных линий [Festing, 1980, Staats, 1980] зарегистри- животных
рованы следующие сублинейные символы линий, полученных в учреж-
дениях СССР:
Icgn – Институт цитологии и генетики Новосибирского отделения АН
СССР (ныне – Институт цитологии и генетики СО РАН),
Iem – Институт экспериментальной медицины АМН СССР (ныне НИИ
экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург),
Igg – Институт общей генетики АН СССР (ныне Институт общей гене-
тики имени Н.И. Вавилова РАН, Москва),
Kv – отделение «Крюково» Центрального питомника АМН СССР (ныне
филиал «Андреевка» НЦБМТ РАМН, Московская область),
Mv – Медведев Н.Н. Этим символом обозначаются линии, выведенные Получение надежных и воспроизводимых результатов эксперимента
им или полученные от него на размножение, с использованием лабораторных животных возможно только при соблю-
Rap – питомник «Рапполово» АМН СССР (ныне питомник «Рапполово» дении всех правил их содержания.
РАМН, Ленинградская область),
Sto – питомник «Столбовая» АМН СССР (ныне филиал «Столбовая»
НЦБМТ РАМН, Московская область), Основные правила содержания лабораторных
Y – Научно-исследовательская лаборатория экспериментально-биоло- животных
гических моделей АМН СССР (ныне Научный центр биомедицин-
ских технологий РАМН – НЦБМТ РАМН, Московская область). Лабораторным животным в питомнике и ЭБК должны быть обеспе-
чены:
Процедуры мониторинга здоровья мини-свиней – полноценное кормление и уход;
– поддержание нормального состояния здоровья;
Процедуры мониторинга включают желудочно-кишечный тракт, – содержание в соответствующих для каждого вида нормативных усло-
тимус, щитовидную и паращитовидную железы. Светлогорские мини- виях;
свиньи свободны от любых паразитов, бактериальных инфекций и ви- – возможность удовлетворения физиологических и поведенческих по-
русных болезней. Гистопатология находит спонтанные возбудители в требностей;
нескольких случаях, но обычно локально и умеренно. Наиболее свежие – ежедневный контроль условий содержания;
и наиболее широкие коллекции контрольных данных опубликованы в – быстрое устранение недостатков и факторов, могущих повлечь за со-
литературе. В частности, найдены 4 главных спонтанных проявления: бой стресс и страдания животных.
1) артериит (рассеянный, местный, некротичный/фибриноидный), В каждом помещении питомника и ЭБК рекомендуется содержать
2) тубулярная атрофия/гипоплазия в яичках (местно), 3) серозная атро- животных только одного вида и участвующих в одном исследовании, за
фия (клетки костного мозга, главным образом в бедренной кости/боль- исключением отдельных случаев, предусмотренных условиями экспери-
шеберцовой кости) и 4) геморрагический синдром. Этиология всех че- мента, на каждой клетке (боксе, вольере) должна быть этикетка с указа-
тырех проявлений неизвестна. Тромбоцитопения распространена при нием данных о животном и другой специальной информацией.
геморрагическом синдроме и, вероятно, связана с иммунокомплексом, Обслуживание одним работником животных разного вида в питом-
сформированным условиями и отмеченным дегенеративными/регене- нике не допускается. В случае обслуживания одним рабочим небольших
ративными мегакариоцитичными изменениями. групп животных разных видов в ЭБК следует соблюдать следующую по-
124 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 125

следовательность при работе: морские свинки, мыши, крысы, кроли- (Совет Европы, Страсбург, 2004 г.), следует придерживаться нормативов
ки. Такая последовательность обслуживания обусловлена чувствитель- содержания лабораторных животных.
ностью лабораторных животных к появлению возможной инфекции. Рекомендуемые температурные режимы содержания животных в
Предпочтительно постоянное закрепление персонала за определен- разных условиях представлены в Таблице 18. В особых случаях для моло-
ными помещениями и для выполнения определенных технологических дых или голых особей может требоваться содержание при более высоких
процедур. За каждой секцией или однородной группой помещения на- температурах.
значается ответственное лицо, несущее административную ответствен-
Все ввозимые в страну животные должны пройти карантин согласно
ность за соблюдение правил содержания и режима работы.
национальному законодательству (Таблица 19). Сроки карантина в усло-
Норма обслуживания зависит от системы содержания, вида живот-
ных, уровня механизации производства. Численность персонала может виях лаборатории обычно определяются соответствующим лицом исходя
быть определена на основе норм, приведенных в Таблицах 16 и 17. из обстоятельств, этим лицом обычно является назначенный учреждени-
Та бли ца 16 ем ветеринар.
НОРМА ОБСЛУЖИВАНИЯ КОНВЕНЦИОНАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ НА ОДНОГО РАБОТНИКА Т абл ица 18
РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ТЕМПЕРАТУРНЫЕ РЕЖИМЫ СОДЕРЖАНИЯ ЖИВОТНЫХ В КЛЕТКАХ,
Вид животных Количество голов Количество клеток ВОЛЬЕРАХ И ВНУТРЕННИХ ЗАГОНАХ
Мыши до 2000 200
Вид животных или группы видов Оптимальная температура °С
Крысы 1000 100
Мышь 20–26
Хомяки 1000 100
Крыса 20–26
Морские свинки 500 100
Сирийский хомяк 20–26
Кролики 120 120
Мышки-полевки 20–26
Собаки 25–30 25–30
Морская свинка 20–26
Кошки 60–70 –
Перепелиные 20–24
Мини-свиньи 25–30 –
Кролик 15–21
Птицы 80–120 –
Кошка 18–29
Та бли ца 17 Собака 15–21
НОРМА ОБСЛУЖИВАНИЯ УЛУЧШЕННЫХ КОНВЕНЦИОНАЛЬНЫХ И СПФ ЖИВОТНЫХ Хорек 15–21
НА 1 РАБОТНИКА
Птицы (курицы) 16–27
Вид животных Вес тела Тип содержания Количество голов Овцы и бараны 10–24
Мыши 16–23 г Клетки 1250 Мини-свиньи 10–24
Крысы 180–220 г Клетки 600 Лошади, жеребята 10–24
Хомяки 80 г Клетки 600
Морские свинки 270–350 г Клетки 415 Т абл ица 19
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ КАРАНТИННОГО ПЕРИОДА В УСЛОВИЯХ
Кролики 2-3 кг Клетки 100 ЛАБОРАТОРИИ
<20 кг Боксы
Собаки 24–18 Продолжительность карантина,
>20 кг Боксы Вид
дней
Кошки 2-3 кг Клетки Колония 50–60
Мышь 5–15
Мини-свиньи 20–30 кг Клетки Боксы 21–22
Крыса 5–15
Птицы 1,5 кг Индивид. содержание 80
Мышки-полевки 5–15
Морская свинка 5–15
Требования к содержанию животных Сирийский хомяк 5–15
Кролик 20–30
В соответствии с Европейской конвенцией по защите позвоночных Кошка 20–30
животных, используемых в экспериментальных и других научных целях Собака 20–30
126 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 127

Высота клетки представляет собой вертикальное расстояние между животное нельзя держать в клетке без разминки. Пространство для раз-
полом клетки и ее верхней горизонтальной частью. минки должно быть достаточно большим, чтобы обеспечивать собаке
На всех стадиях процедур необходимо обеспечить животному жиз- свободу движений. Клетки с сетчатым полом не следует использовать для
ненное пространство согласно этой таблице и учесть потенциально воз- содержания собак, кроме случаев, когда этого требует эксперимент.
можный рост животного (Таблицы 20–23). Ввиду большого различия собак по высоте в холке и отсутствия ста-
Содержание кошек в клетках (Таблица 23) должно быть строго огра- бильной зависимости между высотой и весом, минимальную высоту клет-
ничено. Их необходимо выпускать размяться хотя бы раз в день, когда ки нужно определять исходя из высоты собаки в холке (Таблицы 24, 25).
это не мешает процедурам. Вольеры для кошек должны быть оборудова- Обычно минимальная высота клетки представляет высоту собаки в хол-
ны поддоном для туалета, широкими полками для отдыха и предметами, ке, помноженную на 2.
подходящими для лазания и стачивания когтей. Все вольеры должны быть оборудованы эффективной дренажной
При подсчете минимальной площади клетки можно учитывать системой.
площадь полок. Минимальная площадь клетки для кошки и подстилки Мини-свиней не следует содержать в клетках; в случае, если того
включает в себя площадь гнезда для котят. требует эксперимент, время содержания в клетке должно быть сведено
Собак не следует содержать в клетках дольше, чем того требуют про- к минимуму.
цедуры. Собаки, содержащиеся в клетках, должны выпускаться из них Требования к содержанию мини-свиней и овец даны в Таблицах 26–
хотя бы раз в день для разминки, кроме случаев, когда это не совместимо 28. Стойло должно быть достаточно широким, чтобы позволить живот-
с условиями процедур. Должен быть установлен лимит, сверх которого ному удобно лежать.
Сечение сетки клетки не должно превышать 10×10 мм для цыплят
Та бли ца 2 0 и 25×25 мм для молодых и взрослых особей. Толщина проволоки клетки
РАЗМЕРЫ КЛЕТОК ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ И ПРОЦЕДУР ДЛЯ МЕЛКИХ ГРЫЗУНОВ И КРОЛИКОВ должна быть не менее 2 мм. Угол наклона не должен превышать 14% (8°).
Минимальная площадь клетки, Минимальная высота клетки, Длина поилок должна соответствовать длине кормушек. Если имеются
Вид
см2 см чашки, каждая птица должна иметь доступ к двум. Клетки должны быть
Мышь 180 12 Т абл ица 22
Крыса 350 14 РАЗМЕРЫ КЛЕТОК ДЛЯ РАЗВЕДЕНИЯ КРОЛИКОВ
Сирийский хомяк 180 12 Вес самки, Минимальная площадь для Минимальная вы- Минимальная пло-
Морская свинка 600 18 кг самки и подстилки, м2 сота клетки, см щадь гнезда, м2
Кролик 1 кг 1400 30 1 0,30 30 0,10
2 кг 2000 30 2 0,35 30 0,10
3 кг 2500 35 3 0,40 35 0,12
4 кг 3000 40 4 0,45 40 0,12
5 кг 3600 40 5 0,50 40 0,14
Примечание: Минимальная площадь для самки и подстилки включает площадь гнезда.
Та бли ца 2 1
РАЗМЕРЫ КЛЕТОК ДЛЯ РАЗВЕДЕНИЯ МЕЛКИХ ГРЫЗУНОВ Т абл ица 23
РАЗМЕРЫ КЛЕТОК ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ КОШЕК (ДЛЯ ПРОЦЕДУР И РАЗВЕДЕНИЯ)
Минимальная площадь клетки Минимальная высота клетки,
Вид
для матери и потомства, см2 см Минимальная
Вес Минимальная пло- Минималь- Минимальная пло-
Мышь 200 12 площадь для кош-
кош- щадь клетки на 1 ная высота щадь вольера для
Крыса 800 14 ки и подстилки,
ки, кг кошку, м2 клетки, см кошки и помета, м2
м2
Сирийский хомяк 650 12
0,5–1 0,2 50 – –
Морская свинка 1200 18
1–3 0,3 50 0,58 2
Несколько самок
1000 3–4 0,4 50 0,58 2
морских свинок с 18
на одну взрослую особь 4–5 0,6 50 0,58 2
детенышами
128 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 129

Та бли ца 2 4 Т абл ица 28


РАЗМЕРЫ КЛЕТОК ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ СОБАК СОДЕРЖАНИЕ МИНИ-СВИНЕЙ И ОВЕЦ В СТОЙЛАХ

Высота собаки в Минимальная площадь клет- Минимальная высота клетки, Вид живот- Минимальная пло- Минимальная дли- Минимальная высота
холке, см ки, м2 см ных и их вес щадь стойла, м2 на стойла, м ограждения стойла, м
30 0,75 60 Мини-свиньи
1,2 2,0 0,9
40 1,00 80 <100 кг
50 1,75 140 Овцы
0,7 1,0 0,9
<70 кг
Та бли ца 2 5 Бараны
ТРЕБОВАНИЯ К ВОЛЬЕРАМ ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ И РАЗВЕДЕНИЯ СОБАК 0,8 1,0 0,9
<70 кг
Минимальная площадь прилегающей зоны
Вес собаки, Минимальная площадь для разминки на собаку, м2 Т абл ица 29
кг вольера на 1 собаку, м2 ТРЕБОВАНИЯ К КЛЕТКАМ ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ ПТИЦ (ПРОСТРАНСТВО ОЗНАЧАЕТ ОБЪЕМ,
1–3 собаки больше 3-х собак ПОЛУЧЕННЫЙ ПУТЕМ УМНОЖЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ДЛИНЫ И ШИРИНЫ КЛЕТКИ)
<6 0,5 0,5 (1,0)* 0,5 (1,0)
Минимальное пространство,
6–10 0,7 1,4 (2,1) 1,2 (1,9) см2/1 птицу Минималь- Минимальная
Вид животных и
10–20 1,2 1,6 (2,8) 1,4 (2,6) ная высота длина кормуш-
их вес, г на 1 для 2-х для 3-х и клетки, см ки на птицу, см
20–30 1,7 1,9 (3,6) 1,6 (3,3) птицу птиц более птиц
> 30 2,0 2,0 (4,0) 1,8 (3,8) Куры
250 200 150 25 3
* Примечание. Цифры в скобках означают общую площадь вольера на одну собаку. Собаки, 100–300
содержащиеся вне помещений, должны иметь доступ к укрытию от плохих погодных усло- 300–600 500 400 300 35 7
вий. Если собаки содержатся в вольере с решетчатым полом, для ночного отдыха в воль-
600–1200 1000 600 450 45 10
ере нужно организовать зону со сплошным полом. Решетчатые полы не должны исполь-
зоваться, если того не требует эксперимент. Между вольерами необходимо сохранять 1200–1800 1200 700 550 45 12
расстояние, не позволяющее собакам нанести друг другу повреждения. 1800–2400 1400 850 650 45 12
Та бли ца 2 6 Взрослые петухи
1800 1200 1000 60 15
ТРЕБОВАНИЯ К КЛЕТКАМ ДЛЯ СОДЕРЖАНИЯ МИНИ-СВИНЕЙ > 2400
Перепелиные
Вес мини-свиньи, Минимальная площадь клетки, Минимальная высота клетки, 350 250 200 15 4
120–140
кг м2 см
5–15 0,35 50
15–25 0,55 60 оборудованы насестами, и птицы в одиночных клетках должны иметь
25–40 0,80 80 возможность видеть друг друга (Таблица 29).
Та бли ца 2 7
Требования к корму для SPF-животных
СОДЕРЖАНИЕ МИНИ-СВИНЕЙ И ОВЕЦ В ЗАГОНАХ

Минимальная
Мини- Мини- Минималь- Минималь-
Вид живот- площадь загона Кормление должно осуществляться полнорационным гранулирован-
мальная мальная ная высота ная длина
ных и их вес, для группы жи-
кг
площадь длина ограждения
вотных,
кормушки ным кормом, обеспечивающим физиологические потребности организма
загона, м2 загона, м загона, м на голову, м животного в питательных и минеральных веществах, витаминах, микро-
м2/1 животное
Мини-свиньи элементах и энергии и исключающим необходимость введения в корм до-
2 1,6 0,8 0,2 0,20
10–30 полнительных ингредиентов. Диеты рассчитываются с учетом видовых и
30–50 2 1,8 1,0 0,3 0,25 физиологических (разведение, рост, взрослое состояние) особенностей
50–100 3 2,1 1,2 0,8 0,30 животных. Разрабатываются также диеты, учитывающие генетические
Овцы особенности метаболизма отдельных линий животных. Кормление жи-
1,4 1,8 1,2 0,7 0,35
< 70
вотных при их воспроизводстве и использовании в экспериментах должно
Бараны
1,6 1,8 2,0 0,8 0,35 производиться одинаковым кормом.
< 70
130 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 131

