Открыть Электронные книги
Категории
Открыть Аудиокниги
Категории
Открыть Журналы
Категории
Открыть Документы
Категории
1
Существование в природе вирусов подтверждают универсальность клеточного
строения организма, т. к. вирусы неспособны к самостоятельному
функционированию, они ведут паразитический образ жизни. Изучение общей
ультраструктурной организации клеток и ее процессов, а также закономерностей
клеткообразования, взаимодействия между клетками, клеточного гомеостаза
существенно укрепило значение клеточной теории.
Клетка — важнейшая составляющая часть живых организмов, их главный
морфофизиологический компонент. Клетка — это основа многоклеточного
организма, место протекания биохимических и физиологических процессов в
организме. На клеточном уровне в конечном итоге происходят все биологические
процессы. Клеточная теория позволила сделать вывод о сходстве химического
состава всех клеток, общем плане их строения, что подтверждает
филогенетическое единство всего живого мира.
2
отличия:
Вирусы: Вирусы являются возбудителями многих опасных заболеваний человека,
животных и растений. В то же время, вирусы – возбудители заболеваний у
нежелательных для человека организмов («враги наших врагов»). Они передаются
при непосредственном физическом контакте, воздушно-капельным, половым
путем и другими способами. Вирусы могут также переноситься и другими
организмами (переносчиками). Вирусы , вироиды широко используются как
объекты молекулярно-генетических исследований. В генной инженерии вирусы
применяются для переноса генетического материала.
Вироиды— инфекционные агенты, представляющие собой низкомолекулярную
одноцепочечную кольцевую РНК, не кодирующую собственные белки.
10
Рис.1.Строениенормальнойхромосомы.
А — внешний вид; Б — внутреннее строение: 1—первичная перетяжка; 2 —
вторичная перетяжка; 3 —спутник; 4 — центромера.
Центромера (первичная перетяжка) это место соединения двух хроматид; к
центромере присоединяются нити веретена деления. По сторонам от центромеры
лежат плечи хромосомы. В зависимости от места расположения центромеры
хромосомы делят на равноплечие (метацентрические), неравноплечие
(субметацентрические), палочковидные (акроцентрические) – имеется только одно
плечо.
Вторичная перетяжка – ядрышковый организатор, содержит гены рРНК,
имеется у одной – двух хромосом в геноме.
Теломеры – концевые участки хромосом, содержащие до 10 тысяч пар
нуклеотидов с повторяющейся последовательностью ТТАГГГ. Теломеры не
содержат генов, они защищают концы хромосом он действия нуклеаз –
ферментов, разрушающих ДНК обеспечивают прикрепление концов хромосом
изнутри к ядерной оболочке защищают гены от концевой недорепликации.
Форма хромосомы.
В зависимости от расположения первичной перетяжки
хромосомы подразделяют на:
- метацентрические (оба плеча равной или почти равной длины),
- субметацентрические (плечи неравной длины) и
- акроцентрические (центромера смещена на конец хромосомы).
Химический состав хромосом
Хромосомы - нуклеопротеидные образования, состоящие из ДНК и белка.
Кроме того, в хромосомах присутствует некоторое количество РНК,
образующейся при транскрипции, и ионы Са+ и Mg+. Каждая хроматида, а в
промежутке времени анафаза - S-период интерфазы и хромосома, содержит одну
молекулу ДНК, которая определяет все функции хромосомы, связанные с
хранением наследственной информации, её передачей и реализацией. Молекула
ДНК в хромосомах тесно связана с двумя классами белков - гистонами (основные
белки) и негистонами (кислые белки). Гистоны - это небольшие по величине белки
с высоким содержанием заряженных аминокислот (лизина и аргинина).
Суммарный положительный заряд позволяет гистонам связываться с ДНК
независимо от нуклеотидного состава. Им принадлежит в основном структурная
функция. Это очень стабильные белки, молекулы которых могут сохраняться в
течение всей жизни клетки. В эукариотической клетке присутствуют 5 типов
гистонов, которые распределяются на две основные группы: первая группа (их
обозначают как Н2А, Н2В, НЗ, Н4), отвечает за формирование специфических
дезоксирибонуклеопротеидных комплексов - нуклеосом. Вторая группа гистонов
(HI) располагается между нуклеосомами и фиксирует укладку нуклеосомной цепи
в более высокий уровень структурной организации (супернуклеосомную нить).
Среди гистоновых белков, кроме структурных, встречаются такие, которые
способны ограничивать доступность ДНК для ДНК - связывающих регуляторных
11
белков и тем самым участвовать в регуляции активности генов. Негистоновые
белки весьма разнообразны. Число их фракций превышает 100. Они присутствуют
в меньших количествах в хромосомах в сравнении с гистонами и выполняют в
основном регуляторную функцию. Участвуют в регуляции транскрипционной
активности генов, в обеспечении редупликации и репарации ДНК. Большинство
негистоновых белков хроматина присутствуют в клетках в небольшом количестве
(минорные) - это регуляторные белки, узнающие специфические
последовательности ДНК и связывающиеся с ними. Они вовлечены во многие
генетические процессы, но известно о них пока что немного. Количественно
преобладают негистоновые белки (мажорные), высокоподвижные, относительно
малого размера, с большим электрическим зарядом - они всегда соединяются с
нуклеосомами, содержащими активные гены. Кроме того, в группу негистоновых
белков входит много ферментов.
Биологическая роль:
- хромосомы являются носителями наследственной информации
- хранит, реализует и передает наследственную информацию.
Метафазная:
В метафазе ядрышки неконденсированы и не окрашиваются.
Районы ядрышкового организатора примыкают к находящимся на конце
короткого плеча хромосомы конденсированным участкам хроматина -
спутникам.
Спутники не содержат генов и являются полиморфными участками
В небольшой части клеток удается выявить другие деконденсированные в
метафазе участки, так называемые ломкие участки , где могут происходить
"полные" разрывы хромосомы.
Клиническое значение имеют нарушения в единственном подобном участке,
расположенном на конце длинного плеча Х-хромосомы. Такие нарушения
вызывают синдром ломкой Х-хромосомы.
Неоднородность метафазных хромосом, как уже упоминалось, можно
увидеть даже при световой микроскопии.
Интерфазная:
12
По окончании синтеза ДНК каждая хромосома оказывается удвоенной -
состоящей из двух сестринских хроматид.
В генетическом отношении хроматиды полностью идентичны друг другу,
так как их ДНК состоит из одной материнской и второй вновь
синтезированной цепи.
Сестринские хроматиды тесно сближены и соединены в том районе
хромосомы, который обеспечивает ее движение при делении клетки. Он
называется центромерным районом хромосомы.
После полного удвоения хромосом наступает постсинтетический период
(G2) . В это время клетка готовится к делению: синтезируются
белки микротрубочек , которые во время митоза будут
формировать веретено деления, запасается энергия. Продолжительность G2-
периода меньше, чем у S- и Gi-периодов, и обычно составляет 3-6 ч.
Если содержание ДНК в гаплоидном наборе хромосом обозначить через С,
то сразу после деления в диплоидной клетке имеется 2С-содержание ДНК, а
по окончании синтетического периода в диплоидном (2n) наборе хромосом
содержится 4С-количество ДНК.
14
хромосом), так и нарушением хромосомной структуры или множественностью
клеточных кариотипов в организме (мозаицизмом).
Принципы составления идиограмм
Если расположить фотографии гомологичных хромосом по мере возрастания их
размеров, то можно получить так называемую идиограмму кариотипа. Таким
образом, идиограмма - это графическое изображение хромосом. На идиограмме
пары гомологов располагаются рядами в порядке убывающего размера.
У человека на идиограмме среди 46 хромосом различают три типа хромосом в
зависимости от положения в хромосоме центромер:
1. Метацентрические - центромера занимает центральное положение в хромосоме,
оба плеча хромосомы имеют почти одинаковую длину;
2. Субметацентрические - центромера располагается ближе к одному концу
хромосомы, в результате чего плечи хромосомы разной длины.
15
поколение клеток получает одинаковую генетическую информацию в составе
каждой группы сцепления.
8. Белки, их химический состав, уровни структурной организации.
Биологическая роль белков. Понятие о гистоновых и негистоновых белках.
Прионовые белки и их медицинское значение.
Белки - непериодические полимеры, мономерами которых являются
аминокислоты. Все белки представляют собой полимеры, состоящие из длинных
цепей субъединиц, соединенных вместе в линейную структуру. Субъединицы - это
20 разных аминокислот. Общим признаком для всех аминокислот является
наличие в их составе карбоксильной и аминогрупп, соединенных атомом углерода.
Кроме этих общих атомов, каждая аминокислота содержит свои особые боковые
цепи, присоединенные к центральному атому углерода. Таким образом, хотя все
аминокислоты принадлежат к одному классу соединений и имеют некоторые
общие химические свойства, отдельные аминокислоты резко отличаются друг от
друга.