Перед скармливанием корм в обязательном порядке повергается очистки из воздуха удаляются 60–95% частиц размером более 5 мкм.
стерилизации в автоклаве с использованием вакуума при температуре Фильтры тонкой очистки задерживают до 99,97% всех аэрогенных час-
121–124°С, давлении 1,2 атм. в течение 20 мин. Корм можно также сте- тиц размером менее 5 мкм, в питомниках и ЭБК при конвенциональном
рилизовать гамма-лучами. Гранулированный корм расфасовывается в содержании лабораторных животных воздух должен очищаться как ми-
двойные полиэтиленовые пакеты по 1,5–2,0 кг, которые герметично за- нимум фильтрами грубой очистки. При необходимости в помещениях
паиваются, и корм в таком виде подвергается облучению в дозе 2,5 Мрад может поддерживаться избыточное давление воздуха. Внутреннее давле-
на кобальтовом облучателе. Этот вид стерилизации считается более ща- ние в помещениях барьерного типа должно превышать наружное давле-
дящим и более надежным, но менее экономичным.
ние на 10-15 мм водяного столба. При работе с инфекционным матери-
алом в помещениях с животными создается пониженное по отношению
Размещение лабораторных животных, находящихся в к смежным помещениям и коридорам давление воздуха до 5–10 мм во-
эксперименте дяного столба. В «грязном» коридоре предусмотрена только вытяжная
Животные размещаются в групповых либо в индивидуальных (при вентиляция.
возникновении агрессии друг к другу или при экспериментальной необ- Комнаты содержания животных имеют 12-часовой цикл освещения
ходимости) клетках, предназначенных для содержания грызунов с воз- с автоматическим включением света в 8:00 и выключением в 20:00. Осве-
можностью контроля кормления и поения. щенность – 325 лк на расстоянии 1 м от пола. Во время работы персона-
Размеры клеток и загонов определяются в соответствии с нормативами. ла интенсивность освещения можно увеличивать до 300–400 лк. Основ-
ное освещение выполняется посредством люминесцентных ламп. Окон
Параметры окружающей среды в комнатах содержания животных нет (небольшие смотровые окна есть
В течение всего года, независимо от наружных климатических усло- только в дверях). Помимо основного освещения в комнатах содержания
вий, в помещениях для лабораторных животных должны поддерживаться животных предусмотрено аварийное освещение посредством осветитель-
на требуемом уровне основные показатели микроклимата – температура ных приборов с лампами накаливания. Лампы основного и аварийного
и влажность воздуха, кратность воздухообмена, давление и скорость дви- освещения расположены за пределами комнат – в зоне технологических
жения воздуха, содержание в нем загрязняющих веществ, уровень шума, помещений. Световой поток распределяется непосредственно в комна-
освещенность, которые должны постоянно контролироваться и при не- ты содержания животных через потолочные светофильтры из матового
обходимости – корректироваться, показатели приборов регистрируются стекла, что позволяет беспрепятственно проводить аэрозольную дезин-
в специальном журнале. В виварии должен быть предусмотрен резерв- фекцию и внутреннюю уборку комнат.
ный источник электропитания. В комнатах содержания животных шумовой фон создается самими
Измерение параметров температуры, влажности, освещенности и животными, вентиляцией, персоналом при выполнении процедур и ра-
шума должно осуществляться автоматической системой мониторинга. боте с животными. В присутствии персонала уровень шума в комнате с
Датчики располагают в каждой комнате содержания животных. Разводка
животными не должен превышать 85 Дб.
системы – проводная.
Для уменьшения излишнего шума в местах содержания животных
Для вентилирования комнат лаборатории используют систему при-
система кондиционирования должна быть оборудована многоуровневы-
нудительной вентиляции. Система обеспечивает 100% приток свежего
воздуха, оснащена тремя ступенями фильтрации: фильтрами грубой, ми шумоглушителями. Экспериментальные работы, сопровождающиеся
тонкой и ультратонкой очистки. Она обеспечивает в комнатах содержа- шумовыми эффектами, ведутся вдали от комнат содержания животных.
ния лабораторных животных необходимые параметры среды независимо Обучение персонала направлено на уменьшение уровня шумового фона
от параметров наружного воздуха. В зданиях барьерного типа и в ЭБК с при выполнении процедур по уходу за животными.
экспериментально-инфицированными животными предусматривается Температура и влажность воздуха, кратность воздухообмена, давле-
система фильтров грубой и тонкой очистки воздуха как на приточной, ние и скорость движения воздуха должны ежедневно регистрироваться в
так и на вытяжной системах вентиляции. С помощью фильтров грубой специальных журналах.
132 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 133

Корма Вода
Кормление лабораторных животных (мышей, крыс, хомяков и др.) В лабораторный корпус вода поступает из системы городского во-
всех категорий должно осуществляться полнорационным гранулирован- допровода. Она фильтруется и собирается в резервуар системы. Система
ным комбикормом, изготовленным в соответствии со стандартом «Ком- имеет две точки отбора воды в «чистой» автоклавной и точку отбора в
бикорма полнорационные для лабораторных животных». моечно-стерилизационном блоке в конвенциональной зоне. В зоне со-
Гранулированный комбикорм следует хранить в сухих, чистых, хоро- держания животных в «чистой» автоклавной вода наливается в стериль-
шо проветриваемых, не зараженных амбарными вредителями и дикими ные питьевые бутылочки, которые закрываются стальными крышками с
грызунами складских помещениях, не имеющих посторонних запахов. трубками-носиками, и на тележках развозится по комнатам содержания
Оптимальные условия хранения при температуре +5°С и влажности 50–
животных. Бутылочки меняются вместе с остатками воды не реже одного
60%. Показатели температуры и влажности в комнате регистрируются
раза в 4 дня.
по показаниям термометра-гигрометра. Санитарная обработка комнаты
Контроль качества воды. С частотой, требуемой правилами эксплу-
проходит в соответствии с «Планом санитарных мероприятий в комнате
атации системы фильтрации, проводится санация системы: промывка
хранения корма и подстила».
фильтра, замена либо обработка соответствующих картриджей, санитар-
В зону содержания животных корм поступает только после автокла-
вирования. Двух–трехдневный запас проавтоклавированного корма мо- ная обработка. Проводится также профилактический осмотр инженером
жет храниться в клетках в закрывающемся металлическом шкафу в «чис- фирмы-производителя системы очистки воды. Проводимые процедуры
той» комнате. Непосредственно в комнатах содержания животных корм документируются ответственным за поддержку системы инженером. Пе-
не хранится. риодически (один раз в 4 месяца) проводится отбор проб воды из точек ее
Помещения для приготовления кормов. Перед поступлением в зону со- забора на чистоту. Этот анализ осуществляется в лабораториях Департа-
держания SPF-животных в комнате подготовки корма мешки с кормом мента санитарно-эпидемиологического надзора Минздрава РФ. Заклю-
вскрываются, корм засыпается в металлические поддоны и автоклавиру- чение о проведении данного контроля должно храниться в архиве ЭБК
ется. не менее 5 лет.
Раздача корма. Корм заносится в комнату содержания животных в
клетках или на поддонах в количестве, необходимом для кормления. Для Подстилка
грызунов корм раздается (досыпается) в кормушки клеток из раздаточ-
В лабораторном корпусе крысы и мыши содержатся в клетках пря-
ной емкости в соответствии с суточными нормами кормления или в со-
мого контакта с подстилкой. В качестве подстилки рекомендуется ис-
ответствии с установленной исследовательским протоколом нормой. Во
время еженедельной смены клеток с аксессуарами остатки корма выво- пользовать опилки, стружки или мелкую щепу (длина 5–20 мм, толщина
зятся и утилизируются. Из клетки в клетку корм не переносится. Корм, 1–2 мм) из экологически чистой древесины лиственных пород. Не допус-
упавший на пол, в кормушки не возвращается, выносится из комнаты и кается использовать подстилки из химически обработанной древесины, а
утилизируется. также из древесины хвойных пород. Подстилка автоклавируется на под-
Контроль качества корма. Периодически (один раз в 4 месяца) бе- донах при режиме 118°С в течение 30 мин.
рутся пробы корма, находящегося в «чистой автоклавной» после авто- Хранение подстилки и контроль паразитов. Бумага для подстилки
клавирования на стерильность. Анализ осуществляется в лабораториях хранится и режется в специальном вспомогательном помещении. Не-
Департамента санитарно-эпидемиологического надзора Минздрава РФ. обходимое количество подстила поступает в корпус в резаном виде в за-
Заключение о проведении данного анализа должно храниться в архиве крытых полиэтиленовых мешках. Мешки в закрытом виде складируются
ЭБК не менее 5 лет. в комнате хранения корма и подстила. Санитарная обработка комнаты
Контроль за наличием паразитов осуществляется специализирован- проходит в соответствии с «Планом санитарных мероприятий в комнате
ным государственным предприятием системы санитарно-эпидемиоло- хранения корма и подстила». Контроль наличия паразитов в подстилке
гической службы по договору на проведение дезинфекционных работ. осуществляется специализированным государственным предприятием
Заключение о проведении данного контроля должно храниться в архиве системы санитарно-эпидемиологической службы по договору на прове-
ЭБК не менее 5 лет. дение дезинфекционных работ.
134 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 135

Контроль качества. Периодически (один раз в 4 месяца) берутся про- Очистка и дезинфекция помещений для животных
бы подстилки после автоклавирования для анализа стерильности. Этот
анализ осуществляется в лабораториях Департамента санитарно-эпиде- В комплексе санитарно-гигиенических мероприятий, проводимых
миологического надзора Минздрава РФ. Заключение о проведении дан- в питомниках и ЭБК, большая роль принадлежит дезинфекции, целью
ного контроля должно храниться в архиве ЭБК не менее 5 лет. которой является уничтожение в окружающей среде возбудителей ин-
фекционных заболеваний. Под стерилизацией понимают абсолютный
процесс разрушения всех живых микроорганизмов.
Разное оборудование для содержания/ухода
Проведение эффективной дезинфекции и стерилизации требует,
и использования животных в эксперименте
прежде всего, тщательной очистки с целью удаления органических частиц
Дополнительное оборудование и аксессуары должны соответство- и грязи с дезинфицируемых и стерилизуемых поверхностей. Фаза очистки
вать государственным стандартам или требованиям GLP. включает механическое удаление частиц грязи с поверхностей при помо-
щи щетки и последующее мытье с использованием мыла и детергентов.
Санитария В лабораторном животноводстве применяют следующие способы
дезинфекции и стерилизации:
Частота смены подстилки. Содержание в клетках с неконтактной под- – дезинфекция путем протирания, при которой дезинфицируемый
стилкой не используется. Контактная подстилка в клетках содержания крыс предмет с гладкой поверхностью протирается дезраствором. Мето-
и мышей меняется с периодичностью один раз в 7 дней. Загрязненная под- дом протирания дезинфицируют поверхности стен, полов, дверей,
стилка меняется вместе с клеткой. Чистая подстилка рассыпается в клетки стеллажей, окон, светильников, перфорированные воздухораспре-
из расчета 0,5 л на 500 см 2. делители;
Аксессуары клетки (решетка, разделитель для корма, карточкодер- – дезинфекция путем распыления, при которой дезраствор наносится
жатели) и стеллажи также меняются еженедельно. на поверхность при помощи механических распылителей. Для этих
Исключением является смена подстила у беременных самок в пред- целей используют ранцевые распылители. Дезинфекцию проводят в
родовом периоде (за 1–2 дня до родов) и в послеродовом периоде (первая защитной маске и очках;
неделя лактации). Такой регламент смены подстила позволит уменьшить – дезинфекция путем замачивания, при которой дезинфицируемые ма-
стресс у животных, не нарушая санитарные нормы. териалы помешаются в дезраствор и выдерживаются в нем в течение
Очистка и дезинфекция клеток с твердым полом проводится ежене- не менее четырех часов. С помощью этого метода дезинфицируются
все предметы, не подлежащие автоклавированию и на которые дез-
дельно. В отсеке моечного блока освобожденные от грязного подстила
раствор не оказывает разрушающего действия (клетки и инвентарь
клетки моются щеткой с погружением в металлическую ванну с синте-
из полипропилена, резиновые пробки и др.). Метод замачивания ис-
тическими моющими средствами. После этого клетки тщательно промы-
пользуют при проведении за барьер через гидрошлюз предметов, не
ваются в чистой раковине под струей проточной воды до исчезновения
подлежащих стерилизации в автоклаве и газовой камере (емкости с
мыльной пены. Вымытые клетки составляются стопкой вверх дном на дезрастворами и др.);
сетчатые стеллажи для сушки и затем передаются в монтажный зал. Ре- – стерилизация путем газации (фумигация) используется для стери-
шетки клеток и аксессуары моются механически в моечных машинах с лизации помещений, а также предметов, не подлежащих влажной
использованием моюще-дезинфицирующих средств. дезинфекции и автоклавированию (транспортные клетки, канце-
Ввиду разнообразия моющих и дезинфицирующих веществ данные лярские принадлежности, обувь и др.). Для фумигации помещений
средства подбираются индивидуально. Производимые в России и импор- используют газ формальдегид. Метод газации применяют при про-
тируемые дезсредства можно посмотреть на сайте www.infodez.ru. ведении предметов за барьер с использованием газовых камер (фор-
малиновая, этиленоксидная);
– стерилизация путем автоклавирования, при которой через проход-
ной паровой автоклав высокого давления в «чистую» зону проводят-
136 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 137

ся постоянно используемые материалы (клеточное оборудование, коридор вместе с использованным дезраствором. Отдельные швабры ис-
подстилочный материал, санитарная одежда, корм и др.). пользуются также в «чистой» автоклавной, в «чистом» и «грязном» кори-
Ежедневно проводится влажная уборка полов в комнатах для содер- дорах.
жания животных с использованием дезинфицирующего средства. Еже- Санобработка оборудования клеток. Специальные кормушки для
недельно проводится влажная уборка комнаты с мытьем стен, дверей, клеток не используются. Решетки и разделители для корма обрабатыва-
решеток воздуховодов с применением дезсредств. Ежеквартально или по ются еженедельно. Мытье осуществляется автоматически в моечной ма-
окончании исследования проводится генеральная уборка комнаты (в от- шине. Вымытые крышки клеток и их принадлежности сушатся на полке
сутствии животных в комнате). Все поверхности комнаты обрабатывают- для сушки и затем автоклавируются.
ся дезсредством при помощи распылителей. Методы и частота обработки поилок. Поликарбонатные бутылочки
Уборка коридоров в «чистой» зоне содержания животных произво- меняются не реже одного раза в 4 дня, а при необходимости чаще. По-
дится с той же частотой и теми же методами, что и комнаты содержания илки моются автоматически в моечной машине или вручную ершиком с
животных. Ежедневно после окончания работ в чистой зоне в «грязном» использованием моющего средства с дальнейшей промывкой в проточ-
и «чистом» коридорах и «чистой автоклавной» включается УФ. ной воде. После мытья бутылочки сушатся в сетчатых корзинах и потом
Комната хранения корма и подстила обрабатывается. Один раз в 1,5 автоклавируются.
месяца проводится генеральная обработка комнаты. Санобработка клеток для транспортировки животных, оборудования
Санитарную обработку пола в действующем санпропускнике прово- и транспорта. Картонные транспортные коробки вторично не использу-
дят ежедневно в конце рабочего дня. Еженедельно проводят полную сани- ются и уничтожаются.
тарную обработку пола, стен и поверхностей. Ежеквартально проводится Контроль эффективности санобработки клеток производится визу-
генеральная уборка и смена санпропускников. Факт проведения данных ально. Температурный режим работы автоклавов контролируется еже-
мероприятий должен фиксироваться в лабораторном журнале, который дневно при помощи поверенного термометра и химических индика-
должен храниться в архиве ЭБК не менее 3 лет после окончания исследо- торных полосок. Ежегодно эффективность работы автоклавов должна
вания. контролироваться с помощью биотестов лаборатории Департамента са-
Обработка инвентаря. Швабры, находящиеся в комнатах содержа- нитарно-эпидемиологического надзора Минздрава РФ. Кроме того, ра-
ния животных и во вспомогательных помещениях, ежедневно обраба- бота автоклавов оценивается по результатам проверки на стерильность
тываются тем же дезраствором, который используется для санитарии корма и подстила.
данной комнаты. Еженедельно производят санитарную обработку всей Все работы по содержанию животных и уходу за ними независимо от
поверхности швабр протиранием дезраствором. Ежемесячно все швабры их категорий качества должны проводиться с соблюдением профилакти-
выносят из «чистой» зоны в моечно-стерилизационный блок и подверга- ческих гигиенических мер, направленных на защиту от занесения и рас-
ют обработке полным погружением в дезраствор. Дезраствор для мытья пространения болезнетворных агентов.
полов и поверхностей в зоне содержания животных наливается в клет- Профилактические гигиенические мероприятия в производствен-
ки, используемые специально только для мытья. После использования ных помещениях «чистой» зоны, в помещениях, приравненных к ним
клетки для мытья полов через грязный коридор выносятся на мойку, где по санитарным требованиям (лаборатории, операционные и др.), в по-
моются и стерилизуются автоклавированием. Плоские мопы и тканевые мещениях «грязной» зоны проводятся в соответствии с графиком, пре-
салфетки ежедневно выносят из «чистой» зоны через «грязный» коридор дусматривающим периодичность работ, а также последовательность
после завершения рутинной санитарной обработки помещений. Мопы и выполнения отдельных рабочих этапов и процедур. Факт проведения
салфетки стирают и стерилизуют автоклавированием. данных мероприятий должен фиксироваться в лабораторном журнале,
Для уборки комнат содержания животных используются швабры с который должен храниться в архиве ЭБК не менее 3 лет после оконча-
отжимом. В каждой комнате имеется своя швабра, которая не выносится ния исследования.
в другие комнаты. В качестве емкости для мытья используются специ-
ально предназначенные для этого клетки, которые ежедневно вносятся
в комнату из чистой автоклавной и выносятся из комнат через грязный
138 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 139