16
Опорно-двигательная функция - белки, входящие в состав костей скелета,
сухожилий; движение жгутиковых, инфузорий, сокращение мышц;
Транспортная функция - гемоглобин крови;
Защитная - антитела крови обезвреживают чужеродные вещества;
Энергетическая функция - при расщеплении белков 1 г освобождает 17,6
кДж энергии;
Регуляторная и гормональная - белки входят в состав многих гормонов и
принимают участие в регуляции жизненных процессов организма;
Рецепторная - белки осуществляют процесс избирательного узнавания
отдельных веществ и их присоединение к молекулам.
Понятие о гистоновых и негистоновых белках
Гистоны — обширный класс ядерных белков, выполняющих две основные
функции: они участвуют в упаковке нитей ДНК в ядре и во вторичной регуляции
таких ядерных процессов, как транскрипция, репликация и репарация, проявляют
сильно оснóвные свойства.
Негистоновые белки - это все белки хроматина, кроме гистонов, выделяющиеся с
хроматином или хромосомами. Это сборная группа белков, отличающихся друг
от друга как по общим свойствам, так и по функциональной значимости. Около
80% из негистоновых белков относится к белкам ядерного матрикса,
обнаруживаемых как в составе интерфазных ядер, так и митотических хромосом.
Гистоновые и негистоновые белки принимают участие в экспрессии генов,
участвуют в создании структуры молекулы ДНК. Гистоновые белки - факторы
репрессии (блокирования) генов, негистоновые - наоборот способствуют
считыванию информации. Взаимодействие гистоновых и негистоновых белков –
механизм блокирования и разблокирования молекулы ДНК.
Прионовые белки и их медицинское значение.
Прионы – модифицированные прионовые белки (содержат > 50
полиглютаминовых фрагментов). Прионовые белки – нейромедиаторы и
регуляторы циркадных ритмов. Попадая в организм человека, прионы
модифицируют (переделывают под себя) нормальные прионовые белки и
вызывают следующие болезни: Куру, Кройцфельта-Якоба, смертельная семейная
бессонница, Подострый спонгиозный трансмиссийный энцефалит и проч.
Способы «заражения»: спонтанное возникновение в мозге прионов, ятрогения,
наследственность, употребление в пищу «зараженного» мяса.
18
матрицей для транскрипции может служить только одна из двух цепей ДНК, а
именно та, которая обращена к ферменту своим 3'-концом (3' → 5'). Такую цепь
называют кодогенной. Антипараллельность соединения двух полинуклеотидных
цепей в молекуле ДНК позволяет РНК-полимеразе правильно выбрать матрицу
для синтеза мРНК. Продвигаясь вдоль кодогенной цепи ДНК, РНК-полимераза
осуществляет постепенное точное переписывание информации до тех пор, пока
она не встречает специфическую нуклеотидную последовательность —
терминатор транскрипции. В этом участке РНК-полимераза отделяется как от
матрицы ДНК, так и от вновь синтезированной мРНК. Фрагмент молекулы ДНК,
включающий промотор, транскрибируемую последовательность и терминатор,
образует единицу транскрипции—транскриптон. В процессе синтеза, по мере
продвижения РНК-полимеразы вдоль молекулы ДНК, пройденные ею
одноцепочечные участки ДНК вновь объединяются в двойную спираль.
Образуемая в ходе транскрипции мРНК содержит точную копию информации,
записанной в соответствующем участке ДНК. Тройки рядом стоящих нуклеотидов
мРНК, шифрующие аминокислоты, называют кодонами. Последовательность
кодонов мРНК шифрует последовательность аминокислот в пептидной цепи.
Кодонам мРНК соответствуют определенные аминокислоты. Матрицей для
транскрипции мРНК служит кодогенная цепь ДНК, обращенная к ферменту своим
3'-концом
Транспортная РНК (тРНК). Трансляция. Важная роль в процессе использования
наследственной информации клеткой принадлежит транспортной РНК (тРНК).
Доставляя необходимые аминокислоты к месту сборки пептидных цепей, тРНК
выполняет функцию трансляционного посредника. Молекулы тРНК представляют
собой полинуклеотидные цепи, синтезируемые на определенных
последовательностях ДНК. Они состоят из относительно небольшого числа
нуклеотидов —75—95. В результате комплементарного соединения оснований,
которые находятся в разных участках полинуклеотидной цепи тРНК, она
приобретает структуру, напоминающую по форме лист клевера. В ней выделяют
четыре главные части, выполняющие различные функции. Акцепторный
«стебель» образуется двумя комплементарно соединенными концевыми частями
тРНК. Он состоит из семи пар оснований. 3'-конец этого стебля несколько длиннее
и формирует одноцепочечный участок, который заканчивается
последовательностью ЦЦА со свободной ОН-группой. К этому концу
присоединяется транспортируемая аминокислота. Остальные три ветви
представляют собой комплементарно спаренные последовательности
нуклеотидов, которые заканчиваются неспаренными участками, образующими
петли. Средняя из этих ветвей — антикодоновая — состоит из пяти пар
нуклеотидов и содержит в центре своей петли антикодон. Антикодон — это три
нуклеотида, комплементарные кодону мРНК, который шифрует аминокислоту,
транспортируемую данной тРНК к месту синтеза пептида. Между акцепторной и
антикодоновой ветвями располагаются две боковые ветви. В своих петлях они
содержат модифицированные основания — дигидроуридин (D-петля) и триплет
TψC, где \у — псевдоуриаин (Т^С-петля). Между аитикодоновой и Т^С-ветвями
19
содержится дополнительная петля, включающая от 3—5 до 13—21 нуклеотидов. В
целом различные виды тРНК характеризуются определенным постоянством
нуклеотидной последовательности, которая чаще всего состоит из 76 нуклеотидов.
Варьирование их числа связано главным образом с изменением количества
нуклеотидов в дополнительной петле. Комплементарные участки,
поддерживающие структуру тРНК, как правило, консервативны. Первичная
структура тРНК, определяемая последовательностью нуклеотидов, формирует
вторичную структуру тРНК, имеющую форму листа клевера. В свою очередь,
вторичная структура обусловливает трехмерную третичную структуру, для
которой характерно образование двух перпендикулярно расположенных двойных
спиралей. Одна из них образована акцепторной и ТψС-ветвями, другая —
антикодоновой и D-ветвями. На конце одной из двойных спиралей располагается
транспортируемая аминокислота, на конце другой — антикодон. Эти участки
оказываются максимально удаленными друг от друга. Стабильность третичной
структуры тРНК поддерживается благодаря возникновению дополнительных
водородных связей между основаниями полинуклеотидной цепи, находящимися в
разных ее участках, но пространственно сближенных в третичной структуре.
Различные виды тРНК имеют сходную третичную структуру, хотя и с некоторыми
вариациями. Одной из особенностей тРНК является наличие в ней необычных
оснований, возникающих вследствие химической модификации уже после
включения нормального основания в полинуклеотидную цепь. Эти измененные
основания обусловливают большое структурное многообразие тРНК при общем
плане их строения. Наибольший интерес представляют модификации оснований,
формирующих антикодон, которые влияют на специфичность его взаимодействия
с кодоном. Например, нетипичное основание инозин, иногда стоящий в 1-м
положении антикодона тРНК, способен комплементарно соединяться с тремя
разными третьими основаниями кодона мРНК — У, Ц и А. Установлено также
существование нескольких видов тРНК, способных соединяться с одним и тем же
кодоном. В результате в цитоплазме клеток встречается не 61 (по количеству
кодонов), а около 40 различных молекул тРНК. Этого количества достаточно,
чтобы транспортировать 20 разных аминокислот к месту сборки белка. Наряду с
функцией точного узнавания определенного кодона в мРНК молекула тРНК
осуществляет доставку к месту синтеза пептидной цепи строго определенной
аминокислоты, зашифрованной с помощью данного кодона. Специфическое
соединение тРНК со «своей» аминокислотой протекает в два этапа и приводит к
образованию соединения, называемого аминоацил-тРНК.
Присоединение аминокислоты к соответствующей тРНК:
I—1-й этап, взаимодействие аминокислоты и АТФ с выделением пирофосфата;
II—2-й этап, присоединение аденилировашюй аминокислоты к 3'-концу РНК
На первом этапе аминокислота активируется, взаимодействуя своей
карбоксильной группой с АТФ. В результате образуется адепилированная
аминокислота. На втором этапе это соединение взаимодействует с ОН-группой,
находящейся на 3'-конце соответствующей тРНК, и аминокислота присоединяется
к нему своей карбоксильной группой, высвобождая при этом АМФ. Таким
20
образом, этот процесс протекает с затратой энергии, получаемой при гидролизе
АТФ до АМФ. Специфичность соединения аминокислоты и тРНК, несущей
соответствующий антикодон, достигается благодаря свойствам фермента
аминоацил-тРНК-синтетазы. В цитоплазме существует целый набор таких
ферментов, которые способны к пространственному узнаванию, с одной стороны,
своей аминокислоты, а с другой — соответствующего ей антикодона тРНК.
Наследственная информация, «записанная» в молекулах ДНК и «переписанная» на
мРНК, расшифровывается в ходе трансляции благодаря двум процессам
специфического узнавания молекулярных поверхностей. Сначала фермент
аминоацил-тРНК-синтетаза обеспечивает соединение тРНК с транспортируемой
ею аминокислотой. Затем аминоацил тРНК комплементарно спаривается с мРНК
благодаря взаимодействию антикодона с кодоном. С помощью системы тРНК
язык нуклеотидной цепи мРНК. транслируется в язык аминокислотной
последовательности пептида. Рибосомная РНК (рРНК). Рибосомный цикл синтеза
белка. Процесс взаимодействия мРНК и тРНК, обеспечивающий трансляцию
информации с языка нуклеотидов на язык аминокислот, осуществляется на
рибосомах. Последние представляют собой сложные комплексы рРНК и
разнообразных белков, в которых первые образуют каркас. Рибосомные РНК
являются не только структурным компонентом рибосом, но и обеспечивают
связывание их с определенной нуклеотидной последовательностью мРНК. Этим
устанавливаются начало и рамка считывания при образовании пептидной цепи.
Кроме того, они обеспечивают взаимодействие рибосомы и тРНК.
Многочисленные белки, входящие в состав рибосом наряду с рРНК, выполняют
как структурную, так и ферментативную роль.
Типы РНК
1. Матричная РНК переносит генетический код из ядра в цитоплазму, определяя
таким образом синтез разнообразных белков.
2. Транспортная РНК переносит активированные аминокислоты к рибосомам для
синтеза полипептидных молекул.
3. Рибосомная РНК в комплексе примерно с 75 разными белками формирует
рибосомы — клеточные органеллы, на которых происходит сборка
полипептидных молекул.
4. Малые ядерные РНК (интроны) Учавствует в сплайсинге.
5. Малые цитоплазмотические РНК
6. мякРНК. Она же малая ядрышковая. В ядрышках клеток эукариотов.
7. РНК вирусов
8. РНК вироидов
После полиаденилирования мРНК подвергается сплайсингу, в ходе процессе
которого удаляются интроны (участки, которые не кодируют белки), а экзоны
(участки, кодирующие белки) сшиваются и образуют единую молекулу [2].
Сплайсинг катализируется крупным нуклеопротеидным комплексом —
сплайсосомой, состоящей из белков и малых ядерных РНК. Многие пре-мРНК
могут быть подвергнуты сплайсингу разными путями, при этом образуются
21
разные зрелые мРНК, кодирующие разные последовательности аминокислот
(альтернативный сплайсинг).
Коротко: сплайсинг это когда уходят интроны которые ничего не кодируют и из
экзонов фомируется зрелая молекула, способная кодировать белок.
Альтернативный сплайсинг-из одной молекулы пре-иРНК можно получить
различные белки. То есть мы имеем дело с вариациями выпадания интронов и
различным сшиванием экзонов.
Рибозимы
Молекулы РНК, обладающие ферментативной активностью (как правило,
свойством автокатализa)
Регуляция экспрессии генов с помощью антисмысловых РНК
характеризуется высокой специфичностью. Это обусловлено большой точностью
процесса РНК-РНК-гибридизации, основанной на комплементарном
взаимодействии друг с другом протяженных последовательностей нуклеотидов.
Однако сами по себе антисмысловые РНК не инактивируют необратимо
мРНК-мишени, и для подавления экспрессии соответствующих генов требуются
высокие (по крайней мере, эквимолярные по отношению к мРНК)
внутриклеточные концентрации антисмысловых РНК. Эффективность действия
антисмысловых РНК резко повысилась после того, как в их состав были введены
молекулы рибозимов - коротких последовательностей РНК, обладающих
эндонуклеазной активностью. Известно множество других ферментативных
активностей, ассоциированных с РНК. Поэтому рибозимами в широком смысле
называют молекулы РНК, обладающие любой ферментативной активностью.
На модельных системах опробован РНК-овый вариант подавления ВИЧ-
инфекции. Для этой цели используется необычное свойство некоторых молекул
РНК - их способность разрушать другие виды РНК. Американцы Т. Чех и С.
Альтман за это открытие получили в 1989 году Нобелевскую премию. Считалось,
что все биохимические реакции в организме происходят благодаря
высокоэффективным специфическим катализаторам, которыми служат белки -
ферменты. Однако оказалось, что некоторые виды РНК, подобно белкам,
обладают высокоспецифической каталитической активностью. Эти РНК назвали
рибозимами.
Рибозимы содержат внутри себя антисмысловые участки и участки,
осуществляющие ферментативную реакцию. Т.е. они не просто присоединяются к
мРНК, а еще и разрезают ее. Суть приема подавления ВИЧ-инфекции с помощью
рибозимов изображена на рис. 32 . Присоединяясь к комплементарной РНК-
мишени, рибозим расщепляет эту РНК, результатом чего является прекращение
синтеза белка, кодируемого РНК-мишенью. Если такой мишенью для рибозима
будет вирусная РНК, то рибозим ее "испортит", и соответствующий вирусный
белок образовываться не будет. В результате вирус прекратит свое размножение в
клетке. Такой подход применим и к некоторым другим патологиям человека,
например, для лечения рака.
22
11.Авторедупликация ДНК: суть явления, роль Ферментов, структурная
единица репликации – репликон, лидирующая и запаздывающая цепи,
фрагменты Оказаки. Биологическое значение.
СТРУКТУРА ОПЕРОНА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ И РЕГУЛЯЦИЯ
СИНТЕЗА ФЕРМЕНТОВ.
Генетическая информация в клетке может сниматься как с отдельного гена, так, и
с целого их комплекса, в случае, если они контролируют синтез ферментов,
участвующих в осуществлении целостного биохимического процесса. В
хромосомах такие гены находятся, как правило, вместе, образуя функциональный
комплекс - оперон, а вернее его структурную или информативную зону. Так, если
расщепление некоего вещества А до конечного продукта обмена вещества Д
происходит через промежуточные продукты В и С (по схеме А→В→С→Д), то для
осуществления этого процесса требуется 3 типа белков-ферментов. И в этом
случае в составе оперона, контролирующего данный процесс, находится три
структурных гена. С некоторых оперонов (генов) информация в клетке снимается
постоянно (например, с оперонов, контролирующих синтез ферментов для
расщепления глюкозы). Такие опероны (гены) получили название
конститутивных. С других же информация снимается только при определённых
условиях. Такие опероны (гены) называются адаптивными. Деятельность таких
адаптивных генов в свою очередь контролируется участком ДНК, расположенным
перед структурными генами оперона – о п е р а т о р о м. Сами операторы не несут
генетической информации. Их функция - управление деятельностью оперона.
Поэтому участок оперона, соответствующий операторам, получил название
управляющей, неинформативной или акцепторной зоны. (В клетках эукариот
акцепторная зона значительно превосходит структурную). В эту же зону входит и
небольшой участок ДНК перед опероном, с которого начинается синтез и-РНК,
получивший название п р о м о т о р а. Позади структурных генов находится зона
т е р м и н а т о р а. Таким образом, оперон состоит из структурной и
управляющей зон, промотора и терминатора. Генетическая информация снимается
со всего оперона в виде одной молекулы и-РНК. На рибосомы же попадает лишь
та её часть, которая соответствует информативной зоне.
РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА ФЕРМЕНТОВ В БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКЕ
Регулирующая деятельность оператора заключается в том, что он, в зависимости
от условий существования клетки, то"открывает" то "закрывает" доступ ферменту
РНК-полимеразе к структурным генам оперона ("открыт"-"закрыт"), и сам
контролируется специальными белками-репрессорами. Эти белки проявляют
строгую специфичность, взаимодействуя только с определёнными операторами, а
их структура закодирована в специальных генах – р е г у л я т о р а х (в состав
оперона эти гены не входят). Очевидно, что генов-регуляторов столько, сколько
адаптивных оперонов (генов) присутствует в конкретном геноме. Белки-
репрессоры являются а л л о с т е р и ч е с к и м и белками, т.е имеют два центра,
способных менять свою активность в зависимости от условий существования
23
клетки. Один из них, будучи в в активном состоянии, способен соединяться с
зоной оператора, блокируя весь оперон и закрывая доступ РНК-полимеразе к
структурным генам. Второй центр – центр узнавания с у б с т р а т а реакции или
конечного продукта ее. Активация (индукция) репрессоров осуществляется
двояким образом - различным в биохимических реакциях синтеза и расщепления.