Режим уборки Уборка и дезинфекция помещений «грязной» зоны входят в обязанности


работающего там персонала. Работы по уборке и дезинфекции проводят-
Работы по уборке и дезинфекции помещений проводятся ежедневно ся ежедневно, еженедельно и один раз в 6–8 месяцев
и в конце каждой недели. Ежедневные и еженедельные работы предполагают подметание, сбор
В помещениях для животных ежедневно перед началом работ прово- и вынос мусора, протирание полов, окон, дверей, оборудования, мебели
дится влажная уборка с использованием свежеприготовленного дезрас- дезраствором (например, 2–5% раствор гипохлорита натрия, 2–3% рас-
твора. В течение рабочего дня поддерживается чистота пола. твор хлорамина).
В конце рабочего дня специально предназначенной для этого щеткой Полугодовые генеральные уборки административных, хозяйствен-
обметаются стеллажи, тележки, пол подметается щеткой, после чего про- ных помещений, коридоров «грязной» зоны проводятся с обязательным
изводится влажная уборка – протираются дезраствором стеллажи, теле- смешением оборудования, мебели и обеспечением доступа ко всем мес-
жки, дверные ручки, поверхности оборудования, пол протирается влаж- там, не подвергающимся ежедневной промывке и дезинфекции. Прово-
ной тряпкой, смоченной дезраствором. Затем все орудия чистки – щетки, дится комплекс мероприятий по уничтожению диких грызунов и насеко-
швабры, совок для мусора окунают в дезраствор, затем дезраствор выли- мых. Все помещения подвергаются фумигации формалином.
вают в раковину, при этом раковина очищается и дезинфицируется. Уборка и дезинфекция помещений системы вентиляции и кондициониро-
В конце недели помимо регулярной ежедневной уборки и дезинфек- вания воздуха проводится персоналом, обслуживающим эти помещения.
ции проводят более тщательную уборку и дезинфекцию, дополнительно Кроме регулярной ежедневной уборки и дезинфекции один раз в 6-
к перечисленным процедурам тряпкой, смоченной дезраствором, проти- 8 месяцев должна проводиться генеральная уборка со смещением всех
рают перфорированные заслонки вентиляционных каналов, поверхно- передвижных устройств, оборудования и мебели, пыль в помещении
сти стен, дверей, светильников. удаляется при помощи пылесоса, пол протирается дезраствором. Стери-
Генеральная уборка, дезинфекция и стерилизация помещений для лизация формальдегидом производится только перед пуском системы в
животных проводится один раз в 6–8 месяцев, из помещения удаляют- эксплуатацию, а также в случае специальных распоряжений о проведе-
ся все животные, выносится все переносное оборудование. Помещение нии ветеринарно-санитарных гигиенических мероприятий. Факт про-
герметизируется (двери плотно закрываются, при необходимости щели ведения данных мероприятий должен фиксироваться в лабораторном
заклеиваются клейкой лентой, задвижки приточной и вытяжной вен- журнале, который должен храниться в архиве ЭБК не менее 3 лет после
тиляции закрываются). Проводится тщательная уборка и дезинфекция окончания исследования.
помещения с заключительной его стерилизацией путем фумигации фор-
мальдегидом. Через 24 часа после начала фумигации следует открыть за- Контроль за наличием вредителей (грызунов, вредных
движки приточной и вытяжной вентиляции, после чего пары формалина насекомых)
вытягиваются из помещения в течение 48 часов. При этом одновременно Дератизация и дезинсекция проводятся по графику государствен-
происходит дезинфекция воздуховодов. Персонал, проводящий газовую ным дезинфекционным предприятием по договору. Пестициды, хлор- и
стерилизацию, должен быть обеспечен противогазами и прорезиненной фосфорорганические препараты не применяются. Раз в месяц приманки
защитной одеждой. Животные заселяются в помещение только после по- раскладываются в следующих помещениях:
лучения результатов микробиологического контроля. При положитель- – подвал здания,
ных результатах контроля процесс стерилизации повторяется. – моечно-стерилизационный блок,
Проведение уборки и дезинфекции «чистых» служебных помещений, – комната хранения корма и подстила,
расположенных внутри барьерной зоны, а также помещений «чистой» – технологический этаж,
части шлюза для персонала (душевая, «чистая» раздевалка, туалет) явля- – места рядом с входами в здание.
ется обязанностью работников «чистой» зоны. Эти работы выполняют- Дезинсекционные мероприятия проводятся с помощью специаль-
ся работниками по графику. Ежедневная, еженедельная и генеральная ных средств. Для оперативного уничтожения летающих насекомых, про-
уборки, дезинфекция и стерилизация служебных помещений проводятся никших с улицы, рядом с комнатой хранения корма и подстила и на тех-
так же, как и в помещениях для животных. нологическом этаже установлены световые ловушки для насекомых.
140 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 141

Инструктаж сотрудников, работающих с животными. Сотрудники торией и службу охраны труда. Телефоны и координаты всех ответствен-
предупреждаются о проведении дератизации и дезинсекции. Непосред- ных лиц и служб должны быть в доступном месте.
ственно в комнатах содержания животных родентициды и инсектициды При возникновении очага возгорания в комнатах содержания жи-
не используются. Факт проведения данных мероприятий должен фикси- вотных, животные эвакуируются в другие помещения, если эти действия
роваться в лабораторном журнале, который должен храниться в архиве не опасны для жизни персонала. Сотрудники эвакуируются через бли-
ЭБК не менее 3 лет после окончания исследования. жайший выход.
При опасном воздействии токсических веществ сотрудники немед-
Обеспечение ухода при авариях, в воскресные дни и во ленно эвакуируются из зоны воздействия на открытый воздух. Информи-
время отпусков руются все ответственные службы. Устанавливается степень опасности, и
предпринимаются меры защиты, при необходимости вызывается «скорая
Уход в воскресные дни и во время отпусков. Если протокол исследо-
помощь». При необходимости животные также могут быть эвакуированы.
вания требует ежедневного наблюдения за животными, рутинные ме-
роприятия по уходу выполняются техническим персоналом согласно
графику работы, невзирая на воскресные и праздничные дни. Если про- Утилизация отходов
токол исследования не требует ежедневного наблюдения за животными, Подстилка и мусор. Клетки с грязной подстилкой вывозятся из ком-
то рутинные мероприятия по уходу в выходные дни не выполняются. нат содержания животных в «грязный» коридор и далее в моечный блок,
Перед выходными днями животным в кормушки закладывается до- где подстил ссыпается вручную в бумажные мешки для мусора. Закрытые
полнительное количество корма (в соответствии с суточными нормами мешки хранятся в специальном помещении и вывозятся на сжигание в
кормления). Рутинные мероприятия в праздничные дни проводятся тех- крематорий один раз в неделю.
ническим персоналом согласно графику работы, утвержденному ветери- Трупы животных. Трупы животных помещаются в полиэтиленовые
нарным врачом лаборатории. График работы в праздничные дни и гра- пакеты и хранятся в морозильной камере (-20оС) в комнате сбора отхо-
фик отпусков сотрудников составляется таким образом, чтобы рутинные дов. Трупы, подлежащие вскрытию, помещаются в холодильник на +2
мероприятия по уходу за животными выполнялись в полном объеме. –+8 не более чем на 12 часов. Еженедельно трупы вывозятся на сжигание
Координаты и телефоны руководителей исследований, ветеринар- в крематорий.
ного врача известны техническому персоналу и находятся в доступном Вредные/опасные отходы собираются и хранятся до вывоза на уничто-
месте. Также у службы безопасности на центральном пульте наблюдения жение в комнате сбора отходов согласно инструкциям отдела охраны труда
имеются предписания по поведению в аварийных ситуациях, список ад- и техники безопасности с соблюдением правил хранения соответствующих
ресов и номеров телефонов ответственного персонала, включая персонал групп реактивов (использование герметичных промаркированных емкос-
инженерной службы. тей для отдельных групп отходов, вытяжных шкафов для летучих токсичных
Контроль за работой механических систем, обеспечивающих под- отходов). Вывоз отходов может осуществляться на промежуточный склад
держание параметров микроклимата в комнатах содержания животных, еженедельно, а затем со склада утилизироваться централизованно специ-
осуществляется дежурным охранной службы круглосуточно. Специаль- ализированной техникой. Факт проведения данных мероприятий должен
ные звуковые и световые сигналы предупреждают дежурного охранной фиксироваться в лабораторном журнале, который должен храниться в ар-
службы о возможности возникновения аварийных ситуаций. Дежурный хиве ЭБК не менее 3 лет после окончания исследования.
незамедлительно ставит в известность об этом ответственный обслужи-
вающий персонал инженерной службы.
Аварийные мероприятия. В корпусе должна быть автоматическая про- Устройство вивариев
тивопожарная система, включающая в себя систему предупреждения о
задымлении и систему тушения огня. При срабатывании сигнализации Корпус, в котором содержат лабораторных животных, должен быть
пожарной тревоги на центральном охранном пульте дежурный охранной специально спланированным, в том числе и для проведения исследова-
службы действует в установленном порядке – вызывает пожарную служ- ний на животных. В корпусе должны быть: двухкоридорная барьерная
бу, информирует главного и дежурного инженеров, заведующего лабора- зона содержания животных, лабораторные и технологические помеще-
142 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 143

ния. Комнаты для содержания лабораторных животных располагают в Потолки в комнатах содержания животных – подвесные, выпол-
«чистой» зоне, должна быть зона между «чистым» и «грязным» коридора- ненные из алюминиевых элементов с термоизоляцией, с встроенными
ми и комнаты для содержания лабораторных животных в краткосрочных осветителями, которые обслуживаются с верхней стороны, водонепро-
экспериментах в конвенциональной зоне. Комнаты содержания лабора- ницаемые. Все соединения и примыкания к стенам герметизированы
торных животных отделяют от лабораторных и технологических помеще- универсальным герметиком.
ний системой коридоров и тамбуров. В моечно-стерилизационном блоке потолок может быть выполнен
Комнаты содержания животных должны иметь сообщение с «чис- из сборных железобетонных плит, являющихся наполнителем конструк-
той» и «грязной» зонами. Полы покрывают композицией повышенной ции здания. В санпропускниках – подвесные потолки из пластиковых
износостойкости. Стены выполняют специальными стеновыми пане- элементов, герметично прилегающих к стенам и друг другу, со встроен-
лями. Потолок – подвесной, алюминиевый, в который встраивается ре- ными водонепроницаемыми осветителями.
шетка из нержавеющей стали приточной вентиляции и светофильтры из Комнаты содержания животных относятся к системе P1 вентиляции
матового стекла. Стыки стеновых панелей внутренних стен проварива- и кондиционирования воздуха. Система обеспечивает 100% приток све-
ются. Примыкание поверхности пола к стенам выполняется монолитно. жего воздуха, оснащена тремя ступенями фильтрации класса EU3, EU7,
Стыки потолочных панелей герметизируются универсальным гермети- EU12 (HEPA-фильтр) и поддерживает следующие параметры среды:
– Температура: 20–23°С
ком. Для защиты поверхности стен от механических повреждений уста-
– Относительная влажность: 50-60%
навливают ограничители (бампера).
– Избыточное давление воздуха в комнатах относительно «чистого» и
Комнаты краткосрочного содержания животных в экспериментах,
«грязного» коридоров 2–10 Па.
а также «чистый» и «грязный» коридоры должны соответствовать выше
– Кратность воздухообмена: 10–15 объемов помещений в час.
описанным требованиям.
После окончания длительного исследования для эвтаназии и некро-
Энергоснабжение и освещение
псии, а также для проведения кратковременных исследований животные
транспортируются из комнат содержания барьерной зоны в процедурные Установленные розетки и выключатели выполняют в полугерме-
комнаты. Транспортировка животных по коридорам общего пользования тичном исполнении. Осветители находятся над подвесным потолком,
осуществляется в клетках содержания на стеллажах или передвижных те- герметично закрыты и подвержены влажной обработке. Корпус биоме-
лежках. дицинских исследований должен быть подсоединен к аварийной дизель-
Двери в «чистый» и «грязный» коридоры оборудуются замками и ме- генераторной установке, которая автоматически вступает в работу через
дицинскими ручками. несколько секунд после пропадания напряжения в основной сети. Это
необходимо для предотвращения гибели животных вследствие наруше-
В комнатах содержания животных водопровод и дренаж отсутству-
ния электроснабжения.
ют. В помещении моечного блока оборудуются дренажные люки, пред-
ставляющие собой металлические решетки диаметром 30 см с затвором
и стоком и отдельно стоящий канализационный слив для отходов. Водо- Контроль шума
провод в моечном блоке состоит из трубопровода горячей воды и трубо- Материалы стеновых покрытий, потолка, дверей в комнатах содер-
провода холодной воды. Канализационные стояки – из литых чугунных жания животных должны обладать повышенной звуконепроницаемос-
труб с антикоррозийной защитой. тью. Архитектурная конструкция коридоров и тамбуров с двойными
Стены в помещениях содержания животных и местах санобработок дверями помогает уменьшить распространение звука. Все передвижные
имеют специальное покрытие (водоотталкивающее, неабсорбирующее, механизмы и тележки снабжены колесами с резиновым покрытием.
резистентное к ударам) с проваренными швами. В помещениях моечно-
стерилизационного блока стены такие же, как в комнатах содержания Помещения для санобработки клеток
животных. В санпропускниках стеновые панели также покрыты пласти- Планировка моечно-стерилизационного блока должна позволить
ковым покрытием или керамической плиткой, устойчивыми к влаге. направить поток материалов в одну сторону и развести чистые и гряз-
144 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 145

ные потоки. Грязные материалы и оборудование вывозятся из зоны со- ными руководителем учреждения. Персонал, обслуживающий живот-
держания животных через «грязный» коридор и промежуточную шлюзо- ных, должен систематически выполнять следующие виды работ:
вую комнату в моечно-стерилизационный блок. Инвентарь сортируется, – ежедневно до начала работ по уходу осматривать клетки с целью вы-
грязный подстил собирается в мешки для отходов, которые помещаются явления заболевших или погибших животных, родов; регистриро-
в комнату сбора отходов. Стеллажи обрабатывают на месте, клетки и бу- вать рождение и все случаи гибели животных в формах первичного
тылочки поступают на мытье в соответствующие комнаты. Металличе- учета;
ские аксессуары – на машинное мытье. Грязная одежда персонала – в – выбраковывать больных животных; погибших и выбракованных
комнату на стирку. Вывоз/вынос чистого материала осуществляется че- больных животных передавать на исследование в КДЛ;
рез другие выходы из этих комнат. Подстил и корм заносятся из комнаты – систематически выбраковывать племенных и подсосных животных,
хранения в стерилизационный блок. пополнять выбракованных племенных животных;
– проводить отъем от матки молодняка по окончании подсосного пе-
Безопасность риода (мыши, крысы – 28–31 день; хомяки – 21–29 дней; морские
свинки – 27–29 дней; кролики – 40–45 дней; кошки – 52–56 дней;
Территория, на которой расположен корпус биомедицинских иссле-
собаки – 45 дней; миниатюрные свиньи – 45 дней) и формировать
дований, должна быть ограждена и защищена от внешнего доступа. По-
по полу группы из отъемышей;
рядок входа на территорию строго определен.
– еженедельно заменять грязные клетки на чистые (при необходимо-
Наружный периметр корпуса биомедицинских исследований дол-
сти чаще);
жен быть оборудован системой охранной сигнализации, исключающей
– заполнять свежей водой бутылки для поения с таким расчетом, что-
не только проникновение посторонних лиц непосредственно в здание, но
бы животные были постоянно обеспечены питьевой водой;
и осуществляющей санкционированный доступ сотрудников в помеще-
– заполнять кормом кормушки с таким расчетом, чтобы было обеспе-
ния конкретных охраняемых зон (подвал, технологические помещения).
чено постоянное наличие кормов вволю;
Внутри здания установлена проводная система контроля и управления
– пересаживать, взвешивать, упаковывать животных в транспортные
доступом. На дверях конкретных помещений здания установлены элек-
клетки для транспортировки в соответствии с планом реализации
тромеханические замки с индивидуальными контроллерами, обеспечи-
животных;
вающими управление замками по сигналам от центрального процессора
– ежедневно записывать показатели температуры и влажности воздуха
после считывания информации с бесконтактных карт доступа.
в помещении;
Система регламентирует и обеспечивает пропуск сотрудников в от-
– ежедневно проводить влажную уборку помещений с использовани-
дельные помещения корпуса, осуществляя идентификацию по бескон-
ем дезсредств;
тактным электронным картам по принципу «доступ разрешен – доступ
– ежедневно дезинфицировать оборудование, используемое в работе:
запрещен» с соответствующей регистрацией времени прохода. Система
подсобные тележки, весы, ведра, баки для корма (после опорожне-
регистрирует все происходящие в ней события как по факту, так и по
времени и позволяет получать отчеты о событиях в системе за интере- ния), кормораздаточные лопатки, пинцеты и ножницы (после каж-
сующий период времени (проходы сотрудников, попытки нарушения дого использования);
режима контроля доступа, постановка и снятие помещений с охраны, – ежедневно заполнять этикетки и сводки о движении поголовья;
тревожные события). Система энергонезависима и укомплектована ис- – в соответствии с планом проведения санитарно-гигиенических ме-
точником бесперебойного электропитания. роприятий участвовать в проведении дезинфекции помещений.
Помещение для животных должно быть обеспечено следующим обо-
рудованием и материалами (Таблица 30).
Режим работы Подстилка для лабораторных животных должна отвечать требовани-
ям технических условий «Материал подстилочный из древесной щепы
Работа по уходу за лабораторными животными всех категорий для лабораторных животных» ТУ 5313-001-1897639-92. В качестве под-
строится в соответствии с распорядком дня и регламентом, утвержден- стилки могут использоваться опилки, стружки или мелкая щепа (может
146 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 147