Соответственно, различно контролируется и деятельность оперонов по синтезу
ферментов в этих реакциях. РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА ФЕРМЕНТОВ В
БИОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЯХ РАСЩЕПЛЕНИЯ
В биохимических реакциях расщепления индуктором (побудителем деятельности
оперона является само расщепляемое вещество (субстрат реакции). В отсутствии
субстрата реакции белки-репрессоры активны относительно оператора,
соединяются с ним, и информация со структурных генов на синтез ферментов для
расщепления субстрата не снимается. И, наоборот, если к питательной среде, на
которой растет клетка, добавляется субстрат, то последний вступает во
взаимодействие с репрессорами, делая их неактивными относительно оператора.
При этом открывается доступ к структурным генам оперона, и снимается
информация на синтез ферментов.
РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА ФЕРМЕНТОВ В БИОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЯХ
СИНТЕЗА
В биохимических реакциях синтеза роль регуляторов активности репрессоров
выполняют конечные продукты синтеза. Если клетка полностью использует
образующийся при синтезе продукт, то в отсутствии лишних молекул этого
продукта белки-репрессоры неактивны в отношении оператора. Структурные гены
доступны для РНК-полимеразы, осуществляющей синтез и-РНК для синтеза
ферментов. Как только потребности клетки в синтезируемом продукте будут
удовлетворены полностью и в цитоплазме появятся неиспользованные молекулы,
они соединяются с белками-репрессорами. Такой комплекс проявляет
повышенную активность относительно операторов, блокируя их. Синтез
ферментов прекращается.
24
биохимических события характеризуют этот переход в случае РНК-полимеразы
кишечной палочки: отделение сигма-фактора, первая транслокация молекулы
фермента вдоль матрицы и сильная стабилизация транскрипционного комплекса,
который кроме РНК-полимеразы включает растущую цепь РНК и
транскрибируемую ДНК. Эти же явления характерны и для РНК-полимераз
эукариот. Переход от инициации к элонгации сопровождается разрывом связей
между ферментом, промотором, факторами инициации транскрипции, а в ряде
случаев — переходом РНК-полимеразы в состояние компетентности в отношении
элонгации (например, фосфорилирование CTD-домена у РНК-полимеразы II).
Фаза элонгации заканчивается после освобождения растущего транскрипта и
диссоциации фермента от матрицы (терминация). На стадии элонгации в ДНК
расплетено примерно 18 пар нуклеотидов. Примерно 12 нуклеотидов матричной
нити ДНК образует гибридную спираль с растущим концом цепи РНК. По мере
движения РНК-полимеразы по матрице впереди нее происходит расплетание, а
позади — восстановление двойной спирали ДНК. Одновременно освобождается
очередное звено растущей цепи РНК из комплекса с матрицей и РНК-
полимеразой. Эти перемещения должны сопровождаться относительным
вращением РНК-полимеразы и ДНК. Трудно себе представить, как это может
происходить в клетке, особенно при транскрипции хроматина. Поэтому не
исключено, что для предотвращения такого вращения двигающуюся по ДНК РНК-
полимеразу сопровождают топоизомеразы. Элонгация осуществляется с помощью
основных элонгирующих факторов, необходимых, чтобы процесс не
останавливался преждевременно[2]. В последнее время появились данные,
показывающие, что регуляторные факторы также могут регулировать элонгацию.
РНК-полимераза в процессе элонгации делает паузы на определенных участках
гена. Особенно четко это видно при низких концентрациях субстратов. В
некоторых участках матрицы длительные задержки в продвижении РНК-
полимеразы, т. н. паузы, наблюдаются даже при оптимальных концентрациях
субстратов. Продолжительность этих пауз может контролироваться факторами
элонгации.
У бактерий есть два механизма терминации транскрипции:
25
Особенности транскрипции у про и эукариот:
Транспортная РНК.
26
определённую третичную структуру молекулы, так как не могут участвовать в
образовании комплементарных ферменты:
участие в сплайсинге;
участие в процессинге 3'-конца мРНК;
экспорт мРНК из ядра;
защита 5'-конца транскрипта от экзонуклеаз;
участие в инициации
полиаденирование
Свойства
28
последовательность аминокислот в полипептидной цепи белка, кодируемого этим
геном.
Антикодо́н — триплет (тринуклеотид), участок в транспортной рибонуклеиновой
кислоте (тРНК), состоящий из трёх неспаренных (имеющих свободные связи)
нуклеотидов. Спариваясь с кодоном матричной РНК (мРНК), обеспечивает
правильную расстановку каждой аминокислоты при биосинтезе белка.
Классификация:
Структурные
Регуляторные:
Модификаторы(не имеют собственноо выражения в фенотипе, но оказывают
влияние на экспрессию других генов), супрессоры (гены которые обеспечивают
трансофрмация клеток в опухолевые)
Онкогены (от греч. onkos – опухоль) – гены, которые часто находятся в ДНК-
(аденопаповавирусы) и РНК-содержащих (ретровирусы) вирусах, а также в геноме
опухолевых клеток.
Онкогены обусловливают превращение нормальных клеток эукариот на
злокачественные при участии онкобелков, которые они кодируют. Образуются
онкогены с видоизмененных нормальных генов (проонкогенов), которые широко
представлены в разных видах организмов. Образование проонкогенов происходит
вследствие точечных мутаций, амплификации и усиления экспрессии генов,
хромосомных перестроек.
29
Нарушения в системе передачи сигналов могут привести к
развитию рака, аутоиммунных заболеваний и диабета. Понимание механизмов
передачи сигнала внутри клетки может привести к разработке методов лечения
этих заболеваний и даже созданию искусственных тканей
Первичные посредникиПервичные посредники — это химические соединения или
физические факторы (квант света), способные активировать механизм передачи
сигнала в клетке. По отношению к воспринимающей клетке первичные
посредники являются экстраклеточными сигналами. Стоит отметить, что в
качестве экстраклеточных стимулов могут выступать и молекулы в изобилии
присутствующие внутри клетки, но находящиеся в норме в очень низкой
концентрации в межклеточном пространстве (например, АТФ или глутамат). В
зависимости от функций первичные посредники могут быть разделены на
несколько групп:
гормоны
цитокины
нейротрансмиттеры
факторы роста
хемокины
Вторичные посредники
Вторичные посредники — это низкомолекулярные вещества, которые образуются
или высвобождаются в результате ферментативной активности одного из
компонентов цепи передачи сигнала и способствуют его дальнейшей передаче и
амплификации Вторичные посредники характеризуются следующими свойствами:
имеют небольшую молекулярную массу и с высокой
скоростью диффундируют в цитоплазме; быстро расщепляются и быстро
удаляются из цитоплазмы. Ко вторичным посредникам относятся:
ионы кальция (Ca2+);
инозитолтрифосфат
30
помощью инозитолтрифосфата (вторичный посредник) выделяющиеся при его
участии из ЭПР ионы Ca2+ служат третичным посредником.
G-белки — это семейство белков, относящихся к ГТФазам и функционирующих в
качестве вторичных посредников во внутриклеточных сигнальных каскадах. G-
белки названы так, поскольку в своём сигнальном механизме они используют
замену GDP на GTP как молекулярный функциональный «выключатель» для
регулировки клеточных процессов.
31
Некоторые клетки эукариотов содержат фермент теломеразу, так же
проявляющую активность обратной транскрипции. С её помощью синтезируются
повторяющиеся последовательности в ДНК.
32
Пролиферация — разрастание ткани организма путём размножения клеток
делением.
33
3)Постсинтетическая (G2). ДНК уже не синтезируется, но происходит
исправление недочетов, допущенных при синтезе ее в S период (репарация).
Также накапливаются энергия и питательные вещества, продолжается синтез РНК
и белков (преимущественно ядерных). S и G2 непосредственно связаны с митозом,
поэтому их иногда выделяют в отдельный период – препрофазу. После этого
наступает собственно митоз, который состоит из четырех фаз.
Фазы митоза:
1)Профаза. Центриоли клеточного центра делятся и расходятся к
противоположным полюсам клетки. Из микротрубочек образуется веретено
деления, которое соединяет центриоли разных полюсов. В начале профазы в
клетке еще видны ядро и ядрышки, к концу этой фазы ядерная оболочка
разделяется на отдельные фрагменты, ядрышки распадаются. Начинается
конденсация хромосом: они скручиваются, утолщаются, становятся видимыми в
световой микроскоп. В цитоплазме уменьшается количество структур
шероховатой ЭПС.
2)Метафаза. Заканчивается образование веретена деления.
Конденсированные хромосомы выстраиваются по экватору клетки, образуя
метафазную пластинку. Микротрубочки веретена деления прикрепляются к
центромерам, или кинетохорам (первичным перетяжкам), каждой хромосомы.