быть разной по форме, длина 5–20 мм, толщина 1–2 мм, влажность мак- Т абл ица 31
УРОВЕНЬ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ ПОДСТИЛОЧНОГО МАТЕРИАЛА
симальная 8%) из экологически чистой древесины лиственных пород.
Не допускается использование подстилки из химически обработанной Виды загрязнений Концентрация, мг/кг не более
древесины, а также из древесины хвойных пород. Допускаемый уровень Химические вещества:
загрязненности подстилки химическими веществами и тяжелыми метал- гексахлоран 0,02
лами представлен в Таблице 31. ДДТ 0,02
ДЦД 0,02
Та бли ца 3 0
ПЕРЕЧЕНЬ ОБОРУДОВАНИЯ, СРЕДСТВ И МАТЕРИАЛОВ В ПОМЕЩЕНИИ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ ДДЕ 0,02
Наименование Количество полихлорированные 0,02

Клетки в комплекте. В комплект одной клетки входят: бифенилы 0,02


Количество клеток определяет-
– ванночка из полипропилена или поликарбоната; Тяжелые металлы: 0,02
ся размерами помещений. Оно
– крышка из нержавеющей стали с бункером для корма; свинец 0,05
не лимитируется и зависит от
– бутылка для поения;
технологической возможности кадмий 0,01
– канюля;
обеспечить нормативные пока-
– резиновая пробка; ртуть 0,01
затели микроклимата
– держатель для этикетки из нержавеющей стали
по размерам помещения и не- Количество пыли не должно превышать 1%. Поступившая подстил-
Стеллажи настенные или передвижные
обходимости ка проверяется на наличие пыли. В большом количестве мелкодисперс-
Бак для воды 1 ная пыль на частицах подстилки оказывает вредное влияние на организм
Стол для весов 1 животного, вызывая заболевания и даже падеж молодняка. Кроме того,
Весы 1 пыль, распространяясь по воздуху, создает загрязнение помещения и
Контейнер для кормов 1 отрицательно сказывается на работе оборудования, подстилка должна
Кормораздаточная лопатка 1 просеиваться как для освобождения от пыли (вне помещения питомника
Ножницы 1 или ЭБК), так и от более крупных примесей (куски дерева, металла, бу-
Пинцет 1 маги и др.).
Ведро 1 При поступлении из одного и того же источника подстилка подвер-
Швабра 1 гается лабораторному контролю не менее двух раз в год.
Совок 1 Перед употреблением подстилка в обязательном порядке автокла-
Тряпка половая 1 вируется при температуре 132°С и давлении 2 атм. в течение 20 минут с
Тряпка для протирания пыли I последующей сушкой в течение 30 минут, что обеспечивает надежную
Щетка с ручкой 1 стерилизацию.
Полотенце 1 После охлаждения и сушки подстилка рассыпается в стерильные
Дезковрик 1 клетки толщиной не менее 1 см, в которые пересаживают животных из
Термометр электронный для измерения минимальной и
1
грязных клеток.
максимальной температур Для улучшенных конвенциональных и СПФ-животных воду необ-
Психрометр 1 ходимо стерилизовать в автоклаве при температуре 121°С и давлении 1,2
Шариковая ручка 1
атм. в течение 45 минут, для стерилизации бутылки без пробок, запол-
Журнал для записи температуры и влажности воздуха 1
ненные водой, расставляют в проволочные корзины и помешают в авто-
Бланки, этикетки по необходимости
клав, пробки автоклавируются отдельно. При смене все старые бутылки
Дезинфицирующие растворы по необходимости
заменяются. Доливать старую бутылку свежей водой не допускается.
148 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 149

Кормление временно допускается гранулированным комбикормом ПК 120-5 или


аналогичного иностранного производства с предварительной стерилиза-
Кормление рекомендуется осуществлять полнорационным гранули- цией.
рованным комбикормом, обеспечивающим физиологические потребно- Кормление кошек и собак производится сухими сбалансированными
сти организма в питательных, минеральных веществах, витаминах, мик- кормами, изготовленными из натуральных ингредиентов.
роэлементах и энергии и исключающих необходимость введения в корм Кормление мини-свиней осуществляется стандартными полнораци-
дополнительных ингредиентов. Диеты рассчитываются с учетом видовых онными гранулированными комбикормами, изготовленными для корм-
и физиологических (разведение, рост, взрослое состояние) особенностей ления пользовательских пород свиней (племенное разведение). С учетом
животных. В мировой практике производятся и используются стандарт- массы, физиологического состояния и половозрастной принадлежности
ные полнорационные гранулированные корма специально для каждо- животных в комбикорм добавляется мясокостная мука, сухое молоко,
го вида животных. Для кормления мышей и крыс обычно используется корнеклубнеплоды. При необходимости сухие корма автоклавируются,
один и тот же корм, который допустимо использовать для кормления корнеклубнеплоды отвариваются.
хомяков. Используются также диеты, учитывающие генетические осо- Кормление кур осуществляется по рецептурам, утвержденным МСХ
бенности метаболизма отдельных линий животных. Кормление живот- СССР и РФ (ГОСТ 18221-72) и нормативам затрат в соответствии с При-
ных при их воспроизводстве и использовании в экспериментах должно казом МЗ СССР №1179 от 10.10.1983 г., и рекомендациями МСХ РФ с
производиться одинаковым кормом. использованием:
Кормление лабораторных животных (мышей, крыс, хомяков, морс- – для взрослых кур-несушек комбикормов ПК-1-2 и ПК-1-5 и пре-
ких свинок, кошек, собак) всех категорий должно осуществляться полно- микса П-1-L. Норма кормления – 190 г в сутки на голову.
рационным гранулированным комбикормом, изготовленным в соответ- – для молодняка в возрасте 1–150 дней ПК-2-3 и Пк-3-2 и премикса
ствии со стандартом «Комбикорма полнорационные для лабораторных П-2-1. Норма кормления – 28–90 г в сутки на курочку и 31–100 г в
животных». Гранулированный комбикорм следует хранить в сухих, чис- сутки на одного петушка, в неограниченном количестве даются мел,
тых, хорошо проветриваемых, незараженных амбарными вредителями и ракушка, гравий, перед употреблением корма автоклавируются.
дикими грызунами складских помещениях, не имеющих посторонних Контроль качества корма. Поступающий корм должен иметь на каж-
запахов. Оптимальные условия хранения при температуре +5°С и влаж- дом мешке сертификат с указанием названия и адреса производителя,
ности 50–60%. номер ГОСТа и рецептуры корма, даты изготовления. Контроль каче-
Перед скармливанием корм в обязательном порядке подвергается ства корма производится на его соответствие показателям рецептуры и в
стерилизации в автоклаве с использованием вакуума при температуре целом требованиям ГОСТ производимого корма для всех видов лабора-
121°С и давлении 1,2 атм. в течение 20 мин. Корм автоклавируется в спе- торных животных по показателям и с использованием методов в соответ-
циальных металлических контейнерах с перфорированными стенками. ствии с приложением. Сроки хранения кормов определяются согласно
Из контейнеров корм в теплом состоянии во избежание слипания гра- рекомендациям изготовителя.
нул пересыпается в транспортные клетки со специальными емкостями. Гранулированные комбикорма следует хранить в сухих, чистых, хо-
В кормушки корм раздается дозировочной кормораздаточной лопатой, рошо проветриваемых, не зараженных амбарными вредителями и дики-
переносить корм из одной клетки в другую запрещается. При смене кле- ми грызунами складских помещениях, не имеющих посторонних запа-
ток оставшийся корм использованию не подлежит. Запрещается также хов. Оптимальные условия хранения при температуре +5°С и влажности
класть в кормушки упавший на пол корм. 50–60%.
Кормление мышей, крыс и хомяков всех категорий производится пол- Гарантированный срок хранения гранулированного комбикорма
норационным гранулированным кормом ПК 121-10 (ГОСТ-Р 50258-92) ПК 121-10 при температуре помещения:
или аналогичного иностранного производства с предварительной стери- +6–+ 10°С – 6 месяцев;
лизацией. +11–+18°С – 4 месяца.
Кормление морских свинок и кроликов I и II категории в связи с отсут- Гранулированный комбикорм для морских свинок и кроликов
ствием производства корма в соответствии со стандартом ГОСТ-Р50258-92 ПК 120-5 при температуре +10°С хранится 3 месяца.
150 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 151

Работа с популяциями о животном и его состоянии здоровья при получении, во время каран-
тина и во время исследования. За ведение индивидуального наблюдения
При работе с лабораторными животными необходимо правильно их за животным отвечают руководитель исследования и ветеринарный врач.
маркировать, а также регулярно вести индивидуальные записи по состо- Все данные индивидуального наблюдения за животными хранятся в со-
янию здоровья, проводимым манипуляциям и т.п. ответствующем разделе документации по исследованию.

Методы идентификации каждого вида


Ветеринарная помощь
В качестве методов идентификации крыс и мышей может использо-
ваться маркировка ушей иссечением фрагмента ушной раковины или ее В виварии должна быть предусмотрена возможность оказания вете-
перфорированием или цветные метки на теле (бриллиантовым зеленым, ринарной помощи, включая выходные и праздничные дни. Должен быть
раствором фукарцина или специальным нетоксичным маркером). план ветеринарных мероприятий. Ежедневно животных должен осмат-
Идентификационная карточка на клетках с животными, не участву- ривать ветеринар.
ющими в исследовании, содержит следующую информацию: Компоненты ветеринарной помощи:
Вид/Линия – необходимое оборудование, персонал и службы для обеспечения ос-
Пол новных принципов содержания;
Номер клетки – использование соответствующих методов для предупреждения забо-
Дата получения леваний и контроля здоровья лабораторных животных;
Возраст при получении – наличие службы оповещения в праздничные и выходные дни;
Предназначение (номер исследования, резерв или др.) – ежедневный ветеринарный осмотр;
Количество животных – способность исследователей оказать ветеринарную помощь, исполь-
Идентификационная карточка на клетках с животными, во время зование правильных методов удержания, иммобилизации, анестезии,
исследования содержит следующую информацию: анальгезии и эвтаназии при выполнении научных манипуляций;
Вид/Линия – адекватная премедикация, хирургическая и послеоперационная по-
Пол
мощь.
Номер клетки
Код исследования
Номер протокола КБЭ
Руководитель исследования
Группа
Номера и метки животных в клетке

Ведение постоянных индивидуальных записей


В листе рутинных манипуляций, выполняемых в комнате содержа-
ния животных, отмечаются отклонения в состоянии здоровья животных,
о чем ставятся в известность ветеринарный врач и руководитель иссле-
дования. Кроме того, во время проведения исследований проводится
индивидуальный клинический осмотр животных с регистрацией пока-
зателей в «карте клинических признаков заболевания». В зависимости
от требований протокола исследования может вестись индивидуальная
карта наблюдения за животным, в которую заносится вся информация
152 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 153

Глава 7 НОРМЫ РАЗМЕЩЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В ТРАНСПОРТНЫХ КЛЕТКАХ


Т абл ица 32

Приобретение, транспортировка и
Максимальное количе-
Вид жи- Площадь пола на 1 Высота
Вес, г ство животных
вотных животное, см2 клетки, см
карантинирование лабораторных в 1 клетке
Мыши 15–20 25 20 10
животных Крысы 20–35 25 26 13
35–50 25 40 13
50–150 25 52 13
выше 150 12 100 13
Хомяки 30–50 12 32 13
50–60 12 66 13
60–100 12 136 13
Морские 170–280 12 90 15
свинки 260–420 12 160 15
выше 420 12 230 15
Кролики менее 2,5 4 770 20
Для проведения экспериментальной работы лабораторных живот-
(кг) 2,5–5,0 2 970–1160 25
ных закупают и транспортируют в соответствии с ветеринарными и био-
этическими требованиями. выше 5,0 1 1400 30

пластмассовой сеткой, вставленной между внутренними стенками клетки.


При транспортировке животных СПФ-категории воздушные отверстия
Документация и соглашения при покупке животных клеток покрываются воздухофильтрующим материалом – фильтром вы-
Покупка животных питомниками (вивариями) должна произво- сокой очистки, аналогичном по эффективности действия фильтрам, ис-
диться только из известных источников. Все животные должны иметь пользуемым для очистки воздуха при производстве СПФ-животных. При
сертификаты качества. При покупке животных за рубежом необходимо транспортировке улучшенных конвенциональных животных воздушное
соблюдать международные соглашения по продаже и покупке животных, отверстие следует закрывать фильтром грубой очистки. При продолжи-
а также ветеринарные требования при пересечении границы. Все закупа- тельности транспортировки более 12 часов используются пластмассовые
емые животные должны проходить карантин. транспортные клетки. Воздушные отверстия клеток закрываются метал-
лической сеткой и надежной фильтровальной тканью. При сборке клет-
ки скрепляются специальными скрепками, щели заклеиваются клейкой
Транспортировка лабораторных животных лентой.
Нормы размещения лабораторных животных в транспортных клет-
Транспортировка является стрессовым фактором и существенно по- ках представлены в Таблице 32.
вышает риск инфекционного заражения лабораторных животных и поэто- Заготовки картонных клеток хранятся в виде сложенных листов в
му должна выполняться в соответствии с нижеизложенными правилами. обычном складском помещении. В «чистую зону» они передаются через
При транспортировке лабораторных животных продолжительностью формалиновую камеру стерильными, в складе «чистой» зоны хранить
не более 12 часов используются транспортные клетки, изготовленные по большее количество клеток, чем требуется на одну неделю, запрещается.
специальной технологии из многослойного картона. Размеры клеток для После сборки в клетку помешается стерильная стружка слоем 1–2 см, на
мышей 400 × 140 мм, хомяков – 400 × 280 × 180 мм. Для других видов живот- клетки наклеивается этикетка, в которой указывается:
ных используются клетки большего размера, на противоположных кон- – фамилия заказчика;
цах клетки имеются отверстия для обмена воздуха, которые закрепляются – наименование и адрес потребителя;
154 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 155

– символ линии или популяции транспортируемых животных, пол, ве- Дверка шлюза отворяется с наружной стороны («грязной»). Клетка
совая категория или возраст; помещается внутрь шлюза и закрывается его наружная дверка, откры-
– количество животных; вается дверка шлюза, ведущая в «чистую» зону. Пинцетом, смоченным
– сертификат качества; в дезинфицирующем растворе, открывается крышка клетки. Другим
– дата упаковки и транспортировки; пинцетом животных по одному перемещают в заранее подготовленные
– фамилия упаковщика или знак упаковочного цеха; клетки, клетки с животными помещаются в отдельную комнату «чистой»
– адрес и наименование поставщика. зоны для прохождения карантина, пустые транспортные клетки удаля-
В приготовленную и снабженную этикеткой клетку помещаются ются через наружную дверь шлюза, и в него помещается очередная про-
животные в соответствии с нормой посадки. Если наружная температура дезинфицированная клетка с животными, таким образом, проводится
выше +27°С или температура салона машины не отрегулирована и может шлюзование до распаковки последней транспортной клетки.
достигать 27°С, то в клетку помещается только половина от нормативно- Использованные транспортные клетки передаются в моечно-дезин-
го количества животных. фекционное отделение и сжигаются, повторное использование транс-
При транспортировке продолжительностью более 12 часов в клет- портных клеток категорически не допускается.
ку помещается стерильный брикет в количестве суточной нормы, а в Для транспортировки лабораторных животных используется специ-
стерильную марлю или фольговый мешочек упаковывается брикетная альная автомашина с установленным оборудованием для поддержания в
смесь, увлажненная питьевой водой. салоне микроклимата (температура, вентиляция) на требуемом уровне,
При транспортировке продолжительностью более 24 часов в клетку салон оборудуется полками для размещения транспортных клеток. Авто-
помещается корм в количестве 1,5 суточной нормы, а для удовлетворе- машину, предназначенную для транспортировки животных, запрещает-
ния животных в воде кладутся очищенные от кожицы простерилизован- ся использовать для других целей.
ные яблоки или картофель. Чистка и дезинфекция автомашины для перевозки животных яв-
После помещения животных транспортная клетка закрывается ляются обязанностью водителя, чистка и дезинфекция осуществляются
крышкой, все возможные щели заклеиваются клейкой лентой, и переда- после каждой транспортировки животных как конвенциональных, так и
ется через воздушный шлюз водителю транспортной машины, одновре- СПФ-категории.
менно водителю передаются накладные в трех экземплярах, в которых Пол салона автомашины очищается с помощью швабры или пылесоса.
указываются количество и качество животных. Стены и пол салона для груза, так же как и пол кабины водителя, промыва-
Погрузка клеток производится водителем и работником по отправке ются и дезинфицируются влажной тряпкой, смоченной в дезрастворе.
животных в отапливаемом и проветриваемом гараже или отправочной. Загрязнения маслом и жиром удаляются раз в неделю раствором мо-
Салон автомашины должен быть тщательно очищен и продезинфициро- ющего средства
ван. Клетки в салоне размещаются так, чтобы воздушные отверстия ос- Один раз в квартал или после перевозки инфицированных животных
тавались свободными. Во время транспортировки в салоне автомашины автомашина подвергается, кроме мойки и дезинфекции путем протира-
поддерживается температура 17–27°С (оптимально 19±2°С). Салон по- ния, обработке парами формалина.
стоянно проветривается, летом транспортировка проводится по возмож- Пол в гараже ежедневно протирается раствором моющего средства
ности рано утром. и промывается водой, один раз в квартал гараж обрабатывается парами
В одном салоне допускается совмещение следующих видов живот- формальдегида.
ных по группам: одна группа – мыши, морские свинки, кролики, дру- Работа гаража должна регистрироваться в контрольном журнале, во-
гая – крысы, хомяки. дитель должен заносить в контрольный журнал следующие данные:
Передача животных СПФ-категории в «чистую» зону ЭБК или пи- – дата проведения дезинфекции;
томника производится через воздушный шлюз с УФ-облучением. По- – номер автомашины;
верхность клетки тщательно протирается губкой, смоченной дезинфи- – время начала и конца проведения дезинфекции;
цирующим раствором. Клетки предварительно проверяются на наличие – использованные дезсредства и их концентрации;
повреждений, животные из поврежденных клеток не принимаются. – подпись водителя;
156 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 157