После этого каждая хромосома продольно расщепляется на две хроматиды
(дочерние хромосомы) которые оказываются связанными только в участке
центромеры;
3)Анафаза. Между дочерними хромосомами разрушается связь, и они
начинают перемещаться к противоположным полюсам клетки. В конце анафазы
на каждом полюсе оказывается по диплоидному набору хромосом. Хромосомы
начинают деконденсироваться и раскручиваться, становятся тоньше и длиннее;
4)Телофаза. Хромосомы полностью деспирализуются, восстанавливается
структура ядрышек и интерфазного ядра, монтируется ядерная мембрана.
Разрушается веретено деления. Происходит цитокинез (деление цитоплазмы). В
животных клетках этот процесс начинается с образования в экваториальной
плоскости перетяжки, которая все более углубляется и в конце концов полностью
делит материнскую клетку на две дочерние. Продолжительность каждой фазы
зависит от типа ткани, физиологического состояния организма, воздействия
внешних факторов (света, температуры, химических веществ) и пр. Нетипичные
формы митоза:
1. Амитоз – это прямое деление ядра. Этот способ деления не может считаться
полноценным способом размножения эукариотических клеток.
2. Эндомитоз. При этом типе деления после репликации ДНК не происходит
разделения хромосом на две дочерние хроматиды. Это приводит к увеличению
числа хромосом в клетке иногда в десятки раз по сравнению с диплоидным
набором. Так возникают полиплоидные клетки. Однако с генетической точки
зрения эндомитоз представляет собой геномную соматическую мутацию.
3.Политения. Происходит кратное увеличение содержания ДНК (хромонем) в
хромосомах без увеличения содержания самих хромосом. При этом количество
34
хромонем может достигать 1000 и более, хромосомы при этом приобретают
гигантские размеры. При политении выпадают все фазы митотического цикла,
кроме репродукции первичных нитей ДНК. Такой тип деления наблюдается в
некоторых высокоспециализированных тканях (печеночных клетках, клетках
слюнных желез двукрылых насекомых.
35
Метафаза I — бивалентные хромосомы выстраиваются вдоль экватора клетки,
наступает пауза.
Анафаза I — микротрубочки сокращаются, биваленты делятся и хромосомы
расходятся к полюсам. Важно отметить, что, из-за конъюгации хромосом в
зиготене, к полюсам расходятся целые хромосомы, состоящие из двух хроматид
каждая, а не отдельные хроматиды, как в митозе.
Телофаза I — хромосомы деспирализуются и появляется ядерная оболочка.
Второе деление мейоза следует непосредственно за первым, без выраженной
интерфазы: S-период отсутствует, поскольку перед вторым делением не
происходит репликации ДНК.
Профаза II — происходит конденсация хромосом, клеточный центр делится и
продукты его деления расходятся к полюсам ядра, разрушается ядерная оболочка,
образуется веретено деления, перпендикулярное первому веретену.
Метафаза II — унивалентные хромосомы (состоящие из двух хроматид каждая)
располагаются на «экваторе» (на равном расстоянии от «полюсов» ядра) в одной
плоскости, образуя так называемую метафазную пластинку.
Анафаза II — униваленты делятся и хроматиды расходятся к полюсам.
Телофаза II — хромосомы деспирализуются и появляется ядерная оболочка.
В результате из одной диплоидной клетки образуется четыре гаплоидных клетки.
В тех случаях, когда мейоз сопряжён с гаметогенезом (например, у
многоклеточных животных), при развитии яйцеклеток первое и второе деления
мейоза резко неравномерны. В результате формируется одна гаплоидная
яйцеклетка и три так называемых редукционных тельца.
Динамика хромосом (n) и ДНК (с).
Профаза 1:
Лептотена Появление тонких нитей хромосом (хромосомы удвоены)
Зиготена Конъюгация хромосом
Пахитена Видны конъюгированные хромосомы
Диплотена Начало отталкивания гомологов – различима фигура, похожая на
греческ. Х
Метафаза 1: Разрушение ядерной мембраны. Хромосомы выстраиваются в
метафазную пластинку.
Анафаза 1: К разным полюсам расходятся гомологичные хромосомы, состоящие
из 2 хроматид.
Телофаза 1 может отсутствовать, или ядро может восстанавливаться
Профаза 2, Метафаза 2: по митотическому типу.
Анафаза 2: Расхождение хроматид удвоенных хромосом.
Телофаза 2: 4 гаплоидных ядра.
Схема: 2n2c – 2n4c – 1n2c – 1n1c.
Схема нарушения расхождения
хромосом и формирование патологических кариотипов.
Нормальные кариотипы человека — 46,XX (женский) и 46,XY (мужской).
Нарушения нормального кариотипа у человека возникают на ранних стадиях
36
развития организма: в случае, если такое нарушение возникает при гаметогенезе, в
котором продуцируются половые клетки родителей, кариотип зиготы,
образовавшейся при их слиянии, также оказывается нарушенным. При
дальнейшем делении такой зиготы все клетки эмбриона и развившегося из него
организма обладают одинаковым аномальным кариотипом.
Как правило, нарушения кариотипа у человека сопровождаются множественными
пороками развития; большинство таких аномалий несовместимо с жизнью и
приводят к самопроизвольным абортам на ранних стадиях беременности.
Нарушения кариотипа могут также возникнуть и на ранних стадиях дробления
зиготы, развившийся из такой зиготы организм содержит несколько линий клеток
(клеточных клонов) с различными кариотипами, такая множественность
кариотипов всего организма или отдельных его органов именуется
мозаицизмом(химеризм).
Болезни, обусловленные нарушением числа аутосом - синдром Дауна, синдром
Патау, синдром Эдвардса.
Болезни, связанные с нарушением числа половых хромосом - синдром
Шерешевского - Тёрнера, полисомия по Х-хромосоме, полисомия по Y-
хромосоме, синдром Клайнфельтера.
Болезни, причиной которых является полиплоидия вызывают смерть еще до
рождения.
Нарушения структуры хромосом:
Транслокации — обменные перестройки между негомологичными хромосомами.
Делеции — потери участка хромосомы. Например, синдром кошачьего крика
связан с делецией короткого плеча 5-ой хромосомы. Признаком его служит
необычный плач детей, напоминающий мяуканье или крик кошки. Это связано с
патологией гортани или голосовых связок. Наиболее типичным, помимо
«кошачьего крика», является умственное и физическое недоразвитие,
микроцефалия (аномально уменьшенная голова).
Инверсии — повороты участка хромосомы на 180 градусов.
Дупликации — удвоения участка хромосомы.
Изохромосомия — хромосомы с повторяющимся генетическим материалом в
обоих плечах.
Возникновение кольцевых хромосом — соединение двух концевых делеций в
обоих плечах хромосомы.
37
20.Митоз и мейоз – сравнительно-цитологическая характеристика
Таблица - Сравнение митоза и мейоза
Фаза Митоз Мейоз
1 деление 2 деление
Интерфаза Набор хромосом 2n. Набор хромосом Набор
Идет интенсивный 2n. Наблюдаются хромосом
синтез белков, АТФ те же процессы, гаплоидный
и других что и в митозе, но (n). Синтез орг
органических более нических
веществ. продолжительна, веществ
Удваиваются особенно при отсутствует.
хромосомы, каждая образовании
оказывается яйцеклеток.
состоящей из двух
сестринских
хроматид,
скрепленных общей
центромерой.
Профаза Непродо Более длительна. Короткая; те
жительна, В начале фазы те же процессы,
происходит же процессы, что что и в митозе,
спирализация хро- и в митозе. Кроме но при n хром
мосом, исчезают того, происходит сом.
ядерная оболочка, конъюгация
ядрышко, образуется хромосом, при
веретено деления которой
гомологичные
хромосомы
сближаются по
всей длине и скру-
чиваются. При
этом может
происхо
ить обмен
генетической
информацией
(перекрест
хромосом) —
кроссинговер.
Затем хромосомы
расходятся.
38
Метафаза Происходит Происходят Происходит то
дальнейшая процессы, же, что и в
спирализация хромос аналогичные тем, митозе, но при
м, их центромеры что и в митозе. n хромосом.
располагаются по
экватору.
Анафаза Центромеры, Центромеры не Происходит то
скрепляющие се- делятся. К же, что и в
стринские противоположным митозе, но при
хроматиды, делятся, полюсам отходит n хромосом.
каждая из них одна из
становится новой гомологичных
хромосомой и хромосом,
отходит к состоящая из двух
противоположным хроматид,
полюсам. скрепленных
общей
центромерой.
Телофаза Делится цитоплазма, Длится недолго. Делится
образуются две Гомологичные цитоплазма.