– подпись ответственного ветеринарного врача учреждения. Кроме за- Уход за животными в карантинном отделении осуществляется пер-
писи в контрольный журнал, водитель должен занести те же данные соналом, закрепленным за данным отделением и соблюдающим соответ-
в бортовой журнал автомашины. ствующие меры предосторожности (работа в респираторах, перчатках, в
Качество работ по чистке и дезинфекции транспортных средств и га- спецобуви). Вход в карантинное отделение посторонним лицам и работа-
ража должно не менее одного раза в неделю проверяться ветеринарным ющим в других помещениях категорически запрещается.
врачом учреждения, результат проверки следует занести в контрольный Животные в карантинном отделении содержатся в общепринятых
журнал с указанием даты и подписью. стандартных клетках и в соответствии с нормативами плотности посад-
Водители автомашин для перевозки животных обязаны при погруз- ки. Запрещается содержание в одном помещении животных разных ви-
ках предъявлять бортовой журнал ответственному ветеринарному врачу, дов и разных сроков поступления.
который обязан проверить санитарное состояние автомашины и резуль- Чистка, мойка клеток и другого инвентаря из карантинного отделе-
тат проверки занести в бортовой журнал. Ветеринарный врач имеет право, ния может производиться в общем дезинфекционно-моечном отделении
при серьезных недостатках в санитарном состоянии, запретить погрузку только после предварительного обеззараживания, отходы также должны
животных до их устранения и распорядиться об удалении автомашины с обеззараживаться и сжигаться.
В период карантина животные подвергаются ежедневному ветери-
территории учреждения.
нарному клиническому осмотру, результаты которого документируются
Машинам, принадлежащим другим учреждениям, въезд на террито-
в специальном журнале с указанием поставщика (название, адрес), даты
рию питомника ЭБК не разрешается.
поступления животных, их клинического состояния, состояния транс-
портных клеток.
Карантин лабораторных животных Животные с подозрением на инфекционное заболевание подверга-
ются всестороннему лабораторному обследованию. В случае лаборатор-
Конвенциональные животные, поступившие в питомник или ЭБК, ного подтверждения инфекционного заболевания животные данного
предварительно содержатся в специальном карантинном отделении, по- поступления уничтожаются. В отношении собак, кошек, мини-свиней в
мещение отделения должно быть изолировано от других помещений и зависимости от установленного заболевания сроки карантина могут про-
должно иметь самостоятельную систему воздухообеспечения. Санитар- длеваться. Трупы обрабатывают дезинфектантами и сжигают.
но-гигиенические требования к карантинному отделению стандартные. Помещения карантинного отделения, оборудование, инвентарь по-
В питомниках и ЭБК барьерного типа обязательно предусматрива- сле каждого случая выявления инфекционного заболевания подверга-
ются дезинфекции, после чего смывы с поверхностей стен, полов, окон,
ются карантинные отделения.
оборудования, а также воздух подвергают микробиологическому обсле-
Карантинирование преследует следующие цели:
дованию. В случае обнаружения возбудителей дезинфекцию повторяют
– регистрацию возможных проявлений инфекционных заболеваний
до получения отрицательного результата.
животных, клинической манифестации латентно текущих процессов
При обнаружении инфекционного заболевания руководитель ка-
после стрессовой ситуации, каковой является транспортировка и т.д.;
рантинного отделения письменно информирует об этом поставщика и
– в случае возникновения инфекционного заболевания – диагности-
региональную ветеринарную службу.
ческое обследование животных, обеспечение безопасности персона-
ла, основного поголовья животных и окружающей среды.
Для вновь поступивших животных общепринятыми являются следу- Карантин, адаптация и распределение животных,
ющие сроки карантина: мыши, крысы, хомяки, морские, свинки – 5–15 находящихся в эксперименте
дней; кролики, кошки, собаки, мини-свиньи – 20–30 дней. Продолжи-
тельность карантина может быть увеличена руководителем карантинного Лабораторные животные, приобретенные для экспериментальных
отделения, в том числе и в случае подозрения на заболевание или выяв- исследований, должны пройти карантин, адаптацию, осмотр ветврача, и
ления заболевания. только после этого на них будет возможно проведение исследований.
158 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 159

Прием и первоначальная оценка животных Изоляторы и процедуры для больных животных


Животные поступают в корпус биомедицинских исследований, за- Если появляются клинические признаки заболевания у животных,
ранее обработанные специальным дезраствором, например 0,5% раство- находящихся в условиях адаптации в «чистой» зоне, то животные немед-
ром «Глютекса» и УФ. Картонные контейнеры обрабатываются со всех ленно выводятся из «чистой» зоны и подвергаются эвтаназии. Специаль-
ные изоляторы для больных животных не используются.
сторон 0,5% раствором «Глютекса» или «Аэродезином 2000». Персонал,
получающий животных, переодевается в стерильную одежду: куртка,
Периоды физиологической, психологической и пищевой
брюки, шапочка, маска, перчатки. Обработанные контейнеры заносятся
адаптации
в комнату с передаточным шлюзом, где вскрываются. Животные пере-
саживаются в чистую проавтоклавированную клетку, которая передается Перед началом исследования животные проходят период физиоло-
через передаточный шлюз. С обратной стороны (в «чистой» зоне), жи- гической, психологической и пищевой адаптации не менее 3 суток при
условиях содержания, описанных в Протоколе исследования.
вотные пересаживаются в подготовленные клетки содержания и поме-
щаются в «карантинную» комнату (комната содержания животных, от-
Программа разделения животных по видам, источникам
веденная для адаптации). Разные виды животных помещаются в разные
приобретения и состоянию здоровья
комнаты. Разные партии животных по возможности также содержатся в
разных комнатах. Животные SPF-статуса находятся в барьерной зоне содержания жи-
вотных. Животные разных видов содержатся в разных комнатах. Основ-
ной принцип размещения животных – отдельное исследование – отдель-
Карантинные помещения и процедуры для специально ная комната.
выращенных животных Животные для краткосрочных исследований содержатся в специаль-
После поступления животных в «чистую» зону содержания их раз- но отведенных комнатах конвенциональной зоны.
мещают в комнатах, предназначенных для адаптации животных. Крысы
и мыши разных партий помещаются в разные комнаты. Для животных, Наблюдение, диагностика, лечение и контроль здоровья
поступивших из собственного питомника, период адаптации (период от животных
приема до использования животных в исследовании) составляет не менее Повседневное наблюдение за животными. Осмотр состояния здоровья
3 дней, специальные карантинные мероприятия не проводятся. Микро- животных проводится визуально персоналом, ухаживающим за живот-
биологический контроль прибывших животных не проводится. Состоя- ными. При наличии отклонений в состоянии здоровья животных, по-
ние здоровья оценивается по внешнему виду и проявлению клинических треблении корма и питья делается отметка в Листе рутинных манипу-
ляций по комнате и Протоколе обнаруженных отклонений в здоровье
признаков заболевания.
животных, о чем информируются ветеринарный врач и руководитель
Для животных, поступивших из других источников, порядок и дли-
исследования.
тельность карантинных мероприятий определяются ветеринарным вра- Обеспечение ветеринарной помощью. Животным (крысам и мышам) с
чом лаборатории по согласованию с ветеринарной службой. клиническими признаками заболевания ветеринарная медицинская по-
мощь не оказывается. Если появляются клинические признаки заболе-
Карантинные помещения и процедуры для животных из вания у животных, находящихся в условиях адаптации в «чистой» зоне,
случайных источников то животные немедленно выводятся из «чистой» зоны и подвергаются
эвтаназии. Если появляются клинические признаки заболевания у жи-
Животные из случайных источников с неустановленным статусом вотных, находящихся в исследовании, такие животные изолируются в
здоровья в «чистую» зону не поступают. SPF-статус животных подтверж- отдельные клетки, помещаются на отдельный стеллаж в помещении для
дается документально поставщиком. исследования и находятся под наблюдением до принятия решения об их
160 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 161

участи (наблюдение до исчезновения клинических признаков болезни, Глава 8


лечение, эвтаназия). Решение об участи животных принимается руко-
водителем исследования с учетом рекомендаций ветеринарного врача и Биобезопасность при работе с
утверждается заведующим лабораторией. Животные с признаками боли,
дистресса, в тяжелом состоянии подвергаются немедленной эвтаназии. лабораторными животными
Могут быть проведены патоморфологические и/или бактериологические
исследования павших или заболевших животных.
При проведении экспериментального исследования в случае необ-
ходимости животным оказывается медикаментозное лечение препарата-
ми, разрешенными для применения в ветеринарии (кроме случаев, когда
протоколом исследования не предусмотрено иное).
Ведение медицинских записей. При появлении клинических призна-
ков заболевания стандартные записи включают:
– запись в Протоколе отклонения здоровья животного;
– записи осмотра животного ветеринарным врачом, описание клини- Большое значение в получении лабораторных животных высокого
ческих признаков заболевания и диагноз; качества и проведении экспериментов на них имеет подготовка персона-
– записи дальнейшего наблюдения за животным, динамика проявле- ла. Необходимо уделять особое внимание тому, чтобы было достаточное
ния клинических признаков заболевания; количество людей, обслуживающих животных в питомниках, экспери-
– запись о решении дальнейшей судьбы животного; ментально-биологических клиниках (вивариях), проинструктированных
– запись о проводимом лечении; правильному обращению с животными. Кроме соблюдения правил гу-
– данные об эвтаназии и некропсии животного. манного обращения с животными необходимо соблюдать и правила лич-
Программы профилактической медицины для каждого вида. Для содер- ной безопасности.
жащихся в «чистой» зоне животных превентивная программа заключается
в следующем: раздельное содержание разных видов и партий животных,
размещение прибывших животных в «карантинную» комнату, наличие Помещения для лабораторных животных
барьерной системы: вход персонала через санпропускник, соблюдение
При проектировании помещений для лабораторных животных сле-
однонаправленного потока людей и материалов по направлению «чис-
дует предусмотреть их изоляцию от персонала лаборатории в случае не-
тый коридор – комната содержания животных – грязный коридор», ис-
обходимости, а также возможность деконтаминации и дезинфекции.
пользование дезинфектантов и соблюдение программы санитарии. При Проектирование помещений для животных, так же как и лаборато-
проведении длительных исследований в комнату с экспериментальными рий, должно осуществляться с учетом степени опасности исследуемых
животными помещаются дополнительные животные (sentinels), которые микроорганизмов; здесь также выделяют четыре уровня биологической
затем отправляются на проверку статуса здоровья. безопасности. Во внимание принимаются и иные факторы, такие как
объем и концентрация исследуемого патогенного агента, путь заражения
Мониторинг состояния здоровья животных. Мониторинг здоровья ла- животного и возможный путь выведения агента из организма животного.
бораторных животных включает в себя: серологические, бактериологичес- Учитывают особенности животного: его агрессивность или способность
кие, паразитологические, патоморфологические исследования, которые вы- кусать или царапать, его природных экто- и эндопаразитов, зоонозные
полняются на базе контрактных лабораторий. заболевания, которым подвержено данное животное, а также возможное
распространение аллергенов.
Определенные требования существуют и к оснащению лаборатории,
ее проектированию, причем меры предосторожности усиливаются по
162 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 163

мере возрастания уровня биологической безопасности лаборатории. Эти – при механической вентиляции она должна быть приточной и обес-
требования изложены и кратко представлены в Таблице 33. печиваться путем выброса воздуха в атмосферу. Воздух не должен ре-
циркулировать в остальных помещениях, т.е. используется система
Та бли ца 3 3
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ И УРОВНИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ, СВОД «тотального выброса»;
ПРАВИЛ РАБОТЫ И ПЕРЕЧЕНЬ БЕЗОПАСНОГО ОБОРУДОВАНИЯ – доступ разрешается только ограниченному кругу лиц;
Группа Уровень без- Оборудование, обеспечива- – содержаться должны лишь животные, используемые в эксперименте;
Лабораторная практика
риска опасности ющее безопасность – должна быть программа наблюдения за членистоногими и грызунами;
I 1
Ограниченный доступ, защит- Средства личной защиты и – необходимо использовать средства защиты от насекомых;
ная одежда и перчатки гигиены – после использования рабочие поверхности следует деконтаминиро-
Ограниченный доступ и знаки I и II классы боксов биологи- вать соответствующими дезинфектантами;
биологической опасности; ческой безопасности (БББ) для
II 2 защитная одежда и перчатки; видов работ, сопровождающих- – боксы биологической активности уровней 1 и 2 должны быть при-
деконтаминация отходов и ся образованием аэрозолей; способлены для работы с образованием аэрозолей;
клеток перед уборкой средства личной защиты – автоклав должен быть расположен в помещении или рядом с ним;
Контролируемый доступ; спе- – подстилки из клеток животных удаляются с минимальным образова-
циальная защитная одежда; I и II классы БББ для всех видов
III 3
остальное, как для уровней работ; средства личной защиты
нием аэрозолей или пыли;
1и2 – перед удалением подстилки все использованные материалы подле-
Строго ограниченный доступ; жат деконтаминации;
3-й уровень деятельности
Класс III БББ или ламинарные – материалы для автоклавирования или сжигания транспортируются в
плюс помещения для переоде- безопасных закрытых контейнерах;
IV 4 костюмы с положительным
вания и душевые; все отходы
давлением – после использования клетки животных подлежат деконтаминации;
деконтаминируются перед
удалением из помещения – трупы умерщвленных животных подлежат сожжению;
– должны быть предусмотрены устройства для мытья рук. Персонал
должен мыть руки перед уходом из помещений, где содержатся жи-
Уровни биологической безопасности вотные;
– в помещении следует носить защитную одежду, снимаемую при ухо-
Уровень биологической безопасности 1 де из лаборатории. Следует предусмотреть наличие перчаток;
К этому уровню биологической безопасности относится большин- – все травмы, даже незначительные, должны быть запротоколированы;
ство лабораторных животных (за исключением приматов), а также жи- – в помещениях, где содержатся животные, запрещаются прием пищи
вотных, зараженных инфекционными агентами группы риска 1. При ра- и воды, курение, использование косметики.
боте с ними требуется хорошая микробиологическая техника (ХМТ). Уровень биологической безопасности 3
Относится к работе с лабораторными животными, зараженными па-
Уровень биологической безопасности 2
тогенными агентами группы риска 3. Приемлемы все рекомендации, раз-
Сюда относится работа с лабораторными животными, зараженными
работанные для лабораторий, уровней биологической безопасности 1 и 2:
инфекционными агентами группы риска 2. Необходимо соблюдение сле-
– доступ в лаборатории должен быть строго ограничен;
дующих предосторожностей: – помещения, в которых содержатся животные, должны быть отделе-
– на дверях и в соответствующих местах должны вывешиваться знаки ны от остальной части лаборатории и вивария воздушным шлюзом с
биологической опасности; двумя дверями;
– проектирование должно предусматривать эффективную очистку и – при входе в помещения устанавливаются раковины для мытья рук и
уборку помещений; душ;
– двери должны открываться и легко закрываться; – должна быть предусмотрена механическая вентиляция с поступле-
– отопление, вентиляция и освещение должны быть адекватными; нием воздуха во все комнаты. Отработанный воздух фильтруется
164 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 165