дочерние клетки, хромосомы После двух
каждая с попадают в разные мейотических
диплоидным набором клетки с делений
хромосом. Исчезает гаплоидным образуется 4
веретено деления, набором клетки с
формируются хромосом. гаплоидным
ядрышки. Цитоплазма набором
делится не всегда. хромосом.
40
погибают. При созревании один сперматоцит I порядка дает четыре сперматиды, а
один овоцит I порядка образует одну яйцеклетку и три полярных тельца.
4. Стадия формирования. Она характерна только для сперматогенеза. Незрелая
сперматида превращается в сперматозоид, приобретая свойственный ему вид.
Образование сперматозоидов у мужчин начинается только в период полового
созревания и происходит в течение всего года. Период развития сперматогоний в
зрелые сперматозоиды составляет 74 дня.
1. Гаметогенез включает стадии размножения, роста и созревания клеток.
Сперматогенез включает также стадию формирования (ее нет при овогенезе), в
этом заключаются отличия сперматогенеза от овогенеза. Сперматозоиды проходят
дополнительную четвертую стадию для того, чтобы приобрести своеобразную
форму и сформировать аппарат движения.
2. Второе отличие сперматогенеза от овогенеза: из сперматоцита I порядка
получается четыре половых клетки, а из ооцита I порядка получается одна
полноценная половая клетка.
3. Яйцеклетки образуются циклически, процесс повторяется через 21-35 дней
(менструальный цикл). Сравнительная характеристика овогенеза и сперматогенеза
показывает, что у женщин мейоз начинается в период внутриутробного развития.
Ооциты I порядка у новорожденной девочки останавливаются в фазе мейоз I, и
завершается созревание ооцита к моменту полового созревания. У мальчиков
процесс образования сперматозоидов идет непрерывно и сохраняется в течение
всей половой зрелости мужчины.
4. Существуют значительные различия в количестве образованных половых
клеток в женском и мужском организме. Взрослый мужчина производит 30
миллионов спермиев в день, а женщина - порядка 500 зрелых яйцеклеток за всю
свою жизнь.
5. Стадия размножения при сперматогенезе идет постоянно, а при овогенезе
заканчивается после рождения.
6. Стадия роста при сперматогенезе короче, чем при овогенезе.
7. Стадия созревания при овогенезе имеет особенности, которые заключаются в
неравномерности делений при созревании, что приводит к выделению полярных
телец, что отсутствует при сперматогенезе.
8. Сперматогенез более подвержен влиянию внешней среды, нежели овогенез, что
связано с различием в расположении половых органов - семенники находятся вне
брюшной полости.
9. Поскольку образование яйцеклеток начинается еще до рождения девочки, а
завершается для яйцеклетки только после ее оплодотворения, то неблагоприятные
факторы внешней среды могут повлечь генетические аномалии у потомства.
1. Гаметогенез — процесс образования яйцеклеток (овогенез) и сперматозоидов
(сперматогенез) — подразделяется на ряд стадий.
В стадии размножения диплоидные клетки, из которых образуются гаметы,
называют сперматогониями и овогониями. Эти клетки осуществляют серию
последовательных митотических делений, в результате чего их количество
существенно возрастает. Сперматогонии размножаются на протяжении всего
41
периода половой зрелости мужской особи. Размножение овогоний приурочено
главным образом к периоду эмбриогенеза.
Овогонии и сперматогонии, как и все соматические клетки, характеризуются
диплоидностью. Если в одинарном, гаплоидном наборе число хромосом
обозначить как n, а количество ДНК — как с, то генетическая формула клеток в
стадии размножения соответствует 2n2с до 5-периода и 2n4с после него.
На стадии роста происходит увеличение клеточных размеров и превращение
мужских и женских половых клеток в сперматоциты и овоциты I порядка.
Важным событием этого периода является редупликация ДНК при сохранении
неизменным числа хромосом. Последние приобретают двунитчатую структуру, а
генетическая формула сперматоцитов и овоцитов I порядка приобретает вид 2п4с.
Основными событиями стадии созревания являются два последовательных
деления: редукционное и эквационное,— которые вместе составляют мейоз.
После первого деления образуются сперматоциты и овоциты II порядка
(формула п2с), а после второго — сперматиды и зрелая яйцеклетка (пс).
В результате делений на стадии созревания каждый сперматоцит I порядка дает
четыре сперматиды, тогда как каждый овоцит I порядка — одну полноценную
яйцеклетку и редукционные тельца, которые в размножении не участвуют.
Благодаря этому в женской гамете концентрируется максимальное количество
питательного материала — желтка.
Процесс сперматогенеза завершается стадией формирования, или спермиогенеза.
Ядра сперматид уплотняются вследствие сверхспирализации хромосом, которые
становятся функционально инертными. Пластинчатый комплекс перемещается к
одному из полюсов ядра. Центриоли занимают место у противоположного полюса
ядра, причем от одной из них отрастает жгутик, у основания которого в виде
спирального чехлика концентрируются митохондрии. На этой стадии почти вся
цитоплазма сперматиды отторгается, так что головка зрелого сперматозоида
практически ее лишена.
За счет генетического разнообразия половое размножение создает предпосылки к
освоению разнообразных условий обитания; дает эволюционные и экологические
перспективы; способствует осуществлению творческой роли естественно отбора.
42
другие функции яйцеклетки и сперматозоида различны, поэтому по строению они
резко отличаются.
Яйцеклетки неподвижны, имеют шарообразную или слегка вытянутую форму.
Размеры яйцеклеток значительно крупнее, чем соматических. Внутриклеточная
структура цитоплазмы в яйцах специфична для каждого вида животных, чем
обеспечиваются видовые (а нередко и индивидуальные) особенности развития. В
яйцах содержится ряд веществ, необходимых для развития зародыша. К их числу
относится питательный материал (желток). Мужские гаметы — сперматозоиды
животных и многих растений подвижны и обычно несут один или несколько
жгутиков, исключением являются лишённные жгутиков мужские гаметы
семенных растений — спермии, которые доставляются к яйцеклетке при
прорастании пыльцевой трубки, а также безжгутиковые сперматозоиды (спермии)
нематод и членистоногих.
Морфология гамет различных видов достаточно разнообразна, при этом
продуцируемые гаметы могут отличаться как по хромосомному набору (при
гетерогаметности вида), величине и подвижности, при этом гаметный диморфизм
у различных видов варьирует в широких пределах — от отсутствия диморфизма в
виде изогамии до своего крайнего проявления в форме оогамии.
Изогамия. Если сливающиеся гаметы морфологически не отличаются друг от
друга величиной, строением и хромосомным набором, то их называют
изогаметами, или бесполыми гаметами. Такие гаметы подвижны, могут нести
жгутики или быть амёбовидными. Изогамия типична для многих водорослей.
Анизогамия (гетерогамия). Гаметы, способные к слиянию, различаются по
размерам, подвижные микрогаметы несут жгутики, макрогаметы могут быть как
подвижны (многие водоросли), так и неподвижны (лишённые жгутиков
макрогаметы многих протистов).
Оогамия. Сперматозоид и яйцеклетка. Способные к слиянию гаметы одного
биологического вида резко различаются по размерам и подвижности на два типа:
мужские гаметы малого размера и крупные неподвижные женские гаметы —
яйцеклетки. Различие размера гамет обусловлено тем, что яйцеклетки содержат
запас питательных веществ, достаточный для обеспечения нескольких первых
делений зиготы при её развитии в зародыш.
Сущность полового размножения состоит в перекомбинации генетического
материала родительских особей. В результате дочерние особи становятся более
разнообразными, и естественный отбор выбирает из них наиболее
приспособленные. При половом размножении потомство получается в результате
слияния гаплоидных клеток – гамет. При оплодотворении образуется зигота, из
которой развивается новый организм.
Биологическое значение полового размножения едино для всех организмов:
1) способствует генетическому разнообразию особей вида благодаря
кроссинговеру и комбинативной изменчивости;
2) создаёт предпосылки к освоению разнообразных условий обитания;
3) обеспечивает эволюционные перспективы вида.
43
У людей (как и у всех млекопитающих) половое размножение связано с
образованием половых клеток, которое происходит в специализированных
органах – половых железах, в результате особого процесса. Половые клетки
отличаются от всех остальных клеток тела уменьшенным вдвое набором
хромосом.
44
ЭТАПЫ ОНТОГЕНЕЗА.
Эмбриональный период
Эмбриональный этап - период жизни особи с момента слияния сперматозоида с
яйцом и образования зиготы до рождения или выхода из яйцевых оболочек. У
многоклеточных животных в эмбриональном периоде выделяют три основных
этапа развития: дробление, гаструляцию и первичный органогенез.
Внутриутробное – оканчивается рождением.
Процесс эмбрионального развития человека длится около 280 суток и
подразделяется на 3 периода: начальный (1-я неделя), зародышевый (2-8-я недели)
и плодный (с 9-й недели и до рождения).
Вне тела матери – оканчивается выходом из яйцевых оболочек.
Выходит личинка, как правило, устроенная проще взрослого животного.
Дорепродуктивный период включает личиночную стадию и часто заканчивается
метаморфозом. Личинка имеет специальные личиночные органы и, как правило,
не имеет некоторых органов, свойственных взрослым формам. Метаморфоз -
может быть полным и неполным. При неполном метаморфозе замена личиночных
органов на органы взрослых животных происходит постепенно, без прекращения
активного перемещения и питания организма, например у головастика —
личиночной формы лягушки. При полном метаморфозе личинка прекращает
активно перемещаться в среде обитания и добывать себе пищу. Она образует
куколку, в которой происходит метаморфоз, т. е. замена личиночных органов на
органы взрослого организма, как это наблюдается у бабочек. После завершения
превращения у позвоночных происходит рост и половое созревание. У
беспозвоночных после завершения метаморфоза наступает репродуктивный
период, быстро завершающийся смертью).
Биологическое значение развития с метаморфозом заключается в том, что:
45
— личинка самостоятельно растет, накапливая клеточный материал для
дальнейших превращений. В результате снижаются затраты материнского
организма на развитие каждого потомка, что позволяет увеличить численность
потомства;
— личиночные формы и взрослые организмы, как правило, обитают в разных
условиях среды и используют разные источники питания, что снижает интенсив-
ность борьбы за существование между молодыми и зрелыми формами;
— свободноживущие личинки прикрепленных или паразитических форм
способствуют расселению вида.
Постэмбриональный период
Ювенильный (Игровой) этап - характеризуется выраженной ориентировочной
реакцией и интенсивной игровой деятельностью.
46
Сначала бластомеры прилегают друг к другу, образуя скопление клеток,
называемое морулой. Затем между клетками образуется полость — бластоцель,
заполненная жидкостью. Клетки оттесняются к периферии, образуя стенку
бластулы — бластодерму. Общий размер зародыша к концу дробления на стадии
бластулы не превышает размера зиготы.
Главным результатом периода дробления является превращение зиготы в
многоклеточный односменный зародыш.
48
эмбрионального периода зависит от стадии, на которой зародыш переходит к
самостоятельному существованию во внешней среде. Если постэмбриональное
развитие идет прямым путем, т.е. без личинки и метаморфоза, то желтка в
яйцеклетке должно быть больше. По количеству желтка яйцеклетки хордовых
делят на алецитальные, олиго-, мезо- и полилецитальные, т.е. с ничтожно малым,
малым, средним и большим количеством желтка (от греч. лецитос — желток). У
ланцетника, представителя низших хордовых, яйцеклетка олиголецитальная. У
большинства позвоночных в яйцеклетках содержится значительное количество
желтка. Среди низших позвоночных (Anamnia) наиболее крупные яйца у миксин
(кл. Круглоротые), у акул и химер (кл. Хрящевые рыбы) и у безногих амфибий. У
осетровых рыб, а также остальных амфибий яйцеклетки мезолецитальные, т.е.
имеют среднее количество желтка. У высших позвоночных (Amniota), таких, как
пресмыкающиеся, птицы и яйцекладущие млекопитающие,— полилецитальные,
т.е. в яйцеклетке очень много желтка. Эмбриональное развитие у них протекает
особенно долго. Эта закономерность нарушена у сумчатых и плацентарных
млекопитающих, которые имеют олиго- и алецитальные яйцеклетки
соответственно. У сумчатых эмбрион выходит из яйцевых оболочек и матки при
незавершенном органогенезе, переносится в сумку, где и продолжает развитие. У
плацентарных и человека зародыш выходит из яйцевых оболочек еще раньше, в
стадии бластоцисты, но затем переходит к внутриутробному существованию, где и
завершает все основные периоды развития, подготавливающие его к появлению на
свет. Уменьшение количества желтка в яйцеклетках млекопитающих можно
назвать вторичным, поскольку их предки, освоившие наземную среду, имели, как
и все амниоты, полилецитальные яйца. Полярность яйцеклеток. При малом
количестве желтка в яйцеклетке он обычно распределен в цитоплазме равномерно
и ядро располагается примерно в центре. Такие яйцеклетки называют
изолецитальными (от греч. изос —равный). У большинства позвоночных желтка
много, и он распределен в цитоплазме яйцеклетки неравномерно. Это
анизолециталъные клетки. Основная масса желтка скапливается у одного из
полюсов клетки — вегетативного полюса. Такие яйцеклетки называют
телолецйтальными (от греч. телос — конец). Противоположный полюс, к
которому оттесняется свободная от желтка активная цитоплазма, называют
анималъным. Если желток все же погружен в цитоплазму и не обособлен от нее в
виде отдельной фракции, как у осетровых и земноводных, яйцеклетки называют
умеренно телолецитальными. Если желток полностью отделен от цитоплазмы, как
у амниот, то это резко телолецитальные яйцеклетки. Распределение желтка имеет
решающее значение для всех последующих процессов эмбриогенеза, так как
определяет будущую пространственную организацию зародыша.
Дробление — это ряд последовательных митотических делений зиготы и далее
бластомеров, заканчивающихся образованием многоклеточного зародыша —
бластулы. Как правило, бластомеры располагаются в строгом порядке друг
относительно друга и полярной оси яйца. Порядок, или способ, дробления зависит
от количества, плотности и характера распределения желтка в яйце. По правилам
Сакса — Гертвига клеточное ядро стремится расположиться в центре свободной
49
от желтка цитоплазмы, а веретено клеточного деления — в направлении
наибольшей протяженности этой зоны. В олиго- и мезолецитальных яйцах
дробление полное, или голобластическое. Такой тип дробления встречается у
миног, некоторых рыб, всех амфибий, а также у сумчатых и плацентарных
млекопитающих. При полном дроблении плоскость первого деления
соответствует плоскости двусторонней симметрии. Плоскость второго деления
проходит перпендикулярно плоскости первого. Обе борозды первых двух делений
меридианные, т.е. начинаются на анимальном полюсе и распространяются к
вегетативному полюсу. Яйцевая клетка оказывается разделенной на четыре более
или менее равных по размеру бластомера. Плоскость третьего деления проходит
перпендикулярно первым двум в широтном направлении. После этого в
мезолецитальных яйцах на стадии восьми бластомеров проявляется
неравномерность дробления. На анимальном полюсе четыре более мелких
бластомера — микромеры, на вегетативном — четыре более крупных —
макромеры. Затем деление опять идет в меридианных плоскостях, а потом опять в
широтных. В полилецитальных яйцеклетках костистых рыб, пресмыкающихся,
птиц, а также однопроходных млекопитающих дробление частичное, или
меробластическое, т.е. охватывает только свободную от желтка цитоплазму. Она
располагается в виде тонкого диска на анимальном полюсе, поэтому такой тип
дробления называют дискоидальным.
При характеристике типа дробления учитывают также взаимное расположение и
скорость деления бластомеров. Если бластомеры располагаются рядами друг над
другом по радиусам, дробление называют радиальным. Оно типично для
хордовых и иглокожих. В природе встречаются и другие варианты
пространственного расположения бластомеров при дроблении, что определяет
такие его типы, как спиральное у моллюсков, билатеральное у аскариды,
анархичное у медузы.
50
[Процесс гаструляции характеризуется важными, клеточными преобразованиями,
такими, как направленные перемещения групп и отдельных клеток, избирательное
размножение и сортировка клеток, начало цитодифференцировки и индукционных
взаимодействий.]
51
52
27. Механизмы клеточной дифференцировки в эмбриогенезе:
ооплазматическая сегрегация, эмбриональная индукция, генная активность.
Понятие о гомеозисных генах.
Ооплазматическая сегрегация яйцеклетки
Ооплазматическая сегрегация: перераспределение биологически активных
молекул (локальных детерминант) в цитоплазме яйцеклетки в результате ее
активации.
Во время движения мужского пронуклеуса в яйце происходят сложные
перемещения цитоплазмы. В результате она становится более неоднородной. Эти
процессы получили название ооплазматическои сегрегации (разделения). Они
хорошо заметны в тех случаях, когда разные участки цитоплазмы содержат
разноцветные гранулы (желток, темный пигмент и др.). У хорошо изученных в
этом отношении асцидий (сидячих морских животных) и амфибий перемещения
цитоплазмы приводят к тому, что яйцеклетка приобретает двустороннюю
симметрию. Так, у амфибий напротив точки вхождения сперматозоида
формируется светлый участок цитоплазмы - "серый серп". Кортекс яйца
(наружный слой толщиной в несколько мкм) поворачивается примерно на 30*
относительно внутренних слоев яйца в направлении, которое зависит от места
проникновения сперматозоида. При этом возникает "серый серп", который
расположен напротив места проникновения сперматозоида. У асцидий Styela на
этом месте образуется "желтый серп" - здесь скапливается желтый пигмент,
который до этого был распределен равномерно в поверхностном слое цитоплазмы.