через ВД-фильтры перед выбросом в атмосферу («полный выброс»). – в комнате рядом с лабораторным помещением должен находиться
При проектировании системы предусматриваются устройства, пре- автоклав с двумя дверцами;
пятствующие случайному обратному току воздуха и его нагнетанию – при входе в лабораторию персонал обязан снять уличную одежду и
ко всем клеткам с животными; надеть защитную одежду одноразового использования. После окон-
– в помещении устанавливается автоклав; чания работы одежда снимается и помещается в специальные емкос-
– сжигатель должен находиться в помещении и быть легкодоступным. ти для автоклавирования и уничтожения; персонал обязан принять
Его можно заменить иным аналогичным прибором с согласия соот- душ;
ветствующих служб; – для поступления материалов используется воздушный бокс;
– животные, инфицированные патогенными агентами группы риска 3, – все манипуляции с животными производятся в боксах 3 класса био-
помещаются в клетки, изолированные от остального помещения, логической безопасности;
или в лаборатории перед вытяжными отверстиями вентиляции; – все животные должны находиться в изоляторах;
– подстилки для животных при использовании должны образовывать
– перед удалением из лаборатории все отходы и подстилки для живот-
минимальное количество пыли;
ных автоклавируются;
– в помещении носится защитная одноразовая одежда. При выходе из
– иммунизация персонала и медицинский контроль осуществляются в
помещения она снимается и автоклавируется перед уничтожением;
соответствии с указаниями и международными правилами.
– следует обеспечить регулярную иммунизацию персонала.
Уровень биологической безопасности 4
Работа в данном помещении обычно тесно связана с работой в мак- Идентификация опасных факторов и оценка риска
симально изолированной лаборатории – группа риска 4. Поэтому прави-
ла, разрабатываемые национальными и местными органами здравоохра- Определение опасных факторов
нения, должны соответствовать обоим типам лабораторий. Применяются Определение возможной опасности воздействия вредных производ-
все правила работы с лабораторными животными, разработанные для ственных факторов оценивается в соответствии со следующими норма-
уровней биологической безопасности 1, 2 и 3: тивными документами (Государственными Стандартами и Санитарны-
– доступ строго контролируется (наличие ключей), вход возможен ми правилами и нормами):
лишь лицам, имеющим разрешение директора данного учреждения;
– ГОСТ 12.0.003–74 ССБТ «Опасные и вредные производственные
– персоналу не разрешается работать в одиночку: используется прави-
факторы. Классификация»
ло «работы вдвоем»;
– ГОСТ 12.1.005–88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-
– персонал должен иметь прекрасную подготовку по микробиологии и
гигиенические требования»
знать все факторы риска, сопряженные с работой, а также необходи-
– ГОСТ 12.1.007–76 ССБТ «Вредные вещества. Классификация и об-
мые меры предосторожности;
– если рабочее помещение не является частью максимально изолиро- щие требования безопасности»
ванной лаборатории – с обозначением «уровень биологической без- – ГОСТ 12.1.008–76 ССБТ «Биологическая опасность. Общие требо-
опасности», то оно должно быть расположено в отдельном здании; вания»
– вход в помещение осуществляется через воздушный бокс, перед вхо- – СанПиН 2.2.4.548-96 «Гигиенические требования к микроклимату
дом в который с «чистой» стороны располагаются раздевалки и ду- производственных помещений»
шевые; – СанПиН 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III и
– помещение вентилируется через ВД-фильтры вытяжной вентиляци- IV групп патогенности и гельминтами»
ей, обеспечивающей отрицательное давление; – СанПиН 2.1.7.1322-2003 «Гигиенические требования к размещению
– при проектировании вентиляционной системы должна быть ликви- и обезвреживанию отходов производства и потребления»
дирована случайная возможность обратного тока воздуха, а также – Руководство Р 2.2.755-99 «Гигиенические критерии оценки и клас-
создания в помещении положительного давления; сификация условий труда по показателям вредности и опасности
166 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 167

факторов производственной среды, тяжести и напряженности тру- Собаки, кошки и другие хищники
дового процесса». Salmonella 2
Кроме того, используются обновляемые перечни химически опасных Бактерии
Pasteurella 2
веществ. Опасность известного химического вещества определяется так- Возбудитель кошачьей лихорадки Не класси-
же из MSDS на это вещество. Новое вещество или препарат считаются Cat-scratch fever agent фицирован
опасными, и при работе с ним соблюдаются все меры безопасности если: Лептоспиры Leptospira иктерогеморрагическая 2
– вещество относится к известному классу опасных веществ; Вирусы Кроличьи вирусы (специфические) 3
Грибы Microsporum 2
– если воздействие вещества на организм человека не было изучено;
Toxoplasma Гонди 3
– если структура вещества сходна со структурой заведомо опасного ве-
Toxocara (собачья) 2
щества.
Ancylostoma 2
Echinicoccus granulosus 3
Биобезопасность при работе с лабораторными Паразиты и гельмин-
ты Sarcoptes scabiei
Не класси-
фицирован
животными Не класси-
Ctenocephalides (собачья)
фицирован
Содержание лабораторных животных в питомниках и ЭБК создает Не класси-
потенциальную возможность взаимного инфицирования человека и жи- Ctenocephalides (кошачья)
фицирован
вотных (антропозоонозы), а также перекрестного инфицирования жи- Мини-свиньи, овцы и иные крупные животные
вотных, во избежание чего необходимо строгое соблюдение правил лич- Bacillus anthracis (сибирская язва) 3
ной гигиены работников (Таблица 34). Brucella species 3
Mycobacterium tuberculosis 3
Та бли ца 3 4 Бактерии
БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОПАСНОСТИ АНТРОПОЗООНОЗОВ И ГРУППОВЫЕ НОМЕРА (ГН) Staphylococci 2
УРОВНЯ ОПАСНОСТИ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА В КЛАССИФИКАЦИИ КОНСУЛЬТАТИВНОГО Clostridia 2
КОМИТЕТА ВОЗ ПО ОПАСНЫМ ПАТОГЕНАМ (2002)
Erysipelothrix 2
Групповые Q fever (Coxiella burnetti) 2
Виды патогенов Возбудители и их «хозяева»-животные
номера Вирусы
Cow Pox (чума коров) 2
Кролики, крысы, хомячки, мыши и другие грызуны
Entamoeba histolytica 2
Salmonella (например, S.Typhimurium) 2 Паразиты и гельмин-
Giardia 2
Бактерии Yersinia pseudo-tuberculosis 2 ты
Balantidium coli 2
Actinobacillus moniliformis (крысиная лихорадка) 2
Leptospira (различные виды) 2 При медицинском обследовании до приема на работу рекомендуется
Лептоспиры проводить тесты на аллергические реакции. Также необходимо проверять
Lymphocytic choriomeningitis 3
Sendai (вирус) 2 кандидата на носительство некоторого вида бактерий. Лицо, в организме
Вирусы
Hantaan (вирус) 3 которого эти бактерии присутствуют, не должен работать с животными,
Trichphyton 2 поскольку может передать им эти бактерии. Необходимо также вести на-
Грибы
Micosporon 2 блюдение за респираторными функциями, сделать флюорографию. Ре-
Паразиты, гельминты Hymenolepis nana (The dwart tapeworm) 2 комендуется брать образцы сывороток, для того чтобы в случае возник-
Птицы и другие летающие виды новения зоонозов можно было провести анализы.
Бактерии Salmonella 2 Сотрудники лаборатории должны представить личную и семейную
Вирус болезни Newcastle 2 историю болезни, касающуюся аллергий. Уже существующая аллергия
Вирусы
Пситтакозы и орнитозы 3 на какой-либо вид животного, обычного для лаборатории, является яв-
Aspergillus 2 ным противопоказанием. Нарушения опорно-двигательного аппарата,
Грибы
Candida 2 дыхательной системы и кровообращения также препятствуют утвержде-
168 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 169

нию кандидатуры, поскольку работа с животными предполагает высокую Персонал питомника и ЭБК должен быть обеспечен требуемым коли-
физическую нагрузку. чеством спецодежды, санитарная одежда должна быть персонально мар-
Сотрудники, работающие с лабораторными животными, должны кирована (Таблицах 35–36). Ее количество на одного работника «чистой»
ежегодно проходить медицинское обследование по правилам, действу- зоны в питомниках и ЭБК барьерного типа должно позволять стирку не
ющим для пищевой промышленности, носители патогенной для живот- реже, чем через 1 день и ежедневное автоклавирование. Комплект спец-
ных флоры, включая антропозоонозы, как и больные люди, к работе с одежды для персонала предбарьерной (конвенциональной) зоны имеет
животными не допускаются. тот же набор одежды, но в количествах, обеспечивающих возможность
Особое внимание необходимо обращать на симптомы аллергии и стирки не реже двух раз в неделю. Необходим утвержденный обязатель-
нарушения опорно-двигательного аппарата. Для подтверждения или ис- ный перечень спецодежды для работников «чистой» и «грязной» зон.
ключения причин заболеваний могут потребоваться дополнительные Т абл ица 35
лабораторные анализы. Респираторные функции сотрудников должны ПЕРЕЧЕНЬ СПЕЦОДЕЖДЫ ДЛЯ ПЕРСОНАЛА В ЗДАНИЯХ БАРЬЕРНОГО ТИПА
контролироваться независимо от их нарушений. Продолжительность Наименование Количество на 1 чел. в Количество на 1 чел. в
№№ п/п
нахождения в контакте с аллергеном до возникновения симптомов мо- предметов «чистой» зоне «грязной» зоне
жет быть от полугода до двух лет. Исследователи, находящиеся в долгом 1. Санитарные брюки 6 пар 4 пары
контакте с животным, предназначенным для опытов, могут проявлять 2. Санитарные халаты 6 пар 4 шт.
гиперчувствительность. Поэтому ранний перевод животных в исследова- 3. Колпаки 6 шт. 4 шт.
тельские лаборатории нежелателен. Профилактика заключается в исполь- 4. Маски 6 шт. 4 шт.
5. Носки 6 пар 4 пары
зовании перчаток и масок при контакте с животными. Животные должны
6. Трусы 6 пар 4 пары
содержаться отдельно от рабочих мест сотрудников. У гиперчувствитель-
Нижняя рубашка
ных пациентов часто обнаруживали аллергические реакции на пыль, со- 7.
(майка)
6 шт. 4 шт.
стоящую из эпителиальных клеток животных. Белки, содержащиеся в вы- 8. Полотенца 6 шт. 4 шт.
делениях животных, таких как моча или слюна, также являются мощными 9. Тапочки 4 пары 2 пары
антигенами. Исследования показали, что уровень содержания животного
протеина в воздухе обратно зависим от степени вентиляции помещения. Т абл ица 36
ПЕРЕЧЕНЬ СПЕЦОДЕЖДЫ ДЛЯ ПЕРСОНАЛА ПРИ КОНВЕНЦИОНАЛЬНОМ СОДЕРЖАНИИ
В связи с этим рекомендуется оснащение лаборатории локальной венти- ЖИВОТНЫХ
ляцией и ношение персоналом индивидуальных масок. №№ Наименование Количество на одного Количество на одного че-
Исследователи и техники также находятся в контакте с потенциаль- п/п предметов человека в «чистой» зоне ловека в «грязной» зоне
ными аллергенами, работая с животным или его тканями. Они должны 1. Санитарные брюки 4 пары 4 пары
соблюдать те же правила, что и основные сотрудники. Несмотря на следо- 2. Санитарные халаты 4 шт. 4 шт.
вание правилам обращения с животными, последние иногда кусаются. В 3. Колпаки 4 шт. 4 шт.
момент укуса в ткани человека заносятся не только антигены, но болезне- 4. Полотенца 2 шт. 2 шт.
творные бактерии, чего следует не только остерегаться, но и опасаться. 5. Тапочки 2 пары 2 пары
Весь персонал, работающий с животными, должен пройти тренинги Санитарная одежда подлежит стирке 1 раз в 3 дня. При содержании
на случай возникновения ситуаций, угрожающих жизни и здоровью. В слу- улучшенных конвенциональных животных одежда подвергается авто-
чае возникновения подобных ситуаций необходимо действовать согласно клавированию.
инструкции, утвержденной руководителем учреждения и находящейся в Резиновые перчатки (хирургические и бытовые) и бахилы должны
каждом подразделении. Также в каждом подразделении необходимо иметь быть одноразовые и закупаться в достаточном количестве. Работники
и своевременно пополнять аптечку для оказания неотложной помощи. дезинфекционно-моечного отделения должны обеспечиваться резино-
Рекомендуется проводить раз в 3 года медицинское обследование выми сапогами и прорезиненными фартуками. Руководители и другие
персонала, сходное с проводимым при приеме на работу, включающее сотрудники, не имеющие доступа в «чистую» зону, пользуются санитар-
сдачу образцов сыворотки. ными халатами, легкой обувью и пластиковыми бахилами.
170 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 171

Вход персонала в «чистую» зону помещения барьерного типа про- Лейкопластырь бактерицидный (шт.) 10 20 30
изводится через санпропускник, работник снимает одежду, кольца, це- Устройство для проведения искусственного дыхания
1 1 1
почки, серьги и др. и оставляет их в шкафу «грязной» раздевалки санпро- «Рот-Устройство-Рот» (шт.)
пускника, тщательно принимает душ, используя мыло, мочалку, банную Салфетки марлевые медицинские стерильные (уп.) 1 1
щетку, вытирается досуха полотенцем и одевается в полный комплект Бинт марлевый медицинский стерильный 7м х 14 см 1 2 3
Бинт марлевый медицинский нестерильный 7м х 14 см 1 2 3
стерильной одежды. Очки протираются дезраствором. В течение рабочего
дня работник из «чистой» зоны не выходит. В случае экстренного выхода
процедура входа в «чистую» зону через санпропускник полностью пов-
торяется заново. Таким же образом входят в «чистую» зону сотрудники, Антропозоонозы
выполняющие эксперимент на животных, и при необходимости – техни-
ВОЗ зарегистрировала до 200 зоонозов, то есть заболеваний, прямо
ческие работники. Рабочий инструмент подвергается автоклавированию
или косвенно передающихся от животных человеку. При прямой переда-
или дезинфекции и проводится через шлюзы.
че для возникновения зоонозов необходим только контакт. Циклозооно-
Персонал обеспечивается в необходимых количествах мылом и кре-
зы вызваны микроорганизмами, для размножения которых необходимы
мом для ухода за кожей. В помещениях с животными питомника и ЭБК 2 вида позвоночных существ. Возбудители метазоонозов развиваются в
необходимо иметь емкости с дезинфицирующими растворами для обра- беспозвоночных организмах, например в насекомых. Сапрозоонозы могут
ботки рук (Таблица 37). сохраняться в минеральной почве в течение долгого времени. Наиболее
Та бли ца 3 7 часто встречающиеся зоонозы: туберкулез, бруцеллез, оспа, псевдотубер-
СОДЕРЖИМОЕ КОМПЛЕКТОВ ПЕРВОЙ ПОМОЩИ
кулез, сальмонеллез, рожа, пастереллез, листереллез, бешенство, орнитоз,
Количество сотрудников пситтакоз, трихофития, токсоплазмоз, эхинококкоз, тениоз, туляремия и
Предметы
1–5 6–10 11–50 ботулизм. Многие из них вызывают у человека тяжелые заболевания.
Руководство по биобезопасности (инструкция) 1 1 1
Индивидуально упакованный стерильный лейкопластырь 10 20 40
Стерильная повязка на глаза 1 2 4 Ответственность персонала
Треугольная повязка 1 2 4
Стерильная повязка для наложения на обширные раны 1 2 4 Работа с лабораторными животными требует соблюдения норм био-
Безопасные булавки 6 6 12 безопасности, так как существует опасность инфицирования человека
Стерильная лекарственно не обработанная повязка сред-
3 6 8 болезнетворными бактериями и микроорганизмами. Человек может яв-
него размера ляться носителем микробов, способных передаваться животным.
Стерильная лекарственно не обработанная повязка боль-
1 2 4 На сотрудников возлагаются определенные обязанности по охране
шого размера
Стерильная лекарственно не обработанная повязка очень
труда и технике безопасности, определяемые Правилами внутреннего
1 2 4 трудового распорядка, с которыми сотрудники знакомятся при поступ-
большого размера
Перекись водорода (фл.) 1 1 1 лении на работу. Сотрудник должен ознакомиться с инструкциями по
Р-р бриллиантового зеленого (фл.) 1 1 1 охране труда и технике безопасности, стандартными операционными
Нитроглицерин (уп.) 1 2 2 процедурами (СОП), выполнять правила безопасности и информировать
Альбуцид (тюбик-капельница) 1 2 4 руководителя и службу охраны труда о возникновении аварийной ситуа-
Спирт нашатырный (фл.) 1 1 1 ции и случаях производственного травматизма, а также о несоблюдении
Жгут (шт.) 1 2 3 правил техники безопасности другими сотрудниками.
Вата медицинская стерильная (уп.) 1 1 1 В обязанность руководителя лаборатории входит обеспечение ин-
Перчатки медицинские (пар) 2 4 8 формированности персонала по всем вопросам безопасности, поддержа-
Ножницы 1 1 1 ние связи со службой охраны труда и техники безопасности, принятие
Лейкопластырь рулонный (шт.) 1 2 3 мер к выполнению рекомендаций данной службы.
172 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 173

Глава 9 Животные: транспортировка, прием, идентификация, рандомиза-


ция, маркировка, обращение, взятие проб, наблюдение, эфтаназия,
Основные принципы проведения обращение с мертвыми животными.
Приборы: эксплуатация, техобслуживание, калибровка, очистка, до-
экспериментов пуск в эксплуатацию.
Реактивы: приготовление, маркировка, хранение, учет.
Записи: сбор данных, обработка данных, подготовка отчетов, архи-
вирование.
Тест-система: подготовка помещений, условия окружающей среды,
прием, передача материалов, размещение, установление характерис-
тик, идентификация, уход, наблюдение, уничтожение.
Образцы: сбор, идентификация, обращение, вскрытие, гистопатоло-
гия.
Лабораторные испытания: методы, валидация.
Управление и организация: система документооборота, обучение пер-
Проведение экспериментов на лабораторных животных должно со- сонала, аудит и инспекции, архивирование.
ответствовать общемировым принципам гуманного обращения с живот- Компьютерные системы: проверка, эксплуатация, безопасность, ре-
ными, тщательно планироваться, результаты эксперимента должны тща- зервирование, валидация.
тельно фиксироваться и храниться. Мониторинг. Ежедневно необходимо осуществлять наблюдение за
здоровьем и поведением животных. Должны соблюдаться правила био-
безопасности при работе с животными.
Планирование эксперимента Записи. Исследователь должен ежедневно вести дневник экспери-
ментальной работы, включающий детальное описание рутинных еже-
Выбор животных. Исследователь должен быть уверен, что выбранные дневных процедур, условий окружающей среды и других факторов, не
животные наилучшим образом соответствуют целям эксперимента. Не- относящихся к эксперименту, но которые могут влиять на результаты.
обходимо учитывать генетические характеристики, отсутствие болезней, Записи должны обеспечить возможность статистической обработки ре-
факторы содержания и кормления, а также другие факторы, способные зультатов эксперимента.
оказать влияние на результаты эксперимента. После выбора биологичес- Консультации. При необходимости должны проводиться консульта-
кого вида необходимо убедиться, что животных достаточно для проведе- ции с участием других научных сотрудников, ветеринаров, специалистов
ния эксперимента. При проведении эксперимента животные не должны по лабораторным или диким животным. Участие ветврача необходимо в
испытывать боли и страданий, поэтому после отбора соответствующих следующих случаях:
видов и экземпляров животных для эксперимента необходимо обратить – использование транквилизаторов, анальгетиков и анестезии;
внимание на все аспекты, включая поведенческие характеристики жи- – премедикация, хирургия и послехирургическая помощь;
вотных. – использование паралитиков с анальгезией;
Стандартные операционные процедуры (СОП). Все действия и мани- – длительное использование транквилизаторов, анальгетиков и анес-
пуляции как рутинные, так и в рамках проведения исследования должны тезии.
производиться в соответствии со стандартными операционными проце- Контрольный лист. После завершения планирования эксперимента
дурами организации (СОП). СОПы организации должны разрабатывать- исследователь должен перепроверить протокол для адекватного отраже-
ся, храниться, распространяться и обновляться надлежащим образом в ния следующих вопросов.
соответствии с принятыми стандартами организации. – Отвечает ли проект этическим и научным принципам?
Необходимый перечень СОПов при проведении доклинического ис- – Могут ли быть достигнуты поставленные цели без использования
следования должен включать следующие позиции. животных?
174 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 175

– Есть ли какие-либо еще эксперименты, которые могут быть проведе- Мониторинг здоровья животных проводится следующими методами:
ны параллельно для снижения количества используемых животных? – серологические исследования на антитела к вирусам – методами
– Все ли средства и компетентный персонал имеются в наличии? ELISA и IFA;
– Весь ли персонал оповещен о проведении эксперимента? – микробиология взятых тканей при вскрытии животных – методами
– Отобраны ли наиболее подходящие виды животных? ПЦР и рутинными культуральными исследованиями;
– Является ли подходящим биологический статус животных (генети- – паразитология – микроскопическое исследование на наличие экзо-
ческий, микробиологический статус, способ кормления, общее со- и эндопаразитов, патоморфологические исследования.
стояние здоровья) для данного эксперимента?
– Подходят ли внешние условия (включая тип клеток, шум, освеще-
ние, температуру, влажность, вентиляцию, плотность содержания и Проведение эксперимента
социальную структуру)?
– Будут ли получены статистически достоверные результаты с мини- Ограничение боли и страданий. Боль и дистресс у животных не могут
мальным количеством используемых животных? быть оценены теми же методами, что у человека. Поэтому решение о са-
– Если эксперимент связан с болью и дистрессом, то могут ли они быть мочувствии животных принимаются исследователем исходя из предполо-
минимизированы? жения об их отсутствии. Необходимо предпринимать следующие меры:
– Весь ли персонал обладает необходимой квалификацией для прове- – использование наиболее подходящих и гуманных методов;
дения манипуляций? – использование всех технических навыков и компетентного персонала;
– Участвуют ли в эксперименте студенты и проинструктированы ли – использование анальгезии;
они? – адекватное мониторирование появления боли и дистресса;
– Какие мероприятия должны быть проведены для мониторирования – составление четкого плана для устранения нежелательных послед-
состояния животных и их реакциям на манипуляции? ствий от манипуляций;
– Если подобные эксперименты уже проводились, то зачем проводить – использование незамедлительных мер для предотвращения боли и
данный эксперимент? дистресса;
– Если животные используются повторно, то как минимизировать ку- – использование анестезии, анальгезии и транквилизаторов, подходя-
мулятивный эффект? щих для выбранного вида животных и целей эксперимента;
– Могут ли быть использованы какие-либо другие методы без живот- – разработка плана эксперимента, снижающего боль и дистресс;
ных для получения аналогичных результатов? – проведение эксперимента в наиболее сжатые сроки;
– использование подходящих методов эвтаназии.
Использование общей или местной анестезии, анальгезии или тран-
Средства диагностики квилизаторов должно соответствовать виду животных, а также критери-
ям, принятым в медицине, ветеринарии или практике лабораторного жи-
Клиническая лаборатория. Исследования по клинической биохимии вотноводства.
и гематологии проводятся согласно протоколу конкретного исследова- Эксперименты, результаты которых могут быть искажены, могут
ния и не используются для диагностики заболеваний в программе мони- быть проведены без анестезии. Дистресса в ряде случаев можно избежать
торинга здоровья. без медикаментозного вмешательства. Например, за счет хорошей адап-
Некропсия и гистопатология. Патоморфологические исследования тации животных к внешним условиям до момента начала эксперимента.
проводятся для диагностики патологических изменений органов и тканей Мониторинг животных во время и после эксперимента должен быть
животных, находившихся в конкретных исследованиях, где они заплани- постоянным и адекватным боли и дистрессу. Если боль или дистресс во
рованы в протоколе. При выявлении патоморфологических изменений время эксперимента становятся нестерпимыми, то необходимо немедлен-
органов контрольных животных исследователь сообщает результаты ис- но оказать необходимую помощь. Если исследователь не может оказать
следований ветеринарному врачу лаборатории. помощь самостоятельно, то необходимо немедленно вызвать ветврача.
176 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 177

Если в процессе эксперимента произошла незапланированная ги- ЛИСТ НАБЛЮДЕНИЯ ЗА ПОВЕДЕНИЕМ ЖИВОТНЫХ

бель животного, об этом необходимо оповестить ветврача и отразить это Вид животного ______ Дата наблюдения эксперимента _____
событие в протоколе эксперимента. Начальный вес ______ Исследователь ________________
Исследователь должен знать, каким образом животное, участвующее Объем бутылочки для воды
в эксперименте, сигнализирует о боли и дистрессе. Любые изменения в __________
сне, кормлении, поении, почесывании, поведении должны быть описа- Дата
ны, оценены и учтены в будущем. День недели
Время
Мониторинг состояния животного. Необходимо постоянно наблю-
ВИЗУАЛЬНОЕ НАБЛЮДЕНИЕ
дать, не появилась ли острая боль или дистресс у животных. Это может
Активность
выражаться следующим образом:
Сутулая поза
– агрессивное и/или ненормальное поведение (некоторое виды стано- Нахохливание
вятся слишком тихими); Частота дыхания
– ненормальная стойка или движение; Описание дыхания*
– ненормальные звуки; ИЗМЕРЕНИЕ
– изменение сердечно-сосудистой и/или респираторной функций; Вес животного, г
– ненормальный аппетит; % изменения веса тела
– быстрое снижение веса; Исследовательская активность
– снижение температуры тела; Диарея
– рвота; ненормальная дефекация или мочеиспускание. Дегидратация
Издаваемые звуки
Подтверждением наличия боли и дистресса могут быть:
Захваты и конвульсии
– потеря веса или отсутствие привеса;
ЕДА И ПИТЬЕ
– отсутствие нормального почесывания;
Поедание корма**
– отсутствие спокойного поведения; Количество воды в полной бутылочке
– снижение репродуктивных функций; Количество воды в бутылочке на дату
– снижение устойчивости к болезням. наблюдения
Пример листа наблюдений за животным приведен ниже. Раны**
Точки окончания эксперимента должны быть определены исследо- Кровотечения
вателем заранее. Смерть не должна изначально планироваться как точ- Другие нарушения***
ка окончания эксперимента. В качестве точек окончания эксперимента Швы, рубцы
СОДЕРЖАНИЕ ПОСЛЕ ЭКСПЕРИМЕНТА
обычно принимают:
Обезболивающие препараты
– если потери веса от первоначального превышают 20%;
Доза
– если произошла потеря в весе более чем 10% за 24 часа;
Дополнительные разрезы, жидкость,
– если рост опухоли более чем на 10% превышает вес животного; мл
– если развился абсцесс; ПОДПИСЬ ПЕРСОНАЛА
– если температуры тела резко упала; * – Описание дыхания: Б – быстрое, М – медленное, З – затрудненное,
– если животное само себя покалечило; Н – нормальное.
– если животное не способно самостоятельно есть или вести нормаль- ** – Поставьте ОК, если все нормально.
ный образ жизни. *** – Другие нарушения: В – видимое улучшение, Г – гной.
Все животные, отвечающие таким требованиям, должны быть под-
вергнуты эвтаназии для избавления от боли и страданий.
178 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 179

Повторное использование животных в эксперименте. Обычно жи- ния. Для иммобилизации животных их прикрепляют к столу или специ-
вотных используют только в одном эксперименте. Однако в некоторых альному устройству в положении на спине. В таком положении трудно
случаях можно повторно использовать животных, чтобы снизить общее проводить манипуляции на животном. Пребывание животных в таком
количество животных в проекте и оградить от боли и страданий других неестественном положении является стрессорным фактором. Процесс
животных. В этих случаях животных используют в процедурах, не связан- фиксации животного в положении на спине является трудным и вызывает
ных с болью и страданиями, или процедурах с небольшим биологическим агрессивную реакцию у животных.
стрессом, например изучение корма со взятием крови или неинвазивных Существуют установки для фиксации крупных лабораторных жи-
процедурах. От одного эксперимента до следующего должно пройти до- вотных, которые позволяют сохранить естественное положение живот-
статочное количество времени для восстановления животного. ных, обеспечить надежную иммобилизацию тела всего животного или
Длительность эксперимента ограничена целью исследования и долж- отдельных конечностей, на которых предполагается определенная мани-
на быть максимально краткой, если связана с болью и страданиями жи- пуляция. Принцип этой установки заключается в том, что и лоток и все
вотных. стойки для конечностей и для морды легко трансформируются. Детали
такой установки можно легко подгонять под любые размеры животных
по длине и высоте. В задней части устройства должно быть установлено
Фиксация животных
пластиковое ассенизационно-санитарное устройство. В настоящее вре-
Обездвиживание животных представляет собой комплекс мер физи- мя различные фирмы выпускают такие установки.
ческого или фармакологического воздействия, направленный на сдер- Игрушечная собака размером с настоящую является хорошей мо-
живание естественной подвижности животного в целях проведения делью для тренировок. На моделях отрабатывают навыки. Животные же
необходимых действий по уходу, обследованию или проведению экспе- столь неоднозначны по своему поведению, что их во всех случаях и до
риментальных действий, включая анестезию. Правильное обращение и начала иммобилизационных мероприятий необходимо предварительно
обездвиживание могут дать животному ощущение безопасности и таким приучить к пребыванию в станке. Этому способствует кормление по-
образом уменьшить его боль и испуг. Это не только позволяет в неко- сле того, как животное постоит привязанным в станке. После двух-трех
торых случаях провести эксперимент без анестезии, но и удовлетворяет таких тренировок животных удается легко фиксировать и проводить не-
принципу гуманного обращения с животными. Правильное обращение с обходимые процедуры без помощи посторонних лиц. Для полного обез-
животными обеспечивает также безопасность персонала и исследовате- движения собаки прибегают к рауш-ингаляционному, так и неингаляци-
лей, поскольку успокаивает животное. онному наркозу животных.
Персонал должен быть обучен правильному обращению с животны- Позвоночник кролика и других животных очень хрупок. Прыгая и
ми, поскольку физический контакт с ними является частью их ежеднев- борясь с исследователем, кролик может сломать себе спину. Некоторые
ной работы по уходу за животными и их размножению. Исследователи кролики весьма агрессивны. Поэтому лучше приобретать навыки на мо-
также должны иметь опыт обращения с животными, так как именно они делях-игрушках. Недорогие модели кроликов, крыс и мышей состоят из
проводят большинство экспериментов. В противном случае желательно, оболочек, набитых хлопком. Открывающийся рот служит для развития
чтобы обученный сотрудник ассистировал исследователю при проведе- оральных манипуляций. По размеру модели должны соответствовать
нии эксперимента. реальным животным, а материал похож на их кожу. Стоимость модели
Для того чтобы не испугать животное, не причинить ему вреда или столь мала, что нетрудно иметь 50 и больше моделей для большого клас-
боли, движения при обращении с ним должны быть осторожными и мяг- са. На модели показывают, как правильно вынимать их из клетки, удер-
кими. Во многих случаях целесообразно использовать сети и другие спе- живать при проведении манипуляций.
циальные приспособления для поимки и обездвиживания животного. При соблюдении правил реальная мышь будет вести себя спокойно.
Фиксация животных. В исследованиях на животных возникает во- При неправильных действиях мышь, а особенно крыса, будут вертеться,
прос надежной фиксации отдельных частей их тела или всего животного пытаться вырваться и укусить исследователя. Преподаватель приучает
в целом. Без фиксации у собак или других крупных лабораторных живот- обучаемых бережно относиться к модели, делать все правильно. Другой
ных трудно или невозможно проводить длительные внутривенные введе- метод, который может быть отработан на модели, – это введение зонда.
180 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 181

Могут быть использованы металлические и резиновые зонды. Процедура нять этаминал натрия (нембутал) внутрибрюшинно или подкожно в виде
может быть продемонстрирована до работы с живым объектом. Для вве- 5%-го раствора по 40–60 мг/кг. Наркоз наступает через 10–15 мин. после
дения жидкостей в вену реальных мышей, хомяков и крыс можно приме- введения.
нять специальные методы фиксации. Для проведения недолгих операций (5–10 мин.) на мелких лабора-
Мелких грызунов для длительного обездвиживания следует укутать в торных животных (мыши, крысы) используют специальные ингаляцион-
салфетку или привязать к операционному столу, стараясь не причинять ные анестезиологические камеры. Для крупных животных целесообраз-
им боль. При необходимости вызвать длительную иммобилизацию, при- но использовать инъекционный наркоз.
бегают к наркозу. Исследователи должны безусловно соблюдать все требования зако-
нов и директивных документов, регламентирующих оборот наркотичес-
ких и психотропных средств, а животные-модели не должны при этом
Наркоз и обезболивание
испытывать боли, дистресса и страдания.
Всякое болевое раздражение вызывает у живого организма глубокую Следует особо подчеркнуть, что перед дачей наркоза, а во многих
перестройку многих функций, в первую очередь центральной нервной случаях и перед началом эксперимента, абсолютно необходима премеди-
системы, сердечно-сосудистой, эндокринной и других систем, а это при- кация или лекарственная подготовка.
водит к искажению полученных результатов. Допустимые методы эвтаназии или умерщвления эксперименталь-
Эксперименты, проводящиеся хирургическими методами, должны ных животных применяются только в тех случаях, когда они после про-
проводиться только после обезболивания, причем до иммобилизации веденного эксперимента остаются нежизнеспособными или испытыва-
животного. ющими физические страдания, которые невозможно устранить, а также
Расчет обезболивающего лекарственного средства проводится на в случаях, когда эксперимент в соответствии с программой должен за-
килограмм или грамм массы тела лабораторного животного. И вводимое вершатся умерщвлением его. Смерть должна быть быстрой, без эмоцио-
вещество, и время действия обезболивающего средства обязательно фик- нального стресса, боли и страданий, с потерей сознания, надежной и не-
сируются в протокол эксперимента или в наркозную карту. Если острый обратимой. При доставке животного к месту умерщвления оно не должно
опыт заканчивается смертью животного, его умерщвляют до окончания подвергаться травме.
действия обезболивающего вещества. Идеальный метод эвтаназии должен включать такие условия, как: от-
Наркоз у животных проводят различными фармакологическими сутствие боли; быстрое отключение сознания; быстрая смерть; минималь-
средствами и различными путями (ингаляционный, интратрахеальный, но ограничивающее движение; минимальное возбуждение, подходящие
внутривенный, внутримышечный, ректальный). Чаще всего пользуются по возрасту, виду и состоянию здоровья, оказывающий минимум страха и
комбинированным наркозом. психологического стресса, а также надежность, необратимость, простоту
Комбинированный наркоз является наиболее распространенным и об- для наблюдения, безопасность для оператора, эстетически допустимые.
щепринятым видом обездвиживания, выключения сознания и обезболи-
вания у лабораторных животных. Этот вид наркоза является наиболее оп-
тимизированным подходом в клинической анестезиологии, что, в свою Допустимые методы эвтаназии животных
очередь, делает его приемлемым в необходимых случаях биомоделирова-
ния лабораторных животных. Существует несколько методов эвтаназии экспериментальных жи-
Так, например, при комбинированном наркозе у средних и мелких вотных – это физические и химические. Физические методы включают
животных лучше начинать с этилового эфира. Внимательно следят за ды- оглушение, декапитацию и перелом шейных позвонков. Химические ме-
ханием и тонусом животного, так как в этих условиях легко передозиро- тоды включают ингаляционные средства (такие как СО, СО2), летучие
вать наркотик. В состоянии наркоза фиксируют животных к операцион- обезболивающие средства (галотан, энфлуран и др.) и снотворные (бар-
ному столу и в дальнейшем, по мере необходимости дают наркоз, который битураты и ряд др.).
следует проводить с осторожностью, поскольку барбитураты потенциру- Самый оптимальный метод умерщвления животного – это передо-
ют эффекты морфина в отношении дыхательного центра. Лучше приме- зировка наркоза. В острых случаях животное умерщвляется до оконча-
182 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 183