В обоих случаях плоскость, проведенная через точку вхождения сперматозоида и
середину "серпа", становится плоскостью первого деления зиготы и плоскостью
симметрии.
В яйцеклетках асцидий удается обнаружить и другие области, различающиеся по
составу и цвету включений. Наблюдения показали, что эти области цитоплазмы
попадают в строго определенные клетки зародыша, из которых формируются
строго определенные ткани. Механизмы движения цитоплазмы в деталях не
изучены. Очевидно, что главную роль в этих перемещениях играет цитоскелет . В
частности, важная роль может принадлежать центриоли сперматозоида и
отходящим от нее микротрубочкам. С помощью вещества колхицина,
нарушающего сборку микротрубочек, ооплазматическую сегрегацию удается
подавить.
Можно предположить, что в разных участках цитоплазмы яйцеклетки содержатся
различные вещества (их назвали локальными детерминантами, т.е.
"определителями"), которые определяют судьбу клеток. (Еще один пример
локальных детерминант - это вещества полярных гранул, наличие которых
53
необходимо и достаточно для развития первичных половых клеток). Один из
экспериментов, которые ставились для проверки этой гипотезы, заключался в
центрифугировании яиц асцидий. При быстром вращении в центрифуге разные
зоны цитоплазмы меняют свое расположение и частично смешиваются.
У асцидий это приводит к тому, что образуются "хаотические" зародыши. У них
имеются, как и в норме, мышечные, нервные, покровные и другие клетки. Однако
клетки эти беспорядочно расположены и не образуют органов. В других опытах
центрифугирование не приводило к нарушению развития. Возможно, это связано с
тем, что локальные детерминанты прочно связаны с элементами цитоскелета,
которые не удается сместить центрифугированием. Можно сделать вывод, что у
таких животных, как асцидий, уже в яйце "намечаются" будущие стороны тела и
расположение основных органов зародыша. Эта разметка представляет собой
неравномерное распределение локальных детерминант. Попадание детерминант в
клетку определяет ее дальнейшую судьбу.
Химическая природа локальных детерминант во многих случаях не изучена, так
как выделить их в чистом виде не удается. Однако механизмы их действия
интенсивно изучаются современными методами. Так, в клетках зародыша асцидий
первыми признаками дифференцировки клеток служит появление в них
специфических ферментов. В будущих мышечных клетках появляется фермент
ацетилхолинэстераза, в клетках кишечника - фермент щелочная фосфатаза.
Можно выявлять активность этих ферментов и тем самым узнать, началась ли
дифференцировка. Оказалось, что в ряде случаев подавление транскрипции
нарушает дифференцировку. Можно предполагать, что в этих случаях локальные
детерминанты - это активаторы транскрипции соответствующих генов.
Эмбриональная индукция — взаимодействие между частями развивающегося
организма у многоклеточных беспозвоночных и всех хордовых.
История эмбриологии сохранила сведения о многочисленных экспериментах по
пересадке частей развивающихся зародышей. Среди них работы немецкого
ученого Г. Шпемана и его последователей, которые установили, что если у
зародыша на стадии гаструлы взять участок эктодермы, который должен развиться
в нервную трубку, и пересадить его в зародыш на той же примерно стадии
развития в эктодерму брюшной стороны другого зародыша, находящегося
примерно на той же стадии развития, то в месте трансплантации начинает
развиваться сначала нервная трубка, затем другие компоненты осевых органов. В
результате в зародыше-хозяине возникает вторичный зародыш, который от
первичного лишь незначительно отличается величиной. Г. Шпеман назвал это
явление эмбриональной индукцией, во время которой трансплантат выступает в
роли организатора, направляющего развитие окружающих клеток. В дальнейшем
было обнаружено, что роль организатора могут играть не только определенные
участки развивающихся зародышей, но и вещества самого различного
происхождения. Ученые пришли к выводу, что эффект индукции на ранних этапах
развития зародыша заключается в том, что клетки в месте трансплантации,
поврежденные операцией, выходят из-под контроля сложившихся клеточных
взаимоотношений и начинают развиваться в направлении целого организма.
54
Один из наиболее ранних в развитии и известных случаев эмбриональной
индукции - до сих пор один из наиболее впечатляющих и, несмотря на
поразительный прогресс молекулярной эмбриологии, до сих пор таинственный.
Если удалить зрительный пузырек, то хрусталик не образуется; если зрительный
пузырек имплантировать под эпидермис в какой-либо другой части тела, даже в
туловище, в этом месте индуцируется хрусталик.
Связь с общей концепцией регуляторных механизмов онтогенеза
Явление эмбриональной индукции тесно связано с такими понятиями,
как морфоген и морфогенетическое поле. Еще Шпеманом было показано, что
инактивированные нагреванием ткани организатора сохраняют индуцирующую
активность и среда из-под изолированного организатора также индуцирует
эктодерму.
Позже было показано, что многие ткани взрослых животных индуцируют
нейрализацию эктодермы. также были открыты вещества-индукторы, такие как
хордин и ноггин (действуют косвенно, через подавление BMP (англ. Bone
Morphogenetic protein) — эпидермального индуктора, его инактивация хордином и
ноггином вызывает нейрализацию эктодермы), и многие другие.
Эмбриональная индукция — лишь один из механизмов онтогенеза. Многим
явлениям развития требуются иные механизмы.
Участок дорсальной губы бластопора, который при пересадке вызывает на новом
месте образование мезодермы и нейроэктодермы получил название «организатор
Шпемана».
За свое открытие Ганс Шпеман получил в 1935 г Нобелевскую премию
55
В процессах регуляции генетической активности большую роль играют гены-
регуляторы, которые управляют активностью структурных генов, определяющих
синтез структурных белков или белков-ферментов, а также разных видов тРНК и
рРНК.
Гомеозисные гены — гены, определяющие процессы роста и дифференцировки в
организме. Гомеозисные гены кодируют транскрипционные факторы,
контролирующие программы формирования органов и тканей.
Мутации в гомеозисных генах могут вызвать превращение одной части тела в
другую. Гомеозисными мутантами называются такие организмы, у которых на
месте органа развивается орган другого типа. Например, у дрозофилы при
мутации antennapedia формируется конечность на месте антенны.
Гомеозисные гены контролируют работу других генов и определяют превращение
внешне неразличимых участков зародыша или определённого органа (ткани,
участка тела). В частности, гомеозисные гены контролируют появление
различий сегментов многоклеточных животных в раннем эмбриональном
развитии. У насекомых гомеозисные гены играют ключевую роль в определении
особенностей строения эмбриональных сегментов и структур на них (ноги,
антенны, крылья, глаза).
Гомеозисные гены животных относятся к семейству Hox-генов. Однако не все
гены этого семейства являются гомеозисными. Так, у дрозофилы к Hox-генам
комплексаAntennapedia относятся гены zerknullt, zerknullt2, bicoid и fushi tarazu,
которые не являются гомеозисными. У растительных организмов также известны
процессы, которые контролируются гомеозисными генами: филлотаксис, развитие
цветков и соцветий.
56
другой стороны, выделяют понятие окружающей среды, или среды 2-го порядка,
как совокупности внешних по отношению к организму факторов.
Критические периоды: зигота, имплантация, роды.
Периоды наибольшей чувствительности к повреждающему действию
разнообразных факторов получили название критических, а повреждающие
факторы — тератогенных.
Причиной нарушения развития зачатка является большая чувствительность его в
данный момент к действию патогенного фактора, чем у других органов.
П.Г. Светлов установил два критических периода в развитии плацентарных
млекопитающих. Первый из них совпадает с процессом имплантации зародыша,
второй — с формированием плаценты. Имплантация приходится на первую фазу
гаструляции, у человека — на конец 1-й —начало 2-й недели. Второй критический
период продолжается с 3-й по 6-ю неделю. По другим источникам, он включает в
себя также 7-ю и 8-ю недели. В это время идут процессы нейруляции и начальные
этапы органогенеза.
Действие тератогенных факторов во время эмбрионального (с 3 до 8 нед) периода
может привести к врожденным уродствам. Чем раньше возникает повреждение,
тем грубее бывают пороки.
Факторы, оказывающее поврежденное воздействие, не всегда представляют собой
чужеродные для организма вещества или действия. Это могут быть и
закономерные действия среды, обеспечивающие обычное нормальное развитие но
в других концентрациях с другой силой, в другое время (кислород, питание,
температуру, соседние клетки, гормоны, индукторы, давление, растяжение,
электрический ток и проникающее излучение).
57