ния действия наркоза. В тех случаях, когда умерщвление осуществляется ких, а также пропусканием электрического тока от городской сети через
углекислым газом СО2, следует помнить, что его высокая концентрация головной и спинной мозг.
может вызвать стресс у экспериментальных животных, и использовать Эвтаназия кроликов осуществляется фентобарбитоном 100 мг/кг в/в
необходимо только сжатый СО2. Наименее эффективен СО2 для крыс и или и/п. Кроликов можно умерщвлять нанесением удара по основанию чере-
мышей по сравнению с галотаном для крыс и энфлураном для мышей. Ряд па (при этом держат их за задние конечности вниз головой), внутривенным
авторов считают, что СО2 должен применяться при эвтаназии или анес- введением хлороформа, эфира или воздуха, а также пропусканием элект-
тезии мелких грызунов только в сочетании с галотаном. Оба газа (СО и рического тока из городской сети через спинной и головной мозг (один
СО2) перед бессознательным состоянием вызывают легочное кровотече- электрод в виде зажима Пеана накладывают на угол рта, другой в виде иглы
ние. Кроме того, СО2 при концентрациях больше чем 50% может вызвать вводят под кожу в области крестца). Время воздействия тока — 3–5 сек.
припадки, носовые кровотечения, вставание на лапки, дефекацию, силь- Эвтаназия крупных лабораторных животных (мини-свиньи, собаки,
ное слюнотечение. С большой осторожностью необходимо подбирать кошки и др.) осуществляется введением в толщу легких или кровь хло-
метод эвтаназии для новорожденных лабораторных животных. роформа (5–7 мл), эфира (15–20 мл) или пропусканием электрического
Оценка гуманности метода эвтаназии всегда сложная, она должна тока из городской сети через центральную нервную систему (один элект-
включать обязательно ЭЭГ, на которой определяются спонтанные или род в виде иглы вводят в области поясничных позвонков, а другой в виде
вызванные потенциалы и распознаются поведенческие реакции живот- зажима Пеана накладывают на угол рта). Более приемлемые методы из-
ного. ложены в Таблице 38.
Поведенческие сигналы распознаются по следующим показателям:
Т абл ица 38
звуки голоса; мочеиспускание/дефекация; потливость; борьба; защитная ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИЕМЛЕМЫХ МЕТОДОВ ЭВТАНАЗИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ
или переадресованная агрессия; расширение зрачков; тахикардия; слю- ЖИВОТНЫХ
нотечение. Вещества и лекарственные

Гуманность
Эффектив-
Скорость

Удобство

Оценка в
баллах
При декапитации грызунов измерение уровня кортикостерона более препараты, физические ме-

ность

Риск
полезно при оценке потенциального стресса, но ЭЭГ является наиболее Виды животных тоды выбора, дозы, формы и
особенности применения для
общим средством для оценки гуманности декапитации. Не менее важно эвтаназии
учитывать и сторонних наблюдателей при оценки гуманности метода эв- I. ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
таназии животных, которые подвергались некорректной эвтаназии или а) Препараты для инъекции
те, которые откликались медленнее или неправильным образом (аббе- 1. Натрия пентобарбитонат (нембутал, nembutal)
рантнее) на примененный метод. Например, в исследовании по изучению Грызуны ++ ++ + + ++ 5 Обычно используется 18%-й
мозговых импульсов при декапитации крыс среднее время ЭЭГ состави- Кролики ++ + + ++ 5 р-р (200 мг/мл) препарата в
дозе 200 мг/кг в/в или в/б; для
ло 13–14 секунд, а у одного животного это время составило 29 секунд. Плотоядные ++ ++ - + ++ 5
крупных птиц в/б или внутри-
Эвтаназия мышей осуществляется углекислым газом в течение Птицы ++ + + ++ 5 черепная инъекция (Foramen
10 мин., шейной дислокацией, фентобарбитоном, 5% раствором 0,5мл Крупные млекопи- magnum), для грызунов в/в и в/б
и/п. Умерщвление мышей производят также эфиром, хлороформом, про- ++ ++ - + ++ 5 инъекции; для кроликов и круп-
тающие
ных млекопитающих в/в
пусканием через головной мозг электрического тока.
2. Препарат Т-61
Эвтаназия крыс осуществляется углекислым газом в течение 15–
Грызуны ++ ++ - + ++ 4 Т-61 является комбинацией
20 мин., шейной дислокацией, фентобарбитоном 5% раствор 0,5мл и/п, Плотоядные ++ - + + 4 местного анестетика, снотвор-
гильотиной. Крыс умерщвляют также хлороформом, эфиром, помещая Кролики ++ ++ - + ++ 4 ного и курареподобного вещес-
их в небольшую закрытую посуду, или пропусканием электрического тва. Средство предназначено
Птицы ++ + + ++ 4 только для медленного в/в вве-
тока через головной и спинной мозг. дения, иначе оно вызывает боль
Эвтаназия морских свинок осуществляется углекислым газом, фенто- Крупные млекопи- у животных; птицам массой
++ ++ - + ++ 4
барбитоном 90мг/кг и/п. Морских свинок умерщвляют также хлорофор- тающие < 250 г можно вводить в груд-
мом, эфиром, вводя их ингаляционно, внутрибрюшинно и в толщу лег- ную мышцу
184 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 185

3. Секобарбитал/дибукаин 11. Оглушение электротоком


Плотоядные ++ ++ - + ++ 4 Приемлемо в/в введение Крупные млекопи- Смерть следует подтвердить.
++ ++ + - + 3
4. Хиналбарбитон/нуперкаин тающие Не следует применять у кошек,
Крупные млекопи- Приемлемо в/в введение ло- Кролики ++ - - - 3 так как их шерсть отличается
++ ++ - + ++ 5 высокой электропроводностью,
тающие шадям Плотоядные ++
и у рогатых животных, если рога
Б) Ингаляционные средства Птицы + + + - - 1 мешают наложению электродов.
5. Двуокись углерода 12. Мацерация
Грызуны + ++ ++ ++ ++ 4 СО2 в концентрации >70% Приемлем для цыплят в возрас-
Птицы ++ ++ ++ ++ + 4 приемлем для грызунов, кро- Птицы ++ ++ ++ ++ - 4
те до 72 ч
Кролики + ++ ++ + 1 ликов и свиней; для морских
свинок и для цыплят в возрасте 13. Микроволновое облучение
72 ч – 100% СО2. СО2 не следует Грызуны ++ ++ - ++ + 3 Применяется нейробиологами
Крупные млекопи-
+ + ++ ++ + 1 использовать для животных, Кролики ++ - ++ + 3 для фиксации метаболизма
тающие
способных нырять мозга; для мышей приемлемо
Птицы ++ ++ - ++ + 3 облучение всего тела
6. Окись углерода
Грызуны + + + - ++ 2 14. Быстрое замораживание
Птицы + + ++ - + 2 Опасен для оператора Грызуны - + ++ ++ + 1 Приемлем, если это предусмот-
рено планом эксперимента.
Кролики + + ++ - ++ 1 Приемлем для новорожденных
7. Летучие анестетики – галлотан, энфлуран, изофлуран Кролики + + ++ ++ + 1 грызунов и плодов кроликов с
Грызуны ++ ++ ++ + ++ 5 Приемлемы; смерть необхо- массой < 4 г
Плотоядные ++ + + ++ 4 димо подтвердить; у кроликов 15. Привязной гарпун
Птицы ++ ++ ++ + ++ 4 возникают признаки дистресса; Крупные млекопи- Приемлем для крупных пре-
для рыб используется только ++ ++ ++ + + 5
Кролики ++ ++ + - 2 тающие смыкающихся; гарпун не всегда
галлотан; из крупных млекопи- эффективен для умерщвления
Крупные млекопи- тающих применяются у ягнят и Кролики ++ ++ - + + 4
++ + + + + 2 крупных свиней и взрослых бы-
тающие козлят.
Плотоядные ++ ++ - ++ ++ 3 ков из-за толщины и плотности
II. ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ их черепа.
8. Цервикальная дислокация 16. Отстрел
Грызуны ++ ++ + ++ - 4 Приемлем для грызунов массой Пресмыкающиеся ++ ++ ++ - + 4 Приемлем только в полевых
Кролики ++ - ++ - 4 < 150 г, для кроликов – < 1 кг. Крупные млекопи- условиях; предпочтителен для
Для цыплят в возрасте 72 ч ++ ++ - - - 1 лошадей.
Птицы ++ ++ - ++ - 4 тающие
9. Декапитация Примечание: приемлемость метода оценивается следующими показателями:
Грызуны + + + ++ - 2 Можно использовать у грызу- – скорость действия агента: «++» – очень быстро, «+» – быстро «-» – медленно;
нов и кроликов массой < 1 кг, – эффективность метода: «++» – высокоэффективен, «+» – эффективен, «-» – неэффек-
Кролики + + + ++ - 2 но предпочтительнее другие тивен;
методы – удобство метода: «++» – прост в применении, «+» – требует опыта, «-» – требует
10. Сотрясение мозга (оглушение) специального обучения экспериментатора;
Грызуны ++ ++ + ++ - 4 Приемлем для грызунов массой – риск для оператора: «++» – безопасен, «+» – опасность минимальная, «-» – опасно;
Кролики ++ + ++ - 2 < 1 кг; для птиц – < 250 г и для – гуманность: «++» – приемлем для всех экспертов, «+» – приемлем для большинства экс-
Птицы ++ + - + + 2 новорожденных плотоядных; пертов, «-» – неприемлем для всех экспертов и экспериментаторов.
Плотоядные для крупных млекопитающих – оценка в баллах «1–5»: 1 – не рекомендуемый метод, 5 – наиболее рекомендуемый метод.
необходимо немедленное обеск-
Крупные млекопи-
++ ровливание
Установление смерти. Оценка наступления смерти проводится по
тающие
одному или нескольким факторам. Обязательно делают запись о смерти
животного с указанием количественных факторов, ее установивших.
186 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 187

Имплантации Все эксперименты нужно проводить в соответствии с руководством и


Исследователи должны быть готовы к дополнительным асептическим требованиями национальных Комитетов по охране животных, Минис-
мероприятиям при имплантации инородных тел. Часто после проведения терства здравоохранения и другими видами законодательных актов. Про-
терапии антибиотиками усложняется удаление протеза. Иногда образуют- токолы экспериментов должны включать детальные описания рисков, а
ся фистулы. Поэтому послеоперационное наблюдение особенно важно. также мер предосторожности для исследователей, студентов и препода-
вателей. Инфицированные животные должны быть изолированы, чтобы
избежать риска для заражения людей.
Нейромускулярный паралич
Нейромускулярные блокирующие агенты должны использоваться в Эксперименты с генетическим материалом
сочетании с адекватной общей анестезией. Иммобилизация животных не
требуется. Необходим контроль частоты сердечных сокращений, давле- Все эксперименты с генетическим материалом, зародышами или
ния крови, насыщенности крови кислородом, ширины зрачка, электро- эмбрионами требуют дополнительного согласования и проводятся в со-
энцефалограммы. ответствии с существующим законодательством по охране животных.
Все манипуляции с генетическим материалом являются потенциально
опасными для состояния здоровья животных, поэтому возможно прояв-
Электроиммобилизация ление побочных эффектов, о которых необходимо ставить в известность
Электроиммобилизация не может быть альтернативой анальгезией IACUC. Существует достаточное количество линий животных с врож-
или анестезией. денной патологией, которые могут быть получены обычными процедура-
ми по разведению. Прежде чем планировать эксперименты такого рода,
Валидность моделей болезней надо быть абсолютно уверенным в их необходимости.

Валидация животных-моделей для изучения болезней должна про-


Эксперименты с опухолями
водиться с точки зрения ее соответствия проявлениям патологических
процессов у человека. Животное должно использоваться только в случае, Эти эксперименты потенциально вызывают боль и страдания, по-
если модель достаточно достоверна. Нельзя забывать о том, что живот- этому перед планированием такого эксперимента необходимо изучить
ные будут испытывать те же боль и страдания, что и человек при соответ- все альтернативные возможности его замены. При проведении экспери-
ствующей болезни. Целью и точкой окончания эксперимента, если это мента надо особенно тщательно осматривать животных, следить за воз-
возможно, нельзя ставить гибель животного. Тесты на животных прово- можной потерей веса. Эвтаназию надо проводить до того, как животное
дят только тогда, когда их нельзя выполнить другим способом. Экспе- начало испытывать нестерпимые боль и страдания. Также необходимо
римент должен быть прекращен, как только выявляется токсичность, с следить за количеством асцитной жидкости, которая становится источ-
минимальным ущербом для животного. Количество животных в экспе- ником дистресса животного. Точкой окончания эксперимента не должна
рименте должно быть минимальным. быть смерть животных.

Изучение поведения животных и рисков Исследования центральной нервной системы


При изучении поведения животных надо избегать биологических Анатомические или химические повреждения ЦНС широко приме-
стрессов, нельзя использовать лишение животных еды и питья, а также няют для изучения ее функционирования в здоровом и больном организ-
болевых стимулов. Стресс и боль относятся к категории рисков для здо- ме. Такие эксперименты требуют особых согласований, так как приво-
ровья и жизни животных. В качестве источника риска могут также изу- дят к нарушениям двигательной активности, потере чувствительности,
чаться: вирусы, бактерии, грибы, паразиты, радиация, радиоактивность, температуре, болям, потере аппетита и другим нарушениям. Для работы
субстанции, вызывающие коррозию, токсины, аллергены, карциногены, могут понадобиться специальные клетки и приспособления для постоян-
рекомбинантные ДНК, газы для анестезии, физические повреждения. ного мониторирования животного.
188 Н.Н.Каркищенко. АЛЬТЕРНАТИВЫ БИОМЕДИЦИНЫ 189

Содержание с ограниченным кормлением и поением Боль, страдание, анальгезия и анестезия


Эксперименты с ограничением кормления и поения или совсем без
IACUC определена 3-уровневая шкала боли.
корма и воды не должны быть продолжительными. Необходимо следить
за балансом жидкости и/или потерей веса животного, все показатели Отсутствие боли (категория «C») – исследования, не сопровождаю-
должны быть тщательно задокументированы. щиеся причинением животным боли или страданий сверх того, что мож-
но ожидать при сравнительно мягком и кратковременном воздействии
Эксперименты на эмбрионах типа инъекции, глубокой пальпации и т.п.
Облегчаемая боль (категория «D») – процедуры с использованием
Когда проводят эксперименты на эмбрионах или неонатальные хи-
наркоза или обезболивания в целях облегчения боли и страданий. При-
рургические вмешательства, они не должны сопровождаться болью и
мерами могут служить общий наркоз при операциях, а также применение
страданиями, эвтаназия должна применяться немедленно после рожде-
анальгетиков или противовоспалительных средств.
ния, чтобы избежать боли и дистресса.
Не облегчаемые боль или страдания (категория «Е») – процедуры, где
Анальгезия и анестезия при экспериментах на эмбрионах должны
в силу определенных веских причин облегчение боли и страданий служит
быть применены, как ко взрослым животным. При хирургических вме-
шательствах в организм матери анестезия должна быть сделана и эмб- противопоказанием, например вследствие риска искажения результатов
рионам. Яйца должны быть разрушены до вылупливания птенцов, если в случае применения обезболивающего препарата.
только само вылупливание не является целью эксперимента. Степень боли и страдания и соответствие процедур и манипуляций
указанной категории оценивает ветеринарный врач.
Исследование механизмов и облегчения боли
В таких экспериментах должны быть тщательно подобраны меры Медикаменты, используемые для каждого из видов
уменьщения боли. Исследователь должен быть уверен, что: Мыши – кетамина гидрохлорид, ксилазин, дроперидол, ацепрома-
– причиняемая боль находится на допустимом пределе; зин, бупренорфин, трамадол, ибупрофен, аспирин.
– причиняемая боль является минимальной в соответствии с целями Крысы – кетамина гидрохлорид, ксилазин, ацепромазин, хлорал-
эксперимента; гидрат, бупренорфин, трамадол, ибупрофен, аспирин.
– есть средства для облегчения боли, если это необходимо.
Контроль за использованием анестетиков и анальгетиков
Исследования состояния здоровья животных
Анестетики и наркотические анальгетики хранятся в специальной
Когда изучают возможности улучшения здоровья животных, иссле-
комнате, в которой эти препараты находятся в металлическом сейфе. Од-
дователи нуждаются в условиях, которые можно повторить, например,
рана, травма, нарушения питания, болезнь, физические повреждения нодневный запас, необходимый для проведения текущих исследований,
или стресс. В этих случаях боль и дистресс также можно повторить. В та- хранится в корпусе биомедицинских исследований в металлическом сей-
ких экспериментах исследователь должен быть уверен, что: фе в специальной комнате с ограниченным доступом.
– цель эксперимента – забота о здоровье животного; Работа с контролируемыми веществами осуществляется только ли-
– альтернативные методы, например, уже травмированное животное, цами, имеющими специальный допуск. Допуск лиц на работу с контро-
не могут быть использованы; лируемыми веществами утверждается Государственным комитетом РФ
– предприняты все шаги для уменьшения боли и дистресса; по контролю за оборотом наркотических средст